[003]肥胖是相对于无脂体重的身体脂肪过度，它是现代社会中 非常流行的慢性疾病。它不仅与社交特征而且与寿命缩短和无数医学 问题有关，这些问题包括有害的心理发育、冠状动脉疾病、高血压、 中风、糖尿病、高脂血症和某些癌症(参见例如Nishina，et al.，Metab.43： 554-558，1994；Grundy and Barnett，Dis.Mon.36：641-731，1990； Rissanen，et al.，British Medical Journal，301：835-837，1990)。
[004]肥胖仍是个问题，且治疗方法有限。因此，需要开发有效 缓解肥胖的药物和治疗方案。
[005]肥胖的标志性特性在于主要因三酰甘油蓄积所致脂肪组织 (WAT)质量增加。该WAT质量增加是与肥胖有关的并发症的主要原 因。二酰甘油O-酰基转移酶(DGATs，EC 2.3.1.2)是催化三酰甘油生物 合成的末端阶段的膜结合酶。已表征了具有DGAT活性的两种酶： DGAT-1(1型二酰甘油O-酰基转移酶)(参见例如美国专利号6,100,077； Cases，et al.，Proc.Nat.Acad.Sci.95：13018-13023，1998)和DGAT-2(2 型二酰甘油O-酰基转移酶)(Cases，et al.，J.Biol.Chem.276： 38870-38876，2001)。DGAT-1和DGAT-2不具有明显的蛋白序列同一 性。重要的是，当用高脂肪饲料激发时，与野生型同窝仔相比，DGAT-1 裸小鼠不会变肥胖(Smith，et al.，Nature Genetics 25：87-90，2000)。可能 因为持续的DGAT-2活性，DGAT-1裸小鼠餐后血浆葡萄糖水平出现 下降，能量消耗增加，但血清甘油三酯水平正常(Smith，et al.，2000)。 因为DGAT-1在肠和脂肪组织中表达(Cases，et al.，1998)，所以有至少 两种可解释DGAT-1裸小鼠抵抗食物引起肥胖的机理。第一种机理是， DGAT-1活性在肠中失活可阻断肠细胞中的三酰甘油再形成和通过乳 糜微粒进入循环。第二种机理是，DGAT-1活性在脂肪细胞中失效可 减少WAT中三酰甘油沉积。DGAT-1裸小鼠的表型和我们对DGAT-1 抑制剂在食物引起的肥胖(DIO)小鼠的研究结果一起证明DGAT-1抑 制剂具有治疗肥胖症和与肥胖有关的并发症的实用性。
发明详述
[006]本发明涉及联苯氨基酸衍生物及其药用盐和酯，它们具有 抑制DGAT-1(1型二酰甘油O-酰基转移酶)和治疗肥胖症和与肥胖有 关的疾病的实用性。
[007]本发明的一个实施方案是式(I)化合物或其药学上可接受的 盐和酯

其中
Y为C＝O或S(＝O)2；
R1为氢或(C1-C6)烷基；
R2为(C1-C6)烷基、羟基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-(C1-C6)烷基、 氨基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氨基-(C1-C6)烷基或二[(C1-C6)烷基]氨基 -(C1-C6)烷基；
R3为氢；
或
R1为氢或(C1-C6)烷基；
R2为R6(CH2)m，
其中
m为0-3，
R6为任选被一个或多个以下基团取代的苯基：卤素、羟基、(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基或硝基，
或
R6为2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基，它们各自任选被以下基团 取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基或硝基；
R3为氢；
或
R1为氢或(C1-C6)烷基；
R2和R3相同，且各自选自(C1-C6)烷基；
或
R2和R3与它们连接的碳一起形成3元-6元碳环；或
R1和R2与R1和R2连接的原子一起形成5元-7元吡咯烷基-、哌 啶基-或高哌啶基环，或形成选自以下的环片段

R3为氢；
R4和R5独立选自氢、卤素、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、羟基、 三氟甲基和氰基；
Q为R7-C(＝O)-，
其中
R7为任选被一个或多个以下基团取代的(C1-C6)烷基：羟基、 (C1-C6)烷氧基、二[(C1-C6)烷基)]氨基或氟，
或
R7为R8(CH2)n，
其中
n为0-3，
R8为任选被一个或多个以下基团取代的苯基：卤素、羟基、(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基或硝基，或
R8为2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基，它们各自任选被以下基团 取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基或硝基； 或
R7为R10C(R9)2，
其中
R9为甲基或乙基，
或
C(R9)2为1，1-环丙基、1，1-环丁基、1，1-环戊基或1，1-环己基环，
R10为任选被一个或多个以下基团取代的苯基：卤素、羟基、(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基或硝基，
或
R10为2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基，它们各自任选被以下基 团取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基或硝基；
或
R7为选自以下的片段基团

其中
R11为选自以下的一个或多个取代基：氢、卤素、羟基、(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基和硝基；或
Q为R13-N(R12)-C(＝O)-，
其中
R12为氢或(C1-C6)烷基，
R13为任选被一个或多个以下基团取代的(C1-C6)烷基：羟基、 (C1-C6)烷氧基、二[(C1-C6)烷基)]氨基或氟；或
R13为R17(CH2)p，
其中
p为0-3，
R17为任选被一个或多个以下基团取代的苯基：卤素、羟基、(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，
或
R17为2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基，它们各自任选被以下基 团取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基或硝基；
或
R12和R13与它们连接的氮原子形成环片段，所述环片段选自

其中
R14为(C1-C6)烷基；
或
R14为R16(CH2)q，
其中
q为0或1，
R16为任选被一个或多个以下基团取代的苯基：卤素、羟基、(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，
或
R16为2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基，它们各自任选被以下基 团取代：卤素、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基或硝基；
R15为选自以下的一个或多个取代基：卤素、羟基、(C1-C6)烷基、 (C1-C6)烷氧基、三氟甲基、氰基和硝基；
条件是式(I)不是N-{[4′-(2-甲氧基-乙酰基氨基)-1，1′-联苯-4-基]-羰 基}-L-苯丙氨酸。
[008]本发明实例可在下述实施例和表中找到。实施例中所述化 合物为本发明的代表，应理解本发明范围不限于这些实施例的范围。 本领域技术人员会认识到，可用公开的结构、物质、组合物和方法的 变化形式实施本发明，且此类变化形式应视为在本发明范围内。
[009]以上鉴定的术语在全文中具有以下含义：
[010]术语“卤素”表示F、Br、Cl和I。
[011]术语“(C1-C6)烷基”表示具有约1-约6个碳原子的直链或支 链饱和烃基。烃基还可包括作为烷基的一部分的环烷基。此类基团包 括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己 基、环丙基、环己基、环丙基-甲基和环戊基-甲基。
[012]术语“(C1-C6)烷氧基”表示具有约1-约6个碳原子的直链或 支链饱和烃基，所述基团与氧原子连接。氧原子是烷氧基取代基通过 其与分子的其余部分连接的原子。烃基还可包括作为烷基的一部分的 环烷基。此类基团包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧 基、正丁氧基、正己氧基、3，3-二甲基丙氧基、环丙氧基、环丙基甲 氧基、环戊基氧基等。
[013]术语“3元-6元碳环”表示含有约3-约6个碳原子的饱和或 部分不饱和环。此类基团包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环 己基、环戊烯基、环己烯基等。
[014]术语“羟基-(C1-C6)烷基”表示(C1-C6)烷基，所述烷基在任何 可用的碳原子上进一步被羟基取代。此类基团包括但不限于羟基甲 基、2-羟基乙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、4-羟基丁基、2-羟基-1- 甲基乙基、5-羟基戊基、3-羟基丁基、3-羟基-2-乙基丙基、6-羟基己 基等。
[015]术语“任选取代”表示如此修饰的部分可具有0-至少最大数 目的指定取代基。各取代基可取代如此修饰的部分上的任何氢原子， 只要该取代是化学上可行和稳定的。当任何部分上存在两个或多个取 代基时，每个取代基与任何其它取代基相互独立选择，因此它们可相 同或不同。
[016]当任何部分描述为被取代时，该部分可具有一个或多个指 定取代基，它们可位于该部分的任何可用位置上。当任何部分上存在 两个或多个取代基时，每次出现时，各术语的定义应与任何其它术语 相互独立。
[017]式(I)化合物的代表性盐包括常规无毒盐和季铵盐，通过本 领域熟知的方法，它们由例如无机或有机酸或碱形成。例如，此类酸 加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、 苯甲酸盐、苯磺酸盐、亚硫酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟 磺酸盐、肉桂酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、 乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、 己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、衣康酸盐、 乳酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝 酸盐、草酸盐、扑姆酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦 味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、磺酸盐、酒石酸盐、硫氰酸 盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。
[018]碱式盐包括碱金属盐例如钾和钠盐；碱土金属盐例如钙和 镁盐；和有机碱的铵盐例如二环己基胺盐和N-甲基-D-葡糖胺盐。另 外，可用试剂例如低级烷基卤例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、 溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯例如硫酸二甲酯、二乙酯和二丁酯和 硫酸二戊酯；长链卤化物例如癸基、十二烷基、十四烷基和十八烷基 (strearyl)的氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤例如苄基和苯乙基的 溴化物等，将含碱性氮的基团季铵化。
[019]本发明酯是式(I)化合物的无毒、药学上可接受的酯衍生物。 该酯包括例如用以下酸制备的含羟基的式(I)化合物的酯衍生物：乙 酸、苯甲酸、扁桃酸、硬脂酸、乳酸、水杨酸、羟基萘甲酸、葡庚酸 和葡糖酸。该酯还包括例如用药学上可接受的醇制备的含羧酸的式(I) 化合物的酯衍生物。药学上可接受的醇包括但不限于甲醇、乙醇、异 丙醇、丁醇、2-甲基丙醇、2-甲氧基乙醇、2-(二甲基氨基)乙醇、2-(二 乙基氨基)乙醇、2-(1-哌啶基)乙醇、2-(1-吗啉基)乙醇、羟基乙酸、N，N- 二甲基2-羟乙酰胺、羟基丙酮等。可通过本领域技术人员熟知的多种 常规方法，使具有羧酸基团的式(I)化合物酯化。本领域技术人员可容 易地获知如何成功地实施这些和其它酯化方法。
[020]在进行以上任何形成酯的方法期间，可能需要保护式(I)化 合物上的敏感或活性基团，且可通过本领域中熟知的常规方法加入和 除去保护基团。
[021]根据不对称中心或阻碍旋转的性质，本发明化合物可存在 异构体形式。可存在任何异构体，其中不对称中心为(R)-、(S)-或(R，S) 构型。
[022]还可认识到，当两个或多个不对称中心存在于本发明化合 物中时，通常可能出现举例说明结构的几个非对映体和对映体，纯非 对映体和纯对映体代表优选的实施方案。纯立体异构体、纯非对映体、 纯对映体及其混合物应在本发明范围内。
[023]本发明化合物的所有异构体，无论分离的、纯的、部分纯 的或外消旋混合物，均包括在本发明范围内。可通过本领域中已知的 标准技术，完成对所述异构体的纯化和对所述异构体的混合物的分 离。
[024]关于双键或环的取决于取代基性质的几何异构体可存在顺 式(＝Z-)或反式(＝E-)形式，两种异构形式均包括在本发明范围内。
[025]用于制备本发明化合物的具体方法取决于需要的具体化合 物。此类因素例如具体部分的选择和各部分上的具体取代基在所采用 的制备本发明特定化合物的路线中均起作用。本领域普通技术人员可 容易地认识到这些因素。
[026]对于合成任何具体化合物，本领域技术人员会认识到，合 成含某些取代基的化合物时可能需要使用保护基团。可在例如 Protective Groups in Organic Synthesis，第二版，T.W.Greene，John Wiley and Sons，New York，1991中找到有关合适的保护基团和加入及 除去此类基团的适当方法阐述。
[027]在以下反应流程中，本领域技术人员会认识到，实际使用 的试剂和溶剂可选自本领域中熟知作为有效等同物的几种试剂和溶 剂。因此，当具体试剂或溶剂出现在反应流程中时，表示它们是实施 具体反应流程所需要的条件的说明性实例。在文中出现的未说明的缩 写列于本发明公开的下文“缩写和首字母简略词”标题下。
[028]本发明的另一个目的是提供制备本发明化合物的方法。可 通过以下反应流程和实施例中所示方法和通过其中明显的修改，由容 易得到的物质制备所述化合物。
制备本发明化合物的通用方法
[029]可通过以下反应流程1-3中所示通用方法，制备具有式(I) 的本发明化合物。
[030]在反应流程1中，将联苯羧酸或磺酸硝化，用例如草酰氯 制备相应的酰氯(当Y为C＝O)或磺酰氯(当Y为S(＝O)2)。使该中间体 与适当官能化和保护的氨基酸酯偶合，所述氨基酸酯有市售或可通过 熟知的方法，由它们的氨基酸前体制备。氨基酸酯可以是流程1中所 示甲酯，且本领域技术人员熟知也可使用其它酯例如乙酯、叔丁酯和 苄酯。通常在非亲核性碱例如二异丙基乙胺存在下，用氨基酸酯进行 偶合反应。然后通过用铁在乙酸中，将得到的甲酰胺(当Y为C＝O时) 或磺酰胺(当Y为S(＝O)2时)还原为式(II)对氨基-联苯衍生物。酰胺形 成和将芳基硝基化合物还原的无数其它方法在本领域中也是熟知的。
[031]反应流程1

[032]反应流程2中所示为制备式(II)化合物的备选方法。在水性 或非水性碱存在下，使对溴苯甲酰氯(当Y为C＝O时)或对溴苯磺酰氯 (当Y为S(＝O)2时)与氨基酸酯(用于反应流程1)反应。在本领域中熟 知的宽范围条件的钯催化(称为Suzuki反应)下，使得到的甲酰胺(当Y 为C＝O时)或磺酰胺(当Y为S(＝O)2时)与对硝基苯基硼酸偶合。按前 示反应流程，将得到的联苯衍生物的硝基还原，得到式(II)的酯。
[033]反应流程2

[034]然后通过反应流程3中所述方法之一，将式(II)化合物转化 为式(I)化合物。例如，使式(II)化合物与甲酰氯或甲酰氟反应，或与甲 酸和偶合剂例如N，N′-二环己基碳二亚胺反应，形成相应的甲酰胺，然 后在标准酯水解条件下，将酯基-COOR(例如反应流程中所示 -COOCH3)水解，得到式(Ia)化合物(式(I)，其中Q为R7-C(＝O)-)。
[035]或者，使式(II)化合物与异氰酸酯衍生物R13-N＝C＝O反应， 形成相应的脲衍生物，然后在标准酯水解条件下，可将酯基-COOR(例 如反应流程中所示-COOCH3)水解，得到式(Ib)化合物(式(I)，其中Q 为R13-NH-(C＝O)-)。
[036]反应流程3

[037]还可使式(II)化合物与光气或代用品例如三光气反应，形成 异氰酸酯中间体，然后使该中间体与仲胺(R12R13NH)反应，形成相应 的脲衍生物。然后在标准酯水解条件下，可将酯基-COOR水解，得到 式(Ic)化合物(式(I)，其中Q为R12-N(R13)-(C＝O)-)。
[038]可在下述实施例和表中找到本发明实例。实施例中所述化 合物为本发明的代表，应理解本发明范围不限于这些实施例的范围。 本领域技术人员会认识到，可用公开的结构、物质、组合物和方法的 变化形式实施本发明，且此类变化形式应视为在本发明范围内。
本发明化合物的制备
分析方法
质谱
[039]用配备安装J&W DB-5柱(0.25μM涂层；30m×0.25mm) 的Hewlett Packard 5890气相色谱仪的Hewlett Packard 5989A质谱仪， 得到化学电离质谱(CI-MS)。将离子源保持在250℃下，按2秒/扫描， 质谱扫描范围50-800amu。
液相色谱-电喷雾质谱
[040]通过使用以下两种方法之一，得到液相色谱-电喷雾质谱 (LC-MS)数据。在以下提供的实施例和表中，给出含HPLC保留时间 (ret.时间)的LC-MS数据。除另有说明外，使用方法1。
[041]方法1：配备四元泵、设定在254nm的可变波长检测器、 YMC pro C-18柱(2×23mm，120A)的Hewlett-Packard 1100HPLC和 Finnigan LCQ离子阱质谱仪，电喷雾离子化。根据源中离子数目，用 可调离子时间，质谱扫描范围为120-1200amu。洗脱液为A：2％乙腈/ 水/0.02％TFA，B：2％水/乙腈/0.018％TFA。10％B-95％B梯度洗脱 3.5分钟，用1.0mL/min流速，在初始0.5分钟和最后0.5分钟保持在 95％B。总运行时间为6.5分钟。
[042]方法2：配备两个Gilson 306泵、Gilson 215自动进样器、 Gilson二极管阵列检测器、YMC Pro C-18柱(2×23mm，120A)的Gilson HPLC系统和Micromass LCZ单四极质谱仪，z-喷雾电喷雾离子化。 在120-800amu范围内扫描质谱1.5秒钟。还以模拟通道形式采集 ELSD(蒸发光散射检测器)数据。洗脱液为A：2％乙腈/水/0.02％TFA， B：2％水/乙腈/0.018％TFA。用1.5mL/min流速，10％B-90％B梯度 洗脱3.5分钟，在初始0.5分钟和最后0.5分钟保持在90％B。总运行 时间为4.8分钟。用附加的转换阀实现柱转换和再生。
NMR图谱
[043]在300MHz或400MHz Varian Mercury-加分光光度计上， 进行常规一维NMR图谱。将样品溶于得自Cambridge Isotope Labs的 氘代溶剂，转移到5mm ID Wilmad NMR试管中。在293°K下采集光 谱。化学位移按ppm标度记录，并参照适当溶剂信号，例如对于1H 谱：DMSO-d6为2.49ppm、CD3CN为1.93ppm、CD3OD为3.30ppm、 CD2Cl2为5.32ppm和CDCl3为7.26ppm；和对于13C谱：DMSO-d6为 39.5ppm、CD3CN为1.3ppm、CD3OD为49.0ppm、CD2Cl2为53.8ppm 和CDCl3为77.0ppm。
缩写和首字母缩写
[044]当在本发明公开全文中使用以下缩写时，它们具有以下含 义：
CDCl3           氘代氯仿
              硅藻土过滤剂，Corp.
DMSO            二甲亚砜
DMSO-d6         氘代二甲亚砜
EtOAc           乙酸乙酯
h               小时
HPLC            高效液相色谱
LC-MS           液相色谱-质谱
MeOH            甲醇
min             分钟
MS              质谱
m/z             质量/电荷比
NMR             核磁共振
PdCl2(dppf)     1，1′-二(二苯膦基)二茂铁]二氯合钯(II)
p.o.            口服给药
rt              室温
TFA             三氟乙酸
本发明制备实施例
[045]N-[(4′-氨基联苯-4-基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲酯的制备

[046]反应流程

[047]步骤1：4′-硝基-1，1′-联苯-4-甲酸的制备

[048]向冰冷却的硝酸中加入4-联苯甲酸(9.4g，20.0mmol)，将得 到的混合物在冰上搅拌1h。将混合物倾入冰水中，过滤。将收集的 固体悬浮于乙醇，回流2h。将混合物热过滤，用乙醇洗涤，在高真 空下干燥，得到4′-硝基-1，1′-联苯-4-甲酸(2.3g，47％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.89(d，2H)，8.01(d，2H)，8.05(d，2H)，8.31(d，2H)， 13.12(s，1H).
[049]步骤2：N-甲基-N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸 甲酯的制备

[050]将4′-硝基-1，1′-联苯-4-甲酸(0.50g，2.0mmol)溶于二氯甲烷 (25mL)，依次加入草酰氯(0.27mL，3.1mmol)、1滴N，N-二甲基甲酰 胺。将得到的混合物在50℃下加热1h，减压浓缩，再在真空下干燥 30min。将残渣溶于二氯甲烷(20mL)，滴加到冰冷却的N-甲基-L-缬 氨酸甲酯盐酸盐(0.48g，2.6mmol)、二氯甲烷(50mL)和三乙胺(1.44 mL，10.2mmol)的混合物中。将得到的溶液在冰上搅拌1h，然后在室 温下搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷稀释，用1N盐酸水溶液和盐水 洗涤。将有机层分离，减压浓缩。残渣经闪层析纯化，用 己烷/乙酸乙酯(3∶1)洗脱，得到N-甲基-N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)羰 基]-L-缬氨酸甲酯(0.70g，92％)。
1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ0.85(dd，3H)，1.06(dd，3H)，2.31(m，1H)，3.02(d，3H)，3.77(d，3H)，3.94(d，0.5 H)，4.98(d，0.5H)，7.52(m，2H)，7.64(m，2H)，7.72(t，2H)，8.27(d，2H)；LC-MS m/z 371.2 (MH+)，
保留时间3.27分钟。
[051]步骤3：N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸 甲酯的制备

[052]向N-甲基-N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯 (0.70g，1.9mmol)的85％乙醇(20mL)溶液中加入铁粉(1.05g，18.9 mmol)和2N盐酸水溶液(0.41mL)。将得到的混合物加热回流2h。然 后将混合物通过垫过滤，减压浓缩。将残渣溶于二氯甲烷，用 水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到N-[(4′-氨基-1，1′-联苯 -4-基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲酯(0.49g，76％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.85(dd，3H)，1.06(dd，3H)，2.35(m，1H)，3.02(d，3H)， 3.75(d，3H)，4.05(d，0.5H)，4.78(d，0.5H)，6.78(d，2H)，7.42(m，4H)，7.63(d，2H)；LC- MS m/z341.2(MH+)，
保留时间2.37分钟。
[053]N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯的制备

[054]步骤1：N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯的 制备

[055]将4′-硝基-1，1′-联苯-4-甲酸(0.60g，2.4mmol)溶于二氯甲烷 (25mL)，依次加入草酰氯(0.32mL，3.7mmol)、1滴N，N-二甲基甲酰 胺。将得到的混合物在50℃下加热1h，减压浓缩，再在真空下干燥 30min。将残渣溶于二氯甲烷(20mL)，滴加到L-缬氨酸甲酯盐酸盐 (0.54mg，3.2mmol)、二氯甲烷(25mL)和三乙胺(1.74mL，12.3mmol) 的冰冷却混合物中。将得到的溶液在冰上搅拌1h，然后在室温下搅 拌过夜。将混合物用二氯甲烷稀释，用1N盐酸水溶液和盐水洗涤。 将有机层分离，减压浓缩。残渣经闪层析纯化，用己烷/乙 酸乙酯(2∶1)洗脱，得到N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯 (0.70g，80％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.06(dd，6 H)，2.38(m，1H)，3.77(s，3H)，4.52(d，1H)，7.82(d，2H)，7.91(d，2H)，7.97(d，2H)，8.33(d，2H)； LC-MS m/z 357.1(MH+)，
保留时间3.07分钟。
[056]步骤2：N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯的 制备

[057]向N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯(0.70g， 1.9mmol)的85％乙醇(20mL)溶液中加入铁粉(1.09g，19.6mmol)和2N 盐酸水溶液(1.0mL)。将得到的混合物加热回流2h。然后将混合物通 过垫过滤，减压浓缩。将残渣溶于二氯甲烷，用水和盐水洗涤， 干燥(Na2SO4)，减压浓缩，得到N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬 氨酸甲酯(0.58g，90％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.03(dd，6H)，2.26(m，1H)，3.74(s，3H)，4.48(d，1H)，6.77 (d，2H)，7.43(d，2H)，7.62(d，2H)，7.83(d，2H)；LC-MS m/z 327.1(MH+)，
保留时间2.27分钟。
[058]2-甲基-N-[(4′-氨基联苯-4-基)羰基]丙氨酸甲酯的制备

[059]步骤1：2-甲基-N-[(4′-硝基联苯-4-基)羰基]丙氨酸甲酯的制 备

[060]将4′-硝基-1，1′-联苯-4-甲酸(4.66g，19.2mmol)溶于二氯甲 烷(110mL)，依次加入草酰氯(2.51mL，28.7mmol)、3滴N，N-二甲基 甲酰胺。将得到的混合物在室温下搅拌45min，减压浓缩，再在真空 下干燥30min。将残渣溶于二氯甲烷(75mL)，滴加到冰冷却的2-甲基 丙氨酸甲酯盐酸盐(3.83g，24.9mmol)、二氯甲烷(75mL)和三乙胺(6.68 mL，47.9mmol)的混合物中。将得到的溶液在室温下搅拌1h，然后在 55℃下搅拌2h。将混合物冷却至室温，用1N盐酸水溶液(5mL)和水 (2×20mL)洗涤。将有机层分离，干燥(MgSO4)，减压浓缩。残渣经闪 层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(4∶1)洗脱，得到2-甲基-N-[(4′- 硝基联苯-4-基)羰基]丙氨酸甲酯(6.21g，95％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.73(s，6H)，3.82(s，3H)，6.89(宽蜂s，1H)，7.69(d，2H)，7.77(d，2 H)，7.92(d，2H)，8.31(d，2H)；LC-MS m/z 342.9(MH+)，
保留时间2.98分钟。
[061]步骤2：N-[(4′-氨基联苯-4-基)羰基]-2-甲基丙氨酸甲酯的制 备

[062]向2-甲基-N-[(4′-硝基联苯-4-基)羰基]丙氨酸甲酯(1.59g， 4.6mmol)的85％乙醇(50mL)溶液中加入铁粉(2.59g，46.4mmol)和2M 盐酸水溶液(2.32mL，4.6mmol)。将得到的混合物加热回流2h。然后 使混合物通过垫过滤，减压浓缩，得到N-[(4′-氨基联苯-4-基) 羰基]-2-甲基丙氨酸甲酯，为黄色固体(2.48g，99％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.44(s，6H)，3.57(s，3H)，5.33(宽蜂s，2H)，6.61(d，2 H)，7.41(d，2H)，7.58(d，2H)，7.83(d，2H)，8.54(宽蜂s，1H)；LC-MS m/z 313.2(MH+)，
保留时间1.54分钟。
[063]N-[(4′-氨基联苯-4-基)羰基]-N，2-二甲基丙氨酸甲酯的制备

[064]反应流程

[065]步骤1：N，2-二甲基-N-[(4′-硝基联苯-4-基)羰基]丙氨酸甲酯 的制备

[066]将2-甲基-N-[(4′-硝基联苯-4-基)羰基]丙氨酸甲酯(1.32g， 3.9mmol)、氢化钠(117mg，4.6mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(15mL)的 混合物在室温下搅拌2h。加入碘甲烷(0.48mL，7.7mmol)，将反应混 合物在室温下搅拌过夜。加入水(30mL)，将混合物用乙酸乙酯(2×10 mL)萃取。将合并的萃取液蒸发至干，粗产物经闪层析纯化， 用4∶1的己烷/乙酸乙酯洗脱，得到N，2-二甲基-N-[(4′-硝基联苯-4-基) 羰基]丙氨酸甲酯，为灰白色固体(1.29g，94％)。
1H NMR (400MHz，DMSO-d6)δ1.47(s，6H)，2.93(s，3H)，3.58(s，3H)，7.52(d，2H)，7.84(d，2H)，7.98(d， 2H)，8.30(d，2H)；LC-MS m/z 356.9(MH+)，
保留时间2.98分钟。
[067]步骤2：N-[(4′-氨基联苯-4-基)羰基]-N，2-二甲基丙氨酸甲酯 的制备

[068]向N，2-二甲基-N-[(4′-硝基联苯-4-基)羰基]丙氨酸甲酯(1.92 g，5.4mmol)的85％乙醇(50mL)溶液中加入铁粉(3.01g，53.88mmol)和 2M盐酸水溶液(2.69mL，5.4mmol)。将得到的混合物加热回流2.5h。 使混合物通过垫过滤，减压浓缩，得到N-[(4′-氨基联苯-4-基) 羰基]-N，2-二甲基丙氨酸甲酯，为黄色固体(1.44g，82％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.42(s，6H)，2.94(s，3H)，3.57(s，3H)，5.30(宽峰s，2H)，6.61 (d，2H)，7.31-7.40(m，4H)，7.58(d，2H)；LC-MS m/z 327.2(MH+)，
保留时间1.84分钟。
[069]N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-脯氨酸甲酯的制备

[070]反应流程

[071]步骤1：N-[(4-溴苯基)磺酰基]-L-脯氨酸甲酯的制备

[072]将L-脯氨酸(2.00g，12.0mmol)悬浮于二氯甲烷(50mL)和 吡啶(4.88mL，60.0mmol)中。将得到的混合物冷却至0℃，在20分钟 内，滴加入溴苯磺酰氯(4.63g，18.0mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液。将 混合物从冰浴上移开，在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发将挥发性组 分除去，使残渣在二氯甲烷和水之间分配。将有机层分离，用1N盐 酸水溶液、水和盐水洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，减压浓缩。残渣 经硅胶闪层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱，得到N-[(4-溴苯基) 磺酰基]-L-脯氨酸甲酯(3.98g，95％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.75(m，1H)，1.95(m，2H)，2.06(m，1H)，3.30(m，1H)，3.48(m，1 H)，3.72(s，3H)，4.27(dd，1H)，7.77(s，4H)；LC-MS m/z 348.0(MH+)，
保留时间3.37分钟。
[073]步骤2：N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-脯氨酸甲酯 的制备

[074]在氩气下，将N-[(4-溴苯基)磺酰基]-L-脯氨酸甲酯(1.71g， 5.0mmol)和4-硝基苯基硼酸(0.99g，6.0mmol)在干燥烧瓶中混合。加 入甲苯(50mL)、乙醇(17mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(17mL)。向混合 物中鼓泡通入氩气30min。维持氩气流，同时加入[1，1′-二(二苯膦基)- 二茂铁-二氯合钯(II)络合物：二氯甲烷(1∶1)(12mg，0.01mmol)。将反 应混合物在80℃下加热16h。冷却至室温后，将反应物用二氯甲烷稀 释，通过过滤。将有机层分离，用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)， 减压浓缩。残渣经闪层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)洗脱， 得到N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-脯氨酸甲酯(0.65g，33％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.75(m，1H)，1.95(m，2H)，2.06(m，1H)，3.30(m，1H)，3.53(m，1H)， 3.72(s，3H)，4.27(dd，1H)，7.96(m，6H)，8.35(d，2H)；LC-MS m/z 390.1(MH+)，
保留时间3.44分钟。
[075]步骤3：N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-脯氨酸甲酯 的制备

[076]向N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-脯氨酸甲酯(0.65g， 1.7mmol)的85％乙醇(40mL)溶液中加入铁粉(0.93g，16.7mmol)和2N 盐酸水溶液(0.84mL)。将得到的混合物加热回流2h。使混合物通过 垫过滤，减压浓缩。将残渣溶于二氯甲烷，用水和盐水洗涤。 将有机层分离，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。残渣经闪层析 纯化，用己烷/乙酸乙酯(5∶1)洗脱，得到N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺 酰基]-L-脯氨酸甲酯(0.59g，98％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.75 (m，1H)，1.95(m，2H)，2.06(m，1H)，3.30(m，1H)，3.53(m，1H)，3.72(s，3H)，4.27(dd，1H)，6.78 (d，2H)，7.46(d，2H)，7.75(d，2H)，7.83(d，2H)；LC-MS m/z 361.1(MH+)，
保留时间0.51分钟。
[077]N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯的制备

[078]步骤1：N-[(4-溴苯基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯的制备

[079]将L-缬氨酸甲酯(1.31g，7.8mmol)悬浮于二氯甲烷(50mL) 和吡啶(3.2mL，39.0mmol)中。将得到的混合物冷却至0℃，在20分 钟内，滴加入溴苯磺酰氯(3.0g，12.0mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液。 撤除冰浴，将反应物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发将挥发性组分 除去，使残渣在二氯甲烷和水之间分配。将有机层分离，用1N盐酸 水溶液、水和盐水洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，减压浓缩。残渣经 硅胶闪层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱，得到N-[(4-溴苯基)磺 酰基]-L-缬氨酸甲酯(2.33g，85％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.88(d，3H)，0.97(d，3H)，2.06(m，1H)，3.49(s，3H)，3.74(dd，1 H)，5.12(d，1H)，7.62(d，2H)，7.68(d，2H)；LC-MS m/z 350.0(MH+)，
保留时间3.06分钟。
[080]步骤2：N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯 的制备

[081]在氩气下，使N-[(4-溴苯基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯(2.33g， 6.7mmol)和4-硝基苯基硼酸(1.22g，7.3mmol)在干燥烧瓶中混合。加 入甲苯(50mL)、乙醇(17mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(17mL)。向混合 物中鼓泡通入氩气30min。维持氩气流，同时加入[1，1′-二(二苯膦基) 二茂铁-二氯合钯(II)络合物：二氯甲烷(1∶1)(27mg，0.03mmol)。将反 应混合物在80℃下加热16h。冷却至室温后，将反应物用二氯甲烷稀 释，通过过滤。将有机层分离，用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)， 减压浓缩。残渣经闪层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)洗脱， 得到N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯(1.10g，42％)。
1H NMR (400MHz，CD3OD)δ0.93(d，3H)，0.95(d，3H)，2.03(m，1H)，3.66(s，3H)，3.72(dd，1H)，7.88(d， 2H)，7.94(m，4H)，8.35(d，2H)；LC-MS m/z 393.1(MH+)，
保留时间3.31分钟。
[082]步骤3：N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯 的制备

[083]向N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯(1.08g， 2.8mmol)的85％乙醇(50mL)溶液中加入铁粉(1.53g，27.5mmol)和2N 盐酸水溶液(1.4mL)。将得到的混合物加热回流2h。使混合物通过 垫过滤，减压浓缩。将残渣溶于二氯甲烷，用水和盐水洗涤。 将有机层分离，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。残渣经闪层析 纯化，用己烷/乙酸乙酯(5∶1)洗脱，得到N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺 酰基]-L-缬氨酸甲酯(0.92g，92％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.93(d，6H)， 1.99(m，1H)，3.34(s，3H)，3.65(d，1H)，6.78(d，2H)，7.45(d，2H)，7.68(d，2H)，7.78(d，2H)； LC-MS m/z 363.1(MH+)，
保留时间2.58分钟。
[084]N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲酯 的制备

[085]步骤1：N-[(4-溴苯基)磺酰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲酯的制 备

[086]将N-甲基L-缬氨酸甲酯(1.78g，9.8mmol)悬浮于二氯甲烷 (50mL)和三乙胺(6.82mL，48.9mmol)。将混合物冷却至0℃，在20 分钟内，滴加入4-溴苯磺酰氯(3.0g，11.7mmol)的二氯甲烷(20mL)溶 液。撤除冰浴，将反应物在室温下搅拌过夜。通过旋转蒸发将挥发性 组分除去，使残渣在二氯甲烷和水之间分配。将有机层分离，用1N 盐酸水溶液、水和盐水洗涤。将有机层干燥(Na2SO4)，减压浓缩。残 渣经硅胶闪层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脱，得到N-[(4-溴苯基) 磺酰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲酯(3.40g，95％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.93(d，3H)，0.98(d，3H)，2.11(m，1H)，2.87(s，3 H)，3.40(s，3H)，4.05(d，1H)，7.69(d，2H)，7.75(d，2H).
[087]步骤2：N-甲基-N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-缬氨 酸甲酯的制备

[088]在氩气下，将N-[(4-溴苯基)磺酰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲酯 (3.35g，9.2mmol)和4-硝基苯基硼酸(1.69g，10.1mmol)在干燥烧瓶中 混合。加入甲苯(50mL)、乙醇(17mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(17mL)。 向混合物中鼓泡通入氩气30min。维持氩气流，同时加入[1，1′-二(二苯 膦基)二茂铁-二氯合钯(II)络合物：二氯甲烷(1∶1)(37mg，0.05mmol)。 将反应混合物在80℃下加热16h。冷却至室温后，将反应物用二氯甲 烷稀释，通过过滤。将有机层分离，用水和盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)，减压浓缩。残渣经闪层析纯化，用己烷/乙酸乙 酯(3∶1)洗脱，得到N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯 (2.21g，59％)。
1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δ0.86(d，3H)，0.89(d，3H)，2.05(m，1H)，2.84(s，3H)，3.36(s，3H)，3.99(d，1H)，7.84(d， 2H)，8.01(d，2H)，8.32(d，2H).
[089]步骤3：N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-N-甲基-L-缬氨 酸甲酯的制备

[090]向N-[(4′-硝基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯(2.20g， 5.4mmol)的85％乙醇(50mL)溶液中加入铁粉(3.02g，54.1mmol)和2N 盐酸水溶液(2.7mL)。将得到的混合物加热回流1h。使混合物通过 垫过滤，减压浓缩。将残渣溶于二氯甲烷，用水和盐水洗涤。 将有机层分离，干燥(Na2SO4)，减压浓缩。残渣经闪层析 纯化，用己烷/乙酸乙酯(5∶1)洗脱，得到N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺 酰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲酯(1.40g，69％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.93 (d，3H)，0.98(d，3H)，2.11(m，1H)，2.87(s，3H)，3.40(s，3H)，4.05(d，1H)，6.78(d，2H)，7.45(d， 2H)，7.72(d，2H)，7.75(d，2H).
式(I)实施例
[091]N-{[4′-({[(2，4-二氯苯基)氨基]羰基}氨基)-1，1′-联苯-4-基]羰 基}-N-甲基-L-缬氨酸

[092]向N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸酯 (50.3mg，0.15mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入异氰酸2，4-二氯苯 酯(55.6mg，0.30mmol)。将溶液在室温下搅拌过夜。将混合物减压浓 缩，将残渣悬浮于乙醚中。将得到的固体过滤，收集，用乙醚洗涤， 在高真空下干燥，得到N-{[4′-({[(2，4-二氯苯基)氨基]-羰基}氨基)-1，1′- 联苯-4-基]羰基}-N-甲基-L-缬氨酸酯(46.0mg，59％)。
1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ0.87(dd，3H)，1.09(dd，3H)，2.37(m，1H)，3.04(d，3H)，3.80(d，3H)，4.05(d， 0.5H)，4.80(d，0.5H)，7.29(dd，1H)，7.46(s，1H)，7.48(d，1H)，7.61(m，4H)，7.72(d，2H)，8.18 (d，1H)；LC-MS m/z 528.1(MH+)，
保留时间3.80min。
[093]将脲中间体(39.0mg，0.07mmol)溶于MeOH(3mL)和1N 氢氧化钠水溶液(1mL)。将溶液在55℃下加热过夜。将挥发性组分通 过旋转蒸发除去，用1N盐酸水溶液将得到的含水混合物调至pH 1。 将固体过滤，收集，用水洗涤，在真空下干燥过夜，得到N-{[4′-({[(2，4- 二氯苯基)氨基]羰基}氨基)-1，1′-联苯-4-基]羰基}-N-甲基-L-缬氨酸 (33.0mg，87％)。
1H NMR(400MHz， CD3OD)δ0.89(dd，3H)，1.13(dd，3H)，2.34(m，1H)，3.04(d，3H)，4.05(d，0.5H)，4.80(d，0.5H)， 7.29(dd，1H)，7.55(m，7H)，7.72(d，2H)，8.18(d，1H)；LC-MS m/z 514.1(MH+)，
保留时间3.47min。
[094]N-({4′-[(3，4-二氯苯甲酰基)氨基]-1，1′-联苯-4-基}羰基)-N-甲 基-L-缬氨酸

[095]向N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸酯(50 mg，0.15mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入3，4-二氯苯甲酰氯(62mg， 0.30mmol)和三乙胺(46mg，0.45mmol)。将溶液在室温下搅拌过夜。 将溶液减压浓缩，使残渣悬浮于乙醚中。将得到的固体过滤收集，用 乙醚洗涤，在高真空下干燥，得到N-({4′-[(3，4-二氯苯甲酰基)氨基]-1，1′- 联苯-4-基}羰基)-N-甲基-L-缬氨酸酯(60mg，79％)。
1H NMR (400MHz，CD3OD)δ0.88(dd，3H)，1.09(dd，3H)，2.36(m，1H)，3.04(d，3H)，3.79(d，3H)，4.03 (d，0.5H)，4.80(d，0.5H)，7.49(d，2H)，7.71(m，3H)，7.75(d，2H)，7.83(d，2H)，7.88(dd，1H)， 8.14(d，1H)；LC MS m/z513.1(MH+)，
保留时间3.70min。
[096]将酰胺中间体(60mg，0.12mmol)溶于MeOH(3mL)和1N 氢氧化钠水溶液(1mL)。将溶液在55℃下加热过夜。将挥发性组分通 过旋转蒸发除去，用1N盐酸水溶液将得到的含水混合物调至pH 1。 将固体过滤，收集，用水洗涤，在真空下干燥过夜，得到N-({4′-[(3，4- 二氯苯甲酰基)氨基]-1，1′-联苯-4-基}羰基)-N-甲基-L-缬氨酸(30mg， 50％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.88(d， 3H)，1.12(dd，3H)，2.34(m，1H)，3.06(d，3H)，3.99(d，0.5H)，4.82(d，0.5H)，7.51(t，2H)，7.69 (m，3H)，7.75(d，2H)，7.83(d，2H)，7.88(dd，1H)，8.14(d，1H)；LC-MS m/z 499.1(MH+)，
保留时间3.42min。
[097]N-[(4′-{[4-乙氧基苯基)乙酰基]氨基}-1，1′-联苯-4-基)羰 基]-N-甲基-L-缬氨酸

[098]向N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯(70mg， 0.21mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入4-乙氧基苯乙酸(50mg，0.28 mmol)、二甲基氨基吡啶(13mg，0.11mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐(53mg，0.28mmol)。将溶液在室温下搅拌48h， 然后减压浓缩。使残渣悬浮于乙醚，过滤。将得到的固体用乙醚、1N 盐酸水溶液洗涤，在高真空下干燥，得到N-[(4′-{[(4-乙氧基苯基)乙酰 基]氨基}-1，1′-联苯-4-基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲酯(68mg，66％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.06(dd，6H)，1.38(t，3H)，2.26(m，1H)，3.63(s，3H)，3.76 (s，3H)，4.02(q，2H)，4.50(d，1H)，6.87(d，2H)，7.25(d，2H)，7.66(m，4H)，7.70(d，2H)，7.89(d， 2H)；LC-MS m/z 489.2(MH+)，
保留时间3.11min。
[099]将酰胺中间体(65mg，0.13mmol)溶于MeOH(3mL)和1N 氢氧化钠水溶液(1mL)。将溶液在55℃下加热过夜。将挥发性组分通 过旋转蒸发除去，用1N盐酸水溶液将得到的含水混合物调至pH 1。 将固体过滤，收集，用水洗涤，在真空下干燥过夜，得到N-[(4′-{[(4- 乙氧基苯基)乙酰基]氨基}-1，1′-联苯-4-基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸(57 mg，90％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.06(dd， 6H)，1.38(t，3H)，2.29(m，1H)，3.63(s，3H)，4.02(q，2H)，4.50(d，1H)，6.87(d，2H)，7.25(d，2 H)，7.66(m，6H)，7.91(d，2H)；LC-MS m/z 475.2(MH+)，
保留时间3.03min。
[100]N-{[4′-({[(2，4-二甲基苯基)氨基]羰基}氨基)-联苯-4-基]羰 基}-2-甲基丙氨酸

[101]向N-[(4′-氨基联苯-4-基)羰基]-2-甲基丙氨酸甲酯(30.0mg， 0.10mmol)的二氯乙烷(4mL)溶液中加入异氰酸2，4-二甲基苯酯(21.2 mg，0.14mmol)。将溶液在室温下搅拌过夜。将混合物减压蒸发至干， 粗残渣无须纯化即可用于下一步骤。将脲中间体溶于甲醇(0.8mL)和 四氢呋喃(0.8mL)。加入氢氧化钠水溶液(1N，0.12mL，0.12mmol)，将 溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物过滤，滤液经制备型反相HPLC (水/乙腈梯度，含0.1％TFA)纯化，得到N-{[4′-({[(2，4-二甲基苯基)氨 基]羰基}氨基)联苯-4-基]羰基}-2-甲基丙氨酸(15.3mg，34％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.48(s，6H)，2.21(s，3H)，2.23(s，3H)，6.94(d，1H)，6.99(s，1 H)，7.55(d，2H)，7.64-7.68(m，3H)，7.70(d，2H)，7.87-7.92(m，3H)，8.43(s，1H)，9.08(s，1H)， 12.12(s，1H)；LC-MS m/z 446.1(MH+)，
保留时间3.03min。
[102]N-[(4′-{[(3-氟-4-甲基苯基)氨基]羰基}联苯-4-基)羰基]-N，2- 二甲基丙氨酸

[103]向N-[(4′-氨基联苯-4-基)羰基]-N，2-二甲基丙氨酸甲酯(35.0 mg，0.11mmol)的二氯乙烷(4mL)溶液中加入3-氟-4-甲基苯甲酰氯 (22.2mg，0.13mmol)和聚合物承载的-二异丙基乙胺(56.0mg，0.21 mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌过夜。将固体过滤除去，将滤 液减压蒸发至干。粗N-({4′-[(3-氟-4-甲基-苯甲酰基)氨基]联苯-4-基} 羰基)-N，2-二甲基丙氨酸甲酯无须进一步纯化即可用于下一步骤。
[104]将酰胺中间体(46.3mg，0.10mmol)溶于甲醇(0.8mL)和四 氢呋喃(0.8mL)。加入氢氧化钠水溶液(1N，0.2mL，0.20mmol)，将溶 液在室温下搅拌过夜。再加入氢氧化钾水溶液(3N，0.20mL，0.60 mmol)，将反应混合物在65℃下加热2天。将反应混合物过滤，滤液 经制备型反相HPLC(水/乙腈梯度，含0.1％TFA)纯化，得到N-({4′-[(3- 氟-4-甲基苯甲酰基)-氨基]联苯-4-基}羰基)-N，2-二甲基丙氨酸(2.3mg， 5％)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6) δ1.23(s，6H)，2.32(s，3H)，2.93(s，3H)，7.42-7.48(m，3H)，7.70-7.79(m，6H)，7.87(d，2H)， 10.34(s，1H)，12.03(s，1H)；LC-MS m/z 449.0(MH+)，
保留时间3.00min。
[105]N-[(4′-{[(5-氯-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基)羰基]氨基}-1，1′-联苯 -4-基)羰基]-L-缬氨酸

[106]在氩气氛下，将N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸 甲酯(0.10g，0.11mmol)悬浮于甲苯(3mL)和三乙胺(1.00mL，7.17 mmol)中。将混合物冷却至0℃，加入到2N氢氧化钠水溶液中。缓慢 引入光气(20％的甲苯溶液，1.60mL，3.06mmol)。让混合物升温至室 温，然后再搅拌2h。将得到的悬浮液过滤，将滤液减压浓缩。得到 深橙色油状物，将其溶于1，2-二氯乙烷(6mL)。加入5-氯-2，3-二氢-(1H)- 吲哚(005g，046mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩。 将残渣悬浮于乙酸乙酯，将得到的固体过滤，收集。粗固体经硅胶闪 层析纯化，用己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脱，得到N-[(4′-{[(5-氯-2，3-二氢 -1H-吲哚-1-基)羰基]氨基}-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯(40mg， 25％)。
1H NMR(400MHz，CD2Cl2)δ1.04(t，6H)，2.29(m，1H)，3.28(t，2H)，3.79(s，3H)，4.14(t， 2H)，4.74(m，1H)，6.60(m，1H)，7.17(m，2H)，7.58(d，2H)，7.64(d，2H)，7.70(d，2H)，7.87(d，2 H)，7.93(d，1H)；LC-MS m/z 506.2(MH+)，
保留时间3.63min。
[107]将脲中间体(36mg，0.07mmol)溶于甲醇(3mL)和1N氢氧 化钠水溶液(1mL)。将溶液在75℃下加热2h，然后减压浓缩，除去 挥发性组分。将含水混合物用1N盐酸水溶液调至pH 2。将得到的固 体过滤收集，用水洗涤，真空干燥过夜，得到N-[(4′-{[(5-氯-2，3-二氢 -1H-吲哚-1-基)羰基]氨基}-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸(17mg， 50％)。
1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ1.04(d，6H)，2.31(m，1H)，3.26(t，2H)，4.19(t，2H)，4.53(m，1H)，7.11(d，1H)， 7.19(s，1H)，7.58(d，2H)，7.64(d，2H)，7.73(d，2H)，7.85(d，2H)，7.93(d，1H)；LC-MS m/z 492.1 (MH+)，
保留时间3.36min。
[108]N-[(4′-{[(7-甲氧基-1-苯并呋喃-2-基)羰基]氨基}-1，1′-联苯 -4-基)羰基]-L-缬氨酸

[109]向N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯(70mg， 0.21mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入苯并呋喃-2-甲酸(45mg，0.28 mmol)、4-二甲基氨基吡啶(13mg，0.11mmol)和1-(3-二甲基氨基丙 基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(53mg，0.28mmol)。将溶液在55℃下加热 18h，减压浓缩至干。将残渣悬浮于乙醚，将固体过滤，收集。将固 体用乙醚、1N盐酸水溶液洗涤，真空干燥，得到N-[(4′-{[(7-甲氧基-1- 苯并呋喃-2-基)羰基]氨基}-1，1′-联苯-4-基)羰基]-L-缬氨酸甲酯(66mg， 59％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.09(d，6H)，2.31(m，1H)， 3.77(s，3H)，4.06(s，3H)，4.52(m，1H)，7.07(d，1H)，7.28(m，2H)，7.62(s，1H)，7.72(d，2H)， 7.76(d，2H)，7.89(d，2H)，7.93(d，2H)；LC-MS m/z 501.2(MH+)，
保留时间3.37分钟。
[110]将酰胺中间体(58mg，0.12mmol)溶于MeOH(3mL)和1N 氢氧化钠水溶液(1mL)。将溶液在55℃下加热过夜，然后将挥发性组 分减压除去。用1N盐酸水溶液将得到的悬浮液调至pH 2。将固体过 滤，收集，用水洗涤，在真空下干燥过夜，得到N-[(4′-{[(4-乙氧基苯 基)乙酰基]-氨基}-1，1′-联苯-4-基)羰基]-N-甲基-L-缬氨酸(47mg， 83％)。
1H NMR(400MHz， CD3OD)δ1.09(d，6H)，2.31(m，1H)，4.06(s，3H)，4.52(m，1H)，7.07(d，1H)，7.28(m，2H)，7.62 (s，1H)，7.72(d，2H)，7.76(d，2H)，7.89(d，2H)，7.93(d，2H)；LC-MS m/z 487.2(MH+)，
保留时间3.18min。
[111]N-{[4′-({[(2-氯苯基)氨基]羰基}氨基)-1，1′-联苯-4-基]磺酰 基}-L-脯氨酸

[112]向N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-脯氨酸甲酯(40mg， 0.11mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入异氰酸2-氯苯酯(35mg，023 mmol)。将溶液在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩至干。将残渣悬浮 于乙醚，将固体过滤，收集，用新鲜的乙醚洗涤，真空下干燥，得到 N-{[4′-({[(2-氯苯基)氨基]羰基}氨基)-1，1′-联苯-4-基]磺酰基}-L-脯氨 酸甲酯(46.0mg，59％)。
1HNMR(400MHz，CD2Cl2)δ1.75(m，1H)，2.02(m，3 H)，3.30(m，1H)，3.53(m，1H)，3.72(s，3H)，4.27(m，1H)，7.06(m，3H)，7.29(t，1H)，7.46(d，1 H)，7.55(d，2H)，7.62(d，2H)，7.74(d，2H)，7.88(d，2H)，8.18(d，1H)；LC-MS m/z 514.1(MH+)，
保留时间3.62min。
[113]将脲中间体(36mg，0.07mmol)溶于甲醇(1mL)和1N氢氧 化钠水溶液(0.5mL)。将混合物在55℃下加热过夜，然后将挥发性组 分减压除去。通过加入1N盐酸水溶液将得到的悬浮液调至pH 1。将 固体过滤，收集，用水洗涤，真空干燥过夜，得到N-{[4′-({[(2-氯苯基) 氨基]羰基}-氨基)-1，1′-联苯-4-基]磺酰基}-L-脯氨酸(29mg，82％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.75 (m，1H)，1.99(m，3H)，3.30(m，1H)，3.51(m，1H)，4.25(m，1H)，7.03(ddd，1H)，7.29(ddd，1H)， 7.41(ddd，1H)，7.61(d，2H)，7.68(d，2H)，7.84(d，2H)，7.92(d，2H)，8.14(d，2H)；LC-MS m/z 500.1(MH+)，
保留时间3.40min。
[114]N-({4′-[(3，4-二氟苯甲酰基)氨基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-L- 缬氨酸

[115]向N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-L-缬氨酸甲酯(44mg， 0.12mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液加入3，4-二氟苯甲酰氯(43mg，0.25 mmol)和吡啶(29mg，0.37mmol)。将溶液在室温下搅拌过夜。将混合 物减压蒸发至干，将残渣悬浮于乙醚。将固体过滤，收集，用新鲜的 乙醚洗涤，真空干燥。将干燥的物质溶于甲醇(3mL)和1N氢氧化钠 水溶液(1mL)。将混合物在55℃加热过夜，然后将挥发性组分减压除 去。将得到的悬浮液用1N盐酸水溶液调至pH 1。将固体过滤，收集， 用水洗涤，真空干燥，得到N-({4′-[(3，4-二氟苯甲酰基)氨基]-1，1′-联苯 -4-基}磺酰基)-L-缬氨酸(24mg，45％)。
1H NMR(400MHz， CD3OD)δ0.93(d，6H)，0.99(d，3H)，2.06(m，1H)，3.65(d，1H)，7.22(t，1H)，7.43(dd，1H)，7.71 (m，2H)，7.81(m，5H)，7.89(d，2H)；LC-MS m/z 489.1(MH+)，
保留时间3.16min。
[116]N-({4′-[(3，4-二甲基苯甲酰基)氨基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰 基)-N-甲基-L-缬氨酸

[117]向N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲 酯(60mg，0.16mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入3，4-二甲基苯甲酰 氯(54mg，0.32mmol)和三乙胺(48mg，0.48mmol)。将溶液在室温下搅 拌过夜。将混合物减压蒸发至干，使残渣悬浮于乙醚。将固体过滤， 收集，用新鲜的乙醚洗涤，真空干燥，得到N-({4′-[(3，4-二甲基苯甲酰 基)氨基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-N-甲基-L-缬氨酸甲酯(54mg，66％)。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ0.93(d，3H)，1.01(d，3H)，2.11(m，1H)，2.37(d，6 H)，2.92(s，3H)，3.40(s，3H)，4.05(d，1H)，7.25(d，2H)，7.72(m，4H)，7.84(m，6H)；LC-MS m/z 509.2(MH+)，
保留时间3.77min。
[118]将酰胺中间体(48mg，0.09mmol)溶于甲醇(3mL)和1N氢 氧化钠水溶液(1mL)。将混合物在75℃下加热2h，然后将挥发性组 分减压除去。通过加入1N盐酸水溶液将得到的悬浮液调至pH 1。将 固体过滤收集，用水洗涤，真空干燥，得到N-({4′-[(3，4-二甲基苯甲酰 基)氨基]-1，1′-联苯-4-基}磺酰基)-N-甲基-L-缬氨酸(35mg，87％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.99(d，3H)，1.05(d， 3H)，2.11(m，1H)，2.37(d，6H)，2.92(s，3H)，4.05(d，1H)，7.78(d，1H)，7.69(m，4H)，7.84(m，7 H)；LC-MS m/z 495.2(MH+)，
保留时间3.51min。
[119]N-[(4′-{[(3，5-二氟苯基)乙酰基]氨基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰 基]-N-甲基-L-缬氨酸

[120]向N-[(4′-氨基-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-N-甲基-L-缬氨酸甲 酯(80mg，0.21mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入3，5-二氟苯乙酸(73 mg，042mmol)、4-二甲基氨基吡啶(52mg，0.42mmol)和1-(3-二甲基 氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(81mg，0.42mmol)。将混合物在 55℃下加热18h。将混合物冷却至环境温度，用二氯甲烷稀释。将有 机混合物用1N盐酸水溶液和盐水洗涤，然后减压浓缩至干。将残渣 悬浮于乙醚，将固体过滤，收集。将固体用乙醚洗涤，真空干燥，得 到N-[(4′-{[(3，5-二氟苯基)乙酰基]氨基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-N-甲 基-L-缬氨酸甲酯(65mg，58％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.90(d，3H)，0.97(d，3H)，2.08(m，1H)，2.88(s，3H)，3.35(s，3H)， 3.72(s，2H)，4.05(d，1H)，6.82(t，1H)，6.96(d，2H)，7.61(d，2H)，7.68(d，2H)，7.74(d，2H)，7.78 (d，2H)；LC-MS m/z 531.2(MH+)，
保留时间3.62min。
[121]将苯甲酰胺中间体(65mg，0.12mmol)溶于甲醇(3mL)和 1N氢氧化钠水溶液(1mL)。将混合物在75℃下加热2h，然后将挥发 性组分减压除去。用1N盐酸水溶液将得到的悬浮液调至pH 1。将固 体过滤收集，用水洗涤，真空干燥，得到N-[(4′-{[(3，5-二氟苯基)乙酰 基]氨基}-1，1′-联苯-4-基)磺酰基]-N-甲基-L-缬氨酸(valinate)(57mg， 90％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ0.99(t，6H)，2.08 (m，1H)，2.90(s，3H)，3.72(s，2H)，4.05(d，1H)，6.86(t，1H)，6.99(d，2H)，7.66(d，2H)，7.68(d，2 H)，7.77(d，2H)，7.86(d，2H)；LC-MS m/z 517.2(MH+)，
保留时间3.31min。
[122]通过使用上述方法和选择适当的原料，制备和表征本发明 其它化合物。这些化合物和上述实施例归纳在表1和2中。







































































[123]通过使用上述方法和选择适当的原料，可制备其它式(I)化合物 例如下表3中所示那些化合物。
表3


使用方法
[124]以下定义本文中使用的各种术语。
[125]当引入本发明元素或其优选的实施方案时，冠词“一”、“该” 和“所述”表示存在一个或多个元素。术语“包含”、“包括”和“具有”表 示包括在内的元素和表示可以是列出元素以外的另外元素。
[126]本文中使用的术语“患者”包括哺乳动物(例如人和动物)。
[127]术语“治疗”包括任何方法、作用、施用、疗法等，其中提 供给包括人在内的患者医疗帮助，目的是直接或间接改善患者病情或 延缓患者病症或疾病的进程。
[128]术语“联合疗法”或“共同(co-)疗法”表示给予两种或多种治 疗肥胖病症和/或障碍的治疗药物。这种给药包括按基本上同时方式例 如通过具有固定比例的活性成分的单一胶囊或通过各抑制剂的多个 独立胶囊，一起给予两种或多种治疗药物。另外，这种给药包括按序 贯方式使用各种治疗药物。
[129]短语“治疗有效”表示给予的达到改善肥胖症或障碍严重程 度目的，同时避免或使与给定治疗有关的副作用最小的各药物的量。
[130]术语“药学上可接受的”表示主题适用于药品。
[131]预计本发明式(I)化合物是有价值的治疗药物。因此，本发 明实施方案包括治疗患者(包括哺乳动物)的各种病症的方法，该方法 包括给予所述患者含有效治疗目标病症量的式(I)化合物的组合物。
[132]本发明目的是通过给予本发明化合物提供治疗个体肥胖症 和诱发体重减轻的方法。本发明方法包括给予个体足以诱发体重减轻 的治疗有效量的至少一种本发明化合物或其前药。本发明还包括通过 给予个体足以预防体重增加量的至少一种本发明化合物或其前药预 防个体体重增加的方法。
[133]本发明还涉及本发明化合物治疗与肥胖有关的疾病包括与 异常脂血症有关的疾病和其它与肥胖和超重有关的并发症，例如胆固 醇结石、胆囊疾病、痛风、癌症(例如结肠、直肠、前列腺、乳腺、卵 巢、子宫内膜、子宫颈、胆囊和胆管癌)、月经失调、不孕症、多囊性 卵巢综合征、骨关节炎和睡眠中呼吸暂停的用途，和与以下情况有关 的多种其它药物用途：例如调节食欲和食物摄取、异常脂血症、高甘 油三酯血症、X综合征、2型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)；动脉粥 样硬化性疾病例如心力衰竭、高脂血症、高胆固醇血症、低HDL水 平、高血压、心血管病(包括动脉粥样硬化、冠心病、冠状动脉病和高 血压)；脑血管疾病例如中风；和周围血管病。本发明化合物还可用于 治疗与例如调节胰岛素敏感性、炎性反应、血浆甘油三酯、HDL、LDL 和胆固醇水平等有关的生理病症。
[134]式(I)化合物可单独给药或与一种或多种其它治疗药物联合 给药。联合疗法包括给予含有式(I)化合物和一种或多种其它治疗药物 的单一药物剂量制剂，和通过各自单独的药物剂量制剂给予式(I)化合 物和其它各治疗药物。例如，可通过单一的口服剂量组合物例如片剂 或胶囊剂，一起给予患者式(I)化合物和治疗药物，或可通过各自的口 服剂量制剂给予各药物。
[135]当使用各自的剂量制剂时，可基本上在同一时间(例如同时) 或在错开的时间(例如序贯)给予式(I)化合物和一种或多种其它治疗药 物。
[136]例如，式(I)化合物可与用于治疗肥胖症和糖尿病的其它疗 法和药物联合使用。例如，减肥药包括β-3激动剂例如CL316，243； 大麻素(例如CB-1)拮抗剂例如利莫那班(Acomplia)；神经肽Y5抑制 剂；食欲抑制剂例如西布曲明(Meridia)；和脂肪酶抑制剂例如奥利司 他(Xenical)。本发明化合物还可与调节消化和/或代谢的药物化合物例 如调节产热、脂解、肠动力、脂肪吸收和饱满感的药物联合给药。
[137]另外，式(I)化合物可与以下一种或多种治疗糖尿病或与糖 尿病有关的病症的药物联合给药，它们包括PPAR配体(激动剂、拮抗 剂)；胰岛素促分泌素例如磺酰脲药物和非磺酰脲促分泌素；α-葡萄糖 苷酶抑制剂；胰岛素增敏剂、减少肝糖产量化合物；胰岛素和胰岛素 衍生物。可在给予本发明化合物之前、同时或之后给予此类疗法。胰 岛素和胰岛素衍生物包括胰岛素的长效和短效形式和制剂。PPAR配 体可包括任何PPAR受体或其组合的激动剂和/或拮抗剂。例如，PPAR 配体可包括PPAR-α、PPAR-γ、PPAR-δ或2或3种PPAR受体的任 何组合的配体。PPAR配体包括例如罗格列酮、曲格列酮和吡格列酮。 磺酰脲药物包括例如格列苯脲、格列美脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲和 格列吡嗪，和本发明化合物一起给药时可用于治疗糖尿病的α-葡萄糖 苷酶抑制剂包括阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖。可用于治疗糖尿 病的胰岛素增敏剂包括PPAR-γ激动剂，例如格列酮类(例如曲格列酮、 吡格列酮、恩格列酮、MCC-555、罗格列酮等)和其它噻唑烷二酮和非 噻唑烷二酮化合物；双胍类例如甲福明和苯乙双胍；蛋白酪氨酸磷脂 酶-1B(PTP-1B)抑制剂；二肽酶IV(DPP-IV)抑制剂和11β-HSD抑制 剂。和本发明化合物一起给药时可用于治疗糖尿病的减少肝糖产量化 合物包括胰高血糖素拮抗剂和甲福明，例如格华止和格华止XR。和 本发明化合物一起给药时可用于治疗糖尿病的胰岛素促分泌素包括 磺酰脲和非磺酰脲药物：GLP-1、GIP、PACAP、胰泌素及其衍生物； 那格列奈、美格列奈、瑞格列奈、格列苯脲、格列美脲、氯磺丙脲、 格列吡嗪，GLP-1包括半衰期比原始GLP-1长的GLP-1衍生物，例如 脂肪酸衍生化的GLP-1和exendin。
[138]在本发明方法中，本发明化合物也可与常用于治疗患者脂 质紊乱的药物联用。此类药物包括但不限于HMG-CoA还原酶抑制剂、 烟酸、降脂肪酸化合物(例如阿西莫司)；降脂药物(例如stanol酯、甾 醇糖苷例如替奎安和氮杂环丁烷酮例如依泽替米贝)、ACAT抑制剂 (例如阿伐麦布)、胆汁酸螯合剂、胆汁酸再摄取抑制剂、微粒体甘油 三酯转运抑制剂和纤维酸(fibric acid)衍生物。HMG-CoA还原酶抑制 剂包括例如洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、 rivastatin、依伐他汀、西立伐他汀和ZD-4522。纤维酸衍生物包括例 如氯贝特、非诺贝特、苯扎贝特(bezafibrate)、环丙贝特、苄氯贝特 (beclofibrate)、依托贝特和吉非贝齐。螯合剂包括例如考来烯胺、考来 替泊和右旋糖苷的二烷基氨基烷基衍生物。
[139]本发明化合物也可与降压药例如β-阻滞剂和ACE抑制剂 联用。可与本发明化合物联用的其它降压药的实例包括钙通道阻滞剂 (L-型和T-型；例如地尔硫维拉帕米、硝苯地平、氨氯地平和 mybefradil)、利尿药(例如氯噻嗪、氢氯噻嗪、氟甲噻嗪、氢氟噻嗪、 苄氟噻嗪、甲基氯噻嗪、三氯噻嗪、泊利噻嗪、苄噻嗪、依他尼酸、 tricrynafen、氯噻酮、呋塞米、musolimine、布美他尼、氨苯蝶啶、阿 米诺利、螺内酯)、肾素抑制剂、ACE抑制剂(例如卡托普利、佐芬普 利、福辛普利、依那普利、ceranopril、西拉普利、地拉普利、喷脱普 利、喹那普利、雷米普利、赖诺普利)、AT-1受体拮抗剂(例如洛沙坦、 厄贝沙坦、缬沙坦)、ET受体拮抗剂(例如西他生坦、atrsentan、中性 内肽酶(NEP)抑制剂、血管肽酶抑制剂(双重NEP-ACE抑制剂)(例如奥 马曲拉和gemopatrilat)和硝酸酯。
[140]式(I)化合物也可以游离碱或组合物形式使用，和用于本领 域熟知的研究和诊断或分析对照标准等。因此，本发明包括由惰性载 体和有效量的式(I)化合物或其盐或酯组成的组合物。惰性载体是不与 预定携带的化合物相互作用和为预定携带的化合物提供支持、运载方 法、大量、可追溯物质等的任何物质。化合物的有效量是对所运用的 具体方法产生结果或发挥影响的量。
[141]预计本发明化合物的前药形式将可证明在某些情况中有 效，此类化合物也应包括在本发明范围内。前药形式可具有比本文中 举例说明的母体化合物更好的优点，这些优点在于它们的吸收、分布 更好；更容易渗透到中枢神经系统；代谢或清除更缓慢等。在结晶性 或水溶性方面，前药形式还具有制剂优点。例如，可将具有一个或多 个羟基的本发明化合物转化为具有一个或多个羧基、羟基或氨基的酯 或碳酸酯，在体内，它们在生理pH值下水解或被内源性酯酶或脂肪 酶解离(参见例如美国专利号4,942,184；4,960,790；5,817,840；和 5,824,701，所有专利及其中参考文献均通过引用整体结合到本文中)。
药用组合物
[142]根据以上试验或其它熟知的用于测定治疗上述哺乳动物病 症效力的测定，并通过将这些结果与用于治疗这些病症的已知药物的 结果进行对比，可容易的确定本发明化合物治疗各期望适应症的有效 剂量。治疗这些疾病之一的活性成分的给药量可变化很大，取决于此 类因素例如使用的具体化合物和剂量单位、给药模式、治疗期、所治 疗患者的年龄和性别、所治疗病症的性质和程度。
[143]活性成分的总给药量范围通常可为约0.001mg/kg-约200 mg/kg，优选约0.01mg/kg-约200mg/kg体重/日。单位剂量可含约0.05 mg-约1500mg活性成分，每日可给药一次或多次。通过注射包括静 脉内、肌内、皮下和肠胃外注射和使用输注技术给药的日剂量可为约 0.01-约200mg/kg。日直肠剂量方案可为0.01-200mg/kg总体重。透 皮浓度可为需要维持0.01-200mg/kg日剂量的浓度。
[144]当然，每一患者的具体的初始和维持剂量方案将根据主治 医师确定的病症的性质和严重程度、所使用的具体化合物的活性、患 者的年龄、患者的膳食、给药时间、给药途径、药物的排泄速度、药 物联合等而变化。可通过本领域技术人员，用常规治疗试验确定需要 的治疗模式和本发明化合物或其药学上可接受的盐的剂量数目。
[145]可通过给予有需要的患者适当配制的药用组合物，用本发 明化合物达到需要的药理作用。例如患者可以是需要治疗某种病症或 疾病的哺乳动物包括人。因此，本发明包括药用组合物，它由药学上 可接受的载体和通过本文中所述方法鉴别的药学有效量的化合物或 其药学上可接受的盐或酯组成。药学上可接受的载体是在与活性成分 的有效活性一致的浓度下对患者相对无毒和无害，以致与载体有关的 任何副作用不损害活性成分的有益作用的任何载体。化合物的药学有 效量是对所治疗的具体病症产生结果或发挥影响的量。可用药学上可 接受的载体，用包括例如即释和定时释放制剂在内的任何有效的常规 剂量单位形式，通过口服、肠胃外、局部等给予通过本文中所述方法 鉴别的化合物。
[146]对于口服给药，可将化合物配制成固体或液体制剂，例如 胶囊剂、丸剂、片剂、糖锭剂、锭剂、融化片、散剂、溶液剂、混悬 剂或乳剂，并可按照本领域中制备药用组合物的已知方法制备。固体 单位剂型可以是普通硬或软壳明胶型胶囊剂，该胶囊剂含例如表面活 性剂、润滑剂和惰性填充剂例如乳糖、蔗糖、磷酸钙和玉米淀粉。
[147]在另一个实施方案中，可将常规片剂基质例如乳糖、蔗糖 和玉米淀粉与以下组分联合：粘合剂例如阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶； 用于给予片剂后帮助崩解和片剂溶出的崩解剂例如马铃薯淀粉、藻 酸、玉米淀粉和瓜儿胶；用于改善片剂颗粒流动性和防止片剂材料粘 附至片冲模表面的润滑剂例如滑石粉、硬脂酸或硬脂酸镁、硬脂酸钙 或硬脂酸锌；色素；着色剂和用于增强片剂美观和使它们更易被患者 接受的矫味剂，将本发明化合物压成片。适用于口服液体剂型的赋形 剂包括稀释剂，例如水和醇例如乙醇、苯甲醇和聚乙烯醇，加或不加 药学上可接受的表面活性剂、悬浮剂或乳化剂。各种其它物质可作为 包衣料或用于改变剂量单位的物理形式存在。例如可用虫胶、糖或两 者给片剂、丸剂或胶囊剂包衣。
[148]可分散粉末和颗粒适合制备水性混悬液。它们提供与分散 剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合在一起的活性成分。合 适的分散剂或湿润剂和悬浮剂可通过上述那些举例说明。其它赋形剂 例如上述那些甜味剂、矫味剂和着色剂也可存在。
[149]本发明药用组合物也可以是水包油乳剂形式。油相可以是 植物油例如液体石蜡或植物油的混合物。合适的乳化剂可以是(1)天然 胶例如阿拉伯胶和黄芪胶，(2)天然磷脂例如大豆磷脂和卵磷脂，(3) 由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或部分酯例如脱水山梨醇单油酸酯，和 (4)所述部分酯与环氧乙烷的缩合产物例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油 酸酯。乳剂也可含甜味剂和矫味剂。
[150]可通过使活性成分悬浮于植物油例如落花生油、橄榄油、 芝麻油或椰子油；或矿物油例如液体石蜡，制备油性混悬剂。油性混 悬剂可含增稠剂例如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。混悬剂也可含一种或 多种防腐剂例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯；一种或多种着色剂；一 种或多种矫味剂；和一种或多种甜味剂例如蔗糖或糖精。
[151]可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制糖浆和 酏剂。此类制剂也可含缓和剂、防腐剂、矫味剂和着色剂。
[152]也可通过肠胃外即皮下、静脉内、肌内或腹膜内 (interperitoneally)，以化合物在生理上可接受的稀释剂和药物载体中的 注射剂量，给予本发明化合物，生理上可接受的稀释剂和药物载体可 为无菌液体或液体例如水、盐水、葡萄糖水溶液和有关糖溶液的混合 物；醇例如乙醇、异丙醇或十六烷醇；二醇例如丙二醇或聚乙二醇； 甘油缩酮例如2，2-二甲基-1，1-二氧戊环-4-甲醇；醚例如聚(乙二醇)400； 油；脂肪酸；脂肪酸酯或甘油酯；或乙酰化脂肪酸甘油酯，加或不加 药学上可接受的表面活性剂例如肥皂或洗涤剂；悬浮剂例如果胶、卡 波姆、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素，或乳化剂和 其它药用助剂。
[153]可用于本发明肠胃外制剂的油的说明性实例是石油、动物、 植物或合成来源的那些油，例如花生油、大豆油、芝麻油、棉籽油、 玉米油、橄榄油、凡士林和矿物油。合适的脂肪酸包括油酸、硬脂酸 和异硬脂酸。合适的脂肪酸酯是例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。合 适的肥皂包括脂肪碱金属、铵和三乙醇胺盐，合适的洗涤剂包括阳离 子洗涤剂例如卤化二甲基二烷基铵、卤化烷基吡啶鎓和乙酸烷基胺； 阴离子洗涤剂例如烷基、芳基和烯烃磺酸盐；烷基、烯烃、醚和单甘 油酯硫酸盐；和磺基琥珀酸酯(盐)；非离子型洗涤剂例如脂肪胺氧化 物、脂肪酸链烷醇酰胺和聚氧乙烯聚丙烯共聚物；和两性洗涤剂例如 烷基-β-氨基丙酸盐和2-烷基-咪唑啉季铵盐及混合物。
[154]本发明肠胃外组合物溶液通常可含约0.5％-约25％(重量) 活性成分。最好也可使用防腐剂和缓冲剂。为消除或使注射部位的刺 激最小，此类组合物可含具有亲水-亲油平衡值(HLB)约12-约17的非 离子表面活性剂。这种制剂中的表面活性剂的量为约5％-约15％(重 量)。表面活性剂可为具有以上HLB的单一组分，或可为具有需要的 HLB的两种或多种组分的混合物。
[155]用于肠胃外制剂的表面活性剂的说明性实例是聚乙烯脱水 山梨醇脂肪酸酯例如脱水山梨醇单油酸酯和环氧乙烷和疏水性碱的 高分子量加合物，该疏水性碱通过环氧丙烷和丙二醇缩合形成。
[156]药用组合物可以是无菌注射水性混悬液形式。可按照已知 方法，用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制此类混悬液，分散剂或 湿润剂和悬浮剂有例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤 维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄芪胶和阿拉伯胶；分散剂或湿润 剂，其可为天然磷脂例如卵磷脂、环氧烷与脂肪酸的缩合产物例如聚 氧乙烯硬脂酸酯，环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物例如十七碳亚乙 氧基鲸蜡醇，环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物 例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍 生的部分酯的缩合产物例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。
[157]无菌注射制剂还可以是用无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶 剂制备的无菌注射溶液或混悬液。可使用的稀释剂和溶剂是例如水、 林格氏液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌不挥发油通常用作溶剂或悬 浮介质。为了该目的，可使用任何无刺激性的不挥发油，它们包括合 成的甘油单酯或二酯。另外，脂肪酸例如油酸还可用于制备注射剂。
[158]还可按通过直肠给药的栓剂形式给予本发明组合物。可通 过使药物与合适的在常温下为固体但在直肠温度下为液体从而在直 肠中融化释放药物的非刺激性赋形剂混合，制备这些组合物。此类物 质是例如可可酯和聚乙二醇。
[159]用于本发明方法的另一种制剂使用透皮递药装置(“贴剂”)。 可用此类透皮贴剂提供连续或间歇输注控制量的本发明化合物。释放 药物的透皮贴剂的结构和用途在本领域中熟知(参见例如美国专利号 5,023,252，其通过引用结合到本文中)。可按递药需要，将此类贴剂制 成连续、脉冲递药贴剂。
[160]另一种制剂使用使本发明化合物控释、缓释的可生物降解 的微球。此类制剂可由合成聚合物或共聚物组成。此类制剂允许注射、 吸入、通过鼻或口服给药。递药用的可生物降解的微球的结构和用途 在本领域中熟知(例如美国专利号6,706,289，其通过引用结合到本文 中)。
[161]可能需要或必须通过机械递药装置将药用组合物给予患 者。递药用机械释放装置的结构和用途在本领域中熟知。例如，将药 物直接给予脑的直接技术通常涉及将递药导管置于患者的脑室系统， 绕过血脑屏障。用于转运药物至身体特定解剖区域的一种这样的可植 入递药系统在美国专利号5,011,472中公开，其通过引用结合到本文 中。
[162]必要时或根据需要，本发明组合物还可含通常称为载体或 稀释剂的其它常规药学上可接受的混合成分。可通过加入抗氧剂例如 抗坏血酸或其它合适的防腐剂，保存任何本发明组合物。可使用制备 此类组合物的适当剂型的常规方法。
[163]必要时，可用于配制用于其预定给药途径的组合物的常用 药用成分包括：酸化剂例如但不限于乙酸、柠檬酸、富马酸、盐酸、 硝酸；和碱化剂例如但不限于氨溶液、碳酸铵、二乙醇胺、一乙醇胺、 氢氧化钾、硼酸钠、碳酸钠、氢氧化钠、三乙醇胺、三乙醇胺(trolamine)。
[164]可作为单一药物或与一种或多种其它药物联合给予通过本 文中所述方法鉴别的化合物，其中联合药物不造成不可接受的副作 用。例如，本发明化合物可与已知的减肥药或已知的抗糖尿病或其它 适应症药物等及其混合物和联合药物组合。
[165]还可在研究和诊断中或作为分析参照标准等，使用游离碱 或组合物形式的通过本文中所述方法鉴别的化合物。因此，本发明包 括由惰性载体和有效量的通过本文中所述方法鉴别的化合物或其盐 或酯组成的组合物。惰性载体是不与预定携带的化合物相互作用和为 预定携带的化合物提供支持、运载方法、大量、可追溯物质等的任何 物质。化合物的有效量是对所运用的具体方法产生结果或发挥影响的 量。
[166]可通过本领域中熟知的任何方法，用合适的药物载体；和 用于配制和给药的技术制备适合皮下、静脉内、肌内等的制剂(参见例 如Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton， Pa.，第20版，2000)。
本发明化合物的生物活性
[167]为可更好地理解本发明，提出以下实施例。这些实施例仅 用于说明目的，不应视为以任何方式限制本发明范围。其中涉及的所 有出版物均通过引用整体结合到本文中。
[168]可通过本领域中熟知的体外、离体和体内测定，证明本发 明化合物的活性。例如，可用以下测定证明药物治疗肥胖症和相关病 症的效力。
化合物的DGAT-1酶活性抑制作用的评价
[169]通过PCR从人cDNA库中分离人DGAT-1基因(参见例如 美国专利号6,100,077)。构建重组AcNPV杆状病毒，其中用DGAT-1 基因代替形成多角体蛋白的包含体的基因。将DGAT-1基因序列插入 AcNPV基因组3′至多角体蛋白启动子序列中，使DGAT-1处于多角体 蛋白启动子转录控制之下。按感染复数5，用含DGAT-1的重组杆状 病毒感染由秋粘虫得到的Sf 9昆虫细胞，感染48h后收获。按100mg 湿细胞生物质/mL浓度，将表达DGAT-1的昆虫细胞在10mM Tris， 250mM蔗糖，pH 7.5中匀化。将匀浆物在25,000g下离心30分钟。 弃去25,000g沉淀，将上清液在100,000g下离心1h。弃去100,000g 上清液，使100,000g含DGAT-1膜沉淀再悬浮于10mM Tris，50％(v/v) 甘油pH 7.5中。
[170]通过相分配方案测定DGAT-1酶活性。尤其是，在不同浓 度的抑制剂存在下，将含DGAT-1的膜在20μM二癸酰基甘油，5μM 14C-二癸酰基-CoA，2mM MgCl2，0.04％BSA，20mM HEPES，pH 7.5 缓冲液中温育。按100μl体积，在96孔微量滴定板中，0.5μg总膜蛋 白/孔，进行测定。通过底物引发测定，在环境温度下适度混合1h。 通过加入25μl 0.1％磷酸溶液淬灭活性。通过加入150μl相分配闪烁 流体(Packard，Inc.)并剧烈混合30分钟，实现选择性萃取 疏水性三癸酰基甘油产物。在环境温度下沉降约16h后，通过 闪烁计数器(Wallac，Inc.)定量产物。
化合物的细胞甘油三酯沉积抑制作用的评价
[171]用人结肠直肠腺癌细胞HT-29(HTB-38，ATCC)进行基于 细胞的DGAT-1测定。在75cm2板中，使HT-29细胞在含10％FBS，PSF， 谷氨酰胺和10mM乙酸盐的DMEM培养基生长至～90％融合。然后 将细胞再接种在24孔板中，得到1∶1.2的稀释度，使生长约16h。在 不同浓度的抑制剂存在下，通过加入月桂酸至终浓度0.01％，刺激形 成三酰基甘油酯。6h后，通过胰蛋白酶使细胞从板释放，离心收集， 再悬浮于水，转移至HPLC玻璃瓶中，在-70℃下冷冻，冻干。将冻干 细胞沉淀再悬浮于150μl HPLC级四氢呋喃，将瓶密封。将瓶超声30 分钟，并在超声水浴(Fisher，Inc.)中加热。通过HPLC(HP1100，Agilent， Inc.)，用蒸发光散射检测器(PL-ELS 1000，Polymer Labs，Inc.)定量细胞 三酰基甘油酯。在50℃下(A：50％乙腈，2.5％甲醇，B：100％四氢呋喃)， 用PLRP S 100柱(5微米，150×4.6mm，Polymer Labs，Inc.)，通过用 30-100％B缓冲液4分钟，然后用100％B缓冲液3分钟，完成层析 分离。进样体积为20μl，将检测器设为0.4SLM，40℃雾化器和80℃ 蒸发器。用市售标准品鉴定和定量非极性脂肪酸和甘油脂质。
化合物使食物引起的肥胖小鼠体重下降效力的评价
[172]该方案的目的是测定长期给予化合物对小鼠体重的影响， 该小鼠通过暴露于45％kcal/g高脂肪食物10星期以上变成肥胖。在 这些研究中，选择的小鼠体重大于用标准低脂肪(5-6％脂肪)小鼠饲料 饲养的对照组小鼠重量3标准差。食物引起的肥胖(DIO)动物经常在测 定化合物降低体重的效力试验中使用(参见例如Brown，et al.，Brit.J. Pharmacol.132：1898-1904，2001；Guerre-Millo，et al.，J.Biol.Chem. 275(22)：16638-42，2000；Han，et al.，Intl.J.Obesity and Related Metabolic Disorders 23(2)：174-79，1999；Surwit，et al.，Endocrinol. 141(10)：3630-37，2000)。
[173]该动物模型已成功用于鉴定和表征化合物的效力特性，这 些化合物用于或已用于处理肥胖人体重(参见例如Brown，et al.，2001； Guerre-Millo，et al，2000；Han，et al.，1999)。
[174]典型的研究包括60-80只雄性C57b1/J6小鼠(n＝10只/处理 组)，平均体重约45g。在控制温度和湿度下，在12小时/12小时光照 /黑暗循环中，使小鼠保持在标准动物房中。水和食物可连续得到。将 小鼠分开饲养。在2天基线体重测量和24小时食物和水消耗记录前， 至少4天假饲给予动物研究溶媒。按照它们的基础体重，将小鼠分到 6-8个处理组之一中。按体重的平均标准误差和均值相似的方式，设 立这些组。
[175]每日在光照/黑暗循环的黑暗期前，通过管饲经口给予动物 (5mL/kg)设定剂量/化合物，持续预定天数(通常8-14天)。测定体重、 食物和水消耗量。按照研究设计，用适当的统计学分析数据。在最后 一天，通过吸入CO2，将动物无痛处死。
[176]典型的按5或10mg/kg剂量，通过p.o.q.d.以50∶50PEG/ 水混悬液制剂给予化合物，或通过p.o.b.i.d.以0.5％甲基纤维素混悬液 制剂给予化合物，如果在至少7天处理期后，与溶媒处理对照动物相 比，观察到被处理动物体重统计学上的显著下降，则化合物视为有活 性。
[177]本文中所述结构、物质、组合物和方法是本发明的代表性 实例，可理解本发明范围不限于这些实例范围。本领域技术人员会认 识到，可通过对公开的结构、物质、组合物和方法进行改变，来实施 本发明，且此类改变认为在本发明的范围内。