一种醋酸乌利司他的杂质及其制备和检测方法
阅读：325发布：2023-01-04
专利汇可以提供一种醋酸乌利司他的杂质及其制备和检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供一种 醋酸 乌利司他的杂质化合物及其制备方法，具体地说，提供了新化合物杂质A(化合物A)、G(化合物G)、H(化合物H)、I(化合物I)或J(化合物J)，并还提供所述杂质的检测方法及其用于醋酸乌利司他 原料药 及其制剂的 质量 分析的用途。，下面是一种醋酸乌利司他的杂质及其制备和检测方法专利的具体信息内容。
1.一种化合物或其盐，所述化合物的结构如下式化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J所示：
化合物A：
化合物G：
化合物H：
化合物I：
化合物J：
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中所述盐为无机酸盐或有机酸盐。
3.权利要求1－2所述化合物或其盐的制备方法，其包括从由3,20-双缩酮(中间体VI)制备得到醋酸乌利司他的反应产物中经分离制备得到所述化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J的步骤。
4.根据权利要求3所述的方法，其中由3,20-双缩酮(中间体VI)制备得到醋酸乌利司他的反应为：
5.根据权利要求4所述的方法，其中：
所述的环氧化反应是在二氯甲烷中，碱性条件下，加入氧化剂和全卤代丙酮室温下反应；
所述的格氏反应是在四氢呋喃中，氯化亚铜催化下与4-(N,N一二甲基氨基)苯基溴化镁格氏试剂进行反应；
所述的水解反应是在二氯甲烷和稀酸中搅拌下进行反应；
所述的乙酰化反应是用冰醋酸、高氯酸或醋酐中任一种或者两种以上的酰化剂下进行反应。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的分离制备为制备高压液相色谱分离；优选地，所述的制备高压液相色谱条件为：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶(C18)反相填料，流动相为三乙胺磷酸溶液－乙腈梯度洗脱，检测波长为258nm。
7.根据权利要求3－6所述的制备方法，其特征在于，从醋酸乌利司他重结晶所得到的重结晶母液中分离制备得到所述的化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J。
8.权利要求1或2所述化合物或其盐的检测方法，其特征在于所述方法为HPLC法或者HPLC-MS法；优选地，所述的HPLC法的检测条件为：固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为三乙胺磷酸溶液－乙腈梯度洗脱，检测波长为258nm；优选地，流动相为pH2.5～3.5的三乙胺磷酸溶液-乙腈，体积比为30∶70～50∶50；更优选地，流动相为pH3.0的三乙胺磷酸溶液-乙腈，体积比为40∶60；优选地，所述的HPLC-MS法的检测条件为：HPLC的色谱条件为固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈：0.1％甲酸水＝50：50，MS的条件为采用选择性离子检测法，检测化合物A母离子[M+H]+m/z 397.1、化合物G母离子[M+H]+m/z476.2、化合物H母离子[M+H]+m/z 441.2、化合物I母离子[M+H]+m/z 516.2或化合物J母离子[M+H]+m/z 474.2。
9.权利要求1或2所述化合物或其盐在醋酸乌利司他原料药或者制剂的有关物质检测中作为杂质对照品的用途。
10.一种醋酸乌利司他原料药或者制剂的质量检测方法，其包括测定其中有关物质的步骤，所述的有关物质选自权利要求1或2中所述的化合物或其盐，其特征在于所述的测定采用HPLC法或者HPLC-MS法检测；优选地，所述的检测采用HPLC法检测；更优选地，所述的HPLC法的检测条件为：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为体积比为30∶70～50∶50的pH2.5～3.5的三乙胺磷酸溶液-乙腈，检测波长为DAD(二极管阵列检测器)258nm，理论板数按醋酸乌利司他峰计算应不小于2000；更优选地，所述的有关物质检测中，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，以峰面积计算，与各杂质相对应的峰各不得大于杂质对照品溶液的
0.15倍(即杂质含量不超过0.15％)。
一种醋酸乌利司他的杂质及其制备和检测方法
技术领域
背景技术
[0002] 醋酸乌利司他(Ulipristal Acetate；如下式的化合物X，化学名：17α-乙酰氧基-11β-[4-(N，N-二甲基氨基)苯基]-19-去甲孕甾-4，9-二烯-3，20-二酮)是一种强效的抗孕激素和抗糖皮质激素药物。结构式如下：
[0003]
[0004] 醋酸乌利司他作为紧急避孕药已在欧洲和美国批准上市，用于无防护性生活或已知或怀疑避孕失败后5天内使用，是一种有效且安全的紧急避孕药。紧急避孕被定义为防止无保护措施性行为导致的怀孕的治疗方法，是一种防止无保护措施的性行为导致的意外怀孕的重要方法。它是作为偶然、紧急时使用的一个备用措施。
[0005] 醋酸乌利司他作为子宫肌瘤治疗药已在欧洲批准上市，用于术前治疗育龄妇女中度重度子宫肌瘤。子宫肌瘤(又称子宫平滑肌瘤)是良性的，单克隆的，激素-敏感的子宫平滑肌肿瘤。它是女性绝经前生殖道最常见肿瘤，据报道育龄女性20-40％患有这种肿瘤。子宫肌瘤经常无症状，但当出现症状时，最初的症状是严重的子宫出血，贫血，腹部受压，腹部疼痛，尿频加重和不育。尤其，严重的经血量减少是最常见的子宫肌瘤的症状。
[0006] 现有技术CN102516345B公开了可工业化生产醋酸乌利司他的方法，是以易得的3，3-(亚乙二氧基-19-去甲孕甾-5(10)，9(11)-二烯-3，17-二酮(化合物II)与氰基化试剂加成反应得到化合物III，然后将17α-羟基保护，得到式IV化合物，接着与甲基锂或甲基格式试剂反应后经酸水解得到式V化合物，再经对甲苯磺酸等催化与乙二醇反应得到3，20-双缩酮化合物VI，然后环氧化反应得到环氧物VII，接着与格氏试剂反应得到化合物VIII，再经酸性条件下水解得到化合物IX，最后经乙酸化得到醋酸乌利司他(化合物X)(Scheme 1)。该方法合成路线短，共8步反应，而且反应条件温和，更容易进行，总收率约25-27％左右，且操作更简便，宜于产业化。
[0007]
[0008] 任何影响药物纯度的物质统称为杂质。杂质的研究是药品研发的一项重要内容，它包括选择合适的分析方法，准确地分辨与测定杂质的含量并综合药学、毒理及临床研究的结果确定杂质的合理限度。这一研究贯穿于药品研发的整个过程。药品中的杂质按其理化性质一般分为三类：有机杂质、无机杂质及残留溶剂。按照其来源，杂质可以分为工艺杂质(包括合成中未反应完全的反应物及试剂、中间体、副产物等)、降解产物、从反应物及试剂中混入的杂质等。按照其毒性分类，杂质又可分为毒性杂质和普通杂质等。杂质还可按其化学结构分类，如甾体、生物碱、几何异构体、光学异构体和聚合物等。有机杂质包括工艺中引入的杂质和降解产物等，可能是已知的或未知的、挥发性的或不挥发性的。由于这类杂质的化学结构一般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又可称之为有关物质。分析方法的选择直接关系到杂质测定结果的专属性与准确性，因此，在进行杂质研究时首要问题是选择合适的杂质分析方法。
[0009] 药物杂质检查分析方法应灵敏、专属。通过合适的分析技术将不同结构的杂质进行分离、检测，从而达到对杂质的有效控制。随着分离、检测技术的发展与更新，高效、快速的分离技术与灵敏、稳定、准确、适用的检测手段相结合，几乎所有的有机杂质均能在合适的条件下得到很好的分离与检测。在质量标准中，目前普遍采用的杂质检测方法主要为高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography；HPLC)、薄层色谱法(Thin Layer Chromatography；TLC)、气相色谱法(Gas Chromatography；GC)和毛细管电泳法(Capillary Electrophoresis；CE)。近年来，质谱技术在药物杂质分析方面应用日益广泛，气相色谱联用技术、液相色谱联用技术已经成为药物杂质分析的重要手段。
发明内容
[0010] 为了更好地控制醋酸乌利司他原料药及其制剂的药物质量，本发明对原料药中的杂质进行研究，获得了相关杂质化合物，并提供其制备方法和检测方法。本发明所制备的杂质化合物，作为杂质对照品，可用于该醋酸乌利司他原料药及其制剂的质量分析，同时也可以为工艺条件的选择提供参考，有利于生产过程中药品质量的控制。
[0011] 本发明技术方案如下：
[0012] 本发明提供一种化合物或其盐，所述化合物的结构如下式化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J所示：
[0013] 化合物A：
[0014]
[0015] 化合物G：
[0016]
[0017] 化合物H：
[0018]
[0019] 化合物I：
[0020]
[0021] 化合物J：
[0022]
[0024] 作为本发明另一目的，还提供一种上述所述化合物或其盐的制备方法，其包括从由3，20-双缩酮(中间体VI)制备得到醋酸乌利司他的反应产物中经分离制备得到所述化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J的步骤。优选地，所述的由3，20-双缩酮(中间体VI)制备得到醋酸乌利司他的反应过程如下：
[0025]
[0026] 上述所述的制备方法，其中：
[0027] 所述环氧化反应为：
[0028]
[0029] 例如，化合物VI溶于二氯甲烷中，碱性条件下，加入氧化剂和全卤代丙酮室温下反应。碱选自吡啶，磷酸氢二钾，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠等；氧化剂选自双氧水，间氯过氧苯甲酸等，优选双氧水；反应温度-10-10℃。
[0030] 所述的格氏试剂反应为：
[0031]
[0032] 例如，在THF，氯化亚铜催化下与4-(N，N一二甲基氨基)苯基溴化镁格氏试剂进行加成；优选地，反应原料与格氏试剂摩尔比1∶1.5-5，反应温度-10-40℃，反应时间2-8h。
[0033] 所述的水解反应为：
[0034]
[0036] 所述的乙酰化反应为：
[0037]
[0038] 例如，用冰醋酸、高氯酸或醋酐中任一种或者两种以上的酰化剂下酰化反应；优选高氯酸和醋酐中加入冰醋酸；优选地，反应温度-40-25℃，优选-10-25℃；优选地，冰醋酸的量占冰醋酸、高氯酸、醋酐构成的乙酰化试剂体积的1-50％V/V，优选10-15％V/V。
[0039] 作为本发明另一实施方式，还提供另一种上述所述化合物或其盐的制备方法，其包括从由3，20-双缩酮(中间体VI)制备得到醋酸乌利司他的反应产物中经分离制备得到所述化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J的步骤。3，20-双缩酮(中间体VI)制备得到醋酸乌利司他的反应，例如可以参见现有技术CN102516345B公开的可工业化生产醋酸乌利司他的方法。
[0041] 优选地，上述所述的制备方法，优选从醋酸乌利司他重结晶所得到的重结晶母液中分离制备得到所述的化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J。
[0042] 作为本发明另一目的，还提供一种上述所述化合物或其盐的检测方法，其中所述方法为HPLC法或者HPLC-MS法；
[0043] 优选地，所述的HPLC法的检测条件为：固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为三乙胺磷酸溶液-乙腈梯度洗脱，检测波长为258nm；优选地，流动相为pH2.5～3.5的三乙胺磷酸溶液-乙腈，体积比为30∶70～50∶50；更优选地，流动相为pH3.0的三乙胺磷酸溶液-乙腈，体积比为40∶60；
[0044] 优选地，所述的HPLC-MS法的检测条件为：HPLC的色谱条件为固定相以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈∶0.1％甲酸水＝50∶50，MS的条件为采用选择性离子检测法，检测化合物A母离子[M+H]+m/z 397.1、化合物G母离子[M+H]+m/z 476.2、化合物H母离+ + +子[M+H]m/z 441.2、化合物I母离子[M+H]m/z 516.2或化合物J母离子[M+H]m/z 474.2。
[0045] 作为本发明另一目的，还提供上述所述化合物或其盐在醋酸乌利司他原料药或者制剂的有关物质检测中作为杂质对照品的用途。
[0046] 作为本发明另一目的，还提供一种醋酸乌利司他原料药或者制剂的质量检测方法，其包括测定其中有关物质的步骤，所述的有关物质选自上述所述的化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J，其特征在于所述的测定采用HPLC法或者HPLC-MS法检测；优选地，所述的HPLC法或者HPLC-MS法如上述所述；更优选地，所述的检测采用HPLC法检测；更优选地，所述的HPLC法的检测条件为：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为体积比为30∶70～50∶50的pH2.5～3.5的三乙胺磷酸溶液-乙腈，检测波长为DAD(二极管阵列检测器)258nm，理论板数按醋酸乌利司他峰计算应不小于2000；更优选地，所述的有关物质检测中，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，以峰面积计算，与各杂质相对应的峰各不得大于杂质对照品溶液的0.15倍(即杂质含量不超过0.15％)。
[0047] 上述所述的用途，其中所述的检测采用HPLC法或者HPLC-MS法检测；优选地，所述的检测采用HPLC法检测；更优选地，所述的HPLC法检测条件为：固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为体积比为30∶70～50∶50的pH2.5～3.5的三乙胺磷酸溶液-乙腈，更优选流动相为0.2％三乙胺(磷酸调pH 3.0)缓冲液∶乙腈＝40∶60，检测波长为DAD(二极管阵列检测器)258nm，理论板数按醋酸乌利司他峰计算应不小于2000；更优选地，所述的有关物质检测中，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，以峰面积计算，与各杂质相对应的峰各不得大于杂质对照品溶液的0.15倍(即杂质含量不超过0.15％)。总杂质含量不得超过1.0％。
[0048] 作为本发明一个具体实施方式，上述所述的杂质化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J具体可通过以下方法制备得到。
[0049] 1、醋酸乌利司他的制备过程
[0050] 将3，20-双缩酮(化合物VI 1mol)，二氯甲烷，吡啶、三水六氟丙酮，冷却至-10-0℃，滴加50％双氧水，于-5-5℃反应2-3h，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取两次合并，用10％硫代硫酸钠水溶液洗涤，有机相水洗两次，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至恒重。
[0051] 将Mg(1.6mol)，1，2一二溴乙烷和THF加入三口烧瓶，滴加4-溴-N，N-二甲基苯胺和THF，加热引发反应后回流滴加，加毕，于50-60℃搅拌反应3h得到格氏试剂，冷却至25℃，加入氯化亚铜，25℃搅拌30分钟后，冷却下滴加上述环氧化物的二氯甲烷溶液，保持温度10-20℃，加毕保温搅拌2h，倒入冰的饱和NH4Cl水溶液中，搅拌10分钟，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取，有机相合并，加入2N HCl溶液。于25℃下搅拌2h，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取，合并，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，水各洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液转入反应瓶中，加入冰醋酸(1.25mol)，冷却至-10-0℃，加入70％高氯酸(1.18mol)，然后搅拌下于-10-0℃滴加醋酐(5.96mol)，保温搅拌30分钟后，水相用二氯甲烷萃取，合并，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，水各洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干约110g，经用10倍量异丙醇∶乙醇(95∶5)重结晶得到浅黄色结晶244.8g，重结晶母液浓缩干得固体，待用。产物再次用异丙醇∶乙醇(95∶5)重结晶，60℃烘干得到浅黄色结晶的产物，重结晶母液浓缩干得固体，待用。
[0052] 上述所得的醋酸乌利司他经LC-MS分析，含有多个杂质，其中包括杂质A(即化合物A)、杂质G(即化合物G)、杂质H(即化合物H)、杂质I(即化合物I)或杂质J(即化合物J)，MS检+ + + +测结果为：杂质A：[M+H]397.1，杂质B：[M+H]415.1，杂质C：[M+H]373.1，杂质D：[M+H]
462.2，杂质E：[M+H]+434.0，杂质F：[M+H]+518.2，杂质G：[M+H]+476.2，杂质H：[M+H]+441.2，杂质I：[M+H]+516.2，杂质J：[M+H]+474.2，杂质K：[M+H]+492.3。
462.2，杂质E：[M+H]+434.0，杂质F：[M+H]+518.2，杂质G：[M+H]+476.2，杂质H：[M+H]+441.2，杂质I：[M+H]+516.2，杂质J：[M+H]+474.2，杂质K：[M+H]+492.3。
[0053] 所用的LC-MS条件为：
[0054] HPLC：流动相为乙腈︰0.1％甲酸水＝50︰50
[0055] 柱温25～35℃
[0056] 流速0.3ml/min
[0057] 检测波长258nm
[0058] 色谱柱：Agilent Poroshe11120EC-C18 2.7u m 4.6X 50mm
[0059] MS：条件
[0060] ESI，fg＝25，MS2scan。
[0061] 2、杂质A、G、H、I、J的制备过程
[0062] 经HPLC分析，醋酸乌利司他成品中杂质的含量低于0.1％，但经对合成过程中的母液进行分析，其中杂质的含量较高，故采用从合成过程中处理过的母液中制备分离杂质。
[0063] 将醋酸乌利司他的制备过程中所得重结晶母液浓缩至干得到固体，此固体中含较高比例杂质，将此固体经高压制备液相纯化、处理可得到高纯的的杂质对照品，具体操作如下：
[0064] 纯化条件：
[0065]
[0066]
[0067] 梯度洗脱比例：
[0068]时间(分) A％ B％
0 90 10
30 40 60
60 40 60
0 90 10
30 40 60
60 40 60
[0069] 具体操作步骤：
[0070] 将母液浓缩至干得到固体，取约1g，用40％乙腈/水溶解，上柱，梯度洗脱，根据出峰情况，分段收集洗脱液，每次纯化完成后，纯化柱用5％乙腈水溶液重新平衡后，可重复进样纯化。将多批次纯化得到的含各组份纯度>98％的洗脱液分别合并。浓缩除去大部分乙腈，水层用乙酸乙酯提取，浓缩乙酸乙酯至干，分别得到杂质固体。每批次纯化可得杂质A约为5mg，杂质B约为10mg，杂质C约为5mg，杂质D约为15mg，杂质E约为5mg，杂质F约为5mg，杂质G约为5mg，杂质H约为15mg，杂质I约为5mg，杂质J约为10mg，杂质K约为5mg。
[0071] 上述纯化过程中的分析检测条件为：
[0072] 流动相为pH3.0三乙胺磷酸缓冲液∶乙腈＝40∶60
[0073] 检测波长258nm
[0074] 柱温：30℃
[0075] 流速1.0mL/min
[0076] 作为本发明一个具体实施方式，还提供了上述化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J在醋酸乌利司他原料及其制剂产品质量检测方法中作为杂质对照品的用途。优选用HPLC和/或HPLC-MS检测杂质化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J及其含量。
[0077] 更优选地，所述HPLC所采用的条件为，
[0078] 流动相：pH2.5～3.5的三乙胺磷酸溶液-乙腈，体积比为30∶70～50∶50；其中pH2.5～3.5的三乙胺磷酸溶液是由三乙胺-磷酸缓冲对组成，1000份水加1～3份三乙胺得到三乙胺溶液，以磷酸调节pH为2.5～3.5；
[0079] 流速：0.8～1.2mL/min(优选流速1.0mL/min)；
[0080] 柱温：25～35摄氏度，优选30℃；
[0081] 检测波长：采用多波长检测，分别选择各杂质的最大吸收波长进行有关物质检测、验证。醋酸乌利司他：303nm；杂质A：259nm；杂质B：234nm；杂质C：241nm；杂质D：303nm；杂质E：304nm；杂质F：328nm；杂质G：253nm；杂质H：262nm；杂质I：256nm；杂质J：261nm；杂质K：299nm。
[0082] 固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
[0083] 更一步优选的，所述HPLC-MS所采用的条件为：
[0084] 色谱条件为：流动相：0.05％～0.5％HAc/水∶乙腈＝(75～80)∶(25～20)；优选0.1％HAc/水，与乙腈比例优选78∶22
[0085] 流速：0.1～0.5ml/min，优选0.3ml/min；柱温：20～40℃，优选30℃
[0086] 质谱条件为：采用选择性离子监测((SIM)法
[0087] 干燥气温度：300～400℃，优选350℃
[0088] 载气流速：8～12L/min，优选10L/min
[0089] 雾化气压力：30～50psi，优选40psi
[0091] 作为本发明一个优选实施方式，提供了上述杂质化合物A、化合物G、化合物H、化合物I或化合物J作为杂质对照品在醋酸乌利司他及其制剂的有关物质检查的质量分析中的应用，其中所述的醋酸乌利司他及其杂质的检测方法优选为HPLC法，HPLC检测条件如下：
[0092] 固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
[0093] 流动相：pH3.0的三乙胺磷酸溶液-乙腈，体积比为40∶60；其中pH3.0的三乙胺磷酸溶液是由三乙胺-磷酸缓冲对组成，1000份水加2份三乙胺，以磷酸调节pH为3.0；
[0094] 流速：0.8～1.2mL/min(优选流速1.0mL/min)；
[0095] 柱温：25～35摄氏度，优选30℃；
[0096] 检测波长：优选258nm。
[0097] 理论板数按醋酸乌利司他峰计算应不小于2000
[0098] 检测波长：紫外扫描显示，各杂质及主成分最大吸收波长如下：
[0099] 醋酸乌利司他：303nm；杂质A：259nm；杂质B：234nm；杂质C：241nm；杂质D：303nm；杂质E：304nm；杂质F：328nm；杂质G：253nm；杂质H：262nm；杂质I：256nm；杂质J：261nm；杂质K：299nm，综合考虑，采用多波长检测，分别选择各杂质的最大吸收波长进行有关物质检测、验证。
[0100] 实验操作：
[0101] 分别称取醋酸乌利司他对照品及杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K对照品各适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中分别含醋酸乌利司他、杂质A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K各约20ug的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。精密量取系统适用性试验溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，醋酸乌利司他及各杂质峰相互间的分离度应符合要求，理论板数按醋酸乌利司他峰计算应不小于2000。
[0102] 测定法
[0103] 精密称取本品10mg，置20ml量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1ml置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。量取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度使主成分色谱峰的峰高为满量程的10-20％。再精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。
[0104] 各杂质重点研究检测波长：
[0105]波长 杂质
302nm 杂质D、E、F、K
237nm 杂质B、C
258nm 杂质A、G、H、I、J
302nm 杂质D、E、F、K
237nm 杂质B、C
258nm 杂质A、G、H、I、J
[0106] 供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，以峰面积计算，与各杂质相对应的峰各不得大于对照溶液的0.15倍(即杂质含量不超过0.15％)；其他任一单个杂质峰均不得大于对照溶液的0.15倍(即杂质含量不超过0.15％)，总杂质不得超过1.0(即总杂质含量不得超过1.0％)，小于对照溶液主峰面积0.05倍(即含量小于0.05％)的峰忽略不计。
[0107] 本发明提供的上述醋酸乌利司他有关物质的检测的方法的优点是测定结果准确可靠，专属性强，实用性强，各杂质能有效检出，且醋酸乌利司他及各杂质间均达到良好分离，采用该系统可检测多种杂质。
[0109] 图1：醋酸乌利司他及杂质分离度图谱
[0110] 图2：醋酸乌利司他检测图谱
[0111] 图3：杂质A的HPLC测定线性关系图
[0112] 图4：杂质G的HPLC测定线性关系图
[0113] 图5：杂质H的HPLC测定线性关系图
[0114] 图6：杂质I的HPLC测定线性关系图
[0115] 图7：杂质J的HPLC测定线性关系图
具体实施方式
[0116] 实施例1：醋酸乌利司他的制备
[0117] 将3，20-双缩酮(100g，0.25mol)，二氯甲烷(1L)，吡啶(5ml)、三水六氟丙酮(20ml，143mmol)，冷却至-10-0℃，滴加50％双氧水(70ml，1.44mol)，于-5-5℃反应2-3h原料消失后，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取两次合并，用10％硫代硫酸钠水溶液(10ml)洗涤一次，有机相水洗两次(50ml*2)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至恒重约200ml。
[0118] 将Mg(9.6g，0.4mol)，1，2-二溴乙烷(1ml)和THF(50ml)加入三口烧瓶，滴加4-溴-N，N-二甲基苯胺(71g，0.35mol)和THF(200ml)溶液，加热引发反应后保持回流下滴加，加毕，于50-60℃搅拌反应3h得到格氏试剂，冷却至25℃，加入氯化亚铜(3g，30mmol)，25℃搅拌30分钟后，冷却下滴加上述环氧化物的二氯甲烷溶液，保持温度10-20℃，加毕保温搅拌2h，倒入冰的500ml饱和的NH4Cl水溶液中，搅拌10分钟，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取
400ml*5次，有机相合并，加入1000ml 2N HCl溶液。于25℃下搅拌2h，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取200ml*3，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，水各洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液转入反应瓶中，加入冰醋酸(18ml，315mmol)，冷却至-10～0℃，加入70％高氯酸(24ml，295mmol)，然后搅拌下于-10～0℃滴加醋酐(140ml，l.49mol)，保温搅拌30分钟后，水相用二氯甲烷萃取两次200ml*3，合并，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，水各洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干约110g，经用10倍量异丙醇∶乙醇(95∶5)重结晶得到浅黄色结晶61.2g，重结晶母液浓缩干得固体，待用。产物再次用异丙醇∶乙醇(95∶5)重结晶，
60℃烘干得到浅黄色结晶的产物，重结晶母液浓缩干得固体，待用。
400ml*5次，有机相合并，加入1000ml 2N HCl溶液。于25℃下搅拌2h，分出有机相，水相用二氯甲烷萃取200ml*3，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，水各洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤，滤液转入反应瓶中，加入冰醋酸(18ml，315mmol)，冷却至-10～0℃，加入70％高氯酸(24ml，295mmol)，然后搅拌下于-10～0℃滴加醋酐(140ml，l.49mol)，保温搅拌30分钟后，水相用二氯甲烷萃取两次200ml*3，合并，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，水各洗一次，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至干约110g，经用10倍量异丙醇∶乙醇(95∶5)重结晶得到浅黄色结晶61.2g，重结晶母液浓缩干得固体，待用。产物再次用异丙醇∶乙醇(95∶5)重结晶，
60℃烘干得到浅黄色结晶的产物，重结晶母液浓缩干得固体，待用。
[0119] 实施例2：杂质化合物的制备
[0120] 将醋酸乌利司他的制备过程中所得重结晶母液浓缩至干得到固体，此固体中含较高比例杂质，将此固体经高压制备液相纯化、处理可得到高纯的的杂质对照品，
[0121] 具体操作如下：
[0122] 纯化条件：
[0123]
[0124] 梯度洗脱比例：
[0125]时间(分) A％ B％
0 90 10
30 40 60
60 40 60
0 90 10
30 40 60
60 40 60
[0126] 具体操作步骤：
[0127] 将母液浓缩至干得到固体，取约1g，用40％乙腈/水溶解，上柱，梯度洗脱，根据出峰情况，分段收集洗脱液，每次纯化完成后，纯化柱用5％乙腈水溶液重新平衡后，可重复进样纯化。将多批次纯化得到的含各组份纯度>98％的洗脱液分别合并。浓缩除去大部分乙腈，水层用乙酸乙酯提取，浓缩乙酸乙酯至干，分别得到杂质固体。每批次纯化可得杂质A约为5mg，杂质B约为10mg，杂质C约为5mg，杂质D约为15mg，杂质E约为5mg，杂质F约为5mg，杂质G约为5mg，杂质H约为15mg，杂质I约为5mg，杂质J约为10mg，杂质K约为5mg。其中杂质D和E为已知化合物。其中，所得新化合物A(即杂质A)、化合物G(即杂质G)、化合物H(即杂质H)、化合物I(即杂质I)或化合物J(即杂质J)的结构分别为：
[0128] 杂质A：
[0129]
[0130] 杂质G：
[0131]
[0132] 杂质H：
[0133]
[0134] 杂质I：
[0135]
[0136] 杂质J：
[0137]
[0138] 所述杂质A，分子式：C24H28O5
[0139] 分子量：396.48
[0140] 化学名：3，17α-二乙酰氧基-19-去甲孕甾-2，4，10，9(11)-四烯-20-酮[0141] MS：397.16[M+H]+，419.13[M+Na]+，435.11[M+K]+
[0142] 仪器型号：BRUKER BV-500型核磁共振仪
[0143] 杂质A的1H-NMR谱、13C-NMR谱、DEPT谱、COSY谱、HSQC谱和HMBC谱归属如下表所示[0144]
[0145]
[0146]
[0147] 所述杂质G，分子式：C30H37NO4
[0148] 分子量：475.62
[0149] 化学名：17α-乙酰氧基-10-(4-N，N-二甲基氨基苯基)-19-去甲孕甾-4，9(11)-二烯-3，20-二酮
[0150] MS：476.23[M+H]+
[0151] 仪器型号：BRUKER BV-500型核磁共振仪
[0152] 杂质G的1H-NMR谱、13C-NMR谱、DEPT谱、COSY谱、HSQC谱和HMBC谱归属如下表所示[0153]
[0154]
[0155]
[0156] 所述杂质H，分子式：C26H32O6
[0157] 分子量：440.53
[0158] 化学名：3-乙酰氧基乙氧基-17α-乙酰氧基-19-去甲孕甾-2，4，10，9(11)-四烯-20-酮
[0159] MS：441.20[M+H]+，463.19[M+Na]+，479.14[M+K]+
[0160] 仪器型号：BRUKER BV-500型核磁共振仪
[0161] 杂质H的1H-NMR谱、13C-NMR谱、DEPT谱、COSY谱、HSQC谱和HMBC谱归属如下表所示[0162]
[0163]
[0164]
[0165]
[0166] 所述杂质I，分子式：C32H37NO5
[0167] 分子量：515.64
[0168] 化学名：3，17α-二乙酰氧基-11β-(4-N，N-二甲基氨基苯基)-19-去甲孕甾-2，4，10，9(11)-四烯-20-酮
[0169] MS：516.26[M+H]+
[0170] 仪器型号：BRUKER AV-500型核磁共振仪
[0171] 杂质I的1H-NMR谱、13C-NMR谱、DEPT谱、COSY谱、HSQC谱和HMBC谱归属如下表所示[0172]
[0173]
[0174]
[0175]
[0176] 所述杂质J，分子式：C30H35NO4
[0177] 分子量：473.60
[0178] 化学名：17α-乙酰氧基-11β-(4-N，N-二甲基氨基苯基)-19-去甲孕甾-4，8(14)，9(11)-三烯-3，20-二酮
[0179] MS：474.29[M+H]+，496.27[M+Na]+
[0180] 仪器型号：BRUKER AV-500型核磁共振仪
[0181] 杂质J的1H-NMR谱、13C-NMR谱、DEPT谱、COSY谱、HSQC谱和HMBC谱归属如下表所示[0182]
[0183]
[0184]
[0185]
[0186] 实施例3：醋酸乌利司他及其杂质的检测方法
[0187] 醋酸乌利司他有关物质的检测的方法采用液相色谱检测，HPLC检测条件如下：
[0188] 固定相：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
[0189] 流动相：0.2％三乙胺(磷酸调pH 3.0)缓冲液∶乙腈＝40∶60
[0190] 检测波长：DAD 302nm、258nm、237nm
[0191] 流速：1.0ml/min；
[0192] 柱温：25℃
[0193] 实验操作：
[0194] 分别称取醋酸乌利司他对照品及各杂质对照品各适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中分别含醋酸乌利司他、各杂质各约20u g的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。精密量取系统适用性试验溶液10ul注入液相色谱仪，记录色谱图(如图1所示)，醋酸乌利司他及各杂质峰相互间的分离度应符合要求，理论板数按醋酸乌利司他峰计算应不小于2000。
[0195] 测定法：
[0196] 精密称取醋酸乌利司他10mg，置20ml量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1ml置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。量取对照溶液10μl，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度使主成分色谱峰的峰高为满量程的10-20％。再精密量取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，色谱图如图2所示。
[0197] 各杂质重点研究检测波长：
[0198]波长 杂质
302nm 杂质D、E、F、K
237nm 杂质B、C
258nm 杂质A、G、H、I、J
302nm 杂质D、E、F、K
237nm 杂质B、C
258nm 杂质A、G、H、I、J
[0199] 供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，以峰面积计算，与各杂质相对应的峰各不得大于对照溶液的0.15倍(即杂质含量不超过0.15％)；其他任一单个杂质峰均不得大于对照溶液的0.15倍(即杂质含量不超过0.15％)，总杂质不得超过1.0倍(即总杂质含量不超过1.0％)，小于对照溶液主峰面积0.05倍(即含量小于0.05％)的峰忽略不计。
[0200] 方法学验证：
[0201] 杂质测定方法学验证结果如下：
[0202]
[0203]
[0204]
[0205]
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种马钱苷原料药的制备方法 | 2020-05-12 | 902 |
| 一种原料药合成装置 | 2020-05-11 | 272 |
| 原料药萃取液分离方法 | 2020-05-11 | 510 |
| 原料药桶自动扣盖机 | 2020-05-11 | 1012 |
| 降血糖的药用原料药 | 2020-05-11 | 310 |
| 一种枸橼酸托烷司琼原料药及原料药和注射液的制备工艺 | 2020-05-12 | 445 |
| 一种消化系统抗炎药原料药配方 | 2020-05-13 | 991 |
| 一种中老年花粉抗过敏药原料药配方 | 2020-05-13 | 666 |
| 一种皮肤抗炎药原料药配方 | 2020-05-13 | 963 |
| 一种生发药原料药配方 | 2020-05-11 | 710 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
原料药热门专利
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈