拟杆菌微生态制剂的制备方法
专利汇可以提供拟杆菌微生态制剂的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且从发育良好的婴儿或低龄动物肠道菌群中筛选分离出的一种多功能华星一号(BF839)菌株，利用 发酵 技术制成活菌制制剂，能增加儿童生长发育，对防治急慢性肠炎、菌群失调、上 呼吸道 感染和神经官能症等均有很好的疗效，特别对小儿腹泻、营养不良疗效尤为显著。用作 饲料 添加剂可增加畜禽、动物体重、产蛋量及增强抗病 力 ，还可用于制备 化妆品 、保健食品和饮料等。，下面是拟杆菌微生态制剂的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种拟杆菌活菌制剂，该拟杆菌(保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏号CGMCCN0.0157；分类名称脆弱拟杆菌Bacteroides，Fragilis命名为BF839)，是脆弱杆菌中具有强发酵特性并无感染的一个菌株，其特征是将BF839菌株接种于培养基；蛋白胨0.5-2.5%，葡萄糖0.2-0.5%，半胱氨酸0.001-0.5%，NaCl0.2-0.5%，Na2HPO40.1-0.3%，硫乙醇酸钠0.02-0.1%，牛肝或猪肝浸液30-60%，牛肉浸液30-60%，酵母膏0.1-0.8%(重量百分比)，在恒温32-40℃经12-72小时发酵，然后过滤、洗涤、稀释、测菌应用。
2.根据权利要求1所述的拟杆菌活菌制剂，其特征在于BF839菌株恒温培养温度为37℃。
本发明属生物工程技术领域，特别是涉及一种利用微生物发酵技术培养的脆弱拟杆菌菌株及其应用。
近年来，欧美先进国家从事病源微生物的学者，不少人转向对有益的正常微生物的研究，采用生物工程技术来解决农业、畜牧业、人体保健、防治疾病（包括攻克癌症顽固堡垒）和延长寿命等方面存在的问题。经国际联机检索，有涉及双歧杆菌的抗肿瘤作用文献（F55092322，1978），但未见有关脆弱拟杆菌这类菌株分离、培养和应用的报道。
人体的微生态系和免疫、代谢、营养有关，随着年龄的增加该系统逐渐残衰和老化。故60岁以上的人易衰弱和易患癌症，小于60岁健壮的人则否。本发明的目的旨在从低龄人或动物体内微生态系统正常生理性细菌中分离出某些起重要作用的有益菌种，移植到高龄人或动物体内，使其恢复和建立生物量更高的新微生态系统，提高定值耐性因子水平，达到恢复或部分恢复低龄时期所具有的营养、代谢和免疫等状态。
本发明是通过下述步骤实施的：从发育良好的婴儿或低龄动物肠道菌群中筛选、分离出多功能脆弱拟杆菌菌株，利用微生物发酵技术制成活菌制剂，用于医治多种疾病、制备保健食品、饮料、饲料添加剂和化妆品等。
脆弱拟杆菌系人体正常的生理性厌氧细菌之一。该菌株已于1990年5月3日送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCCN0.0157。经中国科学院微生物研究所和中国预防医学科学院流行病学微生物研究所鉴定，均暂定为脆弱拟杆菌（Bacteroides，Fragilis）中的一个菌株，命名为BF839。因受国内设备和条件所限，尚不能对BF839菌株的超微结构及其某些特性做出圆满的结论。中国微生物菌种保藏管理委员会医学细菌中心建议“经检定后，考虑编入国家标准菌科”。
经过近10年的研究表明，该菌有以下功能：（1）提高人体免疫力，增加免疫T细胞活性;（2）有助于人体吸收消化食物;（3）降解肠内某些毒性物质;（4）排除外来细菌在肠道定居，调整肠内菌群分布;（5）在肠腔内合成多种维生素和蛋白质;（6）抑制癌细胞生长等。
通过数百例临床验证，BF839制剂能增加儿童生长发育，对防治急慢性肠炎、菌群失调、上呼吸道感染和神经官能症等均有很好的疗效，特别对小儿腹泻、营养不良疗效尤为显著。用作饲料添加剂可增加畜、动物体重、产蛋量及增强抗病力，还可用于制备化妆品，保健食品和饮料等。
BF839是从发育良好的婴儿肠道菌群中分得，置自配的厌氧发酵培养基中发酵制成活菌制剂。厌氧发酵培养基成份如下：蛋白胨0.5-2.5%，葡萄糖0.2-0.5%，半胱氨酸0.001-0.5%，NaCl10.2-0.5%，Na2HPO40.1-0.3%，硫乙醇酸钠0.02-0.1%，牛肝或猪肝浸液30-60%，牛肉浸液30-60%，酵母膏0.1-0.8%（重量百分比）。所说的BF839菌株培养温度是接近于哺乳动物体温的范围，最佳温度为37℃，在恒温32-40℃经12-72小时发酵培养，3500转/分离心去上清液、测菌应用。
本发明实施例如下：实施例一：将BF839菌株接种于10立升厌氧发酵培养基中，37℃培养24小时，测得每毫升活菌数为2084×106＝108.2（按log10n/ml计算）3000-4000转/分离心去上清液、洗涤、稀释备用。
实施例二：将BF839菌株接种于10立升厌氧发酵培养基中，37℃培养24小时，测得每毫升活菌数为588×108＝109.8（按log10n/ml计算）3000-4000转/分离心去上清液、洗涤、稀释备用。
实施例三：将BF839菌株接种于10立升厌氧发酵培养基中，37℃培养30小时，测得每毫升活菌数为1132×107＝109.1（按log10n/ml计算）。3000-4000转/分离心去上清液、洗涤、稀释备用。
实施例四：给幼儿园3-6岁全托儿童隔日早餐后10分钟服一次BF839活菌制剂10ml（活菌数40亿/ml），共观察11.5个月，结果表明服用BF839活菌制剂显著增加了儿童的身高和体重（表1，表2），（表1，表2见文后）实施例五：BF839活菌制剂用于提高儿童免疫力，给幼儿园3-6岁全托儿童日早餐后10分钟服一次BF839活菌制剂10ml（活菌数40亿/ml），11个月后采用酯酶染色法测定，结果表明服用BF839活菌制剂显著增加了儿童的免疫功能（表3）。（表3见文后）实施例六：BF839活菌制剂用于治疗肠炎、肠功能紊乱、消化不良症。给按常规标准确诊的急性肠炎、久治不愈的慢性肠炎（部分经肠镜检查确诊）、肠功能紊乱、一般肝性和老年性消化不良、婴儿腹泻、阿米巴痢疾、抑郁型精神病、细菌性痢疾、便秘等236名患者每天早饭后各服一次BF839活菌制剂，每次20ml（活菌数40亿/ml），有效率达98.3%（表5）。（表4见文后）实施例七：BF839活菌制剂用于防治上呼吸道感染。给幼儿园3-6岁全托儿童隔日早餐后10分钟服一次BF839活菌制剂10ml（活菌数20亿/ml），共观察11.5个月，结果表明有预防幼儿上呼吸道疾病的作用（表5）。（表5见文后）实施例八：将养鸡场同种同日龄的产蛋鸡120只，在相同生活条件下，用同种饲料喂养，随机抽样，分成试验组和对照组各60只。试验组每日按每只鸡服用菌数20亿的量将BF839活菌添加剂拌入饲料中一次喂食吃尽。试验期31天和停喂添加剂后继续观察21天。在总计52天中，试验组60只产蛋量增加17.53Kg（表6）
表1 儿童服用BF839后体重变化结果持续服用时间（月） n1（试验组） n2（对照组） T值 P值2 64 54 2.5 ＜0.055 53 46 2.97 ＜0.017.5 59 56 3.58 ＜0.01表2 儿童服用BF839后身长变化结果持续服用时间（月） n1（试验组） n2（对照组） T值 P值6 53 46 1.78 ＞0.0511.5 44 46 2.90 ＜0.01表3 T细胞测定结果n1（试验组） n2（对照组） T值 P值分组试验 45 38 4.18 ＜0.01配对试验 30 30 3.25 ＜0.01
表4 服用BF839对肠道疾病的疗效例数 各人服用瓶数 康复 好转 无效慢性肠炎 81 1-10 74 6 1急性肠炎 17 1-3 17肠功能紊乱 22 1-6 16 4 2一般性消化不良 32 1-4 30 2肝性消化不良 8 4-10 5 3老年性消化不良 6 3-10 6婴儿腹泻 58 1-3 58阿米巴痢疾 1 4 1抑郁型精神病 3 4 3细菌性痢疾 4 4 4便秘 4 4 4总数 236 214 18 4百分率 100% 90.7% 7.6% 1.7%表5 BF839对儿童上呼吸道感染的预防作用持续服用时间（月） n1（试验组） n2（对照组） T值 P值11.5 63 55 3.12 ＜0.01表6 BF839增加鸡的产蛋量产蛋总数（只） 平均产蛋数（只/天） 产蛋总量（Kg） 平均产蛋量（Kg/天）试验组2379 45.75 143.09 2.7对照组2124 40.85 125.56 2.42
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