利用可溶性淋巴毒素β受体的脱髓鞘病的治疗
专利汇可以提供利用可溶性淋巴毒素β受体的脱髓鞘病的治疗专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及使用淋巴毒素β受体(LTβR)作为淋巴毒素途径 抑制剂 治疗 脱髓鞘病诸如多发性硬化。，下面是利用可溶性淋巴毒素β受体的脱髓鞘病的治疗专利的具体信息内容。
1.一种治疗人的脱髓鞘病的方法，所述方法包括
(i)向人施用足以促进髓鞘再生的可溶性LTβR剂量，和
(ii)监控人的髓鞘再生。
2.权利要求1的方法，其中向人施用可溶性LTβR直至在人体内检测到 髓鞘再生。
3.权利要求1的方法，其中将所述剂量每3-10天施用1次；施用至少 2次，并且不多于每5-20天1次；或施用至少2次，并且不多于每28-31天 1次。
4.权利要求1的方法，其中将所述剂量每周施用1次。
5.权利要求1的方法，其中将所述剂量每两周施用1次。
6.权利要求1的方法，其中将所述剂量每个月施用1次。
7.权利要求1的方法，其中将所述剂量在历时至少4周期间每周施用1 次。
8.权利要求1的方法，其中将所述剂量在历时至少6周期间每两周施用 1次。
9.权利要求1的方法，其中将所述剂量在历时至少3个月期间每个月施 用1次。
10.权利要求1的方法，其中所述可溶性LTβR是人LTβR或其LT结合 片段。
11.权利要求10的方法，其中所述可溶性LTβR包含与Ig的Fc区连接 的人LTβR(SEQ ID NO：2)胞外区的LT结合片段。
12.权利要求11的方法，其中所述可溶性LTβR包含SEQ ID NO：1中所 列序列。
13.权利要求1的方法，其中通过磁共振成像、正电子发射断层成像术、 弥散加权成像、弥散张量成像、脊髓造影术、诱发电位测试或磁化转移来监 控髓鞘再生。
14.权利要求1的方法，其中通过脱髓鞘病症状的改善来监控髓鞘再生。
15.权利要求14的方法，其中所述症状是视力损伤，麻木，肢无力，震 颤，热耐受不良，语言障碍，失禁，或本体感觉损伤。
16.权利要求1的方法，其中所述脱髓鞘病是多发性硬化。
17.权利要求1的方法，其中所述脱髓鞘病选自下组：复发性/间歇性多 发性硬化、继发性进行性多发性硬化、进行性复发性多发性硬化、原发性进 行性多发性硬化和急性暴发性多发性硬化。
18.权利要求1的方法，其中所述脱髓鞘病选自下组：中心性脑桥髓鞘 破坏，急性散播性脑脊髓炎，进行性多病灶脑白质病；亚急性硬化性全脑炎， 传染后脑脊髓炎，慢性炎性脱髓鞘性多神经病，归-伯二氏综合征，进行性 多病灶脑白质病，德维克氏病，白洛氏同心性硬化，和脑白质营养不良。
19.权利要求18的方法，其中所述脑白质营养不良是异染性脑白质营养 不良，克拉贝氏病，脑白质肾上腺萎缩症，佩-迈二氏病，卡纳万氏病，伴 有中心性髓鞘形成不足的儿童共济失调，亚历山大氏病或雷弗素姆氏病。
20.一种治疗人的脱髓鞘病的方法，所述方法包括向人施用可溶性LTβR 剂量，其中治疗的单位剂量、施用频率和持续时间足以使人体内出现髓鞘再 生。
21.权利要求20的方法，其中向人施用可溶性LTβR直至在人体内检测 到髓鞘再生。
22.权利要求20的方法，其中将所述剂量每3-10天施用1次；施用至 少2次，并且每5-20天不多于1次；或施用至少2次，并且不多于每28-31 天1次。
23.权利要求20的方法，其中将所述剂量每周施用。
24.权利要求20的方法，其中将所述剂量每两周施用1次。
25.权利要求20的方法，其中将所述剂量每个月施用1次。
26.权利要求20的方法，其中将所述剂量在历时至少4周期间每周施用 1次。
27.权利要求20的方法，其中将所述剂量在历时至少6周期间每两周施 用1次。
28.权利要求20的方法，其中将所述剂量在历时至少3个月期间每个月 施用1次。
29.权利要求20的方法，其中所述可溶性LTβR是人LTβR或其LT结 合片段。
30.权利要求29的方法，其中所述LTβR包含与Ig的Fc区连接的人 LTβR(SEQ ID NO：2)胞外区的重要部分。
31.权利要求30的方法，其中所述可溶性LTβR包含SEQ ID NO：1中所 列序列。
32.权利要求20的方法，其中通过磁共振成像、正电子发射断层成像术、 弥散加权成像、弥散张量成像、脊髓造影术、诱发电位测试或磁化转移来监 控髓鞘再生。
33.权利要求20的方法，其中通过脱髓鞘病症状的改善来监控髓鞘再 生。
34.权利要求33的方法，其中所述症状是视力损伤，麻木，肢无力，震 颤，热耐受不良，语言障碍，失禁，或本体感觉损伤。
35.权利要求20的方法，其中所述脱髓鞘病是多发性硬化。
36.权利要求20的方法，其中所述脱髓鞘病选自下组：复发性/间歇性 多发性硬化、继发性进行性多发性硬化、进行性复发性多发性硬化、原发性 进行性多发性硬化和急性暴发性多发性硬化。
37.权利要求20的方法，其中所述脱髓鞘病选自下组：中心性脑桥髓鞘 破坏，急性散播性脑脊髓炎，进行性多病灶脑白质病；亚急性硬化性全脑炎， 传染后脑脊髓炎，慢性炎性脱髓鞘性多神经病，归-伯二氏综合征，进行性 多病灶脑白质病，德维克氏病，白洛氏同心性硬化，和脑白质营养不良。
38.权利要求37的方法，其中所述脑白质营养不良是异染性脑白质营养 不良，克拉贝氏病，脑白质肾上腺萎缩症，佩-迈二氏病，卡纳万氏病，伴 有中心性髓鞘形成不足的儿童共济失调，亚历山大氏病或雷弗素姆氏病。
39.一种治疗人的脱髓鞘病的方法，所述方法包括
(i)向人施用足以促进髓鞘再生的可溶性LTβR剂量；和
(ii)将人归类于具有预先选择的髓鞘再生水平。
40.权利要求39的方法，其中所述预先选择的髓鞘再生水平是无髓鞘再 生、中等水平的髓鞘再生或高水平的髓鞘再生。
41.权利要求39的方法，其中向人施用可溶性LTβR直至在人体内检测 到髓鞘再生。
42.权利要求39的方法，其中将所述剂量每3-10天施用1次；施用至 少2次，并且不多于每5-20天1次；或施用至少2次，并且不多于每28-31 天1次。
43.权利要求39的方法，其中将所述剂量每周施用1次。
44.权利要求39的方法，其中将所述剂量每两周施用1次。
45.权利要求39的方法，其中将所述剂量每个月施用1次。
46.权利要求39的方法，其中将所述剂量在历时至少4周期间每周施用 1次。
47.权利要求39的方法，其中将所述剂量在历时至少6周期间每两周施 用1次。
48.权利要求39的方法，其中将所述剂量在历时至少3个月期间每个月 施用1次。
49.权利要求39的方法，其中所述可溶性LTβR是人LTβR或其LT结 合片段。
50.权利要求49的方法，其中所述可溶性LTβR包含与Ig的Fc区连接 的人LTβR(SEQ ID NO：2)胞外区的主要部分。
51.权利要求50的方法，其中所述可溶性LTβR包含SEQ ID NO：1中所 列序列。
52.权利要求39的方法，其中通过磁共振成像、正电子发射断层成像术、 弥散加权成像、弥散张量成像、脊髓造影术、诱发电位测试或磁化转移来监 控髓鞘再生。
53.权利要求39的方法，其中通过脱髓鞘病症状的改善来监控髓鞘再 生。
54.权利要求53的方法，其中所述症状是视力损伤，麻木，肢无力，震 颤，热耐受不良，语言障碍，失禁，或本体感觉损伤。
55.权利要求39的方法，其中所述脱髓鞘病是多发性硬化。
56.权利要求39的方法，其中所述脱髓鞘病选自下组：复发性/间歇性 多发性硬化、继发性进行性多发性硬化、进行性复发性多发性硬化、原发性 进行性多发性硬化和急性暴发性多发性硬化。
57.权利要求39的方法，其中所述脱髓鞘病选自下组：中心性脑桥髓鞘 破坏，急性散播性脑脊髓炎，进行性多病灶脑白质病；亚急性硬化性全脑炎， 传染后脑脊髓炎，慢性炎性脱髓鞘性多神经病，归-伯二氏综合征，进行性 多病灶脑白质病，德维克氏病，白洛氏同心性硬化，和脑白质营养不良。
58.权利要求57的方法，其中所述脑白质营养不良是异染性脑白质营养 不良，克拉贝氏病，脑白质肾上腺萎缩症，佩-迈二氏病，卡纳万氏病，伴 有中心性髓鞘形成不足的儿童共济失调，亚历山大氏病或雷弗素姆氏病。
59.一种促进髓鞘再生的方法，所述方法包括：
(i)向接受抗TNF治疗的人施用足以促进人体内髓鞘再生的可溶性LTβR 剂量，和
(ii)监控人的髓鞘再生。
60.权利要求59的方法，其中所述人患有自身免疫病。
61.权利要求60的方法，其中所述自身免疫病是类风湿性关节炎。
62.权利要求59的方法，其中所述抗TNF治疗是Humira、Enbrel或 Remicade。
63.权利要求59的方法，其中向人施用可溶性LTβR直至在人体内检测 到髓鞘再生。
64.权利要求59的方法，其中所述可溶性LTβR是人LTβR或其LT结 合片段。
65.权利要求59的方法，其中将所述剂量每3-10天施用1次；施用至 少2次，并且不多于每5-20天1次；或施用至少2次，并且不多于每28-31 天1次。
66.权利要求59的方法，其中将所述剂量每周施用1次。
67.权利要求59的方法，其中将所述剂量每两周施用1次。
68.权利要求59的方法，其中将所述剂量每个月施用1次。
69.权利要求59的方法，其中将所述剂量在历时至少4周期间每周施用 1次。
70.权利要求59的方法，其中将所述剂量在历时至少6周期间每两周施 用1次。
71.权利要求59的方法，其中将所述剂量在历时至少3个月期间每个月 施用1次。
72.权利要求64的方法，其中所述可溶性LTβR包含与Ig的Fc区连接 的人LTβR(SEQ ID NO：2)胞外区的主要部分。
73.权利要求72的方法，其中所述可溶性LTβR包含SEQ ID NO：1中所 列序列。
74.权利要求59的方法，其中通过磁共振成像、正电子发射断层成像术、 弥散加权成像、弥散张量成像、脊髓造影术、诱发电位测试或磁化转移来监 控髓鞘再生。
75.权利要求59的方法，其中通过脱髓鞘病症状的改善来监控髓鞘再 生。
76.权利要求75的方法，其中所述症状是视力损伤，麻木，肢无力，震 颤，热耐受不良，语言障碍，失禁，或本体感觉损伤。
77.一种设计用于向患有脱髓鞘病的人皮下或肌内施用可溶性LTβR的 递送装置，其中所述施用足以使人体内出现髓鞘再生。
78.权利要求77的递送装置，其中所述递送装置包含冻干的可溶性 LTβR。
79.权利要求77的递送装置，其中所述可溶性LTβR是人LTβR或其LT 结合片段。
80.权利要求79的递送装置，其中所述可溶性LTβR包含与Ig的Fc区 连接的人LTβR(SEQ ID NO：2)胞外区的主要部分。
81.权利要求80的递送装置，其中所述可溶性LTβR包含SEQ ID NO：1 中所列序列。
82.权利要求77的递送装置，其中所述递送装置是注射器。
83.权利要求77的递送装置，其中所述脱髓鞘病是多发性硬化。
84.一种试剂盒，其包含(i)一个或多个单位剂量的可溶性LTβR和(ii)试 剂和关于如何测定髓鞘再生的说明书。
85.权利要求84的试剂盒，其中所述试剂盒用于治疗多发性硬化。
86.权利要求84的试剂盒，其中所述可溶性LTβR是人LTβR或其LT 结合片段。
87.权利要求86的试剂盒，其中所述可溶性LTβR包含与Ig的Fc区连 接的人LTβR(SEQ ID NO：2)胞外区的主要部分。
88.权利要求87的试剂盒，其中所述可溶性LTβR包含SEQ ID NO：1 中所列序列。
89.一种包含两个区室的递送装置，其中第一区室包含单位剂量的冻干 的可溶性LTβR，其中所述单位剂量足以使人体内出现髓鞘再生；并且第二 区室包含用于在向人施用之前重建可溶性LTβR的液体。
90.权利要求88的递送装置，其中所述可溶性LTβR是人LTβR或其LT 结合片段。
91.权利要求90的递送装置，其中所述LTβR包含与Ig的Fc区连接的 人LTβR(SEQ ID NO：2)胞外区的重要部分。
92.权利要求91的递送装置，其中所述可溶性LTβR包含SEQ ID NO：1 中所列序列。
93.一种指导患有脱髓鞘病的患者治疗该患者的脱髓鞘病的方法，所述 方法包括：(i)为患者提供至少两个单位剂量的可溶性LTβR；和(ii)指导该患 者皮下自我施用该单位剂量，一次一剂，其中所述单位剂量的可溶性LTβR 足以诱导患者体内的髓鞘再生。
94.权利要求93的方法，进一步包括指导所述患者自我监控髓鞘再生。
95.权利要求93的方法，其中指导所述患者在历时至少4周期间每两周 自我施用一次所述单位剂量。
96.权利要求93的方法，其中指导所述患者在历时至少2个月期间每个 月自我施用一次所述单位剂量。
97.权利要求93的方法，其中所述脱髓鞘病是多发性硬化的形式。
98.权利要求93的方法，其中所述可溶性LTβR是人LTβR或其LT结 合片段。
99.权利要求98的方法，其中所述可溶性LTβR包含与Ig的Fc区连接 的人LTβR(SEQ ID NO：2)胞外区的主要部分。
100.权利要求99的方法，其中所述可溶性LTβR包含SEQ ID NO：1中 所列序列。
背景
淋巴毒素β受体(LTβR)是肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族成员。所述受体 在大多数淋巴器官的实质(parenchyma)和基质(stroma)中的细胞表面表达，但 是在T淋巴细胞和B淋巴细胞上不存在。通过LTα/β异源三聚体(LT)经由 LTβR的信号传导在淋巴发育过程中很重要。还已知LTβR结合配体LIGHT (与淋巴毒素同源，呈现诱导型表达，并且与单纯疱疹病毒糖蛋白D竞争 HVEM，一种由T淋巴细胞表达的受体)，这已经在外周和胸腺中T细胞驱 动的事件中得到了暗示。LT和LIGHT在活化的淋巴细胞表面表达。已经证 明了用可溶性诱饵LTβR阻断LT途径对治疗多种动物模型中的自身免疫病 有效。
发明内容
本发明部分基于以下发现，即LTβR的可溶形式(例如，LTβR-Fc)能够有 效地促进受试者的髓鞘再生(remyelination)。因此，本发明提供可用于治疗受 试者中脱髓鞘病(demyelinating disorder)(例如，多发性硬化)以及用于监控受 试者中髓鞘再生的方法、组合物(例如可溶性LTβR融合蛋白，例如， LTβR-Fc)、装置(device)和试剂盒。
在一个方面，本发明着重描述一种治疗受试者中脱髓鞘病的方法。所述 方法包括步骤：(i)向受试者施用足以促进髓鞘再生的剂量的可溶性LTβR(例 如LTβR融合蛋白诸如LTβR-Fc)；和任选地(ii)监控受试者的髓鞘再生。任选 地，所述方法还可包括将受试者(例如，人(例如，人患者))鉴定为一位患有 或有风险患上脱髓鞘病的受试者的步骤。
在一些实施方案中，所述方法可包括选择受试者(例如，人患者)的步骤， 所述选择基于所述受试者需要髓鞘再生。
在一些实施方案中，所述方法还可包括将受试者(例如，人患者)归类为 需要髓鞘再生的步骤。
在一些实施方案中，所述方法可进一步包括将受试者(例如，人患者)归 类为具有预先选择的髓鞘再生水平的步骤，例如归类为无髓鞘再生或具有某 种水平的髓鞘再生。优选地，所述患者归类为具有髓鞘再生，例如，所述患 者归类为具有预先选择的水平，例如选自一系列分级的髓鞘再生水平，例如， 极少量(minimal)、中等量(intermediate)或较大量(larger amount)的髓鞘再生。 也可以将分级的髓鞘再生水平或量表示或指派为离散的值，例如，以渐增值 划分的等级，例如，1-10，其中第一种得分“10”表示患者中的髓鞘再生比 具有另一种较低得分的例如另一种(second)得分为“9”的患者中的髓鞘再 生更多。分类可以进行一次或多于一次。依照首先预先选择的界定标准 (milestone)对患者进行归类可能是理想的，例如，预先选择的施用数，预先 决定的治疗期，或预先选择的一种或多种症状的增加或减少。分类可以任选 地根据第二或后续的标尺(例如，相同类型的标尺(milestone))再次进行。在有 关的实施方案中，将受试者的分类记录(例如预先选择的髓鞘再生水平)制成 例如计算机可读的记录。
在一些实施方案中，用可溶性LTβR(例如LTβR融合多肽诸如LTβR-Fc) 治疗受试者。在一些实施方案中，可溶性LTβR是具有SEQ ID NO：1(见下 文)中所示氨基酸序列的LTβR-Fc融合多肽。
受试者可以是任何哺乳动物，包括，例如，小鼠、兔、豚鼠、猴或人(例 如，人患者)。受试者(例如，人患者)可以是任何患有或有风险患上脱髓鞘病 的受试者。如用于本文，“脱髓鞘病”是任何与髓磷脂(myelin)(包围神经纤 维并使之被隔绝的脂肪鞘)从神经脱离(removal)相关的疾病。脱髓鞘病包括， 例如，多发性硬化(例如复发性/间歇性多发性硬化(Relapsing/Remitting Multiple Sclerosis)、继发性进行性多发性硬化(Secondary Progressive Multiple Sclerosis)、进行性复发性多发性硬化(Progressive Relapsing Multiple Sclerosis)、原发性进行性多发性硬化(Primary Progressive Multiple Sclerosis) 和急性暴发性多发性硬化(Acute Fulminant Multiple Sclerosis))，中心性脑桥 髓鞘破坏(Central Pontine Myelinolysis)，急性散播性脑脊髓炎(Acute Disseminated Encephalomyelitis)，进行性多病灶脑白质病(Progressive Multifocal Leukoencephalopathy)；亚急性硬化性全脑炎(Subacute Sclerosing Panencephalitis)，传染后脑脊髓炎(Post-infectious Encephalomyelitis)，慢性炎 性脱髓鞘性多神经病(Chronic Inflammatory Demyelinating Polyneuropathy)， 归-伯二氏综合征(Guillain-Barre Syndrome)，进行性多病灶脑白质病，德维克 氏病(Devic’s Disease)，白洛氏同心性硬化(Balo’s Concentric Sclerosis)，和脑 白质营养不良(leukodystrophy)(例如，异染性脑白质营养不良(Metachromatic Leukodystrophy)，克拉贝氏病(Krabbédisease)，脑白质肾上腺萎缩症 (Adrenoleukodystrophy)，佩-迈二氏病(Pelizaeus-Merzbacher disease)，卡纳万 氏病(Canavan disease)，伴有中心性髓鞘形成不足的儿童共济失调(Childhood Ataxia with Central Hypomyelination)，亚历山大氏病(Alexander disease)或雷 弗素姆氏病(Refsum disease))。患有脱髓鞘病的人患者可能具有脱髓鞘病的一 种或多种症状，诸如，但不限于，视力损伤(impaired vision)，麻木(numbness)， 肢无力(weakness in extremities)，震颤或痉挛(tremors or spasticity)，热耐受不 良(heat intolerance)，语言障碍(speech impairment)，失禁(incontinence)，眩晕 (dizziness)或本体感觉损伤(impaired proprioception)(例如，平衡、协调、肢体 位置的感觉(sense of limb position))。就所述方法而言，认为具有脱髓鞘病家 族史(例如，脱髓鞘病的遗传因素)或表现出轻度的或不常见的上述脱髓鞘病 症状的人(例如，人患者)有风险患上脱髓鞘病(例如，多发性硬化)。
在一些实施方案中，可向受试者以足以诱导该受试者中髓鞘再生的量、 频率和/或时间施用可溶性LTβR。
在一些实施方案中，为了诱导受试者中的髓鞘再生，向受试者施用一次 可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽，诸如LTβR-Fc)。在其它实施方案中， 向受试者施用多于一次的可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽，诸如 LTβR-Fc)，例如，每3-10天一次；至少两次，并且不多于每5-20天一次(at least twice and not more than once every 5-20days)；至少两次，并且不多于每28-31 天一次；每周一次；每两周一次；每月一次；在至少4周的疗程期间每周一 次；在至少6周的疗程期间每两周一次；在至少3个月的疗程期间每月一次； 或在至少6个月的疗程期间每月一次。
在一些实施方案中，在决定剂量(例如，足以诱导受试者中髓鞘再生的 量)的试验中可溶性LTβR的合适起始剂量是每kg受试者体重0.001mg可溶 性LTβR。
在一些实施方案中，通过多种主观的、患者特异性的因素来决定合适剂 量或起始剂量，这些因素诸如，但不限于，性别、年龄、重量、体格健康状 态(physical health)或本文所述的任何其它因素。
在一些实施方案中，向受试者静脉内或胃肠外(例如，皮下、肌内、鼻 内或口服)施用可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽，诸如LTβR-Fc)。
在一些实施方案中，可以将可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽，诸如 LTβR-Fc)作为单一治疗(monotherapy)向受试者施用。
在一些实施方案中，可以将可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽，诸如 LTβR-Fc)作为与另一治疗的组合治疗向受试者施用，所述另一治疗例如另一 对脱髓鞘病(例如，任何本文所述的脱髓鞘病(例如，多发性硬化))的治疗。 例如，所述组合治疗可以包括向受试者(例如，人患者)施用一种或多种为患 有或有风险患上脱髓鞘病的受试者提供治疗效益的附加的剂。在一些实施方 案中，将可溶性LTβR与所述一种或多种附加的剂同时施用。在其它实施方 案中，首先及时施用可溶性LTβR，其次及时再施用所述一种或多种附加的 剂。在一些实施方案中，首先及时施用所述一种或多种附加的剂，其次再及 时施用可溶性LTβR。可溶性LTβR可以取代或加强先前或当前施用的治疗。 例如，在用LTβR处理时，一种或多种附加的剂的施用可以停止或减少，例 如，可以以较低水平施用。在其它实施方案中，保持在先治疗的施用。在一 些实施方案中，将在先治疗保持到LTβR水平达到足以提供治疗效果的水平。 所述两种治疗可以组合施用。
在一些实施方案中，也可向接受第一种脱髓鞘病治疗的人(例如，多发 性硬化)施用可溶性LTβR，例如，LTβR-Fc，所述第一种治疗例如，干扰素β 1a(Avonex(干扰素β1a粉针剂))、干扰素β1b(Rebif)、醋酸格拉默 (Copaxone)、米托蒽醌(Novantrone(诺消灵))、硫唑嘌呤(azathioprine)(Imuran (依木兰))、环磷酰胺(Cytoxan(环磷酰胺制剂)或Neosar(环磷酰胺注射剂))、 环孢菌素(Sandimmune(山地明))、氨甲喋呤、克拉屈滨(Leustatin)、甲泼尼龙 (Depo-Medrol或Solu-Medrol(甲强龙制剂))、泼尼松(prednisone)(Deltasone)、 泼尼松龙(prednisolone)(Delta-Cortef)、地塞米松(Medrol(美卓乐)或 Decadron)、促肾上腺皮质激素(ACTH)或促皮质素(Acthar(促皮质素注射 剂))。在一些实施方案中，当向人施用可溶性LTβR时，停止第一种治疗。 在其它实施方案中，监控人的第一种预先选择的结果，例如，脱髓鞘病的一 种或多种症状的改善(诸如髓鞘再生增加)，例如，任何本文所述的脱髓鞘病 症状。在一些实施方案中，当观察到第一种预先选择的结果时，减少或停止 使用可溶性LTβR的治疗。在一些实施方案中，随后监控人在可溶性LTβR 处理停止后的第二种预先选择的结果，例如，脱髓鞘病症状的恶化。当观察 到第二种预先选择的结果时，回复或增加对人的可溶性LTβR施用，或向人 同时施用可溶性LTβR或加量的可溶性LTβR，以及第一种治疗方案。
在一种实施方案中，接受对脱髓鞘病(例如，多发性硬化或任何其它本 文所述的脱髓鞘病)的第一种治疗，其后再用可溶性LTβR例如LTβR-Fc治疗 的人，以相同的量或减少的量继续接受第一种治疗。在另一实施方案中，使 用第一种治疗的处理与使用可溶性LTβR的处理有一定时间的重叠，但是随 后将使用第一种治疗的处理停止。
在一些实施方案中，可以向正在接受抗TNF治疗(例如，Humira、Enbrel 或Remicade)的受试者施用可溶性LTβR。在一些实施方案中，接受抗TNF 治疗的受试者患有自身免疫病，诸如，但不限于，类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)。
监控受试者(例如，人患者)的髓鞘再生如本文所定义的意思是评估受试 者的变化，例如，在指示髓鞘再生的一种或多种参数上的改善，例如，可以 监控脱髓鞘病的一种或多种症状的改善。这些症状包括本文所述的脱髓鞘病 的任何症状。髓鞘再生也可通过包括直接测定受试者中髓磷脂状态的方法来 监控，例如，可以使用磁共振成像(MRI)测量白质(white matter)的量(mass)或 使用磁共振波谱学(MRS)脑扫描测量髓磷脂纤维厚度。在一些实施方案中， 在施用可溶性LTβR之后，优选在第一次施用之后，进行至少1小时，例如， 至少2、4、6、8、12、24或48个小时，或至少1天、2天、4天、10天、 13天、20天或更长时间，或至少1周、2周、4周、10周、13周、20周或 更长时间的评估。可以在下述时期的一个或多个中对受试者进行评估：治疗 开始之前；治疗过程中；或已经施用了治疗的一种或多种元素之后。评估可 以包括评估对进一步治疗的需求，例如，评估是否应该变更剂量、施用频率 或治疗的持续时间。也可以包括评估添加或放弃所选治疗模式的需要，例如， 添加或放弃任何对本文所述脱髓鞘病的治疗。例如，有必要时可溶性LTβR 的继续施用可以与一种或多种附加的治疗剂一起进行。在优选的实施方案 中，若获得了预先选择的评估结果，则采取附加的步骤，例如，向受试者施 用另一种治疗或进行另一种评估或测试。髓鞘再生的水平可以用于对患者保 健作出决定，例如，选择或修改疗程或决定让第三方偿付治疗。
在一些实施方案中，对受试者(例如，人患者)髓鞘再生的监控也可以包 括使用例如，磁共振成像(MRI)扫描、正电子发射断层成像术(PET)扫描、弥 散加权成像(Diffusion-Weighted Imaging)(DW-I，或DW-MRI)、弥散张量成 像(Diffusion Tensor Imaging)、脊髓造影术(Myelography)、磁化转移 (Magnetization Transfer)来监控炎性病灶(例如，硬化)大小或数量的降低。在 一些实施方案中，对受试者髓鞘再生的监控可以包括检测脑脊液中例如以下 各项的存在：(i)异常蛋白诸如髓磷脂的微小片段，(ii)淋巴细胞水平的升高或 特殊类型的淋巴细胞，和/或(iii)免疫球蛋白(IgG)分子的异常水平，所述脑脊 液获得自腰椎穿刺(lumbar puncture)(即，腰椎穿刺(spinal tap))。在其它实施 方案中，对受试者髓鞘再生的监控可以包括评定受试者神经心理学上的变化 (例如，多种能力状态，诸如记忆力、运算能力、注意力、判断力和推理能 力)。在一些实施方案中，对受试者(例如，人患者)髓鞘再生的监控可以包括 测试患者尿中髓磷脂碱性蛋白样物质(MBPLM)水平的降低，所述物质因疾病 进展中产生的轴突损伤而开始增加。在一些实施方案中，在脱髓鞘病影响受 试者的眼睛或视力的情况下，对患者髓鞘再生的监控可以包括测试例如色盲 的改善。
在一个方面，公开的内容着重描述对受试者进行评估以决定例如受试者 是否响应于脱髓鞘病治疗的方法，所述治疗例如增加受试者中髓鞘再生的治 疗，诸如施用可溶性LTβR。所述方法包括对受试者中髓磷脂的水平或状态 提供参比值(例如，施用前的值)，和任选地，向受试者施用增加髓鞘再生的 药物(例如，可溶性LTβR，例如，LTβR融合多肽，诸如LTβR-Fc)。在施用 药物的实施方案中，所述方法还包括为受试者中髓磷脂的水平或状态提供施 用后的值(例如，在施用髓鞘再生治疗之后髓磷脂的水平或状态)，并且将施 用后的值与参比值比较，由此评估受试者，例如，决定受试者是否响应于所 述治疗。所述施用后的值(即，对应于髓鞘再生治疗之后受试者中髓磷脂的 状态或水平的值)可以通过例如任何本文所述的评定方法来测定。参比值(即， 在使用髓鞘再生治疗进行处理之前受试者中髓磷脂的状态或水平)也可通过 例如任何本文所述的评定方法来测定。
在一些实施方案中，所述方法包括为受试者分配类别，和任选地，记录 所述分配，例如，在计算机可读的记录中。
在一些实施方案中，所述评估包括测定受试者是否有响应。在其它实施 方案中，所述评估包括测定受试者是否无响应。
在一些实施方案中，所述评估包括为作出有关受试者的决定提供信息。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括选择受试者进行预先选择的治 疗的步骤。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括选择受试者中脱髓鞘病(例如， 多发性硬化)的治疗持续时间的步骤。
在一些实施方案中，作出受试者有响应的决定表示(indicate)可以/应该/ 将会向受试者施用或向该受试者施用更短的治疗持续时间(例如，比推荐用 于不响应治疗的受试者的治疗时间短，或比目前脱髓鞘病的现有治疗所采用 的持续时间短)，并且任选地，将所述表示的情况(indication)登入记录中。
在一些实施方案中，作出受试者有响应的决定表示更短的治疗持续时间 不适用于(counter-indicated for)该受试者(例如，比目前脱髓鞘病的现有治疗 所采用的持续时间短，例如，本文所述的脱髓鞘病的任何治疗)，并且任选 地，将所述表示的情况登入记录中。
在一些实施方案中，提供施用后的值与参比值的比较，包括：提供在第 一个时间点对受试者中施用后髓磷脂水平的测定(例如，其中第一个时间点 是髓鞘再生治疗(例如，可溶性LTβR)施用开始之后6、7、8、9、10、11、 12、13、14或更多天(例如，3、4、5、6、8或更多周(例如，3、4、6、12 或更多个月)))；提供在第一时间点之前的第二时间点(例如，其中所述第二 时间点在髓鞘再生治疗(例如，可溶性LTβR，例如，LTβR-Fc)施用开始之前 约1、2、3、4或5天或施用开始约1、2、3、4或5天之内)对受试者中髓 磷脂状态或水平的参比值的测定；和提供对受试者的髓磷脂的施用后水平和 参比值的比较，其中受试者中髓磷脂水平在施用后水平和参比值之间的增加 (例如，两个水平有约60％，约50％，约40％，约30％，约20％，约10％， 约5％，约2％，或约1％的差异)表明受试者有响应。
在另一方面，本发明着重描述为患有脱髓鞘病例如多发性硬化的患者的 髓鞘再生治疗疗程选择支付(payment)类别的方法。所述方法包括提供(例 如，收到)对于患者对用于脱髓鞘病的治疗是否响应或不响应的评估；和进 行以下各项中的至少一项：(1)如果患者有响应(例如，患者出现髓鞘再生)， 那么选择第一支付类别，和(2)如果受试者无响应(例如，患者中无髓鞘再生)， 那么选择第二支付类别。治疗可以包括可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽， 诸如LTβR-Fc)。治疗也可以包括用于本文所述的脱髓鞘病的任何治疗中的一 种或多种。在一些实施方案中，治疗是增加患者中髓鞘再生的治疗，诸如可 溶性LTβR。
在一些实施方案中，将患者分派为第一支付类别，并且该分派授权对第 一期的疗程进行支付。在一些实施方案中，患者对脱髓鞘病的治疗有响应， 授权的治疗期短于52、48、36、24、18、12、10、8、4或2周。
在一些实施方案中，将患者分派为第二支付类别，并且该分派授权对第 二期的疗程进行支付。在一些实施方案中，患者对脱髓鞘病的治疗无响应， 授权的治疗期长于52、48、36、24、18、12、10、8、4或2周。
在一些实施方案中，对患者是否响应于治疗的测定时通过评估受试者的 变化来进行的，所述变化例如，在指示髓鞘再生的一种或多种参数上的改进， 例如，可以监控脱髓鞘病的一种或多种症状上的改善。这些症状包括本文所 述的脱髓鞘病的任何症状。髓鞘再生也可以通过包括直接测定受试者中髓磷 脂的状态的方法来监控，例如，可以使用磁共振成像(MRI)测量白质的量， 使用磁共振波谱学(MRS)脑扫描测量髓磷脂纤维厚度，或任何本文所述的其 他的直接测量。
在另一实施方案中，测定患者是否响应于治疗也可以通过任何其他本文 所述的评定或标记(indicia)来评估，包括，但不限于，监控患者在患者中存 在的炎性病灶(即，硬化)的大小或数量上的降低；监控患者脑脊液中例如以 下各项的存在或量的减少：(i)异常蛋白诸如髓磷脂的微小片段，(ii)淋巴细胞 水平的升高或特殊类型的淋巴细胞，和/或(iii)免疫球蛋白(IgG)分子的异常水 平；监控患者在神经生理学上的积极变化(例如，多种能力状态，诸如记忆 力、运算能力、注意力、判断力和推理能力)；和/或监控患者尿中髓磷脂碱 性蛋白样物质(MBPLM)水平的降低。
在一些实施方案中，在髓鞘再生治疗(例如，诱导受试者中髓鞘再生的 治疗，例如，以可溶性LTβR为例的治疗)之后，脱髓鞘病的一种或多种症状 或其他上述标记至少5％(例如，至少10％，至少15％，至少20％，至少25％， 至少30％，至少35％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％)的改善 足以将患者归类于对治疗有响应。
在另一方面，本发明着重描述为作出有关人受试者(例如，患者)的决定 提供信息的方法，或作出这样的决定的方法。所述方法包括提供(例如，收 到)对患者的评估，其中评估时通过本文所述方法进行的，例如，测定患者 是否患有或有风险患上脱髓鞘病，或是否是一位需要或很可能受益于髓鞘再 生增加的患者；提供对患者中髓磷脂在施用后的状态、水平或量(例如，髓 鞘再生的程度)的测定；由此提供施用后的值；提供施用后的水平与参比值(例 如，治疗之前患者中存在的髓磷脂水平)的比较；以及由此为作出有关患者 的决定提供信息，或作出这样的决定。
在一些实施方案中，所述方法包括作出关于患者的决定。
在一些实施方案中，所述方法还包括与另一方交流所述信息(例如，通 过计算机、光盘、电话、传真、电子邮件或信件)。
在一些实施方案中，所述方法包括记录信息，例如，记录在计算机可读 的记录或患者档案中。
在一些实施方案中，所述决定包括选择患者进行支付，如果受试者对脱 髓鞘病的治疗(例如，增加髓鞘再生的治疗)有响应，那么进行或授权对第一 作用过程(first course of action)的支付；和如果患者对脱髓鞘病的治疗无响 应，那么进行或授权对第二作用过程的支付。
在一些实施方案中，所述决定包括，如果施用后的值与参比值具有预先 确定的关系(例如，施用后的值高于参比值)，那么选择第一作用过程；和如 果施用后的值与参比值具有第二种预先确定的关系(例如，施用后的值低于 参比值)，那么选择第二作用过程。
在一些实施方案中，所述决定包括，如果患者对脱髓鞘病的治疗(例如， 在患者中增加髓鞘再生的治疗)有响应，那么选择第一作用过程；和如果患 者无响应，那么选择第二作用过程。
在一些实施方案中，患者有响应，并且作用过程是对疗程的授权。在一 些实施方案中，所述疗程比提供给无响应但在其它方面类似的患者的疗程 短，例如，所述疗程短于52、48、36、24、18、12、10、8、4或2周。
在一些实施方案中，患者对治疗有响应，并且作用过程是将该患者分派 为第一类。在一些实施方案中，分配为第一类将允许为提供给该患者的治疗 进行支付。在一些实施方案中，由甲方(first party)向乙方(second party)进 行支付。在一些实施方案中，甲方不是患者。在一些实施方案中，甲方选自 第三方支付者、保险公司、雇主、雇主资助的保健计划(employer sponsored health plan)、HMO或政府机构。在一些实施方案中，乙方选自受试者、健 康护理提供者(healthcare provider)、治疗医生(treating physician)、HMO、医 院、政府机构、或销售或供应药物的机构。在一些实施方案中，甲方是保险 公司且乙方选自患者、健康护理提供者、治疗医生、HMO、医院、政府机 构、或销售或供应药物的机构。在一些实施方案中，甲方是政府机构且乙方 选自患者、健康护理提供者、治疗医生、HMO、医院、保险公司、或销售 或供应药物的机构。
在一些实施方案中，患者无响应，并且作用过程是对疗程的授权。在一 些实施方案中，所述疗程比提供给对脱髓鞘病治疗(例如，在患者中增加髓 鞘再生的治疗)有响应但在其它方面类似的患者的疗程长，例如，所述疗程 长于52、48、36、24、18、12、10、8、4或2周。在一些实施方案中，受 试者无响应，并且作用过程是将该患者分派为第二类。在一些实施方案中， 分配为第二类将允许为提供给该患者的治疗进行支付，所述治疗例如，时间 比预先选择的时间长的治疗(例如，比用于增强型响应者的治疗时间长)。在 一些实施方案中，由甲方向乙方进行支付。在一些实施方案中，甲方不是患 者。在一些实施方案中，甲方选自第三方支付者、保险公司、雇主、雇主资 助的保健计划、HMO或政府机构。在一些实施方案中，乙方选自受试者、 健康护理提供者、治疗医生、HMO、医院、政府机构、或销售或供应药物 的机构。在一些实施方案中，甲方是保险公司且乙方选自受试者、健康护理 提供者、治疗医生、HMO、医院、政府机构、或销售或供应药物的机构。 在一些实施方案中，甲方是政府机构且乙方选自受试者、健康护理提供者、 治疗医生、HMO、医院、保险公司、或销售或供应药物的机构。
在一些实施方案中，患者是患有或有风险患上脱髓鞘病诸如多发性硬化 或本文所述的任何其它脱髓鞘病的患者。
在另一方面，公开的内容着重描述为患有或有风险患上脱髓鞘病的受试 者、和/或需要或很可能受益于髓鞘再生增加的受试者对使用髓鞘再生治疗进 行的疗程选择支付类别的方法。所述方法包括鉴定受试者是对治疗有响应的 受试者，并且批准、进行、授权、接受、传送(transmit)或以其它方式允许对 选择的疗程的支付，所述疗程例如，与如果已经将受试者鉴定为对治疗无响 应的情况相比更短的疗程(例如，短于52、48、36、24、18、12、10、8、4 或2周)。
在另一方面，本发明着重描述治疗人的脱髓鞘病的方法，所述方法包括 向受试者(例如，人(例如，人患者))施用可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽， 诸如LTβR-Fc)剂量的步骤，其中所述施用足以使人体内出现髓鞘再生。所述 方法可以任选地包括将患者鉴定为患有或有风险患上脱髓鞘病的患者的步 骤。所述方法还可以，任选地，包括监控所述受试者的髓鞘再生的步骤。所 述受试者可以是任何本文所述的受试者。脱髓鞘病可以是任何本文所述的脱 髓鞘病(例如，多发性硬化)。可溶性LTβR可以是任何本文所述的那些。向 受试者施用可溶性LTβR可以包括任何本文所述的途径、剂量或安排 (schedule)(例如，参见任意上述施用方法)。在一些实施方案中，可溶性LTβR (例如，LTβR融合多肽，诸如LTβR-Fc)可以如上所述作为单一治疗施用，或 者可以与一种或多种用于脱髓鞘病的附加治疗组合施用。在一些实施方案 中，可以向正在接受抗TNF治疗(例如，Humira、Enbrel或Remicade)的受试 者施用可溶性LTβR。使用任何本文所述的方法可以将受试者鉴定为患有或 有风险患上脱髓鞘病的受试者。对受试者(例如，人患者)髓鞘再生的监控可 以包括任何本文所述的方法。
在另一方面，本发明着重描述治疗人的脱髓鞘病的方法，所述方法包括 以下步骤：(i)向人施用足以促进髓鞘再生的可溶性LTβR剂量；和(ii)将人归 类于具有预先选择的髓鞘再生水平。任选地，所述方法可以包括监控该人髓 鞘再生的步骤。所述方法还可任选地包括将人鉴定为患有或有风险患上脱髓 鞘病的人，或鉴定为需要或很可能受益于髓鞘再生增加的人。脱髓鞘病可以 是任何本文所述的脱髓鞘病(例如，多发性硬化)。可溶性LTβR可以是任何 本文所述的那些。向受试者施用可溶性LTβR可以包括任何本文所述的途径、 剂量或安排(例如，参见任意上述施用方法)。在一些实施方案中，可溶性LTβR (例如，LTβR融合多肽，诸如LTβR-Fc)可以如上所述作为单一治疗施用，或 者可以与一种或多种用于脱髓鞘病的附加治疗组合施用。在一些实施方案 中，可以向正在接受抗TNF治疗(例如，Humira、Enbrel或Remicade)的受试 者施用可溶性LTβR。对受试者(例如，人患者)髓鞘再生的监控可以包括任何 本文所述的方法。用于将人(例如，患者)的髓鞘再生归类的示例性方法在上 文描述。
在另一方面，本发明还提供促进髓鞘再生的方法。所述方法包括以下步 骤：(i)向正在接受抗TNF治疗的受试者施用有效剂量的可溶性LTβR(例如， LTβR融合多肽，诸如LTβR-Fc)，和任选地，(ii)监控该人的髓鞘再生。所述 方法还可任选地包括将受试者鉴定为患有或有风险患上因抗TNF治疗导致 的脱髓鞘病的受试者。所述受试者可以是任何本文所述的受试者。向受试者 施用可溶性LTβR可以包括任何本文所述的途径、剂量或安排(例如，参见任 意上述施用方法)。在一些实施方案中，可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽， 诸如LTβR-Fc)可以如上所述作为单一治疗施用，或者可以与一种或多种用于 脱髓鞘病的附加治疗组合施用。在一些实施方案中，所述受试者正在接受的 抗TNF治疗是，例如，Humira、Enbrel或Remicade。可以使用任何本文所 述的方法将受试者鉴定为患有或有风险患上脱髓鞘病的受试者。对受试者 (例如，人患者)髓鞘再生的监控可以包括任何本文所述的方法(参见上文所述 的示例性方法)。
在另一方面，本发明着重描述选择需要或可能受益于可溶性LTβR施用 的患者的方法。所述方法包括测定患者是否需要或可能受益于髓鞘再生的步 骤。所述方法还可包括用LTβR的可溶形式治疗所选患者的步骤。用于选择 患者的方法可以包括任何本文示例的方法，包括，例如，监控脱髓鞘病的一 种或多种症状或直接评定上述受试者中髓磷脂的状态。可溶性LTβR可以是 任何本文所述的那些。施用的剂量、频率(即，安排(schedule))，以及治疗的 持续时间可以是任何本文所述的那些。
在所述方法的一些实施方案中，患者是被诊断患有脱髓鞘病的患者。在 所述方法的其它实施方案中，患者是呈现一种或多种与脱髓鞘病相关的症状 的患者，所述症状诸如任何本文所述的症状。
在另一方面，本发明提供选择向患者施用可溶性LTβR的剂量、途径， 施用的频率，和/或可溶性LTβR治疗的持续时间的方法。所述方法包括以下 步骤：(i)评估患者的一种或多种患者特异性因素和(ii)基于对所述一种或多种 因素的评定选择施用的剂量、频率，和/或治疗的持续时间，和(iii)任选地， 在适当的情况下，以步骤(ii)中测定的施用剂量、频率，和/或治疗持续时间 向患者施用可溶性LTβR。所述方法还可包括选择患有或有风险患上脱髓鞘 病的患者的步骤。因此，所述患者可以是患有或有可能患上脱髓鞘病的患者。 所述方法还可包括在治疗之后监控患者的髓鞘再生的步骤。可溶性LTβR可 以是任何本文所述的那些。
在一些实施方案中，患者可以被测定为不需要或不太可能受益于可溶性 LTβR的施用的患者。
在另一方面，本发明提供用于向患有脱髓鞘病的受试者(例如，人(例如， 人患者)静脉内、皮下或肌内施用可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽，诸如 LTβR-Fc)的递送装置，其中所述施用足以使受试者中出现髓鞘再生。所述递 送装置可以是任何合适的本文所述的递送装置，包括，例如，注射器。所述 脱髓鞘病可以是任何本文所述的脱髓鞘病(例如，多发性硬化)。所述受试者 可以是任何本文所述的受试者。可溶性LTβR可以是任何本文所述的可溶性 LTβR多肽。
在一些实施方案中，所述递送装置含有单位剂量的可溶性LTβR(例如， LTβR-Fc)，其中所述单位剂量足以增加髓鞘再生。
预期约0.001mg/kg的可溶性LTβR的剂量是优化治疗剂量的合适起始 点。
在一些实施方案中，所述递送装置含有冻干的可溶性LTβR(例如，LTβR 融合多肽，诸如LTβR-Fc)。
在另一方面，本发明着重描述一种试剂盒，其含有：(i)一个或多个单位 剂量的可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽，诸如LTβR-Fc)和(ii)试剂和关于 如何测定髓鞘再生的说明书。关于如何测定髓鞘再生的说明书可以包括任何 本文所述的评定髓鞘再生的方法(参见上文)。
在一些实施方案中，所述试剂盒是用于治疗脱髓鞘病(例如，多发性硬 化)的。
在另一方面，本发明着重描述含有两个区室(compartment)的递送装置， 其中第一区室含有单位剂量的冻干的可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽诸 如LTβR-Fc)，其中所述单位剂量足以使受试者(例如，人，例如，人患者)中 出现髓鞘再生；并且第二区室含有用于在向受试者施用之前重建可溶性 LTβR(例如，LTβR融合多肽，诸如LTβR-Fc)的液体。所述递送装置可以是 任何合适的本文所述的递送装置，包括，例如，注射器。所述受试者可以是 任何本文所述的受试者。可溶性LTβR可以是任何本文所述的可溶性LTβR 多肽。所述液体可以是任何本文所述的可药用(pharmaceutically acceptable) 稀释剂，并且可以包括，例如，缓冲液(例如，磷酸盐缓冲盐水)或蒸馏的和/ 或灭菌的水。
在一些实施方案中，所述递送装置含有单位剂量的可溶性LTβR(例如， LTβR-Fc)，使得所述重建的可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)对受试者的施用将 向该受试者递送每kg受试者体重至少约0.001mg的可溶性LTβR。
在另一方面，本发明提供指导患有脱髓鞘病的患者治疗该患者的脱髓鞘 病的方法，所述方法包括以下步骤：(i)为该患者提供至少两单位剂量的可溶 性LTβR(例如，LTβR-Fc)；和(ii)指导该患者皮下自我施用该单位剂量，一 次一剂，其中所述单位剂量的LTβR-Fc足以诱导患者中的髓鞘再生。任选地， 所述方法可以包括指导患者自我监控髓鞘再生的步骤。所述脱髓鞘病可以是 任何本文所述的那些，诸如多发性硬化。可溶性LTβR可以使任何本文所述 的可溶性LTβR多肽，诸如SEQ ID NO：1中所示的LTβR-Fc。一个或多个单 位计量的可溶性LTβR的施用(即，指导如何来进行)可以包括任何本文所述 的方法(例如，安排)。
“可溶性LTβR”如本文所定义，是包括LTβR胞外区的淋巴毒素(LT) 结合片段的多肽。例如，可溶性LTβR可以包括全部人LTβR胞外结构域或 其片段(例如，可溶性LTβR可以包括如下列SEQ ID NO：2所示的人LTβR的 残基40-200、35-200、40-210；35-220、32-225、或28-225)。
MLLPWATSAPGLAWGPLVLGLFGLLAASQPQAVPPYASENQTCRDQ EKEYYEPQHRICCSRCPPGTYVSAKCSRIRDTVCATCAENSYNEHWNYLT ICQLCRPCDPVMGLEEIAPCTSKRKTQCRCQPGMFCAAWALECTHCELLS DCPPGTEAELKDEVGKGNNHCVPCKAGHFQNTSSPSARCQPHTRCENQG LVEAAPGTAQSDTTCKNPLEPLPPEMSGTMLMLAVLLPLAFFLLLATVFSC IWKSHPSLCRKLGSLLKRRPQGEGPNPVAGSWEPPKAHPYFPDLVQPLLPI SGDVSPVSTGLPAAPVLEAGVPQQQSPLDLTREPQLEPGEQSQVAHGTNGI HVTGGSMTITGNIYIYNGPVLGGPPGPGDLPATPEPPYPIPEEGDPGPPGLS TPHQEDGKAWHLAETEHCGATPSNRGPRNQFITHD(SEQ ID NO：2)。
在一些实施方案中，可溶性LTβR包括如SEQ ID NO：2的残基32-225 所示的LTβR分子的胞外区(如下列SEQ ID NO：11所示)。
AVPPYASENQTCRDQEKEYYEPQHRICCSRCPPGTYVSAKCSRIRDT VCATCAENSYNEHWNYLTICQLCRPCDPVMGLEEIAPCTSKRKTQCRCQP GMFCAAWALECTHCELLSDCPPGTEAELKDEVGKGNNHCVPCKAGHFQ NTSSPSARCQPHTRCENQGLVEAAPGTAQSDTTCKNPLEPLPPEMSGTM (SEQ ID NO：11)。
在一些实施方案中，所述全长、未成熟的LTβR R多肽是源自任何物种 (例如，任何表达如SEQ ID NO：2中所列人LTβR多肽的同源物的哺乳动物(例 如，小鼠、大鼠或猴))的全长、未成熟的LTβR多肽。在优选的实施方案中， LTβR多肽是人LTβR。在优选的实施方案中，所述LTβR多肽是人LTβR。
在一些实施方案中，所述LTβR模块(moiety)本身是可溶的。在一些实施 方案中，将LTβR与增加其可溶性的异源模块结合，所述异源模块例如，免 疫球蛋白分子的Fc区。在一些实施方案中，可以将所述异源模块与LTβR 模块共价结合。
在一些实施方案中，可溶性LTβR可以通过共价附接第二多肽模块例如 异源多肽(例如，来制备LTβR融合蛋白)或非多肽模块来修饰。在一些情况 下，这些模块可以改进药物动力学或药物代谢动力学参数，诸如可溶性或半 衰期。LTβR融合蛋白可以包括全部或部分的抗体恒定区(例如，Fc结构域)、 运铁蛋白或清蛋白，诸如人血清清蛋白(HSA)或牛血清清蛋白(BSA)。所述融 合蛋白可以包括LTβR序列和非LTβR蛋白结构域之间的接头区。在一些实 施方案中，通过与聚合物诸如聚乙二醇(PEG)共价附接来修饰可溶性LTβR。 尽管不受限于具体的理论或机制，这样的可溶性LTβR能够发挥诱导(阻断) LTβR活性的诱饵受体的作用。示例性可溶性LTβR是LTβR-Fc，例如，具有 下列SEQ ID NO：1序列的LTβR-Fc。 A V P P Y A S E N Q T C R D Q E K E Y Y E P Q H R I C C S R C P P G T Y V S A K C S R I R D T V C A T C A E N S Y N E H W N Y L T I C Q L C R P C D P V M G L E E I A P C T S K R K T Q C R C Q P G M F C A A W A L E C T H C E L L S D C P P G T E A E L K D E V G K G N N H C V P C K A G H F Q N T S S P S A R C Q P H T R C E N Q G L V E A A P G T A Q S D T T C K N P L E P L P P E M S G T M V (斜体的氨基酸表示信号序列；带下划线的氨基 酸表示源自LTβR胞外区的序列；且粗体氨基酸表示IgG Fc序列。将LTβR 序列与IgG-Fc序列连接的缬氨酸是人工的，既不来自LTβR也不来自IgG-Fc 序列。带下划线的序列是LTβR胞外结构域的重要部分(substantial part)并且 对应于SEQ ID NO：2的氨基酸32-225(见上文))。
“多肽”和“蛋白质”可互换使用，且表示肽键连接的氨基酸链，不考 虑长度或翻译以后修饰。在本发明的任何方法中使用的LTβR、异源多肽或 它们的融合蛋白可以包含人的蛋白质或者是人的蛋白质，或可以是具有不多 于50个(例如，不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20、25、 30、35、40或50个)保守氨基酸取代的变体。保守取代通常包括以下组内的 取代：甘氨酸和丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸；天冬氨酸和谷氨酸； 天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸和苏氨酸；赖氨酸、组氨酸和精氨酸；以及苯 丙氨酸和酪氨酸。只要：(i)这样的可溶性LTβR多肽的变体具有LTβR-Fc融 合蛋白(SEQ ID NO：1)诱导受试者中髓鞘再生的能力的至少25％(例如，至 少：30％；40％；50％；60％；70％；75％；80％；85％；90％；95％；97％； 98％；99％；99.5％或100％或者甚至更高)。
“多肽片段”如用于本文指比全长、未成熟的多肽短的多肽区段。多肽 的“功能性片段”具有成熟多肽的活性的至少10％(例如，至少10％，至少 15％，至少20％，至少25％，至少30％，至少35％，至少40％，至少50％， 至少55％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少95％，至少 98％，至少99％，至少99.5％，或100％或更高)。多肽的片段包括多肽的末 端缺失以及内部缺失变体。缺失变体可以缺乏1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸区段(由两个或更 多个氨基酸组成)或不连续的单个氨基酸。
除非另有定义，否则本文使用的全部技术和科学术语具有与本发明所属 技术领域普通技术人员通常理解的意思相同。下文将描述优选的方法和材 料，但是在本发明的实施或测试中可以使用与本文所述的方法和材料类似或 等同的那些。将全部本文提及的公开文献、专利申请、专利和其它参考文献 通过引用全文并入。本文公开的材料、方法和实例仅用作说明，并且不旨在 进行限制。
从以下描述、从附图和从权利要求书看，本发明的其它特性和优势将使 显而易见的。
附图说明
图2是描述在LtβR-/-和野生型小鼠中脱髓鞘化(demyelination)的严重性 的图示。按照描述脱髓鞘化严重性的等级(scale)，如通过LFB-PAS染色的石 蜡切片所测定的，0表示正常髓鞘化，且3表示完全脱髓鞘化。每个圆圈代 表一只单独的小鼠：空心圆圈，C57BL6野生型(wt)；实心圆圈，LtβR-/-小鼠。 水平线表示每组的中位数得分。
图3是描述在用Cuprizone处理之后在中线胼胝体处检测到的成熟少突 胶质细胞数的图示。野生型小鼠用灰色条形图表示；LtβR-/-小鼠用黑色条形 图表示。
图4是描述在用Cuprizone处理之后在中线胼胝体处检测到的小胶质细 胞/巨噬细胞数的图示。野生型小鼠用灰色条形图表示；LtβR-/-小鼠用黑色条 形图表示。
图5是描述在施用hLtβR-Ig或人Ig对照之后野生型C57BL6小鼠中脱 髓鞘化的严重性的图示。按照描述脱髓鞘化严重性的等级，如通过LFB-PAS 染色的石蜡切片所测定的，0表示正常髓鞘化，且3表示完全脱髓鞘化。每 个圆圈代表一只单独的小鼠：空心圆圈，用人Ig处理的小鼠；实心圆圈， 用hLtβR-Ig处理的小鼠。水平线表示每组的中位数(median)得分。
图6是描述在施用mLtβR-Ig或小鼠Ig对照之后野生型C57BL6小鼠中 脱髓鞘化的严重性的图示。按照描述脱髓鞘化严重性的等级，如通过 LFB-PAS染色的石蜡切片所测定的，0表示正常髓鞘化，且3表示完全脱髓 鞘化。每个圆圈代表一只单独的小鼠：空心圆圈，小鼠Ig处理的小鼠；实 心圆圈，用mLtβR-Ig处理的小鼠。水平线表示每组的中位数得分。
详述
本文所述的可溶性LtβR是淋巴毒素(LT)途径抑制剂，并且被证明促进 髓鞘再生。因此，可溶性LtβR可用于治疗脱髓鞘病。脱髓鞘病可以包括， 例如，多发性硬化(例如复发性/间歇性多发性硬化、继发性进行性多发性硬 化、进行性复发性多发性硬化、原发性进行性多发性硬化和急性暴发性多发 性硬化)，中心性脑桥髓鞘破坏，急性散播性脑脊髓炎，进行性多病灶脑白 质病；亚急性硬化性全脑炎，传染后脑脊髓炎，慢性炎性脱髓鞘性多神经病， 归-伯二氏综合征，进行性多病灶脑白质病，德维克氏病，白洛氏同心性硬 化，和脑白质营养不良(例如，异染性脑白质营养不良，克拉贝氏病，脑白 质肾上腺萎缩症，佩-迈二氏病，卡纳万氏病，伴有中心性髓鞘形成不足的 儿童共济失调，亚历山大氏病或雷弗素姆氏病)。本文所述的剂和方法尤其 适合于治疗多发性硬化。
多发性硬化是中枢神经系统的自发性疾病，其中机体的免疫系统攻击攻 击脑和脊髓中的髓磷脂。无论所述疾病表现为炎症的反复发作还是表现为慢 性症状，其通常导致髓磷脂鞘上的多处瘢痕(硬化)，导致神经功能的缺损或 丧失。多发性硬化可以在任何年龄的患者中出现，尽管主要影响青壮年。多 发性硬化的症状包括，例如，视力或认知功能的损伤，麻木，肢无力，震颤 或痉挛，热耐受不良，语言障碍，失禁，或本体感觉损伤。患有多发性硬化 的患者通常还患有抑郁症(depression)。
在向受试者(例如，人患者)施用含有可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)的组 合物之后，可以评定所述治疗对脱髓鞘病(例如，多发性硬化)的效力(即，因 所述治疗产生的髓鞘再生)，例如，通过将患者在治疗之前和之后的脱髓鞘 病的程度进行比较。治疗后的评定可以立即进行，或在治疗之后不久(例如， 治疗后1小时，治疗后2小时，治疗后3小时，治疗后6小时，治疗后12 小时，或治疗后18小时)进行，或者可以在治疗后至少一天(例如，至少1天， 至少2天，至少3天，至少5天，至少1周，至少2周，至少3周，至少5 周，至少2个月，至少6个月，或至少1年)进行。在有待评估于一次或多 次LTβR-Fc治疗(例如，一次或多次诱导髓鞘再生的治疗)之后多发性硬化改 善的进展的情况下，可以在LTβR-Fc治疗之后的多个时间点评估或测量患者 的症状和认知能力(例如，一日、两日和一周评估；一周、一个月和六个月 评估；一个月、六个月和一年评估)。脱髓鞘病(例如，多发性硬化)的改善的 进展可以包括测量或评定，例如，患者中脱髓鞘病灶大小或数量的改变，或 神经功能的改变(即，改善)。
合适的用于评估脱髓鞘病(例如，多发性硬化或任何其它本文所述的脱 髓鞘病)的程度或严重性的方法是本领域公知的。例如，患者中多发性硬化 的出现、程度或严重性可以藉由多种定量试验和评估的使用来评定。例如， 可以对患者进行腰椎穿刺(即，腰椎穿刺)以获得脑脊液样品。其后测试脑脊 液中例如以下各项的存在：(i)异常蛋白诸如髓磷脂的微小片段，(ii)淋巴细胞 水平的升高或特殊类型的淋巴细胞，和/或(iii)免疫球蛋白(IgG)分子的异常水 平。脱髓鞘病定量测试的另一实例是诱发电位测试，其将神经活性作为神经 冲动从眼、耳或皮肤到达脑所用时间的函数来测量。脱髓鞘病也可使用数种 成像方法中的任一种通过评估存在于中枢神经系统的炎性病灶(即，硬化)的 大小和/或数量来评定，所述成像方法包括，但不限于，磁共振成像(MRI)扫 描、正电子发射断层成像术(PET)扫描、弥散加权成像(DW-I，或DW-MRI)、 弥散张量成像、脊髓造影术、磁化转移。对患者的诊断也可以使用对患者神 经心理学(例如，多种能力状态，诸如记忆力、运算能力、注意力、判断力 和推理能力)或由患者表现的症状(临床症状)包括例如任何上述多发性硬化 的症状的多种半定量或定性评定来进行。此外，脱髓鞘病的程度或进展可以 通过测试患者尿的髓磷脂碱性蛋白样物质(MBPLM)水平的升高来检测，所述 物质因疾病进展中产生的轴突损伤而开始增加(参见，例如，Whitaker等(1995) Ann.Neurol.38(4)：635-632)。对色盲的某些测试也可以有助于跟踪脱髓鞘病 对眼的影响。
任何上述诊断方法也可用于评估用可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)治疗之 后受试者中髓鞘再生的增加。例如，髓鞘再生可能与藉由任何本文所述成像 方法测定的患者中存在的硬化的大小或数量的减少同时发生。同样，受试者 中的髓鞘再生可以根据如基因诱发电位测试所测定的眼、耳或皮肤向脑传导 信号速度的增加来测量。在一些情况下，髓鞘再生可以根据白质体积(例如， 脊柱或脑的神经物质)的增加来评估，尤其是在脱髓鞘病导致神经萎缩的情 况下。在一些情况下，受试者中髓鞘再生的程度和出现可以通过使用例如磁 共振波谱扫描直接测量受试者中髓磷脂的厚度来评定。
给定的治疗在脱髓鞘病(例如，多发性硬化)治疗中的效力(即，髓鞘再生 的程度)可以定义为脱髓鞘病的一种或多种症状(例如，任何上述症状)改善至 少5％(例如，至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至 少40％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％或更多)。在一些情况 下，可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)治疗的效力可以根据一种或多种与多发性 硬化有关的正在恶化症状的稳定化(即，所述治疗减轻了多发性硬化的一种 或多种症状的恶化)来测定。也可使用任何本文所述的诊断方法(例如，MRI 或PET)来评估对患者的治疗效力或患者中的髓鞘再生程度。例如，用 LTβR-Fc治疗之后脱髓鞘病灶(硬化)大小或数量的改善可以使用MRI监控。
联合治疗
本文所述的方法和组合物可以与其它用于治疗脱髓鞘病的治疗联用。例 如，可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)组合物可以与针对多发性硬化的直接治疗 联用，所述直接治疗诸如，但不限于，干扰素β1a(Avonex(干扰素β1a粉 针剂))、干扰素β1b(Rebif)、醋酸格拉默(Copaxone)、米托蒽醌(Novantrone(诺 消灵))、硫唑嘌呤(Imuran(依木兰))、环磷酰胺(Cytoxan(环磷酰胺制剂)或 Neosar(环磷酰胺注射剂))、环孢菌素(Sandimmune(山地明))、氨甲喋呤、克 拉屈滨(Leustatin)、甲泼尼龙(Depo-Medrol或Solu-Medrol(甲强龙制剂))、泼 尼松(Deltasone)、泼尼松龙(Delta-Cortef)、地塞米松(Medrol(美卓乐)或 Decadron)、促肾上腺皮质激素(ACTH)或促皮质素(Acthar(促皮质素注射 剂))。
本文提供的方法和组合物(例如，可溶性LTβR诸如LTβR-Fc)也可以与 设计用于治疗与脱髓鞘病相关的症状的治疗联用。在脱髓鞘病是多发性硬化 的情况下，例如，可以将可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)与针对与多发性硬化 相关的疼痛的一种或多种治疗联合施用，所述治疗包括，例如，卡马西平 (carbamazepine)、加巴喷丁(gabapentin)、托吡酯(topiramate)、唑尼沙胺 (zonisamide)、苯妥英(phenytoin)、己酮可可碱(pentoxifylline)、布洛芬 (ibuprofen)、阿司匹林(aspirin)或扑热息痛(acetaminophen)。可溶性LTβR(例 如，LTβR-Fc)也可以与针对与多发性硬化有关的焦虑症或抑郁症的一种或多 种治疗联合施用，所述治疗包括，例如，氟西汀(fluoxetine)、舍区林(sertraline)、 文拉法辛(vanlafaxine)、西酞普兰(citalopram)、帕罗西汀(parocetine)、曲唑酮 (trazodone)、安非他酮(buproprion)、地西泮(diazepam)、或阿米替林 (amitriptyline)。
此外，可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)可以与针对多发性硬化的其它症状 的一种或多种治疗联合施用，包括，针对失禁(例如，奥西布宁(oxybutynin)、 bethane或丙米嗪(imipramine))，震颤或痉挛(例如，巴氯芬(baclofen)、丹曲 林钠(dantrolene sodium)或替扎尼定(tizanidine))，或眩晕(vertigo)(例如，美克 洛嗪(meclizine)、茶苯海明(dimenhydrinate)、丙氯拉嗪(prochlorperazine)或东 茛菪碱(scopolamine))。
本发明还包括将本文所述的方法和组合物与能够引起脱髓鞘状态的治 疗或药物联合使用。例如，用于治疗类风湿性关节炎的抗TNF治疗的副作 用能够导致某种类型的脱髓鞘症状。因此，可以将可溶性LTβR(例如， LTβR-Fc)与抗TNF治疗联合施用(例如，共同施用)以预防、改善或逆转脱髓 鞘副作用并促进髓鞘再生。抗TNF治疗包括，但不限于，阿达木单抗 (adalimumab)(Humira)、依那西普(etanercept)(Enbrel)或英夫利昔单抗 (infliximab)(Remicade)。
任何本文所述的方法或组合物概括而言可以用在任何增加髓鞘再生将 是有利的情况下。
在一些情况下，将可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)用作二线治疗(second line therapy)。例如，被测定为对脱髓鞘病(例如，多发性硬化)的一种或多种 治疗无响应的患者将停止接受所述一种或多种治疗，并且将开始用可溶性 LTβR，例如，LTβR-Fc治疗。或者，该患者将继续接受所述一种或多种对脱 髓鞘病的治疗，同时接受用可溶性LTβR的治疗。
药物组合物
可以将可溶性LTβR例如LTβR-Fc配制成药物组合物，例如，用于向受 试者施用以制疗脱髓鞘病，诸如多发性硬化。通常，药物组合物包含可药用 载体。如用于本文，“可药用载体”包括任何以及所有生理上兼容的溶剂、 分散介质(dispersion media)、包衣(coating)、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收 延迟剂等。所述组合物可以包括可药用盐，例如，酸加成盐或碱加成盐(参 见例如，Berge等，J.Pharm.Sci.66：1-19，1977)。
可以将可溶性LTβR根据标准方法配制。药物配制是发展成熟 (well-established)的技术，并且在例如Gennaro(ed.)，Remington：The Science and Practice of Pharmacy，20th ed.，Lippincott，Williams&Wilkins(2000) (ISBN：0683306472)；Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，7th Ed.，Lippincott Williams&Wilkins Publishers(1999) (ISBN：0683305727)；和Kibbe(ed.)，Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association，3rd ed.(2000)(ISBN：091733096X)中有 进一步的描述。
在一种实施方案中，可以将可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)与赋形物质一 起配制，所述赋形物质诸如氯化钠、七水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和稳定 剂。可以将其以合适的浓度在例如缓冲溶液中提供，并且可以贮藏在2-8℃。
药物组合物可以是多种形式。这些包括，例如，液体、半固体和固体剂 量形式，诸如液态溶液(例如，可注射和可输注溶液(injectable and infusible solution))、分散剂或悬液(dispersion or suspension)、片剂(tablet)、丸剂(pill)、 粉末(powder)、脂质体(liposome)和栓剂(suppository)。优选的形式可以依赖 于预期的施用和治疗应用模式。用于本文所述的剂的组合物通常是可注射或 可输注溶液的形式。
这样的组合物可以通过胃肠外模式施用(例如，静脉内、皮下、腹膜内 或肌内注射)。短语“胃肠外施用”和“胃肠外地施用”用于本文的意思是 除了肠内(enteral)和局部(topical)施用之外的施用模式，通常通过注射，并且 包括，但不限于，静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、 腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬 膜外、脑内、颅内、颈动脉内和胸骨内注射和输注。
所述组合物可以配制为溶液、微乳剂(microemulsion)、分散剂、脂质体 或适合以高浓度稳定贮藏的其它有序结构。无菌注射溶液可以这样来制备， 将所需量的本文所述的剂按照需要与上述成分之一或上述成分的组合一起 并入适当溶剂中，接着进行过滤灭菌。分散剂通常通过将本文所述的剂并入 无菌运载体(vehicle)来制备，所述无菌运载体含有基础分散介质(basic suspension medium)和来自上文列举的那些的其它所需成分。在用于制备无菌 注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是从之前经无菌过滤的下述 物质的溶液生成本文所述的剂与任何附加的期望成分的粉末的真空干燥和 冷冻干燥。例如，溶液的适当流动性可以通过使用包衣诸如磷脂酰胆碱来保 持，在分散剂的情况下通过维持所需的颗粒大小来保持，和通过使用表面活 性剂来保持。对注射组合物延长的吸收可以通过在组合物中包括延长吸收的 剂(例如，单硬脂酸盐和明胶)来实现。
在某些实施方案中，可以将可溶性LTβR与将会保护化合物不被迅速释 放的载体一起配制，诸如控释剂型，包括植入物，和微囊化的递送系统。可 以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯(ethylene vinyl acetate)、聚酐(polyanhydride)、聚乙醇酸(polyglycolic acid)、胶原 (collagen)、聚正酯类(polyorthoester)和聚乳酸(polylactic acid)。许多用于制备 这些剂型的方法已有专利或是公知的。参见，例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson，ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。
可以对可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)进行修饰，例如，使用将其在循环 中(例如，血液、血清或其它组织中)的稳定性和/或保持力(retention)改进例如 至少1.5、2、5、10或50倍的模块来修饰。可以对经修饰的剂进行评估以评 定其是否能够达到炎症部位(例如，病灶或硬化)，诸如是否能够在脱髓鞘病 (诸如多发性硬化)中出现(例如，通过使用所述剂的标记形式)。
例如，可以将可溶性LTβR与聚合物结合，例如，基本上无抗原性的聚 合物，诸如聚环氧烷(polyalkylene oxide)或聚环氧乙烷(polyalkylene oxide)。 合适的聚合物在重量上将显著不同。可以使用分子序数平均重量范围在约 200至约35000Daltons(或约1000至约15000，和2000至约12500)的聚合物。
例如，可以将可溶性LTβR与水溶性聚合物偶联，例如，亲水聚乙烯聚 合物，例如，聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮。这类聚合物的非限定性列表包括 聚环氧烷均聚物诸如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇，聚氧乙烯化多元醇，它们 的共聚物和它们的嵌段共聚物，只要所述嵌段共聚物的水溶性得到保持。其 它有用的聚合物包括聚氧化烯诸如聚氧乙烯，聚氧丙烯，和聚氧乙烯和聚氧 丙烯的嵌段共聚物(Pluronics)；聚甲基丙烯酸酯；卡波姆；和支链或直链多 糖。
在将可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)与第二种剂(例如，任何本文所述的 针对多发性硬化和其它脱髓鞘病的治疗)联合使用时，可以将所述两种剂单 独配制或配制在一起。例如，可以将各药物组合物混合，例如，在施用之前 即刻混合，再共同施用；或者可以分开施用，例如，在同时或不同时间分开 施用。
施用
可以通过多种方法向受试者(例如，人受试者)施用可溶性LTβR(例如， LTβR-Fc)。对于多种应用，施用途径是下列之一：静脉内注射或输注(IV)、 皮下注射(SC)、腹膜内方式(IP)或肌内注射。在一些情况中，施用可以直接 进入CNS，例如，鞘内、脑室内(ICV)、大脑内或颅内施用。可以将所述剂 作为固定的剂量施用或按照mg/kg的剂量施用。
也可以对剂量进行选择以降低或避免针对所述剂产生抗体。
可溶性LTβR的施用途径和/或模式也可以针对个体情况调整(tailor)，例 如，通过测定受试者中硬化的位置、数量或大小，例如，使用磁共振成像(MRI) 扫描，正电子发射断层成像术(PET)扫描、弥散加权成像(DW-I，或DW-MRI)、 弥散张量成像、脊髓造影术、磁化转移。脱髓鞘病的严重性或程度也可根据 腰椎穿刺(例如，检查脑脊液中白细胞的升高)、测量神经功能的诱发电位测 试、和/或任何与脱髓鞘病(例如，多发性硬化)相关的其它标准参数(例如，任 何本文所述的评定标准)来测定。
调整给药方案(dosage regimen)以提供期望的响应，例如，治疗响应或组 合治疗效果。例如，给药方案将引起髓鞘再生的增加。通常，任选地单独配 制或与适当剂量的第二治疗剂共同配制的可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)剂量 可用于向受试者提供可溶性LTβR。用于可溶性LTβR的合适的剂量和/或剂 量范围包括足以引起受试者中髓鞘再生增加的量。合适的剂量可以是任何本 文所述的那些，并且包括，例如，每kg受试者(例如，人患者)体重至少约 0.001mg可溶性LTβR的剂量。
增加髓鞘再生所需的可溶性LTβR(例如，LTβR融合多肽，诸如LTβR-Fc) 剂量可能依赖于多种因素，包括，例如，待治疗受试者的年龄、性别和重量。 其它影响施用于受试者的剂量的因素包括，例如，脱髓鞘病的类型或严重性。 例如，患有急性暴发性多发性硬化的患者可能需要施用不同于患有较轻形式 多发性硬化的可溶性LTβR剂量。其它因素可以包括，例如，并发的或曾经 影响该患者的其它疾病，患者的一般健康状况(general health)，患者的遗传因 素(genetic disposition)，饮食，施用时间，排泄速率，药物组合，和向该患者 施用的任何其它附加的治疗。还应该理解针对任何具体患者的特定剂量和治 疗方案将依赖于治疗医生的判断。活性成分的量也将依赖于具体描述的化合 物，以及组合物中附加抗病毒剂的存在与否和性质。
剂量单位形式或“固定剂量”用于本文指适合作为单位剂量用于待治疗 受试者的物理上离散的单位；每单位含有经计算可产生期望治疗效果(例如， 受试者中髓鞘再生的增加)的预定量的活性化合物，连同所需药用载体，并 且任选地连同其它剂。合适的施用频率在本文其它地方描述。
药物组合物可以包括治疗有效量的本文所述的可溶性LTβR。这样的有 效量可以基于施用的剂的效果测定，或者如果使用多于一种剂，那么可以基 于剂与第二种剂的组合效果测定。剂的治疗有效量也可根据多种因素变化， 所述因素诸如个体的疾病状态、年龄、性别和重量，以及化合物在个体中引 起期望的响应的能力，例如，至少一种疾病参数的改善，例如，脱髓鞘病(例 如，多发性硬化)的至少一种症状的改善。例如，治疗有效量的可溶性LTβR 将增加髓鞘再生并且还能够减缓和/或改善脱髓鞘化。治疗有效量还是一种所 述组合物的治疗有益效果超过任何毒性或有害效果的量。
装置和试剂盒
包括可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)的药物组合物可以用医疗设备施用。 可以将所述设备设计为具有诸如便携、室温贮藏和易于使用等特性，从而使 其能够在紧急情况下使用，例如，由未经训练的受试者或由专业急救人员 (emergency personnel in the field)使用，能够移至医疗设施和其它医疗器材。 所述设备可以包括，例如，一个或多个用于贮藏包括可溶性LTβR的药物制 备物的壳体(housing)，并且能够被配置成递送一个或多个单位剂量的所述 剂。
例如，可以将所述药物组合物用经皮递送装置诸如注射器(包括皮下或 多腔注射器)来施用。其它合适的递送装置包括支架、导管、经皮贴片 (transcutaneous patch)、微型针(microneedle)和植入式控释设备(implantable controlled release device)。
设备(例如，注射器)可以包括干燥或液体形式的可溶性LTβR，其剂量足 以引起髓鞘再生。所述设备也可以是双腔设备，其中一个腔含有足以引起受 试者中髓鞘再生增加的单位剂量的冻干可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)，而第 二个腔含有液体(例如，缓冲液)，用于重建所述冻干的单位剂量的可溶性 LTβR。
在其它实例中，可以使用无针皮下注射设备施用所述药物组合物，诸如 US 5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；或 4,596,556中描述的设备。熟知的植入物和模块的实例在例如以下专利文献中 描述：US 4,487,603，其公开了一种以受控速率分配药物的植入式微型输注 泵；US 4,486,194，其公开了一种用于经由皮肤施用药物的治疗设备； US 4,447,233，其公开了一种以精确输注速率递送药物的药物输注泵；US 4,447,224，其公开了一种用于持续递送药物的可变流速植入式输注装置；US 4,439,196，其公开了一种具有多腔区室的渗透压药物递送系统；和US 4,475,196，其公开了一种渗透压药物递送系统。许多其它设备、植入物、递 送系统和模块也是已知的。
可以将可溶性LTβR(例如，LTβR-Fc)在试剂盒中提供。在一种实施方案 中，所述试剂盒包括(a)含有组合物的容器，所述组合物包括一个或多个单位 剂量的可溶性LTβR；和任选地(b)信息材料。可溶性LTβR的单位剂量足以 引起受试者中髓鞘再生增加。所述信息材料可以是说明性的、指导性的、市 场性的或与本文所述方法和/或使用所述剂用于治疗效益有关的其它材料。所 述试剂盒还可以包括用于测试(测定)髓鞘再生的试剂和说明书。这些测定髓 鞘再生的方法包括，但不限于，任何本文所述的测试方法。在一种实施方案 中，所述试剂盒包括一种或多种用于治疗脱髓鞘病的附加的剂，诸如一种或 多种治疗多发性硬化的剂。例如，所述试剂盒包括第一容器，其含有包括可 溶性LTβR的组合物，以及第二容器，其包括一种或多种附加的剂。
所述试剂盒的信息材料不受限于它的形式。在一种实施方案中，所述信 息材料可以包括有关化合物的生产、化合物的分子量、浓度、有效期、批次 或生产地的信息等。在一种实施方案中，所述信息材料涉及施用可溶性LTβR (例如，LTβR-Fc)，例如，以合适的剂量、剂量形式或施用模式施用，以治 疗患有脱髓鞘病、或有风险患上、或正在经历与脱髓鞘病相关的发作的受试 者的方法。所述信息可以以多种形式提供，包括印刷文本、计算机可读的材 料、影像记录或录音，或提供实质材料的链接或地址的信息。
除了所述剂，试剂盒中的组合物可以包括其它成分，诸如溶剂或缓冲液， 稳定剂，或防腐剂。所述剂可以以任何形式提供，例如，液体，干燥的或冻 干的形式，优选基本上纯的和/或无菌的。在将所述剂提供在液态溶液中时， 所述液态溶液优选是水溶液。在将所述剂作为干燥形式提供时，重建通常通 过添加合适的溶剂进行。所述溶剂(例如，无菌水或缓冲液)可以任选地在试 剂盒中提供。
试剂盒可以包括用于一种或多种含有所述剂的组合物的一个或多个容 器。在一些实施方案中，所述试剂盒含有分别用于组合物和信息材料的容器、 分隔器(divider)或区室。例如，所述组合物可以包含在瓶、小瓶或注射器中， 而信息材料可以包含在塑料套或包中。在其它实施方案中，试剂盒中的各元 件可以包含在单一的、非分隔的容器内。例如，所述组合物包含在瓶、小瓶 或注射器中，在所述瓶、小瓶或注射器上以标签的形式附有信息材料。在一 些实施方案中，所述试剂盒包括多个(例如，一包)单独的容器，每个含有一 个或多个单位剂量形式(例如，本文所述的剂量形式)的所述剂。所述容器可 以包括组合单位剂量，例如，包括可溶性LTβR和第二种剂二者的单位，例 如，以期望的比例包括上述二者的单位。例如，所述试剂盒包多个注射器、 安瓿、锡箔包(foil packet)、泡包装(blister pack)或医疗设备，例如，每个含有 单一组合单位剂量。所述试剂盒的容器可以是气密的、防水的(例如，湿度 的变化或蒸发无法渗透)和/或不透光的。
所述试剂盒任选地包括适合于施用所述组合物的设备，例如，注射器或 其它合适的递送装置。提供的所述设备可以预先装载有所述剂中的一种或全 部两种，或者可以是空的，但是适合进行装载。
制备可溶性LTβR的方法
制备可溶性LTβR的合适方法是本领域已知的，并且在例如WO 97/03687、WO 98/17313、WO 00/21558、WO 99/38525、WO 00/36092中描 述。例如，可以在降低的温度在细胞培养物(例如，哺乳动物细胞培养物(诸 如猴COS细胞或中国仓鼠卵巢细胞)或酵母培养物)中表达LTβR免疫球蛋白 融合蛋白以产生更大量的正确折叠的融合蛋白。可以将表达的融合蛋白纯 化，例如，通过亲和或常规层析技术(参见，例如，WO 00/36092)。将所有 上述PCT申请通过引用全文并入本文。
以下实施例意在说明本发明，而非限制。
实施例
实施例1. 材料和方法
动物。C57BL6小鼠购自Jackson Laboratories(Bar Harbor，Maine)，并且 饲养在北卡罗来纳大学(UNC)动物实验室(animal facility)的动物房中。将 LtβR-/-小鼠饲养在UNC动物实验室的动物房中。全部规程按照国立卫生研究 所(NIH)的进行，并且经过Institutional Guide for the Care and Use of Laboratory Animals(实验动物饲养和使用管理手册)Animal Care and Use Committee of UNC at Chapel Hill的批准。全部小鼠在开始Cuprizone处理之 前均为8-10周龄。
处理小鼠。为雄性LtβR-/-和C57BL6野生型小鼠任意(ad libitum)喂食混 合在磨碎的食物(milled chow)中的0.2％Cuprizone[双环己酮草酰二腙(oxalic bis(cyclohexylidenehydrazide))](Aldrich，St.Louis，MO)。对小鼠进行3、3.5、 4或5周的处理以研究脱髓鞘化过程。对于髓鞘再生，使小鼠在6整周的 Cuprizone处理之后回归正常粒状食物饮食1、2或4周。未处理小鼠保持正 常粒状食物饮食。
人和小鼠LtβR-Ig以及它们的对照均由J.Browning博士(Biogen Idec， Cambridge，MA)友情提供，并且在Gommerman等(2003)J.Clin.Invest. 112：755-767中有描述。为了研究脱髓鞘化，在第-1天和之后的每周用腹膜 内注射的5mg/kg人LtβR-人Ig(hLtβR-IgG-1Fc)或人-Ig对照预处理小鼠。处 理后的范例由6整周的Cuprizone处理组成。在5周零2天的Cuprizone处 理之后(接近脱髓鞘化的最高值(height))，为小鼠提供腹膜内注射的小鼠 LtβR-小鼠IgG-1或匹配的对照MOPC-21，继而每周进行注射，进行到第10 周(followed by weekly injections out to 10weeks)。已经证明了这种LtβR-Ig的 鼠类版本在小鼠中抗原性较低。
组织制备和组织病理学分析。用石蜡包埋的头冠脑切片(coronal brain section)制备自胼胝体的穹窿区。通过三位双盲读数者对勒克司监牢蓝-过碘 酸希夫(Luxol fast blue-periodic acid Schiff)(LFB-PAS)染色的切片进行读数， 并且按照从0(完全髓鞘化)到3(完全脱髓鞘化)的等级分级，如Arnett等(2001) Nat.Neurosci.4：1116-1122和Plant等(2005)Glia 49：1-14中所述。
免疫组织化学。对成熟少突胶质细胞、小胶质细胞/巨噬细胞和星形胶质 细胞的检测通过免疫组织化学来进行(Plant等(2005)Glia 49：1-14)。对GSTπ 和RCA-1阳性细胞的定量分析限定于中线胼胝体处的0.033mm2区域。仅将 具有可观察到的DAPI染色核的免疫阳性细胞包括在定量中。细胞计数是每 个时间点至少9只且多至14只小鼠的平均值。通过免疫组织化学来检测有 髓鞘的纤维，其中使用髓磷脂碱性蛋白的一抗(primary antibody)(Sternberger Monoclonals Inc.Lutherville，MD)，继之以1∶1000稀释的荧光素偶联的抗小 鼠IgG(Invitrogen，Carlsbad，CA)。
原位杂交。在Cuprizone处理之后，为小鼠灌注不含RNA酶的PBS， 然后再灌注4％多聚甲醛(paraformaldehyde)。取出脑并且在固定剂中温育直 至封固可用于冷冻切片为止。对LtβR mRNA的检测通过原位杂交如Schmid 等(2002)J.Neurochem.83：1309-1320中所述进行。
RT-PCR和定量实时RT-PCR。在Cuprizone处理过程中和处理之后的几 个点，从含有野生型和LtβR-/-小鼠胼胝体的脑解剖区分离总RNA。RNA分 离使用Qiagen RNeasy试剂盒在不含RNA酶的条件下进行(Qiagen，Valencia， CA)。对LIGHT的RT-PCR在20μl反应中使用以下引物进行：5’引物： CTGGCATGGAGAGTGTGGTA(SEQ ID NO：3)；3’引物： GATACGTCAAGCCCCTCAAG(SEQ ID NO：4)。
TaqMan 5′核酸酶定量实时PCR测定法使用ABI Prism 7900序列检测系 统(PE Applied Biosystems，Foster City，CA)在15μl含有通用总混合物 (Invitrogen)、200nM LtβR靶引物和100nM探针的反应中进行。将LtβR特 异性引物设计为跨越内含子-外显子连接处以区别cDNA和基因组DNA。用 于检测小鼠LtβR的引物和探针如下：5′引物， GTACTCTGCCAGCCTGGCACAGAAGCCGAGGTCACAGATG(SEQ ID NO：5)；3′引物，GGTATGGGGTTGACAGCGGGCTCGAGGGGAGG(SEQ ID NO：6)；探针，Fam-ACGTCAACTGTGTCCC-Tamra(SEQ ID NO：7)。用于小 鼠18S核糖体RNA的引物和探针是：5′引物，GCTGCTGGCACCAGACTT (SEQ ID NO：8)；3′引物，CGGCTACCACATCCAAGG(SEQ ID NO：9)；探针， Fam-CAAATTACCCACTCCCGACCCG-Tamra(SEQ ID NO：10)。将热循环参 数优化为50℃2分钟，95℃2分钟，和包含95℃15秒变性和56℃1.5分钟 退火-延伸的40个循环。在每个实验过程中将18S的反应与LtβR的平行进 行，并且用于标准化cDNA的量。
统计分析。使用不成对斯氏t检验以统计学评估显著差异。将数据表示 为平均值±s.e.m。
实施例2.脑中的LtβR定位和LIGHT表达
Ltα和Ltβ存在于多种造血细胞中，而LtβR在树突细胞和单核细胞以及 非造血细胞、小结树突细胞和毛细血管后微静脉的大多数谱系中表达 (Gommerman等(2003)Nat.Rev.Immunol.3：642-655)。Ltα和Ltβ也已经在 星形胶质细胞上检出，同时LtβR已经在星形胶质细胞和单核细胞来源的细 胞上检测到(Cannella等(1997)J.Neuroimmunol.78：172-179和Plant等Glia 49：1-14)。为了在Cuprizone模型中评定LtβR的表达，我们进行了定量实时 RT-PCR来检验未经处理的和经Cuprizone处理的小鼠的脑中LtβR的水平。 从用Cuprizone处理了3、3.5、4或5周的小鼠获得了脱髓鞘化时间点，同 时从处理了6周的小鼠和随后取消Cuprizone 1、2或4周(对应于7、8和10 周)的小鼠获得了髓鞘再生时间点。使用LtβR基因和核糖体18S特异性的 Taqman探针来检测从脑RNA样品生成的cDNA中的转录物。如图1中所示， 在Cuprizone处理期间(直到第6周)(整个脱髓鞘阶段)野生型小鼠中的LtβR mRNA表达稳步升高。在髓鞘再生阶段(第7-10周)LtβR mRNA表达水平回 落至正常水平。在未经处理的对照小鼠中检测到了低水平的LtβR。
为了确定表达LtβR的细胞类型，使用原位杂交来定位未经处理的和经 Cuprizone处理的小鼠脑中的LtβR。在处理之前LtβR不在脑中表达。通过3 周的Cuprizone处理，在胼胝体区检测到了小量的LtβR，然而，通过5周的 处理，在该炎性区中检测到了LtβR的显著上调。为了测定哪种细胞类型表 达LtβR，将原位杂交与免疫组织化学分析偶联。使用生物素化的番茄凝集 素使脑冷冻切片中的小胶质细胞和巨噬细胞显影，使用GFAP特异性抗体使 星形胶质细胞显影，使用CNP特异性抗体使少突胶质细胞显影，并使用NeuN 特异性抗体使神经元显影。仅在凝集素阳性的细胞中能够检测到LtβR表达。 这些结果表明活化的小胶质细胞和/或巨噬细胞在Cuprizone诱导的炎症和脱 髓鞘化过程中表达LtβR，而非星形胶质细胞、少突胶质细胞或神经元。
尽管不受限于任何特定理论或机制，但是考虑到前述的发现，即星形胶 质细胞是Ltα的来源(Plant等(2005)Glia 49：1-14)，这些数据提出星形胶质 细胞和小胶质细胞之间的Ltαβ-LtβR信号传导主要参与了发生在Cuprizone 处理期间的炎性脱髓鞘过程。除了Ltαβ，LtβR与膜结合配体LIGHT(与淋巴 毒素同源，呈现诱导型表达，并且与单纯疱疹病毒糖蛋白D竞争疱疹病毒输 入介质(herpes-virus entry mediator)(HVEM)，一种由T淋巴细胞表达的受体) 相互作用(Granger等(2001)J.Clin.Invest.108：1741-1742)。LIGHT似乎主要 定位在T细胞、未成熟的树突细胞、粒细胞和单核细胞(Gommerman等Nat. Rev.Immunol.3：642-655)，但是在脑中尚未得到充分表征。为了测定LIGHT 表达在Cuprizone处理期间是否有变化，通过RT-PCR分析了脑组织的LIGHT 表达。尽管LIGHT以高水平存在于对照脾和胸腺中，但是在未经处理的或 经Cuprizone处理的小鼠的脑中存在的水平极低可以忽略。此外，LIGHT不 因LtβR存在受到调节，因为缺乏LtβR的小鼠在脑中表达相似水平的LIGHT。 尽管不受限于任何特定理论或机制，这些数据提示了LIGHT在Cuprizone 诱导的炎症过程中不扮演重要角色。
实施例3.LtβR-/-小鼠中延迟的脱髓鞘化
Ltα的存在加重了由Cuprizone处理诱导的脱髓鞘化(Plant等(2005)Glia 49：1-14)。此外，Ltα的缺乏未改变从饮食中去掉Cuprizone之后的髓鞘再生 过程和少突胶质细胞祖先的增殖。Ltα能够作为同源三聚分子通过TNF受体 进行信号传导来发挥作用，也能够作为与Ltβ一起的异源三聚分子通过LtβR 进行信号传导来发挥作用。尽管之前分析过TNF受体在Cuprizone模型中的 功能(Arnett等(2001)Nat.Neurosci.4：1116-1122)，但是LtβR在这种模型中的 功能尚为未知。为了分析LtβR的功能，用小鼠饮食中0.2％Cuprizone对缺 乏这种基因的小鼠和野生型对照进行3、3.5、4或5周的处理。与野生型对 照小鼠相比，如通过LFB-PAS染色所评定的，LtβR-/-小鼠展现出脱髓鞘化的 显著延迟(图2)。由三位双盲调查者评定了用LFB-PAS染色的石蜡切片。在 3周(p＜0.02)、3.5周(p＜0.01)和4周(p＜0.001)时观察到了野生型和LTβR-/-小 鼠在脱髓鞘化上的显著差异。尽管不受限于任何特定理论或机制，这些数据 表明通过LtβR的信号传导加重了炎性脱髓鞘化过程。这种延迟早在第3周 时即可见(p＜.02)，但是在处理3.5周(p＜.01)和4周(p＜.001)时最显著，并 且由处理4周时野生型和LtβR-/-小鼠的代表性LFB-PAS图像清楚地揭示。 LtβR-/-小鼠中脱髓鞘化的延迟类似于在Ltα-/-小鼠中观察到的脱髓鞘化的延 迟(Plant等(2005)Glia 49：1-14)，因此，尽管不受限于任何特定的理论或机 制，这些结果说明了通过LtβR的膜结合Ltαβ信号传导参与了脱髓鞘化过程。
实施例4.LtβR-/-小鼠中延迟的髓鞘再生
研究了LFB-PAS染色的来自野生型和LtβR-/-小鼠的石蜡切片中成熟的 少突胶质细胞使胼胝体髓鞘再生的能力。在7周(p＜.001)和10周(p＜.02)时， 在野生型和LtβR-/-小鼠之间观察到中等程度但具有显著性的差异(图2)。经 过12周，LtβR-/-小鼠与野生型对照的髓鞘再生程度相同(p＝.11)。髓鞘过程 中的这些差异根据我们对脱髓鞘化严重性的分级小于0.5，而在TNFα-/-相对 于野生型小鼠的研究中观察到的差异根据所述分级则大于1.5(Arnett等 (2001)Nat.Neurosci.4：1116-1122)，并且持续至14周。尽管不受限于任何特 定理论或机制，尽管髓鞘再生似乎在LtβR-/-小鼠中延迟，但是最终得以实现 (resolved)。
实施例5.脱髓鞘化期间LtβR-/-小鼠中少突胶质细胞损失的延迟
为了证实通过LFB-PAS观察到的脱髓鞘化的延迟伴随着少突胶质细胞 的变化，进行了免疫组织化学来检测与用于LFB染色的那些相邻的石蜡切 片中的成熟少突胶质细胞。使用GSTπ+作为少突胶质细胞的标记物，并且对 中线胼胝体处的细胞进行定量。在野生型和LtβR-/-小鼠二者中，均在未处理 的小鼠中检测到了丰富的少突胶质细胞。然而，在处理3周和3.5周之后， 在LtβR-/-小鼠中检测到了比野生型小鼠中更多的少突胶质细胞(3.5周；p ＜.01)。在4周时，在野生型和LtβR-/-小鼠之间未发现少突胶质细胞数上的 差异。这些数据类似于LFB染色的结果，除了4周的数据点，其中LFB染 色显示在LtβR-/-小鼠中脱髓鞘化降低。相反，GSTπ+染色在LtβR-/-和野生型 小鼠之间没有区别。尽管不受限于任何特定理论或机制，GSTπ+和LFB染色 间的差异很可能是因为GSTπ+细胞的消失和髓磷脂的实际丧失之间的延迟。 通过5周的Cuprizone处理，在野生型和LtβR-/-小鼠的胼胝体中检测到少数 GSTπ+少突胶质细胞。尽管不受限于任何特定理论或机制，同样，这些数据 与两种小鼠品系的严重脱髓鞘化一致。
实施例6.未改变髓鞘再生期LtβR-/-小鼠中胼胝体少突胶质细胞群体的 恢复
通过在7、8、10和12周(从饮食中去掉Cuprizone之后1、2、4和6周) 检查石蜡切片，研究了LtβR对修复性髓鞘再生过程的参与。为了检测髓鞘 再生期间胼胝体中成熟少突胶质细胞的存在，对来自野生型和LtβR-/-小鼠的 石蜡切片进行了使用GSTπ抗体的免疫组织化学，继而对GSTπ阳性细胞定 量。如图3中所示，在3周时在LtβR-/-小鼠中比在野生型小鼠中发现了更多 的GSTπ+细胞(p＝.09)，在3.5周时在LtβR-/-小鼠中发现的GSTπ+细胞显著 地更多(p＜.03)，而在Cuprizone处理4和5周时在少突胶质细胞方面没有差 异。在去掉Cuprizone之后，在野生型和LtβR-/-小鼠之间未观察到胼胝体少 突胶质细胞群体恢复(repopulation)上的差异。因此，即使在脱髓鞘化的顶点 (5周)处在这些脑中检测到的少突胶质细胞极少，但是在去掉Cuprizone仅一 周之后(7周)，胼胝体恢复了其原始成熟少突胶质细胞数约75％的群体。在 第10周，在野生型和LtβR-/-小鼠二者中，胼胝体中存在的成熟少突胶质细 胞均恢复至处理前水平。尽管不受限于特定的理论或机制，这些数据表明 LtβR不是髓鞘再生期间少突胶质细胞祖先增殖和成熟所必需的。
实施例7.未改变LtβR-/-小鼠中小胶质细胞/巨噬细胞的聚集
Cuprizone诱导脑中的慢性炎性状态，包括活化的小胶质细胞和巨噬细 胞聚集至损伤部位(Matsushima等(2001)Brain Pathol.11：107-116)。用凝集素 RCA-1染色来自LtβR-/-和野生型小鼠的石蜡切片，并且定量中线胼胝体处的 小胶质细胞/巨噬细胞。如图4中所示，小胶质细胞/巨噬细胞在中线胼胝体 的积累未受LtβR存在的影响。在这种模型脱髓鞘化或髓鞘再生期的任何时 间点未观察到RCA-1+细胞数的显著差异。
实施例8.抑制功能性LtβR使脱髓鞘化减少
尽管不受限于任何特定理论或机制，这些研究提出LtβR对脱髓鞘化具 有显著的加重效果，但是在髓鞘再生期间具有潜在的适度的有益效果。然而， 缺乏LtβR的小鼠从出生开始具有严重的发育问题。例如，LtβR-/-小鼠没有肠 系膜淋巴结、淋巴集结和结肠相关的淋巴样组织，并且因此不具有功能完善 的免疫系统(Futterer等(1998)Immunity 9：59-70)。此外，本领域已知趋化因 子和细胞因子合成的水平受到LtβR调控(Chin等(2003)Immuno.Rev. 195：190-201)，但是LtβR对趋化因子和细胞因子的调控对CNS的全面影响 是未知的。此外，LtβR-/-小鼠中的天然杀伤细胞表面没有NK1.1受体的表达， 原因是编码基因靠近Ltbr基因(Wu等(2001)J.Immunol.166：1684-1689)。
可以使用融合诱饵蛋白对野生型小鼠中的LtβR进行功能抑制。为了评 定LtβR-/-小鼠中上述数据的有效性，所述数据证明了LtβR在Cuprizone诱导 的脱髓鞘化过程中的有害作用，在Cuprizone处理过程中用LtβR-Ig(人IgG1 Fc，小鼠LtβR)融合诱饵蛋白或多克隆人IgG对照处理C57BL6小鼠。在第 -1天预处理小鼠，其后每周进行腹膜内注射(5mg/kg)，并且保持任意的0.2％ Cuprizone的饮食3.5周。3.5周之后，灌注小鼠并且通过LFB-PAS法染色石 蜡脑切片以评定中线胼胝体处的脱髓鞘化程度。用人Ig对照处理的小鼠比 接受LtβR-Ig抑制诱饵蛋白的小鼠脱髓鞘化显著地更严重(p＜.02)(图5)。3.5 周之后，接受对照Ig注射的小鼠的平均脱髓鞘化得分非常类似于用 Cuprizone处理4周的野生型小鼠，同时接受LtβR-Ig注射的小鼠的平均脱髓 鞘化等分非常类似于用Cuprizone处理4周的LtβR-/-小鼠。对髓磷脂碱性蛋 白质(MBP)进行的免疫组织化学确认了在用人Ig对照处理的小鼠中与用 LtβR-Ig处理的小鼠相比缺乏有髓鞘的纤维。总而言之，这些结果说明对LtβR 的抑制显著延迟了用Cuprizone处理的小鼠中的脱髓鞘化。
实施例9.对LtβR的抑制增强髓鞘再生
接下来，检查了在已经发生显著脱髓鞘化之后LtβR-IgG1处理改变髓鞘 再生程度的能力。Cuprizone模型的一个优势在于检查影响髓鞘再生的事件 的能力。为了研究LtβR在髓鞘再生过程中的作用，用0.2％Cuprizone处理 C57BL6小鼠6周。这种Cuprizone处理期可再现地导致了目前为止研究的 全部小鼠中的完全脱髓鞘化，包括野生型C57BL6小鼠(Arnett等(2001)Nat. Neurosci.4：1116-1122和Plant等(2005)Glia 49：1-14)。在5周零2天的 Cuprizone处理之后，为小鼠注射小鼠LtβR-IgG-1或对照小鼠IgG-1。在此 之后每周进行小鼠LtβR-IgG1或对照小鼠-IgG1的注射直至第10周，当髓鞘 再生清晰可见时。由于考虑到人Fc可能在这种长时间的实验中引发免疫应 答，所以在此实验中使用了由小鼠LtβR和小鼠IgG1 Fc组成的融合蛋白。 如上所述分析了LFB染色的切片。引人注目且令人惊讶的是，用 mLtβR-mIgG1处理的小鼠比用对照mIgG1处理的小鼠显示出显著地更多的 髓鞘再生(p＜.007)(图6)。此外，对MBP进行的免疫组织化学确认了用人 Ig对照处理的小鼠与用LtβR-Ig处理的小鼠相比髓鞘再生降低。为了验证这 些数据，对10周时胼胝体内成熟少突胶质细胞数进行了定量。与对照的用 小鼠Ig处理的对照相比，在mLtβR-IgG1处理的小鼠胼胝体中GSTπ阳性少 突胶质细胞更丰富(p＜.04)。总而言之，用Cuprizone处理的小鼠中的髓鞘再 生通过用LtβR信号传导抑制剂进行后处理(post-treatment)显著增强。
已经描述了本发明的多种实施方案。然而，应该理解可以在不背离本发 明宗旨和范围的前提下进行多种修改。因此，其它实施方式也在权利要求书 的范围之内。
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