技术领域
[0001] 本
申请涉及针头组件、注射装置及小鼠模型的建立方法。
背景技术
[0002] 肝脏是人体内最大的以代谢为主的实质性器官,其独特的形态组织结构和化学组成特点,赋予肝脏复杂多样的
生物化学功能。肝由肝动脉和
门静脉双重供血,使
肝细胞获得充足的
氧和营养成分;肝内亦存在肝静脉和胆道系统双重输出通道,可输出其
代谢物质或其他组织利用物;肝内具有丰富的肝血窦,为肝细胞与血液进行物质交换提供有
力场所;肝内也含有丰富的酶体系,使肝细胞除了正常代谢功能外,还具有特殊的代谢功能,如合成凝血因子、尿素及
酮体等物质。
[0003] 正常情况下,营养物质及酶类等在肝内参与
氧化还原反应,但当肝实质细胞受损,如急慢性
肝炎、肝硬化、肝癌的患者正常代谢途径就会受阻,导致肝内代谢合成途径受影响。如肝实质损伤直接影响肝生物转化酶类的合成,从而间接对其他重要器官也造成影响。
[0004] 逆行胆管内注射(Rettograde Intrabiliary Infusion)最近发展成为更有效的通过肝靶向递送载体的
给药途径,载体一般包括腺病毒、慢病毒、脂质复合物和高分子纳米复合物等。逆行胆管内注射优点是,可以更直接的将复合物载体通过胆小管
转染至肝实质细胞,从而减少了被kupffer细胞非特异性吞噬的影响。kupffer细胞存在于肝血窦中,能够吞噬和清除大部分肝血窦中的细菌、异物及衰老的红细胞,以消除这些物质对
机体的损伤。通过门静脉或者其他小静脉注射的方法传输DNA,首先要经过kupffer细胞进行清除,这样会导致靶器官的基因表达效率降低。由于大鼠与小鼠解剖学和生理学特点各不相同,现有资料表明胆管注射法主要面对的实验对象是大鼠,是由于大鼠具有体积大、生存能力强、无胆囊、手术易操作等特点。但是大鼠生存时间长,
接触的环境因素比小鼠长,所以体内的遗传物质发生变化的概率要高。而小鼠作为普通常用实验动物,具有经济、易饲养控制、生产繁殖周期短及特殊生理特性等特点,更多的应用于实验研究。但是由于小鼠体积小,机体各器官也较小,给基因的靶向输送的提高了难度。
[0005]
现有技术中,一般采用尾静脉注射的方法,将含有
治疗性的外源基因载体直接导入实验用小鼠体内,使靶基因在目的细胞或组织中表达。但将含有DNA 的大体积溶液快速注射导致此溶液大量在小鼠的下腔静脉进行积累,短时间内,左心室无法将如此大体积的溶液进行动脉射血完成体内血液循环。在下腔静脉内产生了较高的静脉压,从而使带有注射溶液的肝门静脉的血液短时间倒流,迫使倒流的血液被冲击至毛细血管出口和小静脉之间。同时高压导致肝血窦孔径增大,肝细胞膜通透性增强,因此外源性DNA能够在肝脏内瞬时表达。但大体积高压注射,易使动物血液循环受阻,直接导致动物死亡。
发明内容
[0006] 本申请提供一种针头组件、注射装置及小鼠模型的建立方法。
[0007] 根据本申请的第一方面,本申请提供一种针头组件,包括软管、第一针梗、注射
套管以及与
注射器相连的连接件,所述第一针梗由金属制成,所述注射套管为软胶管且包括第二针梗和第二针尖,所述软管连接所述第一针梗和所述连接件,所述第二针梗套设在所述第一针梗上。
[0008] 所述注射套管由聚乙烯制成,所述第一针梗由不锈
钢制成。
[0009] 所述注射套管的外径小于等于1mm。
[0010] 所述连接件包括第三针梗以及与所述注射器连接的针栓。
[0011] 根据本申请的第二方面,本申请提供一种的注射装置,包括注射器,还包括软管、第一针梗、注射套管以及与所述注射器相连的连接件,所述第一针梗由金属制成,所述注射套管为软胶管且包括第二针梗和第二针尖,所述软管连接所述第一针梗和所述连接件,所述第二针梗套设在所述第一针梗上。
[0012] 所述注射套管由聚乙烯制成,所述第一针梗由
不锈钢制成。
[0013] 所述注射套管的外径小于等于1mm。
[0014] 所述连接件包括第三针梗以及与所述注射器连接的针栓。
[0016] 根据本申请的第三方面,本申请提供一种小鼠模型的建立方法,包括以下步骤:
[0017] 取实验用BALB/c小鼠,6周龄-8周龄;
[0018] 使用上述注射装置,进行逆行胆管注射。
[0019] 由于采用了以上技术方案,使本申请具备的有益效果在于:
[0020] 在本申请的具体实施方式中,由于针头组件包括软管、第一针梗、注射套管以及与注射器相连的连接件,第一针梗由金属制成,注射套管包括第二针梗和第二针尖,第二针梗套设在第一针梗上,注射套管为软胶管,便于
手指捏持注射套管,使注射套管刺入胆囊内,降低了第二针尖在穿刺过程中造成的穿透 胆囊所造成的胆汁外泄可能,通过小鼠胆囊逆行注射基因至肝脏,达到有效地进行靶器官的基因传送,增加目的基因的转染效率,同时本申请也降低了实验小鼠的死亡率。
附图说明
[0021] 图1为本申请针头组件在一种实施方式中的结构示意图。
具体实施方式
[0022] 下面通过具体实施方式结合附图对本申请作进一步详细说明。
[0024] 如图1所示,本申请的针头组件,其一种实施方式,包括软管11、第一针梗12、注射套管13和连接件14,连接件14与注射器相连,第一针梗12由金属制成,注射套管13为软胶管,注射套管13包括第二针梗和第二针尖,软管11连接第一针梗12和连接件14,第二针梗套设在第一针梗12上。注射套管13的长度为4~6mm,第二针尖的长度为2~3mm。
[0025] 在一种实施方式中,注射套管13由聚乙烯制成,第一针梗12由不锈钢制成。
[0026] 在一种实施方式中,注射套管13的外径小于等于1mm,注射套管13的内径大于等于0.61mm。在本实施方式中,注射套管13的外径可以为1mm,内径为0.61mm。
[0027] 在一种实施方式中,连接件14可以是针头,具体可使用27号针头。连接件14可以包括第三针梗以及与注射器连接的针栓。
[0028] 实施例二:
[0029] 如图1所示,本申请的注射装置,其一种实施方式,包括注射器(图未示)、软管11、第一针梗12、注射套管13和连接件14,连接件14与注射器相连,第一针梗12由金属制成,注射套管13为软胶管,注射套管13包括第二针梗和第二针尖,软管11连接第一针梗12和连接件14,第二针梗套设在第一针梗12上。注射套管13的长度为4~6mm,第二针尖的长度为2~3mm。
[0030] 在一种实施方式中,注射套管13由聚乙烯制成,第一针梗12由不锈钢制成。
[0031] 在一种实施方式中,注射套管13的外径小于等于1mm。注射套管13的内径大于等于0.61mm。在本实施方式中,注射套管13的外径可以为1mm,内径为 0.61mm。
[0032] 在一种实施方式中,连接件14可以是针头,具体可使用27号针头。连接件14可以包括第三针梗以及与注射器连接的针栓。
[0033] 在一种实施方式中,本申请的注射装置还可以包括微量泵(图未示),微量泵与注射器连接。
[0034] 实施例三:
[0035] 本申请的小鼠模型的建立方法,其一种实施方式,包括以下步骤:
[0036] 步骤202:取实验用BALB/c小鼠,6周龄-8周龄;
[0037] 步骤204:使用本申请的注射装置,进行逆行胆管注射。
[0038] 本申请的小鼠模型的建立方法,基于小鼠的肝靶向性基因传递技术,通过小鼠胆囊逆行注射载体及DNA,载体及DNA可改变成临床常用
化疗药物或其他治疗药物。
[0039] 本申请的小鼠模型的建立方法,其一种应
用例包括以下步骤:
[0040] 步骤302:取实验用BALB/c小鼠,6周龄-8周龄。术前12h实验用鼠禁食,自由饮
水。制备穿刺用胶管针:使用外径为0.61mm、内径为0.28mm、长度为300mm的聚乙烯材料软胶管(Intramedic,Sparks,MD,PE10),将27G1/2针头(BD,USA,NO.305109)剪断,前半段针头与软胶管头部相连,使用低温不干胶连接使其紧密;由于针头尖锐,需使用约5mm同样材质及内外径的聚乙烯材料软胶管(Intramedic,Sparks,MD,PE20)套入针头部,针头被软管包裹,以确保手术穿刺过程中针头不会穿透胆囊壁造成胆汁外泄。后半段针头与软胶管尾部相连。针头后半部分连入1ml-2.5ml普通注射器(螺旋头),使用前需在75%
乙醇中浸泡。
[0041] 步骤304:50mg/kg戊巴比妥钠进行小鼠
腹腔注射麻醉后,使用75%无水乙醇擦拭小鼠,随后将小鼠固定于解剖台上,使用脱毛膏进行腹部脱毛,随后使用生理盐水进行清洗,碘酒擦拭2遍。
[0042] 步骤306:无菌条件下行上腹部正中切口,分层剪开
皮肤、肌肉、韧带等。其中,剑突两侧韧带可稍微剪开一些,可充分暴露手术部位。
[0043] 步骤308:暴露小鼠肝脏、胆囊及十二指肠,使用医用
止血钳夹住剑突将其向上固定,使用动物手术撑开器分别撑开两侧肌肉,辨别胆囊与肝脏及十二指肠相对
位置。
[0044] 步骤310:辨别胆总管走向,使用小动脉夹夹闭胆总管与十二指肠连接处;同时将打松结的6号丝线置于小鼠胆囊周围备用,左手使用普通眼科镊(无齿) 提拉胆囊(胆囊柔韧,动作需轻),右手捏住特制穿刺用胶管针,以针头紧贴胆囊壁垂直刺入胆囊内(胆囊壁较滑,需谨慎为之)。由于胆囊壁有一定韧性,已套入软胶管的针头硬度刚好可以穿透胆囊。穿刺后可使用1ml注射器
抽取胆汁,移除。
[0045] 步骤312:穿刺后,需使用小动脉夹夹闭胆囊壁与针头软管,同时使用预置的丝线结扎胆囊壁与针头软管连接处(不可移除小动脉夹)。
[0046] 步骤314:穿刺成功后,注射器可接微量泵,稳定匀速地进行药物注射。注射药物前可不用生理盐水进行清洗,由于肝脏质地脆,反复注入多量液体易损伤,发生腹腔内出血等后果。
[0047] 步骤316:待药物注射完毕后,可将针头留置于胆囊内1min,确保和的液体充分吸收不至于外流。另取适当长度6号丝线预置于结扎丝线下方结扎胆囊。提起胆囊上部边缘,取下胆囊部小动脉夹,拔出针头。取下胆总管与十二指肠连接处小动脉夹。手术过程中,时刻观察小鼠的呼吸
频率和心率,有条件者可使用小动物生理监测仪进行监测。
[0048] 步骤318:手术完毕后,确认胆囊已结扎并无胆汁外漏后清洗黏连部位后逐层关闭腹部。术后注射复方乳酸钠
葡萄糖溶液及适量抗生素(可不注射),同时进行术后护理,适宜
温度、湿度、清洁饲养术后小鼠。
[0049] 以上内容是结合具体的实施方式对本申请所作的进一步详细说明,不能认定本申请的具体实施只局限于这些说明。对于本申请所属技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本申请构思的前提下,还可以做出若干简单推演或替换。