发明背景

本发明涉及有效抑制癌症、瘢痕形成、破坏细胞骨架和赋予抗感 染性的方法。更确切地，本发明涉及治疗与癌症、瘢痕形成和感染有 关的疾病的方法，和在患有这类疾病的活体动物、包括人类中递送这 种活性的方法。

癌症是失去调节的细胞与肿瘤生长。尽管细胞的存活、分化、运 动和侵袭在伤口愈合、胎儿与胚胎发育中和在黄体、子宫内膜与胎盘 的形成中的过程是天然的并且是受调节的。这些过程对健康和生长是 紧要的，受到致癌基因、肿瘤抑制基因和无数生长因子的非常好地调 节，不过它们在失调时能够引起肿瘤形成。不过，由遗传与环境因素 所导致的基因改变能够引起病原性与失调的生长和肿瘤。引起癌症和 其他疾病的病原性细胞调节障碍是所不希望的，是治疗性干预的目标。

发明的简要概述

在一种特征中，本发明涉及抑制癌细胞的方法，该方法包含使具 有癌细胞的细胞、组织或器官与治疗有效量的式I化合物接触。式I 化合物具有下列通式：

式I

式I中，R1和R2是包括但不限于下列的官能团：羟基、-NH2和 -SH基团。

式I中，R3是包括但不限于下列的官能团：氢、C1-C6-烷基、C2-C6- 链烯基、C2-C6-炔基、芳基、羟基、C1-C6-烷氧基、卤素、NO2、NH3和COOCH3。

式I中，R4是包括但不限于下列的官能团：氢、C1-C6-烷氧基、 葡萄糖、B-D-吡喃葡萄糖、C1-C6-烷基、C2-C6-链烯基、C2-C6-炔基、 芳基、羟基、卤素、NO2、NH3、碳水化合物、氨基酸、核苷酸和脂质。

式I中，R5是包括但不限于下列的官能团：氢、C1-C6-烷基、C2-C6- 链烯基、C2-C6-炔基、芳基、羟基、C1-C6-烷氧基、卤素、NO2、NH3和CH3。

式I中，X1-X3是包括但不限于下列的官能团：氧、硫、-CH2-或羧基，它们可以是不同的，但是优选地是相同的官能团。

在优选的本发明实施方式中，式I化合物是式C25H32O13的橄榄 苦苷(oleuropein)，描述在THE MERK INDEX的第十版中，专题编号 为6709，如式II所示。

式II

可以获得植物提取物，其可以包含植物提取物的任意醇性、丙酮、 无机与有机酸或碱和/或水提取液，将含有橄榄苦苷，即式II所示化 合物。植物提取物是从橄榄树Olea europaea L.、女贞树Ligustrum obtusifolium(木犀科)等的包括但不限于下列的植物部分获得的： 叶、芽、果实、树干、树皮和根。

另一方面，本发明涉及有力抑制组织或器官中癌细胞的方法，该 方法包含使该细胞与药物组合物接触，所述药物组合物含有橄榄苦苷、 即式II所示化合物或式I所示其衍生物或者其水解产物，这可以包括 但不限于橄榄苦苷苷元、elenolic acid、β-3，4-二羟基苯乙醇和甲 基-o-甲基elenolate或其药物组合物，含量足以抑制癌症。在当前优 选的实施方式中，该细胞位于活的生物体中。这类组合物可以包含植 物提取物的醇性、丙酮、无机与有机酸或碱和/或水溶液，或者其醇性、 丙酮、无机与有机酸或碱和/或水溶液或组分的衍生物。

另一方面，本发明涉及治疗由不需要与失控的癌细胞生长、存活、 复制、能动性、侵袭和转移所介导或者与之有关的癌症疾病的方法， 该方法包含对活的动物给以有效剂量的药物组合物，所述药物组合物 含有橄榄苦苷、即式II所示化合物或式I所示其衍生物或者其水解产 物，这可以包括但不限于橄榄苦苷苷元、elenolic acid、β-3，4-二 羟基苯乙醇和甲基-o-甲基elenolate或其药物组合物，剂量足以抑制 癌细胞存活、复制、生长、能动性、侵袭和转移。这些方法可用于改 善以异常或不可取的癌细胞增殖和/或移行为特征的病症后果。这类组 合物可以包含植物提取物X的醇性、丙酮、无机与有机酸或碱和/或水 溶液，或者其醇性、丙酮、无机与有机酸或碱和/或水溶液或组分的衍 生物。

另一方面，本发明涉及癌细胞被橄榄苦苷的葡萄糖部分选择性靶 向的方法，橄榄苦苷即式II所示化合物或式I所示其衍生物或者其水 解产物，这可以包括但不限于橄榄苦苷苷元、elenolicacid、β-3，4- 二羟基苯乙醇和甲基-o-甲基elenolate或其药物组合物，用量足以抑 制癌症。按照这样的方法，橄榄苦苷借助受促进的扩散作用通过葡萄 糖转运蛋白(GLUT)进入所述细胞。目前存在12种GLUT蛋白，它们具 有不同的葡萄糖亲和性和组织特异性分布。已有报道人类恶性肿瘤是 以葡萄糖摄取和利用升高为特征的，这是基于多种GLUT同工型的表达 增强。例如，发现GLUT1和/或GLUT 3mRNA在乳腺癌、食道癌和结肠 癌中增加。癌细胞过度表达GLUT蛋白，因而更有可能摄取含有葡萄糖 分子的橄榄苦苷。

另一方面，本发明涉及破坏细胞骨架和防止其再生的方法，由此 动物细胞圆润，不能分化、运动或侵袭，该方法包含使该细胞与药物 组合物接触，所述药物组合物含有橄榄苦苷、即式II所示化合物或式 I所示其衍生物或者其水解产物，这可以包括但不限于橄榄苦苷苷元、 elenolic acid、β-3，4-二羟基苯乙醇和甲基-o-甲基elenolate或其 药物组合物，含量足以抑制癌症。在当前优选的实施方式中，所述细 胞位于活的生物体中。这类组合物可以包含植物提取物的醇性、丙酮、 无机与有机酸或碱和/或水溶液，或者其醇性、丙酮、无机与有机酸或 碱和/或水溶液或组分的衍生物。

另一方面，本发明涉及破坏细胞骨架的方法，由此动物细胞耐受 细菌、病毒或寄生生物的感染，该方法包含使该细胞与药物组合物接 触，所述药物组合物含有橄榄苦苷、即式II所示化合物或式I所示 其衍生物或者其水解产物，这可以包括但不限于橄榄苦苷苷元、 elenolic acid、β-3，4-二羟基苯乙醇和甲基-o-甲基elenolate或其 药物组合物，含量足以使所述细胞耐受感染。这类组合物可以包含植 物提取物X的醇性、丙酮、无机与有机酸或碱和/或水溶液，或者其 醇性、丙酮、无机与有机酸或碱和/或水溶液或组分的衍生物。按照 这样的方法，相信动物细胞骨架、包括人类细胞骨架在被各种病毒、 细菌和寄生生物感染期间被靶向了。例如，病原体李斯特氏菌单细胞 基因是一种被宿主细胞内在化的细菌，它诱导肌动蛋白(一种细胞骨 架蛋白)在其表面聚合，并且利用来自聚合作用的能量驱动细胞内能 动性和细胞到细胞的传播。橄榄苦苷抑制动物细胞的细胞骨架再生， 能够防止感染性疾病的蔓延。在当前优选的实施方式中，所述细胞位 于活的生物体中。

本发明及其优选实施方式的其他特征、目的和优点将因下列详细 说明而变得显而易见。

附图的简要说明

参照附图，本发明的这些以及其他特征将变得更加显而易见。

图1：基质胶侵袭测定法。在基质胶上研究大多数侵袭性癌(结 肠)，我们发现橄榄苦苷的作用。用0.1％橄榄苦苷处理过的细胞完全 停止了侵袭凝胶，黏附于底侧上的滤器。基质胶侵袭室的图解如(A) 所示。在实验过程中对细胞层和滤器平面照相。含有未处理细胞的侵 袭室如(B)和(C)所示，分别对细胞和滤器平面照相。从照片中明显看 到，在滤器的焦点平面能够见到细胞阴影，表明它们接近滤器，并且 移动穿过基质胶层。相反，含有用橄榄苦苷处理过的细胞的侵袭室滤 器平面照片(F)不含有细胞阴影。事实上，细胞在基质胶中高得多的平 面上被照相，在基质胶中似乎不是可移动的(E)。在实验终点，彻底除 去基质胶。将滤器固定，染色，照相。已经移行穿过基质胶层并且黏 附于滤器下侧的细胞如(D)和(G)所示。从含有橄榄苦苷的侵袭室(G) 所得到的滤器缺乏细胞，表明没有细胞到达滤器。来自未处理室的滤 器含有穿透基质胶并且黏附于滤器的细胞(D)。

图2：细胞移行测定法。在本测定法中，将肾腺癌细胞培养至汇 合，然后用无菌木条划伤，形成一条路的样子。然后使细胞培育并且 移行穿过这条路，以修复培养物中的伤口。(A)、(B)、(C)、(D)所示 未处理细胞已经成功地封闭了伤口区域。与之相比，(E)、(F)、(G)、 (H)所示用0.01％橄榄苦苷处理过的细胞没有有效地封闭伤口。箭头表 明伤口的方向。

图3：描绘上述图2细胞移行测定法的变化。本测定法中的伤口 更加广泛，形成转角或弯曲边缘。在本实验中，使恶性黑素瘤细胞生 长至汇合，然后用木条划伤，方式如上所述。(A)所示为未处理细胞， 在平板上沿所有方向移行。用0.01％橄榄苦苷溶液处理过的细胞(B)的 移行完全停止了。在这种伤口测定法中能够清楚地见到伤口边缘，用 于评估移行细胞的前进。

图4：利用与图3相同的细胞描绘上述实验的变化，除了平板接 种成圆圈以外。(A)已处理细胞(0.01％橄榄苦苷)没有移行至指定圆 圈以外。不过(B)未处理细胞向外径向移行，覆盖平板。

图5：生长测定法。将五种代表大多数侵袭性癌症的具体癌细胞 系以相等的数目接种在含有不同浓度橄榄苦苷的平板上。5天后，利 用MTS测定法评估细胞数，在图片y轴上显示光密度(490nm)值。x轴 代表橄榄苦苷的浓度。没有进行数据的处理。这些代表在微量平板读 数器上所进行的真实而原始的统计。在全部所研究的癌症中，橄榄苦 苷有效地抑制生长。

图6：基质胶上的管破裂测定法。将细胞置于基质胶型管状网络 上，后者在24-48小时内瓦解为丛(图6A，顶行)。管瓦解过程的 特写证明它因管的退缩而发生，由此结节(管交叉处)更接近于彼此 而合并(图6A，底行)。备细胞仍然延长遍及各处。这种缓慢的细胞 移动和收缩过程(24-48小时)牵涉主动的细胞骨架再生。向所进行 的管加入0.1％橄榄苦苷“圆润”或者诱导各细胞通过发生在2小时内 的快速过程就地形成球形(图6B)，破坏管状网络。基于形成球形或 者圆润的细胞不会运动，无期限地停留在原位这样一种理解，从而通 过防止细胞骨架再生而阻挠细胞移动性，使退缩过程中止。

图7：基质胶上的管破裂测定法。加入橄榄苦苷，发生葡萄糖受 抑制的细胞圆润。

图8：细胞移行测定法。使兔皮肤成纤维细胞生长至汇合的单细 胞层，随后用无菌木条划伤。然后培育细胞，使其在培养中修复伤口。 未处理细胞成功地移行穿过受伤区域(A)。如(C)所示，用橄榄苦苷 (0.01％)处理过的细胞被有效抑制了。经过橄榄苦苷处理的细胞的特写 显示单细胞层的不连续性(D和E)，这是因为受到橄榄苦苷对细胞骨 架的影响，细胞形成球形或圆润。相反，未处理细胞显得平坦(B)。洗 去细胞的橄榄苦苷，逆转圆润过程。细胞变平，补偿单层中的不连续 性(H)，开始从伤口边缘移行(F和G)。

发明的详细说明

下列详细说明打算作为当前优选的发明实施方式的说明，不打算 代表本发明可以被实施或利用的唯一形式。本说明阐述实施本发明步 骤的功能和顺序。不过可以理解，不同的实施方式也可以完成相同或 等价的功能和顺序，所述等价的功能和顺序也打算被涵盖在本发明的 范围内。

A.定义

术语“动物”表示具有封闭血管循环系统的生物，包括鸟、哺乳 动物、两栖动物、鱼和爬行动物。这里所用的术语“动物”也包括人 类。

术语“抗感染性”表示橄榄苦苷赋予动物细胞的一种性质，使这 些细胞抵抗感染剂，象细菌、病毒和寄生虫。由橄榄苦苷赋予这种性 质与其对微生物本身的直接作用无关，已有文献详尽记载。

术语“癌症”表示细胞在组织、器官或人体背景中的失控与失调 生长。

术语“转移”表示肿瘤细胞扩散至机体远距离部分的过程。该术 语在本文中也用于表示通过转移过程形成的肿瘤。

术语“接触”在本文中与下列术语互换使用：合并、加入、混合、 穿越、培育、流经等。而且，本发明化合物能够借助任何常规方法“给 药”，例如肠胃外、口服、局部和吸入途径，如本文所述。

术语“药学上可接受的盐”表示这样的化合物盐，它们保留游离 碱的生物有效性和性质，通过与无机酸反应而得，例如盐酸、氢溴酸、 硫酸、硝酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。药学 上可接受的盐例如包括碱金属盐，例如钠和钾的盐，碱土金属盐和铵 盐。

“足量”、“有效量”、“治疗有效量”或“抗血管生成量”表 示化合物或组合物有效降低、压制或抑制血管生成或者导致与血管生 成性疾病有关的症状改善的量。所需结果可以是主观性症状减轻或者 客观上可鉴别的接受给药者好转、内皮细胞血管化减少或者血管生成 率降低，由临床医师或其他有资格的观察人员进行记录。

术语“治疗癌症”、“疗法”等一般表示患有癌症的动物的任何 好转，其中该好转可以归因于用本发明化合物治疗。该好转可以是主 观性的或客观性的。例如，如果动物是人，患者可以把精力或活力好 转或者疼痛减轻记录为主观性症状好转或疗法响应。作为替代选择， 临床医师可以基于身体检查、实验室参数、肿瘤标志物或放射照相发 现而注意到肿瘤大小或肿瘤负荷的减少。一些可供临床医师观察疗法 响应的实验室迹象包括测试的正常化，例如白细胞数、红细胞数、血 小板数、红细胞沉降率和各种酶水平。另外，临床医师可以观察到可 检测的肿瘤标志物减少。作为替代选择，可以利用其他测试来评价客 观性好转，例如声波图、核磁共振测试和正电子发射测试。

“抑制肿瘤细胞生长”可以借助任何公认的测量肿瘤细胞生长是 否已被延缓或消除的方法加以评价。这包括直接观察和间接评价，例 如如上所讨论的主观症状或客观体征。

术语“烷基”在本文中用于表示分支或不分支的、饱和或不饱和 的、具有1-12个碳、优选1-6个碳的一价烃原子团。当烷基具有1 -6个碳原子时，它被称为“低级烷基”。适合的烷基原子团例如包 括甲基、乙基、正丙基、异丙基、2-丙烯基(或烯丙基)、正丁基、 叔丁基、异丁基(或2-甲基丙基)等。正如本文所用的，该术语涵盖 “取代的烷基”。

“取代的烷基”表示如刚才所述的烷基，包括一个或多个官能团， 例如低级烷基、芳基、酰基、卤素(即烷基卤，例如CF3)、羟基、氨 基、烷氧基、烷基胺、酰基氨基、酰氧基、芳氧基、芳氧基烷基、巯 基、饱和与不饱和的环状烃、杂环等。这些基团可以连接于烷基部分 的任何碳。

术语“S-烷基”在本文中用于表示基团-SR，其中R是如本文所定 义的低级烷基或取代的低级烷基。

术语“芳基”在本文中用于表示芳族取代基，它可以是单一的芳 族环或多个芳族环，它们稠合在一起、共价连接或者与公共的基团连 接，例如亚甲基或亚乙基部分。公共的连接基团也可以是羰基，如二 苯酮中的。芳族环可以包括苯基、萘基、联苯、二苯甲基和二苯酮。 术语“芳基”涵盖“芳基烷基”。

“取代的芳基”表示如刚才所述的芳基，包括一个或多个官能团， 例如低级烷基、酰基、卤素、烷基卤(例如CF3)、羟基、氨基、烷氧 基、烷基胺、酰基氨基、酰氧基、巯基、饱和与不饱和的环状烃，它 们与芳族环稠合、共价连接或者与公共的基团连接，例如亚甲基或亚 乙基部分。连接基团也可以是羰基，例如环己基苯基酮中的。术语“取 代的芳基”涵盖“取代的芳基烷基”。

术语“卤素”在本文中用于表示氟、溴、氯和碘原子。

术语“羟基”在本文中用于表示基团-OH。

术语“氨基”在本文中用于表示基团-NRR’，其中R和R’可以 独立地是氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基或酰基。

术语“硝基”在本文中用于表示基团-NO2。

术语“烷氧基”在本文中用于表示-OR基团，其中R是低级烷基、 取代的低级烷基、芳基、取代的芳基、芳基烷基或取代的芳基烷基， 其中该烷基、芳基、取代的芳基、芳基烷基和取代的芳基烷基是如本 文所述的。适合的烷氧基原子团例如包括甲氧基、乙氧基、苯氧基、 取代的苯氧基、苄氧基、苯乙氧基、叔丁氧基等。

术语“链烯基”在本文中用于表示不饱和的支链、直链或环状一 价烃原子团，具有至少一条碳-碳双键。该原子团可以是关于双键的顺 式或反式构型。适合的链烯基原子团例如包括乙烯基、丙烯基、异丙 烯基、环丙烯基、丁烯基、异丁烯基、环丁烯基、叔丁烯基、戊烯基、 己烯基等。

术语“炔基”在本文中用于表示不饱和的支链、直链或环状一价 烃原子团，具有至少一条碳-碳叁键。适合的炔基原子团例如包括乙炔 基、丙炔基、丁炔基、异丁炔基、戊炔基、己炔基等。

术语对映体在本文中用于表示分子实体对之一，它们是彼此的镜 像，并且是不可重叠的。

B.化合物

本发明涉及这样的发现，式I化合物抑制癌细胞生长，可用于治 疗癌症疾病。式I化合物具有下列通式：

式I

其中R1、R2、R3、R4、R5和X1、X2和X3是如上所定义的。在优 选的本发明实施方式中，式I化合物是橄榄苦苷，如下式II所示：

用在本发明中的化合物橄榄苦苷可以容易地从植物中获得，包括 但不限于橄榄树Olea europaea L.、女贞树Ligustrum obtusifolium (木犀科)。

利用体外和体内筛选测定法能够容易地鉴别适合用在本发明方法 中的化合物。这类测定法可以筛选特定化合物体外与体内抑制癌细胞 生长、移动与侵袭或肿瘤产生的能力。作为替代选择，这类测定法可 以筛选特定化合物抑制引起细胞圆润的细胞骨架的能力。例如，下面 有详细描述的基质胶侵袭测定法可以用于筛选给定化合物抑制细胞侵 袭细胞外基质的能力。这种类型的细胞侵袭是癌症建立和生长的必需。 在如本发明所进行的基质胶侵袭测定法中，将癌细胞接种在基质胶上， 后者是细胞外基质。使细胞消化和侵袭凝胶。已成功侵袭基质胶的细 胞黏附于滤器下侧，滤器含有孔。利用显微镜聚焦于含有细胞的腔室 的各个平面，可以进行细胞侵袭基质胶的监测。在测定终点，完全除 去基质胶，将滤器固定，染色，以显露已成功穿透基质胶层的细胞。 基于滤器上的大量细胞数，可以评估化合物对细胞侵袭性的抑制作用 结果。这种测定法可以用于评估本发明化合物的抗癌性质。

在另一种测定法中，一些类型的细胞当生长在高浓度基础膜基质 (基质胶＞10mg/ml)上时在48小时内经历一系列形态变化。这使研 究人员可以通过加入到培养物中的化合物对这些变化的作用剖析它们 的影响。在此过程期间，细胞的形态从平坦的两维细胞变为三维管样 网络。不过，所生成的管是不稳定的，最终在48小时内因退缩而瓦解。 加入到所生成的管中导致细胞因圆润而破裂的化合物被认为作用于细 胞骨架。这种测定法可以用于评估化合物在本发明中对细胞骨架的破 坏作用。将为本领域技术人员所显而易见的是，本发明化合物能够被 单独给药，采取药学上可接受的盐和/或药物组合物的形式。

C.本发明化合物的用途

正如上面所解释的，本发明涉及这样的发现，式I化合物或其优 选实施方式橄榄苦苷或其水解产物可用于抑制癌细胞存活、生长、移 动和侵袭，继而可用于治疗与失控的和失调的癌生长有关的疾病。因 此，在一种实施方式中，本发明提供抑制失控与失调癌细胞的方法， 该方法包含使细胞与有效量、即抗癌量的式I化合物或其优选实施方 式橄榄苦苷或其水解产物接触。在另一种实施方式中，本发明提供抑 制癌细胞的方法，该方法包含使含有癌细胞的细胞、组织或器官与有 效量式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其水解产物接触。在当 前优选的实施方式中，所述细胞位于动物受治疗者中。

本发明涉及治疗与所不需要的和失控的癌症有关的疾病的方法， 该方法包含对动物给以抗癌的式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷 或其水解产物，用量、即剂量足以抑制癌症。式I化合物或其优选实 施方式橄榄苦苷或其水解产物抑制癌症和/或癌疾病所需的特定剂量 将依赖于病症的严重性、给药的途径和有关因素，这将取决于主治医 师。一般而言，被公认的和有效的每日剂量将是足以有效抑制癌症和/ 或癌疾病的量。在这一点上，本发明的方法将非常类似于本申请人的 未决美国专利申请No.10/153,003，题为抑制血管生成的方法，于2002 年5月22日提交，现处于颁布过程。在这一点上，申请人特意将美国 专利申请No.10/153,003的教导结合在此供参考。

由本发明所提供的治疗方法是这样实施的，对需要的动物给以一 定剂量的式I化合物或其优选实施方式或其水解产物(或者其药学上 可接受的盐或溶剂化物)，所述剂量有效抑制癌症和/或癌疾病。术语 “抑制”在本文中用于包括其被公认的含义，这包括预防性处置人类 受治疗者免于获得癌症和/或癌疾病，制止和/或治疗现有癌症和/或癌 疾病。因此，本发明包括医学治疗性和/或预防性处置，视情况而定。

本发明的方法可以用于治疗多种癌疾病。已知能够用本发明方法 治疗的癌症疾病包括但不限于成人急性成淋巴细胞性白血病；儿童急 性成淋巴细胞性白血病；成人急性骨髓性白血病；肾上腺皮质癌；儿 童肾上腺皮质癌；AIDS相关性淋巴瘤；AIDS相关性恶性肿瘤；肛门癌； 儿童小脑星形细胞瘤；儿童大脑星形细胞瘤；肝外胆管癌；膀胱癌； 儿童膀胱癌；骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤型骨癌；儿童脑干神经胶质 瘤；成人脑瘤；儿童脑干神经胶质瘤型脑瘤；儿童小脑星形细胞瘤型 脑瘤；儿童大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤型脑瘤；儿童室管膜瘤型 脑瘤；儿童成神经管细胞瘤型脑瘤；儿童幕上原神经外胚层肿瘤型脑 瘤；儿童视路与下丘脑神经胶质瘤型脑瘤；儿童脑瘤(其他)；乳腺 癌；乳腺癌与妊娠；儿童乳腺癌；男性乳腺癌；儿童支气管腺瘤/类癌； 儿童类癌瘤；胃肠类癌瘤；肾上腺皮质癌；胰岛细胞癌；未知原发性 癌；原发性中枢神经系统淋巴瘤；儿童小脑星形细胞瘤；儿童大脑星 形细胞瘤/恶性神经胶质瘤；宫颈癌；儿童癌症；慢性淋巴细胞性白血 病；慢性骨髓性白血病；慢性脊髓增生症；腱鞘明细胞肉瘤；结肠癌； 儿童结肠直肠癌；皮肤T-细胞淋巴瘤；子宫内膜癌；儿童室管膜瘤； 卵巢上皮癌；食道癌；儿童食道癌；尤因氏瘤家族；儿童颅外胚细胞 瘤；生殖腺外胚细胞瘤；肝外胆管癌；眼内黑素瘤型眼癌；成视网膜 细胞瘤型眼癌；胆囊癌；胃癌；儿童胃癌；胃肠类癌瘤；儿童颅外胚 细胞瘤；生殖腺外胚细胞瘤；卵巢胚细胞瘤；妊娠滋养层瘤；儿童脑 干神经胶质瘤；儿童视路与下丘脑神经胶质瘤；毛细胞白血病；头颈 癌；成人(原发性)肝细胞(肝)癌；儿童(原发性)肝细胞(肝) 癌；成人何杰金氏淋巴瘤；儿童何杰金氏淋巴瘤；妊娠期何杰金氏淋 巴瘤；下咽部癌；儿童下丘脑与视路神经胶质瘤；眼内黑素瘤；胰岛 细胞癌(内分泌胰腺)；卡波济氏肉瘤；肾癌；喉癌；儿童喉癌；成 人急性成淋巴细胞性白血病；儿童急性成淋巴细胞性白血病；成人急 性骨髓性白血病；儿童急性骨髓性白血病；慢性淋巴细胞性白血病； 慢性骨髓性白血病；毛细胞白血病；唇与口腔癌；成人(原发性)肝 癌；儿童(原发性)肝癌；非小细胞性肺癌；小细胞性肺癌；成人急 性成淋巴细胞性白血病；儿童急性成淋巴细胞性白血病；慢性淋巴细 胞性白血病；AIDS相关性淋巴瘤；中枢神经系统(原发性)淋巴瘤； 皮肤T-细胞淋巴瘤；成人何杰金氏淋巴瘤；儿童何杰金氏淋巴瘤；妊 娠期何杰金氏淋巴瘤；成人非何杰金氏淋巴瘤；儿童非何杰金氏淋巴 瘤；妊娠期非何杰金氏病；原发性中枢神经系统淋巴瘤；瓦尔登斯特 伦氏巨球蛋白血；男性乳腺癌；成人恶性间皮瘤；儿童恶性间皮瘤； 儿童成神经管细胞瘤；黑素瘤；眼内黑素瘤；美克耳氏细胞癌；恶性 间皮瘤；隐性原发性转移性鳞状颈癌；儿童多发性内分泌瘤形成综合 征；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤形成；蕈样真菌病；脊髓发育不良综合征； 慢性骨髓性白血病；儿童急性骨髓性白血病；多发性骨髓瘤；慢性脊 髓增生症；鼻腔与鼻窦癌；鼻咽癌；儿童鼻咽癌；成神经细胞瘤；成 人非何杰金氏淋巴瘤；儿童非何杰金氏淋巴瘤；妊娠期非何杰金氏淋 巴瘤；非小细胞性肺癌；儿童口癌；口腔与唇癌；口咽癌；骨肉瘤/ 恶性骨纤维组织细胞瘤；儿童卵巢癌；卵巢上皮癌；卵巢胚细胞瘤； 卵巢低恶性潜在肿瘤；胰腺癌；儿童胰腺癌；胰岛细胞性胰腺癌；副 鼻窦与鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；嗜铬细胞瘤；儿童松果体与幕 上原神经外胚层瘤；垂体瘤；浆细胞瘤形成/多发性骨髓瘤；胸膜肺胚 细胞瘤；妊娠与乳腺癌；妊娠与何杰金氏淋巴瘤；妊娠与非何杰金氏 淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；成人原发性肝癌；儿童原发性 肝癌；前列腺癌；直肠癌；肾细胞(肾)癌；儿童肾细胞癌；肾盂与 输尿管过渡型细胞癌；成视网膜细胞瘤；儿童横纹肌肉瘤；唾液腺癌； 儿童唾液腺癌；尤因氏瘤家族肉瘤；卡波济氏肉瘤；骨的肉瘤(骨肉 瘤)/恶性纤维组织细胞瘤；儿童横纹肌肉瘤；成人软组织肉瘤；儿童 软组织肉瘤；Sezary综合征；皮肤癌；儿童皮肤癌；皮肤癌(黑素瘤)； 美克耳氏细胞性皮肤癌；小细胞性肺癌；小肠癌；成人软组织肉瘤； 儿童软组织肉瘤；隐性原发性转移性鳞状颈癌；胃癌；儿童胃癌；儿 童幕上原神经外胚层瘤；皮肤T-细胞淋巴瘤；睾丸癌；儿童胸腺瘤； 胸腺瘤与胸腺癌；甲状腺癌；儿童甲状腺癌；肾盂与输尿管过渡型细 胞癌；妊娠滋养层瘤；成人未知原发性部位癌；儿童未知原发性部位 癌；儿童不寻常癌；输尿管与肾盂过渡型细胞癌；尿道癌；子宫内膜 癌；子宫肉瘤；阴道癌；儿童视路与下丘脑神经胶质瘤；外阴癌；瓦 尔登斯特伦氏巨球蛋白血；维耳姆斯氏瘤。

本发明的方法也可以用于赋予动物细胞以抗感染性。通过破坏动 物细胞的细胞骨架，橄榄苦苷赋予细胞对病毒、细菌和寄生物感染的 抗性。

与水疱、溃疡形成、结痂和瘢痕形成有关的疾病也可以用本发明 的方法来治疗。引起溃疡形成和瘢痕形成的疾病包括但不限于化学品、 热与放射性灼伤、擦伤与割伤、创伤、纤维瘤、囊肿、瘢痕疙瘩、痤 疮、胃炎、阴道、宫颈、子宫、卵巢、胃、角膜、视网膜、糖尿病、 AIDS相关性瘢痕形成、回肠与结肠溃疡、间质性肺疾病、人纤维变性 肺疾病、人肾疾病、肾小球性肾炎、与系统性狼疮有关的肾炎、腹膜 纤维变性、囊性纤维变性、肝纤维变性、心肌纤维变性、肺纤维变性、 Grave氏眼病、药物诱发的麦角中毒、心血管疾病、癌症、阿尔茨海 默氏病、瘢痕形成、硬皮病、Li-Fraumeni综合征中的成胶质细胞瘤、 散发性成胶质细胞瘤、骨髓性白血病、急性骨髓性白血病、脊髓发育 不良综合征、脊髓增生综合征、妇科学癌症、卡波济氏肉瘤、汉森氏 病、或不包括胶原性结肠炎的炎性肠疾病、肾纤维变性、腹部粘连、 辐射诱发的纤维变性、闭塞性细支气管炎、硅肺损伤、或特农氏囊纤 维增生、或者血管胎记、纹身与创伤性瘢痕形成的激光处置。

在特别优选的实施方式中，本发明涉及与活性免疫疗法(例如肿 瘤疫苗接种)联合给以式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷的方法。

而且，按照上述方法，所要治疗的动物受治疗者包括但不限于人、 实验室动物、宠物和牲畜。

D.药物制剂/给药途径

在本发明的方法中，式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其 水解产物可以被单独递送或给药至动物，例如人类患者，采取药学上 可接受的盐或药物组合物的形式，在所述组合物中将治疗有效量的化 合物与适合的载体或赋形剂混合，所述有效量例如有效降低、压制或 抑制癌症或者导致与癌疾病有关的症状改善的剂量。

用在本发明方法中的式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其 水解产物可以被结合到多种制剂中，供治疗性给药。更确切地，式I 化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其水解产物可以与适当的药学上 可接受的载体或稀释剂联合配制成药物组合物，可以配制成固体、半 固体、液体或气态形式的制备物，例如片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、 颗粒剂、锭剂、凝胶剂、浆液、软膏剂、溶液、栓剂、注射剂、吸入 剂和气雾剂。因此，化合物的给药可以以不同方式实现，包括口、颊、 直肠、肠胃外、腹膜内、真皮内、透皮、intracheal给药等。而且， 所述化合物可以以局部而非全身方式给药，例如将该化合物直接注射 至实体肿瘤内，经常在药库或缓释制剂中。另外，所述化合物可以在 靶药物递送系统中给药，例如涂有肿瘤特异性抗体的脂质体。这类脂 质体将被靶向于肿瘤，并且被肿瘤选择性吸收。

另外，式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其水解产物可以 与普通的赋形剂、稀释剂或载体一起配制，压制成片，或者配制成酏 剂或溶液，以方便口服给药，或者通过肌内或静脉内途径给药。该化 合物可以被透皮给药，可以配制成缓释剂型等。

式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其水解产物可以被单独 或彼此联合给药，或者它们可以与其他已知化合物联合使用(例如其 他抗癌药或其他药物，例如AZT、抗炎剂、抗生素、皮质类固醇、维 生素等)。例如，式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其水解产 物可以与其他已知抗血管生成化疗剂或抗瘤形成剂一起用在联合疗法 中(例如长春花属生物碱、抗生素、抗代谢剂、铂配位复合物等)。 例如，式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其水解产物可以与下 列药物一起用在联合疗法中：长春花属生物碱化合物，例如长春花碱、 长春新碱、紫杉醇等；抗生素，例如亚德里亚霉素(阿霉素)、放线 菌素(放线菌素D)、柔红霉素(道诺霉素、红比霉素)、博莱霉素、 plicamycin(mithramycin)和丝裂霉素(丝裂霉素C)等；抗代谢剂， 例如甲氨蝶呤、阿糖胞苷(AraC)、azauridine、azaribine、氟脱氧尿 苷、脱氧助间型霉素、巯基嘌呤等；或者铂配位复合物，例如顺铂 (cis-DDP)、卡铂等。另外，本领域技术人员将领会到，本发明化合物 可以与其他已知抗血管生成化疗剂或抗瘤形成化合物一起用在联合疗 法中。在药物剂型中，所述化合物可以以它们药学上可接受的盐形式 给药，或者它们也可以单独或适当配合使用，以及与其他药学活性化 合物联合使用。

本文所述药物组合物可以以本领域技术人员已知的方式加以制 造，也就是借助常规的混合、溶解、造粒、制锭、研碎、乳化、包封、 包埋或冻干过程。下列方法和赋形剂仅供例证，决非限制。

就注射而言，化合物可以这样被配制成制备物，将它们溶解、悬 浮或乳化在水性或非水性溶剂中，例如植物油或其他相似的油、合成 脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸酯或丙二醇；如果需要的话，还有常规添 加剂，例如增溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂。优 选地，本发明化合物可以被配制在水溶液中，优选生理学上可相容的 缓冲液，例如汉克斯氏溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液。就透粘 膜给药而言，在制剂中使用适合于所要输注的屏障的渗透剂。这类渗 透剂是本领域公知的。

就口服给药而言，通过与本领域熟知的药学上可接受的载体混合， 可以容易地配制式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其水解产 物。这类载体使所述化合物能够被配制成片剂、丸剂、锭剂、胶囊剂、 乳剂、亲脂性与亲水性悬液、液体、凝胶剂、糖浆剂、浆液、悬液等， 供所治疗的患者口服摄取。口用药物制备物可以这样得到，将所述化 合物与固体赋形剂混合，可选地研磨所得混合物，加工混合物为颗粒， 如果需要的话，在加入适合的助剂后得到片剂或锭剂芯。适合的赋形 剂确切地有填充剂，例如糖类，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖 醇；纤维素制备物，例如玉米淀粉、小麦淀粉、水稻淀粉、马铃薯淀 粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素 钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要的话，可以加入崩解剂，例 如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或者藻酸或其盐，例如藻酸钠。

锭剂芯带有适合的包衣。为此，可以使用浓糖溶液，其中可以可 选地含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、carbopol凝胶、聚乙二 醇和/或二氧化钛、漆溶液和适合的有机溶剂或溶剂混合物。可以向片 剂或锭剂包衣加入染料或色素，供鉴别或者区分活性化合物剂量的不 同组合。

可以口用的药物制备物包括由明胶制成的推入-配合式胶囊剂以 及由明胶和增塑剂制成的软密封胶囊剂，所述增塑剂例如甘油或山梨 糖醇。所述推入-配合式胶囊剂可以含有活性成分与下列成分的混合 物：填充剂，例如乳糖；粘合剂，例如淀粉；和/或润滑剂，例如滑石 或硬脂酸镁；和可选的稳定剂。在软胶囊剂中，可以将活性化合物溶 解或悬浮在适合的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。 另外，可以加入稳定剂。所有口服给药制剂的剂量都应当适合于这类 给药。就颊给药而言，所述组合物可以采取片剂或糖锭剂的形式，按 常规方式配制。

就吸入给药而言，用于本发明的化合物适宜以气雾喷雾剂的方式 从加压包装或雾化器中递送出来，使用适合的推进剂，例如二氯二氟 甲烷、三氯氟代甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合的气体， 或者从无推进剂的干粉吸入器中递送出来。在加压气雾剂的情况下， 提供计量递送的阀门可以决定剂量单元。用在吸入器或吹入器中的例 如明胶胶囊和药筒可以被配制成含有化合物与适合粉末基质的混合 物，所述基质例如乳糖或淀粉。

所述化合物可以被配制成借助注射供肠胃外给药，例如大丸剂注 射或连续输注。注射制剂可以呈现单元剂型，例如在安瓿或多剂容器 中，含有所加入的防腐剂。所述组合物可以采取在油性或水性载体中 的悬液、溶液或乳液的形式，可以含有配制剂，例如悬浮剂、稳定剂 和/或分散剂。

供肠胃外给药的药物制剂包括活性水溶性形式的活性化合物的水 溶液。另外，可以将活性化合物的悬液制成适当的油性注射悬液。适 合的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油，例如芝麻油，或合成脂肪酸酯， 例如油酸乙酯或甘油三酯，或者脂质体。水性注射悬液可以含有增加 悬液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。可选地， 所述悬液也可以含有适合的稳定剂或者增加所述化合物溶解度的试 剂，以便制备高度浓缩的溶液。作为替代选择，所述活性成分可以是 粉末形式，供使用前用适合的载体再生，例如无菌无热原的水。

所述化合物也可以被配制在直肠组合物中，例如栓剂或保留灌肠 剂，例如含有常规栓剂基质，例如可可脂、碳蜡、聚乙二醇或其他甘 油酯，所有它们都在体温下融化，在室温下固化。

除了前述制剂以外，所述化合物也可以被配制成药库制备物。这 类长效制剂可以借助植入(例如皮下或肌内)或者肌内注射给药。因 而例如，该化合物可以与适合的聚合性或疏水性材料(例如在可接受 的油中配制成乳剂)或者离子交换树脂一起配制，或者配制成难溶性 衍生物，例如难溶性盐。作为替代选择，可以采用疏水性药物化合物 的其他递送系统。脂质体和乳剂是熟知的疏水性药物递送载体的实例。

另外，可以采用标志物在异常肿瘤脉管系统上的靶向。靶向部分 当与毒性药物或放射性同位素偶联时，将根据需要起到集中药物的作 用。也可以使用肿瘤缔合性血管标志物的配体。例如，可以采用细胞 粘附分子，它与肿瘤血管元件表面标志物结合。也可以使用脂质体和 其他药物递送系统，尤其如果它们的表面含有使载体优先指向肿瘤脉 管系统的配体。脂质体提供附加的优点，即屏蔽药物与大多数正常组 织，由此减少很多化合物的固有毒性。当包以使吞噬细胞摄取最小化 的聚乙二醇(PEG)(即隐身脂质体)和肿瘤脉管系统特异性靶向部分时， 脂质体提供更长的血浆半衰期、更低的非靶组织毒性和优于未靶向药 物的功效。其他靶向策略包括但不限于ADEPT(指向抗体的酶前体药 物疗法)、GDEPT(指向基因的EPT)和VDEPT(指向病毒的EPT)。 在ADEPT中，无活性前体药物靶向于肿瘤块受到抗肿瘤缔合性标志物 抗体的影响。肿瘤之中或附近的酶环境将前体药物转化为活性毒性剂， 后者然后作用于肿瘤组织。类似地，在GDEPT和VDEPT中，分别利用 肿瘤部位上的不同基因表达或病毒靶向将前体药物活化为它的活性毒 性形式。其他策略包括靶向不同表达的基因、酶或表面标志物，它们 出现在肿瘤缔合性脉管系统上，以实现肿瘤生长的控制。利用上述方 法，式I化合物或其优选实施方式橄榄苦苷或其水解产物可以被靶向 于肿瘤脉管系统，以实现肿瘤进展的控制，或靶向于其他有关部位(例 如内皮细胞)。

也可以采用某些有机溶剂，例如二甲基亚砜。另外，可以利用缓 释系统递送所述化合物，例如含有治疗剂的固体疏水性聚合物的半渗 透性基质。各种类型的缓释材料都已经是成熟的，是本领域技术人员 所熟知的。根据它们的化学属性，缓释胶囊剂可以释放所述化合物长 达几周至100天以上。

所述药物组合物也可以含有适合的固体或凝胶相载体或赋形剂。 这类载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖类、 淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物，例如聚乙二醇。

适合用在本发明中的药物组合物包括这样的组合物，其中含有治 疗有效量的活性成分。组合物的给药量当然将依赖于所治疗的受治疗 者、受治疗者的体重、病患的严重性、给药的方式和主治医师的判断。 有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其鉴于本文所 提供的详细内容。

当前，期望用在本发明实施中的化合物的治疗有效量无论何处可 以包含大约0.030g至20.000g这类化合物每千克受治疗者体重。

F.实施例

本发明将借助具体实施例加以详细描述。下列实施例仅供阐述目 的，不打算以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易认识到多 种可以改变或修正的非关键性参数，以得到本质上相同的结果。

实施例1

本例阐述橄榄苦苷在基质胶侵袭测定法中的抗癌性质。基质胶侵 袭测定法的终点是侵袭并消化基质胶而到达腔室另一端上滤器的细胞 数的测定。这样一种量化将借助癌细胞消化和侵袭细胞外基质的能力 阐述它们的侵袭性。因橄榄苦苷的施用而发现滤器上的细胞数减少， 即表明它的抗癌性质。

利用如附图所示Boyden腔室(图1A)，我们存放基质胶的顶层， 浓度10mg/ml。利用最大侵袭性癌(结肠)细胞系，我们将细胞接种 在含有或没有橄榄苦苷的基质胶顶层。允许细胞移行穿过凝胶达3天， 在此期间对细胞层和滤器平面照相。在实验终点，除去基质胶层，将 附着在滤器下侧的细胞固定，染色，照相。用0.1％橄榄苦苷处理过的 细胞完全停止侵袭凝胶和黏附于滤器底侧。含有未处理细胞的侵袭腔 室如图1B和图1C所示，分别对细胞和滤器平面照相。从照片明显看 出，在滤器的焦点平面可以见到细胞阴影，表明它们接近滤器和移动 穿过基质胶层。相反，含有用橄榄苦苷处理过的细胞的侵袭腔室中的 滤器平面照片(图1F)不含有细胞阴影。事实上，对细胞是在基质胶 中高得多的平面上照相的，似乎不是可移动的(图1E)。已经移行穿 过基质胶层并且黏附于滤器下侧的细胞如图1D和图1G所示。从含有 橄榄苦苷的腔室所得滤器(图1G)缺乏细胞，表明没有细胞到达滤器。 来自未处理腔室的滤器含有穿透基质胶并黏附于滤器的细胞(图1D)。 这类结果说明，橄榄苦苷是有效的癌细胞侵袭抑制剂，因而被视为抗 癌化合物。

实施例2

本例阐述橄榄苦苷在细胞移行测定法中的抗癌性质。细胞移行测 定法的终点是移行以封闭在培养平皿中所产生的伤口的细胞数的测 定。这样一种量化将借助癌细胞完全封闭这样一种伤口的能力阐述它 们的移动性。因橄榄苦苷的施用而发现伤口区域中的细胞数减少，即 表明它的抗癌性质。

在经典伤口测定法中，将细胞培养至汇合，然后用无菌木条划伤， 形成一条路的样子。然后将细胞培育，移行穿过这条路，以修复培养 物中的伤口。在本实验中，我们使用肾腺癌细胞。如图(2A)、(2B)、 (2C)、(2D)所示未处理细胞已经成功地封闭伤口区域。相形之下，如 图(2E)、(2F)、(2G)、(2H)所示用0.01％橄榄苦苷处理过的细胞没有 有效地封闭伤口。再次显示橄榄苦苷抑制癌细胞的移动性，具有抗癌 性质。

上述细胞移行测定法的一种变化是利用更广泛的受伤区域进行伤 口测定法，形成转角或弯曲边缘(图3)。在本实验中，使恶性黑素 瘤细胞生长至汇合，然后利用木条划伤，方式如上所述。图3A所示为 未处理细胞，在平板上沿各个方向移行。用0.01％橄榄苦苷溶液处理 过的细胞的移行(图3B)被完全终止了。在本伤口测定法中可以清楚 地见到伤口边缘，用于评估移行细胞的前进。这再次表明橄榄苦苷的 抗癌性质。

上述实验的另一种变化是将黑素瘤细胞平板接种成圆圈(图4)。 已处理细胞(0.01％橄榄苦苷)没有移行至指定圆圈的外面(图4A)。 不过，未处理细胞向外径向移行，并且覆盖平板(图4B)。这类结果 强烈提示橄榄苦苷的抗癌性质。

实施例3

失调的细胞生长是癌症的标记。本例阐述橄榄苦苷在细胞生长测 定法中的抗癌性质。将代表最大侵袭性癌的癌细胞等量接种在含有不 同浓度橄榄苦苷的平板上。5天后，利用MTS测定法评估细胞数，光 密度(490nm)值如图片y轴所示(图5)。x轴代表橄榄苦苷的浓度。 这些代表在微量平板读数器上所进行的真实而原始的统计。在全部所 研究的癌症中，橄榄苦苷有效地抑制生长。

实施例4

本例借助管破裂测定法阐述橄榄苦苷对细胞骨架的影响。在本测 定法中，将细胞平板接种在基质胶型管状网络上，后者在24-48小时 内瓦解成丛(图6A，顶行)。管瓦解过程的特写证明它因管的退缩而 发生，由此结节(管交叉处)更接近于彼此而合并(图6A，底行)。 各细胞仍然延长遍及各处。这种缓慢的细胞移动和收缩过程(24-48 小时)牵涉主动的细胞骨架再生。向所进行的管加入橄榄苦苷通过发 生在2小时内的快速过程就地圆润各细胞(图6B)，破坏管状网络。 圆润的细胞不会运动，无期限地停留在原位。因而，通过破坏细胞骨 架并防止其再生而阻挠细胞移动性，使退缩过程中止。橄榄苦苷的这 种性质受到葡萄糖的抑制，表明橄榄苦苷通过葡萄糖转运蛋白进入细 胞，葡萄糖竞争这种转运(图7)。

实施例5

本例阐述橄榄苦苷在细胞移行测定法中对伤口愈合的影响。在本 例中，证明了橄榄苦苷对细胞骨架和细胞圆润的影响。本例也阐述橄 榄苦苷对细胞影响的可逆性，提示了微小的副作用。

使兔皮肤成纤维细胞生长至汇合的单细胞层，随后用无菌木条划 伤。然后培育细胞，允许修复培养物中的伤口。未处理细胞成功移行 穿过受伤区域(图8A)。图8C所示用橄榄苦苷(0.01％)处理过的细胞 被有效抑制了。经过橄榄苦苷处理的细胞的特写显示单细胞层的不连 续性(图8D和8E)，这是因为受到橄榄苦苷对细胞骨架的影响，细 胞圆润。相反，未处理细胞显得平坦(图8B)。洗去细胞的橄榄苦苷， 逆转圆润过程。细胞变平，补偿单层中的不连续性(H)，开始从伤口边 缘移行(图8F和8G)。

本发明的其他变化和改进也可以为本领域普通技术人员所显而易 见。因而，本文所描述和阐述的部分和步骤的特定组合打算仅代表本 发明的某些实施方式，不打算充当属于本发明精神和范围的替代装置 和方法的限制。在这一点上，期望本发明的方法可以进一步发现超出 本文所公开以及另外本申请人的未决美国专利申请No.10/153,003 所公开和要求保护的治疗应用。

相关申请的交叉参考

本申请是一份部分继续申请，要求美国专利申请No.10/657,414 的优先权，题为抑制血管生成的方法，于2003年9月8日提交，它是 美国专利申请No.10/153,003的继续申请，题为抑制血管生成的方法， 于2002年5月22日提交，现已颁布为美国专利No.6,632,798，还 要求美国临时专利申请No.60/431,780的优先权，题为抑制癌症的方 法，于2002年12月9日提交。

备注：联邦资助的研究/开发：不可用