[0001] 本发明涉及式I的化合物、使用式I的化合物治疗或预防受试者中的细菌感染的方法、式I的化合物在制造用于治疗受试者中的细菌感染的药物中的用途以及当用于治疗或
预防受试者中的细菌感染的方法中时的医疗装置。

[0002] 在致病革兰氏阳性(G+ve)(金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肠球菌属物种(Enterococcus spp.)和肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae))和革兰氏阴性(G-
ve)病原体(大肠杆菌(Escherichia coli)、肠杆菌属物种(Enterobacter spp.)、沙门氏菌
属物种(Salmonella spp.)、鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、肺炎克雷伯氏菌
(Klebsiella pneumoniae)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))中多药物耐性盛
行的显著增加与全球新型抗感染药物投资空前减少一致。目前几乎没有多药物耐性(MDR)
细菌感染的注册替代药物，迫使临床医生考虑老一代具有窄谱和相当大的潜在毒性副作用
的药物例如粘菌素。此外，很少新型抗感染治疗剂类别从头到尾走完药物开发流程。

[0003] 从2000年起，在几乎15年的时间期内，美国FDA仅批准了5种新作用模式(MOA)抗菌剂–2000年批准的利奈唑胺(linezolid)(噁唑烷酮)、2003年批准的达托霉素(daptomycin)
(脂肽)、2007年批准的瑞他莫林(retapamulin)(截短侧耳素)、2011年批准的非达霉素
(fidaxomicin)(大环内酯台勾霉素)以及2012年批准的贝达喹啉(bedaquiline)(二芳基喹
啉)。值得注意的是，这些药剂对革兰氏阴性菌均无显著活性。2013年未批准新型MOA抗菌
剂，到2014年为止，在美国仅两种现有类别的类似物泰迪唑胺(tedizolid)和达巴万星
(dalbavancin)被推荐批准。虽然在各种开发阶段有超过300种抗感染药物，但大多数这些
药物为此前批准的正在进行新适应症研究的抗菌化合物或其衍生物。

[0004] 此外，动物特异性病原体中多药物耐性的盛行连同注册规则的加强和抗微生物剂在动物中的使用，使得兽医越来越依赖于传统类别的抗微生物剂。MDR人畜共患病生物体从
动物至人转移的风险还要求进一步限制一些最近注册的抗菌药物例如氟喹诺酮类和第三
代及第四代先锋霉素的使用。

[0005] 人和动物病原体中抗菌剂耐性发展的流行病学

[0006] 许多耐性发展由关键MDR生物体的流行病学变化推动。一旦仅限制于人类医院和老年护理机构，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株就以惊人的比例从社区中分离。此
外，社区获得性MRSA菌株很可能携带潘顿‐瓦伦丁杀白细胞素(Panton–Valentine 
leukocidin,PVL)毒素，其为皮肤和软组织病灶以及具有显著相关死亡率的快速、爆发性、
坏死性肺炎相关的毒性因子。最近，MRSA菌株在多个重要动物物种包括牲畜、马和伴侣动物
中具有宿主适应性，并且人至动物和动物至人转移的常规病例有所记录。对于菌株传播和
公共健康，这具有重大后果。最近对751名澳大利亚兽医的MRSA鼻腔携带调查发现，显著的
21.4％的马科兽医为MRSA阳性，相比之下4.9％的小动物兽医、0.9％很少接触动物的兽医
为MRSA阳性。MRSA的这些生态转移，连同针对MRSA特别开发的新型药物例如利奈唑胺的耐
性的出现确认，迫切需要新型MRSA抗感染药物。此外，使用万古霉素治疗MRSA然后必须对付
其患者中耐万古霉素肠球菌(VRE)感染爆发的医院，对替代性抗微生物剂的选择再次受到
限制。

[0007] 高毒性MDR革兰氏阴性(G-ve)菌例如大肠杆菌O25b:ST131在社区内的整体出现和传播确认，细菌病原体的毒性和耐性决定子二者可同时进化。根据最近的MRSA流行病学，人
类中的尿道和血流感染的主要致因大肠杆菌O25b:ST131目前已从伴侣动物和家禽中的肠
外感染分离。具有对氟喹诺酮类和广谱β-内酰胺类和碳青霉烯类的组合耐性的大肠杆菌
O25b:ST131和其它MDR肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的重要性增加是另一个令人担心的
趋势，尤其是考虑到最近除碳青霉烯类家族的逐渐推进之外，很少有G-ve谱抗感染药物开
发的突破。

[0008] 世界卫生组织(World Health Organisation)认定，抗生素耐性是未来全球健康的三大主要威胁之一。美国疾病控制与预防中心(US Centers for Disease Control and 
Prevention(CDC))最近的报告预计，“在美国，每年超过两百万人患上抗生素耐性感染，至
少23,000人因此而死亡。”仅在美国，治疗和管理抗生素耐性感染单个病例相关的额外医疗
成本预计就在每年18,588美元和29,069美元之间，导致美国医疗系统每年的总体直接成本
超过200亿美元。此外，就生产力损失而言美国家庭每年的成本预计超过350亿美元。尽管很
多欧盟(EU)国家具有世界最佳实践医院监督和感染控制策略，但在EU每年仍有25000名患
者死于MDR细菌感染。EU在MDR感染相关的保健花费和生产力损失的成本预计为至少每年15
亿欧元。

[0009] 补充和代替现有抗菌剂的新型作用机制不能满足临床抗菌剂需要，其功效逐渐被抗菌剂耐性机制破坏。治疗多药物耐性细菌感染仍然需要替代抗菌剂。然而，据美国传染病
学会(Infectious Diseases Society of America)和欧洲疾病控制与预防中心(European 
Centre for Disease Control and Prevention)报道，几乎未开发出提供比现有治疗更满
意结果的新药(Infectious Diseases Society of America 2010,Clinical Infectious 
Diseases,50(8):1081-1083)。

[0010] 本发明的目的是克服现有技术的至少一个缺点。

[0011] 上述背景技术的讨论仅仅旨在促进对本发明的理解。该讨论不是承认或认可任何所述材料在本专利申请的优先权日均为一般常识的部分。

[0012] 根据本发明的一个方面，提供了式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药：

[0013]

[0014] 在一个优选的实施方案中，R1为H、环烷基、式II或式III；

[0015]

[0016] 其中R3为H、NH2、NHNH2、O-CH2-CH3、NH-C(O)-苯基、NH-氯苯基、NH-CH2-氯苯基、NH-N＝CH-环烷基、式IV、式V或式VI；

[0017]

[0018] 其中A0为N、C、CH，或A0为C且A0经由R2键合到R4形成三唑环；

[0019] 其中A1为N、C、NH、＝CH-CH＝N-、＝(C6H5)C-CH＝N-或式VII；

[0020]

[0021] A2为N、C、NH、N-C(O)-苯基或式VII；

[0022] 其中A3、A4、A5、A6、A7、A8、A11、A12、A13、A14、A15、A16、A17、A18、A19、A20、A21A23、A24、A25、A26和A27独立地为C、O、N、NH、S；

[0023] 其中A9为C、O、N、NH、N-C(O)-O-CH2-CH3、N-C(O)-O-CH(CH3)2、N-C(O)-NH-CH2-CH3、N-C(O)-NH-CH2-苯基、N-C(O)-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3、N-C(O)-CH2-呋喃-2-基；

[0024] 其中A10为C、NH、-N＝CH-CH＝、-N＝CH-C(C6H5)＝；

[0025] 其中A22为-CH(CH3)-、-N-CH-、-N-C(CH3)-、N-C(CH2OH)-；

[0026] R2为H、COOH、CH2NH2、CH2OH、CH2NHNH2、甲基、乙基、丙基、丁基、环戊基或式VII并且R2和R4键合在一起形成嘧啶、吡嗪或三嗪环，或R2和R9键合在一起形成吡咯烷基羟吲哚环；

[0027] 其中R4为N、NH、O、S，或R4和A0经由R2键合形成三唑环，或R4为N且R4和R2键合在一起形成嘧啶环；

[0028] 其中R7为H、Cl、Br、F、OH、CH3、OCH3、SCH3、CN、CCH、CF3、OCF3、SCF3、NO2、丁基、叔丁基、二甲基氨基、苯基、正丙基、异丙基、-NH-C(O)-CH3、-CH＝CH-COOH、哌嗪-1-基或R7和R8键合在一起形成取代或未取代的、饱和或不饱和的脂族环、杂环或苯环；

[0029] 其中R6、R8、R14、R16、R25和R27独立地为H、OH、Cl、F、Br、CH3、CN、OCH3、COOH、NO2、CF3，R8和R7键合在一起形成取代或未取代的、饱和或不饱和的脂族环、杂环或苯环，R14和R15键合在一起形成取代或未取代的、饱和或不饱和的脂族环、杂环或苯环，R8和R9键合在一起形成取
代或未取代的、饱和或不饱和的脂族环、杂环或苯环，或R14和R13键合在一起形成取代或未
取代的、饱和或不饱和的脂族环、杂环或苯环；

[0030] 其中R5、R9、R17、R24和R28独立地为H、O、OH、Cl、F、Br、NH2、CH3、CF3、OCH3、CN、NO2、苯基、-NH-CH(OH)-CH3、-NH-C(O)-CH3，或R9和R8键合在一起形成取代或未取代的、饱和或不饱和的脂族环、杂环或苯环，或R13和R14键合在一起形成取代或未取代的、饱和或不饱和的脂
族环、杂环或苯环；

[0031] 其中R10、R11、R19、R20、R22和R23独立地为H、Cl或Br，或R10和R11键合在一起形成取代或未取代的、饱和或不饱和的脂族环、杂环或苯环，或R19和R20键合在一起形成取代或未取
代的、饱和或不饱和的脂族环、杂环或苯环，或R22和R23键合在一起形成取代或未取代的、饱
和或不饱和的脂族环、杂环或苯环；

[0032] 其中R12、R18和R21独立地为H、COOH、CH2NH2、CH2OH、甲基、乙基、丙基、丁基、环戊基，或R12和R13键合在一起形成吡咯烷基羟吲哚环；

[0033] 其中R15和R26独立地为H、Cl、Br、F、OH、CH3、OCH3、SCH3、CN、CF3、OCF3、SCF3、NO2、CCH、正丁基、叔丁基、二甲基氨基、苯基、正丙基、异丙基、-NH-C(O)-CH3、-CH＝CH-COOH、哌嗪-1-基，或R15和R14键合在一起形成取代或未取代的、饱和或不饱和的脂族环、杂环或苯环；并且

[0034] 其中“----"为双键或单键。

[0035] 式I的化合物优选地为氯化物盐。

[0036] 在本发明的另一个方面，提供了选自图1所示的化合物列表的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药。当在图1中示出盐时，本发明既涵盖所示的盐
也涵盖该盐的游离碱，以及该游离碱的立体异构体、互变异构体、其它药学上可接受的盐及
其它前药。

[0037] 优选地，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，

[0038] 其中A0为C；

[0039] 其中A1为N或式VII；

[0040] 其中A2为N或NH；

[0041] 其中A3、A4、A6、A7、A11、A12、A14、A15为N或C；

[0042] 其中A5、A13、A23、A24、A25、A26和A27为C；

[0043] 其中A8和A21为S；

[0044] 其中A9为NH；

[0045] 其中A10为N；

[0046] 其中A22为–N-CH-、-N-C(CH3)-或–N-C(CH2OH)-；

[0047] 其中R1为H、式II、式III、环烷基；

[0048] 其中R2为H、甲基、乙基、CH2NHNH2、CH2OH、丁基、环戊基或式VII且R2键合到R4形成嘧啶环；

[0049] 其中R3为NH2、式IV、式V、式VI、NH2、NH-N＝CH-环烷基或O-CH2-CH3；

[0050] 其中R4为NH、O、S；或R4为N且R4和R2键合在一起形成嘧啶环；

[0051] 其中R7为H、F、Cl、CF3、甲基；R7和R8键合在一起形成未取代的苯环、OH、叔丁基、苯基、二甲基氨基、异丙基、正丙基、CN、CCH、正丁基、SCH3；R7和R8键合在一起形成未取代的不
饱和杂环、OCH3、Br、OCF3、哌嗪-1-基或SCF3；

[0052] 其中R6、R8、R14和R16独立地为H、OH、F、OCH3、CF3、甲基、Cl、CN、Br；R8和R7键合在一起形成未取代的苯环；R8和R7键合在一起形成未取代的不饱和杂环；R14和R15键合在一起形成未取代的苯环；或R14和R15键合在一起形成未取代的不饱和杂环；

[0053] 其中R5、R9、R13和R17独立地为H、OH、NH2、Cl、F、OCH3、OH、-NH-CH(OH)-CH3；

[0054] 其中R12为H、甲基、乙基、CH2OH或环戊基；

[0055] 其中R15为H、F、Cl、CF3、甲基；R7和R8键合在一起形成未取代的苯环、OH、叔丁基、苯基、二甲基氨基、异丙基、正丙基、CN、CCH、正丁基、SCH3；R15和R14键合在一起形成未取代的不饱和杂环、OCH3、Br、OCF3、哌嗪-1-基或SCF3；

[0056] 其中R24和R28独立地为H、OH或Cl；

[0057] 其中R25和R27独立地为H或OH；

[0058] 其中R26为H、CH3、Br、Cl、OH、二甲基氨基、-O-P(O)(OEt)2、CF3或F；并且

[0059] 其中“----"独立地为单键或双键。

[0060] 更优选地，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，它们选自：NCL008、NCL009、NCL023、NCL025、NCL026、NCL029、NCL036、
NCL037、NCL039、NCL040、NCL050、NCL061、NCL064、NCL065、NCL068、NCL075、NCL076、NCL078、NCL079、NCL080、NCL081、NCL084、NCL085、NCL086、NCL088、NCL089、NCL090、NCL092、NCL094、NCL095、NCL097、NCL098、NCL099、NCL101、NCL104、NCL105、NCL106、NCL108、NCL111、NCL112、NCL114、NCL115、NCL116、NCL118、NCL119、NCL121、NCL122、NCL123、NCL124、NCL125、NCL126、NCL130、NCL131、NCL132、NCL133、NCL135、NCL136、NCL137、NCL138、NCL139、NCL140、NCL141、NCL144、NCL145、NCL146、NCL147、NCL148、NCL150、NCL152、NCL153、NCL154、NCL156、NCL157、NCL158、NCL159、NCL161、NCL162、NCL164、NCL165、NCL166、NCL167、NCL168、NCL169、NCL170、NCL171、NCL172、NCL173、NCL174、NCL176、NCL177、NCL178、NCL179、NCL180、NCL181、NCL183、NCL184、NCL185、NCL186、NCL187、NCL188、NCL189、NCL190、NCL193、NCL194、NCL195、NCL196、NCL197、NCL198、NCL199、NCL200、NCL201、NCL202、NCL203、NCL204、NCL205、NCL206、NCL207、NCL208、NCL209、NCL210、NCL211、NCL212、NCL213、NCL215、NCL216、NCL217、NCL218、NCL219、NCL220、NCL221、NCL222、NCL223、NCL224、NCL225、NCL226、NCL227、NCL228、NCL229和
NCL230。

[0061] 甚至更优选地，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，它们选自：NCL040、NCL078、NCL079、NCL080、NCL081、NCL084、NCL088、
NCL089、NCL097、NCL099、NCL123、NCL146、NCL157、NCL158、NCL177、NCL179、NCL188、NCL193、NCL195、NCL196、NCL197、NCL199、NCL202、NCL204、NCL205、NCL215、NCL216、NCL217、NCL219
和NCL221。

[0062] 甚至更优选地，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，它们选自：NCL078、NCL079、NCL080、NCL081、NCL084、NCL089、NCL097、
NCL157、NCL158、NCL179、NCL188、NCL193、NCL195、NCL196、NCL199、NCL204、NCL216、NCL217、NCL219和NCL221。

[0063] 甚至更优选地，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，它们选自：NCL089、NCL097、NCL157、NCL179、NCL188、NCL193、NCL195、
NCL196、NCL216、NCL219和NCL221。

[0064] 更优选地，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，它们选自：NCL097、NCL157、NCL179、NCL188、NCL195和NCL196。

[0065] 在本发明的一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中所述化合物不是选自以下的化合物：NCL812、
NCL001、NCL002、NCL003、NCL004、NCL005、NCL006、NCL007、NCL010、NCL011、NCL012、NCL013、NCL014、NCL015、NCL016、NCL017、NCL018、NCL019、NCL020、NCL021、NCL022、NCL024、NCL027、NCL028、NCL030、NCL031、NCL032、NCL033、NCL034、NCL035、NCL038、NCL041、NCL042、NCL043、NCL044、NCL045、NCL046、NCL047、NCL048、NCL049、NCL051、NCL052、NCL053、NCL054、NCL055、NCL056、NCL057、NCL058、NCL059、NCL060、NCL062、NCL063、NCL066、NCL067、NCL069、NCL070、NCL071、NCL072、NCL073、NCL074、NCL077、NCL082、NCL083、NCL087、NCL091、NCL093、NCL096、NCL100、NCL102、NCL103、NCL107、NCL109、NCL110、NCL113、NCL117、NCL120、NCL127、NCL128、NCL129、NCL134、NCL142、NCL143、NCL149、NCL151、NCL155、NCL160、NCL163、NCL175、NCL182、NCL191、NCL192和NCL214。

[0066] 在本发明的一个优选的方面，式I的化合物不是氯苯胍(在本说明书中也作为NCL812提及，并且也被称为1,3-双[(E)-(4-氯苯基)亚甲基氨基]胍)，氯苯胍具有如下结
构：

[0067]

[0068] 在本发明的一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为NH；
A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R7、R9、R12、R13、R15、R16、R17为H；R4为O；R8和R14为CF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和所有式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0069]

[0070] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NH2；A1为N并且A2为NH；A0、
A3、A4、A5、A6和A7为C；R2、R5、R6、R7和R8为H；R4为NH；R9为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0071]

[0072] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16、R17为H；R4为NH；R7和R15为F；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和所有式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0073]

[0074] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R7、R9、R12、R13、R15、R16、R17为H；R4为NH；R8和R14为F；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和所有式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0075]

[0076] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R7、R8、R12、R14、R15、R16、R17为H；R4为NH；R9和R13为OCH3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和所有式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0077]

[0078] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R7、R9、R12、R13、R15、R16、R17为H；R4为NH；R8和R14为OCH3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和所有式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0079]

[0080] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NH2；A1为N；A2为NH；A0、A3、A4、A5、A6和A7为C；R2、R5、R6、R8和R9为H；R4为NH；R7为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0081]

[0082] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16、R17为H；R4为NH；R7和R15为CF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0083]

[0084] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16、R17为H；R4为NH；R7和R15为甲基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0085]

[0086] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R7、R8、R12、R14、R15、R16、R17为H；R4为NH；R9和R13为甲基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0087]

[0088] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R7、R9、R12、R13、R15、R16和R17为H；R4为NH；R8和R14为甲基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0089]

[0090] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NH2；A1为N；A2为NH；A0、A3、A4、A5、A6和A7为C；R2、R5、R6、R8和R9为H；R4为NH；R7为CF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0091]

[0092] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NH2；A1为N；A2为NH；A0、A3、A4、A5、A6和A7为C；R2、R5、R6、R7和R9为H；R4为NH；R8为CF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0093]

[0094] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NH2；A1为N；A2为NH；A0、A3、A4、A5、A6和A7为C；R2、R5、R6、R8和R9为H；R4为NH；R7为甲基；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0095]

[0096] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NH2；A1为N；A2为NH；A0、A3、A4、A5、A6和A7为C；R2、R5、R6、R7和R9为H；R4为NH；R8为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0097]

[0098] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R7、R9、R12、R13、R15、R16、R17为H；R4为NH；R8和R14为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0099]

[0100] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为甲基；R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16、R17为H；R4为NH；R7和R15为CF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为
双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0101]

[0102] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为甲基；R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0103]

[0104] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NHNH2；A1为N；A2为NH；A0、A3、A4、A5、A6和A7为C；R2为甲基，R5、R6、R8和R9为H；R4为NH；R7为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0105]

[0106] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R7、R9、R12、R13、R15、R16和R17为H；R4为S；R8和R14为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发明
的该实施方案的化合物的实例包括：

[0107]

[0108] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NH2；A1为N；A2为NH；A0、A3、A4、A5、A6和A7为C；R2、R5、R6、R8和R9为H；R4为NH；R7为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0109]

[0110] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NHNH2；A1为N；A2为NH；A0、A3、A4、A5、A6和A7为C；R2为甲基；R5、R6、R8和R9为H；R4为NH；R7为CF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0111]

[0112] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14和R16为H；R4为NH；
R7、R15和R17为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0113]

[0114] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14和R16为H；R4为NH；
R7为Cl；R15为CF3；R17为F；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL078)：

[0115]

[0116] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7为Cl；R15为F；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL079)：

[0117]

[0118] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；
R7为Cl；R12为甲基；R15为CF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为
双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL080)：

[0119]

[0120] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；
R7和R15为Cl；R12为甲基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0121]

[0122] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R15和R16为H；R4为NH；R7和R17为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0123]

[0124] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14和R16为H；R4为NH；
R7和R15为Cl；R17为F；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。
本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL084)：

[0125]

[0126] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R15、R16和R17为H；R4为NH；R7为Cl；R14为CN；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0127]

[0128] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R15和R16为H；R4为NH；R7为Cl；R17为F；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0129]

[0130] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为甲基；R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7为Cl；R15为CF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"
为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL089)：

[0131]

[0132] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R9、R12、R13、R16和R17为H；R4为NH；R7和R8键合在一起形成未取代的苯环；R14和R15键合在一起形成未取代的苯环；并且式I中在A0
与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实
例包括：

[0133]

[0134] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中A0为C；A1为N；A2为NH；R1为环己基；R3为NH-N
＝CH-环己基；R4为NH；R2为H；并且式I中在A0与A1之间的“----"为双键。本发明的该实施方
案的化合物的实例包括：

[0135]

[0136] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R9、R12、R13和R17为H；R4为NH；R6、R7、R8、R14、R15和R16为OH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发明
的该实施方案的化合物的实例包括(NCL097)：

[0137]

[0138] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为叔丁基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。
本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0139]

[0140] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R7、R8、R9、R12、R13、R14和R15为H；R4为NH；R5、R6、R16和R17为OH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0141]

[0142] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R8、R12、R14和R17为H；R4为NH；R6、R7、R9、R13、R15和R16为OH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0143]

[0144] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R12、R16和R17为H；R4为NH；R7、R8、R9、R13、R14和R15为OH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL097)：

[0145]

[0146] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R6、R7、R8、R9、R12、R13、R14、R15和R16为H；R4为NH；R5和R17为OH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0147]

[0148] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R7、R8、R9、R12、R13、R14、R15和R17为H；R4为NH；R6和R16为OH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0149]

[0150] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R8、R9、R12、R13、R14和R17为H；R4为NH；R6、R7、R15和R16为OH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0151]

[0152] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为苯基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0153]

[0154] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为二甲基氨基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0155]

[0156] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R8、R9、R12、R13、R14和R17为H；R4为NH；R6和R16为OCH3；R7和R15为OH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0157]

[0158] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为异丙基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。
本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0159]

[0160] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为正丙基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。
本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0161]

[0162] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R8、R9、R12、R13、R14和R17为H；R4为NH；R6、R7、R15和R16为F；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0163]

[0164] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为CCH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0165]

[0166] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R7、R8、R9、R12、R13、R14、R15和R17为H；R4为NH；R6和R16为Br；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0167]

[0168] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为丁基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0169]

[0170] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1为-C(C6H5)-CH-N-并
且A10为–N＝CH-C(C6H5)＝；A2和A9为NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R7、R8、R9、R12、R13、R14、R15、R16和R17为H；R4为NH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0171]

[0172] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为CH3S；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0173]

[0174] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式III；R3为式VI；A0为C；R2和R21为H；A1
和A20为N；A2和A19为NH；A8和A21为S；R4为NH；R10和R11键合在一起形成取代的苯环；R22和R23键合在一起形成取代的苯环；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式III及式VI的“----"
为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0175]

[0176] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为甲基；R5、R6、R7、R8、R9、R13、R14、R15、R16和R17为H；R4为NH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。
本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0177]

[0178] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R9、R12、R13、R16和R17为H；R4为NH；R7和R8键合在一起形成未取代的杂环；R14和R15键合在一起形成未取代的不饱和杂环；并且式I
中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物
的实例包括：

[0179]

[0180] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1为＝CH-CH＝N-并且
A10为–N-(CH)2-；A2和A9为NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为OCH3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0181]

[0182] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为OH；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本发
明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0183]

[0184] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为乙基；R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0185]

[0186] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为甲基；R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为Br；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0187]

[0188] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R12、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为Cl；R9和R13为NH2；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL157)：

[0189]

[0190] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为乙基；R5和R17为OH；R6、R8、R9、R13、R14和R16为H；R4为NH；R7和R15为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"
为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL158)：

[0191]

[0192] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为环戊基；R5和R17为OH；R6、R8、R9、R13、R14和R16为H；R4为NH；R7和R15为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的
“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0193]

[0194] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为OCF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0195]

[0196] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为甲基；R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为哌嗪-1-基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的
“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0197]

[0198] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为O-CH2-CH3；A1为N；A2为NH；
A0、A3、A4、A5、A6和A7为C；R2为甲基；R5、R6、R8和R9为H；R4为NH；R7为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0199]

[0200] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R5、R6、R8、R9、R12、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为SCF3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双键。本
发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0201]

[0202] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R6、R8、R9、R12、R13、R14和R16为H；R4为NH；R7和R15为Cl；R5和R17为-NH-CH(OH)-CH3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的
“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括：

[0203]

[0204] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中A0为C；R1为H；A2和R4为N；R3为NH2；A1为式
VII；R2为式VII且R2键合到R4形成嘧啶环；式I中在R2与A0之间和在A1与A2之间的“----"为双
键；A22为–N-CH-；R24、R25、R27和R28为H；A23、A24、A25、A26和A27为C以及R26为Cl。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL179)：

[0205]

[0206] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为NH2；A1为N；A2和R4为NH；A0、
A3、A4、A5、A6和A7为C；R5、R6、R8和R9为H；R2为丁基；R7为Cl；并且式I中在A0与A1之间的“----"和所有式II的“----"为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL188)：

[0207]

[0208] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中A0为C；R1为H；A2和R4为N；R3为NH2；A1为式
VII；R2为式VII且R2键合到R4形成嘧啶环；式I中在R2与A0之间和在A1与A2之间的“----”为双
键；A22为–N-CH-；R24、R25、R27和R28为H；A23、A24、A25、A26和A27为C以及R26为CH3。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL195)：

[0209]

[0210] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中A0为C；R1为H；A2和R4为N；R3为NH2；A1为式
VII；R2为式VII且R2键合到R4形成嘧啶环；式I中在R2与A0之间和在A1与A2之间的“----"为双
键；A22为–N-CH-；R24、R25、R27和R28为H；A23、A24、A25、A26和A27为C以及R26为OH。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL196)：

[0211]

[0212] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中A0为C；R1为H；A2和R4为N；R3为NH2；A1为式
VII；R2为式VII且R2键合到R4形成嘧啶环；式I中在R2与A0之间和在A1与A2之间的“----"为双
键；A22为–N-CH-；R24、R25、R27和R28为H；A23、A24、A25、A26和A27为C以及R26为Br。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL193)：

[0213]

[0214] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中A0为C；R1为H；A2和R4为N；R3为NH2；A1为式
VII；R2为式VII且R2键合到R4形成嘧啶环；式I中在R2与A0之间和在A1与A2之间的“----"为双
键；A22为–N-CH-；R24、R25、R26、R27和R28为H；以及A23、A24、A25、A26和A27为C。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL199)：

[0215]

[0216] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中A0为C；R1为H；A2和R4为N；R3为NH2；A1为式
VII；R2为式VII且R2键合到R4形成嘧啶环；式I中在R2与A0之间和在A1与A2之间的“----"为双
键；A22为–N-C(CH3)-；R24、R25、R27和R28为H；A23、A24、A25、A26和A27为C以及R26为Cl。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL204)：

[0217]

[0218] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2、R6、R8、R9、R12、R13、R14和R16为H；R4为NH；R7和R15为Cl；R5和R17为F；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为双
键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL216)：

[0219]

[0220] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为甲基；R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为CH3；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"为
双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL217)：

[0221]

[0222] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中R1为式II；R3为式IV；A1和A10为N；A2和A9为
NH；A0、A3、A4、A5、A6、A7、A11、A12、A13、A14和A15为C；R2和R12为甲基；R5、R6、R8、R9、R13、R14、R16和R17为H；R4为NH；R7和R15为叔丁基；并且式I中在A0与A1之间的“----"、所有式II和式IV的“----"
为双键。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL219)：

[0223]

[0224] 在本发明的另一个优选的实施方案中，所述化合物为式I的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐或前药，其中A0为C；R1为H；A2和R4为N；R3为NH2；A1为式
VII；R2为式VII且R2键合到R4形成嘧啶环；式I中在R2与A0之间和在A1与A2之间的“----"为双
键；A22为–N-CH-；R24、R25、R27和R28为H；A23、A24、A25、A26和A27为C以及R26为CF3。本发明的该实施方案的化合物的实例包括(NCL221)：

[0225]

[0226] 根据本发明的另一个方面，提供了治疗或预防受试者中细菌定植或感染的方法，所述方法包括以下步骤：将治疗有效量的式I的化合物或其治疗学上可接受的盐施用给所
述受试者。在此方面，所述细菌感染由菌剂(bacterial agent)引起。所述治疗或预防受试
者中的细菌感染或定植的方法还可包括施用本发明的药物或兽药组合物。

[0227] 根据本发明的再一个方面，提供了式I的化合物或其治疗学上可接受的盐在制造用于治疗受试者中细菌定植或感染的药物中的用途。在此方面，所述细菌感染由菌剂
(bacterial agent)引起。

[0228] 所述受试者可为能够被细菌定植和感染的任何受试者。所述受试者可为哺乳动物，或可为鱼或鸟。优选地，所述受试者选自但不限于人、犬科动物、猫科动物、牛、绵羊、山
羊、其它反刍类物种、猪、马、鸟或鱼。

[0229] 式I的化合物可以按选自0.1mg/kg至250mg/kg体重，优选地1mg/kg至100mg/kg体重，更优选地5mg/kg至50mg/kg体重的剂量施用给所述受试者。式I的化合物可使用选自以
下的给药计划施用给所述受试者：每小时；每天三次；每天两次；每天；每隔一天；每周两次；
每周一次；隔周一次；每月一次；每两月一次或以恒定速率或可变速率注入。优选地，施用式
I的化合物，直到定植或者感染或定植的迹象和症状得到至少部分地治疗或缓解。

[0230] 在一个实施方案中，在治疗后所述受试者血液中式I的化合物(或代谢物)的浓度在选自但不限于：2h时0.1和10ug/mL之间、12小时后1和200ug/mL之间、24h后0.1和5ug/mL
之间、48小时后0.01和2ug/mL之间、72h后0.0001和1ug/mL之间的范围内。优选地，所述浓度
选自但不限于：12小时后小于200ug/mL、24小时后小于5ug/mL、48小时后小于1ug/L和72小
时后小于0.5ug/mL。

[0231] 导致所述细菌感染的作用剂是菌剂。在一个优选的实施方案中，所述作用剂不是原生动物物种。在一个优选的实施方案中，所述作用剂不是球虫原生动物。更优选地，所述
作用剂不是产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)，也不是存在于Hansen等从丹麦
Jyndevad收集的土壤样品中的异养菌种，如以下论文中所讨论：Hansen等2012,
Chemosphere,86:212-215和Hansen等2009,Environmental Pollution157:474-480。

[0232] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阴性的。在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的。在另一个实施方案中，所述菌剂无细胞壁。在另一个实施方案中，所述细
菌感染由至少两种选自以下的作用剂的混合物引起：革兰氏阴性、革兰氏阳性和无细胞壁
的菌剂。

[0233] 导致所述细菌感染的所述菌剂可为选自但不限于：葡萄球菌属物种(Staphylococcus spp)、链球菌(Streptococci)、肠球菌属物种、明串珠菌属物种
(Leuconostoc spp)、棒状杆菌属物种(Corynebacterium spp)、隐秘杆菌属物种
(Arcanobacteria spp)、隐秘杆菌属物种(Trueperella spp)、红球菌属物种(Rhodococcus 
spp)、芽孢杆菌属物种(Bacillus spp)、厌氧球菌(Anaerobic Cocci)、厌氧革兰氏阳性不
产孢子杆菌、放线菌属物种(Actinomyces spp)、梭菌属物种(Clostridium spp)、诺卡菌属
物种(Nocardia spp)、丹毒丝菌属物种(Erysipelothrix spp)、李斯特菌属物种(Listeria 
spp)、盖球菌属物种(Kytococcus spp)、支原体属物种(Mycoplasma spp)、尿原体属物种
(Ureaplasma spp)和分枝杆菌属物种(Mycobacterium spp)的革兰氏阳性菌剂。

[0234] 在一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于葡萄球菌属物种。葡萄球菌属物种的实例包括表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、溶血葡萄
球菌(Staphylococcus haemolyticus)、路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)、腐
生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、耳葡萄球菌(Staphylococcus 
auricularis)、头状葡萄球菌(Staphylococcus capitis)、山羊葡萄球菌(Staphylococcus 
caprae)、肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)、科氏葡萄球菌(Staphylococcus 
cohnii)、人葡萄球菌(Staphylococcus hominis)、巴氏葡萄球菌(Staphylococcus 
pasteuri)、佩氏葡萄球菌(Staphylococcus pettenkoferi)、普氏葡萄球菌
(Staphylococcus pulvereri)、解糖葡萄球菌(Staphylococcus saccharolyticus)、模仿
葡萄球菌(Staphylococcus simulans)、施氏葡萄球菌(Staphylococcus schleiferi)、沃
氏葡萄球菌(Staphylococcus warneri)、木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)、阿尔
莱特葡萄球菌(Staphylococcus arlettae)、溶酪葡萄球菌(Staphylococcus 
caseolyticus)、产色葡萄球菌(Staphylococcus chromogenes)、香料葡萄球菌
(Staphylococcus condimenti)、海豚葡萄球菌(Staphylococcus delphini)、马胃葡萄球
菌(Staphylococcus equorum)、猫葡萄球菌(Staphylococcus felis)、福氏葡萄球菌
(Staphylococcus fleurettii)、鸡葡萄球菌(Staphylococcus gallinarum)、猪葡萄球菌
(Staphylococcus hyicus)、中间葡萄球菌(Staphylococcus intermedius)、克氏葡萄球菌
(Staphylococcus kloosii)、缓慢葡萄球菌(Staphylococcus lentus)、水獭葡萄球菌
(Staphylococcus lutrae)、苍蝇葡萄球菌(Staphylococcus muscae)、尼泊尔葡萄球菌
(Staphylococcus nepalensis)、鱼发酵葡萄球菌(Staphylococcus piscifermentans)、伪
中间葡萄球菌(Staphylococcus pseudintermedius)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus 
sciuri)、猿猴葡萄球菌(Staphylococcus simiae)、琥珀葡萄球菌(Staphylococcus 
succinus)和牛葡萄球菌(Staphylococcus vitulinus)。

[0235] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于链球菌属物种(Streptococcus spp)。链球菌属物种的实例包括无乳链球菌(Streptococcus 
agalactiae)、非解乳糖链球菌(Streptococcus alactolyticus)、咽峡炎链球菌
(Streptococcus anginosus)、犬链球菌(Streptococcus canis)、星座链球菌
(Streptococcus constellatus)、大鼠链球菌(Streptococcus cricetus)、嵴链球菌
(Streptococcus cristatus)、汗毛链球菌(Streptococcus downei)、停乳链球菌停乳亚种
(Streptococcus dysgalactiae subsp.dysgalactiae)、停乳链球菌似马亚种
(Streptococcus dysgalactiae subsp.equisimilis)、马链球菌马亚种(Streptococcus 
equi subsp.equi)、马链球菌兽瘟亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)、野
生链球菌(Streptococcus ferus)、解没食子酸链球菌解没食子酸亚种(Streptococcus 
gallolyticus subsp.gallolyticus)(过去称为牛链球菌(Streptococcus bovis)生物型
i)、解没食子酸链球菌巴氏亚种(Streptococcus gallolyticus subsp.pasteurianus)(过
去称为牛链球菌(Streptococcus bovis)生物型ii/2)、格氏链球菌(Streptococcus 
gordonii)、猪肠链球菌(Streptococcus hyointestinalis)、生殖道链球菌
(Streptococcus hyovaginalis)、婴儿链球菌(Streptococcus infantarius)、婴儿链球菌
婴儿亚种(Streptococcus infantarius subsp infantarius)、婴儿链球菌
(Streptococcus infantis)、海豚链球菌(Streptococcus iniae)、中间链球菌
(Streptococcus intermedius)、巴黎链球菌(Streptococcus lutetiensis)(过去称为牛
链球菌(Streptococcus bovis)生物型ii.1)、猴链球菌(Streptococcus macaccae)、缓症
链球菌(Streptococcus mitis)、变异链球菌(Streptococcus mutans)、口腔链球菌
(Streptococcus oralis)、鼠口腔链球菌(Streptococcus orisratti)、副血链球菌
(Streptococcus parasanguinis)、栖口腔链球菌(Streptococcus peroris)、肺炎链球菌、
豕链球菌(Streptococcus porcinus)、伪中间链球菌(Streptococcus 
pseudintermedius)、化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、大鼠链球菌(Streptococcus 
ratti)、唾液链球菌(Streptococcus salivarius)、血链球菌(Streptococcus 
sanguinis)、表兄链球菌(Streptococcus sobrinus)、猪链球菌(Streptococcus suis)、嗜
热链球菌(Streptococcus thermophilus)、前庭链球菌(Streptococcus vestibularis)以
及营养变异(缺陷)链球菌(软弱贫养菌(Abiotrophia defectiva)、毗邻颗粒链菌
(Granulicatella adiacens)、细长颗粒链菌(Granulicatella elegans)和副毗邻颗粒链
菌(Granulicatella para-adiacens))和相关物种例如粘滑罗斯菌(Rothia 
mucilaginosa)(过去称为粘滑口腔球菌(Stomatococcus mucilaginosus))和片球菌
(Pediococcus)。

[0236] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于肠球菌属物种。肠球菌属物种的实例包括粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌
(Enterococcus faecium)、鹑鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum)、耐久肠球菌
(Enterococcus durans)、鸟肠球菌(Enterococcus avium)、棉子糖肠球菌(Enterococcus 
raffinosus)、苍白肠球菌(Enterococcus pallens)、浅黄肠球菌(Enterococcus gilvus)、
盲肠肠球菌(Enterococcus cecorum)、病臭肠球菌(Enterococcus malodoratus)、意大利
肠球菌(Enterococcus italicus)、血栖肠球菌(Enterococcus sanguinicola)、芒地肠球
菌(Enterococcus mundtii)、铅黄/黄色肠球菌(Enterococcus casseliflavus/
flavescens)、殊异肠球菌(Enterococcus dispar)、海氏肠球菌(Enterococcus hirae)、类
鸟肠球菌(Enterococcus pseudoavium)和牛链球菌(Enterococcus bovis)。

[0237] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于明串珠菌属物种。明串珠菌属物种的实例包括肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)、假肠膜明
串珠菌(Leuconostoc pseudomesenteroides)、类肠膜明串珠菌(Leuconostoc 
paramesenteroides)、柠檬明串珠菌(Leuconostoc citreum)和乳明串珠菌(Leuconostoc 
lactis)。

[0238] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于棒状杆菌属物种。棒状杆菌属物种的实例包括非亲脂性、发酵棒状杆菌属物种例如溃疡棒状杆菌
(Corynebacterium ulcerans)、假结核棒状杆菌(Corynebacterium 
pseudotuberculosis)、结膜干燥棒状杆菌(Corynebacterium xerosis)、纹带棒状杆菌
(Corynebacterium striatum)、极小棒状杆菌(Corynebacterium minutissimum)、无枝菌
酸棒状杆菌(Corynebacterium amycolatum)、解葡萄糖苷棒状杆菌(Corynebacterium 
glucuronolyticum)、银色棒状杆菌(Corynebacterium argentoratense)、马氏棒状杆菌
(Corynebacterium matruchotii)、芮氏棒状杆菌(Corynebacterium riegelii)、混乱棒状
杆菌(Corynebacterium confusum)、膀胱炎棒状杆菌(Corynebacterium cystidis)、白喉
棒状杆菌(Corynebacterium diphtheria)、模仿棒状杆菌(Corynebacterium simulans)、
Corynebacterium sundvallense、Corynebacterium thomssensii、弗雷尼棒状杆菌
(Corynebacterium freneyi)和黏金色棒状杆菌(Corynebacterium aurimucosum)，非亲脂
性、非发酵棒状杆菌属物种例如非发酵棒状杆菌非发酵亚种(Corynebacterium 
afermentans afermentans)、耳棒状杆菌(Corynebacterium auris)、假白喉棒状杆菌
(Corynebacterium pseudodiphtheriticum)和丙酸棒状杆菌(Corynebacterium 
propinquum)以及亲脂性棒状杆菌属物种例如杰氏棒状杆菌(Corynebacterium 
jeikeium)、解脲棒状杆菌(Corynebacterium urealyticum)、非发酵棒状杆菌嗜脂亚种
(Corynebacterium afermentans lipophilum)、邻居棒状杆菌(Corynebacterium 
accolens)、麦利金氏棒状杆菌(Corynebacterium macginleyi)、Corynebacterium 
tuberculostearum、克罗彭施泰特棒状杆菌(Corynebacterium kroppenstedtii)、库彻氏
棒状杆菌(Corynebacterium kutscheri)、多毛棒状杆菌(Corynebacterium pilosum)、牛
棒状杆菌(Corynebacterium bovis)、CDC棒状杆菌群F-1和G和黄色嗜脂棒状杆菌
(Corynebacterium lipophiloflavum)以及其它棒状杆菌属物种例如苏黎士菌属
(Turicella)、节杆菌属(Arthrobacter)、短杆菌(Brevibacterium)、皮杆菌属
(Dermabacter)、罗氏菌属(Rothia)、厄氏菌属(Oerskovia)、微杆菌属(Microbacterium)和
水生雷弗森菌(Leifsonia aquatica)。

[0239] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于隐秘杆菌属物种。隐秘杆菌属物种的实例包括溶血隐秘杆菌(A.haemolyticum)、化脓隐秘杆菌
(A.pyogenes)(现在称为化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)，最初称为化脓放线菌
(Actinomyces pyogenes))和伯纳德隐秘杆菌(A.bernardiae)。

[0240] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于红球菌属物种。红球菌属物种的实例包括马红球菌(Rhodococcus equi)、红串红球菌(Rhodococcus 
erythropolis)、束红球菌(Rhodococcus fasciens)和玫瑰红红球菌(Rhodococcus 
rhodochrous)。

[0241] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于戈登氏菌属物种(Gordonia spp)。

[0242] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于束村氏菌属物种(Tsukamurella spp)。

[0243] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于无胆甾原体属物种(Acholeplasma spp)。

[0244] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于放线菌(Actinobacteria)例如马克洛斯氏菌(Crossiella equi)。

[0245] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于芽孢杆菌属物种。芽孢杆菌属物种的实例包括炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、蜡状芽孢杆菌
(Bacillus cereus)、环状芽胞杆菌(Bacillus circulans)、地衣芽孢杆菌(Bacillus 
licheniformis)、巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacillus 
pumilus)、球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、短
短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)、侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)和
蜂房类芽孢杆菌(Paenibacillus alvei)。

[0246] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于厌氧球菌。厌氧球菌的实例包括莫道克厌氧球菌(Anaerococcus murdochii)、普氏厌氧球菌
(Anaerococcus prevotii)、四联厌氧球菌(Anaerococcus tetradius)、八叠厌氧球菌
(Anaerococcus octavius)、产氢厌氧球菌(Anaerococcus hydrogenalis)、解乳厌氧球菌
(Anaerococcus lactolyticus)、阴道厌氧球菌(Anaerococcus vaginalis)、极小阿托波氏
菌(Atopobium parvulum)、大芬戈尔德菌(Finegoldia magna)、巴尔涅斯孪生球菌
(Gallicola barnesae)、不解糖卟啉孪生球菌(Gemella asaccharolytica)、博格孪生球菌
(Gemella bergeri)、兔孪生球菌(Gemella cuniculi)、溶血孪生球菌(Gemella 
haemolysans)、麻疹孪生球菌(Gemella morbillorum)、Gemella palaticanis、血色孪生球
菌(Gemella sanguinis)、微小微单胞菌(Parvimonas micra)、黑色消化球菌(Peptococcus 
niger)、不解糖嗜胨菌(Peptoniphilus asaccharolyticus)、戈巴赫嗜胨菌
(Peptoniphilus gorbachii)、吲哚嗜胨菌(Peptoniphilus indolicus)、兔嗜胨菌
(Peptoniphilus harei)、艾弗嗜胨菌(Peptoniphilus ivorii)、泪腺嗜胨菌
(Peptoniphilus lacrimalis)、奥尔森嗜胨菌(Peptoniphilus olsenii)、口炎消化链球菌
(Peptostreptococcus stomatis)、厌氧消化链球菌(Peptostreptococcus anaerobius)、
产生瘤胃球菌(Ruminococcus productus)、还原天芥菜碱斯奈克氏菌(Slackia 
heliotrinireducens)和解糖葡萄球菌。

[0247] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于厌氧革兰氏阳性不产孢子杆菌。厌氧革兰氏阳性不产孢子杆菌的实例包括异斯卡多维亚菌
(Alloscardovia omnicolens)、阿托波氏菌属物种(例如微小阿托波氏菌(Atopobium 
minutum)、龈裂阿托波氏菌(Atopobium rimae)、极小阿托波氏菌(Atopobium parvulum)和
阴道阿托波氏菌(Atopobium vaginae))、双歧杆菌属(Bifidobacteria)(例如青春双歧杆
菌(Bifidobacteria adolescentis)、齿双歧杆菌(Bifidobacteria dentium)、斯卡尔多维
双歧杆菌(Bifidobacteria scardovii))、Catabacter hongkongensis、产气柯林斯菌
(Collinsella aerofaciens)、埃格特菌(Eggerthella)(例如迟缓埃格特菌(Eggerthella 
lenta)、香港埃格特菌(Eggerthella hongkongensis)和中国埃格特菌(Eggerthella 
sinensis))、真杆菌属(Eubacterium)和相关物种(例如缠结真杆菌(Eubacterium 
nodatum)、纤细真杆菌(Eubacterium tenue)、短真杆菌(Eubacterium brachy)、娇弱真杆
菌(Eubacterium infirmum)、微小真杆菌(Eubacterium minutum)、缠结真杆菌、隐藏真杆
菌(Eubacterium saphenum)、沟迹真杆菌(Eubacterium sulci)、龈沟产线菌(Filifactor 
alocis)、胆怯艰难杆菌(Mogibacterium timidum)、弱小艰难杆菌(Mogibacterium 
vescum)、非解乳假枝杆菌(Pseudoramibacter alactolyticus)、缓慢布雷德菌(Bulleidia 
extructa)和Solobacterium moorei)、乳杆菌属(Lactobacillus)物种(例如鼠李糖乳杆菌
(Lactobacillus rhamnosus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、发酵乳杆菌
(Lactobacillus fermentum)、戈氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、植物乳杆菌
(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、惰性乳杆菌
(Lactobacillus iners)和Lactobacillus ultunensis)、动弯杆菌属(Mobiluncus)物种
(例如柯氏动弯杆菌(Mobiluncus curtisii)、羞怯动弯杆菌(Mobiluncus mulieris))、
Moryella indoligenes、欧氏菌属(Olsenella)口腔物种(例如齿龈欧氏菌(Olsenella 
uli)和Olsenella profuse)、Oribacterium sinus、丙酸杆菌属(Propionibacterium)(例
如疮疱丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)和丙酸丙酸杆菌(Propionibacterium 
propionicum))、Slackia exigua和Turicibacter sanguine。

[0248] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于放线菌属物种。放线菌属物种的实例包括衣氏放线菌(Actinomyces israelii)、内氏放线菌
(Actinomyces naeslundii)、粘性放线菌(Actinomyces viscosus)、溶齿放线菌
(Actinomyces odontolyticus)、麦尔放线菌(Actinomyces meyeri)和戈氏放线菌
(Actinomyces gerencseriae)(过去称为衣氏放线菌(Actinomyces israelii)血清型II)、
欧洲放线菌(Actinomyces europaeus)、纽氏放线菌(Actinomyces neuii)、罗氏放线菌
(Actinomyces radingae)、格雷费尼茨放线菌(Actinomyces graevenitzii)、大麦伤口放
线菌(Actinomyces hordeovulneris)、图列茨放线菌(Actinomyces turicensis)、乔氏放
线菌(Actinomyces georgiae)、化脓隐秘杆菌(放线菌(Actinomyces))、伯纳德隐秘杆菌
(放线菌)、芬氏放线菌(Actinomyces funkei)、Actinomyces lingnae、休斯顿放线菌
(Actinomyces houstonensis)和卡迪夫放线菌(Actinomyces cardiffensis)。

[0249] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于梭菌属物种。梭菌属物种的实例包括巴氏梭菌(Clostridium baratii)、双酶梭菌(Clostridium 
bifermentans)、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、肉毒梭菌(A、B、C、D、E、F、G型)、丁酸
梭菌(Clostridium butyricum)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、溶组织梭菌
(Clostridium histolyticum)、诺氏梭菌(Clostridium novyi)(A型)、诺氏梭菌(B型)、产
气荚膜梭菌、产气荚膜梭菌(A-E型)、多枝梭菌(Clostridium ramosum)、败毒梭菌
(Clostridium septicum)、索氏梭菌(Clostridium sordelli)、楔形梭菌(Clostridium 
sphenoides)、第三梭菌(Clostridium tertium)和破伤风梭菌(Clostridium tetani)。

[0250] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于诺卡菌属物种。诺卡菌属物种的实例包括星状诺卡氏菌(Nocardia asteroides)、巴西诺卡氏菌
(Nocardia brasiliensis)、皮疽诺卡氏菌(Nocardia farcinica)、新星诺卡氏菌
(Nocardia nova)、豚鼠耳炎诺卡氏菌(Nocardia otitidiscaviarum)和南非诺卡氏菌
(Nocardia transvalensis)。

[0251] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于丹毒丝菌属物种，例如猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)。

[0252] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于李斯特菌属物种，例如单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)。

[0253] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于盖球菌属物种，例如许氏盖球菌(Kytococcus schroeteri)。

[0254] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于分枝杆菌属物种。分枝杆菌属物种的实例包括脓肿分枝杆菌(Mycobacterium abscessus)、
Mycobacterium arupense、亚洲分枝杆菌(Mycobacterium asiaticum)、欧巴涅分枝杆菌
(Mycobacterium aubagnense)、鸟分枝杆菌群(Mycobacterium avium complex)、博氏分枝
杆菌(Mycobacterium bolletii)、博氏分枝杆菌、德氏分枝杆菌(Mycobacterium 
branderi)、卡内蒂分枝杆菌(Mycobacterium canettii)、山羊分枝杆菌(Mycobacterium 
caprae)、隐藏分枝杆菌(Mycobacterium celatum)、龟分枝杆菌(Mycobacterium 
chelonae)、嵌合分枝杆菌(Mycobacterium chimaera)、哥伦比亚分枝杆菌(Mycobacterium 
colombiense)、康赛医院分枝杆菌(Mycobacterium conceptionense)、出众分枝杆菌
(Mycobacterium conspicuum)、象分枝杆菌(Mycobacterium elephantis)、鼻疽分枝杆菌
(Mycobacterium farcinogenes)、佛罗伦萨分枝杆菌(Mycobacterium florentinum)、偶然
分枝杆菌群(Mycobacterium fortuitum group)、日内瓦分枝杆菌(Mycobacterium 
genavense)、古地分枝杆菌(Mycobacterium goodii)、嗜血分枝杆菌(Mycobacterium 
haemophilum)、半岛分枝杆菌(Mycobacterium heckeshornense)、海德堡分枝杆菌
(Mycobacterium heidelbergense)、休斯顿分枝杆菌(Mycobacterium houstonense)、免疫
原分枝杆菌(Mycobacterium immunogenum)、居间分枝杆菌(Mycobacterium 
interjectum)、胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellulare)、塞内加尔分枝杆菌
(Mycobacterium senegalense)、非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum)、鸟分枝杆菌
类结核亚种(Mycobacterium avium subsp paratuberculosis)、堪萨斯分枝杆菌
(Mycobacterium kansasii)、洛克司分枝杆菌(Mycobacterium lacus)、缓黄分枝杆菌
(Mycobacterium lentiflavum)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、鼠麻风分枝杆菌
(Mycobacterium lepraemurium)、马德里分枝杆菌(Mycobacterium mageritense)、玛尔摩
分枝杆菌(Mycobacterium malmoense)、海洋分枝杆菌(Mycobacterium marinum)、马赛分
枝杆菌(Mycobacterium massiliense)、田鼠分枝杆菌(Mycobacterium microti)、摩特弗
分枝杆菌(Mycobacterium montefiorense)(鳗鱼)、莫娜分枝杆菌(Mycobacterium 
moracense)、产粘液分枝杆菌(Mycobacterium mucogenicum)、内布拉斯加分枝杆菌
(Mycobacterium nebraskense)、新金色分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)、新城分枝杆
菌(Mycobacterium novocastrense)、沼泽分枝杆菌(Mycobacterium palustre)、帕尔门塞
分枝杆菌(Mycobacterium parmense)、草分枝杆菌(Mycobacterium phlei)、弗卡分枝杆菌
(Mycobacterium phocaicum)、鳍脚亚目动物分枝杆菌(Mycobacterium pinnipedii)、猪分
枝杆菌(Mycobacterium porcinum)、假分枝杆菌(Mycobacterium pseudoshottsii)(鱼)、
假结核分枝杆菌(Mycobacterium pseudotuberculosis)、萨斯喀彻温分枝杆菌
(Mycobacterium saskatchewanense)、瘰病分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)、
Mycobacterium senuense、败血分枝杆菌(Mycobacterium septicum)、猴分枝杆菌
(Mycobacterium simiae)、包皮垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)、苏加分枝杆菌
(Mycobacterium szulgai)、土分枝杆菌/无色分枝杆菌群(Mycobacterium terrae/
chromogenicum complex)、三重分枝杆菌(Mycobacterium triplex)、肺结核分枝杆菌
(Mycobacterium tuberculosis)、托斯卡纳分枝杆菌(Mycobacterium tusciae)、溃痕分枝
杆菌(Mycobacterium ulcerans)、沃氏分枝杆菌(Mycobacterium wolinskyi)和蟾分枝杆
菌(Mycobacterium xenopi)。

[0255] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的，并且选自但不限于隐秘杆菌属物种。隐秘杆菌属物种的实例包括Trueperella abortisuis、伯氏隐秘杆菌(Trueperella 
bernardiae)、Trueperella bialowiezensis、Trueperella bonasi、化脓隐秘杆菌
(Trueperella pyogenes)。

[0256] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阳性的、革兰氏阴性的或无细胞壁，并且选自但不限于牲畜病原体。牲畜病原体的实例包括猪放线杆菌(Actinobaculum suis)、牛
放线菌(Actinomyces bovis)、化脓隐秘杆菌、炭疽芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、地衣芽孢杆
菌、短小芽孢杆菌、产黑色素芽孢杆菌(Bacillus melaninogenicus)、枯草芽孢杆菌、肉毒
梭菌、气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)、溶血梭菌(Clostridium haemolyticum)、诺氏
梭菌、产气荚膜梭菌、败毒梭菌、索氏梭菌、破伤风梭菌、鹌鹑梭菌(Clostridium colinum)、
假结核棒状杆菌、牛肾盂炎棒状杆菌(Corynebacterium renale)、刚果嗜皮菌
(Dermatophilus congolensis)、肠球菌属物种(例如粪肠球菌、屎肠球菌、耐久肠球菌、鸟
肠球菌、海氏肠球菌)、猪丹毒丝菌、伊万诺夫李斯特菌(Listeria ivanovii)、格雷李斯特
菌(Listeria grayi)、无害李斯特菌(Listeria innocua)、西尔李斯特菌(Listeria 
seeligeri)、威尔逊李斯特菌(Listeria welshimeri)、单核细胞增生李斯特菌、鸟分枝杆
菌、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、类结核分枝杆菌(Mycobacterium 
paratuberculosis)(副结核性肠炎(Johne's Disease))、支原体属(例如山羊支原体山羊
肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae)、山羊支原体山羊亚种
(Mycoplasma capricolum subsp.capricolum)、霉状支原体霉状亚种(M.mycoides subsp 
mycoides)、无乳支原体(M.agalactiae)、羊肺炎支原体(M.ovipneumoniae)、结膜支原体
(M.conjunctivae)、精氨酸支原体(M.arginini)、牛支原体(M.bovis)和腐败支原体
(M.putrefaciens))、牛支原体、殊异支原体(Mycoplasma dispar)、霉状支原体霉状亚种
(例如牛传染性胸膜肺炎(CBPP))鸡败血支原体(Mycoplasma gallisepticum)(MG)、衣阿华
火鸡支原体(Mycoplasma iowae meleagridis)(MM)、关节液支原体(Mycoplasma 
synoviae)(MS)、猪嗜血支原体(Mycoplasma haemosuis)(过去称为猪附红血球体
(Eperythrozoon suis))、产碱支原体(Mycoplasma alkalescens)、牛生殖道支原体
(Mycoplasma bovigenitalum)、牛鼻支原体(Mycoplasma bovirhinis)、牛眼支原体
(Mycoplasma bovoculi)、加利福尼亚支原体(Mycoplasma californicum)、加拿大支原体
(Mycoplasma canadense)、犬支原体(Mycoplasma cynos)、马生殖道支原体(Mycoplasma 
equigenitalium)、猫支原体(Mycoplasma gateae)、犬嗜血支原体(Mycoplasma 
haemocanis)、猫嗜血支原体(Mycoplasma haemofelis)、猪肺炎支原体(Mycoplasma 
hyopneumoniae)、猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)、猪关节液支原体(Mycoplasma 
hyosynoviae)、衣阿华支原体(Mycoplasma iowae)、利氏支原体(Mycoplasma leachii)、火
鸡支原体(Mycoplasma meleagridis)、霉状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp 
capri)、温氏支原体(Mycoplasma wenyonii)、猪支原体(Mycoplasma suis)、马红球菌、表
皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、猫葡萄球菌、木糖葡萄球菌、产色葡萄球菌、沃氏葡萄球菌、溶
血葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、腐生葡萄球菌、人葡萄球菌、山羊葡萄球菌、科氏葡萄球菌科氏
亚种(Staphylococcus cohnii subsp.cohnii)、科氏葡萄球菌解脲亚种(Staphylococcus 
cohnii subsp.urealyticus)、头状葡萄球菌头状亚种(Staphylococcus capitis 
subsp.capitis)、头状葡萄球菌解脲亚种(Staphylococcus capitis 
subsp.urealyticus)、猪葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、伪中间葡萄球菌、海豚葡萄球菌、施氏
葡萄球菌凝结亚种(Staphylococcus schleiferi subsp.coagulans)、金黄色葡萄球菌厌
氧亚种(Staphylococcus aureus subsp.anaerobius)、乳房链球菌(Streptococcus 
uberis)、犬链球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、化脓链球菌、牛链球菌、马链球菌兽瘟亚种、
马肠链球菌(Streptococcus equinus)、马链球菌(Streptococcus equi)(马链球菌马亚
种)、似马链球菌(Streptococcus equisimilis)(停乳链球菌似马亚种)、豕链球菌、猪链球
菌、兽瘟链球菌(Streptococcus zooepidemicus)、兽瘟链球菌(马链球菌兽瘟亚种)、停乳
链球菌似马亚种、疮疱丙酸杆菌、颗粒丙酸杆菌(Propionibacterium granulosum)、真杆菌
属、吲哚消化球菌(Peptococcus indolicus)和厌氧消化链球菌；以及以下革兰氏阴性属的
各物种：放线杆菌属(Actinobacillus)、气单胞菌属(Aeromonas)、无形体属(Anaplasma)、
弓形菌属(Arcobacter)、禽杆菌属(Avibacterium)、类杆菌属(Bacteroides)、巴尔通氏体
属(Bartonella)、博德特氏杆菌属(Bordetella)、包柔氏螺旋体属(Borrelia)、短螺旋体属
(Brachyspira)、布氏杆菌属(Brucella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、二氧化碳噬纤维菌
属(Capnocytophaga)、衣原体属(Chlamydia)、嗜衣原体属(Chlamydophila)、金黄杆菌属
(Chryseobacterium)、考克斯氏体属(Coxiella)、噬纤维菌属(Cytophaga)、偶蹄形菌属
(Dichelobacter)、爱德华氏菌属(Edwardsiella)、埃利希氏体属(Ehrlichia)、埃希氏菌属
(Escherichia)、黄杆菌属(Flavobacterium)、弗朗西斯氏菌属(Francisella)、梭杆菌属
(Fusobacterium)、鸡杆菌属(Gallibacterium)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、嗜组织菌属
(Histophilus)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、指甲花属(Lawsonia)、钩端螺旋体属
(Leptospira)、曼氏杆菌属(Mannheimia)、巨球形菌属(Megasphaera)、摩拉克氏菌属
(Moraxella)、新立克次氏体属(Neorickettsia)、Nicoletella、鸟杆菌属
(Ornithobacterium)、巴斯德氏菌属(Pasteurella)、发光杆菌属(Photobacterium)、鱼衣
原体属(Piscichlamydia)、鱼立克次氏体属(Piscirickettsia)、红棕色单胞菌属
(Porphyromonas)、普雷沃氏菌属(Prevotella)、变形杆菌属(Proteus)、假单胞菌属
(Pseudomonas)、立克次氏体属(Rickettsia)、立默氏菌属(Riemerella)、沙门氏菌属
(Salmonella)、链杆菌属(Streptobacillus)、黏着杆菌属(Tenacibaculum)、弧菌属
(Vibrio)和耶尔森氏菌属(Yersinia)。

[0257] 在另一个实施方案中，所述菌剂选自但不限于伴侣动物物种例如猫、狗和马的病原体。此类病原体的实例包括马病原体，例如马链球菌、兽瘟链球菌、马红球菌、艰难梭菌、
产气荚膜梭菌、假结核棒状杆菌、毛状梭菌(Clostridium piliforme)、牛放线菌、金黄色葡
萄球菌、β溶血链球菌属物种、刚果嗜皮菌、破伤风梭菌和肉毒梭菌。另外的实例包括狗和猫
的病原体，例如葡萄球菌属物种、链球菌属物种、梭菌属物种、放线菌属物种、肠球菌属物
种、诺卡菌属物种、支原体属物种和分枝杆菌属物种。

[0258] 在另一个实施方案中，所述菌剂是革兰氏阴性的，并且选自以下代表性科和种：醋酸杆菌科(Acetobacteraceae)：-颈玫瑰单胞菌(Roseomonas cervicalis)、费氏玫瑰单胞
菌(Roseomonas fauriae)、吉氏玫瑰单胞菌(Roseomonas gilardii)--气单胞菌科
(Aeromonadaceae)：-异常嗜糖气单胞菌(Aeromonas allosaccharophila)、嗜水气单胞菌
(Aeromonas aquariorum)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、嗜水气单胞菌(Aeromonas 
hydrophila)(和亚种)、杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)、舒伯特气单胞菌
(Aeromonas shubertii)、维罗纳气单胞菌温和生物变型(Aeromonas veronii biovar 
sobria)(温和气单胞菌(Aeromonas sobria))--产碱杆菌科(Alcaligenaceae)：-木糖氧化
无色杆菌(Achromobacter xylosoxidans)、粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)、
Bordetella ansorpii、鸟博德特氏杆菌(Bordetella avium)、支气管炎博德特氏杆菌
(Bordetella bronchiseptica)、欣茨博德特氏杆菌(Bordetella hinzii)、霍氏博德特氏
杆菌(Bordetella holmesii)、副百日咳博德特氏杆菌(Bordetella parapertussis)、百日
咳博德特氏杆菌(Bordetella pertussis)、彼得里博德特氏杆菌(Bordetella petrii)、创
口博德特氏杆菌(Bordetella trematum)、解脲寡源杆菌(Oligella ureolytica)、尿道寡
源杆菌(Oligella urethralis)--无浆体科(Anaplasmataceae)：-嗜吞噬细胞无浆体
(Anaplasma phagocytophilum)、扁平无浆体(Anaplasma platys)、牛无浆体(Anaplasma 
bovis)、红血球内生无浆体(Anaplasma centrale)、边缘无浆体(Anaplasma marginale)、
奥氏无浆体(Anaplasma odocoilei)、羊无浆体(Anaplasma ovis)、犬埃里希氏体
(Ehrlichia canis)、恰菲埃里希氏体(Ehrlichia chaffeensis)、尤因埃里希氏体
(Ehrlichia ewingii)、小鼠埃里希氏体(Ehrlichia muris)、羊埃里希氏体(Ehrlichia 
ovina)、反刍兽埃里希氏体(Ehrlichia ruminantium)、Neoehrlichia lotoris、米库尔新
埃里希氏体(Neoehrlichia mikurensis)、蠕虫新立克次氏体(Neorickettsia 
helminthoeca)、立氏新立克次氏体(Neorickettsia risticii)、腺热新立克次体
(Neorickettsia sennetsu)、尖音库蚊沃尔巴克氏体(Wolbachia pipientis)--装甲菌科
(Armatimonadaceae)：-玫瑰装甲菌(Armatimonas rosea)--拟杆菌科(Bacteroidaceae)：-
福赛斯拟杆菌(Bacteroides forsythus)、脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)、产黑色素
拟杆菌(Bacteroides melaninogenicus)、赤拟杆菌(Bacteroides ruber)、解脲拟杆菌
(Bacteroides urealtyicus)--巴尔通氏体科(Bartonellaceae)：-阿尔萨斯巴尔通氏体
(Bartonella alsatica)、澳大利亚巴尔通氏体(Bartonella australis)、杆状巴尔通氏体
(Bartonella bacilliformis)、Bartonella birtlesii、牛巴尔通氏体(Bartonella 
bovis)、卡普里巴尔通氏体(Bartonella capreoli)、Bartonella chomelii、克氏巴尔通氏
体(Bartonella clarridgeiae)、多氏巴尔通氏体(Bartonella doshiae)、伊丽莎白巴尔通
氏体(Bartonella elizabethae)、格氏巴尔通氏体(Bartonella grahamii)、汉氏巴尔通氏
体(Bartonella henselae)、克勒巴尔通氏体(Bartonella koehlerae)、跳鼠巴尔通氏体
(Bartonella peromysci)、Bartonella phoceensis、五日热巴尔通氏体(Bartonella 
quintana)、Bartonella rattimassiliensis、罗卡利巴尔通氏体(Bartonella 
rochalimae)、Bartonella schoenbuchensis、鼹鼠巴尔通氏体(Bartonella talpae)、
Bartonella tamiae、泰勒氏巴尔通氏体(Bartonella taylorii)、特利波契巴尔通氏体
(Bartonella tribocorum)、文森氏巴尔通氏体博格霍夫亚种(Bartonella vinsonii 
subsp berkhoffii)、文森氏巴尔通氏体阿鲁潘亚种(Bartonella vinsonii 
subsp.arupensis)、文森氏巴尔通氏体文森氏亚种(Bartonella vinsonii 
subsp.vinsonii)--蛭弧菌科(Bdellovibrionaceae)：-蛭弧菌属物种(Bdellovibrio 
spp.)--短螺旋体科(Brachyspiraceae)：-短螺旋体属物种(Brachyspira spp)，包括汉普
森短螺旋体(Brachyspira hampsonii)、猪痢疾短螺旋体(Brachyspira hyodysenteriae)、
莫道克短螺旋体(Brachyspira murdochii)、结肠菌毛样短螺旋体(Brachyspira 
pilosicoli)--布鲁氏菌科(Brucellaceae)：-流产布鲁氏菌(Brucella abortus)、犬布鲁
氏菌(Brucella canis)、鲸型布鲁氏菌(Brucella ceti)、马尔他布鲁氏菌(Brucella 
melitensis)、羊布鲁氏菌(Brucella ovis)、鳍型布鲁氏菌(Brucella pinnipedialis)、猪
布鲁氏菌(Brucella suis)、人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi)、中间苍白杆菌
(Ochrobactrum intermedium)--伯克氏菌科(Burkholderiaceae)：-Burkholderia 
aboris、须芒草伯克氏菌(Burkholderia ambifaria)(基因组变型VII)、Burkholderia 
anthina(基因组变型VIII)、新洋葱伯克氏菌(Burkholderia cenocepacia)(基因组变型
III)、洋葱伯克氏菌(Burkholderia cepacia)(基因组变型I)、Burkholderia diffusa、多
罗萨伯克氏菌(Burkholderia dolosa)(基因组变型VI)、Burkholderia latens、鼻疽伯克
氏菌(Burkholderia mallei)、Burkholderia metallica、多噬伯克氏菌(Burkholderia 
multivorans)(基因组变型II)、类鼻疽伯克氏菌(Burkholderia pseudomallei)、吡咯伯克
氏菌(Burkholderia pyrrocinia)(基因组变型IX)、Burkholderia seminalis、稳定伯克氏
菌(Burkholderia stabilis)(基因组变型IV)、尤伯纳伯克氏菌(Burkholderia 
ubonensis)(基因组变型X)、越南伯克氏菌(Burkholderia vietnamiensis)(基因组变型
V)、罕见贪铜菌(Cupriavidus pauculus)、吉氏贪铜菌(Cupriavidus gilardii)、皮氏罗尔
斯顿菌(Ralstonia pickettii)、解甘露醇罗尔斯顿菌(Ralstonia mannitolilytica)、
Sphaerotilus hippei、蒙大拿球衣菌(Sphaerotilus montanus)、浮游球衣菌
(Sphaerotilus natans)--弯曲菌科(Campylobacteraceae)：-弓形菌属物种(Arcobacter 
spp)，包括斯氏弓形菌(Arcobacter skirrowii)、大肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)、简
明弯曲杆菌(Campylobacter concisus)、曲形弯曲杆菌(Campylobacter curvus)、胚胎弯
曲杆菌(Campylobacter fetus)、纤细弯曲杆菌(Campylobacter gracilis)、瑞士弯曲杆菌
(Campylobacter helveticus)、人弯曲杆菌(Campylobacter hominis)、豚肠弯曲杆菌
(Campylobacter hyointestinalis)、海象弯曲杆菌(Campylobacter insulaenigrae)、空
肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)、拉尼尔弯曲杆菌(Campylobacter lanienae)、红嘴
鸥弯曲杆菌(Campylobacter lari)、海鸟弯曲杆菌(Campylobacter laridis)、粘膜弯曲杆
菌(Campylobacter mucosalis)、直肠弯曲杆菌(Campylobacter rectus)、昭和弯曲杆菌
(Campylobacter showae)、痰液弯曲杆菌(Campylobacter sputorum)、乌普萨拉弯曲杆菌
(Campylobacter upsaliensis)--Candidatus：-鲑鱼衣原体(Piscichlamydia 
salmonis)--心杆菌科(Cardiobacteriaceae)：-人心杆菌(Cardiobacterium hominis)、瓣
膜心杆菌(Cardiobacterium valvarum)、节瘤偶蹄形菌(Dichelobacter nodosus)--衣原
体科(Chlamydiaceae)：-衣原体属物种(Chlamydia spp)，包括鸟衣原体(Chlamydia 
avium)、家禽衣原体(Chlamydia gallinacea)、鼠沙眼衣原体(Chlamydia muridarum)、猪
衣原体(Chlamydia suis)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)；嗜衣原体属物种
(Chlamydophila spp)，包括肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae)、家畜嗜衣原体
(Chlamydophila pecorum)、鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci)、流产嗜衣原体
(Chlamydophila abortus)、豚鼠嗜衣原体(Chlamydophila caviae)和猫嗜衣原体
(Chlamydophila felis)--Chthonomonadaceae：-Chthonomonas calidirosea.--丛毛单胞
菌科(Comamonadaceae)：-睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)；
Verminephrobacter spp.--柯克斯体科(Coxiellaceae)：-伯氏柯克斯体(Coxiella 
burnetii)--噬纤维菌科(Cytophagaceae)：-柱状噬纤维菌(Cytophaga columnaris)、哈氏
噬纤维菌(Cytophaga hutchinsonii)、Flexibacter echinicida、华美屈挠杆菌
(Flexibacter elegans)、易挠屈挠杆菌(Flexibacter flexilis)、海滨屈挠杆菌
(Flexibacter litoralis)、多形屈挠杆菌(Flexibacter polymorphus)、玫瑰屈挠杆菌
(Flexibacter roseolus)、红屈挠杆菌(Flexibacter ruber)--脱硫弧菌科
(Desulfovibrionaceae)：-沃氏嗜胆菌(Bilophila wadsworthia)、细胞内劳索尼亚氏菌
(Lawsonia intracellularis)--肠杆菌科：-戴氏西地西菌(Cedecea davisae)、拉氏西地
西菌(Cedecea lapagei)、奈氏西地西菌(Cedecea neteri)、无丙二酸柠檬酸杆菌
(Citrobacter amalonaticus)、差异柠檬酸杆菌(Citrobacter diversus)、弗氏柠檬酸杆
菌(Citrobacter freundii)、柯氏柠檬酸杆菌(Citrobacter koseri)、康帝蒙提克罗诺杆
菌(Cronobacter condimenti)、都柏林克罗诺杆菌(Cronobacter dublinensis)、瑞士克罗
诺杆菌(Cronobacter helveticus)、丙二酸克罗诺杆菌(Cronobacter malonaticus)、穆汀
斯克罗诺杆菌(Cronobacter muytjensii)、Cronobacter pulveris、阪崎克罗诺杆菌
(Cronobacter sakazakii)、图列茨克罗诺杆菌(Cronobacter turicensis)、尤尼沃斯克罗
诺杆菌(Cronobacter universalis)、苏黎世克罗诺杆菌(Cronobacter zurichensis)、鲶
鱼爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)、产气肠
杆菌(Enterobacter aerogenes)、成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)、阴沟肠杆菌
(Enterobacter cloacae)、Enterobacter cowanii、阿尔伯蒂埃希氏菌(Escherichia 
albertii)、大肠杆菌包括AIEC＝粘附侵袭性大肠杆菌、EaggEC＝肠凝集性大肠杆菌、EHEC
＝肠出血性大肠杆菌、EIEC＝肠侵袭性大肠杆菌、EPEC＝肠致病性大肠杆菌、ETEC＝产肠毒
素大肠杆菌、ExPEC＝肠外致病性大肠杆菌、NMEC＝新生儿脑膜炎大肠杆菌、NTEC＝坏死性
毒素大肠杆菌、UPEC＝尿路致病性大肠杆菌、弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)、
美洲爱文氏菌(Ewingella americana)、蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)、副蜂房哈夫尼菌
(Hafnia paralvei)、肉芽肿克雷伯氏菌(Klebsiella granulomatis)、产酸克雷伯氏菌
(Klebsiella oxytoca)、肺炎克雷伯氏菌、抗坏血酸克吕沃尔氏菌(Kluyvera ascorbata)、
栖冷克吕沃尔氏菌(Kluyvera cryocrescens)、摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)、成
团泛菌(Pantoea agglomerans)(过去称为成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans))、非
共生发光杆菌(Photorhabdus asymbiotica)、类志贺邻单胞菌(Plesiomonas 
shigelloides)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、彭氏变形杆菌(Proteus penneri)、
普通变形杆菌(Proteus vulgaris)、产碱普罗威登斯菌(Providencia alcalifaciens)、雷
氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)、斯氏普罗威登斯菌(Providencia stuartii)、
Raoultella electrica、解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)、植生拉乌尔
菌(Raoultella planticola)、土生拉乌尔菌(Raoultella terrigena)、邦戈尔沙门菌
(Salmonella bongori)、肠沙门氏菌肠亚种(Salmonella enterica subspecies 
enterica)(多个血清型)、液化沙雷氏菌(Serratia liquifaciens)、粘质沙雷氏菌
(Serratia marcesans)、鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)、痢疾志贺氏菌(Shigella 
dysenteriae)、弗氏志贺氏菌(Shigella flexneri)、索氏志贺氏菌(Shigella sonnei)、小
肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、
假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)、鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia 
ruckeri)--伞单胞菌科(Fimbriimonadaceae)：-Fimbriimonas ginsengisoli.--黄杆菌科
(Flavobacteriaceae)：-动物溃疡伯杰氏菌(Bergeyella zoohelcum)、狗咬二氧化碳噬纤
维菌(Capnocytophaga canimorsus)、犬咬二氧化碳噬纤维菌(Capnocytophaga 
cynodegmi)、牙龈二氧化碳噬纤维菌(Capnocytophaga gingivalis)、颗粒二氧化碳噬纤维
菌(Capnocytophaga granulosa)、溶血二氧化碳噬纤维菌(Capnocytophaga 
haemolytica)、Capnocytophaga leadbetteri、黄褐二氧化碳噬纤维菌(Capnocytophaga 
ochracea)、生痰二氧化碳噬纤维菌(Capnocytophaga sputigena)、产吲哚金黄杆菌
(Chryseobacterium indologenes)、鱼金黄杆菌(Chryseobacterium piscicola)、脑膜炎
败血伊丽莎白金菌(Elizabethkingia meningoseptica)、嗜鳃黄杆菌(Flavobacterium 
branchiophilum)、柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)、小鳟鱼黄杆菌
(Flavobacterium oncorhynchi)、杀鱼黄杆菌(Flavobacterium piscicida)、嗜冷黄杆菌
(Flavobacterium psychrophilum)、气味类香菌(Myroides odoratus)、拟香味类香菌
(Myroides odoratimimus)、鼻腔鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale)、鸭瘟立默
氏菌(Riemerella anatipestifer)、哥伦比亚立默氏菌(Riemerella columbina)、鸽咽喉
立默氏菌(Riemerella columbipharyngis)、Tenacibaculum dicentrarchi、脱色黏着杆菌
(Tenacibaculum discolour)、Tenacibaculum gallaicum、海洋黏着杆菌(Tenacibaculum 
maritimum)、鳎鱼黏着杆菌(Tenacibaculum soleae)、有毒威克斯氏菌(Weeksella 
virosa)--弗朗西斯氏菌科(Francisellaceae)：-土拉热弗朗西斯氏菌土拉热亚种
(Francisella tularensis subsp.tularensis)、土拉热弗朗西斯氏菌全北区亚种
(Francisella tularensis subsp.holarctica)、土拉热弗朗西斯氏菌新凶手亚种
(Francisella tularensis subsp.novicida)、蜃楼弗朗西斯氏菌(Francisella 
philomiragia)、诺神弗朗西斯氏菌(Francisella noatunensis)、诺神弗朗西斯氏菌东方
亚种(Francisella noatunensis subsp.orientalis)(也称为亚洲弗朗西斯氏菌
(Francisella asiatica))--梭杆菌科(Fusobacteriaceae)；-梭杆菌属物种
(Fusobacterium spp.)，包括坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum)、具核梭杆菌
(Fusobacterium nucleatum)、多形梭杆菌(Fusobacterium polymorphum)--螺杆菌科
(Helicobacteraceae)：-同性恋螺杆菌(Helicobacter cinaedi)、芬纳尔螺杆菌
(Helicobacter fennelliae)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)--军团菌科
(Legionellaceae)：-嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)和其它物种，包括茴香军团菌
(Legionella anisa)、伯明瀚军团菌(Legionella birminghamensis)、博杰曼军团菌
(Legionella bozemannii)、辛辛那提军团菌(Legionella cincinnatiensis)、杜莫夫军团
菌(Legionella dumoffii)、费勒氏军团菌(Legionella feeleii)、戈曼军团菌
(Legionella gormanii)、哈开里军团菌(Legionella hackeliae)、约旦军团菌
(Legionella jordanis)、兰斯格军团菌(Legionella lansingensis)、长滩军团菌
(Legionella longbeachae)、马氏军团菌(Legionella maceachernii)、麦氏军团菌
(Legionella micdadei)、橡树岭军团菌(Legionella oakridgensis)、巴黎军团菌
(Legionella parisiensis)、赫伦荒原军团菌(Legionella sainthelens)、图森军团菌
(Legionella tusconensis)、沃氏军团菌(Legionella wadsworthii)、沃斯利军团菌
(Legionella waltersii)--钩端螺旋体科(Leptospiraceae)：-亚历山大钩端螺旋体
(Leptospira alexanderi)(包括亚历山大钩端螺旋体七日热血清变型(Leptospira 
alexanderi serovar Hebdomadis)、亚历山大钩端螺旋体曼耗群3血清变型(Leptospira 
alexanderi serovar Manhao 3))、Leptospira alstoni(包括Leptospira alstoni 
serovar Pingchang、Leptospira alstoni serovar Sichuan)、双曲钩端螺旋体
(Leptospira biflexa)(包括双曲钩端螺旋体安科纳血清变型(Leptospira biflexa 
serovar Ancona)、双曲钩端螺旋体卡内拉血清变型(Leptospira biflexa serovar 
Canela))、博氏钩端螺旋体(Leptospira borgpetersenii)(包括博氏钩端螺旋体哈德乔血
清变型(Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo)、博氏钩端螺旋体哈德乔-牛血清
变型(Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo-bovis)、博氏钩端螺旋体波莫纳血清
变型(Leptospira borgpetersenii serovar Pomona)、博氏钩端螺旋体塔拉索夫血清变型
(Leptospira borgpetersenii serovar Tarassovi))、布鲁姆钩端螺旋体(Leptospira 
broomii)(包括布鲁姆钩端螺旋体赫斯布里治血清变型(Leptospira broomii serovar 
Hurstbridge))、弗氏钩端螺旋体(Leptospira fainei)(包括弗氏钩端螺旋体赫斯布里治
血清变型(Leptospira fainei serovar Hurstbridge))、Leptospira idonii、稻田氏钩端
螺旋体(Leptospira inadai)(包括稻田氏钩端螺旋体莱姆血清变型(Leptospira inadai 
serovar Lyme)、稻田氏钩端螺旋体马来亚血清变型(Leptospira inadai serovar 
Malaya))、问号钩端螺旋体(Leptospira interrogans)(包括问号钩端螺旋体澳大利亚血
清变型(Leptospira interrogans serovar Australis)、问号钩端螺旋体秋生血清变型
(Leptospira interrogans serovar Autumnalis)、问号钩端螺旋体布拉迪斯拉发血清变
型(Leptospira interrogans serovar Bratislava)、问号钩端螺旋体犬血清变型
(Leptospira interrogans serovar Canicola)、问号钩端螺旋体感冒伤寒血清变型
(Leptospira interrogans serovar Grippotyphosa)、问号钩端螺旋体哈德乔血清变型
(Leptospira interrogans serovar Hardjo)、问号钩端螺旋体哈德乔-牛血清变型
(Leptospira interrogans serovar Hardjo-bovis)、问号钩端螺旋体出血性黄疸血清变
型(Leptospira interrogans serovar Icterohaemorrhagiae)、问号钩端螺旋体波莫纳血
清变型(Leptospira interrogans serovar Pomona)、问号钩端螺旋体致热血清变型
(Leptospira interrogans serovar Pyrogenes)、问号钩端螺旋体塔拉索夫血清变型
(Leptospira interrogans serovar Tarassovi))、基施纳钩端螺旋体(Leptospira 
kirschneri)(包括基施纳钩端螺旋体保加利亚血清变型(Leptospira kirschneri 
serovar Bulgarica)、基施纳钩端螺旋体蝙蝠血清变型(Leptospira kirschneri serovar 
Cynopteri)、基施纳钩端螺旋体感冒伤寒血清变型(Leptospira kirschneri serovar 
Grippotyphosa))、克氏钩端螺旋体(Leptospira kmetyi)、黎氏钩端螺旋体(Leptospira 
licerasiae)、迈氏钩端螺旋体(Leptospira meyeri)(包括迈氏钩端螺旋体索非亚血清变
型(Leptospira meyeri serovar Sofia))、野口氏钩端螺旋体(Leptospira noguchii)(包
括野口氏钩端螺旋体巴拿马血清变型(Leptospira noguchii serovar Panama)、野口氏钩
端螺旋体波莫纳血清变型(Leptospira noguchii serovar Pomona))、圣地罗斯钩端螺旋
体(Leptospira santarosai)、Leptospira terpstrae、Leptospira vanthielii、韦氏钩端
螺旋体(Leptospira weilii)(包括韦氏钩端螺旋体塞尔东尼血清变型(Leptospira 
weilii serovar Celledoni)、韦氏钩端螺旋体沙敏血清变型(Leptospira weilii 
serovar Sarmin))、沃尔氏钩端螺旋体(Leptospira wolbachii)、沃夫钩端螺旋体
(Leptospira wolffii)、柳川钩端螺旋体(Leptospira yanagawae)--纤毛菌科
(Leptotrichiaceae)：-口腔纤毛菌(Leptotrichia buccalis)、念珠状链杆菌
(Streptobacillus moniliformis)--甲基杆菌科(Methylobacteriaceae)：-外链甲基杆菌
群(Methylobacterium extorquens group)、藤泽氏甲基杆菌(Methylobacterium 
fujisawaense)、嗜中温甲基杆菌(Methylobacterium mesophilicum)、扎氏甲基杆菌
(Methylobacterium zatmanii)--摩拉克氏菌科(Moraxellaceae)：-鲍氏不动杆菌(基因组
种2)、贝氏不动杆菌(Acinetobacter baylyi)、布氏不动杆菌(Acinetobacter bouvetii)、
乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)(基因组种1)、格尔纳不动杆菌
(Acinetobacter gerneri)、格氏不动杆菌(Acinetobacter grimontii)、溶血不动杆菌
(Acinetobacter haemolyticus)(基因组种4)、约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii)
(基因组种7)、琼氏不动杆菌(Acinetobacter junii)(基因组种5)、鲁氏不动杆菌
(Acinetobacter lwoffi)(基因组种8/9)、帕氏不动杆菌(Acinetobacter parvus)、抗辐射
不动杆菌(Acinetobacter radioresistens)(基因组种12)、申氏不动杆菌(Acinetobacter 
schindleri)、潭氏不动杆菌(Acinetobacter tandoii)、特氏不动杆菌(Acinetobacter 
tjernbergiae)、汤氏不动杆菌(Acinetobacter towneri)、邬氏不动杆菌(Acinetobacter 
ursingii)、威尼斯不动杆菌(Acinetobacter venetianus)、亚特兰大摩拉克氏菌
(Moraxella atlantae)、鲍氏摩拉克氏菌(Moraxella boevrei)、牛摩拉克氏菌(Moraxella 
bovis)、牛眼摩拉克氏菌(Moraxella bovoculi)、犬摩拉克氏菌(Moraxella canis)、山羊
摩拉克氏菌(Moraxella caprae)、卡他摩拉克氏菌(Moraxella catarrhalis)、豚鼠摩拉克
氏菌(Moraxella caviae)、兔摩拉克氏菌(Moraxella cuniculi)、马摩拉克氏菌
(Moraxella equi)、结膜炎摩拉克氏菌(Moraxella lacunata)、林肯摩拉克氏菌
(Moraxella lincolnii)、猴摩拉克氏菌(Moraxella macacae)、不液化摩拉克氏菌
(Moraxella nonliquefaciens)、Moraxella oblonga、奥斯陆摩拉克氏菌(Moraxella 
osloensis)、羊摩拉克氏菌(Moraxella ovis)、苯丙酮酸摩拉克氏菌(Moraxella 
phenylpyruvica)、多动物摩拉克氏菌(Moraxella pluranimalium)、猪摩拉克氏菌
(Moraxella porci)--摩替亚氏菌科(Moritellaceae)：-深渊摩替亚氏菌(Moritella 
abyssi)、茶山站摩替亚氏菌(Moritella dasanensis)、日本摩替亚氏菌(Moritella 
japonica)、海洋摩替亚氏菌(Moritella marina)、深海摩替亚氏菌(Moritella pro-
funda)、粘摩替亚氏菌(Moritella viscosa)、雅氏摩替亚氏菌(Moritella yayanosii)--
奈瑟氏菌科(Neisseriaceae)：-紫色色杆菌(Chromobacterium violaceum)、啮蚀艾肯氏菌
(Eikenella corrodens)、反硝化金氏菌(Kingella denitrificans)、金氏金氏菌
(Kingella kingae)、口金氏菌(Kingella oralis)、波塔新金氏杆菌(Kingella potus)、灰
色奈瑟氏菌(Neisseria cinerea)、长奈瑟氏菌(Neisseria elongata)、浅黄奈瑟氏菌
(Neisseria flavescens)、淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae)、乳糖奈瑟氏菌
(Neisseria lactamica)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)、粘液奈瑟氏菌
(Neisseria mucosa)、多糖奈瑟氏菌(Neisseria polysaccharea)、干燥奈瑟氏菌
(Neisseria sicca)、微黄奈瑟氏菌(Neisseria subflava)、Neisseria weaver、透明颤菌
属物种(Vitreoscilla spp)--亚硝化单胞菌科(Nitrosomonadaceae)：-真养亚硝化单胞菌
(Nitrosomonas eutropha)、嗜盐亚硝化单胞菌(Nitrosomonas halophila)、寡养亚硝化单
胞菌(Nitrosomonas oligotropha)--巴斯德氏菌科(Pasteurellaceae)：-伴放线放线杆菌
(Actinobacillus actinomycetemcomitans)、马驹放线杆菌(Actinobacillus equuli)、李
氏放线杆菌(Actinobacillus lignieresii)、大叶性肺炎放线杆菌(Actinobacillus 
pleuropneumoniae)、精液放线杆菌(Actinobacillus seminis)、产琥珀酸放线杆菌
(Actinobacillus succinogenes)、脲放线杆菌(Actinobacillus ureae)、伴放线凝聚杆菌
(Aggregatibacter actinomycetemcomitans)、惰性凝聚杆菌(Aggregatibacter segnis)、
嗜沫凝聚杆菌(Aggregatibacter aphrophilus)、鸟禽杆菌(Avibacterium avium)、禽心内
膜炎杆菌(Avibacterium endocarditidis)、鸡禽杆菌(Avibacterium gallinarum)、副鸡
禽杆菌(Avibacterium paragallinarum)、敏捷禽杆菌(Avibacterium volantium)、
Bibersteinia trehalose、鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis)、鸡杆菌
(Gallibacterium)基因组种1、鸡杆菌基因组种2、鸡杆菌基因组种3、鸡杆菌群V
(Gallibacterium group V)、虎皮鹦鹉鸡杆菌(Gallibacterium melopsittaci)、输卵管炎
鸡杆菌(Gallibacterium salpingitidis)、海藻糖发酵鸡杆菌(Gallibacterium 
trehalosifermentans)、埃及嗜血杆菌(Haemophilus aegyptius)、鸟嗜血杆菌
(Haemophilus avium)、杜克雷嗜血杆菌(Haemophilus ducreyi)、溶血嗜血杆菌
(Haemophilus haemolyticus)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、副溶血嗜血杆
菌(Haemophilus parahaemolyticus)、副流感嗜血杆菌(Haemophilus parainfluenzae)、
副猪嗜血杆菌Haemophilus parasuis)、睡眠嗜组织菌(Histophilus somni)、豚鼠曼海姆
菌(Mannheimia caviae)、葡糖苷曼海姆菌(Mannheimia glucosida)、肉芽肿曼海姆菌
(Mannheimia granulomatis)、溶血曼海姆菌(Mannheimia haemolytica)、反刍兽曼海姆菌
(Mannheimia ruminalis)、Mannheimia varigena、Nicoletella semolina、产气巴斯德氏
菌(Pasteurella aerogenes)、贝氏巴斯德氏菌(Pasteurella bettyae)、马巴斯德氏菌
(Pasteurella caballi)、犬巴斯德氏菌(Pasteurella canis)、达可马巴斯德氏菌
(Pasteurella dagmatis)、多杀巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)(多杀亚种
(multocida)、败毒亚种(septicum)、败血亚种(gallicida))、侵肺巴斯德氏菌
(Pasteurella pneumotropica)、口巴斯德氏菌(Pasteurella stomatis)、海藻巴斯德氏菌
(Pasteurella trehalosi)--鱼立克次氏体科(Piscirickettsiaceae)：-鲑鱼立克次氏体
(Piscirickettsia salmonis)--邻单胞菌科(Plesiomonadaceae)：-类志贺邻单胞菌--多
囊菌科(Polyangiaceae)：-纤维堆囊菌(Sorangium cellulosum)--紫单胞菌科
(Porphyromonadaceae)：-Dysgonomonas capnocytophagoides、Dysgonomonas gadei、
Dysgonomonas hofstadii、Dysgonomonas mossii、Dysgonomonas oryzarvi、Dysgonomonas 
wimpennyi、牙龈红棕色单胞菌(Porphyromonas gingivalis)--普雷沃氏菌科
(Prevotellaceae)：-普雷沃氏菌属物种(Prevotella spp.)，包括中间普雷沃氏菌
(Prevotella intermedia)、产黑色素普雷沃氏菌(Prevotella melaninogenica)--假单胞
菌科(Pseudomonadaceae)：-浅黄金色单胞菌(Chryseomonas luteola)、铜绿假单胞菌、浅
黄假单胞菌(Pseudomonas luteola)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、恶臭假
单胞菌(Pseudomonas putida)、施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、栖稻假单胞菌
(Pseudomonas oryzihabitans)--根瘤菌科(Rhizobiaceae)：-根癌农杆菌(Agrobacterium 
tumefaciens)、放射根瘤菌(Rhizobium radiobacter)--立克次氏体科
(Rickettsiaceae)：-Orientia chuto、恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)、埃氏立
克次氏体(Rickettsia aeschlimannii)、非洲立克次氏体(Rickettsia africae)、小蛛立
克次氏体(Rickettsia akari)、Rickettsia argasii、亚洲立克次氏体(Rickettsia 
asiatica)、澳大利亚立克次氏体(Rickettsia australis)、贝利立克次氏体(Rickettsia 
bellii)、加拿大立克次氏体(Rickettsia canadensis)、康氏立克次氏体(Rickettsia 
conorii)、Rickettsia cooleyi、猫立克次氏体(Rickettsia felis)、黑龙江立克次氏体
(Rickettsia heilongjiangensis)、瑞士立克次氏体(Rickettsia helvetica)、
Rickettsia honei、胡氏立克次体(Rickettsia hoogstraalii)、虎林立克次氏体
(Rickettsia hulinensis)、Rickettsia hulinii、日本立克次氏体(Rickettsia 
japonica)、Rickettsia marmionii、Rickettsia martinet、马赛立克次氏体(Rickettsia 
massiliae)、摩纳立克次氏体(Rickettsia monacensis、蒙大拿立克次氏体(Rickettsia 
montanensis)、Rickettsia monteiroi、Rickettsia moreli、帕氏立克次氏体(Rickettsia 
parkeri)、皮氏立克次氏体(Rickettsia peacockii)、Rickettsia philipii、普氏立克次
氏体(Rickettsia prowazekii)、劳氏立克次氏体(Rickettsia raoultii)、扁头蜱立克次
氏体(Rickettsia rhipicephali)、立氏立克次氏体(Rickettsia rickettsii)、西伯利亚
立克次氏体亚群(Rickettsia sibirica subgroup)、斯洛伐克立克次氏体(Rickettsia 
slovaca)、田村氏立克次氏体(Rickettsia tamurae)、斑疹伤寒立克次氏体(Rickettsia 
typhi)--希瓦氏菌科(Shewanellaceae)：-腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)--鞘
脂单胞菌科(Sphingomonadaceae)：-多食鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium multivorum)、食
神鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium spiritivorum)、少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas 
paucimobilis)--螺菌科(Spirillaceae)：-减少螺菌(Spirillum minus)、迂回螺菌
(Spirillum volutans)、维氏螺菌(Spirillum winogradskyi)--螺旋体科
(Spirochaetaceae)：-阿氏疏螺旋体(Borrelia afzelii)、鹅疏螺旋体(Borrelia 
anserina)、比塞蒂疏螺旋体(Borrelia bissettii)、博氏疏螺旋体(Borrelia 
burgdorferi)、质革疏螺旋体(Borrelia coriaceae)、达氏疏螺旋体(Borrelia 
duttonii)、嘎氏疏螺旋体(Borrelia garinii)、赫氏疏螺旋体(Borrelia hermsii)、西班
牙疏螺旋体(Borrelia hispanica)、日本疏螺旋体(Borrelia japonica)、Borrelia 
lonestari、卢西塔尼亚疏螺旋体(Borrelia lusitaniae)、宫本疏螺旋体(Borrelia 
miyamotoi)、扁虱疏螺旋体(Borrelia parkeri)、波斯疏螺旋体(Borrelia persica)、回归
热疏螺旋体(Borrelia recurrentis)、斯氏疏螺旋体(Borrelia spielmanii)、特里蜱疏螺
旋体(Borrelia turicatae)、特里蜱疏螺旋体、法雷斯疏螺旋体(Borrelia valaisiana)、
斑点病密螺旋体(Treponema carateum)、苍白密螺旋体地方亚种(Treponema pallidum 
ssp.endemicum)、苍白密螺旋体苍白亚种(Treponema pallidum ssp.pallidum)、苍白密螺
旋体细长亚种(Treponema pallidum ssp.pertenue)--琥珀酸弧菌科
(Succinivibrionaceae)：-厌氧螺菌属物种(Anaerobiospirillum spp.)--萨特氏菌科
(Sutterellaceae)：-萨特氏菌属物种(Sutterella spp)，包括华德萨特氏菌(Sutterella 
wadsworthia)--栖热菌科(Thermaceae)：-亚栖热菌属物种(Meiothermus spp.)--栖热袍
菌科(Thermotogaceae)：-新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)--韦荣氏球菌科
(Veillonellaceae)：-戴阿利斯特杆菌属物种(Dialister spp)、巨单胞菌属物种
(Megamonas spp)、巨球形菌属物种(Megasphaera spp)、梳状菌属物种(Pectinatus spp)、
Pelosinus spp、Propionispora spp、鼠孢菌属物种(Sporomusa spp)、韦荣氏球菌属物种
(Veillonella spp.)、嗜酵母菌属物种(Zymophilus spp.)--弧菌科(Vibrionaceae)：-美
人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)、适应弧菌(Vibrio adaptatus)、解藻酸弧菌
(Vibrio alginolyticus)、Vibrio azasii、坎氏弧菌(Vibrio campbellii)、霍乱弧菌
(Vibrio cholera)、美人鱼弧菌(Vibrio damsel)、河流弧菌(Vibrio fluvialis)、弗尼斯
弧菌(Vibrio furnisii)、霍利斯弧菌(Vibrio hollisae)、麦奇尼科夫氏弧菌(Vibrio 
metchnikovii)、最小弧菌(Vibrio mimicus)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、创
伤弧菌(Vibrio vulnificus)--沃尔巴克氏体科(Wolbachieae)：-沃尔巴克氏体属物种
(Wolbachia spp.)--黄单胞菌科(Xanthomonadaceae)：-Luteimonas aestuarii、水生藤黄
色单胞菌(Luteimonas aquatica)、食物堆肥藤黄色单胞菌(Luteimonas composti)、
Luteimonas lutimaris、海洋藤黄色单胞菌(Luteimonas marina)、怪味藤黄色单胞菌
(Luteimonas mephitis)、Luteimonas vadosa、Pseudoxanthomonas broegbernensis、日本
假黄单胞菌(Pseudoxanthomonas japonensis)、嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonas 
maltophilia)、亚硝酸盐还原寡养单胞菌(Stenotrophomonas nitritireducens)。

[0259] 最优选地，导致所述细菌感染的所述菌剂是革兰氏阴性的，并且选自：不动杆菌属(Acinetobafcter)物种、嗜水气单胞菌、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)物种、肠杆菌属物种、
大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、摩氏摩根氏菌、铜绿假单胞菌和嗜麦芽糖寡养单胞菌。

[0260] 在另一个优选的实施方案中，导致所述细菌定植或感染的所述菌剂具有对用于治疗所述定植或感染的常规抗生素的耐性。在一个优选的实施方案中，所述菌剂具有对选自
以下的化合物的耐性：氨基糖苷类(例如庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星或奈替米星)、抗
MRSA先锋霉素类(例如头孢洛林)、抗假单胞性青霉素+β-内酰胺酶抑制剂(例如替卡西林-
克拉维酸或哌拉西林-他唑巴坦)、碳青霉烯类(例如厄他培南、亚胺培南、美罗培南或多尼
培南)、非广谱先锋霉素类：第一代和第二代先锋霉素(例如头孢唑林或头孢呋辛)、广谱先
锋霉素类：第三代和第四代先锋霉素(例如头孢噻肟或头孢曲松)、头霉素类(例如头孢西丁
或头孢替坦)、氟喹诺酮类(例如环丙沙星)、叶酸途径抑制剂(例如三甲氧苄二氨嘧啶-磺胺
甲噁唑)、甘氨酰环素类(例如替加环素)、单环内酰胺类(例如氨曲南)、青霉素类(例如氨苄
青霉素)、青霉素+β-内酰胺酶抑制剂(例如阿莫西林-克拉维酸或氨苄青霉素-舒巴坦)、苯
丙醇类(例如氯霉素)、膦酸类(例如磷霉素)以及多粘菌素类(例如粘菌素)、四环素类(例如
四环素、强力霉素或米诺环素中的一者或多者。优选地，具有对这些化合物的耐性的所述菌
剂是革兰氏阴性的。

[0261] 优选地，所述菌剂具有对选自以下的化合物的耐性：青霉素类、先锋霉素类、碳青霉烯类、单环内酰胺类及其它β-内酰胺抗生素、夫西地烷类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、链阳
性菌素类、四环素类、甘氨酰环素类、氯霉素及其它苯丙醇类、大环内酯类和酮内酯类、林可
酰胺类、噁唑烷酮类、氨基环醇类、多粘菌素类、糖肽类、脂肽类、杆菌肽、莫匹罗星、截短侧
耳素类、利福霉素类、磺胺类以及三甲氧苄二氨嘧啶。优选地，所述化合物选自：β内酰胺类、
糖肽类、脂肽类、大环内酯类、噁唑烷酮类以及四环素类。优选地，当所述化合物在选自
0.001μg/mL-10,000μg/mL、0.01μg/mL-1000μg/mL、0.10μg/mL-100μg/mL和1μg/mL-50μg/mL的浓度范围内时，所述菌剂具有对所述化合物的耐性。

[0262] 在另一个优选的实施方案中，导致所述细菌感染的所述菌剂选自但不限于革兰氏阳性菌。所述微生物优选地为选自金黄色葡萄球菌、伪中间葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链
球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和艰难梭菌的革兰氏阳性菌剂。

[0263] 在一个优选的实施方案中，所述菌剂无细胞壁。优选地，所述菌剂选自：支原体属物种、无乳支原体、产碱支原体、Mycoplasma amphoriforme、精氨酸支原体、牛生殖道支原
体、牛鼻支原体、牛支原体、牛眼支原体、颊支原体(Mycoplasma buccale)、加利福尼亚支原
体、加拿大支原体、山羊支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、结膜支原体、犬支原
体、殊异支原体、马生殖道支原体、咽喉支原体(Mycoplasma faucium)、狸猫支原体
(Mycoplasma felis)、发酵支原体(Mycoplasma fermentans)(incognitus株)、鸡败血支原
体(Mycoplasma gallisepticum)(MG)、猫支原体、生殖道支原体(Mycoplasma 
genitalium)、犬嗜血支原体(Mycoplasma haemocanis)、猫嗜血支原体(Mycoplasma 
haemofelis)、猪嗜血支原体(Mycoplasma haemosuis)(过去称为猪附红血球体
Eperythrozoon suis))、人型支原体(Mycoplasma hominis)、猪肺炎支原体、猪鼻支原体、
猪关节液支原体、衣阿华火鸡支原体(MM)、衣阿华支原体、利氏支原体、嗜脂支原体
(Mycoplasma lipophilum)、火鸡支原体、霉状支原体山羊亚种、霉状支原体霉状亚种、霉状
支原体霉状亚种(例如牛传染性胸膜肺炎(CBPP))、口腔支原体(Mycoplasma orale)、羊肺
炎支原体、牛支原体、穿透支原体(Mycoplasma penetrans)、梨支原体(Mycoplasma 
pirum)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、灵长类支原体(Mycoplasma primatum)、腐
败支原体(Mycoplasma putrefaciens)、唾液支原体(Mycoplasma salivarium)、嗜精子支
原体(Mycoplasma spermatophilum)、猪支原体、关节液支原体(MS)、温氏支原体、支原体、
尿原体属物种、微小尿原体(Ureaplasma parvum)、解脲尿原体(Ureaplasma 
urealyticum)、尿原体和差异尿原体(Ureoplasma diversum)。

[0264] 在另一个最优选的实施方案中，所述菌剂是金黄色葡萄球菌。

[0265] 在另一个优选的实施方案中，所述菌剂具有对选自以下的化合物的耐性：氨基糖苷类(例如庆大霉素)、安莎霉素类(例如甲哌利福霉素)、抗MRSA先锋霉素类(例如头孢洛
林)、抗葡萄球菌性β-内酰胺类(或头霉素类)(例如苯唑西林或头孢西丁)、碳青霉烯类(例
如厄他培南、亚胺培南、美罗培南或多尼培南)、非广谱先锋霉素类：第一代和第二代先锋霉
素(例如头孢唑林或头孢呋辛)、广谱先锋霉素类：第三代和第四代先锋霉素(例如头孢噻肟
或头孢曲松)、头霉素类(例如头孢西丁或头孢替坦)、氟喹诺酮类(例如环丙沙星或莫西沙
星)、叶酸途径抑制剂(例如三甲氧苄二氨嘧啶-磺胺甲噁唑)、夫西地烷类(例如梭链孢酸)、
糖肽类(例如万古霉素、替考拉宁或特拉万星)、甘氨酰环素类(例如替加环素)、林可酰胺类
(例如克林霉素)、脂肽类(例如达托霉素)、大环内酯类(例如红霉素)、噁唑烷酮类(例如利
奈唑胺或泰迪唑胺)、苯丙醇类(例如氯霉素)、膦酸类(例如磷霉素)、链阳性菌素类(例如奎
奴普丁-达福普丁)以及四环素类(例如四环素、强力霉素或米诺环素)中的一者或多者。优
选地，具有对这些化合物的耐性的所述菌剂是革兰氏阳性的。

[0266] 在另一个最优选的实施方案中，所述菌剂是肺炎链球菌。所述肺炎链球菌可以是具有对β-内酰胺类和大环内酯类中的一者或多者的耐性的菌株。

[0267] 在另一个最优选的实施方案中，所述菌剂是化脓链球菌。

[0268] 在另一个最优选的实施方案中，所述菌剂是无乳链球菌。

[0269] 在另一个最优选的实施方案中，所述菌剂是屎肠球菌或粪肠球菌。所述屎肠球菌或粪肠球菌可以是具有对氨基糖苷类(例如庆大霉素(高水平)或链霉素(例如链霉素(高水
平))、碳青霉烯类(例如亚胺培南、美罗培南或多尼培南)、氟喹诺酮类(例如环丙沙星、左氧
氟沙星或莫西沙星)、糖肽类(例如万古霉素或替考拉宁)、甘氨酰环素类(例如替加环素)、
脂肽类(例如达托霉素)、噁唑烷酮类(例如利奈唑胺)、青霉素类(例如氨苄青霉素)、链阳性
菌素类(例如奎奴普丁-达福普丁)、四环素(例如强力霉素或米诺环素)的耐性的菌株。

[0270] 在另一个最优选的实施方案中，所述菌剂是艰难梭菌。

[0271] 所述受试者中的所述细菌感染可导致的疾病选自但不限于：金黄色葡萄球菌(MDR、XDR、PDR或甲氧西林敏感或耐甲氧西林菌株)导致的医院获得性肺炎，或侵袭性肺炎
球菌疾病例如肺炎、支气管炎、急性窦炎、中耳炎、结膜炎、脑膜炎、菌血症、败血病、骨髓炎、
脓毒性关节炎、心内膜炎、腹膜炎、心包炎、蜂窝织炎，和肺炎链球菌(包括多药物耐性菌株
[MDRSP]，例如具有对β-内酰胺类和大环内酯类的耐性的那些)导致的脑脓肿，金黄色葡萄
球菌(甲氧西林敏感和耐甲氧西林菌株)、化脓链球菌或无乳链球菌导致的复杂性皮肤和皮
肤结构感染，包括糖尿病足感染，有或无伴发性骨髓炎，金黄色葡萄球菌(甲氧西林敏感和
耐甲氧西林菌株)或化脓链球菌导致的单纯性皮肤和皮肤结构感染，肺炎链球菌(包括多药
物耐性菌株[MDRSP]或金黄色葡萄球菌(甲氧西林敏感和耐甲氧西林菌株)导致的社区获得
性肺炎，包括具有并发性菌血症的病例，以及甲氧西林敏感和耐甲氧西林分离株导致的金
黄色葡萄球菌血流感染(菌血症)，包括具有右心感染性心内膜炎的那些，耐万古霉素肠球
菌感染，包括具有并发性菌血症的病例，以及艰难梭菌相关腹泻(CDAD)的治疗。

[0272] 革兰氏阴性生物体是人和其它动物物种中多种传染病的重要致因。骨和关节感染(革兰氏阴性生物体或混合菌是脊椎骨髓炎和脓毒性关节炎的重要致因)、心血管系统感染
(包括HACEK群-副流感嗜血杆菌、嗜沫嗜血杆菌(Haemophilus aphrophilus)、伴放线凝聚
杆菌、人心杆菌、啮蚀艾肯氏菌、金氏金氏菌导致的心内膜炎)、中枢神经系统感染(细菌性
脑膜炎的最常见的致因是脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎链球菌，并且在未接种的幼童中乙型流感
嗜血杆菌(Haemophilus influenzae类型b)(Hib)，在年龄小于3个月的初生儿和婴儿中无
乳链球菌(B型链球菌)，大肠杆菌及其它需氧革兰氏阴性杆菌是重要的病原体，脑脓肿或硬
脑膜下积脓，感染性生物体随潜在的致病因素而变化，但其中最可能的起源部位是耳，通常
涉及肠革兰氏阴性杆菌)、眼部感染(常见的病原体包括流感嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌或沙
眼衣原体)、胃肠道感染(涉及一系列广泛的病原体，包括产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、沙门氏
菌属、弯曲杆菌属、志贺氏菌属(Shigella)、霍乱弧菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌)、生殖道感
染(细菌性阴道炎是高浓度的厌氧(如动弯杆菌属物种)和其它苛养菌(包括阴道加德纳氏
菌(Gardnerella vaginalis)和阴道阿托波氏菌)以及人型支原体导致的多种微生物临床
综合征；非性获得性盆腔炎(PID)通常由混合阴道菌群包括厌氧微生物、兼性革兰氏阴性菌
和人型支原体导致，而性获得性PID通常由沙眼衣原体或淋病奈瑟氏菌引起，越来越多的证
据显示生殖道支原体感染涉及的病例显著较少)、腹腔内感染(由于内脏穿孔而导致的腹膜
炎通常是需氧和厌氧菌肠群的多种微生物感染的，而自发性细菌腹膜炎(SBP)通常由肠革
兰氏阴性杆菌例如大肠杆菌和克雷伯氏菌属物种导致，逐步认为肺炎克雷伯氏菌是肝脓肿
的致因)、社区获得性肺炎(肺炎支原体、肺炎嗜衣原体(肺炎衣原体)(Chlamydophila
(Chlamydia)pneumoniae)、鹦鹉热嗜衣原体(鹦鹉热衣原体)(Chlamydophila(Chlamydia)
psittaci)、流感嗜血杆菌、需氧革兰氏阴性杆菌包括肺炎克雷伯氏菌、铜绿假单胞菌、鲍氏
不动杆菌、类鼻疽伯克氏菌)、外耳炎(包括急性弥散性外耳炎)(细菌培养物通常产生铜绿
假单胞菌、金黄色葡萄球菌和变形杆菌属以及克雷伯氏菌属(Klebsiella)物种)、中耳炎
(包括急性中耳炎)(常见的细菌病原体包括肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他摩拉克氏
菌)、败血症(包括严重败血症)(包括鲍氏不动杆菌、弥散淋球菌性败血症、肠革兰氏阴性
菌、脑膜炎奈瑟氏菌(脑膜炎球菌性败血症)和铜绿假单胞菌)、全身性感染(斑疹热(立克次
氏体属)和恙虫病(东方体属(Orientia))、普鲁氏菌病、猫抓病和其它巴尔通氏体感染、钩
端螺旋体病、莱姆病、类鼻疽、Q热、伤寒和副伤寒(肠热病)、泌尿道感染(急性膀胱炎、急性
肾盂肾炎、复发性泌尿道感染和导尿管相关菌尿和泌尿道感染)。

[0273] 在人中，革兰氏阴性菌是腹腔内感染(IAI)、泌尿道感染(UTI)、医院获得性肺炎和菌血症的常见致因。大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌(和铜绿假单胞菌在医院环境中是重要的病
原体，占导致健康相关感染的所有病原体的27％和所有革兰氏阴性病原体的70％[Sievert 
DM,Ricks P,Edwards JR等.Antimicrobial-resistant pathogens associated with 
healthcare-associated infections:summary of data reported to the National 
Healthcare Safety Network at the Centers for Disease Control and Prevention,
2009-2010.Infect Control Hosp Epidemiol.2013；34:1-14.]。

[0274] 革兰氏阴性菌显示出对当前疗法的耐药率增加。广谱β-内酰胺酶(ESBL)的产生是常见的耐性机制。产ESBL的大肠杆菌和肺炎链球菌的耐药率显著增加，结果是这些细菌对
广泛使用的抗微生物剂的耐性增加。

[0275] 在美国，铜绿假单胞菌是导致医院获得性肺炎的最常见革兰氏阴性致因和导致导尿管相关UTI的第二最常见致因。

[0276] 大肠杆菌是UTI的最常见致因。产ESBL的大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌以及铜绿假单胞菌(包括MDR菌株)导致的UTI病例增加。产ESBL的大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌通常也从
患有复杂性IAI(cIAI)的患者分离。

[0277] 铜绿假单胞菌是可导致人的常见感染例如医院获得性肺炎、UTI、IAI和血流感染的临床挑战性和毒性病原体。铜绿假单胞菌是导致呼吸器相关肺炎的最常见革兰氏阴性生
物体和导尿管相关UTI的第二常见致因。

[0278] 革兰氏阴性菌导致的感染数量增加伴有耐药率的提高。应对这一挑战的治疗选项越来越受到限制。迫切需要满足患者目前和将来需要的新型抗生素。

[0279] 在一个优选的方面，向受试者施用多于一种本发明的化合物。

[0280] 在另一个优选的实施方案中，本发明的化合物或其治疗学上可接受的盐与移除或基本上移除或降低所述菌剂的细胞壁完整性的化合物或药剂一起施用。例如，所述化合物
选自：β内酰胺类、磷霉素、溶菌酶、多粘菌素类和螯合剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)。例如，所
述药剂是降低所述细胞壁的完整性的免疫剂(例如抗体或疫苗)。在一个优选的实施方案
中，所述化合物或其治疗学上可接受的盐与移除或基本上移除或削弱革兰氏阴性菌剂的外
细胞壁的完整性的化合物一起施用。

[0281] 根据本发明的另一个方面，提供了包含治疗有效量的式I的化合物或其治疗学上可接受的盐的抗菌药物组合物。优选地，所述组合物为抗菌药物组合物。

[0282] 根据本发明的另一个方面，提供了包含治疗有效量的式I的化合物或其治疗学上可接受的盐的抗菌兽药组合物。优选地，所述组合物为抗菌兽药组合物。

[0283] 所述药物组合物可任选地包含药学上可接受的赋形剂或载体。所述兽药组合物可任选地包含兽药学上可接受的赋形剂或载体。

[0284] 本发明的药物或兽药组合物优选地按选自以下的浓度包含I的化合物或其药学上可接受的盐：1mg/g至500mg/g、5mg至400mg/g、10mg/g至200mg/g、20mg/g至100mg/g、30mg/g
至70mg/g和40mg/g至60mg/g。

[0285] 在另一个实施方案中，所述药物或兽药组合物包含杂质，其中杂质的量以组合物的总重量的百分比计选自：小于20％杂质(以组合物的总重量计)、小于15％杂质、小于10％
杂质、小于8％杂质、小于5％杂质、小于4％杂质、小于3％杂质、小于2％杂质、小于1％杂质、
小于0.5％杂质、小于0.1％杂质。在一个实施方案中，所述药物或兽药组合物包含微生物杂
质或次级代谢物，其中微生物杂质的量以组合物的总重量的百分比计选自：小于5％、小于
4％、小于3％、小于2％、小于1％、小于0.5％、小于0.1％、小于0.01％、小于0.001％。在一个
实施方案中，所述药物或兽药组合物是无菌的，并且保存在密封和无菌容器中。在一个实施
方案中，所述药物或兽药组合物包含不可检测水平的微生物污染物。

[0286] 本发明的药物或兽药组合物可包含另外的抗微生物剂。所述另外的抗微生物剂可以是抗真菌剂或抗菌剂。所述治疗或预防受试者中细菌感染或定植的方法还可包括本发明
的化合物与另外的抗微生物剂一起施用。

[0287] 本发明的药物或兽药组合物可包含多于一种本发明的化合物。例如，化合物的组合。所述治疗或预防受试者中的细菌感染或定植的方法还可包括施用多于一种本发明的化
合物。

[0288] 在一个实施方案中，所述抗真菌剂选自但不限于：天然存在的药剂，包括棘球白素(阿尼芬净、卡泊芬净、米卡芬净)、聚烯(两性霉素B、杀假丝菌素、菲律宾菌素、制霉色基素
(戊霉素)、曲古霉素、哈霉素、鲁斯霉素、美帕曲星、游霉素、制霉菌素、培西洛星、表霉素)，
以及其它天然存在的抗真菌剂，包括灰黄霉素、寡霉素、硝吡咯菌素、干蠕孢菌素和绿毛菌
素。所述抗真菌剂可以是选自但不限于：烯丙胺类(布替萘芬、奈替芬、特比萘芬)咪唑类(联
苯苄唑、布康唑、氯咪唑、甘宝素、氯康唑(克罗可唑)、克霉唑、依柏康唑、益康唑、恩康唑、芬
替康唑、氟曲马唑、磷氟康唑、异康唑、酮康唑、拉诺康唑、卢立康唑、咪康唑、奈康唑、奥莫康
唑、硝酸奥昔康唑、帕康唑、舍他康唑、硫康唑、噻康唑)、硫代氨基甲酸酯类(利拉萘酯、托西
拉酯、托林达酯、托萘酯)、三唑类(氟康唑、艾沙康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、雷夫康唑、沙康
唑、特康唑、伏立康唑)，以及其它合成剂例如吖啶琐辛、阿莫罗芬、溴柳氯苯胺(溴氯水杨酰
苯胺)、丁氯柳胺、丙酸钙、氯苯甘油醚、环吡酮、氯羟喹(5-氯-8-羟基喹啉)、科帕腊芬内特、
依沙酰胺、氟胞嘧啶、卤普罗近、合克替啶、氯氟卡班、硝呋太尔、硝呋甲肟、吡罗克酮、碘化
钾、丙酸、巯基吡啶氧化物、水杨酰苯胺、对氯苯甲酸钠、丙酸钠、舒苯汀、替诺尼唑、甘油三
乙酸酯、三甲曲沙、十一碳烯酸(十一烯酸)和丙酸锌的合成化合物。

[0289] 本发明的组合物可包含选自但不限于：β-内酰胺酶抑制剂(阿维巴坦、克拉维酸、舒巴坦、舒他西林、他唑巴坦)、肾二肽酶抑制剂(西司他丁)以及肾保护剂(倍他米隆)的抗
生素佐剂。

[0290] 在一个实施方案中，本发明的组合物包含选自但不限于：2,4-二氨基嘧啶类，包括巴喹普林、溴莫普林、艾拉普林、奥美普林、乙胺嘧啶、四氧普林、三甲氧苄二氨嘧啶；氨基香
豆素类，包括新生霉素；氨基环醇类，包括壮观霉素；氨基糖苷类，包括阿米卡星、阿普拉霉
素、阿贝卡星、卡那霉素、丁苷菌素、地贝卡星、二氢链霉素、依替米星、福提霉素类(阿司米
星)、弗氏菌丝素、庆大霉素、潮霉素B、异帕米星、卡那霉素、小诺霉素、新霉素、奈替米星、巴
龙霉素、Plazomicin、核糖霉素、西索米星、链霉素、妥布霉素、威达米星；氨基美他环素类，
包括奥玛环素；酰胺醇类，包括叠氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考、甲砜氯霉素；安莎霉素类，包
括利福布汀、利福酰胺、利福平(甲哌利福霉素)、利福霉素、利福喷汀、利福昔明；防腐剂类，
包括吖啶衍生物(包括吖啶黄、氨基吖啶、依沙吖啶、普罗黄素)、双吡啶类(包括奥替尼啶二
盐酸盐)、溴化水杨酰苯胺(包括溴胺杀)、氯己定、酚衍生物(包括百里酚和三氯生)、季铵化
合物(包括烷基二甲基乙基苄基氯化铵、苯扎氯铵、十六烷基氯化吡啶鎓、氯化苄乙氧铵、十
六烷基三甲铵)；抗结核药，包括环丝氨酸、迪拉马尼、乙胺丁醇、乙硫磷酰胺、异烟肼(异烟
腙)、吗啉酰吡嗪、对氨基水杨酸(PAS)、丙硫异烟胺、吡嗪酰胺、特立齐酮、胺苯硫脲、硫卡利
特；砷剂类，包括阿散酸、洛克沙砷；杆菌素类，包括乳链菌肽、Brilacidin(PMX-30063)；β-
内酰胺碳头孢烯类，包括氯碳头孢；β-内酰胺碳青霉烯类，包括比阿培南、多尼培南、厄他培
南、法罗培南、亚胺培南、美罗培南、帕尼培南、阿祖培南、利替培南、硫培南、泰比培南、托莫
培南；β-内酰胺先锋霉素类，包括头孢乙腈、头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢来星、头
孢罗宁、头孢利定、头孢菌素、头孢孟多、头孢匹林、羟胺唑头孢菌素、头孢氮氟、头孢西酮、
头孢唑林、头孢卡品、头孢地尼、头孢妥仑、头孢吡肟、头孢他美、头孢克肟、头孢甲肟、头孢
地嗪、头孢尼西、头孢哌酮、头孢雷特、头孢噻利、头孢噻肟、头孢替安、头孢维星、头孢唑兰、
头孢咪唑、头孢匹胺、头孢匹罗、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢喹肟、头孢拉啶、头孢沙定、头孢
磺啶、头孢洛林、头孢他啶、头孢特仑、头孢替唑、头孢布烯、头孢噻呋、头孢唑肟、头孢吡普、
Ceftolozane、头孢拉定、头孢替唑、头孢曲松、头孢沙定、头孢呋辛、头孢唑南、
Pivcefalexin；β-内酰胺头霉素类，包括头孢拉宗、头孢美他唑、头孢米诺、头孢替坦、头孢
西丁；β-内酰胺单环内酰胺类，包括氨曲南、卡芦莫南、替吉莫南；β-内酰胺氧头孢烯类，包
括氟氧头孢、拉氧头孢、羟酸氧酰胺菌素；β-内酰胺青霉素类，包括阿德诺西林(美西林)、阿
莫西林、氨苄青霉素、阿帕西林、阿扑西林、叠氮西林、阿洛西林、巴氨西林、羧苄青霉素、卡
茚西林、环己西林、氯咪唑青霉素、氯甲西林、氯唑西林、环青霉素、双氯西林、依匹西林、芬
贝西林、氟氯青霉素(氟氯西林)、海他西林、仑氨苄西林、甲亚胺青霉素、美坦西林、甲氧西
林钠、美洛西林、萘夫西林、苯唑西林、培那西林、青霉素g二乙氨乙酯氢碘酸盐、青霉素G、苄
星青霉素G、普鲁卡因青霉素G、青霉素N、青霉素O、青霉素V、苯氧乙基青霉素钾、哌拉西林、
匹氨西林、匹美西林、苯丙西林、喹那西林、磺苄西林、舒他西林、酞氨西林、替莫西林、替卡
西林；双环霉素类，包括二环霉素；含硼抗菌剂，包括AN3365(氨基甲基苯并硼唑类)、
GSK2251052(亮氨酰-tRNA合成酶抑制剂)；环状酯类，包括磷霉素；脂肪酸合成抑制剂
(FabI)、AFN-1252、MUT056399、FAB-001；氟喹诺酮类，包括Avarofloxacin、巴洛沙星、贝西
沙星、昌欣沙星、西诺沙星、环丙沙星、克林沙星、达诺沙星、德拉沙星、双氟沙星、依诺沙星、
恩氟沙星、非那沙星、氟罗沙星、氟甲喹、加雷沙星、加替沙星、吉米沙星、格帕沙星、依巴沙
星、左氧氟沙星、洛美沙星、马波沙星、米洛沙星、莫西沙星、那氟沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、
奥比沙星、帕珠沙星、培氟沙星、普多沙星、普卢利沙星、罗索沙星、芦氟沙星、沙氟沙星、西
他沙星、斯帕沙星、替马沙星、妥舒沙星、曲伐沙星、扎波沙星；夫西地烷类，包括梭链孢酸；
糖脂缩肽，包括雷莫拉宁；糖肽类，包括阿佛帕星、达贝万星、去甲万古霉素、奥利万星、替考
拉宁、替拉万星、万古霉素；糖磷脂类，包括班贝霉素类(班贝霉素、默诺霉素类、黄磷脂素)；
甘氨酰环素类，包括替加环素；混合药物、卡达唑胺(噁唑烷酮-喹诺酮)、TD-1792(糖肽-先
锋霉素)；林可酰胺类，包括克林霉素、林肯霉素、吡利霉素；脂肽类，包括达托霉素、
Surotomycin；大环内酯类，包括阿奇霉素、碳霉素、赛红霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素、
非达霉素、氟红霉素、加米霉素、交沙霉素、北里霉素、柱晶白霉素、麦白霉素、麦迪霉素类、
蜜柑霉素、米罗沙霉素、竹桃霉素、伯霉素、罗他霉素、蔷薇霉素、罗红霉素、西地霉素、索利
霉素、螺旋霉素、泰利霉素、特卡霉素、泰地罗新、替米考星、醋竹桃霉素、托拉菌素、泰乐菌
素、泰伐洛星；硝基呋喃类，包括呋喃他酮、呋喃烯啶、呋喃唑酮、呋唑氯铵、硝呋拉太、硝呋
复林、硝呋酚酰肼、硝呋吡醇、硝呋妥醇、硝呋噻肼、呋喃西林、硝基呋喃妥英、硝基糠腙；硝
基咪唑类，包括迪美唑、甲硝唑、奥硝唑、洛硝哒唑、塞克硝唑、磺甲硝咪唑；寡糖类，包括阿
维霉素、扁枝衣霉素；其它抗菌剂，包括Auriclosene、氯喔星、氯喹那多、氯碘喹啉、氯福克
酚、哈喹诺、洛替利星、扁桃酸、乌洛托品(六胺)、醋胺硝唑、硝羟喹啉、Perchlozone、牛磺罗
定、噻吩甲酸、异冰片二甲酚；噁唑烷酮类，包括依哌唑胺、利奈唑胺、泼斯唑来、雷得唑来、
Sutezolid、特地唑胺(泰迪唑胺)；肽去甲酰酶抑制剂，包括GSK1322322；肽类，包括奥米加
南、培西加南；截短侧耳素类，包括瑞他莫林、泰妙菌素、伐奈莫林；聚醚离子载体，包括莱特
洛霉素、拉沙里菌素、马杜霉素、莫能菌素、甲基盐霉素、盐霉素、生度米星；多粘菌素类，包
括粘菌素、多粘菌素B；多肽类，包括安福霉素、杆菌肽、卷曲霉素、持久杀菌素、持久霉素、恩
维霉素、夫沙芬近、短杆菌肽类、依色加南、爪蟾抗菌肽类、诺西肽、瑞斯托菌素、硫链丝菌
肽、结核放射菌素、短杆菌酪肽、短杆菌素、紫霉素；假单胞菌类，包括莫匹罗星；喹诺酮类，
包括萘啶酸、奈诺沙星、噁喹酸、奥泽沙星、吡哌酸、吡咯米酸；喹喔啉类，包括卡巴多司、喹
乙醇；氯苯吩嗪类，包括氯苯吩嗪；斯达汀类，包括阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他
汀、匹伐他汀、普伐他汀、罗苏伐他汀、辛伐他汀；链阳性菌素类，包括达福普丁、氟洛普丁、
Linopristin、原始霉素、奎奴普丁、维及尼霉素；链丝菌素类，包括诺尔丝菌素；磺胺类，包
括磺胺乙酰甲氧吡嗪、氯胺-B、氯胺-T、二氯胺T、甲醛磺胺噻唑、磺胺米隆、N4-磺胺酰磺胺、
诺丙磺胺、N-磺胺酰-3,4-二甲苯甲酰胺、Ormaosulfathiazole、邻苯二甲酰磺乙酰胺、邻苯
二甲酰磺胺噻唑、水杨基偶氮磺胺二甲嘧啶、琥珀酰磺胺噻唑、苯酰磺胺、磺胺脲、乙酰磺
胺、磺胺氯哒嗪、磺胺柯衣酸、磺胺氯吡嗪、磺胺乙胞嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺戊烯、碘胺二甲氧
哒嗪、磺胺二甲嘧啶、周效磺胺、磺胺乙二唑、磺胺胍、磺胺胍诺、磺胺林、磺胺洛西酸、磺胺
二甲基嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧甲嘧啶、磺胺甲噁唑、
磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲基噻唑、磺胺甲氧吡嗪、磺胺美曲、磺胺柯衣定、磺胺莫托辛、磺胺噁
唑、对氨基苯磺酰胺、磺胺酰脲、磺胺培林、磺胺苯吡唑、磺胺普罗林、磺胺吡嗪、磺胺嘧啶、
磺胺喹啉、磺胺噻唑、磺胺硫脲、磺胺曲沙唑、磺胺索嘧啶、磺胺异噁唑(磺胺二甲异噁唑)；
砜类，包括醋地砜、氨苯砜、葡萄糖砜钠、对磺胺酰基苄胺、琥珀氨苯砜、磺胺酸、阿地砜钠、
噻唑砜；四环素类，包括氯四环素、氯莫环素、地美环素、强力霉素、Eravacycline、胍甲环
素、赖甲四环素、甲氯环素、甲烯土霉素、米诺环素、土霉素、青哌环素、匹哌环素、罗列环素、
Sarecycline和四环素的另外的抗生素。

[0291] 本发明的组合物还可包含选自但不限于：粘合剂和压缩助剂、包衣和膜、染色剂、稀释剂和媒介物、崩解剂、乳化和增溶剂、调味剂和甜味剂、拒斥剂、助流剂和润滑剂、增塑
剂、防腐剂、推进剂、溶剂、稳定剂、悬浮剂和增粘剂的赋形剂。

[0292] 根据本发明的另一个方面，提供了用于治疗或预防所述受试者中细菌感染的方法的医疗装置。

[0293] 根据本发明的另外方面，提供了包括本发明所述的组合物的医疗装置。本发明的组合物可以是任何缓释形式，和/或医疗装置的涂层形式。

[0294] 所述医疗装置可以是选自以下的形式：应用于受试者中的细菌感染的植入物、膏药、绷带和其它敷料。

[0295] 根据本发明的另外方面，提供了杀灭细菌的方法，所述方法包括用本发明的化合物或其治疗学上可接受的盐接触所述细菌的步骤。

[0296] 根据本发明的另外方面，提供了本发明的化合物或其治疗学上可接受的盐杀灭细菌的用途，所述用途包括用本发明的化合物或其治疗学上可接受的盐接触所述细菌的步
骤。

[0297] 除非另外指明，否则本文所用的术语将具有本领域中通常的意义。如本文所用，术语氯苯胍NCL812(也称为1,3-双[(E)-(4-氯苯基)亚甲基氨基]胍)是指具有以下化学结构
的化合物：

[0298]

[0299] 附图简述

[0300] 本发明的另外特征将在以下其若干非限制性实施方案的描述中予以更完整描述。该描述仅出于示例本发明的目的而并入。其不应被理解为对上文所示的本发明的广泛发明
内容、公开内容描述进行限制。该描述将结合附图进行，在附图中：

[0301] 图1展示了化合物NCL001至NCL230的化学名称和化学结构；

[0302] 图2示出了根据实施例2的NCL812对金黄色葡萄球菌中DNA大分子合成的影响曲线图；

[0303] 图3示出了根据实施例2的NCL812对金黄色葡萄球菌中RNA大分子合成的影响曲线图；

[0304] 图4示出了根据实施例2的NCL812对金黄色葡萄球菌(ATCC29213)中蛋白质大分子合成的影响曲线图；

[0305] 图5示出了根据实施例2的NCL812对金黄色葡萄球菌(ATCC29213)中细胞壁大分子合成的影响曲线图；

[0306] 图6示出了根据实施例2的NCL812对金黄色葡萄球菌(ATCC29213)中脂质大分子合成的影响曲线图；

[0307] 图7示出了汇总根据实施例2的NCL812对金黄色葡萄球菌(ATCC29213)中大分子合成的影响的曲线图；

[0308] 图8示出了根据实施例3的NCL812对ATP从金黄色葡萄球菌(ATCC29213)释放的影响曲线图；

[0309] 图9示出了曲线图，显示了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分离株中mecA基因实时聚合酶链式反应后负导数dF/dT的平均解链温度峰值曲线图，这些分离株以mec基因复合物分
组，A(n＝4)、B(n＝10)、C2(n＝4)和未归类(n＝2)。根据实施例4，以不同上标标出的组具有
显著性差异(P<0.05)；

[0310] 图10示出了根据实施例4的使用微量肉汤稀释法测定的无补充生长对照、氨苄青霉素和不同浓度的抗甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌ATCC 49775的抗菌剂NCL812的光密度
曲线图。所测试的NCL812浓度处于MIC，以及在温育最多24h后在测试条件下测定的MIC的四
倍。氨苄青霉素以MIC测试。在0、1、2、4、8、12和24h测试抗菌剂的杀菌活性；

[0311] 图11示出了根据实施例4的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌ATCC49775的杀菌动力学曲线图，其示出了使用临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards 
Institute)宏量稀释法在10ml小瓶中测定的NCL812杀菌活性。所测试的抗菌剂浓度为测试
条件下测定的MIC的1倍和4倍。杀菌活性在添加抗菌剂0、1、2、4、8、12和24h后测定。杀菌活
性定义为存活细菌的数量从初始接种量减少3log10(99.9％)；

[0312] 图12示出了曲线图，指出了根据实施例5的在暴露至4μg/mL NCL812和0.0023μg/mL氨苄青霉素的肺炎链球菌菌株D39的宏量肉汤稀释测定法期间的pH改变；

[0313] 图13示出了根据实施例5的NCL812处理48小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0314] 图14示出了根据实施例5的NCL062处理48小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0315] 图15示出了根据实施例5的NCL812处理14小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0316] 图16示出了根据实施例5的NCL062处理14小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0317] 图17示出了根据实施例5的氨苄青霉素处理14小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0318] 图18示出了根据实施例5的从图43收集的NCL812处理12小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0319] 图19示出了根据实施例5的从图44收集的NCL062处理12小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0320] 图20示出了根据实施例5的氨苄青霉素处理48小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0321] 图21示出了根据实施例5的红霉素处理48小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0322] 图22示出了NCL812和5％氯化胆碱处理48小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0323] 图23示出了根据实施例5的NCL812和5％氯化胆碱处理12小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0324] 图24示出了根据实施例5的NCL062和5％氯化胆碱处理48小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0325] 图25示出了根据实施例5的NCL062和5％氯化胆碱处理12小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0326] 图26示出了根据实施例5的氨苄青霉素和氯化胆碱处理48小时的肺炎链球菌菌株D39时间-杀菌曲线图；

[0327] 图27示出了根据实施例5的NCL812或NCL062处理48小时的D39相对MBC曲线图；

[0328] 图28示出了根据实施例5的氨苄青霉素处理48h时间期的肺炎链球菌菌株D39相对最小杀菌浓度(MBC)曲线图；

[0329] 图29示出了根据实施例5的红霉素处理48h时间期的肺炎链球菌菌株D39相对MBC曲线图；

[0330] 图30示出了根据实施例5的宏量肉汤稀释测定的NCL812处理24小时的肺炎链球菌菌株D39的时间-杀菌存活计数(log10CFU/ml)曲线图；

[0331] 图31示出了根据实施例5的宏量肉汤稀释测定的氨苄青霉素处理24小时的肺炎链球菌菌株D39的时间-杀菌存活计数(log10CFU/ml)曲线图；

[0332] 图32示出了根据实施例5的处理和未处理的D39的平均细胞膜厚度条形图；

[0333] 图33示出了根据实施例5的处理(16μg/mL NCL812)和未处理的D39样品的周质空间平均宽度条形图；

[0334] 图34示出了根据实施例7在8小时时间期内在不同浓度的NCL812下所得的MRSA 580分离株的杀菌动力学；

[0335] 图35示出了根据实施例7在24h时间期内在不同浓度的NCL812中MRSA 580的杀菌动力学；

[0336] 图36示出了根据实施例7在24h时间期内在不同浓度的NCL812中MRSA 698的杀菌动力学；

[0337] 图37示出了根据实施例7在24h时间期内在不同浓度的NCL812下VRE 26c(dc)的杀菌动力学；

[0338] 图38示出了根据实施例8在24h时间期内在不同浓度的NCL812下VRE 16c(dc)的杀菌动力学；

[0339] 图39示出了根据实施例8的金黄色葡萄球菌KC01在不同NCL812浓度下温育最多24h的杀菌动力学测定；

[0340] 图40示出了根据实施例8的粪肠球菌USA01在不同NCL812浓度下温育最多24h的杀菌动力学测定；以及

[0341] 图41是曲线图，示出了根据实施例10的NCL812和NCL099从制剂B的累积释放。

[0342] 实施方案描述

[0343] 概述

[0344] 在详细描述本发明之前，应当理解本发明不限于本文所公开的具体示例方法或组合物。还应当理解，本文所用的术语只是为了描述本发明的具体实施方案，并非旨在进行限
制。

[0345] 本文涉及的所有出版物，包括专利和专利申请，全文以引用方式并入。然而，本文涉及的专利申请仅仅是出于描述和公开结合本发明使用的出版物中涉及的程序、方案和试
剂的目的。本文涉及的任何出版物的引用不应解释为承认本发明不能因为是在先发明而先
于此类公开揭示。

[0346] 此外，除非另外指明，否则本发明的实施使用本领域内的常规微生物学技术。此类常规技术是技术人员已知的。

[0347] 本文中和随附的权利要求书中所用的单数形式“一”、“一个/种”和“该/所述”包括复数，除非上下文清楚表明不是如此。

[0348] 除非另外指明，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的意义。虽然与本文所述类似或等同的任何材料和方法可用于
实施本发明，但本文描述了优选的材料和方法。

[0349] 本文描述的发明可包括一个或多个数值范围(如尺寸、浓度、剂量等)。数值范围将理解为包括范围内的所有数值，包括定义范围的数值，以及产生与紧邻定义范围边界的数
值相同或基本上相同结果的邻近范围的数值。

[0350] 本发明的药物或兽药组合物可以多个单位剂量施用，具体取决于施用方法、目标部位、患者的生理状态以及所施用的其它药物。例如，适于经口施用的单位剂型包括固体剂
型例如粉剂、片剂、丸剂和胶囊剂，以及液体剂型例如酏剂、糖浆、溶液和悬浮液。活性成分
还可以无菌液体剂型经肠胃外施用。明胶胶囊剂可包含活性成分和无活性成分，例如粉末
载体、葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露糖醇、淀粉、纤维素或纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸、糖精
钠、滑石、碳酸镁等等。

[0351] 如本文所用，短语“治疗有效量”是指足以抑制与细菌感染或定植相关的细菌生长的量。也就是说，提及根据本发明的方法或组合物施用治疗有效量的式I的化合物是指其中
基本上杀菌或抑菌活性致使细菌感染大量抑制的治疗效应。如本文所用，术语“治疗有效
量”是指足以提供所需的生物学、治疗和/或预防结果的组合物的量。所需的结果包括消除
细菌感染或定植或减少和/或减轻疾病的迹象、症状或致因，或生物系统的任何其它所需改
变。在任何个体病例中，有效量可由本领域的普通技术人员使用日常实验确定。相对于药物
或兽药组合物，有效量可以是在调节疾病状态或其迹象或症状中所推荐的剂量。有效量根
据所用的组合物和所用的施用途径而不同。有效量考虑药代动力学和药效动力学特性以及
具体患者的各种因素例如年龄、体重、性别等和疾病或致病微生物影响的区域而例行优化。

[0352] 如本文所用，术语“治疗”是指完全或部分移除病症的症状和迹象。例如，在细菌感染或定植的治疗中，治疗完全或部分移除感染的迹象。优选地，在感染的治疗中，治疗减少
或消除导致微生物治愈的感染性细菌病原体。

[0353] 如本文所用，术语“细菌”是指原核微生物的广泛域的成员。细菌的长度通常为几微米，具有多种形状，从球形到杆状和球体，并且可以单个细胞存在或以可变数量和形状的
直链或簇存在。优选地，术语“细菌”及其形容词“细菌的”是指例如革兰氏阳性葡萄球菌属
物种、链球菌属物种、芽胞杆菌属物种(Bacillus spp)、肠球菌属物种、李斯特菌属物种和
厌氧细菌；革兰氏阴性大肠杆菌、肠杆菌属物种、克雷伯氏菌属物种和假单胞菌属物种的细
菌；以及无细胞壁的细菌例如支原体属物种和尿原体属物种。该术语可以指抗生素敏感或
耐抗生素菌株。在一个优选的实施方案中，该术语是指MRSA或MRSP。在另一个优选的实施方
案中，该术语是指MDR葡萄球菌属物种、链球菌属物种、肠球菌属物种、艰难梭菌、大肠杆菌、
肠杆菌属物种、克雷伯氏菌属物种和假单胞菌属物种。

[0354] 如本文所用，术语“耐甲氧西林细菌”(例如耐甲氧西林葡萄球菌)是指显示出在任何剂量下对所有β-内酰胺包括青霉素类、碳青霉烯类和第一代至第四代先锋霉素类具有耐
性，但对第五代抗MRSA先锋霉素类(例如头孢洛林)没有耐性的细菌分离株。多药物耐性
(MDR)定义为对三种或更多种抗微生物剂类别中的至少一种药剂的获得性不敏感性，广泛
耐药性(XDR)定义为除两种或更少的抗微生物剂类别之外的所有药剂中的至少一种药剂的
不敏感性(即细菌分离株仅对一种或两种类别保持敏感)，以及泛耐药性(PDR)定义为对现
有的所有抗微生物剂类别中的所有药剂的不敏感性。

[0355] 敏感、MDR、XDR和PDR细菌的实例包括：野生型、未暴露至抗菌剂、可能对所有以下抗菌剂类别(和药剂)敏感的金黄色葡萄球菌分离株：氨基糖苷类(例如庆大霉素)、安莎霉
素类(例如甲哌利福霉素)、抗MRSA先锋霉素类(例如头孢洛林)、抗葡萄球菌性β-内酰胺类
(例如苯唑西林或头孢西丁)、碳青霉烯类(例如厄他培南、亚胺培南、美罗培南或多尼培
南)、非广谱先锋霉素类、第一代和第二代先锋霉素(例如头孢唑林或头孢呋辛)、广谱先锋
霉素类、第三代和第四代先锋霉素(例如头孢噻肟或头孢曲松)、头霉素类(例如头孢西丁或
头孢替坦)、氟喹诺酮类(例如环丙沙星或莫西沙星)、叶酸途径抑制剂(例如三甲氧苄二氨
嘧啶-磺胺甲噁唑)、夫西地烷类(例如梭链孢酸)、糖肽类(例如万古霉素、替考拉宁或特拉
万星)、甘氨酰环素类(例如替加环素)、林可酰胺类(例如克林霉素)、脂肽类(例如达托霉
素)、大环内酯类(例如红霉素)、噁唑烷酮类(例如利奈唑胺或泰迪唑胺)、苯丙醇类(例如氯
霉素)、膦酸类(例如磷霉素)、链阳性菌素类(例如奎奴普丁-达福普丁)以及四环素类(例如
四环素、强力霉素或米诺环素)。对超过三种抗微生物剂类别中的不止一种药剂不敏感的分
离株归类为MDR(所有MRSA，例如满足MDR的定义)。对除一种或两种抗微生物剂类别之外的
所有药剂中的不止一种药剂不敏感的分离株归类为XDR。对所有列出的抗菌剂不敏感的分
离株为PDR。

[0356] 药学上和兽药学上可接受的盐包括保持本公开的化合物的生物有效性和性质并且不在生物学或其它方面不可取的盐。在多种情况下，本文所公开的化合物由于氨基和/或
羧基或其类似基团的存在能够形成酸式和/或碱式盐。可接受的碱式盐可从无机和有机碱
制备。衍生自无机碱的盐包括(仅以举例的方式)钠、钾、锂、铵、钙和镁盐。衍生自有机碱的
盐包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺盐，例如仅以举例的方式，烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、
取代烷基胺、二(取代烷基)胺、三(取代烷基)胺、烯基胺、二烯基胺、三烯基胺、取代烯基胺、
二(取代烯基)胺、三(取代烯基)胺、环烷基胺、二(环烷基)胺、三(环烷基)胺、取代环烷基
胺、二取代环烷基胺、三取代环烷基胺、环烯基胺、二(环烯基)胺、三(环烯基)胺、取代环烯
基胺、二取代环烯基胺、三取代环烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、杂芳基胺、二杂芳基
胺、三杂芳基胺、杂环胺、二杂环胺、三杂环胺，其中胺上的至少两个取代基不同并且选自烷
基、取代烷基、烯基、取代烯基、环烷基、取代环烷基、环烯基、取代环烯基、芳基、杂芳基、杂
环等等的二胺和三胺混合物。还包括其中两个或三个取代基连同氨基氮一起形成杂环或杂
芳基的胺。

[0357] 药学上和兽药学上可接受的酸式盐可从无机和有机酸制备。可使用的无机酸包括(仅以举例的方式)盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等等。可使用的有机酸包括(仅以举例的
方式)乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、延胡索酸、酒石
酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等等。

[0358] 可用于本公开的化合物的药学上或兽药学上可接受的盐可通过常规化学方法从母体化合物合成，该母体化合物包含碱性或酸性部分。一般来讲，此类盐可通过使这些化合
物的游离酸或碱形式与化学计量的适当碱或酸在水或有机溶剂中，或二者的混合物中反应
来制备；一般来讲，无水介质如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。合适的盐的列
表见于Remington's Pharmaceutical Sciences.第17版，Mack Publishing Company,
Easton,Pa.(1985)，第1418页中，该文献的公开内容据此以引用的方式并入。此类可接受的
盐的实例为碘化物、乙酸盐、苯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯代
苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯
甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、溴化物、异丁酸盐、苯丁酸盐、γ-羟丁酸盐、β-羟基丁酸盐、丁炔-
1,4-二酸盐、己炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、己酸盐、辛酸盐、氯化物、肉桂酸盐、柠檬
酸盐、癸酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、乙醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸
盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、邻苯
二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、
苯丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸
盐、亚硫酸氢盐、磺酸盐、苯磺酸盐、对溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、丙磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟
基乙磺酸盐、甲磺酸盐、萘-I-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、对甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、酒石酸
盐等等。

[0359] 本发明的药物或兽药组合物可根据需要以常规方式与其它药学上可接受的赋形剂一起配制成适于经口、肠胃外或局部施用的形式。施用模式可包括肠胃外施用，例如肌
内、皮下和静脉内施用、经口施用、局部施用和直接施用至感染部位例如眼内、耳内、子宫
内、鼻内、乳房内、腹膜内、病灶内等。

[0360] 本发明的药物或兽药组合物可配制成用于经口施用。可添加传统的无活性成分以提供所需的颜色、味道、稳定性、缓冲能力、分散性或其它已知的所需特征。实例包括红氧化
铁、硅胶、月桂基硫酸钠、二氧化钛、可食用白色墨水等等。常规的稀释剂可用于制备压缩片
剂。片剂和胶囊剂二者可制备为药物在一段时间内连续释放的持续释放组合物。压缩片剂
可为糖衣或薄膜衣片剂，或在胃肠道中选择性崩解的包肠溶衣片剂的形式。供经口施用的
液体剂型可包含染色剂和/或调味剂以增加患者的顺从性。例如，包含本发明的化合物的口
服制剂可为包含以下赋形剂中的任一者或其组合的片剂：无水磷酸氢钙、微晶纤维素、乳
糖、羟丙基甲基纤维素和滑石。

[0361] 本文所述的组合物可以为液体制剂的形式。优选的液体组合物的实例包括溶液、乳液、注射溶液、容纳于胶囊剂中的溶液。液体制剂可包括包含溶于溶剂中的治疗剂的溶
液。一般来讲，可使用具有所需效果的任何溶剂，治疗剂溶于该溶剂中并且该溶剂可施用给
受试者。一般来讲，可使用具有所需效果的任何浓度的治疗剂。在一些变型形式中，制剂为
不饱和、饱和或过饱和溶液。溶剂可以为纯溶剂，或可以为液体溶剂组分的混合物。在一些
变型形式中，所形成的溶液为原位胶凝化制剂。可用的溶剂和溶液类型是该药物递送技术
领域的技术人员熟知的。

[0362] 本文所述的组合物可为液体悬浮液的形式。液体悬浮液可根据本领域已知的标准程序制备。液体悬浮液的实例包括微乳液，即配混化合物和稳定悬浮液的形成物。液体悬浮
液可以为未稀释的或浓缩的形式。口服使用的液体悬浮液可包含合适的防腐剂、抗氧化剂
以及本领域已知的作为分散剂、悬浮剂、增稠剂、乳化剂、润湿剂、增溶剂、稳定剂、调味和甜
味剂、染色剂等中的一者或多者的其它赋形剂。液体悬浮液可包含甘油和水。

[0363] 本文所述的组合物可为口服糊剂的形式。口服糊剂可根据本领域已知的标准程序制备。

[0364] 本文所述的组合物可为用于注射例如肌肉内注射的液体制剂形式，并且使用本领域已知的方法制备。例如，液体制剂可包含聚乙烯基吡咯烷酮K30和水。

[0365] 本文所述的组合物可为局部用制剂的形式。局部用制剂可为使用本领域已知的方法制备的洗剂或霜剂的形式。例如，洗剂可用水性或油性基料配制，并且可包含一种或多种
本领域已知的作为增粘剂、乳化剂、芳香剂或香料、防腐剂、螯合剂、pH调节剂、抗氧化剂等
的赋形剂。例如，包含本发明的一种或多种化合物的局部用制剂可以为包含以下赋形剂中
的任一者或组合的凝胶：PEG 8000、PEG 4000、PEG 200、甘油、丙二醇。NCL812化合物可使用
SoluPlus(BASF,www.soluplus.com)进一步配制为固态分散体，并且使用以下赋形剂中的
任一者或其组合配制：PEG 8000、PEG 4000、PEG 200、甘油和丙二醇。

[0366] 对于气雾剂施用，本发明的组合物以细分形式连同无毒表面活性剂和推进剂一起提供。表面活性剂优选地可溶于推进剂中。此类表面活性剂可包括脂肪酸酯或偏酯。

[0367] 本发明的化合物作为另外一种选择可被配制成通过注射而施用。例如，该化合物通过以下途径中的任一种以注射方式施用：静脉内、肌内、皮内、腹膜内和皮下。

[0368] 本发明的组合物作为另外一种选择可使用纳米药物递送技术例如本领域已知的那些技术进行配制。基于纳米技术的药物递送体系具有改善生物利用率、患者的顺从性以
及减少副作用的优点。

[0369] 本发明组合物的配制包括根据化合物溶解度以纳米悬浮液或纳米乳液的形式制备纳米粒子。纳米悬浮液是通过自底向上或自顶向下技术制备并且用合适的赋形剂稳定的
纳米尺度药物颗粒分散体。该方法可适用于本发明的可能具有不良水溶性和脂溶性的化合
物，以便增强饱和溶解性并改善溶出特性。该技术的实例在Sharma和Garg(2010)(Pure 
drug and polymer-based nanotechnologies for the improved solubility,
stability,bioavailability,and targeting of anti-HIV drugs.Advanced Drug 
Delivery Reviews,62:第491-502页)中示出。饱和溶解度将被理解为取决于温度、溶出介
质性质和粒度(<1–2μm)的化合物特定的常数。

[0370] 本发明的组合物可以纳米悬浮液的形式提供。对于纳米悬浮液，表面积的增加可导致饱和溶解度的增加。纳米悬浮液是由小于1μm的颗粒组成的胶体药物递送体系。本发明
的组合物可为纳米悬浮液的形式，包括纳米晶悬浮液、固体脂质纳米粒子(SLN)、聚合物纳
米粒子、纳米胶囊、聚合物胶束和树枝状体。纳米悬浮液可使用自顶向下法制备，其中较大
的颗粒可通过本领域已知的多种技术包括湿磨和高压均化减小至纳米尺度。作为另外一种
选择，纳米悬浮液可使用自底向上技术制备，其中颗粒的受控沉淀过程可从溶液中进行。

[0371] 本发明的组合物可以纳米乳液的形式提供。纳米乳液通常为澄清的水包油或油包水双相体系，液滴尺寸在100–500nm的范围内，并且所关注的化合物存在于疏水相中。纳米
乳液的制备可改善本文所述的本发明的化合物的溶解性，从而导致更好的生物利用率。纳
米尺度悬浮液可包含静电或空间稳定剂，例如聚合物和表面活性剂。SLN形式的组合物可包
含可生物降解的脂质，例如甘油三酯、类固醇、蜡和乳化剂，例如大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂和
泊洛沙姆。SLN制剂的制备可涉及在熔融脂质中溶解/分散药物，然后是热或冷均化。如果使
用热均化，则熔融脂质相可分散于水相，制备成乳液。这可通过冷却固化得到SLN。如果使用
冷均化，则脂质相可在液氮中固化并研磨成微米尺寸。所得的粉末可在表面活性剂水溶液
中经受高压均化。

[0372] 如本文所述的式I的化合物可溶于油/液体脂质中并稳定成乳液制剂。纳米乳液可使用高能和低能液滴减小技术制备。高能法可包括高压均化、超声破碎和微流化。如果使用
低能法，则溶剂扩散和相转化将生成自发性纳米乳液。用于纳米乳液的脂质可选自甘油三
酯、大豆油、红花油和芝麻油。还可添加其它组分，例如乳化剂、抗氧化剂、pH调节剂和防腐
剂。

[0373] 组合物可为控释制剂的形式，并可包含可降解或不可降解的聚合物、水凝胶、有机凝胶，或改变化合物的释放的其它物理构建体。应当理解，此类制剂可包含另外的无活性成
分，其添加可提供所需的颜色、稳定性、缓冲能力、分散性或其它已知的所需特征。此类制剂
还可包括脂质体，例如乳液、泡沫、胶束、不溶性单层、液晶、磷脂分散体、片状层等等。本发
明所用的脂质体可从标准囊泡形成脂质形成，所述脂质通常包括中性和带负电的磷脂和甾
醇，例如胆固醇。

[0374] 本发明的制剂可具有提高化合物的溶解度和/或稳定性的优点，尤其是对于那些使用纳米技术制备的制剂而言。式I的化合物这种提高的稳定性和/或稳定性可改善生物利
用率并增强口服和/或肠胃外剂型的药物暴露。

[0375] 在此整个说明书中，除非上下文有另外的要求，否则词语“包括”或变型形式例如“包含”或“含有”将被理解为意味着包括指定的整数或整数组，但不排除任何其它整数或整
数组。
实施例

[0376] 实施例1：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐万古霉素肠球菌属物种(VRE)和肺炎链球菌中NCL812的最小抑制浓度(MIC)。

[0377] 细节

[0378] 如从前文的发明内容中显而易见的是，本发明涉及式I的化合物、治疗细菌感染的方法、用途和医疗装置。

[0379] 本研究进行抗菌剂NCL812的最小抑制浓度(MIC)测定。该抗菌剂代表潜在的新型药物类别，其具有认知的窄谱抗菌活性和新作用机制。本研究关注人的三种主要机会病原
体的最近分离株：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐万古霉素肠球菌属物种(VRE)和肺
炎链球菌，其中对现有抗菌剂类别的抗菌剂耐性发展是有问题的。

[0380] 在该实施例中，测定了61个澳大利亚临床分离株(由21个MRSA、20个推定的VRE和20个肺炎链球菌分离株构成)的NCL812最小抑制浓度(MIC)。据发现，NCL812的MIC谱惊人地
一致，针对所测试的每个物种记录的MIC50和MIC90值为4μg/mL。

[0381] 材料和方法

[0382] 细菌分离株收集和鉴定

[0383] 六十一个测试分离株来源于临床诊断微生物学实验室。MRSA分离株最初在选择性Brilliance MRSA显色琼脂(Oxoid)上培养。可疑菌落根据其在该琼脂上的菌落外观进行选
择，并且金黄色葡萄球菌的鉴定使用非选择性绵羊血琼脂(SBA)上的菌落特性和表型特性
例如革兰氏染色、过氧化氢酶测试阳性、凝固酶测试阳性(使用兔血浆的试管凝固酶测试)
和凝集因子(使用Oxoid Staphytect乳胶测试法的凝集)、Voges Proskauer测试阳性以及
从海藻糖生成酸的能力确定。耐头孢西丁筛选阳性确认分离株为MRSA。所有肠球菌分离株
均进行了标准生物化学鉴定。生物化学谱分析暂时地将VRE分离株中的四个鉴定为粪肠球
菌，其余的为屎肠球菌。所有肺炎链球菌分离株均根据标准生物化学谱分析进行鉴定。

[0384] 抗菌剂的制备

[0385] 获得了具有1000mg/g(即100％)的确定效价的分析级NCL812(批次20081214)。将粉末保存在-20℃的温度下。原液(25.6mg/mL)的等分试样(1mL)在DMSO中制备，保存于-80
℃，在使用前立即解冻。

[0386] 准备96孔微量滴定板以使用NCL812进行肉汤微量稀释MIC测试

[0387] 使用100mL无菌Mueller Hinton肉汤(经pH调节的)配制阳离子调节的Mueller Hinton肉汤(CAMHB)。向每100mL体积中，以无菌方式添加125μL钙原液(10mg Ca2+/ml)和43μ
2+
L镁原液(10mg Mg /mL)。配制足量的肉汤供每日使用，未使用的部分保存在4℃下过夜。

[0388] 通过以下方式准备具有溶于CAMHB的4％裂解马血的微量稀释板：通过反复冻融(3-4次)而裂解马血(Oxoid)，然后以无菌方式将裂解的马血(LHB)按50:50与无菌蒸馏水混
合。通过将50％LHB在16,000×g(7000rpm)下离心20min获得无细胞悬浮液。倾析出上清液，
再次离心，冷冻保存。将50％LHB用CAMHB稀释，得到4％的最终浓度(7mL LHB加到93mL 
CAMHB中)。在准备微量稀释板和配制链球菌种的抗微生物剂溶液的所有步骤中使用4％
LHB-CAMHB而不是CAMHB。

[0389] 将NCL812的抗生素工作原液配制成25.60mg/mL的浓度。将效价称为1000mg/g或100％。将粉末溶于10mL DMSO，将1mL体积等分到eppendorf管中，在-80℃下保存。当添加到
CAMHB中时，形成了细小的浑浊沉淀，在等分前和等分过程中摇匀。

[0390] 将氨苄青霉素原液配制成25.60mg/mL的浓度。氨苄青霉素用于内部质量控制。将粉化氨苄青霉素以0.1mol/L溶于4mL pH为8.0的磷酸盐缓冲液中，然后以0.1mol/L稀释在
6mL pH为6.0的磷酸盐缓冲液中。将1mL体积等分到eppendorf管中，在-80℃下保存。

[0391] 对于金黄色葡萄球菌，如上所述按1:100在CAMHB中稀释原液(100μL加到9.9mL中)而配制256μg/mL的工作溶液。当将90μL加到每个孔12中时，存在1:2的稀释，以使得孔12具
有128μg/mL的抗生素。经计算抗微生物剂的范围为0.25μg/mL(孔3)至128μg/mL(孔12)。

[0392] 对于肠球菌种，如上所述按1:400在CAMHB中稀释原液而配制64μg/mL的工作溶液(将100μL加到9.9mL中，然后将此按1:4进一步稀释)。当将90μL加到孔12中时，存在1:2的稀
释，以使得孔12具有32μg/mL的抗生素。

[0393] 对于肺炎链球菌，如上所述按1:400在4％LHB-CAMHB中稀释原液而配制64μg/mL的工作溶液(将100μL加到9.9mL中，然后将此按1:4进一步稀释)。当将90μL Mars加到孔12中
时，存在1:2的稀释，以使得孔12具有32μg/mL的抗生素。

[0394] 根据本领域的标准方法，在安全橱中设立的96孔板中制备系列稀释样。简而言之，将90μL抗生素工作溶液加到板的第12列的各孔中，混匀，然后将90μL转到第11列。将溶液再
次混合，然后如前转移到下一列，继续稀释到第3列。孔的混合需要在每个孔中吸取并排出
90μL 3-4次，然后吸取并转移90μL到下一个孔。第2列(细菌阳性对照)和第1列(阴性对照)
不构成系列稀释的一部分。对板进行如下安排：2个菌株在一个板中一式两份地测试，使得
菌株1位于A至D行，菌株2位于E至H行等。使用对照菌株的氨苄青霉素MIC(μg/mL)解释标准
在下表1中示出。氨苄青霉素的金黄色葡萄球菌ATCC 29213可接受MIC范围＝0.5至2μg/mL，
氨苄青霉素的粪肠球菌ATCC 29212可接受MIC范围＝0.5至2μg/mL，氨苄青霉素的肺炎链球
菌ATCC 49619可接受MIC范围＝0.06至0.25μg/mL。

[0395] 表1：根据实施例1的使用对照菌株的氨苄青霉素MIC(μg/mL)解释标准。

[0396]

[0397] 制备用于肉汤微量稀释MIC方法的细菌悬浮液

[0398] 在绵羊血琼脂(SBA)上制备用于测试的细菌的新鲜培养物，在37℃下如下过夜温育：将每种菌株的2-3个菌落在7mL无菌盐水中温育，测量OD600作为密度指标(约0.5×
108CFU/mL或0.5McFarland标准)。使用盐水将细菌悬浮液调节到0.08至0.100的最终吸光
度以实现正确的密度，并作为空白。在制备后的15分钟内，用无菌盐水按1:20调节细菌悬浮
液(将1mL加到19mL无菌盐水中)以实现4至5×106CFU/mL的最终细菌浓度。将细菌溶液置于
无菌槽中，取10μL细菌溶液加到每个所需的行上的孔2至12中(1:10稀释，孔中的最终细菌
浓度＝5×105CFU/mL)。将板密封并在37℃温育18-24h。通过以下方式确认细菌悬浮液的纯
度：将50μL 1:20稀释样划线接种到SBA板上，在37℃下温育18h并检查。进行存活计数以确
保已将正确浓度的细菌加到孔中。将稀释后的细菌溶液(4至5×106CFU/mL)通过以下方式
1:10向下稀释：将100μL加到无菌管中的900μL无菌盐水中，1:10进行5根管的系列稀释。将
100μL(4-5滴)第4和5个稀释样(第4管＝105和第5管＝106CFU/ml))一式两份地接种到预先
干燥的PCA琼脂板上，并在37℃温育过夜。第二天，对板上的菌落计数，得到100μL中的平均
计数。将研究结果乘以10以得到每毫升的活细菌计数。

[0399] 分离株的描述和鉴定

[0400] MRSA分离株最初在选择性Brilliance MRSA显色琼脂(Oxoid)上培养。可疑菌落根据其在该琼脂上的菌落外观进行选择，并且金黄色葡萄球菌的鉴定使用非选择性SBA上的
菌落特性和表型特性例如革兰氏染色、过氧化氢酶测试阳性、凝固酶测试阳性(使用兔血浆
的试管凝固酶测试)和凝集因子(使用Oxoid Staphytect乳胶测试法的凝集)、Voges 
Proskauer测试阳性以及从海藻糖生成酸的能力确定。耐头孢西丁筛选阳性确认分离株为
MRSA。

[0401] 通过快速分子分型确定MRSA克隆复合体。两个菌株未能使用该快速方法分型，如下表2中所示。

[0402] 表2：显示了根据实施例1的MRSA克隆复合体的表格。

[0403]

[0404]

[0405] NA：不适用；TBD：分离株未能使用该快速方法分型，目前正在使用传统方法鉴定。

[0406] 所有肠球菌分离株均进行了基于Quinn等(1994,Clinical Veterinary Microbiology,Mosby Ltd,New York)的简化生物化学鉴定。生物化学谱分析暂时地将VRE
分离株中的四个鉴定为粪肠球菌，其余的可能为屎肠球菌。所有的肺炎链球菌分离株均基
于标准生物化学谱分析进行鉴定。

[0407] 供试品及保存

[0408] 获得了具有1000mg/g(即100％)的确定效价的分析级NCL812(批次20081214)，并将粉末保存在-20℃的温度下。原液(25.6mg/mL)的等分试样(1mL)在DMSO中制备，保存于-
80℃，在使用前立即解冻。

[0409] 最小抑制浓度测定

[0410] 使用由临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的肉汤微量稀释法测定最小抑制浓度(Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That 
Grow Aerobically；Approved Standard–第七版.CLSI M7-A7,2006；Performance 
Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for 
Bacteria Isolated from Animals；Approved Standard–第二版.CLSI M31-A2,2002；
Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing；CLSI M2-A9,
2006)。

[0411] 将MIC视为完全抑制微量稀释孔中的生物体生长(通过肉眼观察)的抗微生物剂最低浓度。MIC断点通过视觉评估进行确定，然后使用ELISA酶标仪测量450nm处的吸光度水平
而确认。将具有抗微生物剂的孔中的细菌生长(浊度)与生长对照孔(不含抗微生物剂)中的
生长量(浊度)进行比较。所有分离株一式两份地进行测试，如果在结果中存在大于一个两
倍稀释的差异，则将测试重复第三次。通过将制备的种菌传代培养到SBA上，在测试期间密
切监控分离株的纯度。在整个测试中使用对照生物体(粪肠球菌菌株ATCC 29212、金黄色葡
萄球菌菌株ATCC 29213和肺炎链球菌菌株ATCC 49619)以监控质量控制。对于每个测试运
行，测定抗微生物剂氨苄青霉素(范围分别为1.0、2.0和0.06μg/mL)的对照菌株MIC，作为内
部质量控制。计算每个细菌组的MIC50、MIC90和MIC范围(最小值和最大值)。

[0412] 结果

[0413] 根据CLSI推荐，预期得自ATCC对照菌株的氨苄青霉素MIC值在正常范围内。各分离株的NCL812和氨苄青霉素MIC值在下表3(MRSA分离株)、表4(VRE分离株)和表5(肺炎链球菌
分离株)中指出。所测试的各细菌物种的MIC50、MIC90、MIC众数和MIC范围在下表6中示出。
MIC50被视为抑制50％分离株的可见生长的最低浓度。MIC90被视为抑制90％分离株的可见
生长的最低浓度。MIC众数是最常见的MIC值，并且MIC范围是所得的最小和最大MIC值。

[0414] 表3：根据实施例1的各个金黄色葡萄球菌分离株的最小抑制浓度表。

[0415]

[0416] 表4：根据实施例1的各个肠球菌分离株的最小抑制浓度表。

[0417]

[0418] 表5：根据实施例1的各个肺炎链球菌分离株的最小抑制浓度表。

[0419]

[0420] 表6：MRSA、VRE和肺炎链球菌的澳大利亚分离株的NCL812MIC50、MIC90、MIC众数和MIC范围。

[0421]

[0422] *众数-最常见的MIC值。

[0423] §对比氨芐青霉素MIC在括号中示出。

[0424] 三个菌种之内和每个之间的NCL812MIC值一致。MRSA、VRE和肺炎链球菌分离株的MIC50和MIC90值均相等(4μg/ml)，少于10％的分离株显示出MIC值比该数值低1-2个稀释度
或只大一个稀释度。

[0425] 基于这些结果，NCL812代表新的抗菌剂。

[0426] 实施例2：NCL812对金黄色葡萄球菌大分子合成的影响

[0427] 材料和方法

[0428] 测试化合物

[0429] 测试化合物NCL812在环境温度条件下运输至实验装置，然后保存于2-8℃直到进行测定。原液通过将NCL812干粉溶于100％DMSO中得到6,400μg/mL的浓度来制备。万古霉素
(目录号1134335)、甲哌利福霉素(目录号R-7382)和浅蓝菌素(目录号C-2389)均得自
Sigma，环丙沙星得自USP(目录号1134335)以及利奈唑胺得自ChemPacific(目录号35710)。

[0430] 最小抑制浓度测试

[0431] MIC测定方法遵循临床和实验室标准协会或CLSI所述的程序(Clinical and Laboratory Standards Institute.Methods for Dilution Antimicrobial 
Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically；Approved Standard—第
八版CLSI文档M07-A8[ISBN 1-56238-689-1].Clinical and Laboratory Standards 
Institute,940West Valley Road,Suite1400,Wayne,Pennsylvania 19087-19898USA,
2009)，并且利用自动移液器进行系列稀释和液体转移。用于MIC测定法的培养基为Mueller 
Hinton II肉汤(MHB II-Becton Dickinson,Sparks,MD；目录号212322；批次9044411)。金
黄色葡萄球菌ATCC 29213作为质量控制菌株，并且利奈唑胺用作质量控制抗生素来验证测
定。在加入生长培养基之前将NCL812和利奈唑胺均溶于100％DMSO中。

[0432] 大分子合成测定

[0433] 细菌和生长条件

[0434] 使用金黄色葡萄球菌ATCC 29213研究NCL812对全细胞DNA、RNA、细胞壁、蛋白质和脂质合成的影响。细胞在胰蛋白胨大豆琼脂上在35℃下生长过夜。将得自平板的菌落用于
接种10ml Mueller Hinton肉汤II(MHBII)，使培养物生长至指数生长早期(OD600＝0.2至
0.3)，同时在35℃和200rpm的摇动器中温育。

[0435] DNA、RNA和蛋白质合成

[0436] 当细胞达到指数生长早期时，将100μl培养物加入包含各种浓度测试化合物或20×终浓度溶于100％DMSO的对照抗生素(5μL)的孔(一式三份)。5％DMSO处理培养物作为所
有实验的“无药物”对照。细胞以105％加入MHBII以考虑到加入每个反应的药物量，或加入
M9基本培养基以考虑到蛋白质合成反应。在室温下温育15min后，根据实验以0.5-1.0μCi/
反应添加[3H]胸苷(DNA合成)、[3H]尿苷(RNA合成)或[3H]亮氨酸(蛋白质合成)。使反应在室
温下进行15-30min，然后通过添加12μl冷的5％三氯乙酸(TCA)或5％TCA/2％酪蛋白氨基酸
(仅蛋白质合成)停止反应。将反应物在冰上温育30min，并将TCA沉淀材料收集于25mm GF/A
过滤器上。在用5ml冷的5％TCA洗涤三次后，用5mL 100％乙醇冲洗过滤器两次，使其干燥，
然后使用Beckman LS3801液体闪烁计数器计数。

[0437] 细胞壁合成

[0438] 将指数生长早期的细菌细胞转移至M9基本培养基，并且加入如上所述包含各种浓度测试化合物或20×终浓度溶于100％DMSO的对照抗生素(5μL)的1.5mL eppendorf管中
(100μL/管)。在37℃下温育5min后，每根管加入[14C]N-乙酰基葡糖胺(0.4μCi/反应)，在37
℃加热块中温育45min。通过向每根管加入100μl 8％SDS来停止反应。然后将反应物在95℃
加热块中加热30min，冷却，短暂离心，并点到预先润湿的HA过滤器(0.45μM)上。在用5mL 
0.1％SDS洗涤三次后，用5ml去离子水冲洗过滤器两次，使其干燥，然后使用Beckman 
LS3801液体闪烁计数器计数。

[0439] 脂质合成

[0440] 使细菌细胞在MHBII肉汤中生长至指数生长早期，并且加入如上所述包含各种浓度测试化合物或对照抗生素的1.5mL eppendorf管中(一式三份)。在室温下温育5min后，以
0.5μCi/反应添加[3H]甘油。

[0441] 使反应在室温下进行15min，然后通过添加375μl氯仿/甲醇(1:2)停止反应，然后每次添加后涡旋20秒。然后向每个反应加入氯仿(125μL)，涡旋，然后添加125μl dH2O并涡
旋。以13,000rpm离心反应物10min，然后将150μl有机相转移至闪烁小瓶，使之在通风橱中
干燥至少1小时。样品计数通过液体闪烁计数进行。

[0442] 结果

[0443] 敏感性测试使用NCL812和金黄色葡萄球菌ATCC 29213进行，以确定大分子合成测定中所需的药物浓度。

[0444] 表7显示出NCL812的MIC为4μg/mL，而质量控制剂利奈唑胺在CLSI-建立的质量控制范围内(Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance Standards 
for Antimicrobial Susceptibility Testing；Nineteenth Informational 
Supplement.CLSI文档M100-S20[ISBN1-56238-716-2].Clinical and Laboratory 
Standards Institute,940West Valley Road,Suite 1400,Wayne,Pennsylvania 19087-
1898USA,2010)。在以相同方式准备但未接受金黄色葡萄球菌接种的平板中，≥8μg/mL下观
察到NCL812沉淀。对于金黄色葡萄球菌ATCC 29213，大分子合成抑制研究使用相当于MIC值
(4μg/ml)0、0.25、0.5、1、2、4或8倍的NCL812浓度进行(图11-16)。

[0445] 表7：根据实施例2的NCL812(氯苯胍)和利奈唑胺对金黄色葡萄球菌ATCC29213的最小抑制浓度值。

[0446]

[0447] 图2示出了NCL812对DNA合成的影响。NCL812显示在0.25倍MIC下无抑制，在0.5倍下40％抑制，并且在MIC下大约95％的抑制。与对照组环丙沙星比较显示在8倍MIC(0.5μg/
mL)下抑制大约51％。NCL812抑制RNA合成的结果与DNA合成研究非常类似，其中以甲哌利福
霉素作为阳性对照(图3。应当指出的是，在用于DNA和RNA合成测定的Mueller Hinton肉汤
II中，4至8倍MIC下观察到沉淀。

[0448] 在0.25、0.5和1倍NCL812MIC值下蛋白质合成以剂量依赖性方式受到抑制，显示在MIC下最多97％抑制(图4)。利奈唑胺显示在8倍MIC(2μg/mL)下蛋白质合成受到大约61％抑
制。在蛋白质合成测定中，NCL812的沉淀发生在4和8倍MIC。

[0449] 在图5中，NCL812还显示出一定程度的细胞壁合成剂量依赖性抑制，但从1倍至2倍MIC，抑制大幅增加。然而，在4倍和8倍MIC下抑制分别降至大约68％和52％。在用于细胞壁
合成测定的M9基本培养基中，NCL812沉淀发生在2、4和8倍MIC，这可能是导致抑制下降的原
因。相比之下，阳性对照万古霉素显示在8倍MIC(2μg/mL)下96％的抑制。NCL812显示出与
DNA和RNA合成所示类似的脂质合成抑制曲线，在MIC下达到大约90％的抑制(图6)。阳性对
照抑制剂浅蓝菌素显示出在8倍MIC(32μg/mL)下72％的抑制。

[0450] 图7展示了所有五个大分子合成反应的组合。可观察到每个途径的抑制曲线类似，暗示多个途径同时被NCL812整体抑制。NCL812靶向细胞膜，导致基本离子和/或代谢物渗
漏，从而导致细胞合成途径整体关闭是可能的。

[0451] 概括地说，在金黄色葡萄球菌生长培养物中，NCL812抑制DNA、RNA、蛋白质、细胞壁和脂质途径。虽然观察到途径剂量依赖性抑制的一些实例，但所有五个大分子合成反应对
NCL812具有类似的敏感性。

[0452] 实施例3：NCL812对ATP从金黄色葡萄球菌释放的影响

[0453] 材料和方法

[0454] 测试化合物

[0455] 测试化合物NCL812在环境温度条件下运输，然后保存于2-8℃直到进行测定。原液通过将NCL812干粉溶于100％DMSO中得到1,600μg/mL的浓度来制备。多粘菌素B得自Sigma
(目录号P-4932)。

[0456] 测试生物体

[0457] 金黄色葡萄球菌ATCC 29213最初从美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection(Manassas,VA))获得。

[0458] ATP释放测试

[0459] 将CellTiter-Glo发光法细胞活力测定(Promega)用于测量ATP从细菌的渗漏。培养物在Mueller-Hinton肉汤II中生长至指数生长早期(0.2–0.3OD600)，然后用七种不同浓
度的NCL812或多粘菌素B(阳性对照)处理，该处理利用每个化合物的MIC作为指导(0、0.25、
0.5、1、2、3、4或8倍MIC)。阴性对照接受2％DMSO，其表示每个测定中的最终DMSO浓度。在暴
露至药物30min后，离心沉淀细胞，分析上清液中ATP的存在。结果以释放至培养基的ATP浓
度(μM)表示。

[0460] 结果

[0461] NCL812的MIC此前确定为4μg/mL。ATP释放测定通过以下方法进行：使金黄色葡萄球菌生长至指数生长期，然后以MIC的倍数加入药物，以检测剂量依赖性响应。

[0462] 如图8所示，阳性对照多粘菌素B以剂量依赖性方式从金黄色葡萄球菌细胞释放ATP，在8倍MIC(256μg/mL)下最大释放量为大约0.34μM ATP。在存在NCL812的情况下，ATP释
放在0.5–1倍MIC下为剂量依赖性的，观察到在MIC(4μg/ml)下产生最大释放量(0.33μM)。然
后在2至8倍MIC下，ATP释放实际上减少。应当指出的是，在先前的研究中，在Mueller 
Hinton肉汤II中4至8倍MIC下观察到NCL812沉淀。

[0463] 概括地说，NCL812显示出ATP从生长活跃的金黄色葡萄球菌细胞的剂量依赖性释放。ATP从细胞释放至生长培养基在MIC值下达到最大水平，然后是在较高剂量下的ATP释放
量下降。数据显示NCL812可与金黄色葡萄球菌的细胞膜相互作用，导致重要代谢物例如ATP
渗漏。

[0464] 实施例4：NCL812对耐甲氧西林和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性

[0465] 材料和方法

[0466] 抗微生物剂

[0467] NCL812原液(25.6mg/ml)的等分试样在DMSO中制备，保存于-80℃，在使用前立即解冻。氨苄青霉素原液得自Sigma-Aldrich(Australia)。抗微生物纸片得自Thermo Fisher 
Scientific(Australia)。

[0468] 微生物

[0469] 获得代表澳大利亚医院获得性(HA)和社区获得性(CA)MRSA的最常见序列类型的MRSA的临床分离株，它们在下表8中描述。使用了金黄色葡萄球菌对照生物体ATCC 49775。
分离株鉴定通过传统表型方法确认，包括玻片凝固酶测试、Vogues-Proskauer测试、多粘菌
素B敏感性测试(300个单位)和Staphytect Plus蛋白A乳胶玻片凝集测试(Thermo Fisher 
Scientific Australia)。细菌在40％甘油肉汤中保存于-80℃，并在37℃温育的绵羊血琼
脂(SBA)上从原液例行生长。在后续的实验中，仅使用<24h的新鲜培养物。

[0470]

[0471]

[0472] 分离株耐性分型(resistotyping)

[0473] 分离株收集物的抗生素敏感性表达谱分析使用Kirby-Bauer纸片扩散法进行，如由临床和实验室标准协会(CLSI)推荐在Mueller-Hinton琼脂上进行。分离株在37℃下在
SBA上过夜生长。将菌落悬浮于生理盐水。浊度调整为0.5McFarland标准，并将悬浮液涂布
于培养基上。将根据下表9的抗生素纸片转移到经接种的培养基上，在37℃下温育24h后进
行分析。根据Kirby-Bauer测试标记为不耐β-内酰胺的MRSA的分离株在补充5μg/ml氨苄青
霉素的平板计数琼脂上从原液生长，并经受重复测试，因为PBP2a表达可通过暴露于β-内酰
胺抗微生物剂而诱导。

[0474] 表9：如实施例4中所用的Kirby-Bauer纸片扩散的抗菌剂抑菌区直径解释大小。

[0475]

[0476]

[0477] 蛋白A和mecA基因的分子检测以确认MRSA状态

[0478] 分离株种类使用靶向spa(蛋白A)和mecA(耐甲氧西林)基因的双重聚合酶链式反应(PCR)测试法通过基因型确认。此外，分离株在mecA和spa Sybr绿色实时PCR中测试。将每
个过夜细菌传代培养物的大约十个菌落悬浮于1×磷酸盐缓冲盐水(pH7.4)中并涡旋。分离
株使用 DNA小量提取试剂盒(Qiagen,Australia)根据制造商方案进行DNA提取。
模板DNA在50μL洗脱缓冲液中洗脱，并且直接用于PCR，或在DNA扩增前保存于-20℃，所述
DNA扩增使用spa正向(5′-TGATACAGTAAATGACATTG-3′)和反向(5′-TTCTTAT 
CAACAACAAGTTC-3′)引物以及mecA正向(5′-TTCGTGTCTTTTAAT AAGTGAGG-3′)和反向(5′-
ATGAAGTGGTAAATGGTAATATCG-3′)引物(Invitrogen,Australia)。常规PCR扩增在包含10μL 
HotStarTaq Pl us Master Mix(Qiagen,Australia)、0.5μM每种spa引物、0.2μM每种mecA
引物和3μL提取DNA的20μL体积中进行。将自动热循环仪(T100热循环仪，Bio-Rad)根据以下
条件用于spa和mecA基因的PCR扩增：PCR阶段(酶在95℃下活化300s，接着进行38轮以下扩
增：94℃30s(变性)、50℃30s(退火)和72℃38s(延伸)，然后为20℃的冷却阶段直到需要
时)；实时PCR阶段(酶在95℃下活化300s，接着进行40轮以下扩增：95℃15s(变性)、50℃20s
(退火)和70℃40s(延伸)，95℃5s单轮，55℃20s单轮，95℃至0℃连续解链曲线和40℃30s冷
却期。分别为325和120bp的me cA和spa扩增产物通过GelRed染色然后是2％琼脂糖凝胶电
泳进行检测。

[0479] 最小抑制浓度测试

[0480] NCL812和氨苄青霉素阳性对照的体外活性在阳离子调节Mueller-Hinton II肉汤中通过CLSI推荐的微量肉汤稀释进行确定。给包含两倍稀释的每种抗微生物剂的微量滴定
板接种～105CFU/ml每种分离株，最终体积为100μL。将平板在37℃下温育24h。浊度(OD600下
的吸光度)使用Bio-Rad Benchmark Plus微板分光光度计在Microplate 软件
5.2.1版(Bio-Rad)中测量。最小抑制浓度(MIC)端值定义为分光光度计评估的抑制细菌生
长的最低抗微生物剂浓度。ATCC 49775使用CLSI定义的断点包括于分离株收集物中，作为
对照生物体。计算MIC50、MIC90(分别抑制较低50％和90％的总生物体生长的浓度)和MIC范
围(最小值和最大值)，以绘制分离株收集物的抗微生物剂敏感性曲线。

[0481] 杀菌活性

[0482] NCL812的杀菌活性通过使用CLSI指导原则确定最小杀菌浓度(MBC)和时间-杀菌分析结果而确立。MBC定义为消除99.95％的原始接种物所处的最低药物浓度。

[0483] ATCC 49775的时间-杀菌测定在微量滴定板中的阳离子调节Mueller-Hinton II肉汤中，然后在抗微生物剂浓度相当于1×和4×MIC的10ml体积宏量稀释测定中进行。宏量
稀释测定中的杀菌活性确定为从初始接种量减少3log10。细菌在SBA上37℃下过夜培养。将
菌落悬浮于肉汤中，并将浊度调整为0.5McFarland标准，以得到～105CFU/ml的细菌悬浮
液。细菌悬浮液在37℃下摇动温育。在加入抗微生物剂后0、1、2、4、8、12和24h取出等分试
样，稀释，接种于SBA上并且在37℃下温育48h用于存活计数测定。使用Bio-Rad Benchmark 
Plus微板分光光度计监测600nm下光密度变化进行微量滴定板测定，获得金黄色葡萄球菌
的比浊生长曲线。在加入抗微生物剂后0、1、2、4、8、12和24h测量光密度。

[0484] 统计方法

[0485] 微生物数据使用CLSI指导原则解释。数据在适用时使用学生t-检验、费希尔精确检验(Fisher’s exact test)、方差分析和受试者之间影响测试的广义线性模型进行验证。
在IBM 19.0版中，0.05水平的差异被视为具有显著性。

[0486] 结果

[0487] 金黄色葡萄球菌种类和mecA状态确认

[0488] 乳胶凝集测试确认了所有30个分离株均为蛋白A阳性。使用玻片凝集法，分离株的凝固酶活性测试呈阳性。Voges-Proskauer和耐多粘菌素B测试确认，除一个甲氧西林敏感
分离株MSSADE-25之外，所有分离株均为金黄色葡萄球菌，如下表10中所示。根据spa基因
PCR扩增，该分离株未鉴定为金黄色葡萄球菌分离株，尽管蛋白A乳胶凝集和玻片凝固酶测
试中为测试阳性。根据生物化学特性，该犬科动物来源葡萄球菌属物种鉴定为伪中间葡萄
球菌。mecA常规和实时PCR结果确认，根据是否拥有mecA基因，将66.66％的分离株归类为耐
甲氧西林。常规和实时PCR的mecA基因检测能力之间无显著性差异(P>0.05)。

[0489]

[0490]

[0491] 金黄色葡萄球菌抗微生物剂敏感性曲线

[0492] 抗微生物剂敏感性测定揭示，HA-MRSA分离株具有对多种抗微生物剂类别耐性的最高平均盛行率(P<0.000)。CA-MRSA分离株的耐性次高(P<0.007)，接着是甲氧西林敏感性
葡萄球菌(P<0.037)，如上表11中所示。苯唑西林耐性在分别仅80.00％和10.00％的HA-
MRSA和CA-MRSA分离株中表达。头孢替坦耐性在分别80.00％和20.00％的HA-MRSA和CA-
MRSA分离株中表达。虽然苯唑西林和头孢替坦在检测MRSA的能力方面无显著性差异(P>
0.05)，但与纸片扩散法相比时，使用mecA PCR时检测显著改善(P<0.013)。大部分HA-MRSA
分离株表达对阿莫西林-克拉维酸、头孢替坦、头孢氨苄、克林霉素、红霉素、苯唑西林和青
霉素-G的耐性，而大部分CA-MRSA分离株仅对克林霉素、红霉素和青霉素-G具有耐性。所有
测试分离株均不具有万古霉素耐性。总体说来，最盛行耐性表型为青霉素-G(83.33％)、红
霉素(73.33％)和克林霉素(43.33％)，而仅单独一个分离株(3.33％)具有对三甲氧苄二氨
嘧啶-磺胺甲噁唑和甲哌利福霉素的耐性。

[0493] mec基因复合物相互作用

[0494] 所有属于mec基因复合物A的MRSA分离株均表达出对苯唑西林和头孢替坦二者的耐性，如下表12中所示。然而，仅20％的mec基因复合物B MRSA分离株对这些抗微生物剂具
有表型耐性。在属于mec基因复合物C2的MRSA分离株中，仅单独一个分离株表达甲氧西林和
苯唑西林耐性，仅两个分离株表达头孢替坦耐性。未归类MRSA分离株表达完全的苯唑西林
和头孢替坦耐性。

[0495] 表12：根据实施例4的归类为耐甲氧西林的20个金黄色葡萄球菌菌株中鉴定的mec基因复合物的数量和百分比

[0496]

[0497]

[0498] 图中示出了表达苯唑西林和头孢替坦表型耐性的各个葡萄球菌盒染色体(SCCmec)复合物和类型，以及实时mecA状态和得自mecA基因实时PCR的解链温度分析的平
均负dF/dT峰值。

[0499] mecA实时PCR负导数图–dF/dT的解链温度峰值在mec基因复合物之间存在差异(P<0.003)(图9。平均起来，mec基因复合物B和未归类的分离株显示出比其它SCCmec类型更高
的解链温度峰值(P<0.012)。

[0500] 供试抗微生物剂的物理性质和得自初步类似物测试的最低抑制浓度结果的比较

[0501] 基于得自初步研究的溶解性和抗微生物活性选择供试抗微生物剂。当将NCL812溶于阳离子调节的Mueller-Hinton II肉汤时观察到了浑浊的沉淀，如下表13中所示。在对每
种合成的类似物进行初步结构-活性测试后，据发现，NCL812在本研究中具有一致的MIC值。

[0502] 表13：根据实施例4的抗菌剂NCL812和β-内酰胺抗菌剂氨苄青霉素的特性。

[0503]

[0504] 详细示出了初步研究所确定的和在本研究期间所确定的抗菌剂在二甲基亚砜(DMSO)中的溶解度、在阳离子调节Mueller-Hinton II肉汤(CAMHB)中的溶解度以及对耐甲
氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的平均最小抑制浓度(MIC)(μg/ml，24h时)。ATCC 49775；甲
氧西林敏感金黄色葡萄球菌分离株和ATCC对照菌株。MRSA580；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
分离株#580。MRSA698；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分离株#698。

[0505] 体外抗菌活性：最小抑制浓度

[0506] 先导化合物NCL812(4和4-8μg/mL)的MIC50和MIC90值在下表14中示出。MIC值随金黄色葡萄球菌分类而不同(敏感、HA或CA-MRSA)(P<0.005)。在很多情况下，与HA-MRSA相比
时，NCL812对CA-MRSA和甲氧西林敏感葡萄球菌的活性显著增加一个稀释度(分别地，P<
0.002和P<0.020)，然而甲氧西林敏感葡萄球菌和CA-MRSA的MIC值之间无显著性差异(P>
0.05)。ATCC对照菌株所得的氨苄青霉素MIC值在基于CLSI指导原则所预期的正常范围内。

[0507] 表14：根据实施例4的新型抗菌剂NCL812和β-内酰胺抗菌剂氨苄青霉素对金黄色葡萄球菌临床分离株的体外活性。

[0508]

[0509]

[0510] HA-MRSA；医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。CA-MRSA；社区相关性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。MIC；最小抑制浓度(μg/ml)。MBC；最小杀菌浓度(μg/ml)。MIC/MBC范围；
所有分离株的最小和最大MIC/MBC。MIC/MBC50；抑制50％分离株所处的MIC/MBC。MIC/MBC90；
抑制90％分离株所处的MIC/MBC

[0511] 体外抗菌活性：最小杀菌浓度

[0512] 从NCL812确定的MBC分别相当于93.33％和83.33％金黄色葡萄球菌分离株的MIC(表14)。在所有其余情况中，MBC高一个稀释度。对于NCL812，MBC分别在2-8μg/mL和4-16μg/
mL的范围内。

[0513] 时间-杀菌研究

[0514] 与ATCC 49775的比浊生长曲线相比，在微量稀释测定中，当ATCC 49775接种至补充NCL812的阳离子调节Mueller Hinton II肉汤时，1×和4×MIC未观察到可见细菌生长
(分别地，P<0.033和P<0.038)(图10)。

[0515] 当用10mL宏量稀释测定法分析时，与生长对照相比，补充1×和4×MIC抗微生物剂并接种ATCC 49775的肉汤显示出两种NCL812浓度的存活计数均显著减少(0.000(图11)。另外，NCL812的各浓度的时间-杀菌曲线无明显差异(P>0.05)。两种浓度均保持杀
菌性，直到抗微生物剂加入后大约8-12h，此时观察到细菌再生长。观察到从8至24h NCL812
杀菌活性的显著变化。虽然NCL812到24h时不再具有杀菌性，但1×MIC观察到的存活计数仍
然显著低于得自无补充的肉汤的那些(P<0.046)。

[0516] 概括地说，上述实施例显示出对甲氧西林敏感葡萄球菌和MRSA二者的杀菌活性。MIC和MBC值在整个分离株的选择中一贯较低(MIC范围2-8μg/mL)。NCL812对常见的多药物耐
性MRSA分离株保持良好的体外抗微生物活性，这些分离株包括传染性UK EMRSA-15、EMRSA-
16和EMRSA-17、爱尔兰EMRSA-1、AUS EMRSA-3、NY/JAPAN HA-MRSA和优势CA-MRSA克隆。
NCL812还对一株最初鉴定为金黄色葡萄球菌菌株的伪中间葡萄球菌分离株具有活性。

[0517] 初步测试暗示，NCL812靶向金黄色葡萄球菌细胞膜，导致重要代谢物例如ATP的剂量依赖性释放。细菌膜双层或构成细菌中膜功能的蛋白质的破坏是自然界中普遍存在的许
多大型抗微生物剂的靶标，所述抗微生物剂包括糖脂、脂肽、脂蛋白、脂肪酸、中性脂质、磷
脂和生物表面活性剂。虽然NCL812是低分子量(≤500Da)合成化合物，但其看起来以靶向革
兰氏阳性细胞膜的其它抗微生物剂(包括高分子量环状脂缩肽(lipodepsipeptide)抗微生
物剂达托霉素或化学结构目前未知的低分子量喹诺酮衍生HT61)类似的方式发挥杀菌活
性。由于存在外部脂双层膜，这些亲脂抗菌剂中的许多也对革兰氏阴性微生物无效，该脂双
层膜包含狭窄的孔蛋白通道，减少了一些化合物向细胞的净渗透。

[0518] 即使在低浓度下NCL812也不溶于微生物介质可反映该抗微生物剂的两亲和低聚性质，并暗示真实MIC远低于观测值，可能的是，NCL812仅在溶液中才具有生物活性。在时
间-杀菌研究中，NCL812发挥了快速ATCC 49775体外杀菌活性。同样，这些发现与细胞膜功
能抑制剂诸如达托霉素和HT61的时间-杀菌曲线一致。

[0519] 重要的是，该抗微生物剂的表观体外半衰期短导致抗微生物剂加入后12h观察到细菌再生长。这暗示如果活细菌群体在抗微生物剂失活之前的NCL812初始暴露中存活，则
将出现细菌再生长。这些研究中排除了NCL812耐性发展，因为在收集、洗涤和MIC测试后，测
试细菌保持了对NCL812的敏感性。虽然NCL812的表观体外半衰期短可为未来体内应用所期
望的特性，但这并非暗示在未来体内安全和功效实验中每8h应施用NCL812以保持足够的全
身浓度，虽然从时间-杀菌曲线可观察到NCL化合物系列是浓度依赖性而非时间依赖性抗微
生物剂。

[0520] 为克服甲氧西林敏感表型，将纸片扩散温育时间从24h延长至48h，以补偿mecR基因的去抑制减缓。虽然延长温育的效果未经检验，并且MRSA分离株的小样本量妨碍了对mec
复合物相互作用的进一步研究；但在该研究中与确认分离株的mecA状态的表型方法相比，
基因技术的灵敏度显著提高。虽然基因技术并非总是用作检测MRSA的日常方法，但实时PCR
鉴定葡萄球菌属物种分离株中mecA基因的存在仍然是诊断的金标准。

[0521] 实施例5：肺炎链球菌的新型抗微生物剂的体外药效动力学。

[0522] 材料和方法

[0523] 肺炎球菌的抗微生物剂敏感性

[0524] 肺炎球菌菌株和生长条件

[0525] 包括六个经表征的实验室菌株和14个临床分离株的二十个肺炎球菌分离株是本研究的对象(P9/6A、P21/3、WCH16/6A、WCH43/4、WCH46/4、WCH57/8、WCH77/5、WCH86/4、
WCH89/7、WCH92/4、WCH137/6A、WCH158/19F、WCH184/19F和WCH211/11；分别为菌株/血清
型)。用于该实施例中的其它分离株为：A66.1/3(Francis等,2001.Infect Immun.69:3350-
2358)、EF3030/19F(Briles等,2003J.Infec.Diseases.188:339-348)、L82016/6B(Briles
等,2000Infect Immun.68:796-800)、TIGR4/4(Tettlelin等,2001Science 293:498-506)
和WU2/3(Briles等,1981J.Exp Med.153:694-705)。有关用于本研究的分离株的表型特征，
参见下表15。将国家标准菌库(NCTC)对照菌株D39(Avery等,2010Nature Reviews 
Microbiology 8:260-271)用作所有MIC和MBC测定的生长对照。D39之后被指定用于杀菌动
力学、耐性点测定和透射电子显微镜(TEM)研究，因为有大量证据证明其为具有确定的体内
致病机理(表15)、显示出一致的NCL812MIC和MBC的实验室菌株。

[0526] 表15：根据实施例5的肺炎球菌分离株及其表型描述。

[0527]

[0528] ND＝未确定

[0529] 对于所有体外测定，将新鲜的肺炎球菌分离株在马血琼脂(HBA)平板上(39g/L Columbia血琼脂基础[Oxoid]5％[v/v]脱纤维马血[Oxoid]，37℃，补充5％CO2)生长过夜
(O/N)。将含5％脱纤维绵羊血(MHSBA Roseworthy Media and Blood Service)的Mueller-
Hinton血琼脂用于圆盘扩散分析，如临床和实验室标准协会(CLSI)标准所指导。肺炎球菌
在由4％裂解马血(LHB)和阳离子调节Mueller Hinton肉汤(CAHMB,[Difco])组成的肉汤中
在37℃下补充5％CO2例行生长。马血清肉汤(HSB，10％(v/v)的溶于营养肉汤[10g/L蛋白
胨、10g/L Lab Lemco(Oxiod)和5g/L NaCl]中的供体马血清)还用于一些MIC测定。将分离
株在-80℃保存在HSB中。

[0530] 抗生素原液和试剂

[0531] 以干粉形式提供NCL812。将总共256mg分配于10mL100％DMSO中，制成25.6mg/mL的原液，然后在CAHMB中1:100稀释，制成256μg/mL的最终工作原液。氨苄青霉素干粉得自
Sigma A0166。将25.6mg/mL原液在盐水中1:100稀释，1:4、1:20以及最终1:16溶于CAMHB中，
制成0.18μg/mL的最终工作原液。红霉素购自Sigma Aldrich，氯化胆碱得自Roche 
Diagnostics。将二十微升0.05μg/mL红霉素在4.980mL CAMHB中1:25稀释，得到0.2μg/mL的
最终工作原液。将氯化胆碱(0.5％)加入4％LHB:CAMHB，用于特定的杀菌动力学测定。

[0532] 确定肺炎球菌分离株的抗微生物剂敏感性

[0533] 分离株对12种不同抗微生物剂的敏感性(表16)通过CLSI和欧洲抗微生物剂敏感性测试委员会测试(European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing,
EUCAST)方法确定。抗微生物剂根据CLSI和EUCAST指导原则选择。将标准化细菌悬浮液使用
无菌棉拭子涂到MHSBA上。将肺炎链球菌的细菌悬浮液形式使用分光光度计标准化至OD600
在0.08和0.1之间，然后1:20稀释。从O/N马血琼脂平板挑取细菌菌落。为确保1:20细菌悬浮
液的纯度，将50μL涂布接种至马血琼脂上并在37℃下通过5％CO2温育O/N。计算CFU并与初
始平板计数比较。使用圆盘分配器(购自Oxoid)根据CLSI标准放置抗生素圆盘(购自Sigma 
Aldrich)。将MHSBA平板在37℃下在5％CO2中温育16h–24h。使用尺子测量自然光反射生长
的完整抑菌区三次，近似到毫米，并以众数表示每个分离株的直径。肺炎球菌分离株通过
CLSI标准和质量控制(QC)范围归类为敏感、中敏(I)或耐性(R)(表16)。

[0534] 表16：根据实施例5的用于纸片扩散分析的抗菌剂与抑菌区直径解释标准(mm)。

[0535]

[0536] °除了环丙沙星对肺炎链球菌外，其它抗微生物剂的抑菌区直径均通过CLSI标准测定。

[0537] *环丙沙星对肺炎链球菌的抗微生物剂敏感性的抑菌区直径通过EUCAST测定。

[0538] NCL812MIC50、MIC90、MIC范围和MBC50、MBC90MBC范围的测定

[0539] 列于表15中的所有分离株的NCL812的MIC通过使用96孔微量滴定板在37℃下在5％CO2中温育24h后，测量作为细菌生长指标的OD600(Spectramax分光光度计，Molecular 
Devices Corporation)而确定。[微量肉汤稀释和96孔板通过以下方法准备：使用多道移液
管将90μL 4％LHB:CAMHB等分至所有孔中。以1:2的稀释比例，在滴定板上向下，非系列稀释
90μL抗微生物剂工作原液。在规划96孔板的安排时考虑阴性肉汤对照和稀释对照。]然后将
10μL细菌悬浮液加入96孔板的适当孔中。每个测定包括适当的阳性(无抗微生物剂)、阴性
(无抗微生物剂或细菌)和阴性稀释(抗微生物剂和肉汤的系列稀释对照)对照。杀菌动力学
测定的MBC和平板计数通过从96孔微量滴定板的每个孔将20μL等分至HBA上，并在37℃下通
过5％CO2温育来确定。考虑到稀释因素，MBC通过肺炎链球菌的99.95％抑制来确定。MIC和
MBC测定四次，以众数作为代表值。MIC50、MIC90和MIC范围以及MBC50、MBC90和MBC范围根据
CLSI标准确定。MIC50和MIC90或MBC50和MBC90由最小浓度定义，当分离株的所有MIC和MBC从小
到大排列时，其分别抑制分离株总量的50％和90％。

[0540] 使用菌株D39进行NCL812的微量肉汤稀释时间杀菌研究

[0541] 将细菌悬浮液一式三份加入包含NCL812的96孔微量滴定板，起始浓度为128μg/mL，按顺序1:2系列稀释至0.25μg/mL的浓度。中值生长值减去阴性稀释对照得到合适的总
细菌生成量指标。将96孔板在37℃下在5％CO2中温育，前12h每2h读取一次OD600读数，然后
在24h和48h读取最终读数。为进一步补充该数据，进行其中每半小时间隔使用分光光度计
(Spectramax分光光度计，Molecular Devices Corporation)从96孔板自动读数14h的单独
实验，以确认原始微量肉汤稀释研究观察到的生长曲线趋势。

[0542] 使用菌株D39进行NCL812的MBC时间杀菌研究

[0543] MBC杀菌动力学测定涉及三个96孔微量滴定板的准备。在特定时间点，在HBA上37℃下5％CO2中温育后，提供得自这些板的等分试样的存活计数，并且在生长24h后确定MBC。

[0544] 使用NCL812的D39宏量肉汤稀释时间杀菌研究

[0545] 细菌悬浮液和抗生素工作原液如上所述制备。[对于制备宏量肉汤稀释液，向每根20mL管加入9mL 4％LHB:CAMHB。当加入一根管中时，1:2稀释9mL抗微生物剂工作原液，然后
从高浓度至低浓度抗微生物剂向下系列稀释。将1mL肺炎链球菌细菌悬浮液加入适当的管
中，包括阳性对照。将管在37℃下通过5％CO2温育，前12h每10min用手轻轻倾斜NCL812处理
的管。在生长的前12h期间每2-3h然后在24h和48h，将50μL各细菌悬浮液涂布接种到HBA上，
并在37℃下通过5％CO2温育16-24h。]

[0546] 下表17指出了用于各抗微生物剂的浓度。培养物在37℃下在5％CO2中温育，前12h每10min用手轻轻倾斜。在37℃下在5％CO2中温育24h后读取每个浓度的50μL等分试样的存
活计数。在特定时间点使用pH试纸测量每个样品的pH。当计数超过1000个菌落/平板时，定
义为汇合生长。杀菌效果定义为在24h针对每个浓度测得的初始细胞悬浮液降低1000倍
(99.9％)。

[0547] 表17：根据实施例5的用于宏量肉汤稀释测定的抗菌剂。

[0548]

[0549] NCL812的耐性点测试

[0550] 宏量肉汤稀释样如上所述制备。将菌株D39的肉汤培养物(10mL)在存在2μg/mL和4μg/mL NCL812以及0.022μg/mL氨苄青霉素的情况下在37℃下在5％CO2中温育6h。将样品在
101.45×g相对离心力(RCF)下离心10min，并在50mL磷酸盐缓冲盐水(PBS)中洗涤两次，以
移除任何残留抗微生物剂和/或细菌终产物和培养基。重悬洗涤后的细菌并进行MIC测定。

[0551] NCL812对D39细胞膜超微结构的影响

[0552] 透射电子显微镜法

[0553] 细胞膜的外观形态和形态测定分析使用透射电子显微镜法(TEM)测定。D39的细菌悬浮液和10mL培养物如前所述制备。将样品在37℃下在5％CO2中温育，每10min用手轻轻倾
斜培养物。使培养物暴露至1μg/mL、4μg/mL或16μg/mL NCL812，并在6或12h以101.45×g的
RCF离心20min收集，在50mL PBS中洗涤两次。TEM工作的关键时间点通过分析杀菌动力学研
究生成的生长曲线趋势而确定。将样品重悬于包含20％甘油的PBS中，并保存于-80℃直到
需要时。在固定前，通过离心移除20％甘油，在冰上用50mL PBS洗涤三次。

[0554] 将样品用先前检验肺炎链球菌细胞壁超微结构的研究确定的修改方案固定(Hammerschmidt,S.等,2005.Infect Immun，73:4653-4667)。基于醋酸赖氨酸的甲醛-戊二
醛钌红-锇固定程序涉及将细菌沉淀用包含2％甲醛、2.5％戊二醛、0.075％钌红和0.075M
醋酸赖氨酸的卡可酸盐缓冲溶液固定1h。在用含有0.075％钌红的卡可酸盐缓冲液洗涤三
次后，在包含2％甲醛、2.5％戊二醛和0.075％钌红的卡可酸盐缓冲溶液中进行1.5h的第二
次固定。随后用包含0.075％钌红的卡可酸盐缓冲液洗涤细胞三次，并使用溶于包含
0.075％钌红的卡可酸盐的1％四氧化锇最终固定1h。然后用仅包含0.075％钌红的卡可酸
盐缓冲液洗涤样品三次。

[0555] 样品使用梯度系列乙醇(70％、90％、95％和100％)洗涤和脱水10-20min，每步两次。将样品用溶于100％乙醇的50:50LR白树脂渗透1h，随后用100％LR白树脂洗涤1h，第三
次更换100％LR白树脂保存O/N，以确保树脂足量渗透。然后将样品包埋至新鲜的LR白树脂
中，在50℃下温育48h。使用玻璃刀切成1μm切片，用甲苯胺蓝染色，在光学显微镜下放大400
倍查看，以鉴定存在染色肺炎球菌。然后使用金刚石刀将至少四块超薄切片切成90nm，并置
于点阵网格上，每格一块切片。然后用乙酸双氧铀和柠檬酸铅对超薄切片间隔5min交替染
色，然后在每次暴露之间用蒸馏水洗涤三次。然后将染色切片置于网格上，并在Philips 
CM100透射电子显微镜上在放大25000与130000倍之间查看。获得130000倍放大率的图像并
使用analySIS[Olympus Soft Imaging Systems]分析。

[0556] 统计分析

[0557] 使用适用于Windows的统计程序GraphPad Prism(第5版，GraphPad Software Inc.)进行统计分析。对于生长曲线，所示数据为每个数据点的平均值和均值标准误差
(SEM)(以误差条表示)，但宏量肉汤稀释研究除外，其中由于该测定涉及高成本而不能得到
多次平行测定结果。进行了双尾、非配对t-检验。

[0558] 结果

[0559] 肺炎链球菌中NCL812的药效动力学

[0560] 20个肺炎链球菌分离株的质量控制圆盘扩散分析

[0561] 虽然用于圆盘扩散分析的十二种抗微生物剂中的九种通过EUCAST建立了QC范围，但阿莫西林-克拉维酸盐、克拉霉素和克林霉素的QC范围未确定(表18和表19)。WCH16和
WCH184均对至少两种抗微生物剂具有耐性，而EF3030和WCH137分别为三甲氧苄二氨嘧啶–
磺胺甲噁唑中敏和耐性(表19)。其余十六个分离株对所有十二种抗微生物剂敏感。确认了
每个分离株的氨苄青霉素敏感性，使氨苄青霉素可在后续微量肉汤稀释测定中用作阳性对
照(表18)。

[0562]

[0563]

[0564] NCL812和NCL062在不同培养基中的溶解性和活性

[0565] NCL812在视觉上看起来在100％DMSO中具有比NCL062更高的溶解性，仅当进一步稀释到CAMHB或PBS中时才产生浑浊(表20)。虽然NCL062的CAMHB稀释剂通过视觉检查看起
来是透明的(表20)，但采用CAMHB对NCL062的进一步研究导致：与采用DMSO稀释剂的生长相
比，在六个肺炎链球菌分离株的微量肉汤稀释测定中完全汇合(表21和表22)。

[0566] 表20：根据实施例5的NCL812和NCL062及氨苄青霉素溶解性的视觉分析。

[0567]

[0568] 表21：根据实施例5的NCL062对各肺炎球菌分离株的各个MIC

[0569]NCL062 MIC(μg.mL-1) MBC(μg.mL-1)
D39 2 4
EF3030 16 16
A66.1 8 32
TIGR4 8 8
WU2 16 64
L82016 8 32
P9 4 16
P21 4 4
WCH158 16 16
WCH89 4 4
WCH57 4 8
WCH77 8 8
WCH46 32 32
WCH86 4 8
WCH137 2 4
WCH184 16 16
WCH16 32 32
WCH43 2 4
WCH92 8 8
WCH211 2 4

[0570] 表22：根据实施例5使用微量肉汤稀释以获得作为预测指标的MIC时NCL812和NCL062在不同培养基中的活性差异。

[0571]

[0572] 在NCL812和NCL062的MIC测定中，使用10％HSB(220mL马血清在180mL Lemco营养肉汤中过滤成10％)进行肺炎链球菌菌株D39的生长，结果NCL812和NCL062处理的D39的MIC
增加三倍(表23)，而阳性氨苄青霉素对照增加两倍。对于预先准备的96孔微量滴定板的不
同保存条件，D39的MIC无明显变化(表24)。在宏量肉汤稀释期间，与适当的对照相比，培养
基的pH不变(图12)。

[0573] 表23：使用马血补充肉汤在NCL812和NCL062的MIC测定中肺炎链球菌菌株D39的生长

[0574]

[0575] 表24：根据实施例5的为微量肉汤稀释准备的微量滴定板的保存不改变D39的MIC。

[0576]

[0577] 肺炎链球菌的NCL812和NCL062体外敏感性测定

[0578] NCL812和NCL062MIC50、MIC90、MIC范围测定

[0579] NCL812表现出MIC50和MIC90，MIC90为8μg/mL，以及4-8μg/mL的MIC范围，而对于NCL062，这些值更高且更多变(表25和表26)。氨苄青霉素的MIC与最近公布的使用微量肉汤
稀释作为肺炎球菌分离株中抗微生物剂耐性端值的结果相当，从而确认了NCL812和NCL062
的所得MIC的准确性(表25至26和图13)。

[0580] 表25：根据实施例5的用NCL812、NCL062和氨苄青霉素处理的所有分离株的MIC50、MIC90、MBC50、MBC90和MIC范围。

[0581]  NCL812(μg/mL) NCL062(μg/mL) 氨苄青霉素(μg/mL)
MIC50 8 8 0.023
MIC90 8 32 0.023
MIC范围 4-8 2-32 0.011-0.09
MBC50 8 16 0.023
MBC90 8 32 0.023
MBC范围 4-8 4-64 0.011-0.09

[0582] 表26：根据实施例5的NCL812对各肺炎球菌分离株的MIC。

[0583]

[0584] NCL812和NCL062MBC50、MBC90、MBC范围的测定

[0585] 针对所有二十个分离株，测定了NCL812和氨苄青霉素的最小杀菌浓度(分别为MBC50、MBC90和MBC范围)(表25至表26)。与NCL062相比，NCL812的MBC50、MBC90和MBC范围更低
且更一致(表25)。

[0586] NCL812和NCL062处理的D39的微量肉汤稀释时间杀菌研究

[0587] 暴露于亚抑菌浓度(≤2μg/ml)的NCL812或NCL062的D39在48h的时间期内与未暴露的对照的生长相似(图13和14。较高浓度的NCL812和NCL062(≥16μg/mL)使得48h无细菌
生长(图14和15。这些生长特性使用Spectramax分光光度计通过微量肉汤杀菌动力学研究
而验证，所述分光光度计测量14h内每半小时间隔NCL812、NCL062和氨苄青霉素对应的生长
(以OD600表示)(图15和17。对于NCL812处理的D39和NCL062处理的D39，指数生长期开始之间
存在大约六小时的差异(图13、14、18和19)。

[0588] 将NCL812或NCL062处理的D39的生长与氨苄青霉素或红霉素处理的D39在48h内进行比较(图20和21)。氨苄青霉素处理的D39表现出与暴露至NCL812或NCL062的D39在48h内
类似的生长(图20)。红霉素处理的D39产生与NCL812和NCL062截然不同的生长曲线，其中观
察到各浓度之间的生长差异较大(图21)。在48h时间期内将5％氯化胆碱加入培养基的结果
是，与阳性和生长对照相比，NCL812和NCL062的生长无显著性差异(图22至26)。

[0589] 耐性点测试

[0590] 用≤4μg/mL NCL812处理的D39在6h时进入对数生长期(图13和18)，如四个独立实验所示。在5和6h之间的对NCL812的抗微生物剂耐性可能性通过进一步确定暴露至2μg/mL 
NCL812、4μg/mL NCL812和0.0225μg/mL氨苄青霉素6h的D39MIC进行研究。结果显示与生长
对照和氨苄青霉素相比，暴露至NCL812的所有D39样品的MIC无显著增加(表27)。

[0591] 表27：根据实施例5的暴露至2μg/mL或4μg/mL NCL8126h的D39的MIC。

[0592]

[0593] *D39生长对照：肺炎链球菌菌株D39在4％LHB:CAMHB中生长6小时。

[0594] **D39生长2对照：肺炎链球菌菌株D39在HBA上生长O/N，重悬于盐水中(0.1OD600)并在无菌盐水中1/20稀释。

[0595] 通过测量特定时间点的相对MBC进行微量肉汤稀释

[0596] 相对MBC在特定时间间隔使用肉汤稀释测定法测定，对于NCL812和NCL062(图27)以及对照抗微生物剂氨苄青霉素和红霉素温育48h(图20和21)。测定了氨苄青霉素和红霉
素对D39的MIC(表26和28)。描述了氨苄青霉素和红霉素对应的生长的对比特征(图28和
29)。氨苄青霉素和红霉素显示出细菌的时间依赖性减少。NCL062表现出快速的杀菌作用，
立即的(在施用后的前10min内)MBC为8μg/mL(图27)。虽然在5与12h之间NCL062的MBC存在
不一致，但NCL062在24与48h之间维持了恒定的杀菌浓度(4μg/mL)。NCL812表现出快速杀菌
作用，其证据是MBC在5h内降低约3倍(图27)。对于NCL812在整个48h内杀菌浓度保持一致(8
μg/mL)。

[0597] 表28：根据实施例5的红霉素对D39的MIC和MBC。

[0598]

[0599] 采用NCL812和NCL062的D39宏量肉汤稀释时间杀菌研究

[0600] 每个时间点的存活计数以NCL812(图30)和氨苄青霉素(图31)的log10CFU/mL减少表示。对于未暴露的对照和2μg/mL NCL812观察到一致的汇合生长(通过2×104CFU的限值
确定)。通过在3h内CFU降低4log10观察到了128μg/mL NCL812的完整杀菌活性(定义为CFU降
低3log10)，并且16μg/mL和64μg/mL NCL812之间的浓度对8小时内消除细菌生长有效(图
30)。4μg/mL和8μg/mL NCL812看起来在暴露后11h时失活，因为观察到该时间点后菌株D39
生长增加(图20和31)。氨苄青霉素处理的菌株D39的存活计数通过显示出在48h内恒定减弱
的时间依赖性杀灭而展示出该特定测定法的一致性(图31)。

[0601] 透射电子显微镜法

[0602] 形态测定分析揭示，与生长对照相比，暴露至16μg/mL NCL8126h后菌株D39的细胞膜显著改变。由于每个切片缺少可用的细菌细胞，4μg/mL处理的样品以及12小时培养物不
考虑用于形态测定分析。与未处理的样品(4.35±0.24nm)相比，处理的样品具有显著更厚
的细胞膜(6.43±0.29nm)(p<0.0001)(图32和29)。与未处理的样品(3.91±0.14nm)相比，
16μg/mL NCL812处理的D39的周质空间(细胞膜和细胞壁之间的胞内空间)显著更宽(4.54
±0.096nm)(p<0.001)(图29和33)。

[0603] 表29：根据实施例5的用NCL812处理6小时的D39的超结构的形态测定研究。

[0604]

[0605]

[0606] 概括地说，对于肺炎链球菌菌株收集物，NCL812生成高度一致的MIC和等同的MBC，确认其对该生物体具有杀菌性。在测量48h时间期内相对MBC的杀菌动力学实验中，D39初始
暴露至NCL8126h后得到一致的杀菌效果。

[0607] 杀菌活性的该表现首先在肺炎链球菌中观察到。这表示NCL812在体外对肺炎球菌有效。

[0608] 在血液、血清或肉汤中，组分之间的竞争性结合降低了NCL的抗微生物活性。这反映在不同肉汤类型和稀释剂之间观察到的MIC增加。在完成这些研究后，最近的独立研究确
认了NCL812在PBS中沉淀，并且报道其在100％DMSO中初始稀释后，完全溶于包含4％DMSO的
水中。水溶性NCL812将大大提高体内生物利用率和血液或血清蛋白质之间的负相互作用。

[0609] 根据该研究的发现，NCL812表现出对肺炎链球菌的作用机制不同于β-内酰胺或大环内酯类别，因为其看起来表现出浓度依赖性杀菌活性，而不是时间依赖性性质。确定体内
NCL812的最大药代动力学血清浓度将有助于确认其浓度依赖性药效动力学活性。此外，将
氯化胆碱加入培养基确认了：NCL作用机制与对细胞壁胆碱结合蛋白的亲和力无关，因此可
能与细胞壁无关。

[0610] 16μg/mL NCL812处理6h的D39的细胞膜和周质空间的形态测定分析显示，与对照样品相比，处理样品中细胞膜和周质空间更大。膜尺寸的明显增加可能是由于细胞膜下电
子密集胞内材料的积聚。周质空间尺寸的增加可能是由于可能因去极化或ATP抑制而导致
的细胞膜破裂。NCL812的作用机制可能不是钙依赖性的，因为看起来，电镜显微图中观察到
NCL812和脂双层的钙通道抑制剂钌红之间无竞争性结合。

[0611] 最后，该体外研究显示NCL812具有许多所需的特性，作为看起来靶向肺炎链球菌细胞膜的快速作用性浓度依赖性杀菌抗微生物剂。这些特性是治疗急性肺炎球菌感染所需
的。由于NCL812可具有靶向细胞膜的作用机制，其作用比时间依赖性抗微生物剂例如β-内
酰胺和大环内酯类迅速得多，并且可能比具有胞内靶标的其它杀菌浓度依赖性抗微生物剂
例如氟喹诺酮类更有效。

[0612] 实施例6：澳大利亚甲氧西林敏感和耐甲氧西林伪中间葡萄球菌分离株的表征和新型抗葡萄球菌化合物的初步体外功效

[0613] 材料和方法

[0614] 甲氧西林敏感伪中间葡萄球菌(MSSP)和耐甲氧西林伪中间葡萄球菌(MRSP)的样品收集和鉴定

[0615] 从狗获得总共23个伪中间葡萄球菌分离株(表30)。

[0616]

[0617]

[0618] 该研究收集十个甲氧西林敏感和13个耐甲氧西林伪中间葡萄球菌。分离株根据体外苯唑西林耐性在表型上归类为耐甲氧西林，并且根据标准程序确定遗传学上存在mecA基
因。

[0619] 进行了使用圆盘扩散技术的苯唑西林和头孢西丁敏感性测试，和Epsilometer测试。mecA基因的鉴定使用聚合酶链式反应(PCR)进行

[0620] 对23个伪中间葡萄球菌分离株进行以下抗微生物剂的CLSI圆盘扩散敏感性测试：青霉素、阿莫西林、红霉素、庆大霉素、克林霉素、环丙沙星、头孢氨苄、氯霉素、四环素、土霉
素、万古霉素、头孢替坦、莫西沙星和利福平。

[0621] NCL812的最小抑制浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)测试使用CLSI方法进行，并且包括氨苄青霉素作为对照。然后对所有23个分离株测试抗葡萄球菌化合物，并根据标准方
案测定最小抑制浓度(MIC)。在确定MIC后，进行最小杀菌浓度测试以确定这些化合物具有
抑菌性还是杀菌性。

[0622] 结果

[0623] mecA基因存在于13个MRSP分离株中，在10个MSSP中呈阴性(表30和31)。根据纸片扩散(≤17mm)和E-测试MIC(≥0.5mg/L)，所有MRSP分离株具有苯唑西林耐性。

[0624]

[0625]

[0626] 当将头孢西丁耐性断点设为≤24mm时，所测试的MRSP分别有3/13(23％)和5/13(38％)对头孢西丁敏感。当将头孢西丁耐性断点设为≤30mm时，所测试的MRSP仅有1/13
(7.7％)为敏感的(表30和31)。

[0627] MRSP分离株对多个抗生素类别具有耐性。在13个MRSP分离株中，所有13个均对利福平敏感。3/13(23％)对氯四环素敏感；10/13(77％)对万古霉素敏感(表30和31)。

[0628] 有趣的是，3/13(23％)的MRSP分离株对阿莫西林敏感；8/13(62％)对头孢噻吩敏感；12/13(92％)对头孢替坦敏感，并且12/13(92％)对莫西沙星敏感(表30和31)。

[0629] 根据MIC，所有23个分离株对NCL812敏感。此外，根据最小杀菌浓度(MBC)，NCL812显示出具有杀菌性。

[0630] NCL812对伪中间葡萄球菌分离株的MIC范围被发现在1μg/mL和4μg/mL之间(表32)。NCL812对伪中间葡萄球菌分离株的MIC50和MIC90被发现分别为2μg/mL和4μg/mL(表
33)。NCL812对伪中间葡萄球菌分离株的MIC众数和MIC范围被发现分别为2μg/mL和1-4μg/
mL(表33)。

[0631] 表32：根据实施例6的NCL812和氨苄青霉素对伪中间葡萄球菌分离株的MIC。

[0632]

[0633]

[0634] 表33：根据实施例6的NCL812对伪中间葡萄球菌分离株的MIC50、MIC90、MIC众数、MIC范围。

[0635]对伪中间葡萄球菌的效力 氨苄青霉素 NCL812
MIC50(μg/ml) 32 2
MIC90(μg/ml) 128 4
MIC众数(μg/ml) 128 2
MIC范围(μg/ml) 0.1-128 1-4

[0636] 耐甲氧西林伪中间葡萄球菌(MRSP)在狗、猫和马中造成的问题越来越多。据报道，在欧洲(ST 71)和北美(ST 68)从狗分离了两种主要MRSP克隆谱系。还有在日本MRSP影响狗
的报道，以及在香港MRSP影响兽医人员的单例报道。

[0637] 在本研究中，使用mecA基因的存在和体外苯唑西林耐性的组合测定MRSP分离株。头孢西丁敏感性已作为苯唑西林的替代品用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。然而，使用针
对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌的人分离株所推荐的解释指导原则
进行头孢西丁圆盘扩散测试在MRSP鉴定中不可靠。Bemis等在2012年已提议≤30mm的头孢
西丁耐性断点＝耐性，≥31的头孢西丁耐性断点＝敏感[Bemis,D.A.,R.D.Jones等.
(2012)."Evaluation of cefoxitin disk diffusion breakpoint for detection of 
methicillin resistance in Staphylococcus pseudintermedius isolates from 
dogs."Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 24(5):964-967]。本研究支
持该断点在预测耐甲氧西林伪中间葡萄球菌中可更可靠。

[0638] MRSP分离株通常对多个抗生素类别具有耐性。因此，对于所有可疑MRSP感染，推荐进行细菌培养和抗生素敏感性测试，以便适当地选择抗生素。本研究需注意的限制是MRSP
分离株对阿莫西林和先锋霉素(头孢噻吩和头孢替坦)的表观体外敏感性。

[0639] NCL812对MSSP和MRSP二者的所有23个分离株有效。大量研究确认了NCL812对伪中间葡萄球菌的有效性，因为其为越来越多的家畜MRSP感染提供了安全的替代抗生素选择。

[0640] 实施例7：NCL812类似物(也称为本发明的化合物)的制备和测试。

[0641] 材料和方法

[0642] NCL812

[0643] 获得了具有960mg/g(即96％)的确定效价的分析级NCL812。将粉末在研究中心在室温下保存在密闭样品容器中，避阳光直射。制备原液(在DMSO中含25.6mg/mL NCL812)的
等分试样(1mL)，保存于-80℃，在使用前立即解冻。

[0644] NCL812类似物的合成和测试

[0645] 使用本领域的标准方法合成了如图1中所确定的类似物NCL001至NCL230。例如，用于制造化合物NCL097、NCL157、NCL179、NCL188、NCL195和NCL196的方法如下：

[0646] NCL 097(2,2'-双[(3,4,5-三羟基苯基)亚甲基]碳亚胺二酰肼盐酸盐)

[0647] 使3,4,5-三羟基苯甲醛(412.0mg，2.673mmol，2.21当量)和N,N′-二氨基胍盐酸盐(152.0mg,1.211mmol)在EtOH(5mL)中的悬浮液在100℃下接受10min的微波辐射(150W)。然
后使反应物冷却到环境温度。收集所得的沉淀，用冷EtOH(5mL)和Et2O(5mL)洗涤，得到作为
浅棕色固体的碳亚胺二酰肼(carbonimidicdihydrazide)(369.0mg,77％)。熔点292℃(分
解)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.06(br s,6H),8.25–8.01(m,4H),6.83(s,4H).13C NMR
+ +
(75MHz,DMSO-d6)δ152.2,149.7,146.2,136.5,123.7,107.4.LRMS(ESI ):361.95[M+1]。

[0648] NCL157(2,2'-双[(2-氨基-4-氯苯基)亚甲基]碳亚胺二酰肼盐酸盐)

[0649] 合成2-氨基-4-氯-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺。向2-氨基-4-氯苯甲酸(5.6691g,33.041mmol)、N,O-二甲基羟胺盐酸盐(5.7504g，58.954mmol，1.78当量)、N-(3-二甲基氨基
丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(7.7925g，40.649mmol，1.23当量)和N-羟基苯并三唑水合
物(5.2371g，38.793mmol(按无水计)，1.17当量)在DMF(100mL)中的溶液加入二异丙基乙胺
(18.0mL，13.4g，104mmol，3.15当量)，将棕色溶液在环境温度下搅拌7h。然后将反应物真空
浓缩，再用1M NaOH(100mL)稀释，用CH2Cl2(3×100mL)萃取。将合并的有机萃取物用1M HCl
(100mL)洗涤，经MgSO4干燥，真空浓缩得到棕色浆液。然后将该油状物在60℃在高真空下进
一步干燥，得到作为棕色浆液的粗Weinreb酰胺(7.021g,99％)，静置时结晶。使用该粗料，
无需进一步纯化。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.24(d,J＝8.4Hz,1H),6.62(d,J＝18Hz,1H),
6.54(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H),4.75(s,2H),3.48(s,3H),3.24(s,3H)。13C NMR(101MHz,
CDCl3)δ169.2,148.4,137.1,130.6,116.6,116.1,115.0,61.1,34.0。

[0650] 合成2-氨基-4-氯苯甲醛。将粗2-氨基-4-氯-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(751.1mg,3.532mmol)分成大约120mg的批，将各批溶于THF(10mL)，冷却到0℃，然后将
LiAlH4(2M的THF溶液，0.5mL)加入各批，将溶液搅拌16h，使反应物达到室温。将反应用饱和
NH4Cl(1mL)猝灭，合并，用饱和NaHCO3(160mL)稀释，再用CHCl3(2×150mL,1×75mL)萃取。将
合并的有机物经MgSO4干燥，真空浓缩得到作为黄色/橙色晶体的粗苯甲醛(463.3mg,
85％)。使用该材料，无需进一步纯化。1H(400MHz,CD3OD)9.77(d,J＝0.7Hz,1H),7.46(d,J＝
8.3Hz,1H),6.83–6.71(m,1H),6.63(dd,J＝8.4,1.9Hz,1H)。13C NMR(101MHz,CD3OD)δ
194.6,153.0,142.5,138.4,118.3,116.8,116.1。

[0651] 合成2,2'-双[(2-氨基-4-氯苯基)亚甲基]碳亚胺二酰肼盐酸盐。使2-氨基-4-氯苯甲醛(128.0mg，0.823mmol，1.78当量)和N,N′-二氨基胍盐酸盐(58.0mg,0.462mmol)在
EtOH(2mL)中的悬浮液在60℃下接受5分钟的微波辐射(100W)。然后真空除去大部分溶剂，
添加EtOH(1mL)，将烧瓶转移到冰箱以实现结晶。收集所得的沉淀，用EtOH(1mL)洗涤，得到
作为浅黄色固体的碳亚胺二酰肼(21.0mg,13％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.71(br s,
2H),8.40(s,2H),8.37(s,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,2H),6.87(d,J＝2.0Hz,2H),6.73(br s,
4H),6.59(dd,J＝8.3,2.0Hz,2H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ152.1,151.5,148.9,136.0,
134.7,115.1,114.5,112.8。

[0652] NCL179(4,6-双(2-((E)-4-氯苯亚甲基)肼基)嘧啶-2-胺)

[0653] 将2-氨基-4,6-二肼基嘧啶(67.3mg,0.434mmol)和4-氯苯甲醛(198.8mg，1.414mmol，3.26当量)在EtOH(25mL)中的悬浮液回流加热16h。之后，撤去冷凝器，将溶液浓
缩至大约1mL，趁热过滤所得的沉淀，用Et2O(10mL)洗涤，得到作为灰白色无定形粉末的氨
1
基嘧啶(42.8mg,25％)。熔点275℃(分解)。H NMR(400MHz,DMSO)δ10.70(s,2H),8.02(s,
2H),7.67(d,J＝8.4Hz,4H),7.52(d,J＝8.4Hz,4H),6.28(s,1H),5.85(s,2H)。13C NMR
(101MHz,DMSO)δ162.8,162.6,138.8,134.1,133.1,128.9,127.6,73.5。

[0654] NCL188((E)-2-(1-(4-氯苯基)亚戊基)肼-1-甲脒盐酸盐)

[0655] 将1-(4-氯苯基)戊酮(1.8319g，9.3146mmol，1.95当量)和氨基胍盐酸盐(527.6mg,4.773mmol)在EtOH(15mL)中的悬浮液在65℃加热16h。将粗料冷却到环境温度，
用Et2O(60mL)稀释，再冷却到0℃以沉淀未反应的氨基胍盐酸盐(174.5mg)。然后将母液真
空浓缩，将残余物溶于Et2O(20mL)。再将溶液煮沸，添加己烷(10mL)，得到作为膏状固体的
甲脒。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.54(s,1H),7.99(d,J＝8.7Hz,2H),7.90(s,3H),7.47(d,J
＝8.6Hz,2H),2.91–2.82(m,2H),1.48–1.32(m,4H),0.89–0.84(m,3H)。13C NMR(101MHz,
DMSO)δ156.2,153.8,134.8,134.4,128.7,128.4,28.1,26.6,22.0,13.8

[0656] NCL195(4,6-双(2-((E)-4-甲基苯亚甲基)肼基)嘧啶-2-胺)

[0657] 将2-氨基-4,6-二肼基嘧啶(58.9mg,0.380mmol)和4-甲基苯甲醛(0.10mL，100mg，0.832mmol，2.19当量)在EtOH(4mL)中的悬浮液回流加热16h。将反应混合物冷却到环境温
度，收集丸状沉淀，用Et2O(20mL)洗涤。然后将“丸”压碎，将固体进一步用Et2O(10mL)洗涤，
得到作为白色“蓬松”粉末的嘧啶(85.8mg,63％)。熔点274-276℃。1H NMR(400MHz,DMSO)δ
10.51(s,2H),8.00(s,2H),7.54(d,J＝8.0Hz,4H),7.26(d,J＝7.9Hz,4H),6.26(s,1H),
5.77(s,2H),2.34(s,6H)。13C NMR(101MHz,DMSO)δ162.8,162.6,140.1,138.4,132.5,
129.4,126.0,73.3,21.0。

[0658] NCL196(4,4'-((1E,1'E)-((2-氨基嘧啶-4,6-二基)双(肼-2-基-1-亚基))双(甲基亚基))二酚)

[0659] 将2-氨基-4,6-二肼基嘧啶(70.4mg,0.454mmol)和4-羟基苯甲醛(140.3mg，1.149mmol，2.53当量)在EtOH(3mL)中的悬浮液回流加热16h。将反应混合物冷却到环境温
度，收集沉淀，用Et2O(25mL)洗涤，得到作为灰白色粉末的嘧啶(91.4mg,55％)。熔点298℃
(分解)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ10.31(s,2H),9.74(s,2H),7.94(s,2H),7.48(d,J＝8.6Hz,
4H),6.83(d,J＝8.6Hz,4H),6.20(s,1H),5.70(s,2H)。13C(101MHz,DMSO)δ162.7,162.5,
158.3,140.5,127.7,126.3,115.7,73.0。

[0660] MIC测试

[0661] 使用由临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的肉汤微量稀释法测定了最小抑制浓度(μg/ml)。MIC断点通过视觉评估进行确定，然后使用ELISA酶标仪测量600nm处的吸光度
水平而确认。将具有抗微生物剂的孔中的细菌生长(浊度)与生长对照孔(不含抗微生物剂)
中的生长量(浊度)进行比较。所有分离株一式两份地进行测试，如果在结果中存在大于一
个两倍稀释的差异，则将测试重复第三次。通过将制备的种菌传代培养到SBA(绵羊血琼脂)
上，在测试期间密切监控分离株的纯度。针对每个测试运行，测定抗微生物剂氨苄青霉素的
对照菌株MIC，作为内部质量控制。计算每个细菌组的MIC50、MIC90和MIC范围(最小值和最大
值)。

[0662] NCL812和MIC对革兰式阴性菌的活性

[0663] 使用由临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的肉汤微量稀释法评估了NCL812对革兰式阴性菌的活性，并测定了NCL812和氨苄青霉素的MIC(μg/mL)。

[0664] 确定最小杀菌浓度(MBC)

[0665] CLSI方法

[0666] 简而言之，将始于MIC的每个孔的10μL内容物接种到Columbia SBA板上并在37℃温育48h。在24和48h时对板进行检查，并将MBC记录为在板上未观察到细菌菌落(或与对照
相比观察到明显的生长抑制)(CLSI 2005)时的NCL812最低浓度。

[0667] 杀菌动力学测定(MRSA&VRE)

[0668] 使MRSA/VRE在Columbia SBA上在37℃下生长过夜。然后将几个细菌菌落悬浮在CAMHB中，调节到0.08至0.10的光密度。将细菌悬浮液按1:10稀释。将一毫升细菌加到9mL含
各种浓度(最高4x MIC)的NCL812的CAMHB中，以实现1至3x106CFU/ml的最终细菌浓度。将管
在37℃下温育。为了确定在各个时间点存在的活细菌的数量，从每根管取出100μL等分试样
并在生理盐水中稀释。然后，将100μL各稀释样一式两份地涂到菌落计数琼脂上，并在37℃
下温育48h。在24h后，对存在于每个板上的菌落数计数，并因此对存在于原始悬浮液中的活
细菌数计数。在48小时后对板再次检查。

[0669] 与其它类别的抗微生物剂的协同作用研究。

[0670] 将棋盘法(Gunics等,2000Int.J.Antimicrob.Agents.14:239-42)用于发现NCL812与四环素、氯霉素、红霉素(大环内酯)、氨苄青霉素(广谱β-内酰胺)、庆大霉素(氨基
糖苷)、环丙沙星(氟喹诺酮)、磺胺甲噁唑(磺胺)或青霉素G(窄谱β-内酰胺)组合的相互作
用(协同作用、拮抗作用、无作用)。对于初始实验，使用了金黄色葡萄球菌T3-129的实验室
菌株，然而，该菌株对于一些抗微生物剂而言得到了不一致的结果，将对所有测试的抗微生
物剂敏感的称为MK1的新葡萄球菌属物种菌株(当前正在鉴定中的确定种)用于后续测试。

[0671] 首先，根据CLSI标准指导原则测定每种单独的抗生素的MIC。其次，一式两份地测试NCL812与每种上述抗生素的组合。为了评价组合的作用，如下计算了每种抗生素的分级
抑菌浓度(FIC)：

[0672] 所测试的抗生素的FIC＝所测试的抗生素组合的MIC/单独的抗生素的MIC。

[0673] NCL812的FIC＝NCL812组合的MIC/单独的NCL812的MIC。

[0674] FICI＝FIC指数＝NCL812的FIC+每种测试的抗生素的FIC。

[0675] 根据棋盘指导原则，将协同作用(S)定义为FICI<0.5。将无作用(NE)定义为0.5

[0676] 测试NCL812类似物

[0677] 将NCL812类似物保存在4℃下直至进行测定。测定了对两个MRSA菌株、两个VRE菌株以及大肠杆菌和铜绿假单胞菌各一个菌株的MIC。

[0678] 结果

[0679] 测定最小抑制浓度(MIC)

[0680] 获得了21个MRSA分离株的对比NCL812和氨苄青霉素MIC值(μg/mL)。原始实验(I期)和重复测试(II期)的结果在表34中示出。每个MIC测试一式两份地进行。

[0681]

[0682]

[0683] 获得了13个VRE分离株的对比NCL812和氨苄青霉素MIC值(μg/mL)。原始实验(I期)和重复测试(II期)的结果在表35中示出。每个MIC测试一式两份地进行。

[0684] 获得了MRSA和VRE的澳大利亚分离株的NCL812MIC50、MIC90、MIC众数和MIC范围，如表6中所示。氨苄青霉素的对比MIC值在括号中示出。

[0685] NCL812和MIC对革兰式阴性菌的活性

[0686] 获得了大肠杆菌、铜绿假单胞菌和亚利桑那沙门菌(Salmonella arizonae)的对比NCL812和氨苄青霉素MIC值(μg/mL)，如表36中所示。每个MIC测试一式两份地进行。

[0687] 表36：根据实施例7所得的大肠杆菌、铜绿假单胞菌和亚利桑那沙门菌的对比NCL812和氨苄青霉素MIC值(μg/ml)。

[0688]生物体 NCL812第1 NCL812第2 氨苄青霉素第1 氨苄青霉素第2
大肠杆菌 >128μg/ml >128μg/ml 4μg/ml 4μg/ml
铜绿假单胞菌 >128μg/ml >128μg/ml >128μg/ml >128μg/ml
亚利桑那沙门菌 >128μg/ml >128μg/ml 1μg/ml 1μg/ml

[0689] NCL812对所选革兰式阴性菌的抗微生物活性>128μg/ml。

[0690] 确定最小杀菌浓度(MBC)

[0691] MRSA分离株的MBC结果在表37中示出，该表显示了20个MRSA分离株的NCL812MBC值(μg/mL)。从NCL812MIC浓度开始到16倍MIC，一式两份地进行每个MBC测试。对于所有分离
株，MBC等于MIC。然而，对于一些浓度，记录到了不一致的在琼脂板上的生长。

[0692] 表37：根据实施例7的20个MRSA分离株的NCL812MBC值(μg/ml)。

[0693]

[0694] GB＝在绵羊血琼脂上的细菌生长

[0695] N**＝未在绵羊血琼脂上培养

[0696] 10个VRE分离株的结果在表38中示出。从NCL812MIC浓度开始到32倍MIC，一式两份地进行每个MBC测试。与所测试的MRSA分离株一样，MBC似乎等于MIC。然而，对于VRE分离株，
在较高的NCL812浓度下观察到了异常。在接近MIC的浓度下存在明显的生长抑制，但随着
NCL812浓度升高，细菌似乎不太受到抑制。在≥16μg/mL的NCL812浓度下，在平板上观察到
了大量细菌。

[0697] 表38：根据实施例7的10个VRE分离株的NCL812MBC值(μg/ml)

[0698]

[0699] *每毫升样品在24小时后生长的细菌数(CFU/ml)；M＝许多细菌在板上生长(太多而无法计数)

[0700] 据发现，NCL812在相当于MIC的浓度下杀革兰式阳性菌。

[0701] 杀菌动力学测定(MRSA&VRE)

[0702] 在初步实验中，在t＝15、30、45和60min时进行菌落计数。在这些时间点未观察到细菌浓度的显著变化，暗示NCL812不快速杀菌(比较之下，脂糖肽奥利万星(McKay等.
(2009)J.Antimicrob.Chemother.63(6):1191-1199)导致了在暴露于相当于Cmax的浓度一
小时内存活计数降低3log10)。因此，对于将来的实验，采样时间点延伸到一个小时的间隔，
再延伸到两个小时的间隔。

[0703] 在初步实验中，对于MRSA，在4h，与生长对照相比看，观察到至少2.5log10CFU/mL的降低。在8h，在对照与暴露于NCL812的细菌之间存在至少3.5log10CFU/mL的差异。在24h后，
存在于所有NCL812浓度中的细菌数与对照无明显不同。在从4至16μg/mL的NCL812浓度下，
直至8h，细菌数均存在一致的降低，但对于高于16μg/mL的浓度未观察到这种情况。比较之
下，用于治疗或正在开发用于治疗MRSA和VRE的大多数杀菌抗微生物剂(奥利万星、达托霉
素、万古霉素)快速杀菌，在暴露后的1h内以浓度依赖性方式实现相似的对数降低(McKay
等,2009)。在杀菌动力学实验中，抑菌抗微生物剂推荐用于治疗MRSA和VRE感染(替考拉宁
和利奈唑胺仅略微地减少了存活计数和生长)。

[0704] 对于VRE，暴露于NCL812的细菌观测到的降低值(CFU/mL)小于MRSA。在4h，与对照相比，存在大约2log10的存活计数降低，在8h，存在大约2.5log10的降低。然而，在24h，细菌
不再生长，因为与对照相比明显减少。细菌数在8h温育后增加，这一影响随着NCL812的浓度
渐增似乎更显著。

[0705] 获得了在8h的时间期内在不同NCL812浓度下MRSA 580的杀菌动力学，如图34中所示。在24h的时间期内在不同浓度的NCL812中MRSA 580的杀菌动力学在图35中示出。在4h温
育后，将培养基换成含有相同浓度的NCL812的新鲜培养基。

[0706] 在24h的时间期内在不同浓度的NCL812中MRSA 698的杀菌动力学在图36中示出。在4h温育后，将培养基换成含有相同浓度的NCL812的新鲜培养基。

[0707] 在24h的时间期内在不同浓度的NCL812下VRE 26c(dc)的杀菌动力学在图37中示出。

[0708] 在24h的时间期内在不同浓度的NCL812下VRE 16c(dc)的杀菌动力学在图38中示出。

[0709] 对NCL812的细菌耐性的测试

[0710] 开展了初步测试以确定细菌耐性是否可解释在较高NCL812浓度下的细菌生长观察结果和在24h温育时杀菌动力学实验中细菌数的增加。将96孔微量滴定板中在高NCL812
浓度下生长的细菌(MRSA)传代培养到SBA上，温育24h，然后进行MIC测试。这些细菌的MIC无
变化。还测试了在用于杀菌动力学实验的肉汤中生长的细菌的任何MIC变化。未观察到变
化。

[0711] 另外，然后使暴露于高浓度NCL812的细菌传代培养到含有NCL812(64μg/mL和128μg/mL)的平板计数琼脂上，在37℃下温育24h。然后将平板上生长的细菌用于进行MIC测试。
细菌MIC仍无变化。

[0712] 概括地说，NCL812具有对MRSA的杀菌活性，对VRE菌株不太明显。与针对MRSA和VRE感染所开发的杀菌抗微生物剂(达托霉素、oratovancin、万古霉素)相比，杀菌作用不快。在
较高NCL812浓度下的异常杀菌结果不表示产生了耐性，但可以暗示活性的丧失。因此，在探
索这些有趣但目前未得到解释的结果之前，应当在肉汤培养基中对化合物进行稳定性测
试。这将包括详细研究文献以确定该现象是否在其它类别的抗微生物剂中观察到。在这种
情况下，将需要更进一步地研究8与24h之间的杀菌动力学。NCL812对MRSA和VRE的杀菌曲线
暗示与抑菌抗微生物剂(利奈唑胺、替考拉宁)相比更高的杀菌活性。一旦研究了NCL812的
稳定性问题后，现在就应该例如与利奈唑胺一样生成肺炎链球菌的杀菌曲线，因为一些抗
菌剂可能对某些细菌具有抑菌作用，而对其它细菌具有杀菌作用。

[0713] 与其它类别的抗微生物剂的协同作用研究。

[0714] MIC、FIC、FICI和NCL812与八种抗生素之间的相互作用在表39中示出。代表不同类别的抗微生物剂的八种测试化合物均未显示出与NCL812的正(协同)或负(拮抗)相互作用，
这与将抗微生物剂加到NCL812中时的相加作用一致。

[0715] 表39：根据实施例7的MIC、FIC、FICI和NCL812与八种抗生素之间的相互作用。

[0716]

[0717] 1金黄色葡萄球菌菌株T3-29

[0718] 2葡萄球菌属物种菌株MK1

[0719] FIC1＝与NCL812组合的抗生素的MIC/单独的抗生素的MIC

[0720] FIC2＝与抗生素组合的NCL812的MIC/单独的NCL812的MIC

[0721] FICI＝FIC

[0722] 指数

[0723] 测试NCL812类似物

[0724] 类似物NCL001至NCL230的化学结构在图1中示出。

[0725] NCL812和类似物NCL001-070的MIC在表40中示出。

[0726] 类似物NCL071至171的MIC在表41中示出。

[0727] 类似物NCL171至230的MIC在表42中示出。

[0728] 表40：根据实施例7的NCL812和类似物NCL001-070的MIC。

[0729]

[0730]

[0731]

[0732]

[0733] 表41：根据实施例7的类似物NCL071-170的MIC。

[0734]

[0735]

[0736]

[0737]

[0738] 表42：根据实施例7的类似物NCL171-230的MIC。

[0739]

[0740]

[0741]

[0742]

[0743] 显示出最高水平的革兰氏阴性抗菌活性的NCL类似物包括NCL030(特别是假单胞菌属)、NCL041、NCL043、NCL044(特别是假单胞菌属)、NCL052(特别是假单胞菌属)和NCL053
(特别是假单胞菌属)、NCL097(特别是假单胞菌属)、NCL196和NCL188(特别是大肠杆菌)。

[0744] 显示出对MRSA的最大活性的NCL类似物包括：NCL021、NCL023、NCL029、NCL030、NCL035、NCL038、NCL039、NCL040、NCL041、NCL043、NCL044、NCL052、NCL054、NCL062、NCL069、NCL072、NCL073、NCL074、NCL078、NCL079、NCL080、NCL081、NCL082、NCL084、NCL088、NCL089、NCL093、NCL094、NCL097、NCL099、NCL101、NCL104、NCL107、NCL108、NCL111、NCL113、NCL117、NCL120、NCL121、NCL123、NCL136、NCL138、NCL140、NCL143、NCL146、NCL150、NCL151、NCL153、NCL155、NCL157、NCL158、NCL159、NCL160、NCL161、NCL166、NCL168、NCL169、NCL171、NCL172、NCL173、NCL174、NCL177、NCL178、NCL179、NCL180、NCL181、NCL182、NCL183、NCL184、NCL185、NCL186、NCL187、NCL188、NCL189、NCL190、NCL191、NCL192、NCL193、NCL195、NCL196、NCL197、NCL199、NCL201、NCL202、NCL203、NCL204、NCL205、NCL207、NCL215、NCL216、NCL217、NCL219、NCL220和NCL221。

[0745] 显示出对VRE的最大活性的NCL类似物包括：NCL011、NCL021、NCL023、NCL029、NCL030、NCL035、NCL038、NCL039、NCL040、NCL041、NCL043、NCL044、NCL052、NCL054、NCL061、NCL062、NCL069、NCL070、NCL072、NCL073、NCL074、NCL078、NCL079、NCL080、NCL081、NCL082、NCL084、NCL088、NCL093、NCL094、NCL097、NCL099、NCL101、NCL105、NCL107、NCL108、NCL111、NCL112、NCL113、NCL117、NCL120、NCL121、NCL123、NCL126、NCL131、NCL136、NCL140、NCL141、NCL143、NCL146、NCL151、NCL153、NCL155、NCL157、NCL158、NCL159、NCL160、NCL161、NCL166、NCL168、NCL169、NCL171、NCL173、NCL174、NCL175、NCL177、NCL178、NCL179、NCL180、NCL181、NCL182、NCL183、NCL184、NCL185、NCL186、NCL187、NCL188、NCL189、NCL190、NCL191、NCL192、NCL193、NCL195、NCL196、NCL197、NCL202、NCL203、NCL204、NCL205、NCL210、NCL212、NCL215、NCL216、NCL217、NCL218、NCL219、NCL220和NCL221。

[0746] 所测试的类似物的生物测定排序在表43中示出。

[0747] 表43：根据实施例7测试的类似物的生物测定排序。

[0748]

[0749]

[0750] 实施例8：NCL812对金黄色葡萄球菌和粪肠球菌的抗微生物剂敏感性分离株的作用

[0751] 材料和方法

[0752] 菌株信息

[0753] 将两个金黄色葡萄球菌分离株用于以下实验：金黄色葡萄球菌MK01人类皮肤菌株，和金黄色葡萄球菌KC01马皮肤菌株。这些分离株通过革兰氏染色和生物化学方法(包括
Remel Staphaurex商业试剂盒)鉴定。一个粪肠球菌分离株(USA01)未鉴定为VRE菌株。因为
该分离株之前已经形成物种，除了观察在血琼脂上的纯、特征性生长外，其未接受进一步的
测试。

[0754] 研究最小杀菌浓度(MBC)

[0755] CLSI方法

[0756] 如在之前的实验中，将始于MIC的每个孔的10μL内容物接种到Columbia SBA板上并在37℃温育48h。在24和48h时对板进行检查，并将MBC记录为在板上未观察到细菌菌落
(或与对照相比观察到明显的生长抑制)(CLSI 2005)时的NCL812最低浓度。

[0757] 金黄色葡萄球菌KC01和粪肠球菌USA01的杀菌动力学测定方法

[0758] 使分别未被确定为MRSA或VRE的金黄色葡萄球菌KC01和粪肠球菌USA01在Columbia SBA上在37℃生长过夜。然后将几个细菌菌落悬浮在CAMHB(阳离子调节的
Mueller Hinton肉汤)中并调节到0.08至0.10的OD600。将细菌悬浮液按1:10稀释。将一毫升
细菌加到9mL含各种(最高4×MIC)浓度的NCL的CAMHB中，以实现1至3×106CFU/mL的最终细
菌浓度。将管在37℃在恒定振荡下温育。为了确定在各个时间点存在的活细菌的数量，从每
根管取出100μL等分试样并稀释。然后，将100μL各稀释样一式两份地涂到菌落计数琼脂上，
并在37℃温育48h。在24h后，对存在于每个板上的菌落数计数，并因此对存在于原始悬浮液
中的活细菌数计数。在48小时后对板再次检查。

[0759] 结果

[0760] 最小抑制浓度(MIC)

[0761] 研究了分离株金黄色葡萄球菌MK01和KC01以及粪肠球菌USA01的NCL812MIC。结果是：金黄色葡萄球菌MK01＝4-8μg/mL，金黄色葡萄球菌KC01＝2μg/mL，粪肠球菌USA 01＝4μ
g/mL。

[0762] 研究了金黄色葡萄球菌分离株MK01和KC01，未观察到生长或仅在低浓度NCL812(2μg/ml)下观察到生长，表明NCL812杀金黄色葡萄球菌。然而，对于所测试的粪肠球菌分离株
(USA01)，在所有测试的NCL812浓度下均观察到细菌生长。随着浓度的增加，存在细菌数的
明显降低，但与金黄色葡萄球菌的无生长相比，存在生长。这些结果的汇总可见于表45。表
45显示了对两个非MRSA金黄色葡萄球菌分离株和一个非VRE粪肠球菌分离株进行的
NCL812MBC测试的结果。每个MBC测试一式两份地进行。在48h时未观察到结果的变化。表37
显示了20个MRSA分离株的NCL812MBC值(μg/mL)。从NCL812MIC浓度开始到16倍MIC，一式两
份地进行每个MBC测试。表38显示了10个VRE分离株的NCL812MBC值(μg/ml)从NCL812MIC浓
度开始到32倍MIC，一式两份地进行每个MBC测试。

[0763] 表45：根据实施例8的对两个非MRSA金黄色葡萄球菌分离株和一个非VRE粪肠球菌分离株的NCL812MBC测试。

[0764]

[0765] +＝在绵羊血琼脂上生长；0＝在绵羊血琼脂上无生长；N＝未培养；括号中的数是每毫升样品在24小时后生长的细菌数(CFU/ml)

[0766] 金黄色葡萄球菌KC01和粪肠球菌USA01的杀菌动力学测定方法

[0767] 在t＝0、120、240和360min，然后在24h时再次进行菌落计数。在2h时间点，金黄色葡萄球菌KC01显示出细菌数与初始数相比2.5log10的最小降低，并与相同时间点的对照相
比大于3log10的降低。2log10的最小较低在6h温育时仍然明显，然而，在24h后，所存在的细
菌数增加，并且这与对照无明显不同。

[0768] 粪肠球菌USA01得到了类似的结果，然而，所观察到的细菌数降低低于金黄色葡萄球菌KC01。与生长对照相比，在2h时观察到了CFU/mL的2log10的降低。然而，与原始细菌数相
比CFU/mL的降低刚好大于1log10。在4-16μg/mL的NCL812浓度下，该细菌数降低保持一致直
到6h时间点。然而，在32和64μg/mL的浓度下，在相同的时间段内，存在约1log10的细菌数升
高。在24h时，所有浓度下的细菌数量均增加到几乎与生长对照相同的水平。

[0769] 这些金黄色葡萄球菌和粪肠球菌菌株观察到的结果与所测试的所有MRSA和VRE分离株的杀菌动力学测定所观察到的结果一致。金黄色葡萄球菌KC01在不同NCL812浓度下温
育最多24h的杀菌动力学测定在图39中示出。粪肠球菌USA01在不同NCL812浓度下温育最多
24h的杀菌动力学测定在图40中示出。

[0770] 实施例9：化合物制剂

[0771] 使用本领域的标准方法制备以下制剂。

[0772] 制剂A–局部用制剂-具有本发明的化合物的基于PEG的凝胶

[0773] 4.0g PEG 4000；

[0774] 3.5g PEG 200；

[0775] 0.6g丙二醇；

[0776] 1.9g水；和

[0777] 0.204g化合物(例如NCL099)

[0778] 将PEG 4000、PEG 200和丙二醇混合，并加热到150℃，直到所有固体晶体溶解。将化合物加入水中，超声处理30分钟，直到完全悬浮。将化合物溶液和凝胶溶液混合，并使之
冷却和固化。制剂A将可能展示出可接受的粘度、易于涂抹到皮肤上、均匀的悬浮液和一致
且细腻的质地。

[0779] 制剂B–局部用制剂-具有本发明的化合物的基于PEG的凝胶

[0780] 3.0g PEG 4000；

[0781] 1.0g PEG 8000；

[0782] 3.0g PEG 200；

[0783] 1.0g丙二醇；

[0784] 1.9g水；和

[0785] 0.202g化合物(例如NCL099)

[0786] 将PEG 4000、PEG 8000、PEG 200和丙二醇混合并加热到150℃，直到所有固体晶体溶解。将化合物(例如NCL099)加到水中，超声处理30分钟，直到完全悬浮。将化合物溶液和
凝胶溶液混合，并使之冷却和固化。制剂B展示出可接受的粘度、易于涂抹到皮肤上、均匀的
悬浮液和一致且细腻的质地。

[0787] 制剂C–局部用制剂-具有化合物-Soluplus的基于PEG的凝胶

[0788] 2.5g PEG 4000；

[0789] 4.0g PEG 200；

[0790] 2.5g丙二醇；

[0791] 1.0g水；和

[0792] 1.8g化合物-SoluPlus固体分散体。

[0793] Soluplus购自BASF(www.soluplus.com)。使用本领域的标准方法制备化合物-SoluPlus。将PEG 4000、PEG 200、化合物-SoluPlus和丙二醇混合并加热到150℃，直到所有
固体晶体溶解。添加水，然后将溶液超声处理。使溶液冷却和固化。制剂C展示出可接受的粘
度、易于涂抹到皮肤上、均匀的悬浮液和一致且细腻的质地。

[0794] 制剂D–片剂制剂

[0795] 30mg脱水磷酸氢钙；

[0796] 80mg微晶纤维素；

[0797] 50mg乳糖；

[0798] 8mg羟丙基甲基纤维素

[0799] 1.5mg滑石

[0800] 10mg化合物(例如NCL099)

[0801] 对赋形剂称重，并混合5分钟。将混合物送入压片机的喂料斗，使压片机根据本领域的标准程序运行。制剂D展示出可接受的片剂硬度、崩解性和脆碎度。

[0802] 制剂E–口服悬浮液

[0803] 2.0ml甘油；

[0804] 1.5ml无水乙醇；

[0805] 600mg NCL812；和

[0806] 至60ml媒介物(Ora Sweet和Ora Plus，1:1)中

[0807] 将NCL 812粉末过75μm筛。将600mg经过筛的NCL 812与2.0ml甘油和1.5ml无水乙醇混合。将混合物置于研钵中，手动研磨直到NCL 812均匀悬浮。将悬浮液超声处理30分钟。
然后将媒介物(55ml Ora Sweet和Ora Plus混合物)加到悬浮液中，再研磨10分钟。通过转
移到量筒中将体积用Ora plus和Ora sweet混合物补足到60ml

[0808] 制剂E展示出可接受的悬浮液并暂时出可接受的短期稳定性。

[0809] 制剂F–肌内注射

[0810] 20mg/ml聚乙烯吡咯烷酮K30(PVPK30)；

[0811] 0.09mg/ml NCL812；和

[0812] 50ml水。

[0813] 通过向50ml MilliQ水中添加1.0g PVP K30制备了2％w/v的PVP K30溶液。然后将溶液置于超声仪中30分钟以进行平衡，将4.5mg NCL 812加入PVP溶液中并置于10rpm最大
速度下的振荡培养箱上24小时，温度控制在25±1℃。将溶液转移到5ml小瓶中并检查澄明
度、外观、pH和短期稳定性。溶液的pH为7.25。

[0814] 制剂F展示出可接受的透明度和短期稳定性。

[0815] 实施例10：NCL812和NCL099从制剂B中的释放。

[0816] 本研究的目的是测量NCL812和NCL099从实施例9中制备的制剂B中的释放。

[0817] 将Franz扩散池用于对NCL812和NCL099从其局部用制剂中的释放速率进行定量。将五毫升被选为理想的释放介质的无水乙醇装到接受室中。使用水夹套将接受液的温度保
持恒定在32±1℃。选择孔径为0.45μm的乙酰基纤维素膜(Pall Corporation)，并置于供应
室与接受室之间。之后，将多个试样(制剂B)装入供应室。通过采样口，在0.25、0.50、0.75、
1、2、3、4、5、6、7、8和24小时的定期时间间隔收集一毫升接受液。将一毫升新鲜的无水乙醇
立即返回到接受室中。将UV-HPLC用于分析所得的接受液的含量。

[0818] 图41展示了NCL812和NCL099随着时间的累积释放。该研究证实了制剂B提供可接受的NCL812和NCL099释放谱。

[0819] 实施例11:化合物NCL812、NCL001-NCL230的NMR光谱列表

[0820] 使用本领域的标准方法对化合物NCL812、NCL001-NCL230进行了NMR光谱分析。NMR光谱列表在表46中示出。

[0821]

[0822]

[0823]

[0824]

[0825]

[0826]

[0827]

[0828]

[0829]

[0830]

[0831] 实施例12：通过施用NCL812或NCL099治疗体内细菌感染。

[0832] 本研究的目的是确定含有NCL812或NCL099的兽医试验用药在治疗小鼠皮肤感染中的功效

[0833] 模型概述：有用的动物模型系统应为临床上相关、实验上稳健、伦理学上可接受、便于执行的并且应当提供可靠且可重现的结果。存在许多已描述的局部皮肤感染动物模
型，包括巴豆油致炎皮肤模型(Akiyama,H.,H.Kanzaki,Y.Abe,J.Tada和J.Arata(1994)."
Staphylococcus aureus infection on experimental croton oil-inflamed skin in 
mice."Journal of Dermatological Science 8(1):1-10)、灼伤皮肤模型(Stieritz,
D.D.,A.Bondi,D.McDermott和E.B.Michaels(1982)."A burned mouse model to 
evaluate anti-pseudomonas activity of topical agents."Journal of 
Antimicrobial Chemotherapy 9(2):133-140)、皮肤缝合伤口模型(McRipley,R.J.和
R.R.Whitney(1976)."Characterization and Quantitation of Experimental 
Surgical-Wound Infections Used to Evaluate Topical Antibacterial Agents."
Antimicrobial Agents and Chemotherapy 10(1):38-44)、皮肤胶带剥离模型
(Kugelberg,E.,T. T.K.Petersen,T.Duvold,D.I.Andersson和D.Hughes
(2005)."Establishment of a Superficial Skin Infection Model in Mice by Using 
Staphylococcus aureus and Streptococcus pyogenes."Antimicrobial Agents and 
Chemotherapy 49(8):3435-3441)以及线性全厚度手术刀切割方法(Guo,Y.,R.I.Ramos,
J.S.Cho,N.P.Donegan,A.L.Cheung和L.S.Miller(2013)."In Vivo Bioluminescence 
Imaging To Evaluate Systemic and Topical Antibiotics against Community-
Acquired Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus-Infected Skin Wounds in 
Mice."Antimicrobial Agents and Chemotherapy 57(2):855-863)

[0834] 在开展本研究之前的初步研究确立了源于上述模型的详细研究的新皮肤感染方法。简而言之，将研究小鼠麻醉，剪下一片背部皮肤以露出皮肤，并用手持式冲孔机取下一
块圆形皮肤，在背部上留下具有中央腔的伤口。将伤口用已知数量的挑战性生物体感染。在
感染后大约四至六小时，将伤口用媒介物制剂或活性制剂进行局部处理。每12小时对感染
的皮肤伤口再次处理，总共处理14次。对小鼠实施人道安乐死，解剖原始感染伤口区域并取
下，通过标准微生物学测试对细菌含量计数。以此方式，由于活性制剂处理而导致的细菌浓
度变化可通过检查与媒介物对照相比的细菌载量降低而容易地确定。

[0835] 材料和方法

[0836] 感染种菌的制备

[0837] 使细菌(金黄色葡萄球菌)的新鲜培养物在绵羊血琼脂上在37℃生长16-18小时。选择一些典型的菌落，悬浮在10ml胰酶大豆肉汤中并在振荡培养箱(240rpm)中在37℃温育
过夜。将过夜悬浮液涡旋并稀释(1:100)在新鲜胰酶大豆肉汤中(100μL[0.1ml]稀释在
9.9ml肉汤中)。将新鲜悬浮液在振荡培养箱(如上)中温育3小时以便得到对数中期细菌。将
细菌通过在7,500rpm下离心10分钟而沉淀。移除肉汤上清液，将细菌悬浮在10ml磷酸盐缓
冲盐水(PBS)中。将这些步骤再重复两次。使用分光光度计，以盐水作为空白，通过测量
600nm处的吸光度而检查悬浮液的密度，以确认在约0.100的读数下的目标密度(与2.5x 
107CFU/ml的细菌密度一致)。将悬浮液置于放到具有冰砖的可上锁运输箱中的架子上，以
在运输期间保持制冷，然后在到达后储存在小鼠皮肤感染实验室的冷房内。将最终悬浮液
彻底混合，然后对小鼠中形成的皮肤伤口接种。

[0838] 为了确保悬浮液的纯度和准确性，在置于上锁的箱子之前进行以下步骤。

[0839] 通过将100μl最终悬浮液涂在SBA(绵羊血琼脂)板上，在37℃温育18小时并进行检查以确认一种菌落类型的均匀生长，而确保细菌悬浮液纯度。通过以下方式对最终悬浮液
进行活菌计数：在Eppendorf管(每根管约900μl)中配制盐水，取出100μl样品并加到第一
Eppendorf管中，将混合物涡旋，并使用含有盐水的第2根管重复。将该过程继续5至6根管。
最后，将100μl第5次和第6次稀释样铺到平板计数琼脂上，在37℃温育18小时，并进行菌落
计数以确认CFU/ml为约2.5x 107。在接种伤口后，将该过程重复以确保在手术期间未发生
污染或活菌计数的降低。

[0840] 皮肤伤口手术操作

[0841] 将每只小鼠置于诱导箱中并使用2％异氟烷诱导麻醉。将每只麻醉小鼠的眼用兽医眼科润滑剂覆盖以便防止角膜脱水。将每只小鼠从诱导室取出并置于手术区域上的各个
麻醉鼻吸之前。在麻醉下，监控每只小鼠以评估麻醉深度(对疼痛、瞬目反射、骨骼肌张力的
反应)和呼吸及心脏功能。用机械剪从手术区域剃去背部皮毛。将剃毛区域用沾到纸巾上的
70％乙醇然后用10％w/v聚维酮碘溶液清洁。一旦碘溶液干燥后，施用非甾体抗炎剂美洛昔
康的皮下注射。使用耳洞钳/活检穿孔器轻轻夹紧背部皮肤，以允许形成圆形全厚度伤口。
媒介物对照和NCL812及NCL099小鼠将伤口用微量移液管通过10μl细菌悬浮液接种(2.5x 
105CFU/10μL)。一旦细菌悬浮液干燥后，将小鼠置于用小鼠编号标记的各个恢复箱中。记录
接种时间。将每只小鼠的初始体重记录在适当的记录表上。小鼠在5分钟内恢复到全意识。
将恢复的小鼠放回各个笼子，并每小时监控术后或麻醉并发症。

[0842] 术后护理(术后4小时)

[0843] 评估了小鼠的术后并发症，并将观察结果记录在临床记录表上。将每只小鼠小心从IVC取出并置于评估容器中，避免过多触摸或碰到手术部位。一旦小鼠在评估容器内后，
即对其进行评估并将观察结果记录在术后临床记录表上。每当出现所建议的健康问题时，
即施用术后止痛，并记录在临床记录表上。

[0844] 动物监控和日常护理

[0845] 抗生素施用(早上7点和下午6点)。媒介物或NCL812或NCL099膏剂的第一次施用在术后4小时进行。在施用前对每个膏剂容器称重，并记录重量。小心地约束每只小鼠。将膏剂
(媒介物或NCL812或NCL099)涂到病变区域，并将经处理的小鼠返回到IVC，其中对每只小鼠
进行观察以确保膏剂未因梳毛而被立即移除。记录膏剂容器的施用后重量。将媒介物和活
性NCL产品在第一次施用后每12小时涂到皮肤伤口，总共连续处理14次。NCL812和NCL099产
品(制剂B，如实施例9中所示)均以20mg/g的浓度含有其相应的活性成分。在每种情况下均
涂抹约0.1-0.2g膏剂，从而向体重在18g与25g之间的小鼠递送28与56mg之间的NCL812或
NCL099总局部剂量。

[0846] 每日监控。在大约中午12点每天一次对每只小鼠进行监控。将每只小鼠小心从IVC取出并置于观察容器中，避免过多触摸或碰到手术部位。仔细评估在容器中时的皮毛、姿
势、眼睛、行为、发声和活动，并将观察结果记录在评估表上。检查小鼠粪便(笼底上或容器
中)的稠度，并记录观察结果。当小鼠在容器中时测定每只小鼠的重量，并计算和记录体重
变化。将观察容器用乙醇消毒，然后放在一边晾干，同时将新的容器用于下一只小鼠。每两
天，将小鼠再次用2％异氟烷麻醉，并用尺子作为尺寸参考进行拍照。将这些照片用于评估
试验期间的病变大小和感染进展。

[0847] 组织分析和抗菌功效的评估

[0848] 在7天皮肤伤口评估期结束时，对所有实验小鼠实施安乐死，然后收集伤口进行死后检查。从每只小鼠的背部解剖皮肤伤口。将样品置于样品管中，称重，然后添加1ml PBS和
无菌组织均化微珠。将组织样品用组织匀化器(Next Advance Bullet Blender)匀化10分
钟，然后涡旋大约30秒。取出100μl上清液，置于含有900μl PBS的Eppendorf管中。使用系列
稀释重复该程序，总共稀释8次。最后，将100μl各稀释样一式两份地移取到平板计数琼脂
上，在37℃温育过夜。将十微升原始悬浮液置于绵羊血琼脂上以评估培养物纯度，并在37℃
温育过夜。第二天，使用温育后的平板计数琼脂板进行活菌计数，并确认作为收获的菌株的
金黄色葡萄球菌(挑战性生物体)的种类。

[0849] 结果

[0850] 在媒介物处理组中观察到的每克组织的平均菌落计数为5,888,436(6.77log10)。在NCL812组中观察到的每克组织的平均菌落计数为141,254(5.15log10)。在NCL099处理小
鼠中观察到的每克组织的平均菌落计数为1,318(3.12log10)。每克组织的log10菌落形成单
位数和降低％在下表中汇总。

[0851] 表47：在局部施用媒介物和处理后每克组织的Log10菌落形成单位数和降低百分比。

[0852]处理 Log10(CFU/g) 降低％
媒介物 6.77  
NCL812 5.15 97.6
NCL099 3.12 99.98

[0853] 从该表格中显而易见的是，用NCL812或NCL099处理导致了感染性金黄色葡萄球菌的数量高度降低。这些结果证明了通过施用本发明的化合对体内细菌定植或感染进行了有
效治疗。