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用于再生医药和用于组织支持物的生物相容的并且可生物降解的梯度层系统

阅读：985发布：2020-07-02

专利汇可以提供用于再生医药和用于组织支持物的生物相容的并且可生物降解的梯度层系统专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统，其包含至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联聚合物的层组和至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层，其中优选地形成有关至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联聚合物的层组和／或至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层的一层或多层的机械和／或物理性能的梯度。至少一个支持层优选地包含生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物和／或生物相容的和可掺入的材料。此生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可用作用于再生医药，特别是作为伤口敷料或用于组织支持物的生物材料。本发明也提供了利用所述发明的梯度层系统的方式和用于生产其的方法。，下面是用于再生医药和用于组织支持物的生物相容的并且可生物降解的梯度层系统专利的具体信息内容。

权利要求

1.生物相容的梯度层系统，所述梯度层系统包含至少一个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组和至少一个生物相容的支持层，其中通过改变在发明的梯度层系统的至少一个层或层组内或在若干层或层组之间的机械和／或物理性能形成梯度。
2.根据权利要求1的梯度层系统，其中机械和／或物理性能包含例如机械强度、孔大小、纤维强度和纤维长度。
3.根据权利要求1或2的梯度层系统，其中在梯度层系统的至少一个层或层组内或在梯度层系统的若干层或层组之间纤维强度改变、增加或降低从约0.0001μm-至约2μm每μm层或层组高度。
4.根据权利要求1至3中任一项的梯度层系统，其中至少一个包含生物相容的交联的聚合物的层组的聚合物纤维的纤维强度表现出在约1nm至约500μm之间的强度。
5.根据权利要求1至4中任一项的梯度层系统，其中生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物选自胶原、明胶、纤维蛋白、弹性蛋白、层粘连蛋白，和纤连蛋白、多糖、聚糖或多聚糖，或其组合。
6.根据权利要求1至5中任一项的梯度层系统，其中至少一个生物相容的支持层包含选自聚酯类别、聚己内酯(PCL)、聚交酯(PLA)、聚乙醇酸交酯(PGA)、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚酸酐、聚癸二酸、多肽、明胶、藻酸盐、胶原、纤维蛋白，或混合物或聚氨酯的可生物降解并且生物相容的可熔化的聚合物，和／或选自可掺入的陶瓷材料、由磷酸三钙(TCP)制成的可掺入的陶瓷材料或由羟基磷灰石(HA)制成的可掺入的陶瓷材料的可掺入的材料。
7.根据权利要求1至6中任一项的梯度层系统，其中使用交联剂交联生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物和／或生物相容的可熔化的聚合物，所述交联剂选自酸酐、氨基酸、氮丙啶、儿茶酚胺、epoxydes、醛、甲醛、二醛、戊二醛、乙二醛、乙二醛三聚体二水合物、戊二醛、异己酮、二甲基辛二亚氨酸酯和二甲基3，3′-二硫代双丙亚氨酸戊二醛(dimethyl3，3′-dithiobispropionimidadteglutaraldehyde)、环氧化物、双环氧乙烷、氧化的葡聚糖、对叠氮苯甲酰肼、N-[([α]-马来酰亚胺乙酸基]琥珀酰亚胺酯、对叠氮苯基乙二醛单水合物、双(β-[4-叠氮水杨酰氨基]乙基)二硫化物、双[磺基琥珀酰亚胺基]辛二酸酯、二硫代双[琥珀酰亚胺基丙酸酯、二琥珀酰亚胺基辛二酸酯、1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐、二酰基氯化物、单酚化合物和多酚化合物。
8.根据权利要求1至7中任一项的梯度层系统，其中至少一个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组以绒布、网或网眼样结构的形式存在。
9.根据权利要求1至8中任一项的梯度层系统，其中至少一个生物相容的支持层以带、线、纤维、颗粒、滴状物、网或网眼样结构、片、膜、箔或层压制件的形式存在。
10.根据权利要求1至9中任一项的梯度层系统，其中梯度层系统接种了细胞。
11.根据权利要求10的梯度层系统，其中细胞选自从定向干细胞、分化的细胞、成体干细胞、骨髓干细胞和脐带干细胞、改造的或非改造的干细胞、原代或永生化(细胞系)干细胞、间充质干细胞选择的(哺乳动物、人或非人)干细胞，软骨细胞、上皮细胞、内皮细胞、血管和角膜组织的内皮细胞、皮肤细胞、骨细胞、成骨细胞、成牙骨质细胞、骨细胞、成肌细胞、成神经细胞、所有结缔组织的成纤维细胞、齿龈和／或皮肤和角膜成纤维细胞，单独地或与牙周韧带成纤维细胞一起、角化细胞、齿龈角化细胞、成胶质细胞、生殖细胞、肝细胞、软骨细胞、平滑肌细胞、心肌细胞、结缔组织细胞、胶质细胞、激素分泌细胞、免疫系统细胞、神经元、中枢神经系统细胞、神经元细胞、周细胞、肌细胞、脂肪细胞、星形胶质细胞、黑素细胞、组织细胞、来自自体组织来源、同种异体组织来源或异种组织来源的组织细胞、自体细胞、同种异体细胞、异种细胞、组织细胞、骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞、心肌细胞、肝细胞、平滑肌细胞、内皮细胞或如上面定义的细胞的混合物。
12.根据权利要求1至11中任一项的梯度层系统，其中梯度层系统还包含细胞因子、白介素、生长因子、免疫球蛋白、RGD肽、抗菌剂和其他药剂。
13.根据权利要求1至12中任一项的梯度层系统，其中还使用酚类化合物交联至少一个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组。
14.根据权利要求1至13中任一项定义的梯度层系统，所述梯度层系统用于治疗烧伤，治疗由于手术损伤、软或硬组织的损伤的伤口，治疗由于肿瘤疾病的伤口，治疗大的慢性伤口，由疾病，例如癌症、II型糖尿病引起的伤口，治疗溃疡的伤口，治疗口腔中的伤口，治疗眼科学领域、牙周缺损包括牙周韧带领域的伤口或损伤，用于再生或重建损伤的或患病的或去除的组织，用于再生或重建由帕金森氏病或脊髓损伤或肿瘤病理或阿尔茨海默病导致的损伤的或患病的或去除的组织，治疗心血管病，治疗创伤疾病或损伤，治疗整形外科领域的疾病或病症，治疗、再生或重构软骨、软骨疾病或软骨病症、软骨病，构建膝盖中的软骨，和治疗关节病。
15.包含根据权利要求1至13中任一项的梯度层系统的生物材料，其中所述生物材料选自用于再生医药、用于伤口敷料或用于组织支持物或用于制备所述再生医药、伤口敷料或组织支持物的生物材料、生物改造的组织或器官构建体、或部分器官构建体、生物改造的心、生物改造的心脏瓣膜、生物改造的肝、生物改造的肾、生物改造的血管、生物改造的骨骼肌、生物改造的心肌、生物改造的神经导引、烧伤敷料、伤口敷料、外科敷料、皮肤贴片、筋膜鞘、血管构建体、血管移植物、血管、用于旁路或移植的冠状血管、股动脉、腘动脉、肱动脉、胫动脉、桡动脉或相应的静脉、支架、支架的内衬或外衬、心血管瓣膜、皮肤贴片、用于消化的锭剂、腹膜内植入物、皮下植入物、腱、角膜、韧带、假牙、肌肉植入物或神经导引、改造的组织或器官、修复学、组织脚手架、止血设备、用于组织修复和支持粘合剂的设备或结构、用于合成的植入物的天然涂料或组分；美容植入物或支持物、用于物质递送的生物材料、生物改造的平台、或用于检测物质对细胞的作用的平台。
16.根据权利要求1至13中任一项定义的梯度层系统用于制备如权利要求15中定义的生物材料的用途。

说明书全文

用于再生医药和用于组织支持物的生物相容的并且可生物

降解的梯度层系统

[0001] 本发明涉及生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统，其包含至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组和至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层，其中优选地形成关于至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组和／或至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层的一层或多层的机械和／或物理性能的梯度。至少一个支持层优选地包含生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物和／或生物相容的和可掺入的材料。此生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可用作用于再生医药，特别是作为伤口敷料(dressing)或用于组织支持物的生物材料。本发明也提供了利用所述发明的梯度层系统的工具和生产所述梯度层系统的方法。

[0002] 在再生医学中，上皮灼伤案例的发生率日益增长。这些大伤口的治疗一般通过完全去除受损组织进行。随后，将健康皮肤从患者的未受影响区域移植到待治疗的伤口处。移植皮肤移植物必然需要侵入性手术并涉及大面积的皮肤。因此这些治疗不仅痛苦，而且具有感染、形成疤痕的风险，由于伤口的尺寸过大还可能伴随伤口愈合困难。

[0003] 新方法已显示，这些伤口也可通过开发的用于再生医药的新材料，特别是伤口敷料材料治疗。在此上下文中，用于再生医药的生物材料不仅应具有包括去除溢泌物和保护伤口的能力，而且也应具有足够的机械性能，因为它们必须抵抗一般在组织和移植物中局部出现的剪切力。可满足这些要求的理想的伤口敷料材料的若干其他特征为，例如用于气体渗透的高孔隙率和用于保护伤口免于感染和脱水的良好屏障。基于这些要求，开发的用于再生医药的候选生物材料，特别是伤口敷料材料必须通过评估以验证其既是良好屏障又具有良好的氧气渗透性。另外，这样的材料应理想地支持新组织在伤口上的生长，并因此优选地与待替换的组织的脚手架结构或至少与允许脚手架结构的细胞内向生长和／或新生血管形成的脚手架结构类似。

[0004] 可适用于这些目的的用于再生医药的生物材料优选地由生物相容性材料组成。在本领域存在许多生物相容性材料的例子，但由于各个材料的机械和物理限制，仅可有效使用其中的一部分。

[0005] 通常在本领域中使用的材料可分为天然存在的聚合物和合成的聚合物。天然存在的聚合物一般显示良好的生物相容性和生物降解性。合成的聚合物部分也显示良好的生物相容性和部分生物降解性。然而，这些合成聚合物的制备经常需要应用细胞毒性物质例如催化剂、细胞毒性溶剂，和／或这些聚合物可能包含单体或有机溶剂。这些杂质不能被完全去除，因此可能在最终聚合物中以细胞毒性成分残留。特别地，这些杂质可能导致周围组织的炎性反应，待治疗患者在移植位点的有害免疫反应，甚至导致移植物的变态反应或移植排斥反应。

[0006] 一种提供非常好的生物相容性和甚至更优选地，良好生物降解性的卓越的天然存在的聚合物是明胶。明胶是广泛用于药物和食物工业的蛋白质，其以相对低的价格大规模生产。其也显示了对水蒸气的有限屏障，这特别有利于制备有效的伤口敷料材料。由于其功能性质，其已被进一步用于生产可食用和／或可生物降解的膜。然而和大多数基于蛋白质的膜类似，其具有有限的机械性能并显示对剪切力的糟糕的稳定性和抵抗，使其难以应用于用于再生医药的生物材料。

[0007] 因此本领域的许多研究试图提供基于明胶的改进的生物材料，通过在组合的聚合物溶液中混合明胶和合成的、机械上更稳定的聚合物以得到良好或改进的机械稳定性。这些合成的、机械上更稳定的聚合物是，例如聚己内酯(PCL)，聚交酯(PLA)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)，聚氨酯(PU)，等等。然而这些混合的聚合物显著降低了明胶和其他天然存在聚合物的优越品质，因为它们降低了对水蒸气的有限屏障，降低或甚至破坏了明胶的优秀的生物相容性能，甚至可能导致周围组织的炎性反应，待治疗患者在移植位点的有害免疫反应，甚至导致移植物的变态反应或移植排斥反应，原因是使用已在单独的合成聚合物中讨论的细胞毒性溶剂。

[0008] 在例如美国专利申请US2002／0090725A1中讨论了一种这样的方法，其中公开了电处理的胶原和电处理的混合的聚合物组合物，所述组合物包含胶原与合成聚合物的组合，所述合成聚合物为例如聚氨酯，聚硅氧烷或聚硅酮，聚乙烯，聚乙烯基吡咯烷酮，聚甲基丙烯酸2-羟基乙酯，聚N-乙烯基吡咯烷酮，聚甲基丙烯酸甲酯，聚乙烯醇，聚丙烯酸，聚丙烯酰胺，聚乙烯-乙酸乙烯酯共聚物，聚乙二醇，合成的聚阳离子(例如聚乙烯亚胺)，合成的聚阴离子(例如聚苯乙烯磺酸盐和聚甲基丙烯酸)，聚甲基丙烯酸，聚交酯(PLA)，聚羟基乙酸(PGA)，聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)，尼龙，聚酰胺，聚酸酐，聚乙烯-乙烯醇共聚物(EVOH)，聚己内酯，聚乙酸乙烯酯(PVA)，聚环氧乙烷(PEO)和聚原酸酯或其他类似的可开发的生物相容的合成聚合物。不幸地是，这些合成聚合物只有一部分是可生物降解的，因此如果它们不能或不永久掺入体内的话则需要在应用后去除。因此这些不可生物降解的聚合物适合临时应用。另外，尽管US2002／0090725A1的混合的聚合物可能显示了增强的机械性能，它们没有去除如上讨论的可能的有害副作用的缺点。此外，这些材料和由其制成的聚合物基质仅提供了有关细胞向内生长、水和蒸气渗透性等的有限的能力。

[0009] 在US2003／0232746中的另一种方法涉及稳定化的交联的水凝胶基质，其包含第一高分子量组分和第二高分子量组分。两种高分子量组分共价交联，其中第一高分子量组分和第二高分子量组分分别选自多聚糖和多肽，优选任意组织来源或合成产生的多肽，例如胶原或胶原来源的明胶，更优选葡聚糖和明胶。组合物还含有至少一种稳定剂或增强剂。尽管提供了多种不同功能和改进的机械性能，US2003／0232746的稳定化的交联的水凝胶基质在制备基质时需要交联剂，所述交联剂在交联后可能不能充分去除，因此保留在最终的聚合物基质中。如上所述，这些残留物可能导致如上讨论的周围组织的变态反应和炎性反应，还可能由于未反应的交联剂化合物导致细胞毒性作用。

[0010] 另一篇文件，Lelkes等人(US2006／0263417)公开了作为组织工程脚手架的天然和合成聚合纤维的电纺丝掺合物。如在Lelkes等人中开始讨论的，将共纺作为首先的方法，各个材料在不同的注射器中，通过电纺丝在支持物上同时应用材料以提供在机械上改进的但仍然多孔的基质。然而作者放弃了此方法。作者反而意识到展示较低密度纤维网络的材料可能是有利的。作为此问题的解决方案，Lelkes等人(US2006／0263417)提出了包含不经交联的至少一种合成聚合物和至少两种天然聚合物的电处理的掺合物的纤维。优选地，至少两种天然聚合物之一是弹性蛋白或弹性蛋白的前体形式或弹性蛋白样材料。
Lelkes等人(US2006／0263417)预期这些基质比现有技术基质展示更多孔的脚手架，并观察到其在细胞培养基中维持稳定。然而，Lelkes等人(US2006／0263417)青睐的不同的天然存在材料和合成材料的掺合物，由于如上已经讨论的在一种聚合物混合物中掺合这些聚合物显著改变和损害了这些聚合物的优越品质。

[0011] Carvalho 等人 ( 见 Carvalho 等人，Brazilian Journal of Chemical Engineering，第23卷，No.01，第45-53页，January-March，2006)报导了改进明胶的机械性能的另一种方法，虽然是在另一种情况下。如文中讨论的，制备明胶膜用于可食用和／或生物降解的膜，其中进一步交联明胶。结果，交联度的增加通过扩散性降低导致水蒸气渗透性的降低和机械特征的改进。然而，较不优选高交联比，因为其导致特别小的孔并显著降低可能的细胞的向内生长。

[0012] 在Lee等人(US2008／0233162A1)中描述了和前面讨论的类似的方法。Lee等人公开了用于组织再生的纤维状多孔三维脚手架，其包含聚合物和／或低分子纤维。此聚合物和／或低分子纤维是由一种或多种合成的可生物降解的脂肪族聚酯或一种或多种天然聚合物组成的可生物降解的聚合物。聚合物通过电纺丝在三维网络结构上形成，并可单独使用或在聚合物的混合物中使用。然而Lee等人(US2008／0233162A1)没有提供可克服根本问题的其他替代物。

[0013] Kim等人(见Kim等人，Biomed.Mater.4，(2009)044106(11p))公开了掺合的纳米纤维脚手架，其分别使用合成和天然聚合物，聚氨酯(PU)和明胶，使用电纺丝法制备用于伤口敷料的材料。他们测定了此明胶/PU掺合的纳米纤维脚手架的性能，发现这些纳米纤维的平均直径是均匀地电纺成的，范围从0.4至2.1μm。根据结果，当掺合的溶液中的明胶量降低时，接触角增加且脚手架的水摄入同时降低。在机械试验中，掺合的纳米纤维脚手架是有弹性的，且弹性随PU总量的增加而增加。此外，当明胶总量增加时，相同培养时间下的细胞增殖增加。然而，尽管此明胶/PU掺合的纳米纤维脚手架在作为伤口敷料中具有潜在应用，将脚手架的天然聚合物与其他聚合物掺合仍然损害了脚手架的天然聚合物的优越性能。

[0014] US2010／0129450涉及组合物和用于制备包含至少一种天然生物材料组分和至少一种合成聚合物材料的电纺丝基质的方法。天然组分使基质高度生物相容，而分子量聚合物成分可通过增加电纺丝期间溶液的粘度和纺丝特征赋予脚手架额外的机械强度和／或改进制备的容易度。与讨论的本领域的其他方法和脚手架类似，US2010／0129450在电纺丝基质的制备中利用不同聚合物的掺合物。如已经陈述的，这样的掺合物通过将脚手架的天然聚合物与其他聚合物掺合可损害脚手架的天然聚合物的优越性能，并因此可仅提供有关例如气体渗透和脱水的有限性能，或可能不足以允许细胞向内生长和新组织结构的形成。

[0015] 综上，现有技术方法提供的生物材料仍然具有若干缺点，例如糟糕的细胞向内生长，不足的机械稳定性，细胞毒性等等。因此，本发明的目的是提供用于再生医药，优选用于伤口敷料和组织支持物的新生物材料，其允许在其脚手架结构中有效培养细胞，显示良好的机械性能，用于气体渗透的高孔隙率和用于保护伤口免于感染和脱水的良好屏障，但不损害应用的天然或合成聚合物的优越品质。此外，这样的生物材料应有效支持细胞的向内生长和新组织结构(例如细胞外膜或功能器官组织)的形成。

[0016] 本发明的此目的通过本发明公开内容随附的权利要求解决。

[0017] 优选地，根据第一实施方案，本发明的目的通过生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统解决，所述梯度层系统包含至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组和至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层，其中优选地形成关于至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组和／或至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层的一层或多层的机械和／或物理性能的梯度。优选地，通过改变发明的梯度层系统的至少一个层或层组内或若干个层或层组之间的机械和／或物理性能形成梯度。优选地，机械和／或物理性能包括例如机械强度、孔大小、纤维强度、纤维长度等。纤维强度特别地表示纤维的宽度或直径，其一般进而决定纤维的机械强度。在本发明的上下文中，术语“纤维强度”因此优选地指如本文定义的纤维的宽度或直径。生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统优选地是水不溶性的。

[0018] 由于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统，本发明有效允许本系统适用于伤口治疗中出现的多种不同情况。发明的梯度层系统提供了具有良好生物相容性的新的和有弹性的生物材料，广泛应用于烧伤泊疗，由于手术治疗、癌症或其他疾病的损伤或伤口的治疗，以及慢性伤口的治疗和重建整形外科。发明的梯度层系统还可容易地适应于例如待治疗的伤口或损伤的不同生物力学需要。发明的梯度层系统还可补充多种不同化合物，例如生长因子、白介素等。由于发明的梯度层系统在其不同层或层组中的可调节的机械强度，其另外显示了适时的体内延迟降解。这允许补充了这样的发明的梯度层系统的组织在伤口的短期或长期治疗期间通过生长进入所述人工组织或脚手架有效取代发明的梯度层系统。其也允许发明的梯度层系统的缓慢降解，优选地用于软组织结构，和／或发明的梯度层系统的掺入，优选地用于硬组织结构。由于发明的梯度层系统的一致结构，发明的梯度层系统本身也允许有效和全面地在层组或层上培养例如自体细胞。这有效允许制备人工组织构建体甚至人工器官，包括在所述人工构建体或器官中建立功能性血管系统。此外，可将抗菌聚合物(AMP)整合进聚合物或电纺丝聚合物纤维中。

[0019] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可用作用于再生医药，特别是用作伤口敷料或用于组织支持物，特别是用于软和／或硬组织支持物的生物材料。其优选地是生物相容的、可生物降解的、水不溶性的并有效支持细胞向内生长进入其脚手架结构并形成新的组织结构，例如细胞外基质和／或膜，功能器官组织或任意其他组织。其还显示良好的机械性能且不损害应用的天然或合成聚合物的优越品质。

[0020] 本发明的第一实施方案定义了生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统，其包含至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组。

[0021] 在此上下文中，可优选地将术语“层组”解释为例如聚合物纤维或任意其他化合物的至少一个“单层”的三维排列。因此，这样的“层组”可由一个或多个“单层”组成，即层组可包含例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，1-15，10-25，15-30，10-50或10-100个或甚至更多个“单层”。因此，由于这样的“层组”的生产，在此上下文中可将“层组”理解为近似无纺绒布、垫子或绒布样或垫子样的结构，其包含一个或多个单层，例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，1-15，10-25，15-30，10-50或10-100或甚至更多层。

[0022] 此外，将术语“梯度层系统”优选地理解为包含如本文定义的层或层组的层系统，其中这些层或层组在发明的梯度层系统的至少一个层或层组内或在几个层或层组之间形成有关机械和／或物理性能的梯度。优选地，形成关于至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组和至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层的机械和／或物理性能的梯度，优选地通过改变、增加或降低一个或多个这样的层或层组的机械和／或物理性能，例如机械强度、孔大小、纤维强度、纤维长度等。因此，这样的梯度可在一个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组内，从一个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组到另一个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组，从至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组到至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层，从至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层到至少另一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层等，及其组合之间改变。

[0023] 根据一个方面，通过改变一个或多个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组的机械和／或物理性能，在一个或多个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组内或之间形成这样的梯度。这优选地通过改变(增加或降低)包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的至少一个层组内或若干个层组(例如2，3，4，5或甚至更多个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组)之间的机械和／或物理性能例如机械强度、刚度、孔隙率、纤维强度等实现。至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组优选地充当组织样脚手架结构，其允许细胞培养和向内生长和形成组织样结构或细胞外样膜。

[0024] 根据一个具体的方面，可通过改变在如上定义的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个层组内的机械和／或物理性能形成梯度。在此上下文中，可通过在同一个层组中的聚合物纤维的改变的(例如增加的或降低的)纤维强度，优选宽度或直径优选地形成梯度，其中优选地在从单层到单层之间改变纤维强度。可通过改变用于此目的的聚合物的粘度和／或交联比，优选地在应用前立刻或应用期间，例如通过在应用前立刻加入交联剂使得在应用期间继续交联并增加粘度和交联比，实现纤维强度，优选宽度或直径的改变。例如，可通过增加用于此目的的聚合物的交联比，特别优选在应用过程中进行，实现纤维强度的增加。同样地，可通过增加用于此目的的聚合物的粘度，特别优选在应用过程中进行，实现纤维强度的增加。在单层或层组的制备中，这样增加聚合物的粘度和／或增加的交联比一般导致增加的纤维强度，优选宽度或直径。同样地，可通过降低用于此目的的聚合物的粘度和／或降低交联比实现纤维强度的降低。在制备整个层组期间，也可机械地调节制备过程以产生改变的，优选增加或降低的纤维强度。

[0025] 通过改变，优选增加或降低根据本发明定义的纤维强度形成的梯度可对应随层或层组的高度和／或数目的纤维强度的改变，优选增加或降低。优选地，宽度或直径随层或层组的高度和／或数目而增加。此随层或层组的高度的纤维强度的改变，优选增加或降低可出现在如本文定义的一个层或层组内，或甚至在具有其不同的层或层组的整个发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统中。优选地，纤维强度，更优选地纤维宽度或直径可在如本文定义的一个层或层组内，或甚至在具有其不同的层或层组的整个发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统中改变，优选增加或降低例如约0.0001μm-约2μm每μm层或层组高度，优选约0.0001μm-约1μm每μm层或层组高度，更优选约
0.001μm-约0.01μm每μm层或层组高度，甚至更优选约0.005μm-0.01μm每μm层或层组高度。

[0026] 可选或另外地，这样的梯度可通过层或层组的制备过程确定，例如通过在所述制备中按照时间增加或降低纤维强度，优选纤维的宽度或直径。例如，通过在制备过程中增加或降低至少一个层组的纤维强度，优选纤维的宽度或直径约1μm／至约500nm／h，约100μm／h至约500nm／h，约1nm／h至约500nm／h，或约10nm／h至约500nm／h，
优选地约100nm／h至约400nm／h，例如约100，150，200，250，300，350或400nm／h，例如280nm／h确定梯度。

[0027] 可选地，可通过不同的层组形成梯度，每个层组优选地包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物。在此上下文中，在同一层组内的聚合物纤维的纤维强度可在上述定义中保持恒定，但相对下一个／其他层组改变，其中聚合物纤维优选地展示不同的强度。

[0028] 优选地，如本文定义的聚合物纤维，优选具有本文定义的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的单层或至少一层或具有生物相容的并且优选可生物降解的支持层的聚合物纤维，可展示在约1nm至约500μm，约1nm至约250μm，约1nm至约100μm，约1nm至约50μm，约10nm至约500μm，约10nm至约250μm，约10nm至约100μm，约10nm至约50μm，约50nm至约500μm，约50nm至约250μm，约50nm至约100μm，约50nm至约50μm之间的强度，优选宽度或直径。

[0029] 根据第一实施方案，生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统包含至少一个包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组。在此上下文中，适合作为生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的聚合物一般选自技术人员已知的生物相容的并且可生物降解的任何聚合物。这样的聚合物优选地包括任意天然存在的聚合物或多肽，优选细胞外基质蛋白质或多糖。细胞外基质蛋白质是在此上下文中合适的优选多肽类别。实例包括但不限于胶原、纤维蛋白、弹性蛋白、层粘连蛋白和纤连蛋白等等。这样的多肽可从天然来源得到，例如从动物，优选哺乳动物，例如奶牛、猪、绵羊等等。这些多肽和分子各自的多种类型是天然存在的。同样地，这样的多肽可合成制造或通过基因工程产生。例如，存在许多形式和类型的胶原，并且本文涵盖所有这些类型和子集。

[0030] 在此上下文中合适的特别优选的多肽的组是任意类型的胶原或其片段或产物。胶原是动物的细胞外基质的主要蛋白质组分。胶原组装成复杂的纤维状组织。原纤维组装成形成纤维的束。原纤维由处于交错排列的5条微原纤维构成。每条微原纤维是胶原棒的聚集。每根胶原棒是右手三股螺旋，每条链自身是左手螺旋。胶原原纤维通过共价的分子内和分子间交联加固，这使成熟动物的此基质不溶于冷水。优选地，在如上陈述的术语的完整含义内的胶原可包括全长胶原、胶原片段和／或类似物，包含相对任意类型或种类的胶原的保守氨基酸取代、非保守氨基酸取代和／或具有非天然存在的氨基酸或残基的取代的胶原。在本发明中使用的胶原可源自天然来源，可合成制造，可通过基因工程产生，或可通过任意其他方式或其组合产生。天然来源包括但不限于，活生物组织产生或含有的胶原。例如，在本发明中使用的胶原可包括但不限于，自体胶原、来自同种器官的胶原或来自另一物种的胶原。可使用的一些胶原包括但不限于I，II，III，IV，V，VI，VII，VIII，IX，X，XI，XII，XIII，XIV，XV，XVI，XVII，XVIII和XIX型胶原。一些优选的胶原包括I和III型。合成的胶原可包括通过任意人工手段产生的胶原。产生胶原和其他蛋白质的多种方法是本领域公知的。可使用特异性序列制备合成的胶原。例如，可使用与天然胶原不同的特定的期望氨基酸序列制备基因改造的胶原。可通过任意方式，包括例如肽、多肽或蛋白质合成产生改造的胶原。例如，可体内或体外基因改造细胞以产生胶原或能够形成胶原或胶原亚结构域的分子，然后可收获期望的胶原。在一个说明性的方面，可包括比在天然胶原中存在的量更多的期望序列，其在胶原蛋白上形成细胞或肽的结合位点。本文使用的胶原也可由胶原自身或由形成胶原结构的任意其他材料在制备由其形成的各个层期间形成。实例包括但不限于，氨基酸、肽、变性的胶原例如明胶、多肽和蛋白质。可在制备各个层前、期间或后形成胶原。例如，可在制备各个层前、期间或后通过组合前胶原和前胶原肽酶形成胶原。当使用合适的处理时，可提取和溶解胶原棒，其中胶原棒保持其三股螺旋的构象。这是变性的胶原，与胶原的天然形式不同，但还未经历足够的热或化学处理以破坏在胶原中存在的分子内稳定化共价键。当彻底加热胶原溶液，或当含有天然胶原的组织经受化学和热处理时，稳定胶原螺旋的氢键和共价键被破坏，分子采用无序构象。通过破坏这些氢键，极性氨基和羧酸基现在能够结合来自其他来源或自身的极性基团。此材料是明胶，一种变性胶原形式，通过动物皮肤、白色结缔组织或骨骼来源的胶原的部分水解得到。明胶可源自酸处理的前体或碱处理的前体。源自酸处理的前体的明胶被称为A型，而源自碱处理的前体的明胶被称为B型。在化学和部分热水解中与胶原降解相关的大分子结构改变基本相同。在热和酸催化的降解的情况下，在个体胶原链内主要是水解切割。在碱水解中，主要是分子间和分子内交联的切割。因此，本文使用的多肽也可包含选自A型和B型明胶的明胶。胶原和由其制备的明胶优选地具有约2,000至约5,000,000Da，更优选地约10,000Da至约1,000,000Da，例如约20,000Da至约80,000Da，或约30,000Da至约70,000Da的分子量范围。

[0031] 同样地，用于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个层组的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物可选自多糖，优选地包括糖胺聚糖(GAG)或葡糖胺聚糖。糖胺聚糖表示包含具有重复的二糖单位的无分支的(或分支的)多糖链的任意聚糖(即，多糖)，所述二糖之一总是氨基糖。这些作为携带高负电荷的化合物类别是强亲水的，一般被称为粘多糖。这组多糖包括肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素和透明质酸。这些GAG主要存在于细胞表面和细胞外基质中。葡糖胺聚糖表示主要含有单糖衍生物的任意聚糖(即，多糖)，其中醇羟基被氨基或其他功能基团例如硫酸或磷酸基团取代。葡糖胺聚糖的实例是聚N-乙酰葡糖胺聚糖，一般被称为壳聚糖。可用于本发明的示例多糖包括葡聚糖、乙酰肝素、肝素、透明质酸、藻酸盐、琼脂糖、卡拉胶、支链淀粉、直链淀粉、糖原、淀粉、纤维素、几丁质、壳聚糖和多种硫酸化的多糖，例如硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素、硫酸葡聚糖、硫酸皮肤素或硫酸角质素。多聚糖组分优选地具有约2,000至约8,000,000Da，更优选地约20,000至约1,000,000Da的分子量范围。

[0032] 优选地，生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物选自胶原、明胶、纤维蛋白、弹性蛋白、层粘连蛋白和纤连蛋白、多糖、聚糖或多聚糖，或其组合。

[0033] 可使用交联剂交联用于制备发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个层组的如上定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物。这样的交联剂的选择优选地取决于待交联的聚合物，优选如上定义的多肽或多糖。大体上，在本发明的上下文中合适的交联剂可包含，但不限于，酸酐、氮丙啶、epoxydes、醛、异己酮、氨基酸，例如丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、L-亮氨酸、L-甲硫氨酸或其衍生物，或任意其他天然或非天然存在的氨基酸，儿茶酚胺，例如儿茶酚、肾上腺素、去甲肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺和携带儿茶酚或1，2-二羟基苯部分的任意其他化合物，优选甲醛、二醛，例如戊二醛、乙二醛、乙二醛三聚体二水合物、二甲基辛二亚氨酸酯和二甲基3，3′-二硫代双丙亚氨酸戊二醛(dimethyl3，3′-dithiobispropionimidadteglutaraldehyde)，环氧化物(例如双环氧乙烷)、氧化的葡聚糖、对叠氮苯甲酰肼、N-[([α]-马来酰亚胺乙酸基]琥珀酰亚胺酯、对叠氮苯基乙二醛单水合物、双(β-[4-叠氮水杨酰氨基]乙基)二硫化物、双[磺基琥珀酰亚胺基]辛二酸酯、二硫代双[琥珀酰亚胺基丙酸酯、二琥珀酰亚胺基辛二酸酯、1-乙基-3-[3-二甲氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐、选自半胱氨酸、组氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、L-亮氨酸、L-甲硫氨酸或其衍生物的二酰基氯化物氨基酸，如上定义的儿茶酚胺，和本领域技术人员公知的其他功能性交联剂。甲醛、乙二醛和戊二醛与氨基酸侧链，特别是与赖氨酸ε-NH2基反应，形成与Schiff碱的形成中类似的键。此外，合适的交联剂，优选地用于本文定义的一种或多种多肽的交联剂包括但不限于下述交联剂，如醛，例如戊二醛、碳二亚胺EDC(1-乙基-3(3二甲基氨基丙基))、在暴露于特定波长的光或辐射(例如紫外光)后交联的感光材料，其选自四氧化锇、碳二亚胺盐酸盐和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)，和因子XIIIa。戊二醛是用于胶原或明胶的理想的交联剂。可选地，可通过加入纤连蛋白和或硫酸肝素，或通过赖氨酰氧化酶酶促级联交联胶原或明胶。同样优选地，可交联多糖和例如二酰基氯化物，以形成二酯交联物。另外，可使用酚类化合物，包括单酚和多酚化合物，优选多酚化合物作为本文定义的聚合物的交联剂。这样的酚类化合物，优选多酚化合物，优选地选自(i)一般适度溶于水的化合物，(ii)具有约500-4000Da的分子量，(iii)优选地包含>约12个酚羟基，和(iv)优选地展示约5-7个芳香环／1000Da。具体优选的多酚化合物包括鞣质、没食子鞣质(Sigma-Aldrich)，根据White-Bate-Smith-Swain-Haslam(WBSSH)定义而定义的化合物，优选原花色素例如矢车菊苷配基、可水解鞣质和phlorotannins，以及酚类化合物，特别是能够复合胶原和其他生物分子的酚类化合物，例如在Quideau等人，Angew Chem Int Ed Engl.2011，50(3)：586-621中定义的。酚类化合物也包含例如姜黄素(curcumin)，白藜芦醇(resveratrol)，其相关衍生物，没食子酸(gallic acid)，绿原酸(chlorogenic acid)，咖啡酸，鼠尾草酚(carnosol)，辣椒素(capsaicin)，6-姜烯酮(shogaol)，6-姜酮醇(gingerol)，及其相应的衍生物，类黄酮，黄烷醇(flavanol)，新类黄酮，酚酸，等等，例如熊果苷(arbutin)，洋蓟酸(cynarin)，芹黄素(apigenin)，isocuttelarein，木樨草素(luteolin)，川陈皮素(nobiletin)，桔皮素(tangeretin)，杨芽黄素(tectochrysin)，高良姜精(galangin)，山柰酚(kaempferol)，杨梅酮(myricetin)，槲皮素(quercetin)，芦丁(rutin)，柠檬素(citrin)，curcurocitrin，圣草酚(eriodictyol)，橙皮苷(hesperidin)，柚皮素(naringenin)，柚皮苷(naringin)，松属素(pinocembrin)，槲皮苷 (quercitrin)，鹰嘴豆素A(biochanin)，白杨素(chrysin)，大豆苷元(daidzein)，雌马酚(equol)，芒柄花黄素(formononetin)，染料木素(genistein)，黄豆素(glycetein)，依普黄酮(ipriflavone)，lactuin，lactuin，碧萝芷(pycnogenol)，水飞蓟素(silymarin)，木质素(lignin)，等等，或类姜黄素化合物，例如姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素等等。除了共价键合以外，可选或另外地，在酚类化合物和蛋白质之间也可存在氢键的形成和电相互作用。

[0034] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组可通过交联如上定义的合适的(生物相容的并且可生物降解的)聚合物，优选如上定义的(生物相容的并且可生物降解的)多肽或多糖，并用交联的聚合物通过至少一个单层，优选一个或多个组成层组的单层形成层组来制备。

[0035] 用生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物形成包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组可通过技术人员已知和合适的任意方法，更优选地通过电处理方法进行。在此上下文中，术语“电处理”优选地应被广义地定义为包括材料的电纺纱、电喷射、电喷雾、电沉积和电喷溅的所有方法，两种或多种这些方法的组合，和其中聚合物可通过流动、喷射、喷溅或滴落穿过电场并朝向靶的任意其他方法。电处理的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物可从一个或多个接底面的储库朝优选带电的基质方向经电处理，或从优选带电的储库朝接底面的靶经电处理。“电沉积”包括任意类型的通过电方式在靶上沉积如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物。为此目的，优选地从溶液形成纤维，或通过使优选带电的溶液流动熔化纤维，或通过孔口熔化纤维并沉积在靶上。“电纺丝”优选地表示从溶液形成纤维，或通过使优选带电的溶液流动熔化纤维，或通过孔口熔化纤维的过程。“电喷雾”优选地表示其中从溶液形成小液滴，或通过使优选带电的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物溶液熔化，或通过孔口熔化小液滴的过程。术语电处理不限于本文陈述的特定实例，并且其包括使用电场用于在靶上沉积材料的任意方式。优选地，可通过电纺丝进行用生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物形成层组。

[0036] 适于通过任意上述方法将如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物电处理为至少一个层或层组的电处理装置包括电处理机械装置和靶。在优选的方面，电处理机械装置包括一个或多个容纳包含将待被电处理(例如电纺丝或电沉积)的如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的一种或多种溶液的储库。一个或多个储库具有至少一个孔口、喷嘴或其他装置，以允许包含如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的溶液从储库流出。电处理的发生一般是由于在孔口或靶上存在电荷，而另一个接底面。在用于制备电处理的组合物的材料的电处理中，基底也可用作可变特征。具体地，靶可为用于制备电处理的基质的材料的实际基底，或沉积电处理的基质本身。可选地，可在靶和喷嘴之间放置基底。靶也可特定地沿预选的图式带电或接底面，使得从孔口流出的溶液朝向特定方向。可通过微处理器控制电场以制造具有期望的几何学的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的电处理的层或层组。可将靶和一个或多个喷嘴改造为可相对彼此移动的，从而允许另外控制待形成的电处理的层或层组的几何学。本发明允许形成具有预定形状，例如适合于例如待治疗患者的伤口的特定形式的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层或层组。

[0037] 用生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物形成用于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的层组可通过逐步制备一个或多个单层以形成如上定义的包含(可生物降解并且生物相容的)交联的聚合物的层组进行，优选地，其中在如上定义的前一层上形成每个新层，从而形成层组。

[0038] 可在特定溶剂的存在下形成用于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组。在例如通过电处理，优选通过电纺丝形成层组前，这样的溶剂可优选地已用于溶解生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物，或溶解如上定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物和任选地如本文定义的交联剂。这样的溶剂可选自但不限于，用于溶解或悬浮如本文定义的聚合物或多糖的溶剂。这样的溶剂可包含但不限于，水、乙酸乙酯、乙酸、水、乙酸乙酯和／或乙酸的混合物，2，2，2-三氟乙醇、1，1，1，3，3，3-六氟-2-丙醇(又称六氟异丙醇或HFIP)、尿素、乙酸、一氯乙酸、三氟乙酸、三氟乙酸酐，低级醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等，卤代醇、乙酰胺、N-甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲亚砜(DMSO)、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙酸乙酯、乙腈、1，1，1-三氟丙酮、顺丁烯二酸、六氟丙酮、氯仿，和三氟乙醇(TFE)或其组合。由于电纺丝技术经常需要更特定的溶剂条件，可取决于使用的具体聚合物，例如如本文定义的多肽或多糖选择溶剂。例如，可在例如水、乙酸乙酯、乙酸，水、乙酸乙酯和／或乙酸的混合物，2，2，2-三氟乙醇、1，1，1，3，3，3-六氟-2-丙醇(又称六氟异丙醇或HFIP)或其组合的溶液或悬浮液中对胶原和明胶进行电纺丝。可从例如尿素、一氯乙酸、水、2，2，2-三氟乙醇、HFIP或其组合的溶剂中对纤维蛋白单体进行电纺丝。可在例如水、
2，2，2-三氟乙醇、异丙醇、HFIP或其组合，例如异丙醇和水的溶液或悬浮液中，优选从含有
250mg/ml弹性蛋白的70％异丙醇和30％水的溶液中对弹性蛋白进行电纺丝。任选地在存在交联剂的情况下，可通过在如上定义的溶剂中溶解至少一种如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物或至少一种如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物进行对应的溶液的制备。

[0039] 形成用于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组还可以如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物的熔化物形式进行。为此，一般将如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物加热至其熔点。熔化物可含有如本文定义的交联剂。可选或另外地，在制备层组后，可交联通过熔化物制备的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组。

[0040] 用于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的用交联的聚合物形成的层组优选地具有支持细胞粘附和铺展、生长、增殖、分化和发育或迁移的三维网络超微结构。层组的单根纤维之间的空间距离对细胞能够得到用于生长的营养物以及允许进行细胞-细胞相互作用或迁移起重要作用。因此，根据本发明的具体的方面，纤维之间的距离可为约1nm至约500μm，优选地约1nm至约100μm，约1nm至约500nm，约1nm至约100nm，约1nm至约50nm，约1nm至约30nm，或甚至约10nm至约30nm，例如约50nm，约100nm，约150nm，约200nm，约250nm，约300nm，约350nm，约600nm，约750nm，约800nm，约850nm，约900nm，约950nm，约1000nm(1μm)，10μm)，10μm)，50μm)，约100μm)，约150μm)，约200μm)，约250μm)，约300μm)，约350μm)，约400μm)，约450μm)，或约500μm)。根据优选的方面，纤维之间的距离可包含所引用的范围或由上述数值中的任两个形成的任意范围之间的任意长度。

[0041] 也可通过操纵电纺丝的参数控制用于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的用交联的聚合物形成的层组的孔大小。根据特定的方面，用于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的用交联的聚合物形成的层组具有足够小的孔大小，使得一种或多种细胞类型不能渗透。这样的孔大小优选地用于层组，其可用作发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的外表面，例如用于保护伤口、器官、特定组织免受外部影响或用于身体先天组织细胞的渗透。在一个方面，用于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的用交联的聚合物形成的层组的平均孔直径为约1nm至约500μm，优选地约1nm至约100μm，约1nm至约500nm，约1nm至约100nm，约1nm至约50nm，约1nm至约30nm，或甚至约10nm至约30nm，例如约500nm或更小。在另一个方面，层组的平均孔直径为约1μm或更小。在另一个方面，层组的平均孔直径为约2μm或更小。在另一个方面，层组的平均孔直径为约5μm或更小。在另一个方面，层组的平均孔直径为约
2
8μm或更小。有些方面具有不阻碍细胞渗透的孔直径。在另一个方面，层组具有在约1nm
2 2 2 2 2
至约500μm，约10nm 至约100μm，约0.1μm 和约100μm，等等之间的孔大小(面积)。
2 2
在另一个方面，层组具有在约0.1μm 和约50μm 之间的孔大小(面积)。在另一个方面，
2 2
层组具有在约1.0μm 和约25μm 之间的孔大小(面积)。在另一个方面，层组具有在约
2 2
1.0μm 和约5μm 之间的孔大小(面积)。

[0042] 当制备层组时，也可通过混合致孔材料和聚合物操纵用于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的用交联的聚合物形成的层组的孔隙率。这样的致孔材料可为，例如盐或其他可提取的活性剂，其的溶解将在基质中留下确定大小的孔。也可通过在基质中存在的交联的量控制孔大小。同样地，可通过随后使用如上定义的交联剂，与经电处理的，优选经电纺丝的包含如本文前面定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物的层组的交联，操纵层组的孔隙率。此外，这样的层组的操纵可通过加入例如多酚化合物和因此进一步交联进行。这样的多酚化合物优选地选自(i)一般适度溶于水的化合物，(ii)具有约500-4000Da的分子量，(iii)优选地包含>约12个酚羟基，和(iv)优选地每1000Da展示约5-7个芳香环。具体地优选的多酚化合物包括鞣质、没食子鞣质(Sigma-Aldrich)，根据White-Bate-Smith-Swain-Haslam(WBSSH)定义定义的化合物，优选原花色素例如矢车菊苷配基、可水解鞣质和phlorotannins，以及酚类化合物，特别是能够复合胶原和其他生物分子的酚类化合物，例如在Quideau等人，Angew Chem Int Ed Engl.2011，50(3)：586-621中定义的。用这样的多酚化合物修饰层组一般导致层的单根纤维之间的交联的显著增加，因此导致层的机械强度的显著改进。这样的经修饰的层组可用作(进一步的)支持工具，例如作为保护外层等等。层组的修饰可整体或部分进行，例如在层组的边缘、边界或其他选定部分修饰。

[0043] 如上定义，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组可由一个或多个“单层”组成，即，层组可包含例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，1-15，10-25，15-30，10-50或10-100个或甚至更多个“单层”。包含如上定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的这样的层或层组可包含几nm至约几μm或甚至mm的厚度，优选地在约1nm至约5mm，约1nm至约4mm，约1nm至约3mm，约1nm至约2mm，或约1nm至约1mm，更优选地约10nm至约1mm，约100nm至约1mm，约1μm至约1mm，约1μm至约500μm，约1μm至约250μm，约1μm至约100μm，或约100nm至约100μm等的范围内。

[0044] 可一步制备至少一个包含如上定义的生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组，或以连续方式以单层逐层制备。此外，如果制备多于一个包含如上定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组，每个层组优选地如本文定义的用于包含如上定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组。如果制备了多于一个如上定义的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组，可单独制备每个层组或以连续方式继彼此之后制备。可在合适的支持物上，已经制备的如上定义的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组上，在至少一个如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的支持层等等上，或适用于此目的的任意表面或支持物(例如钢板、纸、玻璃、载玻片或任意物品容器、平皿、特氟龙表面，例如特氟龙箔、封口膜、铝板、铝箔、塑料箔等)上制备如本文定义的层组。在此上下文中，支持物或表面可为模型或模具，其类似于要重构的组织片段等的三维结构。

[0045] 如果制备多于一个如上定义的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组，可在如上定义的支持物上制备第一层组。继制备了这样的第一层组之后，可制备第二层组，其中这样的第二层组可类似地在如上定义的支持物上制备，或可在第一层组上制备，以得到2个层组的交错的结构。

[0046] 这样的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组，优选地处于如上定义的交错结构的这样的层组，可以各自合适的方向朝向彼此。例如，如果制备2个层组，可将展示较大孔隙率、较大纤维长度和／或较小纤维强度的第二层组的侧面置于展示较小孔隙率、较小纤维长度和／或较大纤维强度的第二层组的侧面上。同样地，可将展示较小孔隙率、较小纤维长度和／或较大纤维强度的第二层组的侧面置于展示较大孔隙率、较大纤维长度和／或较小纤维强度的第一层组的侧面上，优选地关于纤维的宽度或直径。可选地，可将展示较小孔隙率、较小纤维长度和／或较大纤维强度的第二层组的侧面置于展示较小孔隙率、较小纤维长度和／或较大纤维强度的第一层组的侧面上。同样地，可将展示较大孔隙率、较大纤维长度和／或较小纤维强度的第二层组的侧面置于展示较大孔隙率、较大纤维长度和／或较小纤维强度的第一层组的侧面上。

[0047] 可依照如上定义的用于制备这样的层组的交错结构的相同原理制备另外的如上定义的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组。例如，可相应地在随后的层组上制备另外的如上定义的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组，以形成包含例如1，2，3，4，5，6，7，8，9或甚至10个或更多个不同的如本文描述的层组的交错的层组，其中每个层组可如前面举例描述的第一和第二层组一样朝向随后的层组。例如，所有层组可包含相同的方向，即可将展示较大孔隙率、较大纤维长度和／或较小纤维强度的一个层组的侧面置于展示较小孔隙率、较小纤维长度和／或较大纤维强度的另一个层组的侧面上。同样地，可将展示较小孔隙率、较小纤维长度和／或较大纤维强度的一个层组的侧面置于展示较大孔隙率、较大纤维长度和／或较小纤维强度的另一个层组的侧面上。

[0048] 可使用在不同层组中的相同或不同的上面定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物，例如约1，2，3，4，或甚至5种或更多不同的上面定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物制备这样不同的如上定义的包含生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组。特别优选的组合包括明胶和弹性蛋白，但不限于此。

[0049] 此外，可使用在每个层组中的一种或多于一种如上定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物，例如2，3，4，或甚至5种或更多不同的如上定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物制备包含如上定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的如上定义的层组。可通过如上定义的任意方法，优选通过电处理，例如电纺丝或电沉积，更优选地通过共纺丝，即如上定义的电纺丝进行这样的层组的制备，其中同时使用不同的如上定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物制备单层(例如对每种聚合物使用单独的喷嘴)。这里也适用如上定义的层组的任何定义，特别是有关聚合物纤维的强度和层组的机械和／或物理性能的改变，以及有关层组的修饰，不同层组相对彼此的方向，等等。

[0050] 根据一个非常特定的方面，可使用下述步骤制备包含如上定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的如上定义的层组：

[0051] (i)提供和制备用于电处理的聚合物溶液，优选地通过优选地在如本文定义的溶剂中，任选地在存在如本文定义的交联剂下，溶解如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物，通过优选地在如本文定义的溶剂中，溶解如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物和如本文定义的交联剂，或通过任选地在存在如本文定义的交联剂下，熔化如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物；和

[0052] (ii)电处理聚合物溶液中的至少一个层组，从而形成三维层组，其中当进行电处理过程时，优选地通过改变，更优选地增加或降低如本文定义的层组的纤维强度，形成如本文定义的梯度；并且任选地模塑产生的层组。如果使用溶剂，优选地在步骤(ii)中在电处理聚合物溶液的步骤期间使溶剂挥发。

[0053] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组可具有任意合适的形式。合适的形式包括但不限于，带、线、绒布、纤维、颗粒、滴状物或网或网眼样结构。合适的形式也可包含片、膜、箔或层压制件。优选地，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个包含可生物降解并且生物相容的交联的聚合物的层以绒布、网或网眼样结构存在。这些结构中的任一种可具有或不具有洞或腔。

[0054] 作为另外的组分，根据本发明的第一实施方案的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统包含至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层。这样的生物相容的并且优选可生物降解的支持层可包含生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物和／或可掺入的材料。在此上下文中可生物降解的并且优选生物相容的可熔化的聚合物可包括但不限于，适用于此目的的任意生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物，例如聚酯、聚酸酐、多肽或聚氨酯例如聚己内酯PCL，优选聚ε-己内酯(PCL)、聚交酯PLA、聚乙醇酸交酯PGA、聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA、聚癸二酸等，或生物聚合物例如明胶、藻酸盐、胶原、纤维蛋白等等。在此上下文中生物相容的并且可掺入的材料可包括但不限于，适用于此目的的任意生物相容的并且可掺入的材料，优选地例如陶瓷，例如用羟基磷灰石(HA)、磷酸三钙(TCP)等制成的陶瓷。如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的支持层也可包含这样的如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物，所述聚合物含有如本文定义的可掺入材料。这样的生物相容的并且优选可生物降解的支持层优选地充当粘合剂和／或结构支持物以产生机械上稳定的生物复合材料。取决于期望的应用，这样的生物相容的可掺入的材料可用作硬支持物，用于例如硬组织补充或再生、骨修复等。

[0055] 在此上下文中，术语“可熔化”优选地表示在约20至25℃的室温和／或在待治疗的患者的正常体温，例如约37℃，可生物降解并且生物相容的可熔化的聚合物包含固态或半固态。因此，如本文定义的可生物降解并且生物相容的可熔化的聚合物可根据其熔点和玻璃化温度选择。如果在本文中用作支持层的可生物降解并且生物相容的可熔化的聚合物是有弹性的，可这样选择这样的聚合物的玻璃化温度，即使得聚合物在待治疗患者的正常体温处于其玻璃化点Tg之上。这允许聚合物链相对彼此移动，因此提供一定的弹性。另外，优选地这样选择聚合物，使其熔点在约20至25℃的室温和／或待治疗患者的正常体温，例如约37℃之上。例如，PCL的熔点为约60℃，其玻璃化温度为约-60℃。

[0056] 可通过首先提供生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物制备根据第一实施方案的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层。可选地，例如在如本文定义的溶剂中，优选地在聚乙烯醇(PVA)中，可提供如上定义的可掺入的材料的悬浮液或溶液。根据另外的可选方案，可提供还包含如上定义的可掺入的材料的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物。然后可通过用熔化的聚合物，用如上定义的可掺入的材料的悬浮液或溶液，和／或用可提供的还包含如上定义的可掺入的材料的可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物形成层，进行发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一层包含生物相容的并且优选可生物降解的支持层的制备。

[0057] 在发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的上下文中，可通过技术人员公知的任意方法进行用熔化的聚合物，用如上定义的可掺入的材料的悬浮液或溶液，和／或用任选地还包含如上定义的可掺入的材料的可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物，形成至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层。这样的方法可包括如上定义的任意电处理方法，优选地材料的电纺丝、电喷射、电喷雾、电沉积和电喷溅法，两种或多种这些方法的组合，和其中聚合物可通过流动、喷射、喷溅或滴落穿过电场朝向靶的任意其他方法。电处理的聚酯可从一个或多个接底面的储库朝优选带电的基质方向经电处理，或从优选带电的储库朝接底面的靶经电处理。

[0058] 可选地和更优选地，在发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的上下文中，可通过快速原型技术，优选通过3D绘图(plotting)，例如使用3D绘图机(plotter)(例如Envisiontec公司的3D生物绘图机)进行用熔化的聚合物，用如上定义的可掺入的材料的悬浮液或溶液，和／或用任选地还包含如上定义的可掺入的材料的可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物，形成至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层。在此上下文中，优选地将快速原型理解为使用叠加制造技术(additive manufacturing technology)自动构建物体。这样的技术一般利用可熔化的聚合物的叠加制造用于计算机辅助设计(CAD)或动画建模软件的虚拟设计的快速原型，将其转化为薄的、虚拟的水平剖面，然后创建连续的层直到完成模型。

[0059] 根据特别优选的方面，可从熔化的聚合物，用如上定义的可掺入材料的悬浮液或溶液，和／或用任选地还包含如本文定义的可掺入的材料的可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物，优选地使用3D绘图机，形成至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层。可通过例如熔化聚合物或制备如本文定义的可掺入的材料的悬浮液或溶液，并在表面上提供熔化的聚合物或所述悬浮液或溶液，例如通过3D绘图机的分配器，随分配器的移动形成期望的单层，进行3D绘图。分配器通常将熔化的聚合物或悬浮液或溶液经分配器的喷嘴压或泵到如本文定义的表面上，例如通过气压。优选地，分配器可往任意期望的方向(上、下、左、右、前、后)移动，优选地具有可调节的速度，以形成期望的结构。在分配器移动期间，优选地将熔化的聚合物或悬浮液或溶液经喷嘴压出并提供例如纤维、带、点等或期望或得到的任意形式，优选地根据喷嘴的形式。在形成纤维、带、点等时，优选地形成预定的三维结构。这样的三维结构可包含聚合物或可掺入的材料的单层，或可由本文已公开的聚合物或可掺入的材料的若干单层组成。这样的单层也可形成包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的至少一个层组的如上文已定义的层组。这样的层组可由一个或多个“单层”组成，即层组可包含例如1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，1-15，10-25，15-30，10-50或10-100个或甚至更多个聚合物或可掺入的材料的“单层”。这样的聚合物或可掺入的材料的层或层组可包含几nm至约几μm或甚至mm的厚度，优选地在约100nm至约5mm，约100nm至约4mm，约100nm至约3mm，约100nm至约2mm，或约100nm至约1mm，更优选地约1μm至约2mm，约1μm至约1mm，约1μm至约500μm，约1μm至约250μm，约10μm至约250μm，或约10μm至约100μm等的范围内的厚度。

[0060] 在3D绘图期间，可适当调节温度。如果使用生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物，任选地补充了如本文定义的可掺入材料的所述可熔化的聚合物，一般在使如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物以熔化的形式存在的温度进行3D绘图，其中一般调节温度以保持聚合物熔化直到经过喷嘴或针挤出。同样地，如果使用如上定义的可掺入的材料的悬浮液或溶液，一般不需要应用升高的温度。因此，一般根据如本文定义的每种生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物或可掺入的材料的具体要求选择应用和工作温度。为了应用熔化的聚合物和／或如上定义的可掺入的材料的悬浮液或溶液，可使用例如，高温或低温头／模块调节温度。可同样地冷却低温头/模块(例如<0℃)，反之可加热高温头／模块直至达到期望的温度，例如直至50℃，100℃，150℃，200℃或甚至250℃或甚至更高。可以例如约1至约1000mm／分钟的驱动器速度移动喷嘴或针。x／y／z轴的分辨率可为约0.05mm，例如在约10μm至约1mm之间。用于挤压熔化的聚合物或悬浮液或溶液的应用的压力可为约0至约5巴。

[0061] 在发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的上下文中，可在任意合适的支持物上，已制备的包含如上定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组上，至少一个如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的支持层上等等，或适用于此目的的任意表面或支持物上，例如钢板、纸、玻璃、载玻片或任意合适的容器、平皿、特氟龙表面，例如特氟龙箔、封口膜、铝板、铝箔、塑料箔等上实现用熔化的聚合物，用如上定义的可掺入的材料的悬浮液或溶液，和／或用任选地还包含如上定义的可掺入的材料的可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物形成至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层。在此上下文中，支持物或表面可为模型或模具，其类似于待重构的组织片段等的三维结构。优选地在特氟龙箔上进行熔化的聚合物的3D绘图，因为绘制的聚合物／支持层可容易地从此表面释放。

[0062] 可适当地进一步调节生物相容的并且优选可生物降解的支持层的形状和厚度，优选地如本文对于至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组已描述的。特别地，任意这些参数，例如纤维之间的距离(如果产生纤维的话)、孔大小、厚度等等可应用于支持层或层组，如上文对于至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组已经讨论的。

[0063] 根据另外的特别优选的方面，可使用如上定义的生物相容的可掺入的材料形成至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层。为此目的，优选地在溶剂中溶解或悬浮生物相容的可掺入的材料并在表面上提供所述材料以形成预定的三维结构。根据实例，可通过在热的蒸馏水(aqua dest)中溶解聚乙烯醇(PVA)(10％(重量)，Mowiol28-99，Clariant GmbH，Frankfurt a.M.，Deutschland)形成羟基磷灰石陶瓷支持层。然后，这样得到的溶液／悬浮液(例如2份)可与羟基磷灰石(例如1份，例如Typ SF超细粉C13-09，Chemische Fabrik Budenheim，Mainz，Germany)混合。然后优选地使混合物过筛以去除凝块或结块(100μm，Retsch，Haan，Germany)。然后优选地使用3D绘图机(Envisiontec，Gladbeck，Germany)将混合物应用于如上定义的表面。处理温度可为约室温。支持结构可具有例如如本文定义的形式，例如网或网眼样结构。可以例如冷冻形式储存支持结构，直至使用。优选地在制备了支持结构之后立即进行冷冻，例如最初在约-30℃，优选地降低温度至约-200℃并冷冻干燥支持结构(例如在Lyovac GT2，Amsco／Finn-Aqua，Hürth，Germany中)。为了从支持结构中去除聚乙烯醇(PVA)，优选地烧结或烘焙(例如约5h(约2至约10h)，约350℃(约200℃至约600℃))支持结构至少一次。在另外的步骤中，可再次烧结(例如约12h(约5至约20h)，约1100℃(约500℃至约2000℃))支持结构，这优选地导致羟基磷灰石颗粒烧结为陶瓷支持层。

[0064] 在使用发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的另外的至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层或可生物降解并且生物相容的可熔化的聚合物或可掺入的材料之前，可储存、冷冻干燥、灭菌、等离子体灭菌至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层。

[0065] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层可具有任意合适的形式。合适的形式包括但不限于，带、线、绒布、纤维、颗粒、滴状物或网或网眼样结构。合适的形式也可包含片、膜、箔或层压制件。优选地，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层为带、线、绒布、纤维、颗粒、滴状物、网或网眼样结构、片、膜、箔或层压制件的形式。这些结构中的任一种可具有或不具有洞或腔。

[0066] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层的制备可单独地进行并且独立于如上定义的至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组的制备。

[0067] 根据非常具体的方面，可使用以下步骤制备如本文定义的至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层：

[0068] (i)提供熔化的如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物，如本文定义的生物相容的可掺入的材料的悬浮液或溶液，和／或任选地还包含如本文定义的生物相容的可掺入的材料的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物；和

[0069] (ii)在如本文定义的表面上电处理或3D绘制熔化的如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物，如本文定义的生物相容的可掺入的材料的悬浮液或溶液，和／或任选地还包含如本文定义的生物相容的可掺入的材料的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物。

[0070] 在发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统中，至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组和至少一个如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的支持层可排列在一起以形成发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统。这样的排列可包含如本文定义的任意种类和适合特定目的的任意数目的层或层组。

[0071] 例如，可通过下述方法形成发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统，所述方法提供至少一个层组(例如1，2，3，4，5个或甚至更多层组)作为第一元件，每个层组包含相同或不同的如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物，并在此第一元件上应用如本文定义的至少一种生物相容的并且优选可生物降解的支持层或层组作为第二元件。

[0072] 同样地，可通过下述方法形成发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统，所述方法通过提供至少一个包含相同或不同的如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组作为第一元件，通过在此第一元件上应用至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层或如本文定义的层组作为第二元件，并通过在第二元件上应用至少一个包含相同或不同的如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物的层组作为第三元件。层的方向可为合适的，例如第一和三层组可彼此朝向相同的方向或反之亦然。同样地，第二层组可与第一或第三层组朝向相同的方向或反之亦然。

[0073] 根据非常具体的方面，可使用以下步骤制备发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统：

[0074] (i)任选地提供和制备用于电处理的聚合物溶液，优选地通过优选地在如本文定义的溶剂中，任选地在存在如本文定义的交联剂下，溶解如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物，通过优选地在如本文定义的溶剂中，溶解如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物和如本文定义的交联剂，或通过任选地在存在如本文定义的交联剂下，熔化如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物；

[0075] (ii)任选地电处理聚合物溶液中的至少一个层组，从而形成三维层组，其中当进行电处理过程时，优选地通过改变，更优选地增加或降低如本文定义的层组的纤维强度，形成如本文定义的梯度；并且任选地模塑产生的层组。如果使用溶剂，优选地在步骤(ii)中在电处理聚合物溶液的步骤期间使溶剂挥发；

[0076] (iii)提供熔化的如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物，如本文定义的生物相容的可掺入的材料的悬浮液或溶液，和／或任选地还包含如本文定义的生物相容的可掺入的材料的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物；

[0077] (iv)在如本文定义的表面上电处理或3D绘制熔化的如本文定义的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物，如本文定义的生物相容的可掺入材料的悬浮液或溶液，和／或任选地还包含如本文定义的生物相容的可掺入材料的生物相容的并且优选可生物降解的可熔化的聚合物的熔化物；

[0078] (v)任选地提供和制备用于电处理的聚合物溶液，优选地通过优选地在如本文定义的溶剂中，任选地在存在如本文定义的交联剂下，溶解如本文定义的生物相容的并且可生物降解的交联的聚合物，通过优选地在如本文定义的溶剂中，溶解如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物和如本文定义的交联剂，或通过任选地在存在如本文定义的交联剂下，熔化如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物；和

[0079] (vi)任选地电处理聚合物溶液中的至少一个层组，从而形成三维层组，其中当进行电处理过程时，优选地通过改变，更优选地增加或降低如本文定义的层组的纤维强度，形成如本文定义的梯度；任选地模塑产生的层组。如果使用溶剂，优选地在步骤(ii)中在电处理聚合物溶液的步骤期间使溶剂挥发。

[0080] 在制备了如上所述的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统之后，优选地洗涤梯度层系统至少1次、2次或甚至更多次(3，4，或5次或更多次)，优选地用水、缓冲液，例如用于培养本文描述的细胞的缓冲液，等等洗涤。

[0081] 也可对如上所述的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统补充另外的包含如本文定义的生物相容的并且可生物降解的聚合物的层组和／或另外的至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层，其中所述至少一个层或层组已用如上定义的多酚化合物修饰。

[0082] 可实现发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的任意其他形式。准确地说，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可含有任意数目和任意方向的任意不同层和／或层组，特别是任意至少一个包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组和／或任意至少一个生物相容的并且优选可生物降解的支持层。因此，应当注意，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统不受限于层或层组的任意具体排列。

[0083] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可还包含细胞。这样的细胞优选地包含但不限于，选自定向干细胞、分化的细胞、成体干细胞、胚胎干细胞、骨髓干细胞和脐带干细胞、改造的或非改造的干细胞、原代或永生化(细胞系)干细胞的(哺乳动物、人或非人)干细胞，优选间充质干细胞。在多个方面中使用的细胞的其他实例包括但不限于，软骨细胞、上皮细胞、内皮细胞、血管和角膜组织的内皮细胞、皮肤细胞、骨细胞、成骨细胞、成牙骨质细胞、骨细胞、成肌细胞、成神经细胞、所有结缔组织的成纤维细胞、齿龈和／或皮肤和角膜成纤维细胞(单独地或与牙周韧带成纤维细胞一起)、角化细胞，例如齿龈角化细胞和来自口腔和上呼吸消化道以及皮肤和眼表的角化细胞，成胶质细胞、生殖细胞、肝细胞、软骨细胞、平滑肌细胞、心肌细胞、结缔组织细胞、胶质细胞、激素分泌细胞、免疫系统细胞和神经元，以及例如中枢神经系统细胞、神经细胞、周细胞、肌细胞、脂肪细胞、星形胶质细胞、黑素细胞等等。在一些方面不需要预选择待使用的干细胞的类型，因为一旦被递送至给定器官后，可以器官特异性模式诱导许多类型的干细胞分化。例如，仅仅通过将干细胞置于肝内，递送至肝的干细胞就可被诱导成干细胞。基质中的细胞可起到提供脚手架或接种，产生特定的化合物或上述二者的目的。在上述意义中的细胞也可包含用于某些治疗用途的活组织细胞。优选但不是必要地，组织细胞来源于与将在治疗中使用发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的相同类型的组织。活组织细胞可来源于自体组织来源、同种异体组织来源或异种组织来源。术语“自体”旨在指来源于相同的宿主的组织。术语“同种异体”旨在指来源于相同物种(即，人)但不同基因组成的来源的组织。术语“异种”旨在指组织来源于与宿主不同的物种。可与发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统组合使用的细胞类型的非限制性实例包括干细胞、骨细胞、肌腱细胞(tenocyte)、脂肪细胞、心肌细胞、肝细胞、平滑肌细胞、内皮细胞等等。在进行交联前、期间或后，可将组织细胞加至发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统。本文使用的细胞也可包含前面定义的细胞的混合物。

[0084] 优选地用如本文定义的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统培养如上定义的细胞，例如在适于特定细胞类型的培养基中培养。也可将细胞置于构建体的腔或空间中，或植于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统附近以协助生长。可选地，可将发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统置于生物反应器中。存在若干类型的可商购的生物反应器，即设计用于提供低剪切力、高营养物灌注环境的设备。直到最近，大多数可用的生物反应器悬浮培养细胞并通过鼓泡，通过使用叶轮，或其他搅拌工具递送营养物和氧气。

[0085] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统也可包含可体外培养的细胞，所述细胞来源于天然来源，经基因改造，或通过任意其他方式产生。可使用原核细胞或真核细胞的任意天然来源，例如如上定义的细胞。在将发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统植入生物的方面，可使用来自接受者的细胞，来自同种供体或来自不同物种的供体的细胞，或细菌或微生物细胞。包括在使用前从来源收获和培养的细胞。

[0086] 根据一个特别的方面，在发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统中含有的细胞可含有已经过基因改造的细胞。改造包括为细胞提供程序表达一个或多个基因，抑制一个或多个基因的表达，或上述二者。可用于本发明的基因改造的细胞的一个实例是产生并分泌一种或多种期望的分子的基因改造的细胞。当发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统包含基因改造的细胞并被植入或移植到生物中时，产生的分子可产生局部作用或全身作用，并且可包括上文鉴定为可能的物质的分子。在目的之一是使生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统产生免疫反应的方面中，细胞也可产生抗原性材料。细胞可产生辅助下述目的非包含性列表的物质：抑制或刺激炎症；促进愈合；抵抗免疫排斥；提供激素替代；替代神经递质；抑制或破坏癌细胞；促进细胞生长；抑制或刺激血管形成；增加组织；和补充或替代神经元、皮肤、一般上皮细胞、滑液、肌腱、软骨、韧带、骨、肌肉、器官、硬脑膜、血管、骨髓和细胞外基质。基因改造可包括，例如对细胞增加或从细胞去除遗传物质，改变已有的遗传物质，或上述二者。在转染或改造细胞以表达基因的方面，可使用瞬时或永久转染的基因，或二者。基因序列可为全长或部分长度，克隆或天然存在的。

[0087] 应当理解，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可组合或补充其他材料和／或物质。例如，当皮下植入时，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可组合或补充佐剂以增强免疫原性。同样地，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可组合或补充药剂。作为另一个例子，含有细胞的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可组合或补充例如白介素和／或生长因子以刺激在梯度层系统中的细胞生长和分裂。

[0088] 根据一个方面，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可包含药剂。本文中合适的药剂可为有机或无机的，并且可处于固相、半固相、液相或气相。分子可以与其他分子的组合或混合物存在，并且可为溶液、悬浮液或任意其他形式。可使用的分子类别的实例包括人或兽医治疗剂、化妆品、营养食品、农业用品例如除草剂、杀虫剂和化肥、维生素、盐、电解质、氨基酸、肽、多肽、蛋白质、碳水化合物、脂、核酸、糖蛋白、脂蛋白、糖脂、糖胺聚糖、蛋白聚糖、生长因子、激素、神经递质、信息素、抑素、前列腺素、免疫球蛋白、单核因子和其他细胞因子、保湿剂、金属、气体、矿物质、塑化剂、离子、电和磁性反应材料、光敏感材料、抗氧化剂、酚类化合物、单酚或多酚化合物，优选地如上定义的单酚或多酚化合物，例如姜黄素，白藜芦醇，其相关衍生物，没食子酸，绿原酸，咖啡酸，鼠尾草酚，辣椒素，6-姜烯酮，6-姜酮醇，及其相应的衍生物，类黄酮，黄烷醇，新类黄酮，酚酸，等等，例如熊果苷，洋蓟酸，芹黄素，isocuttelarein，木樨草素，川陈皮素，桔皮素，杨芽黄素，高良姜精，山柰酚，杨梅酮，槲皮素，芦丁，柠檬素，curcurocitrin，圣草酚，橙皮苷，柚皮素，柚皮苷，松属素，槲皮苷，鹰嘴豆素A，白杨素，大豆苷元，雌马酚，芒柄花黄素，染料木素，黄豆素，依普黄酮，lactuin，lactuin，碧萝芷，水飞蓟素，木质素，等等，或类姜黄素化合物，例如姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素等等，儿茶酚胺(catecholamin)或儿茶酚胺(catecholamine)，例如儿茶酚、肾上腺素、去甲肾上腺素(noradrenaline)、去甲肾上腺素(norepinephrine)、多巴胺和携带儿茶酚或1，2-二羟基苯部分的任意其他化合物，可作为细胞能量来源被代谢的任意分子，抗原和可引起细胞或生理反应的任意分子。可使用分子的任意组合，以及这些分子的激动剂或拮抗剂。

[0089] 药剂可还包括任意治疗分子或物质，包括但不限于任意制药物质或药物。药物的例子包括但不限于，麻醉剂、催眠药、镇静剂和睡眠诱导物、抗精神病药、抗抑郁药、抗过敏药、抗心绞痛药、抗关节炎药、止喘药、，抗糖尿病药、止泻药、抗痉挛药、抗痛风药、抗组胺药、止痒剂、催吐剂、抗呕剂、止痉挛药、厌食剂、神经活性物质、神经递质激动剂、拮抗剂、受体阻断剂和再摄取调节物、β-肾上腺素阻断剂、钙通道阻断剂、双硫仑和双硫仑样药物、肌肉松弛药、镇痛药、退热剂、兴奋剂、抗胆碱酯酶剂、拟副交感神经药、激素、抗凝剂、抗血栓剂、溶栓剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂、激素激动剂／拮抗剂、维生素、抗菌剂、抗肿瘤药、抗酸药、消化剂、轻泻剂、泻药、防腐剂、利尿剂、消毒剂、杀真菌剂、杀外寄生物药、杀寄生虫药、重金属、重金属拮抗剂、螯合剂、气体和蒸汽、生物碱、盐、离子、内分泌物、毛地黄、强心苷、抗心律不齐药、抗高血压药、血管扩张剂、血管收缩剂、抗毒蕈碱剂、神经节刺激剂、神经节阻断剂、神经肌肉阻断剂、肾上腺素神经抑制剂、抗氧化剂、维生素、化妆品、抗炎药、伤口护理产品、抗血栓形成剂、抗肿瘤剂、抗血管生成剂、麻醉剂、抗原剂、伤口愈合剂、植物提取物、生长因子、润肤剂、保湿剂、排斥／抗排斥药、杀精剂、调节剂、抗菌剂、抗真菌剂、抗病毒剂、抗生素、镇定剂、降胆固醇药、止咳药、组胺阻断药、单胺氧化酶抑制剂。本发明的物质也包括美国药典列出的所有物质。

[0090] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统还可包含治疗物质，其选自但不限于抗肿瘤药、抗有丝分裂药、抗炎药、抗血小板药、抗凝剂、抗纤维蛋白、抗凝血酶、抗增殖药、抗生素、抗氧化剂和抗过敏药物以及其组合。这样的抗肿瘤药和／或抗有丝分裂药的例子包括紫杉醇(例如，Bristol-Myers Squibb Co.，Stamford，Conn.的多西他赛(docetaxel)(例如，Aventis S.A.，Frankfurt，Germany的甲氨
蝶呤、咪唑硫嘌呤、长春新碱、长春花碱、氟尿嘧啶、盐酸阿霉素(例如，Pharmacia&Upjohn，Peapack N.J.的和丝裂霉素(例如，Bristol-Myers Squibb Co.，
Stamford，Conn.的这样的抗血小板药、抗凝剂、抗纤维蛋白和抗凝血酶
的例子包括肝素钠、低分子量肝素、肝素类似物、水蛭素、阿加曲班、毛喉素、伐哌前列素、环前列腺素和环前列腺素类似物、葡聚糖、D-苯丙氨酸-脯氨酸-精氨酸氯代甲基酮(合成的抗凝血酶)、双嘧达莫、糖蛋白IIb／lIIa血小板膜受体拮抗剂抗体、重组水蛭素，和凝TM
血酶抑制剂例如Angiomax (Biogen，Inc.，Cambridge，Mass.)。这样的细胞抑制剂或抗增殖剂的例子包括血管抑肽、血管紧张素转化酶抑制剂例如卡托普利(captopril)(例如，Bristol-Myers Squibb Co.，Stamford，Conn.的和西拉普利
(cilazapril)或赖诺普利(lisinopril)(例如，Merck&Co.，Inc.，Whitehouse Station，N.J.的和钙通道阻断剂(例如硝苯地平)，秋水仙碱，成纤维
细胞生长因子(FGF)拮抗剂，鱼油(ω3-脂肪酸)，组胺拮抗剂，洛伐他汀(lovastatin)(HMG-CoA还原酶抑制剂，降胆固醇药，商标名称来自Merck&Co.，Inc.，
Whitehouse Station，N.J.)，单克隆抗体(例如对于血小板源生长因子(PDGF)受体的特异性的单克隆抗体)，硝普盐(nitroprusside)，磷酸二酯酶抑制剂，前列腺素抑制剂，苏拉明(suramin)，血清素(serotonin)阻断剂，类固醇，硫蛋白酶抑制剂，三唑并嘧啶(PDGF拮抗剂)和一氧化氮。抗过敏药的例子是吡嘧司特(permirolast)钾。可使用的其他治疗物质或活性剂包括α-干扰素，经基因改造的上皮细胞和地塞米松(dexamethasone)。在其他例子中，治疗物质是在放射治疗程序中用于可包含设备用途的放射性同位素。放射性同位素
32 103 131 125
的例子包括但不限于，磷酸(H3P O4)，钯(Pd )，铯(CS )和碘(I )。

[0091] 此外，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可用其他组分或物质培养或可补充其他组分或物质。这样的组分或物质可包括例如，任意分子，例如有机或无机的，处于固相、半固相、液相或气相。分子可以与其他分子的组合或混合物存在，并且可处于溶液、悬浮液或任意其他形式。可使用的分子类别的实例包括人或兽医治疗剂、营养食品、维生素、盐、电解质、氨基酸、肽、多肽、蛋白质、碳水化合物、脂、核酸、糖蛋白、脂蛋白、糖脂、糖胺聚糖、蛋白聚糖、生长因子、激素、神经递质、信息素、抑素、前列腺素、免疫球蛋白、单核因子和其他细胞因子、保湿剂、金属、气体、矿物质、塑化剂、离子、电和磁性反应材料、光敏感材料、抗氧化剂、可作为细胞能量来源被代谢的分子、抗原和可引起细胞或生理反应的任意分子。可使用分子的任意组合，以及这些分子的激动剂或拮抗剂。

[0092] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统中可含有的其他优选的组分涉及生长因子。可用于本发明的生长因子包括但不限于，转化生长因子(″TGF-″)，转化生长因子β(″TGF-β″)，血小板源生长因子，包括AA，AB和BB同种型(″PDGF″)，成纤维细胞生长因子(″FGF″)，包括FGF酸性同种型1和2，FGF碱性形式2和FGF4，8，9和10，神经生长因子(″NGF″)，包括NGF2.5s，NGF7.0s和βNGF和神经营养因子，脑源神经营养因子，软骨源因子，骨生长因子(BGF)，碱性成纤维细胞生长因子，胰岛素样生长因子(IGF)，血管内皮生长因子(VEGF)，集落刺激因子例如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，胰岛素样生长因子(IGF)I和II，肝细胞生长因子，胶质细胞神经营养生长因子(GDNF)，干细胞因子(SCF)，角化细胞生长因子(KGF)，转化生长因子(TGF)，包括TGFα，β，β1，β2和β3，骨骼生长因子，骨基质源生长因子和骨源生长因子及其混合物。一些优选的生长因子包括VEGF(血管内皮生长因子)，NGF(神经生长因子)，PDGF-AA，PDGF-BB，PDGF-AB，FGFb，FGFa和BGF。

[0093] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统中同样可含有的细胞因子包括但不限于，心肌营养蛋白，基质细胞源因子，巨噬细胞源趋化因子(MDC)，黑色素瘤生长刺激活性(MGSA)，巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)，2，3α，3β，4和5，IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL-10，IL-11，IL-12，IL-13，IL-15，IL-16，IL-17和IL-18，TNF-α和TNF-β。可用于本发明的免疫球蛋白包括但不限于，IgG，IgA，IgM，IgD，IgE，及其混合物。发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统中可含有的其他分子包括但不限于，瘦素，白血病抑制因子(LIF)，GLP-1，内皮抑素，血管抑素，血小板反应蛋白，成骨蛋白-1，骨形态发生蛋白2和7，骨粘连蛋白，生长调节素样肽，骨钙素，干扰素α，干扰素αA，干扰素β，干扰素λ，干扰素1α。

[0094] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可还包含RGD肽或序列，优选重复的RGD结合肽，更优选地具有式(RGD)n，用于结合或粘附细胞。一般地，多功能融合蛋白的这样的重复的RGD结合肽可为含有至少一个RGD肽序列，优选至少2个RGD肽序列，或甚至3、4、5个或更多RGD肽序列的肽，即n可为1，2，3，4，5或甚至更大，优选地，n是1至5，1至4，1至3，2至5，2至4，2或3或3至5，3至4或4至5。在此上下文中，RGD肽序列一般是含有3个(连续的)氨基酸RGD的序列，RGD是“精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸”的单字母氨基酸编码缩写，优选地处于指示的顺序。这样的RGD序列一般表示整合素对细胞外基质蛋白的识别序列的一部分。在此上下文中，整合素已知作为介导细胞和其周围组织，(例如其他细胞或细胞外基质(ECM))之间的附着的受体。整合素也在细胞信号传递中起作用，并从而定义细胞形状、移动性并调节细胞周期。可用于本发明的目的以允许细胞通过整合素结合多价融合蛋白的RGD序列一般来源于ECM蛋白或包含RGD肽序列的肽，或合成序列，在每种情况下包含氨基酸序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(在单字母氨基酸编码中为″RGD″)。可掺入发明的多功能融合蛋白中的这样的细胞特异性粘附序列是例如Hersel等人(2003)综述和列出的(见Hersel等人，Biomaterials24(2003)，4385-4415)。在Hersel等人(2003，同上)中的各自公开内容涉及这样的特定RGD肽序列，并且优选地将如其中公开的特定RGD序列以其整体引入本文作为参考。甚至更优选地，这样的RGD序列可选自但不限于下述氨基酸序列中的至少一种：RGD(SEQ ID NO：1)，RGDS(SEQ ID NO：
2)，(RGDS)n(SEQ ID NO：3)，其中n优选地是1，2，3，4，5，6，7，8，9，10或甚至更大，GRGD(SEQ ID NO：4)，RGDV(SEQ ID NO：5)，RGDT(SEQ ID NO：6)，GRGDG(SEQ ID NO：7)，GRGDS(SEQ ID NO：8)，GRGDY(SEQ ID NO：9)，GRGDF(SEQ ID NO：10)，YRGDS(SEQ ID NO：11)，YRGDG(SEQ ID NO：12)，YGRGD(SEQ ID NO：13)，GRGDSP(SEQ ID NO：146)，GRGDSG(SEQ ID NO：15)，GRGDSP(SEQ ID NO：16)，GRGDSY(SEQ ID NO：17)，GRGDVY(SEQ ID NO：18)，GRGDSPK(SEQ ID NO：19)，CGRGDSPK(SEQ ID NO：20)，CGRGDSY(SEQ ID NO：21)，YAVTGRGDS(SEQ ID NO：22)(RGD模拟物酪氨酸脚手架)，AcCGGNGEPRGD(SEQ ID NO：23)，YRAY-NH2(SEQ ID NO：24)，AcGCGYGRGDSPG(SEQ ID NO：25)，RGDSPASSKP(SEQ ID NO：26)，AcGRGDSPASSKG(SEQ ID NO：
27)，

[0095] 或可选自环状RGD序列，例如

[0096] AXEPRGDNYRC(SEQ ID NO：28)，其中X代表修饰的氨基酸Dap(2，3-二氨基丙酸)，βA代表b-丙氨酸，此环状RGD序列具有以下结构：

[0097]

[0098] KRGDf(SEQ ID NO：29)，其中f代表苯丙氨酸的D-氨基酸变体，并且其中此环状RGD序列具有以下结构：

[0099]

[0100] GPenGRGDSPCA(SEQ ID NO：30)，其中Pen代表青霉素，并且其中此环状RGD序列具有以下结构：

[0101]

[0102] vRGDE(SEQ ID NO：31)，其中v代表缬氨酸的D-氨基酸变体，并且其中此环状RGD序列具有以下结构：

[0103]

[0104] 或可选自与SEQ ID NO：1至31的任一序列显示至少80％，优选至少90％，更优选至少95％，和甚至更优选至少97,5％同一性的氨基酸序列。

[0105] 在发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统中可含有的另外的添加剂可为抗菌剂。在此上下文中，可使用本领域技术人员已知的任意抗菌剂。抗菌剂的非限制性例子包括阿米卡星(Amikacin)，阿莫西林(Amoxicillin)，阿莫西林-克拉维酸，两性霉素(Amphothericin)B，氨苄青霉素，氨苄青霉素-舒巴坦(Ampicllin-sulbactam)，安普霉素(Apramycin)，阿奇霉素(Azithromycin)，氨曲南(Aztreonam)，杆菌肽(Bacitracin)，苄青霉素(Benzylpenicillin)，卡泊芬净(Caspofungin)，头孢克洛(Cefaclor)，头孢羟氨苄(Cefadroxil)，头孢氨苄(Cefalexin)，头孢噻吩(Cefalothin)，头孢唑啉(Cefazolin)，头孢地尼(Cefdinir)，头孢吡肟(Cefepime)，头孢克肟(Cefixime)，头孢甲肟(Cefmenoxime)，头孢哌酮(Cefoperazone)，头孢哌酮舒巴坦，头孢噻肟(Cefotaxime)，头孢西丁(Cefoxitin)，Cefbirome，头孢泊肟(Cefpodoxime)，头孢泊肟-克拉维酸，头孢泊肟-舒巴坦，Cefbrozil，头孢喹肟(Cefquinome)，头孢他啶(Ceftazidime)，头孢布烯(Ceftibutin)，头孢噻呋(Ceftiofur)，头孢吡普(Ceftobiprole)，头孢曲松(Ceftriaxon)，头孢呋辛(Cefuroxime)，氯霉素(Chloramphenicole)，Florfenicole，环丙沙星(Ciprofloxacin)，克拉霉素(Clarithromycin)，克林沙星(Clinafloxacin)，克林霉素(Clindamycin)，邻氯青霉素(Cloxacillin)，粘菌素(Colistin)，Cotrimoxazol(三甲氧苄氨嘧啶(Trimthoprim)／磺胺甲唑(sulphamethoxazole))，达巴万星(Dalbavancin)，达福普汀(Dalfopristin)／Quinopristin，达托霉素(Daptomycin)，地贝卡星(Dibekacin)，双氯青霉素 (Dicloxacillin)，多尼培南(Doripenem)，强力霉素(Doxycycline)，恩诺沙星(Enrofloxacin)，厄他培南(Ertapenem)，红
霉素(Erythromycin)，氟氯西林(Flucloxacillin)，氟康唑(Fluconazol)，氟胞嘧啶(Flucytosin)，磷霉素(Fosfomycin)，夫西地酸(Fusidic acid)，加雷沙星
(Garenoxacin)，加替沙星(Gatifloxacin)，吉米沙星(Gemifloxacin)，庆大霉素(Gentamicin)，亚胺培南(Imipenem)，伊曲康唑(Itraconazole)，卡那霉素(Kanamycin)，酮康唑(Ketoconazole)，左氧氟沙星(Levofloxacin)，洁霉素(Lincomycin)，利奈唑胺(Linezolid)，氯碳头孢(Loracarbef)，美西林(Mecillnam)(氮脒青霉素
(amdinocillin))，美罗培南(Meropenem)，甲硝哒唑(Metronidazole)，美洛西林(Meziocillin)，美洛西林舒巴坦，米诺环素(Minocycline)，莫西沙星(Moxifloxacin)，莫匹罗星(Mupirocin)，萘啶酸(Nalidixic acid)，新霉素，奈替米星(Netilmicin)，呋喃咀啶(Nitrofurantoin)，诺氟沙星(Norfloxacin)，氧氟沙星(Ofloxacin)，苯唑西林(Oxacillin)，培氟沙星(Pefloxacin)，青霉素V，哌拉西林(Piperacillin)，哌拉西林舒巴坦，哌拉西林他唑巴坦(Piperacillin-tazobactam)，利福平(Rifampicin)，罗红霉素(Roxythromycin)，司帕沙星(Sparfloxacin)，壮观霉素(Spectinomycin)，螺旋霉素(Spiramycin)，链霉素，舒巴坦，磺胺甲唑(Sulfamethoxazole)，替考拉宁(Teicoplanin)，特拉万星(Telavancin)，泰利霉素(Telithromycin)，替莫西林(Temocillin)，Tetracyklin，替卡西林(Ticarcillin)，替卡西林-克拉维酸，替加环素(Tigecycline)，妥布霉素(Tobramycin)，甲氧苄啶嘧啶(Trimethoprim)，曲伐沙星(Trovafloxacin)，泰乐菌素(Tylosin)，万古霉素(Vancomycin)，维吉霉素(Virginiamycin)和伏立康唑(Voriconazole)。

[0106] 可特定地使发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统成形，例如以神经导引、皮肤贴片、筋膜鞘或血管移植物的形状用于后续的体内使用。同样地，可使发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统成形，以适应待填充的缺损或位点，优选地作为硬组织或软组织植入物。实例包括从中已去除了肿瘤的位点，皮肤上的损伤位点(切口、活检位点、洞或其他缺损)和缺失或粉碎的骨块。可使发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统成形为用于物质递送的形式，例如皮肤或其他上皮贴片、用于摄取的锭剂、腹膜内植入物、皮下植入物、支架的内衬或外衬、心血管瓣、腱、角膜、韧带、假牙、肌肉植入物或神经导引。发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的制备允许巨大的灵活性并允许将构建体定制为几乎任意需要的形状。许多这样的梯度层系统具有足够的灵活性使得允许其形成几乎任何形状。在使这样的梯度层系统成形时，可通过例如热封、化学密封和应用机械压力或其组合，将梯度层系统的部分彼此密封。热封的例子是使用本文讨论的交联技术以在发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的2个层或层组之间形成交联。也可使用密封封闭成形的基质中的开口。也可使用缝合彼此连接基质的部分或封闭基质中的开口。可优选地，合成聚合物的加入增强待热封的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的性能。

[0107] 在此上下文中，可修饰发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的几何学以产生期望的基质或形式。通过改变底面(ground)的几何学，例如具有平面或线型或多点的底面，可改变发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的组分的方向并定制用于特定应用。例如，在制备发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统中可使用包含一系列平行线的接底面的靶，以使电纺丝材料朝向特定方向。接底面的靶可为圆柱形心轴，由此形成管状基质。最优选地，底面是可变表面，其可通过其中编程指示特定底面几何学的微处理器控制。可选地，例如，可将底面固定框架中，所述框架在相对纤维源或固定的流出胶原的微量移液器吸头的x，y和z平面中移动。

[0108] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可应用于广泛范围的潜在应用。用途包括但不限于下述用途：制造改造的组织和器官，包括例如贴片、塞子或组织的结构或基质材料的结构。这些和其他构建体可补充细胞或不补充细胞使用。其他用途包括下述用途：修复学，和其他植入物；组织脚手架；伤口修复或敷料；止血设备；用于组织修复和支持的设备或结构，例如手术缝合线、粘合剂、天然涂料或用于合成植入物的组分；美容植入物和支持物；器官或组织修复或结构支持；物质递送；生物改造的平台；用于检测物质对细胞的作用的平台；细胞培养；和许多其他用途。

[0109] 在如上概述的每种治疗用途中，使用治疗有效量的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统。发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的治疗有效剂量将多少根据梯度层系统与梯度层系统，患者与患者，用途与用途的不同而变化，并将取决去下述因子，例如患者的病况，待治疗病况的性质和递送途径。例如，直径1cm并且深3
0.5cm的小皮肤缺损将需要约0.4cm 发明生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统以填补缺口，刺激血管发生和组织再生并具有治疗效力。相比较，直径20cm并且深5cm的褥
3
疮性溃疡将需要约1600cm 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统以具有类似效力。作为一般建议，治疗效力所需的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层
3 3
系统的量可为从0.1至2000cm，优选从约0.5至100cm。

[0110] 特别地，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可用作生物材料，所述生物材料用于再生医药，特别是作为伤口敷料或用于组织支持物，或用于制备所述伤口敷料或组织支持物。这样的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统也可用于制备血管构建体或组织或器官构建体或作为相应的构建体用于物质递送，例如治疗／生物活性剂的局部化递送，以及这些活性剂在对象中的靶位点处的受控释放，等等。

[0111] 根据一个方面，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可用于构建血管。发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的一个应用是形成中和小直径的血管构建体。用于此目的的一些优选材料是明胶、胶原和弹性蛋白，特别是I型胶原蛋白和III型胶原蛋白。可根据本发明制备的血管构建体的例子包括但不限于用于旁路或移植物的冠状血管、股动脉、腘动脉、肱动脉、胫动脉、桡动脉或相应的静脉。当与内皮细胞和平滑肌细胞以及周细胞组合时，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统特别有用。也可构建更复杂的形状，包括锥形和／或分支的血管。不同形状的心轴是缠绕大纤维或定向电纺丝聚合物所必需的。

[0112] 与血管基质有关的一些并发症是(1)血栓的形成和(2)不能定量监控血管移植物的体内整合。与血栓形成有关的问题是最困难的挑战之一，经常导致血管移植的失败。一般临床施用肝素，一种有效的抗凝剂，以避免血栓的形成。然而，肝素的全身使用具有一定的风险，因此优选局部施用肝素。发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统因此可通过在结构中掺入肝素克服缺乏对药物释放的控制。

[0113] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可同样地用于构建设计的组织或器官构建体，或器官构建体的部分，例如，心、心脏瓣膜、肝、肾等等。使用发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统生物设计组织或器官的能力产生了广泛范围的生物改造的组织替换应用。生物改造的组分的例子包括但不限于，血管、心、肝、肾、骨骼肌、皮肤和其他上皮细胞、心肌和神经导引。在一些方面，这样的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可与改善植入物功能的治疗剂组合。可将例如，抗生素、抗炎药、局部麻醉剂、生长因子和细胞因子或其组合加至生物改造的器官的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统以加速愈合过程和降低不适。

[0114] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统也可用于递送一种或多种治疗剂至期望的位置。

[0115] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可用于例如口腔中、上呼吸消化道中(例如在耳鼻喉科学或耳鼻喉医学期间)以及口腔伤口(例如在口腔和颌面部手术期间)的移植学、皮肤病学和癌症领域的治疗。更精确地，这样的临床应用包括在再生医药、牙医学和牙科学领域中的例如伤口敷料，组织支持物或组织再生应用。在这些应用中，可治疗皮肤病学领域中的例如慢性溃疡伤口，以及再生医药领域中的伤口，特别是在手术切除上呼吸消化道癌(例如在耳鼻喉科学或耳鼻喉医学期间)中可出现的伤口，以及口腔伤口(例如在口腔和颌面部手术期间)。在常常出现在糖尿病患者腿末端下部的溃疡伤口的情况下，可在存在已辐射的细胞分裂失活的相应成纤维细胞时在发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统上创新地体外培养自体角化细胞，直到得到预成型的上皮。这样的自体角化细胞一般来源于例如外毛根鞘，因此容易获得。之后，优选地将相应地已经培养了这些自体细胞的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统施用到所述细胞来源的相同患者的优选预先处理的伤口上。一般以这样的密度和大小将发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统施用在患者的伤口上，所述密度和大小优选地启动伤口的愈合并优选地允许用来自周围组织和液体的营养物支持细胞。发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的施用也支持伤口的闭合，这是由于发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的受指导的和系统的降解和导致的特异性蛋白质(例如角化细胞促进生长因子，例如EGF或FGF-7(KGF))的释放。至于本文提到的上呼吸消化道癌(例如在耳鼻喉科学或耳鼻喉医学期间)，与发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统应用的角化细胞一般来源于所谓的“前臂皮瓣(forearm flap)”。在此情况下，移除前臂内侧部分的一块完整皮肤，并在体外培养结缔组织的成纤维细胞和上皮角化细胞。因为具有这些肿瘤的患者一般遭受受损的伤口愈合，因此显示相应地有问题的肉芽组织，在施用优选接种了上皮细胞和相应的成纤维细胞的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的条件下，有利地进行对这些患者的治疗和外科敷料。

[0116] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统(优选地为药物、药物载体、医疗设备或医疗产品的形式)的其他有利的临床应用包括在待治疗的患者中的拔牙后的牙槽嵴预防。这样的应用将明确地有助于在牙医学和牙科学中牙种植物在审美和功能上的成功应用。在德国，每年要拔超过1千4百万颗牙齿。在拔牙或牙缺失后，缺失的牙的支持骨多少会有一定程度的坍塌(萎缩)。因此，在此情况中可观察到不同程度的骨缺失或萎缩。牙槽骨的萎缩会损害审美外表。更槽糕地是，损害了种植学的先决条件和进一步损害假体康复。因此通常需要改善功能和审美外观的增加的措施并因此通常增加与侵入性操作流程相关的费用以及外科手术工作量。因此，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统在拔牙或牙缺失后的直接特定应用代表了避免这些费用和后续治疗的适当的和有成本效率的工具。

[0117] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统(优选地为药物、药物载体、医疗设备或医疗产品的形式)的其他有利的临床应用包括在待治疗的患者中治疗人角膜疾病。可在角膜，即上皮、结缔组织／成纤维细胞和内皮疾病的治疗中进行这样的应用。在角膜缘疾病(“角膜缘干细胞缺乏”)中，结缔组织(结膜)的携带血管的浑浊上皮变为清澈角膜，这一般导致受影响的患者失明。这些疾病的传统治疗一般需要替换角膜缘干细胞，其代表清澈的角膜上皮的前体细胞。在单侧角膜缘疾病中，可通过将重要的角膜缘组织从未受影响的眼转移到受影响的眼中进行治疗。在双侧情况下，这样的治疗是不可能的，问题大得多。在这些情况下，假如至少在一只眼中有保留的角膜缘功能，可基于少量细胞样品在合适的载体基质例如发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统上培养融汇的细胞层。然后将融汇的细胞层转移到受影响的眼中。迄今为止使用人羊膜或纤维蛋白凝胶作为载体基质，其中从提取的细胞样品培养的增殖细胞(干细胞)数代表了这样的离体培养的最重要方面。不幸地是，长期观察显示，在目前使用的两种载体基质上，即人羊膜或纤维蛋白凝胶上的干细胞数很少。此失败的原因很可能是由于这些载体基质都不能提供这些干细胞的最佳细胞外环境。因此，这些干细胞不能形成最佳细胞生长所需的小生境。在此情况中，由于其个体适应性能，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统提供了最佳环境，可根据这些干细胞的需要设计所述梯度层系统。

[0118] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统(优选地为医疗设备的形式)的另一种临床应用包括治疗大的慢性伤口，由疾病(例如癌症、糖尿病等，例如大量替换等)导致的伤口，特别是治疗损伤和组织和组织结构的丢失，例如在皮肤病学领域中。在此情况中，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统提供了用于制备皮肤等同物，或与成纤维组合的卓越候选物，可有利地用作上皮角化细胞的载体系统或脚手架结构，本文包括上述所有内容。应用可包括(i)具有溃疡伤口，例如由于II型糖尿病在四肢的溃疡伤口的患者的伤口的治疗，或(ii)在肿瘤切除后的伤口的治疗。发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统有效促进了伤口的愈合，并因此加速了移植后的愈合过程。

[0119] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统(优选地为医疗设备的形式)的另外的临床应用包括治疗角膜内皮疾病。在此情况中的具体应用为例如治疗富克斯角膜内皮营养不良。在此疾病中和在其他疾病的情况下，角膜内皮细胞由于凋亡剧烈降低，导致角膜浑浊。目前的疗法包括角膜移植，包括移植和替换角膜的所有层。备选的治疗包括通过来自供体的内皮细胞层的特定移植替换患病的细胞。因为移植材料不是HLA一致的材料，组织移植物可能被排斥，导致内皮细胞层的严重损伤。在此情况中，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统提供了从待治疗患者提取内皮细胞，和与上述类似地通过在合适的载体基质，例如发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统上基于少量细胞样品培养融汇的细胞层以富集这些内皮细胞的可能性。再一次地，由于其个体适应性能，发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统提供了这些细胞的最佳环境，可根据这些干细胞的需要设计所述梯度层系统。然后可将细胞与作为载体的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统一起转移到角膜背侧，并因此避免了移植物的排斥。

[0120] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统(优选地为药物、药物载体、医疗设备或医疗产品的形式)可另外用于例如烧伤敷料，止血贴片，治疗损伤，外科敷料，伤口治疗，软或硬组织再生，例如在移植学领域中，治疗口腔中的伤口，例如由于肿瘤疾病的伤口，眼科学领域，牙周缺损领域，包括牙周韧带等，制备用于整体或部分再生或重建损伤或患病或移除的组织，特别是肌肉、心肌、结缔、骨、腱或韧带、肝、肾、角膜、真皮或表皮和其他上皮组织、关节软骨组织的细胞植入物，制备用于整体或部分再生或重建神经组织，特别是中枢神经系统组织、神经组织(例如因为帕金森氏病或脊髓损伤或肿瘤病症或阿尔茨海默病损伤的神经元组织)、神经组织(例如在外科手术后去除或烧灼的神经元组织)的作为神经细胞的中枢神经系统细胞植入物。发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可另外用于治疗心血管疾病，治疗创伤疾病或损伤，治疗整形外科领域的疾病或病症，治疗、再生或重构软骨、软骨疾病或软骨疾症、软骨病，构建膝盖中的软骨，和治疗关节病或作为药物递送设备，用于体外、体内和／或离体应用的细胞基质，或用于制备组织模型和作为细胞移植基质。

[0121] 因此，还通过包含如本文定义的梯度层系统的生物材料解决了本发明的目的，其中所述生物材料选自用于再生医药、用于伤口敷料或用于组织支持物或用于制备所述再生医药、伤口敷料或组织支持物的生物材料，生物改造的组织或器官构建体，或部分器官构建体，生物改造的心，生物改造的心脏瓣膜，生物改造的肝，生物改造的肾，生物改造的血管，生物改造的骨骼肌，生物改造的心肌，生物改造的神经导引，烧伤敷料，伤口敷料，外科敷料，皮肤贴片，口腔贴片或任意其他上皮贴片，筋膜鞘，血管构建体，血管移植物，血管，用于旁路或移植的冠状血管，股动脉，腘动脉，肱动脉，胫动脉，桡动脉或相应的静脉，支架，支架的内衬或外衬，心血管瓣膜，皮肤贴片，用于消化的锭剂，腹膜内植入物，皮下植入物，腱，角膜，韧带，假牙，肌肉植入物或神经导引，改造的组织或器官，修复学，组织脚手架，止血设备，用于组织修复和支持粘合剂的设备或结构，用于合成的植入物的天然涂料或成分；美容植入物或支持物，用于物质递送的生物材料，生物改造的平台，或用于检测物质对细胞的作用的平台。

[0122] 根据另一个具体的实施方案，还通过发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统在疾病、疾病状态的治疗或如本文上述一般定义的治疗中的用途解决了本发明的目的。更优选地，如本文定义的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可用于(例如在药物、药物载体、医疗设备或医疗产品的制备中)治疗如上定义的疾病。

[0123] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可储存并通过在植入前不久接种细胞使用。一旦制备后可干燥发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统并将其贮存在干燥或冷冻的状态下。储存条件将取决于使用的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统和是否在梯度层系统上面或内部掺入了治疗剂。在掺入治疗剂的方面，可在低于0℃的温度、真空或以冻干态储存发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统。取决于在发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统内部或上面的材料，可使用其他储存条件，例如在室温，在黑暗中，在真空或减低的压力下，在惰性气体下，在冰箱温度，在水溶液或其他液体溶液中，或以粉末形式储存。

[0124] 也可通过本领域普通技术人员公知的常规手段灭菌发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统，例如辐射和热。发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统也可与抑菌剂(例如硫柳汞(thimerosal))组合以抑制细菌生长。在一些方面，可用赋予在储存和运输中的稳定性的化学品、溶液和方法处理组合物。

[0125] 发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统可以其自身，或以用于任意上述定义用途的药物、药物载体、医疗设备或医疗产品的形式提供。

[0126] 在本发明中，如果没有另外指示，如果合适可彼此组合可选方案、方面和实施方案的不同特征。此外，如果没有特别提到，术语“包含”不应被理解为表示“由...组成”。然而，在本发明的上下文中，在适用情况下，术语“包含”可用术语“由...组成”替换。

[0127] 附图：

[0128] 下面显示的图仅是说明性的并进一步描述本发明。不应将这些图理解为限制本发明。

[0129] 图1：图示了示例性的发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统及其结构。如图所示，发明的梯度层系统包含绒布样结构的不同的包含生物相容的并且优选可生物降解的交联的聚合物的层组和至少一个以网或网眼样结构存在的生物相容的并且优选可生物降解的支持层。

[0130] 图2：显示了发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的光栅电子显微镜检查(REM)，其中在体外成功培养和增殖了真皮的成纤维细胞。图2中的光栅电子显微镜(REM)图还显示了来自发明的梯度层系统的底侧／底面(插图)的真皮的成纤维细胞的预培养和在基底表面上的表皮角化细胞区室的建立。

[0131] 图3：描述了发明的梯度层系统的光栅电子显微镜检查(REM)，其中在发明的梯度层系统上成功地体外培养和增殖了真皮成纤维细胞和表皮角化细胞的交互共培养物(见图3和插图)。

[0132] 实施例：

[0133] 下面显示的实施例仅是说明性的并进一步描述本发明。不应将这些实施例理解为限制本发明。

[0134] 实施例1-明胶层的制备

[0135] 在乙酸(Merck)，乙酸乙酯(Fluka)和水(5：3：2体积)的溶剂混合物中溶解明胶(B型，来自牛皮肤；Sigma-Aldrich)。浓度在约5至20％(重量)的范围内。将不同量的交联剂乙二醛(0.0005-0.1g／g明胶溶液)与明胶溶液混合。将明胶／乙二醛混合物填充进注射器并固定在注射泵(型号：KDS100oder KDS101，KD scientific)上。流速在约0.1和1.0ml／h之间。用2台高压电力发电机( LNC30000-2neg和LNC30000-2pos)在套管和集电极之间建立电场，场力在0.4和8kV／cm之间。

[0136] a)电纺丝／电喷射

[0137] 在基底上沉淀了足够厚的绒布样明胶/乙二醛纤维层组后，在明胶/乙二醛纤维形成的绒布样层组上电纺丝或电喷射PCL的薄层。之后应用包含明胶的另外的层组。在随后的温度处理(60-100℃；0.5-24h)期间，进行明胶和乙二醛的(进一步)交联。这伴随绒布样层组由于形成Schiff碱变为褐色。此外，温度处理导致PCL层的(部分)熔化。熔化物呈点状或层状地包围明胶纤维，并因此提供了膨胀的绒布样明胶/乙二醛纤维层组的显著改进的机械性能。

[0138] b)3D绘图

[0139] 如在a)部分中描述的，在绒布样明胶/乙二醛纤维层组而非PCL层上应用绘制的PCL层构建体。

[0140] 对a)和b)两步，应当注意可任意改变层或层组的排列。例如，同样可以使用3D构建体作为电纺丝的靶。层或层组的不同排列，不同层或层组的方向和层或层组的不同数量都是可能的。任选地，可使用热风枪或热风鼓风机将构建体，例如PCL层等应用在支持物上或直接应用在绒布样明胶／乙二醛纤维层组上。基于明胶纤维和多酚化合物，优选gallotannine(Sigma-Aldrich)的额外的交联使用改进发明的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的机械性能的另外的可能性。将绒布样明胶/乙二醛纤维层组浸入或孵育在多酚化合物的水或醇溶液(0.01-10％(重量))中，在约20-40℃的温度轻轻搅动0.5至24小时。通过若干洗涤步骤(蒸馏水、缓冲液、醇)去除过量的多酚化合物。

[0141] 实施例2-聚己内酯层的制备

[0142] 缩写：

[0143] PCL=聚己内酯

[0144] TCP=磷酸三钙

[0145] D内=喷嘴的孔径

[0146] RPM=每分钟旋转次数

[0147] 3D-BioplottingTM的实验部分

[0148] 1.聚己内酯网眼样构建体

[0149] 使用CAD数据，用3D绘图机(第3代，Envisiontec，Germany)直接打印网眼样构建体。为此目的，将聚己内酯(PCL，Mn=80.000g／mol，Aldrich，St.Louis，USA)填充进3D生物绘图机的高温打印机头并熔化(90℃)。以矩形(4x4cm)形式打印熔化的材料。使用特氟龙箔作为打印的支持物。所有实验参数列在表1中。

[0150]

[0151] 表1：从纯PCL制备的网眼样构建体的绘图过程的实验参数。

[0152] 1.聚己内酯／磷酸三钙-网眼样构建体：

[0153] 在杠杆开启盖玻璃容器中提供聚己内酯(PCL，Mn=80.000g／mol，Aldrich，St.Louis，USA)和磷酸三钙(10Gew.-％，Budenheim，Germany)并混合。用微量混合器(microcompounder)(Daca Instruments，Santa Barbara，USA)混合混合物(100℃，100RPM，持续时间2分钟)。如章节a中指示的处理得到的材料。所有实验参数列在表2中。

[0154]

[0155] 表2：从PCL和TCP制备的网眼样构建体的绘图过程的实验参数。

[0156] 实施例3-生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的制备

[0157] 为了制备示例的发明的梯度层系统，在合成聚合的明胶纤维之前制备如上所述的明胶或具有其他聚合物的明胶掺合物，并与作为交联剂的乙二醛混合。在发明方法的第一步中，然后通过前面描述的电纺丝程序合成聚合的明胶纤维，得到交联的聚合的明胶纤维层。在交联剂乙二醛的存在下使用明胶掺合物合成纤维以增强机械性能。此外，由于多肽与乙二醛交联后粘度增加，在电纺丝程序期间调节聚合的明胶纤维的纤维强度。乙二醛优选地使得得到的维兰斯(vlies)结构不可溶于水，并因此改进生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统的机械性能。增加的粘度导致纤维强度增加，并导致在用聚合的明胶纤维产生的层中的梯度。渐变的纤维强度具有如上定义的范围，一般在约50至1500nm或100至800nm的范围内。

[0158] 在根据第一步合成了交联的聚合的明胶纤维层后，鉴定了聚合的明胶纤维的这些渐变的纤维层，其在水环境中展示了的充分稳定性。pH值为约5.5至约8.5。避免过碱和过酸的条件以防止明胶降解。然后在3D电绘图程序的第二步中使用这些渐变的纤维层作为基础。在3D电绘图程序中，在聚合的明胶纤维的渐变的纤维层上绘制聚酯化合物聚己内酯，以得到作为三维生物混合聚合物网络结构或脚手架的发明的聚合的梯度层系统，其显著稳定了聚合的明胶纤维的渐变的纤维层。得到的脚手架保留了在单个步骤中使用的聚合物的卓越性能。示例的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统及其结构显示在图1中。

[0159] 然后，在另外的步骤3中，培养根据如上所述的步骤2得到的生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统和靶细胞。通过在发明的聚合的梯度层系统表面上培养靶细胞，优选真皮的成纤维细胞进行步骤3。在细胞培养基中培养靶细胞。在含有10％胎牛血清(Seromed，Biochrom，Berlin，Germany)和50μg／ml卡那霉素(Roche Diagnostics，Mannheim，Germany)的DME培养基(PAA，Pasching，Austria)中培养原代真皮成纤维细胞培养物进行常规细胞培养。在含有50μg／ml卡那霉素(Roche Diagnostics，Mannheim，Germany)的低钙角化细胞生长培养基(基础角化细胞培养基，KGM，具有提供的补充物，Promocell，Heidelberg，Germany)中培养表皮角化细胞。

[0160] 通过在基底底侧24小时预培养真皮成纤维细胞和随后在设备顶侧接种表皮角化细胞进行在生物相容的并且优选可生物降解的梯度层系统上的各个细胞类型的建立。再培养14天此共培养系统。

[0161] 如光栅电子显微镜(REM)(见图2)测定的，成功地在体外培养和增殖了真皮成纤维细胞。在图2中的光栅电子显微镜(REM)图还显示了在发明的聚合的梯度层系统的底侧／底面(插图)的来自真皮的成纤维细胞的预培养和在基底表面上的表皮角化细胞区室的建立。还可以在发明的聚合物梯度层系统上成功培养由成纤维细胞和表皮角化细胞组成的交互共培养物(见图3和插图)。

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