稳定的药物组合物，其含有至少一种单克隆抗体和至少一
种包含疏水性取代基的两亲性多糖
[0001] 由于其在
治疗某些癌症和牵涉大量患者的一定数目的慢性
疾病方面的特殊的效
力，这些年来单克隆抗体取得了令人震惊的成功。在这些疾病中，可以提及各种不同形式的癌症，
前列腺癌、
乳腺癌、肝癌，还有其他病理学状况例如
风湿性关节炎、某些感染性疾病、年龄相关的黄斑变性，等等。
[0002] 从此之后，该家族的几种化合物成为了用于这些病理学状况的参考药物。
[0003] 由于确立了单克隆抗体的治疗益处，因而许多
生物制药公司致力于开发可以具有优异的治疗效果而同时具有更小的
副作用的新型化合物。
[0004] 然而，这些单克隆抗体大多数必须以重大的量进行施用以便达到所寻求的治疗效果。
[0005] 主要的困难在于获得这样的药物组合物，其包含所需量的
蛋白质，其中具有足够的贮存
稳定性以便保证随时间过去的其效力并避免可能具有副作用(特别是免疫原性效应)的副产物的形成。
[0006] 这是因为，观察到这些作为高分子量蛋白质的单克隆抗体在
温度或机械
应力的作用下容易地发生聚集。这在包括诸如阿瓦斯丁(Avastin)和爱比妥(Erbitux)的产品(它们目前已商业化)上观察到。它们的利用需要在使用前进行过滤，以便去除沉淀出的颗粒。显而易见的是，在这些条件下，无法检查所施用的活性物质的量以及未被过滤掉的杂质的性质和量。
[0007] 为了获得具有高浓度的单克隆抗体的稳定药物组合物，已进行了许多尝试。
[0008] 将提及例如：
[0009] -以CHUGAI名义的
申请NZ534542，它涉及抗-白介素6受体或抗-HM1.24的抗体的稳定制剂，其包含作为稳定剂的糖，所述糖为非还原糖，
二糖或三糖，
[0010] -以GENENTECH名义的申请WO2006/044908，它描述了在组
氨酸缓冲液中的单克隆抗体的稳定制剂，所述制剂尤其可包含二糖，尤其是海藻糖和
蔗糖，
[0011] -以Medimune名义的申请WO2008/121615，它涉及抗-干扰素抗体的制剂，所述制剂尤其包含组氨酸/
柠檬酸盐缓冲液类型的缓冲液等，但也包含海藻糖或蔗糖。
[0012] 所进行的大部分工作局限于，对于给定的抗体而言，寻找对于保留生物学活性来说有效的缓冲液。因此，这些逐一提供的解决方案并不是可推广的，并且进一步而言，它们经常显得是无效的，如对于许多商业产品可以观察到的那样。
[0013] 通过采用同时包含
羧酸盐基团和疏水性取代基的多糖，本
发明使得能够解决单克隆抗体的稳定性的问题。
[0014] 特别地，本
申请人证明，所述同时包含羧酸盐基团和疏水性基团的经修饰的多糖：
[0015] -使抗体稳定，针对聚集和沉淀，
[0017] -有助于溶解。
[0018] 一般而言，本发明使得能够解决单克隆抗体的稳定性的问题。本发明涉及包含至少一种单克隆抗体和至少一种两亲性多糖的稳定的药物组合物。
[0019] 例如，稳定的组合物将是包含单克隆抗体和两亲性多糖的组合物，其中在使用浓度下在水溶液中在56℃下温育48小时后没有觉察出任何聚集。
[0020] 在一个实施方案中，所述两亲性多糖选自包含羧基官能团的多糖，所述羧基官能团中至少一个被标注为Hy的至少一个疏水性基团取代：
[0021] ●所述疏水性基团(Hy)嫁接或连接至该阴离子多糖：
[0022] -要么通过官能团F′，所述官能团F′由于疏水性化合物的
反应性官能团与该阴离子多糖的羧基官能团之间的偶联而产生，
[0023] -要么通过连接臂R，所述连接臂R通过键F而与该多糖相连接，所述键F由于连接臂前体R′的反应性官能团与该阴离子多糖的羧基官能团之间的偶联而产生，并且所述疏水性基团(Hy)通过官能团G而与连接臂R相连接，所述官能团G由于疏水性化合物的反应性官能团与连接臂前体R′的反应性官能团之间的偶联而产生，
[0024] ●该阴离子多糖的未取代的羧基官能团以阳离子的羧酸盐形式存在，所述阳离子+ +优选地为
碱金属阳离子，例如Na 或K，
[0025] ●F为酰胺官能团、酯官能团、硫酯官能团或酸酐官能团，
[0026] ●F′为酰胺官能团、酯官能团、硫酯官能团或酸酐官能团，
[0027] ●G为酰胺官能团、酯官能团、硫酯官能团、硫羰酸酯官能团、氨基
甲酸酯官能团、
碳酸酯官能团或酸酐官能团，
[0028] ●Hy为要么由于疏水性化合物的反应性官能团与该阴离子多糖的羧基官能团之间的偶联，要么由于疏水性化合物的反应性官能团与连接臂前体R′的反应性官能团之间的偶联而产生的基团，其由包含4-50个碳的链构成，所述链任选地是支化的和/或不饱和的，任选地包含一个或多个杂
原子，例如O、N或/和S，任选地包含一个或多个饱和的、不饱和的或芳香族的环或杂环，
[0029] ●R为由包含1-18个碳的链构成的二价基团，所述链任选地是支化的和/或不饱和的，任选地包含一个或多个杂原子，例如O、N或/和S，任选地包含一个或多个饱和的、不饱和的或芳香族的环或杂环，并且R由于具有至少两个反应性官能团的前体R′的反应而产生，所述至少两个反应性官能团为相同或不同的，并且选自醇官能团、酸官能团、胺官能团、硫醇官能团和硫羰酸官能团，
[0030] ●所述包含羧基官能团的多糖在中性pH下是两亲性的。
[0031] 在一个实施方案中，所述包含羧基官能团的多糖为天然地携带羧基官能团的多糖，并且选自藻酸盐、乙酰透明质酸、聚半乳糖
醛酸。
[0032] 在一个实施方案中，所述包含羧基官能团的多糖为通式I的合成多糖，其从天然地包含羧基官能团的多糖获得或者从在其上嫁接有至少15个羧基官能团/100个糖单元的中性多糖获得：
[0033]
[0034] 式I
[0035] -所述天然多糖选自占多数地由通过(1，6)和/或(1，4)和/或(1，3)和/或(1，2)类型的糖苷键相连接的糖苷
单体构成的多糖，
[0036] -L为由于连接臂Q与该多糖的-OH官能团之间的偶联而产生的键，并且为酯官能团、硫羰酸酯官能团、碳酸酯官能团、氨基甲酸酯官能团或醚官能团，
[0037] -i表示取代基L-Q的摩尔份数/多糖的糖单元，
[0038] -Q为包含1-18个碳的链，其任选地是支化的和/或不饱和的，包含一个或多个杂原子，例如O、N或/和S，并且包含至少一个羧基官能团，-CO2H。
[0039] 在一个实施方案中，该多糖占多数地由通过(1，6)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成。
[0040] 在一个实施方案中，该占多数地由通过(1，6)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成的多糖为右旋糖酐。
[0041] 在一个实施方案中，该多糖占多数地由通过(1，4)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成。
[0042] 在一个实施方案中，该占多数地由通过(1，4)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成的多糖选自出芽短梗霉聚糖、藻酸盐、乙酰透明质酸、木聚糖、聚半乳糖醛酸或
水溶性纤维素。
[0043] 在一个实施方案中，该多糖为出芽短梗霉聚糖。
[0044] 在一个实施方案中，该多糖为藻酸盐。
[0045] 在一个实施方案中，该多糖为乙酰透明质酸。
[0046] 在一个实施方案中，该多糖为木聚糖。
[0047] 在一个实施方案中，该多糖为聚半乳糖醛酸。
[0048] 在一个实施方案中，该多糖为水溶性
纤维素。
[0049] 在一个实施方案中，该多糖占多数地由通过(1，3)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成。
[0050] 在一个实施方案中，该占多数地由通过(1，3)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成的多糖为凝乳聚糖。
[0051] 在一个实施方案中，该多糖占多数地由通过(1，2)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成。
[0052] 在一个实施方案中，该占多数地由通过(1，2)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成的多糖为菊粉。
[0053] 在一个实施方案中，该多糖占多数地由通过(1，4)和(1，3)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成。
[0054] 在一个实施方案中，该占多数地由通过(1，4)和(1，3)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成的多糖为葡聚糖。
[0055] 在一个实施方案中，该多糖占多数地由通过(1，4)和(1，3)和(1，2)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成。
[0056] 在一个实施方案中，该占多数地由通过(1，4)和(1，3)和(1，2)类型的糖苷键相连接的糖苷单体构成的多糖为甘露聚糖。
[0057] 在一个实施方案中，根据本发明的多糖的特征在于，基团Q选自下列基团：
[0058]
[0059] 在一个实施方案中，i为0.1-3。
[0060] 在一个实施方案中，i为0.2-1.5。
[0061] 在一个实施方案中，所述多糖为包含羧基官能团的多糖，所述羧基官能团中至少一个被标注为Ah的疏水性醇的衍生物取代：
[0062] ●所述疏水性醇(Ah)通过偶联臂R而嫁接或连接至该阴离子多糖，所述偶联臂通过官能团F而与该阴离子多糖相连接，所述官能团F由于连接臂前体R′的胺官能团、醇官能团、硫醇官能团或羧基官能团与该阴离子多糖的羧基官能团之间的偶联而产生，并且所述偶联臂R通过官能团G而与所述疏水性醇相连接，所述官能团G由于偶联臂前体R′的羧基官能团、胺官能团、硫羰酸官能团或醇官能团与所述疏水性醇的醇官能团之间的偶联而产生，该阴离子多糖的未取代的羧基官能团以阳离子的羧酸盐形式存在，所述阳离子优选+ +地为碱金属阳离子，例如Na 或K，
[0063] -F要么为酰胺官能团，要么为酯官能团，要么为硫酯官能团，要么为酸酐官能团，[0064] -G要么为酯官能团，要么为硫酯官能团，要么为碳酸酯官能团，要么为氨基甲酸酯官能团，
[0065] -R为由包含1-18个碳的链构成的二价基团，所述链任选地是支化的和/或不饱和的，任选地包含一个或多个杂原子，例如O、N或/和S，
[0066] -Ah为疏水性醇或硫醇的残基，其从所述疏水性醇的羟基官能团与由二价基团R的前体所携带的至少一个反应性官能团之间的偶联而产生，
[0067] ●所述包含羧基官能团的多糖在中性pH下是两亲性的。
[0068] 在一个实施方案中，F为酰胺官能团，G为酯官能团，R′为氨基酸，和Ah为疏水性醇的残基。
[0069] 在一个实施方案中，F为酰胺官能团，G为硫酯官能团，R′为氨基酸，和Ah为疏水性硫醇的残基。
[0070] 在一个实施方案中，F为酰胺官能团，G为氨基甲酸酯官能团，R′为二胺，和Ah为疏水性醇的残基。
[0071] 在一个实施方案中，F为酰胺官能团，G为碳酸酯官能团，R′为氨基醇，和Ah为疏水性醇的残基。
[0072] 在一个实施方案中，F为酰胺官能团，G为硫羰酸酯官能团，R′为O-硫代氨基酸，和Ah为疏水性醇的残基。
[0073] 在一个实施方案中，F为酯官能团，G为酯官能团，R′为醇酸，和Ah为疏水性醇的残基。
[0074] 在一个实施方案中，F为酯官能团，G为硫酯官能团，R′为醇酸，和Ah为疏水性硫醇的残基。
[0075] 在一个实施方案中，F为酯官能团，G为碳酸酯官能团，R′为二醇，和Ah为疏水性醇的残基。
[0076] 在一个实施方案中，F为酯官能团，G为氨基甲酸酯官能团，R′为醇胺，和Ah为疏水性醇的残基。
[0077] 在一个实施方案中，F为硫酯官能团，G为酯官能团，R′为硫醇酸，和Ah为疏水性醇的残基。
[0078] 在一个实施方案中，F为硫酯官能团，G为硫酯官能团，R′为硫醇酸，和Ah为疏水性硫醇的残基。
[0079] 在一个实施方案中，F为硫酯官能团，G为碳酸酯官能团，R′为醇硫醇(alcoolthiol)，和Ah为疏水性醇的残基。
[0080] 在一个实施方案中，F为硫酯官能团，G为氨基甲酸酯官能团，R′为胺硫醇(aminethiol)，和Ah为疏水性醇的残基。
[0081] 在一个实施方案中，F为酸酐官能团，G为酯官能团，R′为二酸，和Ah为疏水性醇的残基。
[0082] 在一个实施方案中，F为酸酐官能团，G为硫酯官能团，R′为二酸，和Ah为疏水性硫醇的残基。
[0083] 在一个实施方案中，F为酸酐官能团，G为氨基甲酸酯官能团，R′为氨基酸，和Ah为疏水性醇的残基。
[0084] 在一个实施方案中，F为酸酐官能团，G为碳酸酯官能团，R′为醇酸，和Ah为疏水性醇的残基。
[0085] 在一个实施方案中，所述包含被疏水性醇部分地取代的羧基官能团的多糖选自通式II的包含羧基官能团的多糖：
[0086]
[0087] 式II
[0088] 其中
[0089] -n表示被F-R-G-Ah取代的多糖的羧基官能团的摩尔份数，并且为0.01-0.7，[0090] -F、R、G和Ah符合上文给出的定义，并且当该多糖的羧基官能团不被F-R-G-Ah取代时，那么该多糖的所述羧基官能团为阳离子的羧酸盐，所述阳离子优选地为碱金属阳离子，例如Na+或K+。
[0091] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自氨基酸。
[0092] 在一个实施方案中，所述氨基酸选自α-氨基酸。
[0093] 在一个实施方案中，所述α-氨基酸选自天然α-氨基酸。
[0094] 在一个实施方案中，所述天然α-氨基酸选自亮氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、
色氨酸、缬氨酸、脯氨酸。
[0095] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自多元醇。
[0096] 在一个实施方案中，所述多元醇选自二醇。
[0097] 在一个实施方案中，所述二醇选自二甘醇和三甘醇。
[0098] 在一个实施方案中，所述二醇选自聚乙二醇，无
质量限制。
[0099] 在一个实施方案中，所述多元醇选自甘油、二甘油和三甘油。
[0100] 在一个实施方案中，所述多元醇为三
乙醇胺。
[0101] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自二胺。
[0102] 在一个实施方案中，所述二胺选自乙二胺和赖氨酸及其衍生物。
[0103] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自醇胺。
[0104] 在一个实施方案中，所述醇胺选自乙醇胺、氨基-2-丙醇、异丙醇胺、3-氨基-1，2-丙二醇、二乙醇胺、二异丙醇胺、氨丁三醇(Tris)和2-(2-氨基乙
氧基)乙醇。
[0105] 在一个实施方案中，所述醇胺选自还原的氨基酸。
[0106] 在一个实施方案中，所述还原的氨基酸选自丙氨醇、缬氨醇、亮氨醇、异亮氨醇、脯氨醇和苯丙氨醇。
[0107] 在一个实施方案中，所述醇胺选自带电荷的氨基酸。
[0108] 在一个实施方案中，所述带电荷的氨基酸选自丝氨酸和苏氨酸。
[0109] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自二酸。
[0110] 在一个实施方案中，所述二酸选自
琥珀酸、谷氨酸、
马来酸、
草酸、
丙二酸、富马酸和戊烯二酸。
[0111] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自醇酸。
[0112] 在一个实施方案中，所述醇酸选自
扁桃酸、乳酸和柠檬酸。
[0113] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自脂肪醇。
[0114] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自由包含4-18个碳的、支化或非支化的、不饱和或饱和的烷基链构成的醇。
[0115] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自由包含6-18个碳的、支化或非支化的、不饱和或饱和的烷基链构成的醇。
[0116] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自由包含多于18个碳的、支化或非支化的、不饱和或饱和的烷基链构成的醇。
[0117] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自由包含多于18个碳的、支化或非支化的、不饱和或饱和的烷基链构成的醇。
[0118] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为辛醇。
[0119] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为十二烷醇。
[0120] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为2-乙基丁醇。
[0121] 在一个实施方案中，所述脂肪醇选自肉豆蔻醇、鲸蜡醇、硬脂醇、鲸蜡硬脂醇、丁醇、油醇、羊毛脂。
[0122] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自胆固醇衍生物。
[0123] 在一个实施方案中，所述胆固醇衍生物为胆固醇。
[0124] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自薄荷醇衍生物。
[0125] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为以外消旋形式的薄荷醇。
[0126] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为薄荷醇的D异构体。
[0127] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为薄荷醇的L异构体。
[0128] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自生育酚。
[0129] 在一个实施方案中，所述生育酚为α-生育酚。
[0130] 在一个实施方案中，所述α-生育酚为α-生育酚的外消旋物。
[0131] 在一个实施方案中，所述生育酚为α-生育酚的D异构体。
[0132] 在一个实施方案中，所述生育酚为α-生育酚的L异构体。
[0133] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自携带芳基的醇。
[0134] 在一个实施方案中，所述携带芳基的醇选自苄醇、苯乙醇。
[0135] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自在由牻
牛儿醇、β-香茅醇和法呢醇构成的组中的不饱和脂肪醇。
[0136] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为3，7-二甲基-1-辛醇。
[0137] 在一个实施方案中，所述多糖为包含羧基官能团的多糖，所述羧基官能团中至少一个被标注为Ah的疏水性醇的衍生物取代：
[0138] ●所述疏水性醇(Ah)通过官能团F′而嫁接或连接至该阴离子多糖，所述官能团F′由于该阴离子多糖的羧基官能团与所述疏水性醇的羟基官能团之间的偶联而产生，该阴离子多糖的未取代的羧基官能团以阳离子的羧酸盐形式存在，所述阳离子优选地为碱金+ +属阳离子，例如Na 或K，
[0139] -F′为酯官能团或硫酯官能团，
[0140] ●Ah为疏水性醇或疏水性硫醇的残基，
[0141] ●所述包含羧基官能团的多糖在中性pH下是两亲性的。
[0142] 在一个实施方案中，所述包含被疏水性醇部分地取代的羧基官能团的多糖选自通式III的包含羧基官能团的多糖：
[0143]
[0144] 式III
[0145] 其中
[0146] -n表示被F′-Ah取代的多糖的羧基官能团的摩尔份数，并且为0.01-0.7，[0147] -F′和Ah符合上文给出的定义，并且当该多糖的羧基官能团不被F′-Ah取代时，那么该多糖的所述羧基官能团为阳离子的羧酸盐，所述阳离子优选地为碱金属阳离子，例+ +如Na 或K。
[0148] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自脂肪醇。
[0149] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自由包含6-18个碳的、支化或非支化的、不饱和或饱和的烷基链构成的醇。
[0150] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自由包含8-18个碳的、支化或非支化的、不饱和或饱和的烷基链构成的醇。
[0151] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自由包含多于18个碳的、支化或非支化的、不饱和或饱和的烷基链构成的醇。
[0152] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为辛醇。
[0153] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为2-乙基丁醇。
[0154] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为十二烷醇。
[0155] 在一个实施方案中，所述脂肪醇选自肉豆蔻醇、鲸蜡醇、硬脂醇、鲸蜡硬脂醇、丁醇、油醇、羊毛脂。
[0156] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自胆固醇衍生物。
[0157] 在一个实施方案中，所述胆固醇衍生物为胆固醇。
[0158] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自薄荷醇衍生物。
[0159] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为以外消旋形式的薄荷醇。
[0160] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为薄荷醇的D异构体。
[0161] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为薄荷醇的L异构体。
[0162] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自生育酚。
[0163] 在一个实施方案中，所述生育酚为α-生育酚。
[0164] 在一个实施方案中，所述α-生育酚为α-生育酚的外消旋物。
[0165] 在一个实施方案中，所述生育酚为α-生育酚的D异构体。
[0166] 在一个实施方案中，所述生育酚为α-生育酚的L异构体。
[0167] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自携带芳基的醇。
[0168] 在一个实施方案中，所述携带芳基的醇选自苄醇、苯乙醇。
[0169] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自在由牻牛儿醇、β-香茅醇和法呢醇构成的组中的不饱和脂肪醇。
[0170] 在一个实施方案中，所述疏水性醇为3，7-二甲基-1-辛醇。
[0171] 在一个实施方案中，所述两亲性多糖为包含羧基官能团的多糖，所述羧基官能团中至少一个被标注为Amh的疏水性胺的衍生物取代：
[0172] ●所述疏水性胺通过酰胺官能团F′而嫁接或连接至该阴离子多糖，所述酰胺官能团F′由于所述疏水性胺的胺官能团与该阴离子多糖的羧基官能团之间的偶联而产生，该阴离子多糖的未取代的羧基官能团以阳离子的羧酸盐形式存在，所述阳离子优选地为碱+ +金属阳离子，例如Na 或K，
[0173] ●Amh为疏水性胺的残基，其从所述疏水性胺的胺官能团与该阴离子多糖的羧基官能团之间的偶联而产生。
[0174] 在一个实施方案中，所述包含嫁接有疏水性胺的羧基官能团的多糖选自通式IV的包含羧基官能团的多糖：
[0175]
[0176] 式IV
[0177] 其中
[0178] -n表示被F′-Amh取代的多糖的羧基官能团的摩尔份数，并且为0.01-0.7，[0179] -F′和Amh符合上文给出的定义，并且当该多糖的羧基官能团不被F′-Amh取代时，那么该多糖的所述羧基官能团为阳离子的羧酸盐，所述阳离子优选地为碱金属阳离子，+ +例如Na 或K。
[0180] 在一个实施方案中，所述疏水性胺选自由包含6-18个碳的、支化或线性的、不饱和或饱和的烷基链构成的胺。
[0181] 在一个实施方案中，所述脂肪胺为十二烷胺。
[0182] 在一个实施方案中，所述脂肪胺选自肉豆蔻胺、鲸蜡胺、硬脂胺、鲸蜡硬脂胺、丁胺、油胺、羊毛脂。
[0183] 在一个实施方案中，所述疏水性胺选自携带芳基的胺。
[0184] 在一个实施方案中，所述携带芳基的胺选自苄胺、苯乙胺。
[0185] 在一个实施方案中，所述多糖为包含羧基官能团的多糖，所述羧基官能团中至少一个被标注为Ach的疏水性酸的衍生物取代：
[0186] ●所述疏水性酸(Ach)通
过酸酐官能团F′而嫁接或连接至该阴离子多糖，所述官能团F由于该阴离子多糖的羧基官能团与所述疏水性酸的羧基官能团之间的偶联而产生，该阴离子多糖的未取代的羧基官能团以阳离子的羧酸盐形式存在，所述阳离子优选地+ +为碱金属阳离子，例如Na 或K，
[0187] ●Ach为疏水性酸或疏水性O-硫羰酸的残基，
[0188] ●所述包含羧基官能团的多糖在中性pH下是两亲性的。
[0189] 在一个实施方案中，所述包含被疏水性酸部分地取代的羧基官能团的多糖选自通式V的包含羧基官能团的多糖：
[0190]
[0191] 式V
[0192] 其中
[0193] -n表示被F′-Ach取代的多糖的羧基官能团的摩尔份数，并且为0.01-0.7，[0194] -F′和Ach符合上文给出的定义，并且当该多糖的羧基官能团不被F′-Ach取代时，那么该多糖的所述羧基官能团为阳离子的羧酸盐，所述阳离子优选地为碱金属阳离子，例如Na+或K+。
[0195] 在一个实施方案中，所述疏水性酸选自
脂肪酸。
[0196] 在一个实施方案中，所述脂肪酸选自由包含6-50个碳的、支化或非支化的、不饱和或饱和的烷基链构成的酸。
[0197] 在一个实施方案中，所述脂肪酸选自线性脂肪酸。
[0198] 在一个实施方案中，所述线性脂肪酸选自己酸、庚酸、辛酸、癸酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、棕榈酸、
硬脂酸、花生酸、山萮酸、二十三烷酸、二十四烷酸、二十七烷酸、二十八烷酸和蜂花酸。
[0199] 在一个实施方案中，所述脂肪酸选自不
饱和脂肪酸。
[0200] 在一个实施方案中，所述不饱和脂肪酸选自肉豆蔻脑酸、
棕榈油酸、油酸、反油酸、亚油酸、α-亚油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸和二十二碳六烯酸。
[0201] 在一个实施方案中，所述脂肪酸选自胆汁酸及其衍生物。
[0202] 在一个实施方案中，所述胆汁酸及其衍生物选自胆酸、脱氢胆酸、脱氧胆酸和鹅脱氧胆酸。
[0203] 在一个实施方案中，所述多糖为包含羧基官能团的多糖，所述羧基官能团中至少一个被标注为Ach的疏水性酸的衍生物取代：
[0204] ●所述疏水性酸(Ach)通过偶联臂R而嫁接或连接至该阴离子多糖，所述偶联臂通过官能团F而与该阴离子多糖相连接，所述官能团F由于连接臂前体R′的胺官能团、醇官能团、硫醇官能团或羧基官能团与该阴离子多糖的羧基官能团之间的偶联而产生，并且所述偶联臂R通过官能团G而与所述疏水性酸相连接，所述官能团G由于偶联臂前体R′的胺官能团、醇官能团、硫醇官能团或羧基官能团与所述疏水性酸的羧基官能团之间的偶联而产生，该阴离子多糖的未取代的羧基官能团以阳离子的羧酸盐形式存在，所述阳离子优+ +选地为碱金属阳离子，例如Na 或K，
[0205] -F要么为酰胺官能团，要么为酯官能团，要么为硫酯官能团，要么为酸酐官能团，[0206] -G要么为酯官能团，要么为酰胺官能团，要么为酯官能团，要么为硫酯官能团，要么为酸酐官能团，
[0207] -R为由包含1-18个碳的链构成的二价基团，所述链任选地是支化的和/或不饱和的，任选地包含一个或多个杂原子，例如O、N或/和S，
[0208] -Ach为酸的残基，其从所述疏水性酸的羧基官能团与由二价基团R的前体R′所携带的至少一个反应性官能团之间的偶联而产生，
[0209] ●所述包含羧基官能团的多糖在中性pH下是两亲性的。
[0210] 在一个实施方案中，F为酰胺官能团，G为酯官能团，R′为醇胺，和Ach为疏水性酸的残基。
[0211] 在一个实施方案中，F为酰胺官能团，G为硫酯官能团，R′为硫羟胺(thiolamine)，和Ach为疏水性酸的残基。
[0212] 在一个实施方案中，F为酰胺官能团，G为酰胺官能团，R′为二胺，和Ach为疏水性酸的残基。
[0213] 在一个实施方案中，F为酰胺官能团，G为酸酐官能团，R′为氨基酸，和Ach为疏水性酸的残基。
[0214] 在一个实施方案中，F为酯官能团，G为酰胺官能团，R′为醇胺，和Ach为疏水性酸的残基。
[0215] 在一个实施方案中，F为酯官能团，G为酯官能团，R′为二醇，和Ach为疏水性酸的残基。
[0216] 在一个实施方案中，F为酯官能团，G为硫酯官能团，R′为醇硫醇，和Ach为疏水性酸的残基。
[0217] 在一个实施方案中，F为酯官能团，G为酸酐官能团，R′为醇酸，和Ach为疏水性酸的残基。
[0218] 在一个实施方案中，F为硫酯官能团，G为酰胺官能团，R′为硫羟胺，和Ach为疏水性酸的残基。
[0219] 在一个实施方案中，F为硫酯官能团，G为酯官能团，R′为醇硫醇，和Ach为疏水性酸的残基。
[0220] 在一个实施方案中，F为硫酯官能团，G为硫酯官能团，R′为二硫醇，和Ach为疏水性酸的残基。
[0221] 在一个实施方案中，F为硫酯官能团，G为酸酐官能团，R′为硫醇酸，和Ach为疏水性酸的残基。
[0222] 在一个实施方案中，F为酸酐官能团，G为酯官能团，R′为醇酸，和Ach为疏水性酸的残基。
[0223] 在一个实施方案中，F为酸酐官能团，G为硫酯官能团，R′为硫醇酸，和Ach为疏水性酸的残基。
[0224] 在一个实施方案中，F为酸酐官能团，G为酰胺官能团，R′为氨基酸，和Ach为疏水性酸的残基。
[0225] 在一个实施方案中，F为酸酐官能团，G为酸酐官能团，R′为二酸，和Ach为疏水性酸的残基。
[0226] 在一个实施方案中，所述包含被疏水性醇部分地取代的羧基官能团的多糖选自通式VI的包含羧基官能团的多糖：
[0227]
[0228] 式VI
[0229] 其中
[0230] -n表示被F-R-G-Ach取代的多糖的羧基官能团的摩尔份数，并且为0.01-0.7，[0231] -F、R、G和Ach符合上文给出的定义，并且当该多糖的羧基官能团不被F-R-G-Ach取代时，那么该多糖的所述羧基官能团为阳离子的羧酸盐，所述阳离子优选地为碱金属阳+ +离子，例如Na 或K。
[0232] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自氨基酸。
[0233] 在一个实施方案中，所述氨基酸选自α-氨基酸。
[0234] 在一个实施方案中，所述α-氨基酸选自天然α-氨基酸。
[0235] 在一个实施方案中，所述天然α-氨基酸选自亮氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、缬氨酸、脯氨酸。
[0236] 在一个实施方案中，所述疏水性醇选自脂肪醇。
[0237] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自二醇。
[0238] 在一个实施方案中，所述二醇选自甘油、二甘油和三甘油。
[0239] 在一个实施方案中，所述二醇为三乙醇胺。
[0240] 在一个实施方案中，所述二醇选自二甘醇和三甘醇。
[0241] 在一个实施方案中，所述二醇选自聚乙二醇，无质量限制。
[0242] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自二胺。
[0243] 在一个实施方案中，所述二胺选自乙二胺和赖氨酸及其衍生物。
[0244] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自醇胺。
[0245] 在一个实施方案中，所述醇胺选自乙醇胺、氨基-2-丙醇、异丙醇胺、3-氨基-1，2-丙二醇、二乙醇胺、二异丙醇胺、氨丁三醇(Tris)和2-(2-氨基乙氧基)乙醇。
[0246] 在一个实施方案中，所述醇胺选自还原的氨基酸。
[0247] 在一个实施方案中，所述还原的氨基酸选自丙氨醇、缬氨醇、亮氨醇、异亮氨醇、脯氨醇和苯丙氨醇。
[0248] 在一个实施方案中，所述醇胺选自带电荷的氨基酸。
[0249] 在一个实施方案中，所述带电荷的氨基酸选自丝氨酸和苏氨酸。
[0250] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自二酸。
[0251] 在一个实施方案中，所述二酸选自琥珀酸、谷氨酸、马来酸、草酸、丙二酸、富马酸和戊烯二酸。
[0252] 在一个实施方案中，基团R的前体即R′的特征在于，它选自醇酸。
[0253] 在一个实施方案中，所述醇酸选自扁桃酸、乳酸和柠檬酸。
[0254] 在一个实施方案中，所述疏水性酸选自脂肪酸。
[0255] 在一个实施方案中，所述脂肪酸选自由包含6-50个碳的、支化或非支化的、不饱和或饱和的烷基链构成的酸。
[0256] 在一个实施方案中，所述脂肪酸选自线性脂肪酸。
[0257] 在一个实施方案中，所述线性脂肪酸选自己酸、庚酸、辛酸、癸酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山萮酸、二十三烷酸、二十四烷酸、二十七烷酸、二十八烷酸和蜂花酸。
[0258] 在一个实施方案中，所述脂肪酸选自不饱和脂肪酸。
[0259] 在一个实施方案中，所述不饱和脂肪酸选自肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、油酸、反油酸、亚油酸、α-亚油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、芥酸和二十二碳六烯酸。
[0260] 在一个实施方案中，所述脂肪酸选自胆汁酸及其衍生物。
[0261] 在一个实施方案中，所述胆汁酸及其衍生物选自胆酸、脱氢胆酸、脱氧胆酸和鹅脱氧胆酸。
[0262] 所述多糖可以具有10-10000的聚合度m。
[0263] 在一个实施方案中，它具有10-1000的聚合度m。
[0264] 在另一个实施方案中，它具有10-500的聚合度m。
[0265] 在一个实施方案中，本发明涉及组合物，其特征在于，所述抗体选自在治疗上具有活性的抗体及其
片段。
[0266] 在一个实施方案中，所述抗体或其片段选自在癌学中使用的以下列物质作为靶标的抗体或抗体片段：
[0267] -CD52、VEGF(血管内皮生长因子)、EGF-R(表皮生长因子受体)、CD11a、CCR4(趋化因子C-C受体4)、CD105、CD123、CD137、CD19、CD22、CD23、CD3、CD30、CD38、CD4、CD40、CD55SC-1、CD56、CD6、CD74、CD80、CS1(细胞表面糖蛋白1)、CTLA4(细胞毒性T-淋巴细胞
抗原4，也称为CD152)、DR5(死亡受体5)、Ep-CAM(上皮细胞粘附因子)、叶酸受体α、神经节苷脂GD2、神经节苷脂GD3、GPNMB(糖蛋白NMB)、HGF/SF(
肝细胞生长因子/分散因子)、IGF-1(胰岛素样生长因子)、IGF1-受体(胰岛素样生长因子-1受体)、IL13(白介素-13)、IL6(白介素-6)、IL-6R(白介素-6受体)、免疫显性
真菌抗原热休克蛋白90(hsp90)、整联蛋白α5β3、MHC(主要组织相容性复合物)II类、MN-抗原(也称为G250-抗原)、MUC1、PD-1(程序性死亡蛋白1)、PIGF(胎盘生长因子)、PDGFRa(血小板衍生生长因子α)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、PTHrP(甲状旁腺
激素相关蛋白)、CD200受体、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、鞘氨醇-1-
磷酸(S1P)、TGFβ(转化生长因子β)、TRAIL(
肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导性配体)受体1、肿瘤坏死因子受体2、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、CD33、CD20或CA125(癌抗原125)。
[0268] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括阿仑珠单抗、贝伐珠单抗、西妥昔单抗、依法珠单抗、吉妥珠单抗、britumomab、奥戈伏单抗(ovarex mab)、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗或曲妥珠单抗的抗体的组。
[0269] 在一个实施方案中，所述抗体选自在
皮肤病学中使用的以下列物质作为靶标的抗体或抗体片段：
[0270] -TNFα(肿瘤坏死因子α)、IL12、IL15、IL8、干扰素α、CD3。
[0271] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括阿达木单抗、ABT874、伊那西普、AMG714、HuMax-IL8、MEDI545、otelixizumab或英利昔单抗的抗体的组。
[0272] 在一个实施方案中，所述抗体选自在
呼吸系统疾病和
肺疾病中使用的以下列物质作为靶标的抗体或抗体片段：
[0273] -IL4、IL5受体、IL1(白介素1)、IL13、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、CD25(分化群25)、CTGF(结缔组织生长因子)、TNFα(肿瘤坏死因子α)、GM-CSF(粒细胞单核细胞集落刺激因子)、CD23、RSV(
呼吸道合胞病毒)、IL5、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)聚集因子A、组织因子、IgE(免疫球蛋白E)或RSV(呼吸道合胞病毒)。
[0274] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括AMG317、抗-IL13、BIW-8405、卡那奴单抗(canakinumab)、CAT354、CNTO148、达克珠单抗、FG-3019、GC-1008、戈利木单抗、KB002、鲁昔单抗、MEDI557、美泊利单抗、QAX576、替非珠单抗、TNX-832、奥马珠单抗或帕利珠单抗的抗体的组。
[0275] 在一个实施方案中，在自身免疫疾病和炎性疾病中使用的抗体选自以下列物质作为靶标的抗体或抗体片段：
[0276] -TNFα(肿瘤坏死因子α)、CD25(分化群25)、CD、LFA-1(淋巴细胞功能相关抗原)、CD3、IgE(免疫球蛋白E)、IL6、B7RP-1(B7相关蛋白)、Blys(B淋巴细胞刺激因子)、CCR4(趋化因子C-C受体4)、CD11a、CD20(分化群20)、CD22(分化群22)、CD23、CD4、CD40、CD44、CD95、CXCL10、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)1、GM-CSF(粒细胞单核细胞集落刺激因子)、IL1(白介素1)、IL12、IL13、IL15、IL18、IL5、IL8、IL23、整联蛋白α4β7、整联蛋白α4β1或α4β7、干扰素α、干扰素γ、白介素-17受体、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、VAP-1(血管粘附蛋白-1)
炎症受体(血管粘附蛋白-1的炎症受体)或VAP-1(血管粘附蛋白-1)。
[0277] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括阿达木单抗、巴利昔单抗(basiliximab)、达克珠单抗、依法珠单抗、莫罗单抗-CD3、奥马珠单抗或托珠单抗的抗体的组。
[0278] 在一个实施方案中，所述抗体选自在心
血管疾病和循环系统疾病中使用的以下列物质作为靶标的的抗体或抗体片段：
[0279] -人血小板糖蛋白IIb/IIIa受体、氧化型低
密度脂蛋白(oxLDL)、地高辛或凝血因子VIII。
[0280] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括阿昔单抗、7E3、BI-204、Digibind或TB402的抗体的组。
[0281] 在一个实施方案中，所述抗体选自在中枢神经系统疾病中使用的以下列物质作为靶标的抗体或抗体片段：
[0282] -CD52、整联蛋白α4β1或α4β7、
淀粉状蛋白β肽、IL12、IL23、CD25(分化群25)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)、CD20或NGF(神经生长因子)。
[0283] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括阿仑珠单抗、那他珠单抗、ABT874、巴匹珠单抗、CNTO 1275、达克珠单抗、GSK249320、利妥昔单抗、RN624的抗体的组。
[0284] 在一个实施方案中，所述抗体选自在胃肠疾病中使用的以下列物质作为靶标的抗体或抗体片段：
[0285] -TNFα(肿瘤坏死因 子α)、CD25(分化群25)、艰难梭 菌(Clostridium difficile)的毒素A、CXCL10、IL5或整联蛋白α4β1或α4β7。
[0286] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括英利昔单抗、阿达木单抗、巴利昔单抗、CNTO148、戈利木单抗、MDX066、MDX1100、美泊利单抗、MLN02或瑞利珠单抗(Reslizumab)的抗体的组。
[0287] 在一个实施方案中，在感染性疾病中使用的抗体选自以下列物质作为靶标的抗体或抗体片段：
[0288] -丙型
肝炎病毒的包膜蛋白2、PS(磷脂酰丝氨酸)、脂磷壁酸、青霉素结合蛋白(PBP)、CD4、CTLA4(细胞毒性T-淋巴细胞抗原4，也称为CD152)、PD-1(程序性死亡蛋白1)、西尼罗河病毒、真菌抗原热休克蛋白90、CCR5(趋化因子C-C受体5)、狂犬病病毒、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)保护性抗原、金黄色葡萄球菌聚集因子A、Stx2或TNFα(肿瘤坏死因子α)。
[0289] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括巴土昔单抗、PEREGRINE、BSYXA110、氯唑西林、伊巴珠单抗(ibalizumab)、MDX010、MDX1106、MGAWN1、Mycograb、Pro140、狂犬病抗体、雷昔库单抗、替非珠单抗或TMA15的抗体的组。
[0290] 在一个实施方案中，所述抗体选自在代谢疾病中或在内分泌学中使用的以下列物质作为靶标的抗体或抗体片段：
[0291] -IL1(白介素1)、GCGR(胰高血糖素受体)、PTHrP(甲状旁腺激素相关蛋白)或CD3。
[0292] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括IOR-T3、AMG108、AMG477、CAL、卡那奴单抗、otelixizumab、替利珠单抗(Teplizumab)或XOMA052的抗体的组。
[0293] 在一个实施方案中，所述抗体选自在女性代谢疾病中使用的以下列物质作为靶标的抗体或抗体片段：
[0294] -核因子κB受体活化因子配体(RANKL)。
[0295] 在一个实施方案中，所述抗体选自包括地舒单抗的抗体的组。
[0296] 在一个实施方案中，所述抗体为西妥昔单抗。
[0297] 在一个实施方案中，所述抗体为贝伐珠单抗。
[0298] 本发明还涉及使单克隆抗体制剂的稳定化优化的方法，其包括下列步骤：
[0299] ●提供单克隆抗体，
[0300] ●提供包含上面所定义的多糖的两亲性
聚合物的文库，
[0301] ●测量所述抗体的热稳定化，
[0302] ●确定能够在药物制剂的浓度下提供最佳稳定化的两亲性多糖，
[0303] ●在所述两亲性多糖存在下配制所述抗体。
[0304] 在一个实施方案中，热稳定化的测量通过将抗体或复合物在56℃下温育1至5天来进行。当单独的或复合的抗体失去稳定时，抗体聚集。通过在450nm处测量光散射来监测该聚集。
[0305] 本发明还涉及包含根据本发明的组合物的药物制剂，其中多糖/抗体的摩尔比为0.2-20，优选地0.5-10。
[0306] 在所述制剂中的抗体浓度优选地在1mg/ml和大约250mg/ml之间的区间内。该浓度由制剂形式来决定，例如对于静脉内制剂，该浓度为1至50mg/ml，对于皮下或肌内制剂，该浓度为50mg/ml至大约200mg/ml。
[0307] 所述制剂优选地为水性制剂。
[0308] 根据本发明的制剂另外还可以包含
表面活性剂，例如聚山梨醇酯，以0.0001至1.0％的浓度。
[0309] 所述制剂可以包含用于保持或恢复等渗性的盐或非离子种类，例如
氯化钠、甘油或海藻糖。
[0310]
实施例1：通过十二烷胺进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物1)的合成[0311] 将8g(即148mmol的羟基官能团)具有大约40kg/mol的重均摩尔质量的右旋糖酐(Fluka)以42g/L溶解在水中。向该溶液中添加15mL 10N NaOH(148mmol NaOH)。将混合物带至35℃，随后添加23g(198mmol)氯乙酸钠。将反应介质的温度带至60℃，保持100分钟。用200mL水稀释反应介质，用乙酸中和，并且通过在5kD的PES膜上逆6体积的水进行
超滤来施行纯化。最终的溶液通过干提取物来进行计量，以测定聚合物的浓度；随后通过在50/50(V/V)的水/丙
酮中的酸/碱含量测定来进行计量，以测定甲基羧酸根的取代度。
[0312] 根据干提取物：[聚合物]＝31.5mg/g。
[0313] 根据酸/碱含量测定：羟基官能团被甲基羧酸根官能团取代的取代度为1.04/糖基元。
[0314] 使右旋糖酐甲基羧酸钠溶液通过Purolite
树脂(阴离子的)以获得右旋糖酐甲基羧酸，其然后冻干18小时。
[0315] 将7.5g右旋糖酐甲基羧酸(即34mmol的甲基羧酸官能团)以45g/L溶解在DMF中，随后冷却至0℃。将0.65g十二烷胺(3.5mmol)和3.69g三乙胺以100g/L悬浮在DMF中。一旦聚合物溶液达到0℃，随即添加3.69g(36mmol)N-甲基吗啉和4.98g(36mmol)氯甲酸异丁酯。在反应10分钟后，添加十二烷胺和三乙胺的溶液。然后，将该介质维持在10℃3小时，随后加热至20℃。一旦达到20℃，添加10mL水。将该介质在剧烈搅拌下倾注到820mL的水/乙醇(50/50)溶液中。将该溶液在5kD PES膜上逆10体积的0.9％NaCl溶液，随后逆5体积的水进行超滤。通过干提取物来测定聚合物溶液的浓度。将一部分溶液冻干，并1
且在D2O中通过 H NMR进行分析，以测定转化为十二烷基酰胺的酸官能团的比率。
[0316] 根据干提取物：[聚合物1]＝25.9mg/g。
[0317] 根据1H NMR：通过十二烷胺进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.10。
[0318] 实施例2：通过胆固醇亮氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物2)的合成
[0319] 根据在
专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得胆固醇亮氨酸酯，
对甲苯磺酸盐。
[0320] 使在实施例1中所描述的右旋糖酐甲基羧酸钠溶液通过Purolite树脂(阴离子的)以获得右旋糖酐甲基羧酸，其然后冻干18小时。
[0321] 将8g右旋糖酐甲基羧酸(37mmol的甲基羧酸官能团)以45g/L溶解在DMF中，随后冷却至0℃。将0.73g胆固醇亮氨酸酯对甲苯磺酸盐(1mmol)以100g/L悬浮在DMF中。然后，向该悬浮液中添加0.11g三乙胺(1mmol)。一旦聚合物溶液达到0℃，随即添加0.109g(1mmol)NMM和0.117g(1mmol)EtOCOCl。在反应10分钟后，添加胆固醇亮氨酸酯的悬浮液。然后，将该介质维持在4℃15分钟。然后，将该介质加热至30℃。一旦达到30℃，随即将该介质在剧烈搅拌下倾注到5g/L的3.76g NMM(37mmol)的溶液中。将该溶液在10kD PES膜上逆10体积的0.9％NaCl溶液，随后逆5体积的水进行超滤。通过干提取物来测定
1
聚合物溶液的浓度。将一部分溶液冻干，并且在D2O中通过 H NMR进行分析，以测定转化为胆固醇亮氨酸酯酰胺的酸官能团的比率。
[0322] 根据干提取物：[聚合物2]＝12.9mg/g。
[0323] 根据1H NMR：通过胆固醇亮氨酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.03。
[0324] 实施例3：通过胆固醇亮氨酸酯进行修饰的右旋糖酐琥珀酸钠(聚合物3)的合成[0325] 根据在专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得胆固醇亮氨酸酯，对甲苯磺酸盐。
[0326] 根据在Sanchez-Chaves等人的文章(Sanchez-Chaves，Manuel等人，Polymer1998，39(13)，2751-2757)中所描述的方法从右旋糖酐40开始来获得右旋糖酐琥珀酸钠。
1
根据在D2O/NaOD中的 H NMR，酸官能团/糖苷单元的比率(i)为1.46。
[0327] 使右旋糖酐琥珀酸钠溶液通过Purolite树脂(阴离子的)以获得右旋糖酐琥珀酸，其然后冻干18小时。
[0328] 将7.1g右旋糖酐琥珀酸(23mmol)以44g/L溶解在DMF中。将该溶液冷却至0℃。将0.77g胆固醇亮氨酸酯对甲苯磺酸盐(1mmol)以100g/L悬浮在DMF中。然后，向该悬浮液中添加0.12g三乙胺(TEA)(1mmol)。一旦聚合物溶液达到0℃，随即添加0.116g(1mmol)NMM和0.124g(1mmol)EtOCOCl。在反应10分钟后，添加胆固醇亮氨酸酯的悬浮液。然后，将该介质维持在4℃15分钟。然后，将该介质加热至30℃。一旦达到30℃，随即将该介质在剧烈搅拌下倾注到5g/L的3.39g NMM(33mmol)的溶液中。将该溶液在10kD PES膜上逆
10体积的0.9％NaCl溶液，随后逆5体积的水进行超滤。通过干提取物来测定聚合物溶液
1
的浓度。将一部分溶液冻干，并且在D2O中通过 H NMR进行分析，以测定转化为胆固醇亮氨酸酯酰胺的酸官能团的比率。
[0329] 根据干提取物：[聚合物3]＝17.5mg/g。
[0330] 根据1H NMR：通过胆固醇亮氨酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.05。
[0331] 实施例4：通过辛醇甘氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物4)的合成[0332] 根据在专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得辛醇甘氨酸酯，对甲苯磺酸盐。
[0333] 通过与在实施例2中所描述的方法相似的方法，获得通过辛醇甘氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠。
[0334] 根据干提取物：[聚合物4]＝34.1mg/g。
[0335] 根据1H NMR：通过辛醇甘氨酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.1。
[0336] 实施例5：通过异己醇亮氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物5)的合成
[0337] 根据在专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得异己醇亮氨酸酯，对甲苯磺酸盐。
[0338] 通过与在实施例2中所描述的方法相似的方法，获得通过异己醇亮氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠。
[0339] 根据干提取物：[聚合物5]＝16mg/g。
[0340] 根据1H NMR：通过异己醇亮氨酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.17。
[0341] 实施例6：通过十二烷醇苯丙氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物6)的合成
[0342] 根据在专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得十二烷醇苯丙氨酸酯，对甲苯磺酸盐。
[0343] 通过与在实施例2中所描述的方法相似的方法，获得通过十二烷醇苯丙氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠。
[0344] 根据干提取物：[聚合物6]＝20mg/g。
[0345] 根据1H NMR：通过十二烷醇苯丙氨酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.1。
[0346] 实施例7：通过苄醇苯丙氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物7)的合成
[0347] 通过与在实施例2中所描述的方法相似的方法，获得通过苄醇苯丙氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠，其中使用苄醇苯丙氨酸酯
盐酸盐(Bachem)。
[0348] 根据干提取物：[聚合物7]＝47.7mg/g。
[0349] 根据1H NMR：通过苄醇苯丙氨酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.41。
[0350] 实施例8：通过十二烷醇甘氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物8)的合成
[0351] 根据在专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得十二烷醇甘氨酸酯，对甲苯磺酸盐。
[0352] 通过与在实施例2中所描述的方法相似的方法，获得通过十二烷醇甘氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠。
[0353] 根据干提取物：[聚合物8]＝25.3mg/g。
[0354] 根据1H NMR：通过十二烷醇甘氨酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.1。
[0355] 实施例9：通过癸醇甘氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物9)的合成[0356] 根据在专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得癸醇甘氨酸酯，对甲苯磺酸盐。
[0357] 通过与在实施例2中所描述的方法相似的方法，获得通过癸醇甘氨酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠。
[0358] 根据干提取物：[聚合物9]＝23.1mg/g。
[0359] 根据1H NMR：通过癸醇甘氨酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.1。
[0360] 实施例10：通过辛醇进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物10)的合成[0361] 根据在出版物(Morita，J.-I.等人，Green Chem.2005，7，711)中所描述的方法来获得对甲苯磺酸1-辛酯。
[0362] 根据在实施例1中所描述的方法来合成右旋糖酐甲基羧酸钠，其中使用重均分子质量为大约10kg/mol的右旋糖酐(Pharmacosmos)。
[0363] 使右旋糖酐甲基羧酸钠溶液通过Purolite树脂(阴离子的)以获得右旋糖酐甲基羧酸的水溶液，其pH通过添加氢氧化四丁基铵(Sigma)的水溶液(40％)而增至7.1，然后将该溶液冻干18小时。
[0364] 将20g右旋糖酐甲基羧酸四丁基铵(45mmol的甲基羧酸根官能团)以120g/L溶解在DMF中，随后加热至40℃。然后，向该聚合物溶液中添加2.37g对甲苯磺酸1-辛酯(8.3mmol)在12mL DMF中所形成的溶液。然后，将该介质维持在40℃5小时。将该溶液在10kDPES膜上逆15体积的0.9％NaCl溶液，随后逆5体积的水进行超滤。通过干提取物来
1
测定聚合物溶液的浓度。将一部分溶液冻干，并且在D2O中通过 H NMR进行分析，以测定转化为1-辛醇酯的酸官能团的比率。
[0365] 根据干提取物：[聚合物10]＝20.2mg/g。
[0366] 根据1H NMR：通过1-辛醇进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.17。
[0367] 实施例11：通过十二烷醇进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物11)的合成[0368] 根据在出版物(Morita，J.-I.等人，Green Chem.2005，7，711)中所描述的方法来获得对甲苯磺酸1-十二酯。
[0369] 通过与在实施例10中所描述的方法相似的方法，获得通过十二烷醇进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠，其中使用重均分子质量为大约10kg/mol的右旋糖酐(Pharmacosmos)。
[0370] 根据干提取物：[聚合物11]＝18.7mg/g。
[0371] 根据1H NMR：通过十二烷醇进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.095。
[0372] 实施例12：通过苯丙氨醇辛酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物13)的合成
[0373] 根据在专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得苯丙氨醇辛酸酯，对甲苯磺酸盐。
[0374] 通过与在实施例2中所描述的方法相似的方法，获得通过苯丙氨醇辛酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠。
[0375] 根据干提取物：[聚合物13]＝25mg/g。
[0376] 根据1H NMR：通过苯丙氨醇辛酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.045。
[0377] 实施例13：通过乙醇胺辛酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物14)的合成
[0378] 根据在专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得乙醇胺辛酸酯，对甲苯磺酸盐。
[0379] 通过与在实施例2中所描述的方法相似的方法，获得通过乙醇胺辛酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠。
[0380] 根据干提取物：[聚合物14]＝29.1mg/g。
[0381] 根据1H NMR：通过乙醇胺辛酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.15。
[0382] 实施例14：通过乙醇胺月桂酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠(聚合物15)的合成
[0383] 根据在专利(Kenji，M等人，US4826818)中所描述的方法来获得乙醇胺月桂酸酯，对甲苯磺酸盐。
[0384] 通过与在实施例2中所描述的方法相似的方法，获得通过乙醇胺月桂酸酯进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸钠。
[0385] 根据干提取物：[聚合物15]＝21.2mg/g。
[0386] 根据1H NMR：通过乙醇胺月桂酸酯进行修饰的酸的摩尔份数/糖单元为0.09。
[0387] 实施例15：相反实施例1，未通过疏水性基团进行修饰的右旋糖酐甲基羧酸盐(聚合物16)的合成
[0388] 如在实施例1的第一部分中所描述的那样来获得右旋糖酐甲基羧酸钠。通过疏水性基团进行修饰的酸的摩尔份数为零。
[0389] 实施例16：通过与聚合物相复合而实现的抗体的热稳定化
[0390] 稳定性测试的描述
[0391] 该测试使得能够测量通过与聚合物相互作用而实现的抗体的热稳定化。
热稳定性通过在56℃下将抗体或复合物温育1至5天而发生。当单独的或复合的抗体失去稳定时，抗体聚集。通过在450nm处测量光散射来监测该聚集。
[0392] 抗体的研究浓度的确定
[0393] 尽管它们具有相似性，但是单克隆抗体在制剂浓度下具有不同的溶解度或稳定性。为了使用该测试，首先应当确定使得能够测量足够的去稳定化
信号的抗体浓度。为此，例如将200μl浓度为1、2、4、6、10mg/ml的单克隆抗体在56℃下温育48小时。在t0和t48小时之时测量450nm处的吸光度。将研究浓度确定为这样的最小浓度，对于所述最小浓度来说，t48小时和t0之间的吸光度的差异对于1cm的光程而言为至少0.5。
[0394] 由于聚合物而导致的稳定化的研究
[0395] 将100μl具有2倍研究浓度的抗体与100μl具有相同摩尔浓度的聚合物相混合，以便获得以摩尔比1/1存在有聚合物的具有研究浓度的抗体溶液。将该制剂在56℃下温育5天，并且在t0、t24小时、t48小时和t96小时之时以及随后每24小时测量450nm处的吸光度。如果聚合物在不同的分析时刻导致比用单独的抗体所获得的吸光度低的吸光度，那么认为它是正的(+)。如果聚合物在不同的分析时刻导致比用单独的抗体所获得的吸光度低得多的吸光度，那么认为它是非常正的(++)。在这两种情况下，这指示了单克隆抗体的更低的聚集，并因此指示了通过聚合物而导致的单克隆抗体的热稳定化。如果聚合物在不同的分析时刻导致与用单独的抗体所获得的吸光度大致相同的吸光度，那么认为它是负的(-)。
[0396] 所获得的结果：
[0397] 1.3mg/ml的西妥昔单抗(爱比妥)
[0398]聚合物 稳定化
1 ++
2 ++
3 ++
4 +
5 +
6 +
7 +
8 ++
9 +
16 -
[0399] 6mg/ml的贝伐珠单抗(阿瓦斯丁)
[0400]聚合物 稳定化
1 ++
2 ++
4 -
8 ++
9 +
10 +
16 -
[0401] 实施例17：嫁接物的碳链长度对于稳定化的影响的研究
[0402] 聚合物4、9和8在其脂肪链的长度(从C8至C12)上有区别。将在实施例17中所描述的它们的稳定作用概括在下表中。
[0403]
[0404] 所获得的结果清楚地显示，脂肪链的长度增加导致更好的稳定化。
[0405] 实施例18：根据离子强度的由于聚合物而导致的稳定化的研究
[0406] 将6.4mL的25mg/ml阿瓦斯丁、50mM
磷酸盐(pH 6.2)与0.165mL 4M NaCl和1.435mL 50mM磷酸盐相混合，以获得在50mM磷酸盐、83mM NaCl中的20mg/ml阿瓦斯丁。向
2.5ml的该阿瓦斯丁溶液中添加2.5ml的在50mM磷酸盐(pH 6.2)、83mM NaCl中的11mg/ml聚合物8，这使得能够获得含有10mg/ml阿瓦斯丁的摩尔比为2/1的“聚合物/阿瓦斯丁”复合物的溶液。制备没有聚合物的相同溶液。
[0407] 保存2ml的每种溶液以用于研究在高离子强度下的稳定化，并且将3ml进行渗滤以获得具有低离子强度的样品：通过添加9ml H2O来将3ml的“阿瓦斯丁/聚合物”复合物或单独的阿瓦斯丁溶液稀释4倍，然后在装备有10kD膜的amicon中进行离心直至获得3ml的体积。用5mM磷酸盐缓冲液(pH 6.2)重复该步骤2次。
[0408] 将四种制剂在56℃下温育4天，并且在t0、t60小时和t80小时之时测量450nm处的吸光度。相对于单独的抗体而言随时间过去吸光度增加的减少指示了更低的聚集，和因此指示了抗体的热稳定化。
[0409]
[0410] 在这些条件下，包含复合物的制剂比包含单独的抗体的制剂更稳定。此外，当离子强度降低时，稳定性增加。
[0411] 实施例19：针对机械应力的单克隆抗体的稳定化
[0412] 从25mg/mL阿瓦斯丁和50mM磷酸盐(pH 6.2)的储备溶液开始，将单克隆抗体阿瓦斯丁稀释至2mg/mL(在纯化水中以稀释至1/5来进行第一次稀释，和用10mM磷酸盐缓冲液以稀释至2/5来进行后一次稀释)。磷酸盐的终浓度为10mM。在10mM磷酸盐缓冲液(pH
