本发明涉及通过对受试者给予有效量的TRPM5抑制剂诸如本文的 式I化合物来增强胰岛素释放、增强GLP-1释放、增加胰岛素敏感 性、增加胰岛素基因表达、降低胃液分泌、降低胃排空和降低胰高血 糖素分泌的方法。本发明还涉及通过对受试者给予有效量的TRPM5抑 制剂诸如本文的式I化合物来治疗糖尿病、胰岛素抵抗综合征、高血 糖症和肥胖症的方法。本发明进一步涉及使用这种TRPM5抑制剂在有 需要的动物、优选人或其它哺乳动物中治疗上述疾病的方法，和涉及 可用于本方法的药物组合物。本发明的这些和另外的方面在本文中进 一步被详述。

糖尿病是以胰岛素生成异常、尿排出增加和血糖水平升高为特征 的综合征。基于由人胰腺β-细胞生成的胰岛素水平，可以提及两种主 要亚类。一类是胰岛素依赖型糖尿病(IDDM，或1型)，以前被称为幼 年型糖尿病，因为其在一生中的早期就明显。在1型糖尿病中，生成 很少的胰岛素或者不生成胰岛素，因为胰腺β-细胞已被身体自身的免 疫系统所破坏。所有糖尿病中有5-10％是IDDM(American Diabetes Association。Diabetes 1996 Vital Statistics.Rockville，Md.： American Diabetes Association，1996)。另一类是非胰岛素依赖型 糖尿病(NIDDM，或2型)，通常被称为成年型糖尿病。在2型糖尿病 中，胰腺β-细胞生成胰岛素，但是生成量不足以维持健康的血糖水 平。2型糖尿病由介导胰岛素对细胞起作用的有效性的分子机构的退 化(例如胰岛素抵抗和胰岛素释放不足)所导致。所有糖尿病中有 90-95％是NIDDM(Harris，M.I.，Cowie，C.C.，Stern，M.P.编， Diabetes in America，2nd.ed.National Institutes of Health。National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases.NIH Publication No.95-1468，1995)。
2型糖尿病是重要的保健问题，并且其发病率上涨。在1990到 1998之间，在美国，NIDDM的发病率增加33％，增加到约1300万人。 另外有500万人被推测具有未被诊断的NIDDM，而另外有1400万人具 有葡萄糖耐量受损。与糖尿病有关的直接医药费用在1997年是$440 亿，主要由与高血糖相关的糖尿病并发症引起，所述并发症包括糖尿 病性血管病变，动脉粥样硬化，糖尿病性肾病，糖尿病性神经病变和 糖尿病性眼并发症诸如视网膜病、白内障形成和青光眼。
对胰岛素代谢作用的抵抗是非胰岛素依赖型糖尿病的关键特征之 一。胰岛素抵抗的特征在于在胰岛素敏感的靶器官诸如脂肪细胞和骨 骼肌中葡萄糖的摄取和利用受损，和在于肝葡萄糖排出的抑制受损。 功能性胰岛素不足和胰岛素对肝葡萄糖排出的抑制失败导致空腹高血 糖。胰腺β-细胞通过分泌增高水平的胰岛素来代偿胰岛素抵抗。然 而，β-细胞不能保持这种胰岛素的高输出，并且，最终，由葡萄糖诱 导的胰岛素释放下降，导致葡萄糖体内平衡退化以及导致随后的显性 糖尿病的发展。
与葡萄糖利用受损和胰岛素抵抗有关的其它代谢病症包含胰岛素 抵抗综合征(下文中称为“IRS”)，其是指一组包括以下的表现形式： 胰岛素抵抗；高胰岛素血症；非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)；高动脉 压；中央(内脏型)肥胖症；和脂质异常血症。
胰岛素抵抗治疗以及由此的糖尿病治疗的主要目标是降低血糖水 平从而预防急性的和长期的疾病并发症。对于一些人，为了实现控制 葡萄糖的目标，调节饮食和增加锻炼可能成为成功的治疗选择。当调 节饮食和增加锻炼不成功时，开始使用口服抗糖尿病药的药物疗法。
胰岛素释放的控制非常重要，因为有许多存活的糖尿病患者其胰 腺不能正确地工作。在一些类型的糖尿病中，总胰岛素水平被降低， 低于为保持正常血糖水平所需的水平。在其它类型中，在血糖水平增 加后产生所要求的胰岛素，但是只在不受欢迎的延迟后才产生。在其 它类型中，身体由于某种原因对胰岛素效果有抵抗。如果对糖尿病的 控制差，其可导致糖尿病并发症。糖尿病并发症在2型患者中常见， 在诊断时约50％罹患一种或多种并发症(Clark，C.M.，Vinicor，F. Introduction：Risks and benefits of intensive management in non-insulin-dependent diabetes mellitus.The Fifth Regensrief Conference.Ann Intern Med，124(1，pt 2)，81-85， 1996)。
在临床上使用注射外源胰岛素来控制糖尿病，但是遇到许多问 题。胰岛素是蛋白质，因此由于消化和降解导致不能被口服，必须被 注射。通过胰岛素给药并不总能获得对血糖水平的良好控制。胰岛素 抵抗时常发生，要求比正常剂量高得多的剂量的胰岛素。胰岛素的另 一个缺点是，尽管其可控制激素异常，但是其并不总能预防并发症诸 如神经病变、视网膜病、肾小球硬化症和心血管病的发生。胰岛素主 要通过作用于两个靶组织：肝脏和肌肉来调节葡萄糖体内平衡。肝脏 是产生葡萄糖的唯一部位，骨骼肌是由胰岛素介导的葡萄糖摄取的主 要部位。
有以下几类药物可用于治疗2型糖尿病：1)胰岛素释放剂，其直 接刺激胰岛素释放，存在低血糖症风险；2)餐时胰岛素释放剂，其加 强由葡萄糖诱导的胰岛素释放并且必须在每餐之前被给予；3)双胍 类，包括二甲双胍在内，其减弱肝脏糖异生(其在糖尿病中自相矛盾地 升高)；4)胰岛素敏化剂，例如噻唑烷二酮衍生物罗格列酮和吡格列 酮，其改善对胰岛素的周围应答，但是其具有副作用，诸如体重增 加、浮肿和偶见的肝脏毒性；和5)胰岛素注射剂，当胰岛在长期的超 高刺激下不能发挥功能时，胰岛素注射在2型糖尿病的后期通常是必 要的。目前口服抗糖尿病药治疗的有效性受到限制，部分是因为较差 的或受限的血糖控制，或因为由于不受欢迎的副作用所导致的患者依 从性差。这些副作用包括浮肿、体重增加、低血糖症以及甚至更严重 的并发症。
胰岛素促泌剂是用于具有轻度到中度空腹高血糖的2型糖尿病的 标准疗法。胰岛素促泌剂包括磺酰脲类(SFU)和非磺酰脲类那格列奈和 瑞格列奈。磺酰脲类被再分成两小类：第一代药剂，例如甲苯磺丁 脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、醋酸己脲，和第二代药剂，例如格列本脲 (优降糖)、格列吡嗪和格列齐特。
胰岛素促泌剂具有的限制包括可能诱导低血糖症、体重增加，和 高的原发性和继发性失败率。最初接受治疗的患者中约10到20％未能 显示显著的治疗效果(原发性治疗失败)。继发性治疗失败显示在用胰 岛素促泌剂治疗6个月后治疗效果另外丧失20-30％。在治疗5-7年 后，在50％的胰岛素促泌剂应答者中要求使用胰岛素疗法(Scheen等 人，Diabetes Res.Clin.Pract.6：533 543，1989)。那格列奈和瑞 格列奈是短效药物，其需要每天给予三次。它们仅被用于控制餐后葡 萄糖，而非用于控制空腹葡萄糖。
使用磺酰脲类进行治疗增加低血糖症的风险(或胰岛素休克)，低 血糖症在血糖水平降到正常水平以下时发生(UKPDS Group.UK Prospective Diabetes Study 33：Intensive blood-glucose control with sulphonylureas or insulin compared with conventional treatment and risk of complications in patients with type 2 diabetes.Lancet，352，837-853(1998)。
用胃肠道蛋白质激素进行治疗可能是另一种治疗糖尿病的方法。 胃肠道蛋白质激素，包括但不限于，葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP) 和胰高血糖素样肽-1(GLP-1)，在食物摄取后刺激胰岛素合成和从郎格 罕氏岛细胞的β-细胞的分泌，从而降低血糖水平。另外，长期已知葡 萄糖的口服给药增加胰岛素分泌超过静脉内葡萄糖给药剂量，尽管具 有类似的血浆葡萄糖浓度。Scow等人，Am J.Physiol.， 179(3)：435-438(1954)。这种效应，被称为肠促胰岛素分泌效应，为 调节葡萄糖处置和糖尿病及其相关疾病的治疗提供了基础。
最强力的胃肠道蛋白质激素是GLP-1，其最初是37个氨基酸的肽 并且是高血糖素原的产物。随后在第6位和第7位之间的内源性分裂 产生具有生物学活性的GLP-1(7-37)肽。当摄入葡萄糖时，GLP-1由内 脏腔表面中的L型肠内分泌细胞分泌。GLP-1通过G蛋白偶联的细胞 表面受体(GLP-1R)起作用并且受到T1R味觉受体和味蛋白(gustducin) 调节。参见Kokrashvili等人，AChemS XXIX Abstract， 246(2007)。研究已显示，在由糖和甜味剂刺激的GLP-1从L型肠内分 泌细胞的分泌中，α-味蛋白结合甜味受体T1R3。参见Jang等人， Proc.Natl.Acad.Sci.USA，104(38)：15069-15074；Margolskee 等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 104(38)：15075- 15080(2007)。GLP-1具有几种生理功能；例如，1)其以葡萄糖依赖性 方式刺激胰岛素从胰岛细胞的合成，从而降低血糖水平；2)其降低高 血糖素从胰腺的分泌；3)其增加β-细胞量和胰岛素基因表达；4)其抑 制胃液分泌和排空；5)其通过增加饱腹感而剂量依赖性抑制食物摄 取；和6)其促进体重减轻。GLP-1的几种作用描述于美国专利 6,583,118；美国专利7,211,557；美国专利申请公报 2005/0244810；Deacon，Regulatory Peptides 128：117- 124(2005)；和Turton等人，Nature，379，69-72(1996)中。

因此，通过增加GLP-1分泌水平可用于直接刺激胰岛素分泌或间 接刺激胰岛素的抗糖尿病药对于糖尿病及其相关病症的治疗将是所需 的。
本发明涉及TRPM5抑制剂用于增强胰岛素分泌的应用。另外，根 据本发明，TRPM5抑制剂可用于治疗诸如糖尿病和对胰岛素增加有积 极应答的其它病况的病况。
在一个实施方案中，公开了通过对受试者给予本文的式I化合物 来治疗糖尿病的方法。
还提供了在哺乳动物中治疗、预防或控制高血糖症和/或胰岛素抵 抗的方法，包括对有需要的受试者给予有效量的TRPM5抑制剂，诸如 式I化合物。
在该实施方案的一个方面，糖尿病是2型糖尿病或年轻人的成年 型糖尿病，在另一方面，TRPM5抑制剂增强胰岛素释放，诸如增强由 葡萄糖刺激的胰岛素释放。在其它方面，该化合物增强由超生理 (supraphysiological)葡萄糖浓度刺激的胰岛素释放，并且不增强在 生理葡萄糖浓度存在的条件下的胰岛素释放。
还提供了用于治疗糖尿病、胰岛素抵抗综合征和高血糖症的药物 组合物，其包含TRPM5抑制剂诸如式I化合物。本发明的这些和其它 方面在本文被更详细地描述。
本发明还涉及增强GLP-1从细胞释放的方法，包括使所述细胞接 触有效量的一种或多种TRPM5抑制剂。在某些实施方案中，TRPM5抑 制剂是式I化合物。
本发明还涉及在哺乳动物中降低胃液分泌和排空的方法，抑制食 物摄取的方法，降低胰高血糖素分泌的方法，增强胰岛素敏感性的方 法，增加胰岛素基因表达的方法，和治疗肥胖症的方法，包括对所述 有需要的哺乳动物给予有效量的一种或多种TRPM5抑制剂。在某些实 施方案中，TRPM5抑制剂是式I化合物。
附图说明
图1A表示在不同条件(A-H)下在β-TC6细胞中对胰岛素合成和释 放的刺激。所述不同条件(A-H)如下所示：A)KRBB缓冲液；B)KRBB 和DMSO(媒介物)；C)KRBB、DMSO和LG化合物A(100μM，一种已知 增强TRPM5的化合物)；D)KRBB、DMSO和实施例4(100μM)；E)KRBB 和2mM葡萄糖；F)KRBB、2mM葡萄糖和DMSO；G)KRBB、DMSO、 2mM葡萄糖和LG化合物A(100μM)；H)KRBB、DMSO、2mM葡萄糖和实 施例4。图1B表示用于KRBB(缓冲液)应答的被减去的相同结果。
图2提供了在β-TC6细胞中在葡萄糖(2mM)存在的条件下由实施 例4的化合物刺激的胰岛素分泌的剂量-应答曲线。
图3比较了葡萄糖浓度对由实施例3的化合物和甲苯磺丁脲刺激 的胰岛素释放的影响。如图3所示，实施例3的化合物与甲苯磺丁脲 相反地以葡萄糖依赖性方式增加胰岛素分泌，甲苯磺丁脲对葡萄糖水 平不敏感。
图4表示实施例3的化合物、甲苯磺丁脲和二氮嗪对小鼠β-细胞 胰岛瘤系TC6的胰岛素分泌的影响。
图5说明某些TRPM5增强剂在刺激胰岛素分泌中是无效的并且还 说明实施例3的化合物增加胰岛素分泌。
图6说明实施例4和甲苯磺丁脲对胰岛素分泌的加合效应。
图7表示实施例4的化合物与甲苯磺丁脲相反地以葡萄糖依赖性 方式增加胰岛素分泌。
图8表示格列本脲对于胰岛素分泌的剂量-应答。
图9表示在100μM甲苯磺丁脲存在的条件下各种化合物的剂量应 答。
图10表示在300μM二氮嗪存在的条件下各种化合物的剂量应答。
图11提供了被绘成图的实验结果，其表示在βTC-6细胞中和用 TRPM5克隆的HEK细胞中，在钙激活的离子通道电流之间的类似性。
图12说明了在βTC-6细胞中和根据Talavera等人，Nature 438：1022-1025(2005)的报道在TRPM5通道中在钙激活的电流之间的 温度依赖性的相似性。
图13提供了在βTC6细胞中钙激活的电流的电流-时间曲线并显示 了由实施例4的化合物的脉冲剂量所导致的电流抑制。
图14提供了一份凝胶电泳图，其显示了根据RT-PCR测定在小鼠 βTC-6细胞中存在mTRPM5。
图15提供了实施例4化合物的对映体的HPLC分离的结果。
图16表示在GLUTag细胞中，TRPM5抑制剂(实施例3的化合物) 在10mM葡萄糖存在的条件下增强GLP-1分泌，而在GLUTag细胞中， TRPM5增强剂在10mM葡萄糖存在的条件下降低GLP-1分泌。
图17表示在GLUTag细胞中实施例3和实施例23的化合物在 12.5mM葡萄糖存在的条件下增加GLP-1分泌。实施例3的化合物增 加GLP-1分泌的效力，而实施例23的化合物比实施例3的化合物的效 力更强。为了比较显示了用于GLP-1释放的葡萄糖的标准曲线。
图18表示在GLUTag细胞中，实施例3和实施例23的化合物在中 等高浓度的葡萄糖(3.3mM)存在的条件下增加GLP-1释放。
图19表示在GLUTag细胞中实施例3和实施例23的化合物在低葡 萄糖(0.1mM)存在的条件下增加GLP-1释放。这两个实施例的IC50值 (分别是600nM和111nM)与在FLIPR膜电位试验中获得的IC50值相 似。
发明详述
本发明提供了可用于增加胰岛素释放、GLP-1释放、胰岛素敏感 性和胰岛素基因表达的方法和组合物及其应用。本发明的其它方面在 本文中被详细描述。
使用方法
本发明的第一方面涉及增强胰岛素分泌的方法，包括给予有效量 的作为TRPM5抑制剂的化合物。该化合物可被给予到细胞或整个有机 体，以便获得增强的胰岛素分泌。另外，TRPM5抑制剂可单独地或与 已知引起胰岛素分泌释放的药剂诸如葡萄糖一起被给予。例如，本发 明所用的TRPM5可以是IC50为1微摩尔或更低、优选100纳摩尔或更 低的TRPM5抑制剂。在另一个实施方案中，本方法所用的TRPM5抑制 剂在5微摩尔或更低的浓度下抑制TRPM5受体至少75％，优选90％。
TRPM5抑制剂可以采用本文公开的试验和方法进行鉴定。另外， 在2006年11月3日提交的美国专利申请11/592,180(其全文被并入 本文)中所公开的试验可用于鉴定作为TRPM5抑制剂的化合物。另 外，在全文被并入本文的美国专利申请公报20050019830中公开的试 验可用于鉴定作为TRPM5抑制剂的化合物。
在某些实施方案中，TRPM5抑制剂可为蛋白质，肽，小分子或天 然产物。在优选情况中，在本发明方法中使用小分子TRPM5抑制剂来 抑制味觉。例如，TRPM5抑制剂可为分子量小于或等于约500质量单 位的小分子化合物。在另一个实施方案中，TRPM5抑制剂可为分子量 为约50到约500质量单位的小分子。作为替代，TRPM5抑制剂可为分 子量为约100、200、300或400质量单位的小分子。这些化合物可选 自本文所述的任何具体化合物或组。
可用于本发明的TRPM5抑制剂可包括许多化学官能团。在本方法 的某些实施方案中，优选的TRPM5抑制剂包括一种或多种选自以下优 选基团的官能团。例如，在优选情况中，本方法所用的TRPM5抑制剂 包含约5个或更少的氢键供体(例如OH和NH基)。在其它实施方案 中，本方法所用的TRPM5抑制剂将包含约10个或更少的氢键受体(例 如N和O)。这些化合物可选自本文所述的任何具体化合物或组。在优 选方案中，本方法所用的TRPM5抑制剂将包含1到5个氢键供体和1 到5个氢键受体。
TRPM5抑制剂在其结构中可包括例如一种或多种以下官能团：吡 啶基，高吡啶基，氨基哌啶基氨甲酸酯，苯基氨甲酸酯，环己基，环 戊基，哌啶基，哌嗪基，吡咯基，呋喃基，噻吩基，吡唑基，咪唑 基，噻唑基，异噻唑基，噁唑基，异噁唑基，噁二唑基，三唑基，四 唑基，吡啶基，嘧啶基，苯并咪唑基，萘基，吲哚基，异吲哚基，苯 并呋喃基，异苯并呋喃基，苯并[b]噻吩基，苯并[d]异噁唑基，喹啉 基，异喹啉基，噌啉基，喹唑啉基和喹喔啉基。
在另一实施方案中，TRPM5抑制剂在其化学结构中可包括但不限 于以下官能团：吡啶基，高吡啶基，氨基哌啶基氨甲酸酯，苯基氨甲 酸酯，环己基，环戊基，哌啶基，哌嗪基，吡咯基，呋喃基噻吩基， 吡唑基，咪唑基，噻唑基，异噻唑基，噁唑基，异噁唑基，噁二唑 基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，苯并咪唑基，萘基，吲哚 基，异吲哚基，苯并呋喃基，异苯并呋喃基，苯并[b]噻吩基，苯并[d] 异噁唑基，喹啉基，异喹啉基，噌啉基，喹唑啉基和喹喔啉基，它们 任选地被苯、卤化物、胺、羟基和/或烷基取代。这些化合物可选自本 文所述的任何具体化合物或组。
在其它实施方案中，本方法所用的TRPM5抑制剂具有的分配系数 (log P)为约0到约5，优选为约1到约5，或为约2到约4。这些化 合物可选自本文所述的任何具体化合物或组。
在又一实施方案中，适当的TRPM5抑制剂是分子量为100到500 质量单位并且在其化学结构中包含一个或多个、优选1-3个以下官能 团的TRPM5抑制剂：吡啶基，高吡啶基，氨基哌啶基氨甲酸酯，苯基 氨甲酸酯，环己基，环戊基，哌啶基，哌嗪基，吡咯基，呋喃基噻吩 基，吡唑基，咪唑基，噻唑基，异噻唑基，噁唑基，异噁唑基，噁二 唑基，三唑基，四唑基，吡啶基，嘧啶基，苯并咪唑基，萘基，吲哚 基，异吲哚基，苯并呋喃基，异苯并呋喃基，苯并[b]噻吩基，苯并[d] 异噁唑基，喹啉基，异喹啉基，噌啉基，喹唑啉基和喹喔啉基，它们 任选地被苯、卤化物、胺、羟基和/或烷基取代。这些化合物可选自本 文所述的任何具体化合物或组。
在一个实施方案中，本方法包括对需要胰岛素释放增加的受试者 给予式I化合物：

或其生理学可接受的盐，其中
R1是C6-14芳基，5-14元杂芳基，C3-14环烷基，C3-14环烯基，3-14 元环杂烷基，3-14元环杂烯基和C1-6烷基，其各自任选地被取代；
R2是H，C1-6烷基，C6-10芳基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
R3是H，C1-6烷基，C6-10芳基或氰基；
R4是C1-6烷基，C6-14芳基，5-14元杂芳基，C3-14环烷基，C3-14环 烯基，3-14元环杂烷基或3-14元环杂烯基，其各自任选地被取代， 或者是氰基；
L1不存在，或者是含1-10个碳原子和/或杂原子的连接基并且其 任选地被取代；
L2不存在，或者是含1-10个碳原子和/或杂原子的连接基并且其 任选地被取代；或
R3，R4和L2，与L2和R3所连接的碳原子一起，形成选自以下的基 团：C6-14芳基，5-14元杂芳基，C3-14环烷基，C3-14环烯基，3-14元 环杂烷基，3-14元环杂烯基，其各自任选地被取代。
在一个实施方案中，R1是任选被取代的C6-10芳基，诸如苯基或萘 基。在另一个实施方案中，R1是任选被取代的5-10元杂芳基，或优选 5-7元杂芳基，诸如但不限于吡啶基，嘧啶基，咪唑基，四唑基，呋 喃基，噻吩基，吲哚基，氮杂吲哚基，喹啉基，吡咯基，苯并咪唑基 和苯并噻唑基，其各自任选地被取代。在其它情况中，杂芳基是含氮 的杂芳基或含氧的杂芳基。
在另一个实施方案中，R1是任选被取代的10-14元杂芳基，诸如 咔唑基例如9-咔唑基，或喹啉基例如2-喹啉基。
R1的另一子集包括具有1-3个独立地选自以下的取代基的被取代 的芳基或杂芳基：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷 基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亚烷 基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基， C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨 基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧 基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。适当 的R1基团包括4，8-二甲基喹啉-2-基。
在另一个实施方案中，R1是任选被取代的C3-10环烷基或任选被取 代的C3-10环烯基。在另一个实施方案中，R1是任选被取代的3-10元 环杂烷基或任选被取代的3-10元环杂烯基。适当的R1基团包括但不限 于环丙基，环戊基，环己基，环戊烯基，环己烯基等。环烷基还包括 二环烷基和多环烷基，优选含7-10个碳原子，诸如二环并[4.1.0]庚 烷基和金刚烷基。
R1的另一子集包括具有1-3个独立地选自以下的取代基的被取代 的C3-10环烷基或C3-10环烯基：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫 醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧 基，C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨 基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1- 4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰 基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷 基。
在又一个实施方案中，R1是任选被取代的C1-6烷基，诸如甲基， 乙基和丙基。R1可为直链或支链烷基。适当的被取代的烷基包括卤代 烷基，羟基烷基，氨基烷基等。
在另一个实施方案中，R2是H。作为替代，R2是C1-6烷基，诸如甲 基，乙基或丙基。R2可为直链或支链烷基。在其它实施方案中，R2是 C6-10芳基(C1-6)烷基，诸如苄基，苯乙基或苯基丙基。优选地，R2是 C6-10芳基(C1-4)烷基。
在另外的实施方案中，R3是H。作为替代，R3是C1-6烷基，诸如甲 基，乙基或丙基。R3可为直链或支链烷基。在又一个实施方案中，R3 是氰基(-CN)。
在另一个实施方案中，R4是任选被取代的C6-10芳基，诸如苯基或 萘基。在另一个实施方案中，R4是任选被取代的5-10元杂芳基，或优 选5-7元杂芳基，诸如包括但不限于：吡啶基，嘧啶基，咪唑基，四 唑基，呋喃基，噻吩基，吲哚基，氮杂吲哚基，喹啉基，吡咯基，苯 并咪唑基和苯并噻唑基，其各自任选地被取代。在其它情况中，杂芳 基是含氮的杂芳基。在其它情况中，杂芳基是含氧的杂芳基。
R4的另一子集包括具有1-3个独立地选自以下的取代基的被取代 的芳基或杂芳基：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷 基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亚烷 基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6 羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二C1-4)烷基氨基， C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6) 烷氧基C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。适当的R4基团 包括3，4-二甲氧基苯基。
在另一个实施方案中，R4是任选被取代的C3-10环烷基或任选被取 代的C3-10环烯基。在另一个实施方案中，R4是任选被取代的3-10元环 杂烷基或任选被取代的3-10元环杂烯基。适当的R4基团包括但不限 于：环丙基，环戊基，环己基，环戊烯基，环己烯基等。环烷基还包 括二环烷基，诸如二环并[4.1.0]庚烷基。
在又一个实施方案中，R4是任选被取代的C1-6烷基，诸如甲基， 乙基和丙基。R4可为直链或支链烷基。适当的被取代的烷基包括卤代 烷基，羟基烷基，氨基烷基等。
在一个实施方案中，L1不存在。因此，根据该实施方案，R1直接 通过单一键连接于氮原子。
在另一个实施方案中，L1是包含1-10个、优选1-7个碳原子和/ 或杂原子的连接基并且其任选被取代。连接基是将R1与氮连接的二价 部分。连接基可以是包含1-10个碳原子和/或杂原子的任何适当的二 价部分。适当的连接基包含例如1、2、3、4、5或6个碳原子和/或杂 原子。
例如，连接基可以是含1-10个、优选1-7个碳原子的二价碳连接 基，诸如但不限于：亚甲基(-CH2-)，亚乙基(-CH2-CH2-)，亚丙基(例 如，-CH2-CH2-CH2-)，亚丁基等。作为替代，L1可以是C3-10亚环烷基连 接基，诸如亚甲基亚环丙基。二价碳连接基可以被本文所述的适当的 取代基所取代。在另一个子集中，取代基的优选基团包括：氨基，羟 基，卤素，氰基，硫醇，氧代，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基， C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基， C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基， 二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧 基羰基，羧基，氨基羰基和C2-6羧基烷基。
L1还可为含2-10个、优选含2-6个碳原子和杂原子的二价连接 基。适当的连接基包括例如以下的非限制性实例：亚烷基氧基，亚烷 基氨基，亚烷基硫基，亚烷基二氧基。其它适当的实例包 括-OCH2-，-SCH2-，-NHCH2-，-OCH2CH2-，-NHCH2CH2-和-OCH2CH2CH2-。 可理解，既包含碳原子又包含杂原子的优选的连接基是其中杂原子不 直接连接于式I的氮原子的连接基。
连接基L1还可包含1-10个杂原子，优选包含1、2或3个杂原 子。适当的杂原子连接基包括：-O-，-S-，-NH-，-N＝N-等。
在其它实施方案中，连接基L1是1-6元亚烷基，亚烯基或亚炔基 部分。在其它实施方案中，连接基L1是1-6元杂亚烷基，杂亚烯基或 杂亚炔基部分。
连接基L1可以如本文所述被取代。在一个实施方案中，连接基L1 是包含1-6个碳原子并且被1、2或3个选自以下的取代基取代的二价 部分：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫醇，氧代，C1-6烷基，C2-6 烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亚烷基二氧 基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷 基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰 基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基 (C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6羧基烷基。
在另一个实施方案中，L1是选自以下的连接基：

在另一个实施方案中，L1是选自以下的连接基：-(O)CCH2S-。
在另外的实施方案中，R1和L1一起形成选自以下的基团：

在一个实施方案中，L2不存在。因此，根据该实施方案，R4直接 连接于通过双键与氮原子连接的碳原子上。
L2还可为含2-10个、优选含2-6个碳原子和杂原子的二价连接 基。适当的连接基包括例如以下的非限制性实例：亚烷基氧基，亚烷 基氨基，亚烷基硫基，亚烷基二氧基。其它适当的实例包括-OCH2-，- NHCH2-，-OCH2CH2-，-NHCH2CH2-和-OCH2CH2CH2-。可理解，既包含碳原 子又包含杂原子的优选的连接基是其中杂原子不直接连接于式I的氮 原子的连接基。在一些情况中，L2不包含环系统。
连接基L2还可为含1-10个杂原子、优选含1、2或3个杂原子的 连接基。适当的杂原子连接基包括：-O-，-S-，-NH-，-N＝N-等。
在另外的实施方案中，R4和L2-起形成选自以下的基团：-N＝N-芳 基和-N＝N-杂芳基。-N＝N-芳基的适当实例包括但不限于其中苯基任选 被取代的-N＝N-苯基和其中萘基任选被取代的-N＝N-萘基。
在另外的实施方案中，R4和L2一起形成选自以下的基团：

在第一小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中
R1是任选被取代的C6-10芳基；
R2是H或C1-6烷基，优选C1-4烷基；
R3是H或C1-6烷基，优选C1-4烷基；和
R4是任选被取代的C6-10芳基。
在该第一小类的一个实施方案中，R1是未被取代的苯基。在其它 情况中，C6-10芳基，诸如苯基，被1、2或3个独立地选自以下的基团 所取代：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯 基，C2-6炔基，C1-6卤代烷基，C3-6环烷基，C3-6环烯基，C3-6环杂烷 基，C3-6环杂烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亚 烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基， C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨 基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基， (C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基 氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基， 氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺酰基，C2-6炔基磺酰基，C1-6烷基 亚磺酰基，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亚氨基氨 基，甲酰基亚氨基氨基，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6) 烷基氨基。
在其它另外的情况中，芳基的取代基选自：氨基，羟基，硝基， 卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷氧 基，C3-6烯基氧基，C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基 烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基 氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2- 6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6 羧基烷基。
在另一个实施方案中，R1上的取代基独立地选自：硝基，溴代， 氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羟基甲基，甲基， 烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羟基，三氟甲基，吗啉基和吡咯烷基。
在该第一小类的另一个实施方案中，L1是含1-6个碳原子和/或杂 原子的连接基并且其任选被取代。
在该第一小类的另一个实施方案中，L2是含1-6个碳原子和/或杂 原子的连接基并且其任选被取代。
在另一个实施方案中，L2不包含环系统。
在该第一小类的另一个实施方案中，R4是任选被1-3个选自以下 的取代基取代的苯基：硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧 基，二乙基氨基，羟基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羟 基，三氟甲基，吗啉基和吡咯烷基。
在第二小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中
R1是任选被取代的5-10元杂芳基；
R2是H或C1-6烷基；
R3是H或C1-6烷基；和
R4是任选被取代的C6-10芳基。
在该第二小类的一个实施方案中，R1是未被取代的5-10元杂芳 基，诸如吲哚基，吡啶基，苯并噻唑基，苯并咪唑基或喹啉基。作为 替代，R1是被一个或多个独立地选自以下的取代基取代的5-10元杂芳 基：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2- 6炔基，C1-6卤代烷基，C3-6环烷基，C3-6环烯基，C3-6环杂烷基，C3-6 环杂烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亚烷基二氧 基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷 基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基 羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基 (C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷 氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基， C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺酰基，C2-6炔基磺酰基，C1-6烷基亚磺酰基， C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亚氨基氨基，甲酰基 亚氨基氨基，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
在其它另外的情况中，杂芳基的取代基选自：氨基，羟基，硝 基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷 氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨 基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷 基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基， C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和 C2-6羧基烷基。
在另一个实施方案中，R1上的取代基独立地选自：硝基，溴代， 氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羟基甲基，甲基， 烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羟基，三氟甲基，吗啉基和吡咯烷基。
在该第一小类的另一个实施方案中，L1是含1-10个、优选含1-4 个碳原子和/或杂原子的连接基并且其任选被取代。
在该第一小类的另一个实施方案中，L2是含1-10个、优选含1-4 个碳原子和/或杂原子的连接基并且其任选被取代。在另外的实施方案 中，L2不包含环系统。
在第三小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中
R1是任选被取代的C6-10芳基；
R2是H或C1-6烷基；
R3是H或C1-6烷基；和
R4是任选被取代的5-10元杂芳基。
在该第三小类的一个实施方案中，R1是未被取代的苯基。在其它 情况中，C6-10芳基，诸如苯基，被1、2或3个独立地选自以下的基团 所取代：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯 基，C2-6炔基，C1-6卤代烷基，C3-6环烷基，C3-6环烯基，C3-6环杂烷 基，C1-6环杂烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亚 烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基， C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨 基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基， (C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基 氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基， 氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺酰基，C2-6炔基磺酰基，C1-6烷基 亚磺酰基，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亚氨基氨 基，甲酰基亚氨基氨基，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6) 烷基氨基。
在其它另外的情况中，芳基的取代基选自：氨基，羟基，硝基， 卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷氧 基，C3-6烯基氧基，C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基 烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基 氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2- 6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6 羧基烷基。
在另一个实施方案中，R1上的取代基独立地选自：硝基，溴代， 氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羟基甲基，甲基， 烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羟基，三氟甲基，吗啉基和吡咯烷基。
在该第一小类的另一个实施方案中，L1是含1-10个、优选含1-4 个碳原子和/或杂原子的连接基并且其任选被取代。
在该第一小类的另一个实施方案中，L2是含1-10个、优选含1-4 个碳原子和/或杂原子的连接基并且其任选被取代。在另外的实施方案 中，L2不包含环系统。
在该第三小类的一个实施方案中，R4是未被取代的5-10元杂芳 基，诸如吲哚基，吡啶基，苯并噻唑基，苯并咪唑基或喹啉基。作为 替代，R1是被一个或多个独立地选自以下的取代基取代的5-10元杂芳 基：硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基， 羟基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羟基，三氟甲基，吗 啉基和吡咯烷基。
在第四小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中
R1是任选被取代的5-10元杂芳基；
R2是H或C1-6烷基；
R3是H或C1-6烷基；和
R4是任选被取代的5-10元杂芳基。
在该第四小类的一个实施方案中，R1是未被取代的5-10元杂芳 基，诸如吲哚基，吡啶基或喹啉基。作为替代，R1是被一个或多个独 立地选自以下的取代基取代的5-10元杂芳基：氨基，羟基，硝基，卤 素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6卤代烷基，C3-6 环烷基，C3-6环烯基，C3-6环杂烷基，C3-6环杂烯基，C1-6烷氧基，C3-6 烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基， C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一 (C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰 基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷 基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基) 氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺 酰基，C2-6炔基磺酰基，C1-6烷基亚磺酰基，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10 芳基磺酰胺基，C1-6烷基亚氨基氨基，甲酰基亚氨基氨基，C2-6羧基烷 氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
在其它另外的情况中，杂芳基的取代基选自：氨基，羟基，硝 基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷 氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨 基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷 基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基， C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和 C2-6羧基烷基。
在另一个实施方案中，R1上的取代基独立地选自：硝基，溴代， 氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羟基甲基，甲基， 烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羟基，三氟甲基，吗啉基和吡咯烷基。
在该第四小类的一个实施方案中，R4是未被取代的5-10元杂芳 基，诸如吲哚基，吡啶基，苯并噻唑基，苯并咪唑基或喹啉基。作为 替代，R1是被一个或多个独立地选自以下的取代基取代的5-10元杂芳 基：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2- 6炔基，C1-6卤代烷基，C3-6环烷基，C3-6环烯基，C3-6环杂烷基，C3-6 环杂烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亚烷基二氧 基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷 基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基 羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基 (C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷 氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基， C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺酰基，C2-6炔基磺酰基，C1-6烷基亚磺酰基， C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亚氨基氨基，甲酰基 亚氨基氨基，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
在其它另外的情况中，杂芳基的取代基选自：氨基，羟基，硝 基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷 氧基，C3-6烯基氧基，C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨 基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷 基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基， C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和 C2-6羧基烷基。
在另一个实施方案中，R4上的取代基独立地选自：硝基，溴代， 氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羟基甲基，甲基， 烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羟基，三氟甲基，吗啉基和吡咯烷基。
在第五小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中
R1是任选被取代的C6-10芳基；
R2是H或C1-6烷基；
R3是H或C1-6烷基；和
R4是任选被取代的C3-10环烷基。
在该第五小类的一个实施方案中，R1是未被取代的苯基。在其它 情况中，C6-10芳基，诸如苯基，被1、2或3个独立地选自以下的基团 所取代：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯 基，C2-6炔基，C1-6卤代烷基，C3-6环烷基，C3-6环烯基，C3-6环杂烷 基，C3-6环杂烯基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亚 烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基， C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨 基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基， (C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基 氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基， 氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺酰基，C2-6炔基磺酰基，C1-6烷基 亚磺酰基，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C1-6烷基亚氨基氨 基，甲酰基亚氨基氨基，C2-6羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6) 烷基氨基。
在其它另外的情况中，芳基的取代基选自：氨基，羟基，硝基， 卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C1-6卤代烷基，C1-6烷氧 基，C3-6烯基氧基，C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C1-6氨基 烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基 氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2- 6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，C2-6羧基烷氧基和C2-6 羧基烷基。
在另一个实施方案中，R1上的取代基独立地选自：硝基，溴代， 氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨基，羟基甲基，甲基， 烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羟基，三氟甲基，吗啉基和吡咯烷基。
在第六小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中
R1是任选被取代的5-10元杂芳基；
R2是H或C1-6烷基；
R3是H或C1-6烷基；和
R4和L2一起形成-N＝N-芳基。
在该第六小类的一个实施方案中，R1是未被取代的5-10元杂芳 基，诸如吲哚基，吡啶基或喹啉基。作为替代，R1是被一个或多个独 立地选自以下的取代基取代的5-10元杂芳基：氨基，羟基，硝基，卤 素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6卤代烷基，C3-6 环烷基，C3-6环烯基，C3-6环杂烷基，C3-6环杂烯基，C1-6烷氧基，C3-6 烯基氧基，C1-6烷基硫基，C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基， C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基，C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一 (C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰 基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷 基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，C2-10一(羧基烷基) 氨基，二(C2-10羧基烷基)氨基，氨基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺 酰基，C2-6炔基磺酰基，C1-6烷基亚磺酰基，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10 芳基磺酰胺基，C1-6烷基亚氨基氨基，甲酰基亚氨基氨基，C2-6羧基烷 氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。在另一个实施方案中，R1 上的取代基独立地选自：硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲 氧基，二乙基氨基，羟基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基， 羟基，三氟甲基，吗啉基和吡咯烷基。
在该第六小类中，R4和L2一起形成-N＝N-芳基，其中芳基是任选被 取代的C6-10芳基，诸如苯基或萘基。芳基上的适当的取代基包括但不 限于：硝基，溴代，氯代，羧基，甲氧基羰基，甲氧基，二乙基氨 基，羟基甲基，甲基，烯丙基氧基，三氟甲基硫基，羟基，三氟甲 基，吗啉基和吡咯烷基。
在第七小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中
R1是任选被取代的5-10元杂芳基，诸如吡啶基，喹啉基，苯并噻 唑基，苯并咪唑基和吲哚基；
R4是任选被取代的C6-10芳基，诸如苯基和萘基；和
L1和L2不存在。
在第八小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中
R1是C6-10芳基，5-10元杂芳基，C3-10环烷基，C3-10环烯基，3-10 元环杂烷基，3-10元环杂烯基和C1-6烷基，其各自任选被取代；
R2是H，C1-6烷基或C6-10芳基(C1-6)烷基；
L1不存在，或者是含1-10个、优选含1-6个碳原子和/或杂原子 的连接基并且其任选被取代；
R3，R4和L2与碳原子一起形成选自以下的基团：C6-10芳基，5-10 元杂芳基，C3-10环烷基，C3-10环烯基，3-10元环杂烷基，3-10元环杂 烯基，其各自任选地被取代。
在其它小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中R1是杂芳基；R2是H；R4是杂芳基； L1不存在；和L2是N＝N。
在另外的小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，其中所述 方法包括对受试者给予式I化合物，其中R1是任选被取代的含氮的杂 芳基；和R2是任选被取代的苯基。
在其它小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中R1是二环烷基；R2是H；R3是H；R4 是芳基或杂芳基；L1不存在；和L2不存在。
在其它小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中R1是芳基；R2是H；R3是H；R4是芳 基或杂芳基；L1是任选被取代的含2-4个碳原子或杂原子的连接基； 和L2不存在。
在其它小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中R1是环烯基；R2是H；R3是H；R4是 芳基或杂芳基；L1是任选被取代的含2-4个碳原子或杂原子的连接 基；和L2不存在。
在其它小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中R1是任选被取代的芳基；R2是H；R3 是H；R4是任选被取代的芳基或任选被取代的杂芳基；L1是-(CH2)1-6- C(O)-；和L2不存在。
在其它小类中，本发明涉及增加胰岛素释放的方法，所述方法包 括对受试者给予式I化合物，其中R1是任选被取代的萘基；R2是H； R3是H；R4是任选被取代的芳基；L1是-(CH2)-C(O)-；和L2不存在。
在其它小类中，本发明的方法包括给予式I化合物，其中R1是任 选被一个或多个C1-6烷基取代的喹啉基；L1是任选被取代的C1-4连接 基；和R2是任选被取代的苯基，诸如被一个或多个C1-6烷氧基所取 代。
在其它小类中，本发明的方法包括给予式I化合物，其中R1是任 选被取代的咔唑基；L1是含1个硫原子并进一步任选被取代的C1-6连接 基；和R2是任选被取代的苯基，诸如被一个或多个C1-6烷氧基所取 代。
用于本发明方法的适当的化合物的实例包括：
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-基)肼叉基)-2-甲基-丙基) 二氮烯基)苯甲酸甲基酯；
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)-乙酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-2-(萘-1-基)-乙酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-2-苯基环丙烷-甲酰肼 (carbohydrazide)；
(E)-3-环己烯基-4-羟基-N′-(4-甲氧基苯亚甲基)-丁酰肼；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-4-羟基己酰肼；
2-((Z)-2-(苯基((E)-苯基二氮烯基)亚甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-2-(间-甲苯基氧基)乙酰肼；
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亚甲基)-2-(3-溴苄基硫 基)-乙酰肼；
(E)-N′-(4-异丙基苯亚甲基)二环并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼；
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)-亚乙基) 二氢吲哚；
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羟基苯亚甲基)-2-苯基环丙烷甲酰 肼；
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物 (carbonohydrazonoyldicyanide)；
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氢吲哚-3-基亚基)肼 基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺；
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亚甲基)肼基)苯甲酸；
(E)-4-((2-苄基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶；
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亚甲基)三环并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰 肼；
(Z)-1-(2-(4-(乙基(2-羟基乙基)氨基)苯基)肼叉基)-萘-2- (1H)-酮；
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基-肼叉基) 甲基)苯-1，3-二酚；
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′(4-吗啉代-3-硝基苯亚甲基)乙 酰肼；
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎宁环；
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨 基)苯酚；
及其生理学可接受的盐。
另外的适当的化合物包括：
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亚甲基)酰肼；
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亚甲基)酰 肼；
及其生理学可接受的盐。
本发明的方法还包括式I化合物的生理学可接受的盐的应用。术 语生理学可接受的盐是指式I化合物的酸加成盐和/或碱加成盐。酸加 成盐可通过将适当的酸加入到式I化合物中形成。碱加成盐可通过将 适当的碱加入到式I化合物中形成。所述酸或碱不使所述式I化合物 发生实质上的降解、分解或破坏。生理学可接受的盐的实例包括盐酸 盐，氢溴酸盐，乙酸盐，富马酸盐，马来酸盐，草酸盐和琥珀酸盐。 其它适当的盐包括钠、钾的盐，碳酸盐和氨丁三醇盐。
还可理解的是，本发明被认为涵盖了立体异构体以及光学异构 体，例如对映体的混合物以及单独的对映体和非对映体的应用，这些 异构体由于在被选择的本发明系列的化合物中的结构不对称而存在。 还可理解的是，本发明涵盖了式I化合物的互变异构体的应用。互变 异构体是本领域公知的并且包括酮-烯醇互变异构体。
还可理解的是，式I化合物包括腙的以可变比率存在的E和Z异 构体。正如本领域已知的，腙部分可在E异构体和Z异构体之间发生 异构化，如以下图解所示：

尽管上面列出的具体化合物可表示腙部分的特定立体化学，即E 或Z，但是本发明明确地包括异构体二者。
式I化合物还可进行溶合，包括水合。水合可发生在化合物或包 含该化合物的组合物制造期间，或者水合可由于化合物的吸水性而随 着时间发生。
在式I范围内的某些化合物可为被称为“前体药物”的衍生物。 术语“前体药物”表示已知直接起效药剂的衍生物，其中该衍生物具 有的治疗价值可能类似于、大于或小于该药剂的治疗价值。一般地， 前体药物当被递送至受试者、细胞或试验介质时通过酶促或化学过程 被转化为活性剂。在某些情况中，前体药物是本发明化合物的衍生 物，其具有可被代谢裂解的基团并且通过溶剂分解或在生理条件下变 为具有体内药学活性的本发明化合物。例如，本发明化合物的酯衍生 物通常具有体内活性，而不具有体外活性。本发明化合物的其它衍生 物在其酸和酸衍生物形式二者中都具有活性，但是酸衍生物形式通常 提供溶解性、组织相容性或在哺乳动物有机体中延迟释放的优点(参 见Bundgard，H.，Design of Prodrugs，pp.7-9，21-24， Blsevier，Amsterdam 1985)。前体药物包括本领域技术人员公知的 酸衍生物，诸如，例如，通过将母体酸与适当的醇反应制备的酯，或 者通过母体酸化合物与胺反应制备的酰胺。从本发明化合物的侧链酸 基团得到的简单脂族酯或芳族酯是优选的前体药物。在一些情况中， 希望制备双酯类型的前体药物，诸如(酰基氧基)烷基酯或((烷氧基羰 基)氧基)烷基酯。
在任何构成中或在式I中当任何变量出现超过一次时，其在每次 出现时的定义与其在所有其它次出现时的定义无关，除非另有陈述。 另外，取代基和/或变量的组合只有当这种组合产生稳定化合物时才是 被允许的。
术语″烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被使 用，除非对其链长有所限定，否则是指含最多10个碳的直链和支链基 团，诸如甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，1-甲基丙基，2-甲基丙 基，戊基，1-甲基丁基，异丁基，戊基，叔戊基(CH3CH2(CH3)2C-)，己 基，异己基，庚基，辛基或癸基。
术语″烯基″，本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被使 用，除非对其链长有所限定，否则是指含2-10个碳原子的直链或支链 基团，包括但不限于：乙烯基，1-丙烯基，2-丙烯基，2-甲基-1-丙烯 基，1-丁烯基，2-丁烯基，3-丁烯基，戊烯基，1-己烯基和2-己烯 基。
术语″炔基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被使 用，除非对其链长有所限定，否则是指含2-10个碳原子的直链或支链 基团，其中在链中的两个碳原子之间存在至少一个三键，包括但不限 于：乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基，1-甲基-2- 丁炔基，1-甲基-3-丁炔基，2-甲基-3-戊炔基，己炔基和庚炔基。
在其中存在烯基部分或炔基部分作为取代基团的情况中，优选不 饱和键不直接连接于氮、氧或硫部分。
术语″环烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被 使用，是指含3-14个、优选含3-10个碳原子的环烷基。典型实例是 环丙基，环丁基，环戊基和环己基。环烷基还包括二环烷基、多环烷 基和其它桥连的环烷基。
术语″环烯基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被 使用，是指含3-10个碳原子和1-3个碳-碳双键的环烯基。典型实例 包括环丙烯基，环丁烯基，环戊烯基，环己烯基，环庚烯基和环己二 烯基。环烯基还包括二环烯基，多环烯基和其它桥连的环烯基。
术语″环杂烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指含碳原子和1、2、3或4个氧、氮或硫杂原子的、包含 3到14环原子的基团。典型实例包括但不限于2-四氢呋喃基，2-四氢 噻吩基，2-吡咯烷基，3-异噁唑烷基，3-异噻唑烷基，1，3，4-噁唑烷- 2-基，2，3-二氢噻吩-2-基，4，5-异噁唑啉-3-基，3-哌啶基，1，3-二 噁烷-5-基，4-哌啶基，2-四氢吡喃基，4-四氢吡喃基，吡咯烷基，咪 唑烷基，吡唑烷基(pirazolidinyl)，四氢呋喃基，四氢吡喃基，哌 啶基，哌嗪基，奎宁环基和吗啉基。
术语″环杂烯基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指含碳原子和1、2、3或4个氧、氮或硫原子及1、2或3 个双键的、包含3到14个环原子的基团。典型实例优选包括如上所述 并经过修饰以包含1或2个双键的环杂烷基，特别是吡咯烷基，咪唑 烷基，吡唑烷基，四氢呋喃基，四氢吡喃基，哌啶基，哌嗪基，奎宁 环基和吗啉基。
术语″亚烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被 使用，是指除非另有陈述否则含1-15个碳原子、优选含1-10个碳原 子、更优选含1-6个碳原子的非支链饱和烃链的二价基。该术语的示 例性基团是：亚甲基(-CH2-)，亚乙基(-CH2CH2-)，亚丙基(-CH2CH2CH2- )，亚丁基等。
术语″亚烯基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被 使用，是指除非另有陈述否则含2-15个碳原子、优选含1-10个碳原 子、更优选含1-6个碳原子并具有至少一个乙烯基不饱和度、优选具 有1-6个乙烯基不饱和度的非支链不饱和烃链的二价基。该术语的示 例性基团是：亚乙烯基(-CH＝CH-)，亚丙烯基(-CH2CH＝CH-，- CH＝CHCH2-)等。
术语″亚炔基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被 使用，是指除非另有陈述否则含2-15个碳原子、优选含1-10个碳原 子、更优选含1-6个碳原子并具有至少一个乙炔(三键)不饱和度、优 选具有1-6个乙炔(三键)不饱和度的非支链不饱和烃链的二价基。实 例包括诸如亚乙炔基(-C≡C-)，亚炔丙基(-CH2-C≡C-)等的亚炔基。
术语″杂亚烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5个被选自N、O或S 的杂原子(例如氨基，氧基，硫基，氨基亚甲基(-NHCH2-)，氧基亚甲 基(-OCH2-)等)替换的亚烷基。实例包括亚烷基氧基，亚烷基氨基和亚 烷基硫基。优选地，其中所含的氧、氮和硫原子不与其它杂原子成 键。适当的基团包括亚乙基氧基，亚丙基氧基，亚丁基氧基，亚戊基 氧基，亚庚基氧基，亚乙基氨基，亚丙基氨基，亚丁基氨基，亚戊基 氨基，亚己基氨基，亚庚基氨基和亚辛基氨基。其它实例包括-CH2CH2- S-CH2CH2-和-CH2-S-CH2CH2-NH-CH2-。在杂亚烷基的一个实施方案中， 杂原子还可占据链末端中任一个而非两个。
术语″杂亚烯基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5个被选自N、O或S 的杂原子替换的亚烯基。实例包括亚烯基氧基，亚烯基氨基和亚烯基 硫基。优选地，其中所含的氧、氮和硫原子不与其它杂原子成键。适 当的基团包括亚乙烯基氧基，亚丙烯基氧基，亚丁烯基氧基，亚戊烯 基氧基，亚己烯基氧基，亚乙烯基氨基，亚丙烯基氨基，亚丁烯基氨 基，亚戊烯基氨基和亚己烯基氨基。在杂亚烯基的一个实施方案中， 杂原子还可占据链末端中任一个而非两个。另外，在另一个实施方案 中，杂原子不构成乙烯键的一部分。
术语″杂亚炔基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5个被选自N、O或S 的杂原子替换的亚炔基。实例包括亚炔基氧基，亚炔基氨基和亚炔基 硫基。优选地，其中所含的氧、氮和硫原子不与其它杂原子成键。在 杂亚炔基的一个实施方案中，杂原子可占据链末端中任一个而非两 个。另外，杂原子不构成乙烯键的一部分。
术语″亚环烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指含3-15个碳原子、优选含3-10个碳原子的非芳香的脂 环二价烃基。本文使用的″亚环烷基″的实例包括但不限于：环丙基- 1，1-二基，环丙基-1，2-二基，环丁基-1，2-二基，环戊基-1，3-二基， 环己基-1，4-二基等。另外的实例包括还包含亚烷基的二价基，诸如亚 甲基亚环丙基(即，-CH2-亚环丙基-)，亚乙基亚环丙基(即，- CH2CH2-亚环丙基-)和亚甲基亚环己基(即，-CH2-亚环己基-)。
术语″亚环烯基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指含3-15个碳原子、优选含3-10个碳原子和至少一个碳- 碳双键的被取代的脂环二价烃基。本文使用的″亚环烯基″的实例包括 但不限于：4，5-环戊烯-1，3-二基，3，4-环己烯-1，1-二基等。亚环烯 基另外是指如上关于亚环烷基所述的并且至少一个单键用双键代替的 二价烃基。双键可被包含在环结构内。作为替代，当可能时，双键可 位于亚环烯基的非环部分上。
术语″亚环杂烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部 分被使用，是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5个被选自N、O或 S的杂原子替换的亚环烷基。在一个实施方案中，其中所含的氧、氮 和硫原子不与其它杂原子成键。适当的实例包括哌啶、哌嗪、吗啉和 吡咯烷的二价基。其它适当的实例包括亚甲基哌啶基，亚乙基哌啶 基，亚甲基哌嗪基，亚乙基哌嗪基和亚甲基吗啉基。
术语″亚环杂烯基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部 分被使用是指如上所述并且其中所示碳原子的1-5个被选自N、O或S 的杂原子替换的亚环烯基。在一个实施方案中，其中所含的氧、氮和 硫原子不与其它杂原子成键。
术语″烷氧基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被 使用，是指与氧原子连接的任何上述烷基。典型实例是甲氧基，乙氧 基，异丙基氧基，仲-丁基氧基和叔-丁基氧基。
术语″烯基氧基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指与氧原子连接的任何上述烯基。典型实例包括乙烯基氧 基，丙烯基氧基，丁烯基氧基，戊烯基氧基和己烯基氧基。
术语″芳基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被使 用，是指在环部分中含6-14个碳、优选在环部分中含6-10个碳的单 环或二环的芳族基团。典型实例包括苯基，萘基，蒽基或芴基。
术语″芳烷基″或″芳基烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基 团的一部分被使用，是指如上所述并具有芳基取代基的C1-6烷基，诸如 苄基，苯基乙基或2-萘基甲基。
术语″杂芳基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分被 使用，是指含5-14个环原子；在环排列中共享6、10或14个π电子并 且包含碳原子和1、2、3或4个氧、氮或硫原子的基团；杂芳基的实 例是：噻吩基，苯并[b]噻吩基，萘并[2，3-b]噻吩基，噻蒽基，呋喃 基，吡喃基，异苯并呋喃基，苯并噁唑基，苯并吡喃基，呫吨基，吩 噻噁基，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧 啶基，哒嗪基，中氮茚基，异吲哚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基， 嘌呤基，4H-喹嗪基，异喹啉基，喹啉基，酞嗪基，萘啶基，喹唑啉 基，噌啉基，喋啶基，4αH-咔唑基，咔唑基，β-咔啉基，菲啶基， 吖啶基，萘嵌二氮杂苯，菲咯啉基，吩嗪基，异噻唑基，酚噻嗪基， 异噁唑基，呋咱基，酚噁嗪基和四唑基。另外的杂芳基描述于A.R. Katritzky and C.W.Rees，编，Comprehensive Heterocyclic Chemistry：The Structure，Reactions，Synthesis and Use of Heterocyclic Compounds，Vol.1-8，Pergamon Press，NY(1984) 中。
术语″亚烷基二氧基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一 部分被使用，涉及环并且特别是指C1-4亚烷基二氧基。亚烷基二氧基 可任选被卤素(特别是氟)取代。典型实例包括亚甲基二氧基(-OCH2O-) 或二氟亚甲基二氧基(-OCF2O-)。
术语″卤素″或″卤代″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一 部分被使用，是指氯、溴、氟或碘。
术语″一烷基胺″或″一烷基氨基″，在本文中单独被使用或作为其 它基团的一部分被使用，是指其中一个氢用如上所述的烷基取代的基 团NH2。
术语″二烷基胺″或″二烷基氨基″，在本文中单独被使用或作为其 它基团的一部分被使用，是指其中两个氢都被如上所述的烷基取代的 基团NH2。
术语″羟基烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用是指任何如上所述并且其一个或多个氢被一个或多个羟基部分 取代的烷基。
本文使用的术语″酰基氨基″是指式-NRaC(O)Rb所示部分，其中Ra 和Rb独立地是氢或如上所述的烷基。
术语″卤代烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指任何如上所述并且其一个或多个氢被一个或多个卤代部 分取代的烷基。典型实例包括氟甲基，三氟甲基，三氯乙基和三氟乙 基。
术语″卤代烯基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指任何如上所述并且其一个或多个氢被一个或多个卤代部 分取代的烯基。典型实例包括氟乙烯基，二氟乙烯基和三氯乙烯基。
术语″羧基烷基″，在本文中单独被使用或作为其它基团的一部分 被使用，是指任何如上所述并且其一个或多个氢被一个或多个羧酸部 分取代的烷基。
本文使用的术语″杂原子″是指氧原子(″O″)，硫原子(″S″)或氮 原子(″N″)。可理解的是，当杂原子是氮时，其可形成NRaRb部分，其 中Ra和Rb彼此独立地是氢或烷基，或者与它们所连接的氮一起形成饱 和的或不饱和的5、6或7元环。
术语″氧基″是指氧(O)原子。
术语″硫基″是指硫(S)原子。
一般地并且除非另有定义，本文使用的术语“任选被取代”是指 一个或多个基团任选被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：氨 基，羟基，硝基，卤素，氰基，硫醇，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔 基，C3-6环烷基，C3-6环烯基，C3-6环杂烷基，C3-6环杂烯基，C6-10芳 基，5-10元杂芳基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基， C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C6-10芳 基(C2-6)烯基，C6-10芳基(C1-6)烷氧基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基， C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨 基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧 基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4) 烷基氨基(C2-6)烷氧基C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨 基，氨基羰基，C6-14芳基(C1-6)烷氧基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺 酰基，C2-6炔基磺酰基，C6-10芳基磺酰基，C6-10芳基(C1-6)烷基磺酰基， C1-6烷基亚磺酰基，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C6-10芳基 (C1-6)烷基磺酰胺基，C1-6烷基亚氨基氨基，甲酰基亚氨基氨基，C2-6 羧基烷氧基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
当术语“任选被取代”在涉及烷基、烯基或炔基被使用时，本文 中的术语“任选被取代”是指所述一个或多个基团任选被一个或多个 独立地选自以下的取代基所取代：氨基，羟基，硝基，卤素，氰基， 硫醇，C3-6环烷基，C3-6环烯基，C3-6环杂烷基，C3-6环杂烯基，C6-10 芳基，5-10元杂芳基，C1-6烷氧基，C3-6烯基氧基，C1-6烷基硫基， C1-6亚烷基二氧基，C1-6烷氧基(C1-6)烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C6-10芳 基(C2-6)烯基，C6-10芳基(C1-6)烷氧基，C1-6氨基烷基，C1-6氨基烷氧基， C1-6羟基烷基，C2-6羟基烷氧基，一(C1-4)烷基氨基，二(C1-4)烷基氨 基，C2-6烷基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基氨基，C2-6烷氧基羰基，羧 基，(C1-6)烷氧基(C2-6)烷氧基，一(C1-4)烷基氨基(C2-6)烷氧基，二(C1-4) 烷基氨基(C2-6)烷氧基C2-10一(羧基烷基)氨基，二(C2-10羧基烷基)氨 基，C6-14芳基(C1-6)烷氧基羰基，C2-6炔基羰基，C1-6烷基磺酰基， C2-6炔基磺酰基，C6-10芳基磺酰基，C6-10芳基(C1-6)烷基磺酰基，C1-6烷 基亚磺酰基，C1-6烷基磺酰胺基，C6-10芳基磺酰胺基，C6-10芳基(C1-6)烷 基磺酰胺基，C1-6烷基亚氨基氨基，甲酰基亚氨基氨基，C2-6羧基烷氧 基，C2-6羧基烷基和羧基(C1-6)烷基氨基。
尽管没有为以上所用的每个术语都提供详细定义，但是每个术语 可被本领域普通技术人员所理解。
正如上面某些实施方案中所定义的，连接基L1和L2可为含1-10 个碳原子和/或杂原子的连接基并且其任选被取代。这可被理解为是指 所述连接基可包含碳原子和杂原子的任何组合，从而使得碳原子和杂 原子的总数，不包括任何任选的取代基，等于1-10的整数。因此，根 据本发明，适当的连接基可包括但不必限于：含1个碳原子的连接基 (例如CH2)；含1个杂原子的连接基(例如O)；含5个碳原子的连接基 (例如CH2CH2CH2CH2CH2)；含3个碳原子和2个杂原子的连接基(例如 OCH2CH2NHCH2)；含10个碳原子的连接基；或含9个碳原子和1个杂原 子的连接基。
术语“抑制剂”是指部分地改变或削弱TRPM5的功能和/或性质的 分子。“抑制剂”包括肽，蛋白质或其片段，肽模拟物，有机化合物 和抗体。在本发明的某些实施方案中，该抑制剂可完全阻断TRPM5的 功能。在其它实施方案中，该抑制剂可以一定的百分数(例如用IC50值 表示)阻断或抑制TRPM5的活性。
术语“糖尿病”是指其中存在诱导高血糖的葡萄糖利用受损的一 种代谢疾病。关于糖尿病的发病机理和形态学及其后期并发症综述可 由本领域技术人员了解，例如，参见Robins′Pathologic Basis of Disease(5th Ed.pp.910-922)。
术语“有效量”的TRPM5抑制剂是指抑制TRPM5受体或赋予对 TRPM5受体的抑制效果的量。该量单独地或与其它TRPM5抑制剂相组 合地足以赋予其所被给予的细胞或整个有机体以TRPM5抑制效果。在 一些实施方案中，有效量是不引起过度毒性、刺激性、过敏反应或其 它可能的并发症并与合理的益处/风险比率相称的量。
术语“胰岛素抵抗综合征”(IRS)是指一组包括以下的表现形式： 胰岛素抵抗；高胰岛素血症；非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)；高动脉 压；中央(内脏型)肥胖症；和脂质异常血症。除了NIDDM的主要的晚 期并发症(糖尿病性血管病，动脉粥样硬化，糖尿病性肾病，糖尿病 性神经病变，和糖尿病性眼并发症诸如视网膜病、白内障形成和青光 眼)之外，许多其它病况也与NIDDM有关，这些病况包括脂质异常血 症糖皮质激素诱导的胰岛素抵抗，脂质异常血症，多囊卵巢综合征， 肥胖症，高血糖症，高脂血症，高胆固醇血症，高甘油三酯血症，高 胰岛素血症和高血压。这些病况的简要定义可在任何医药词典例如 Stedman′s Medical Dictionary中被获得。
如上所述，上述化合物可被用来刺激胰岛素释放。该活性可为体 外活性或体内活性。用于刺激胰岛素释放的TRPM5抑制剂，诸如式I 化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物的量当在体内使用 时不必与体外使用量相同。当在体内增加胰岛素释放时，具体化合物 的因素诸如药物代谢动力学和药效学可能要求使用更大量或更小量的 TRPM5抑制剂，诸如式I的化合物，或任何上述的特定小组、小类或 具体化合物。
本发明包括在有需要的动物、优选哺乳动物中治疗糖尿病的方 法，包括对受试者给予有效量的TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任 何上述的特定小组、小类或具体化合物或其药学可接受的盐。该方法 还包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中预防糖尿病的方 法，包括对受试者给予胰岛素分泌增强量的TRPM5抑制剂，诸如式I 化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物或其药学可接受的 盐。
本发明还包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中治疗胰 岛素抵抗综合征的方法，包括对受试者给予有效量的TRPM5抑制剂， 诸如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物或其药学 可接受的盐。本发明还包括在哺乳动物中治疗或预防胰岛素抵抗的方 法，包括对所述哺乳动物给予有效量的TRPM5抑制剂，诸如式I化合 物或任何特定的小组、小类或其药学可接受的盐。
本发明包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中治疗高血 糖症的方法，包括对受试者给予有效量的TRPM5抑制剂，诸如式I化 合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物或其药学可接受的 盐。该方法还包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中预防高 血糖症的方法，包括对受试者给予胰岛素分泌增强量的TRPM5抑制 剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物或其 药学可接受的盐。
本发明还涉及增强GLP-1从细胞释放的方法，包括给予有效量的 TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体 化合物或其药学可接受的盐。如上所讨论的，GLP-1在食物摄取后刺 激胰岛素合成和从胰岛β-细胞的分泌，从而降低血糖水平。GLP-1是 37个氨基酸的肽并且是高血糖素原的产物。随后在第6位和第7位之 间的内源性分裂产生具有生物学活性的GLP-1(7-37)肽。当摄入葡萄 糖时，GLP-1从内脏的腔表面中的L-型肠内分泌细胞被分泌。GLP-1 还响应其它刺激而被释放。GLP-1通过G蛋白偶联的细胞表面受体、 特别是GLP-1R起作用，并且由T1R味觉受体和味蛋白进行调节。参见 Kokrashvili等人，AChemS XXIX Abstract，246(2007)。研究已显 示，在由糖和甜味剂刺激的GLP-1从L型肠内分泌细胞的分泌中，α- 味蛋白结合甜味受体T1R3。参见Jang等人，Proc.Natl.Acad.Sci. USA，104(38)：15069-15074(2007)。
GLP-1具有几种生理功能：1)其以葡萄糖依赖性方式刺激胰岛素 从胰岛细胞的合成，从而降低血糖水平；2)其降低高血糖素从胰腺的 分泌；3)其增加β-细胞量和胰岛素基因表达；4)其抑制胃液分泌和排 空；5)其通过增加饱腹感而剂量依赖性抑制食物摄取；和6)其促进体 重减轻。GLP-1的几种作用描述于美国专利6,583,118、美国专利 7,211,557；美国专利申请公报2005/0244810；Deacon，Regulatory Peptides 128：117-124(2005)；Turton等人Nature，379：69- 72(1996)。
已进行一些研究以鉴定GLP-1受体的非天然肽和小分子激动剂。 这些化合物可用于治疗2型糖尿病以及其它应用。这些化合物模仿 GLP-1的效果，因为它们加强由葡萄糖诱导的胰岛素从胰岛细胞的释 放。例如艾塞那肽是exendin-4的合成变体，exendin-4是最初从毒 蜥唾液中分离的天然肽。艾塞那肽目前被美国食品与药物管理局批准 用于辅助性治疗，以改善摄入二甲双胍、磺酰脲类或二甲双胍与磺酰 脲类的组合但未实现足够的血糖控制的2型糖尿病患者的血糖控制。 正在开发其它可能的模仿GLP-1效果的药剂。例如，参见，Knudsen 等人，Small-molecule agonists for the glucagon-like peptide 1 receptor，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 104(3)：937- 942(2007)。
因此，本发明的另一个方面是通过给予TRPM5抑制剂来刺激GLP- 1释放的方法。现有技术未暗示TRPM5抑制剂，诸如本文示例的那 些，可被用于增强GLP-1的释放，从而增加GLP-1的有益效果。因 此，在某些实施方案中，本发明提供了增强GLP-1从肠细胞诸如小肠 细胞释放并随后具有增强胰岛素从胰腺细胞释放的效果的方法。
TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何具体实施例可被给予至细 胞或整个有机体，以获得增强的GLP-1释放。另外，TRPM5抑制剂可 单独地或与已知引起GLP-1分泌释放的药剂诸如葡萄糖一起被给予。 例如，本发明所用的TRPM5可以是IC50为约1微摩尔或更低、优选约 100纳摩尔或更低的TRPM5抑制剂。在一些实施方案中，本方法所用 的TRPM5抑制剂在5微摩尔或更低的浓度下抑制TRPM5受体至少 75％，优选90％。
本文使用的“GLP-1”或胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是胃肠道蛋白 质激素，其增强通过给予营养物诸如葡萄糖、碳水化合物、脂肪、蛋 白质或混合氨基酸引起的胰岛素分泌。GLP-1的生理作用和在摄取营 养物后GLP-1释放的各种被提出的机制例如由Kreymann等人描述于 Lancet 2：1300-1304(1987)和由Deacon描述于Regulatory Peptides 128：117-124(2005)。除非另有说明，否则“GLP-1”是指 GLP-1(7-37)。根据本领域的常识，GLP-1(7-37)的氨基末端用数字7 指定并且羧基末端用数字37指定。GLP-1(7-37)的氨基酸序列是本领 域公知的，但是如下表示：NH2-His-Als-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser- Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile- Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Gly-COOH。
在某些实施方案中，TRPM5抑制剂使GLP-1释放增加约5％到约 50％，或约10％到约70％，或约25％到约100％。在其它实施方案中， TRPM5抑制剂使从肠细胞释放的GLP-1的量增加约25％、50％、75％或 100％。
优选地，增加GLP-1释放的方法被用于哺乳动物，诸如人其它灵 长类动物。在其它情况中，所述方法的受试者可以是宠物，诸如狗或 猫。
GLP-1释放的检测可根据本领域普通技术人员公知的方法(包括本 文所述的那些方法在内)进行。例如，参见，F.Reinmann等人， Diabetes，55(Supp.2)：S78-S-85(2006)。
本发明还包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中降低胃 液分泌和排空的方法，包括对受试者给予有效量的TRPM5抑制剂，诸 如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物或其药学可 接受的盐。
本发明还包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中抑制食 物摄取的方法，包括对受试者给予有效量的TRPM5抑制剂，诸如式I 化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物或其药学可接受的 盐。已知GLP-1在调节对食物摄取的生理应答中起显著作用。GLP-1 响应食物的摄入从高血糖素原被加工得到并且从主要位于小肠和结肠 末梢内的内分泌L-细胞被释放进血液中。GLP-1通过G蛋白质偶联的 细胞表面受体(GLP-1R)起作用并且增强由营养物所诱导的胰岛素合成 和释放。GLP-1刺激胰岛素分泌(促胰岛素作用)和cAMP形成。GLP- 1(7-36)酰胺刺激胰岛素释放剂降低胰高血糖素分泌，并抑制胃液分泌 和排空。GLP-1的这些胃肠道效果在切断迷走神经的受试者中未被测 得，显示了由中枢介导的效果。GLP-1以高亲合性与被分离的大鼠脂 肪细胞结合，激活cAMP产生(Valverde等人，1993)并刺激脂肪生成 或脂肪分解。GLP-1刺激大鼠骨骼肌中的糖原合成，葡萄糖氧化和乳 酸形成。因此，基于本发明人的观察结果，本文所述的TRPM5抑制剂 可用于抑制食物摄取，因为TRPM5抑制剂增加GLP-1的释放。
本发明还包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中降低胰 高血糖素分泌的方法，包括对受试者给予有效量的TRPM5抑制剂，诸 如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物或其药学可 接受的盐。
高血糖素是由具有29个氨基酸残基的直链多肽构成的激素，从胰 腺α-细胞中被提取。其生理作用，诸如升高血糖浓度和激活肝脏磷酸 化酶，可由本领域技术人员所了解，并且例如，参见Stedman′s Medical Dictionary，26th Ed.(1990)，第729页。
本发明还包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中增强胰 岛素敏感性的方法，包括对受试者给予有效量的TRPM5抑制剂，诸如 式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物或其药学可接 受的盐。
本发明还包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中增加胰 岛的β-细胞量和胰岛素基因表达的方法，包括对受试者给予有效量的 TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体 化合物或其药学可接受的盐。
本发明包括在有需要的动物、优选人或其它哺乳动物中治疗或预 防肥胖症的方法，包括对受试者给予有效量的TRPM5抑制剂，诸如式 I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物或其药学可接受 的盐。
本文使用的“肥胖症”是指脂肪在皮下结缔组织中的异常增加。 Stedman′s Medical Dictionary，26th Ed.(1990)，第1235页。
在上述方法的每个实施方案中，方法的受试者，除非另有限制， 否则可为任何需要该方法的特定治疗或效果的动物。这些动物包括但 不限于：牛、马、羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、 兔、猴或豚鼠的胰岛素分泌细胞。在其它实施方案中，动物是家畜动 物，驯养动物或宠物动物。在具体实施方案中，要求保护的方法的受 试者是人。
然而，通常，适当的剂量为约0.005到约100毫克/千克，例如为 约0.1到约75毫克/千克体重/天，诸如0.03到约50毫克/千克接受 者体重/天，优选为0.06到90毫克/千克/天，最优选为0.15到60毫 克/千克/天。在其它实施方案中，适当的剂量在一整天内为约0.1毫 克/天到约2000毫克/天，作为单一剂量或多剂量被给予。
化合物可方便地以单位剂型被给予；例如，每单位剂型包含0.05 到1000毫克、方便地包含0.1到750毫克、最方便地包含0.5到500 毫克的活性成分。
TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或 具体化合物可典型地以约0.1重量％到约100重量％、优选约1重量％到 约80重量％的量存在于剂型中。本发明还考虑了占剂型重量的约1％到 约50％，优选约5％到约20％，约8％、15％或18％的量。
理想地，TRPM5抑制剂，诸如式I化合物，应被给予以实现活性 化合物的血浆峰浓度为约0.005到约75μM，优选约0.01到50μM，最 优选约0.02到约30μM。这例如可通过静脉内注射活性成分任选地在 盐水中的0.0005到5％的溶液实现，或口服给予含约0.01-1毫克的活 性成分的丸剂实现。所需的血液水平可通过提供约0.0001-5毫克/千 克/小时的连续输注或通过间歇输注约0.004-15毫克/千克的活性成分 得以保持。
该方法可被实施从而使得胰岛素分泌、GLP-1分泌或胰岛素敏感 性被TRPM5抑制剂诸如式I化合物增强至少约10％、20％、30％、40％、 50％、60％、70％、80％、90％或95％、或约60％到约99％、或约20％到约 50％。因此，在更具体的实施方案中，该方法包括给予包含一种或多种 TRPM5抑制剂，诸如式I化合物的剂型，其中一种或多种式I化合物 以足够使胰岛素分泌、GLP-1分泌或胰岛素敏感性增强至少约10％、 20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％、或约60％到约 99％、或约30％到约70％的量存在。当然，在其它实施方案中，胰岛素 分泌、GLP-1分泌或胰岛素敏感性可被增强到不同程度。
所需剂量可方便地以单一剂量存在或者以在适当间隔被给予的分 剂量存在，诸如每天2、3、4次或更多次的亚剂量。亚剂量自身可再 被细分，例如，被分成许多离散的、宽松间隔的给药；诸如从吹入器 被多次吸入或者被多次滴入眼中。
在另一个实施方案中，上述化合物可被用来增强胰岛素或GLP-1 从细胞分泌或增强细胞的胰岛素敏感性。这些增强可为体外增强或体 内增强。用于增强胰岛素分泌、胰岛素敏感性或GLP-1分泌的TRPM5 抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物 的量当在体内使用时不必与体外使用量相同。当在体内作用于胰腺细 胞时，具体化合物的因素诸如药物代谢动力学和药效学可能要求使用 更大量或更小量的TRPM5抑制剂，诸如式I的化合物，或任何上述的 特定小组、小类或具体化合物。因此，本发明的一个方面是增强胰岛 素从细胞释放和GLP-1从细胞分泌或增强细胞的胰岛素敏感性的方 法，包括使细胞接触TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特 定小组、小类或具体化合物。
在本发明这方面的一个实施方案中，该方法包括使细胞、优选胰 腺细胞接触TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、 小类或具体化合物，其中所述细胞分泌胰岛素。
在本发明这方面的一个实施方案中，该方法包括使细胞、优选L 型肠内分泌细胞接触TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特 定小组、小类或具体化合物，其中所述细胞分泌GLP-1。
本发明还涉及增强胰岛素和GLP-1从细胞释放或增强细胞的胰岛 素敏感性的方法，包括使所述细胞接触TRPM5抑制剂，诸如式I化合 物或任何上述的特定小类和具体化合物，并且使细胞的胰岛素分泌、 GLP-1分泌或胰岛素敏感性增强至少约10％、20％、30％、40％、50％、 60％、70％、80％、90％或95％、或约50％到约99％。在另一个实施方案 中，该方法包括使所述细胞接触TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任 何上述的特定小类和具体化合物，并使细胞的胰岛素分泌、GLP-1分 泌或胰岛素敏感性增强约10％到约50％。在另一个实施方案中，本发明 涉及增强胰岛素从细胞分泌或增强GLP-1从细胞分泌或增强细胞的胰 岛素敏感性的方法，包括使所述细胞接触TRPM5抑制剂，诸如式I化 合物或任何上述的特定小类和具体化合物，并使胰岛素分泌、GLP-1 分泌或胰岛素敏感性增强至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、 70％、80％、90％或95％、或50％到约99％/或约10％到约50％，并且其中 所述细胞是天然存在的细胞。在另一个实施方案中，本发明涉及增强 胰岛素从细胞分泌或增强GLP-1从细胞分泌或增强细胞的胰岛素敏感 性的方法，包括使所述细胞接触TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任 何上述的特定小类和具体化合物，并使胰岛素分泌、GLP-1分泌或胰 岛素敏感性增强至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、 90％或95％、或50％到约99％，或约10％到约50％，并且其中所述细胞是 天然存在的人胰岛素分泌细胞或GLP-1分泌细胞。
可使用任何量的提供所需增强程度的TRPM5抑制剂，诸如式I化 合物。例如，基于每天每千克体重约0.001到100毫克、优选每天每 千克体重约0.01到约25毫克所提供的单一剂量或2-4个分剂量是适 当的。所述物质优选口服给药，但是还可使用非肠道途径，诸如皮 下、肌肉内、静脉内或腹腔内途径或任何其它适当的递送系统诸如鼻 内或透皮途径。
本文使用的术语“增强”及其语法变体是指量或程度的增加。例 如，增强胰岛素从细胞释放或增强GLP-1从细胞释放是指增加由细胞 所释放的胰岛素或GLP-1的量。类似地，增强细胞的胰岛素敏感性是 指增加细胞的胰岛素敏感性的程度。增强包括但不必限于调节、修 饰、激活等。
组合物
本发明还涉及各种可用于治疗糖尿病、胰岛素抵抗综合征、高血 糖症和肥胖症的的组合物，其包含TRPM5，诸如式I化合物或其生理 学可接受的盐。
本发明还涉及各种可用于增加胰岛的β-细胞量和胰岛素基因表 达、降低胃液分泌和排空和胰高血糖素分泌并抑制食物摄取的组合 物，其包含TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或其生理学可接受的盐。
在一个方面，本发明涉及包含TRPM5抑制剂以及一种或多种药学 可接受的载体的药物组合物，其中TRPM5抑制剂是诸如以上定义的式 I化合物，包括任何上述的特定实施方案、小类或物质在内。本发明 的优选组合物是包含选自以上所列的一个或多个实施方案的化合物以 及一种或多种药学可接受的赋形剂的药物组合物。
本发明的药物组合物可为任何适于实现其预定目的的形式。然 而，优选地，组合物为可经颊或经口给药的形式。作为替代，药物组 合物可为口或鼻喷雾剂。
本发明的药物组合物可为任何适于对可以经历一种或多种TRPM5 抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物 的有益效果的动物给药的形式。在这些动物中优选人，尽管本发明并 不仅限于人。其它适当的动物包括犬科动物、猫科动物、狗、猫、家 畜、马、牛、羊等。本文使用的兽用组合物是指适用于非人动物的药 物组合物。这些兽用组合物是本领域已知的。
本发明的药物制剂可采用已知的方法制造，例如借助于传统的混 合、造粒、包糖衣、溶解或冻干方法制造。因此，用于口服应用的药 物制剂可通过将活性化合物与固体赋形剂混合、任选地研磨所得混合 物并将混合物加工为颗粒，如果需要或必要的话，在加入适当的助剂 后，获得片剂或糖衣核心而被获得。
药物赋形剂是本领域公知的。适当的赋形剂包括填充剂诸如糖 类，例如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇，纤维素制剂和/或磷酸钙，例 如磷酸三钙或磷酸氢钙，以及粘合剂诸如淀粉糊，例如使用玉米淀 粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、 羟基丙基甲基纤维素、羧基甲基纤维素钠和/或聚乙烯基吡咯烷酮。如 果需要，可加入崩解剂，诸如上述的淀粉以及羧基甲基淀粉、交联聚 乙烯基吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐诸如藻酸钠。首先，助剂是流动 调节剂和润滑剂，例如，是二氧化硅，滑石，硬脂酸或其盐诸如硬脂 酸镁或硬脂酸钙，和/或聚乙二醇。糖衣核心被提供有适当的包衣，如 果需要，该包衣耐胃液。为了这一目的，可使用浓的糖溶液，其可任 选包含阿拉伯树胶，滑石，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化 钛，漆溶液和适当的有机溶剂或溶剂混合物。为了产生耐胃液的包 衣，使用适当的纤维素制剂诸邻苯二甲酸乙酰纤维素或邻苯二甲酸羟 基丙基甲基纤维素酯的溶液。可向片剂或糖衣丸包衣中加入染料或颜 料，例如，用于区别或者用于表征活性化合物剂量的组合。
用于口服给药的液体剂型包括药学可接受的乳剂、溶液、悬浮 剂、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还包含本领域常 用的惰性稀释剂，诸如，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂诸如乙 醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苄醇，苯甲酸苄酯，丙二醇， 1，3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、 胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢糠醇，聚乙二醇和山 梨糖醇酐的脂肪酸酯，及其混合物。
除了活性化合物之外，悬浮剂可包含助悬剂，诸如，例如，乙氧 基化异硬脂醇，聚氧乙烯山梨醇和山梨糖醇酐酯，微晶纤维素，偏氢 氧化铝(aluminum metahydroxide)，膨润土，琼脂和黄蓍胶，及其 混合物。
在另外的实施方案中，本发明涉及包含医药有效量的TRPM5抑制 剂诸如一种或多种式I化合物以及一种或多种生物学活性剂的咀嚼 片。咀嚼片是本领域已知的。例如，参见，美国专利4,684,534和 6,060,078，其各自全文并入本文作为参考。
在另一个实施方案中，本发明涉及口服崩解组合物，其中所述口 服崩解组合物另外包含TRPM5抑制剂，诸如一种或多种上述的式I化 合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物。口服崩解片剂是本 领域已知的。例如，参见，美国专利6,368,625和6,316,029，其各 自全文并入本文作为参考。
在另一个实施方案中，本发明进一步涉及鼻用组合物，其另外包 含医学有效量的TRPM5抑制剂，诸如一种或多种上述的式I化合物或 任何上述的特定小组、小类或具体化合物。鼻喷雾剂是本领域已知 的。例如，参见，美国专利6,187,332。作为非限制性实例，本发明 的鼻喷雾组合物包含水(诸如95-98重量％)、柠檬酸盐(诸如0.02M柠 檬酸根阴离子到0.06M柠檬酸根阴离子)、式I化合物和任选的磷酸 盐(诸如0.03M的磷酸盐到0.09M磷酸盐)。
在另一个实施方案中，本发明涉及固体剂型，其包含由水和/或唾 液活化的泡腾颗粒诸如具有可控泡腾速率的颗粒以及TRPM5抑制剂诸 如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体化合物。泡腾药物 组合物是本领域已知的。例如，参见，美国专利6,649,186，其全文 并入本文作为参考。
在另一个实施方案中，本发明涉及薄膜成形或薄片成形的药物组 合物，其包含TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小 组、小类或具体化合物，并且能够崩解。这些薄膜成形或薄片成形的 药物组合物可被构建为例如迅速崩解的给药形式，例如，在1秒到最 多3分钟的时段内崩解的给药形式，或者可被构建为缓慢崩解的给药 形式，例如在3-15分钟的时段内崩解的给药形式。
通过使用例如具有不同崩解或溶出特征的基质形成聚合物，上述 崩解时间可被设定在上述范围内。因此，通过混合相应的聚合物组 分，可以调节崩解时间。另外，崩解剂已知其从基质“汲取”水并引 起基质从内部进裂。因此，本发明的某些实施方案包括用于调节崩解 时间目的的这些崩解剂。
用于薄膜成形或薄片成形的药物组合物的适当的聚合物包括纤维 素衍生物，聚乙烯醇(例如MOWIOLTM)，聚丙烯酸酯，聚乙烯基吡咯烷 酮，纤维素醚，诸如乙基纤维素，以及聚乙烯醇，聚氨酯，聚甲基丙 烯酸酯，聚甲基丙烯酸甲酯和上述聚合物的衍生物和共聚合物。
在某些实施方案中，本发明的薄膜成形或薄片成形的药物组合物 的总厚度优选为5微米到最多10毫米，优选30微米到2毫米，特别 优选0.1毫米到1毫米。药物制剂可为圆形、卵形、椭圆形、三角 形、四边形或多边形，但是它们还可具有任何的圆形。
在另一个实施方案中，本发明涉及组合物，其包含被包含在包围 胶基制剂的包衣内中的药学活性量的TRPM5抑制剂，诸如式I化合物 或上述任何的特定小组、小类或具体化合物。优选地，包衣占整个产 品重量的至少50％。当核心被咀嚼时，药物或药剂被释放进入唾液。 例如，美国专利6,773,716，其全文并入本文作为参考，公开了被包 含在包围胶基制剂的包衣中的合适的药物或药剂。一种或多种上述的 式I化合物或任何特定的小组、小类或具体化合物可用于制备包衣。 上述的式I化合物或任何特定的小组、小类或具体化合物可以不同的 量存在，诸如约30％、50％、75％或90％。在另一个实施方案中，式I化 合物以约30％到约99％存在。在其它实施方案中，式I化合物以约1％ 到约30％存在。
在另外的实施方案中，本发明涉及适用于气雾剂给药的药物组合 物，其包含医学有效量的TRPM5抑制剂诸如式I化合物或任何上述的 特定小组、小类或具体化合物以及适当的载体。气雾剂组合物是本领 域已知的。例如，参见，美国专利5,011,678，其全文并入本文作为 参考。作为非限制性实例，本发明的气雾剂组合物可包含TRPM5抑制 剂，诸如一种或多种式I化合物或任何上述的特定小组、小类或具体 化合物以及生物相容性推进剂，诸如(氢/氟)碳推进剂。
在另外的实施方案中，本发明涉及透皮药物递送组合物，其包含 医学有效量的TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小 组、小类或具体化合物。透皮药物递送组合物，诸如装置被设计用于 递送治疗有效量的药物穿过患者的皮肤。本领域已知的装置包括涉及 控制药物向皮肤释放的速率的膜的储库型装置和涉及药物在基质中的 分散体的装置。透皮药物递送组合物，诸如透皮贴剂是本领域已知 的。
在某些实施方案中，本发明的药物组合物包含约0.001毫克到约 1000毫克的TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、 小类或具体化合物。在某些实施方案中，本发明的药物组合物包含约 0.01毫克到约10毫克的TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述 的特定小组、小类或具体化合物。
TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或 具体化合物的活性可通过采用本领域已知的许多方法测试所述化合物 来测定。例如，可以通过使用体内试验来评价化合物增强胰岛素分 泌、GLP-1分泌或胰岛素敏感性的能力。该体内试验鉴定了在TRPM5 抑制剂诸如式I化合物存在的条件下由胰腺细胞释放的胰岛素的量或 由L型肠内分泌细胞释放的GLP-1的量。
TRPM5抑制剂，诸如式I化合物或任何上述的特定小组、小类或 具体化合物的活性还可借助于在实施例23中所述的试验来测定。
化合物的制备方法
TRPM5抑制剂可以采用本文所公开的试验和方法进行鉴定。另 外，在全文并入本文作为参考的美国专利申请公报20050019830中公 开的试验可用于鉴定作为TRPM5抑制剂的化合物。这些化合物可采用 本领域技术人员已知的技术来制备。
式I化合物可根据下文所述方法被合成。用于本发明的化合物可 使用本领域已知的过程被合成。
以下一般反应路线说明了用于制备本发明化合物的合成方法。在 一个方法中，式I化合物可通过将适当酰基化的酰肼与适当的酮或醛 在适当的有机溶剂诸如乙醇、2-丙醇、四氢呋喃、甲苯等及其混合物 中进行缩合来制备，如反应路线1所示(其中R1、R2、R3、R4、L1和L2 的定义同上)。水淬灭剂诸如分子筛或干燥碳酸钾的存在可用于该方法 中。可使用酸或碱催化来促进缩合。酸催化剂包括但不限于对甲苯磺 酸、甲磺酸、磷酸和硫酸。碱催化剂包括但不限于三乙胺、二异丙基 乙基胺、吡啶、N-甲基吗啉、碳酸钠、碳酸钾和碳酸钠。
反应路线1.

在可供选择的方法中，其中R2是H的某些式I化合物可以如反应 路线2所示被制备(其中R1、R2、R3、R4、L1和L2的定义同上)。根据 该方法，适当的羧酸用适当的醛或酮的腙进行处理，以提供式I化合 物。羰基二咪唑和三乙胺在该反应中可作为缩合剂被使用，尽管也可 使用其它适当的缩合剂。
反应路线2.

作为另一个实施例，其中R1和R2是芳基的式I化合物可以通过将 酰基化的酰肼(诸如化合物1)与醛(诸如化合物2)在适当的有机溶剂诸 如乙醇、2-丙醇、四氢呋喃、甲苯等及其混合物中，并在水淬灭剂诸 如分子筛或干燥碳酸钾存在的条件下进行缩合被制备(反应路线 1)。可使用酸或碱催化来促进缩合。酸催化剂包括但不限于对甲苯磺 酸、甲磺酸、磷酸和硫酸。碱催化剂包括但不限于三乙胺、二异丙基 乙基胺、吡啶、N-甲基吗啉、碳酸钠、碳酸钾和碳酸钠。该方法的一 个实例如反应路线3所示。
反应路线3

该方法的变体可包括用适当的醛的腙(诸如化合物4)处理适当的 羧酸(诸如化合物3)以提供化合物I。羰基二咪唑和三乙胺在该反应中 通常作为缩合剂被使用。该方法的一个实例如反应路线4所示。
反应路线4

该反应还可在无掺杂(例如无溶剂)的条件下进行。在反应完全 后，通过从溶剂诸如乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和甲苯等中结晶来分 离产品。
类似地，本发明的其它化合物可从市售来源获得或者可由本领域 技术人员制备。起始材料是市售的或者它们可通过本领域技术人员制 备。例如，上述的化合物1可如下被制备：使羧酸(诸如化合物3)与 被保护的肼(诸如化合物5)在羰基二咪唑/三乙胺存在的条件下反应以 提供被保护的酰肼(诸如化合物6)。在反应完全后，在标准条件(诸 如酸性条件，例如三氟乙酸)下可以从酰肼(诸如化合物6)中除去保 护基，以提供式1化合物。该方法的一个实例如反应路线5所示。
反应路线5

本发明的其它化合物可通过本文所述方法的微小变体被制备。这 些方法和其它方法描述于文献中，诸如Wyrzykiewicz和Prukala， Polish J.Chem.72：694-702(1998)；和Elderfield和Wood，J. Org.Chem.27：2463-2465(1962)，其各自全文并入本文作为参考。
另外的式I化合物(其中L2是N＝N)可通过使重氮盐与腙反应被制 备。用于该缩合的反应条件是有机合成领域技术人员已知的(例如，参 见，Synthesis，577-581(1995)；Chemical and Pharmaceutical Bulletin 42(11)：2363-2364(1994)；Tetrahedron 38(12)：1793- 1796(1982))。起始材料可为市售来源或者可通过常用的有机反应条件 被制备。

其中L2不存在、R3和R4是氰基和R2是H的另外的式I化合物可通 过将丙二腈与重氮盐缩合被制备。该反应和条件是有机合成领域技术 人员已知的。(例如，参见，Archiv.der Pharmazie 337(3)：140- 147(2004)；Monatshefte fuer Chemie 130(11)：1409- 1418(1999))。

其中L1-R1是下式的另外的式I化合物

可通过用肼在醇性溶剂(例如甲醇、乙醇、异丙醇)或其它溶剂中 处理内酯A被制备(参见Zhurnal Organischeskoi Khimii 17(3)：481-486(1981))

以提供可如本文所述被使用的酰基腙B。
其中L1-R1是下式的另外的式I化合物

可从酮酸C被制备(参见Org.Syn.Coll.Vol.9，530)。酮酸C 用重氮甲烷、三甲基甲硅烷基二偶氮甲烷或其它试剂组合进行酯化， 得到的酯用选择性还原剂诸如硼氢化钠在甲醇或乙醇中还原，以提供 中间体D和/或其内酯。中间体D(或其内酯)用过量的肼在醇性溶剂 (例如甲醇、乙醇、异丙醇)或其它溶剂中进行处理，以提供中间体 E。该中间体可如本文所述被用于制备式I化合物。

其中L1不存在并且R1是下式的另外的式I化合物

可从中间体G被制备。中间体G通过用氯化锡(例如，参见， Journal of Heterocyclic Chemistry 24(4)：1041-3(1987))等还 原市售的重氮盐F被制备。

其中L1-R1是下式的另外的式I化合物
可从中间体K被制备。中间体K如以下反应路线所示被制备。苯 胺(H)用碱诸如碳酸钾、另一种碳酸盐碱或更强的碱诸如六甲基二硅氮 化钠(sodium hexamethyldisilazide)或氢化钠；和溴乙酸乙酯处 理，以提供J。中间体J用过量的肼在醇性溶剂或其它溶剂中进行处 理，以提供如本文所述被使用的K。

其中L1不存在并且R1是下式的另外的式I化合物

可从中间体M被制备。中间体M可如JCS Perkin 1，2216- 2221(1976)所述用吡咯烷处理市售的卤化物L被获得。

当然，可使用本领域已知的其它方法和过程来制备某些式I化合 物。
以下实施例非限制性地说明了本发明的方法、化合物和组合物。 以下所列的每一化合物从市售的目录公司获得，诸如Aldrich RarechemLib，Aldrich Sigma，AlsInEx，Biotech Corp.， Brandon/Berlex，Calbiochem，ChemBridge，Comgenex West，Foks H，G.&J.Research，IBS，ICN Biochemicals，Institute for Chemotherapy，Kodak，Lederle Labs，Ligand-CGX，Maybridge PRI， Menai Organics，Menai/Neurocrine，MicroSource，MPA Chemists， Mybrgd/ONYX，PRI-Peakdale，RADIAN，Receptor Research，RGI， Rhone-Poulenc，SPECS/BioSPECS/SYNTHESIA，T.Glinka，Tripos Modern，VWR，Zaleska，Zelinksy/Berlex，Aeros和Chemica。化合 物使用传统的纯化过程诸如HPLC进行纯化。化合物可使用HPLC和质 谱法来确认。正如本领域已知的和如上所述的，腙部分可以E或Z构 型存在。因此，尽管对于本文所述的具体化合物用具体立体化学表 示，可以理解，本发明包括所有的立体异构体，特别是所有的E和Z 异构体。通常遇到的和对于本领域技术人员是显而易见的对不同条件 和参数进行其它适当的改变和修改处在本发明的精神和范围内。
实施例
实施例1
4-((E)-((Z)-1-(2-(苯并[d]噻唑-2-1)肼叉基)-2-甲基丙基)二 氮烯基)苯甲酸甲基酯

分子式：C19H19N5O2S；分子量：381.5(计算值)。
实施例2
(E)-2-(4-溴-2-((2-(喹啉-8-基)肼叉基)甲基)苯氧基)乙酸

分子式：C18H14BrN3O3；分子量：400(计算值)。
实施例3
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-2-(萘-1-基)乙酰肼

分子式：C21H20N2O3；分子量：348(计算值)，348(实测值)。
实施例4
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-2-苯基环丙烷甲酰肼

分子式：C19H20N2O3；分子量：324(计算值)，324(实测值)。
实施例4的对映体(R，R，R，S，S，S和S，R)通过超临界流体色谱法 使用20％甲醇(流速为5mL/min，100巴，35℃)在4.6×250mm Diacel ODH柱上被分离。分离的HPLC色谱如图15所示。
实施例5
(E)-3-环己烯基-4-羟基-N′-(4-甲氧基苯亚甲基)丁酰肼

分子式：C18H24N2O3；分子量：316.40(计算值)。
实施例6
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-4-羟基己酰肼

分子式：C20H30N2O4；分子量：364.5(计算值)，364(实测值)。
实施例7
2-((Z)-2-(苯基-((E)-苯基二氮烯基)-亚甲基)肼基)苯甲酸

分子式：C20H16N4O2；分子量：344.7(计算值)。
实施例8
(E)-N′-(3，4-二甲氧基苯亚甲基)-2-(间-甲苯基氧基)乙酰肼

分子式：C18H20N2O4；分子量：328(计算值)，328(实测值)。
实施例9
(E)-N′-(4-(烯丙基氧基)-3-甲氧基苯亚甲基)-2-(3-溴苄基硫基) 乙酰肼

分子式：C20H21BrN2O3S；分子量：449(计算值)，447.9(实测值)。
实施例10
(E)-N′-(4-异丙基苯亚甲基)二环并[4.1.0]庚烷-7-甲酰肼

分子式：C18H24N2O；分子量：284(计算值)，284(实测值)。
实施例11
(Z)-1，3，3-三甲基-2-((E)-2-(2-(4-硝基苯基)肼叉基)亚乙基) 二氢吲哚

分子式：C19H20N4O2；分子量：336(计算值)，336(实测值)。
实施例12
(E)-N′-(4-(二乙基氨基)-2-羟基苯亚甲基)-2-苯基环丙烷甲酰肼

分子式：C21H25N3O2；分子量：351(计算值)，351(实测值)。
实施例13
(4-(三氟甲基硫基)苯基)肼叉基碳二氰化物 (carbonohydrazonoyldicyanide)

分子式：C10H5F3N4S；分子量：270.24(计算值)。
实施例14
N-((E)-3-((Z)-2-(1，5-二甲基-2-氧代二氢吲哚-3-基亚基)肼 基)-3-氧代-1-苯基丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺

分子式：C26H22N4O3；分子量：438.5(计算值)。
实施例15
(Z)-2-(2-((1-丁基-1H-吲哚-3-基)亚甲基)肼基)苯甲酸

分子式：C20H21N3O2；分子量：335.4(计算值)。
实施例16
(E)-4-((2-苄基-2-苯基肼叉基)甲基)吡啶

分子式：C19H17N3；分子量：287(计算值)，287.2(实测值)。
实施例17
(Z)-N′-((1H-吡咯-2-基)亚甲基)三环并[3.3.1.13，7]癸烷-3-甲酰 肼

分子式：C16H21N3O；分子量：271(计算值)。
实施例18
(Z)-1-(2-(4-(乙基-(2-羟基乙基)-氨基)苯基)肼叉基)萘- 2(1H)-酮

分子式：C20H21N3O2；分子量：335(计算值)，333.2(实测值)。
实施例19
(E)-4-((2-(5-氯-3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-2-2-甲基肼叉基)甲 基)苯-1，3-二酚

分子式：C14H11ClF3N3O；分子量：345.7(计算值)，344.9(实测 值)。
实施例20
(E)-2-(3，4-二甲基苯基氨基)-N′-(4-吗啉代-3-硝基苯亚甲基) 乙酰肼

分子式：C21H25N5O4；分子量：411.4(计算值)，411.3(实测值)。
实施例21
(Z)-3-(2-硝基-5-(吡咯烷-1-基)苯基)肼叉基)奎宁环

分子式：C17H23N5O2；分子量：329.4(计算值)。
实施例22
(E)-2-((2-(1H-苯并[d]咪唑-2-基)肼叉基)甲基)-5-(二乙基氨 基)苯酚

分子式：C18H21N5O；分子量：323.4(计算值)。
实施例23
3-咔唑-9-基丙酸(3，4-二甲氧基苯亚甲基)酰肼

分子式：C24H23N3O3。
实施例24
(4，8-二甲基喹啉-2-基硫烷基)乙酸(3，4-二甲氧基苯亚甲基)酰肼

分子式：C22H22N3O3。
实施例25
用于测定TRPM5抑制剂对胰岛素释放的增强效果的试验
如Poitout等人，Diabetes，44：306-313(1995)所述，β-TC-6细 胞，是从在胰腺β-细胞中表达猿猴病毒40(SV40)的大T-抗原的转基 因小鼠中得到的胰岛素分泌细胞系。该细胞系从ATCC细胞库CAT# CRL-11506获得并在含15％胎牛血清(FBS)、4mM谷氨酰胺、4.5mM葡 萄糖、1500mg/L碳酸氢钠和1X青霉素/链霉素抗生素混合物的 Dulbecco氏改性伊格尔培养基(DMEM)中，在含5％CO2的37℃的保温 箱中进行生长。培养物按照惯例在胰蛋白酶的帮助下每周以1∶2分裂 两次。
在试验前一天，将0.1×106个β-TC-6细胞在96孔板的每个孔中 铺板，并将细胞在生长培养基中培养过夜。
第二天，从板中取出生长培养基，将单层用磷酸盐缓冲盐水(PBS) 漂洗并在37℃在由118.5mM NaCl、2.54mM CaCl2、1.19mM KH2PO4、4.74mM KCl、25mM NaHCO3、1.19mM MgSO4、10mM HEPES 缓冲液和0.1％牛血清白蛋白组成的Krebs-Ringer碳酸氢盐缓冲液 (KRBB)(pH 7.4)中预培养30分钟。将该缓冲液取出并替换为100μL 的包含各种胰岛素释放调节剂的相同缓冲液：包括最高为12mM的各 种浓度的葡萄糖，高至100μM的化合物。将化合物储备溶液例如10- 20mM在DMSO中稀释。在培养缓冲液中的最终DMSO浓度是0.5％或更 低。包括了媒介物对照。然后在37℃静止培养2小时。在2小时培养 后收集全部培养体积用于胰岛素试验。
ELISA规程用于胰岛素测定。使用得自Linco Research，Inc.的 大鼠/小鼠胰岛素ELISA试剂盒CAT# EZRMI-13K和Red过氧 化氢/过氧化物酶试验试剂盒CAT# A22188和Red试剂(10- 乙酰基-3，7-二羟基酚噁嗪)CAT# A12222，使用以下规程实施ELISA。
所有试剂在进行实验之前被预温热到室温。
1.将10X洗涤缓冲液稀释成1X洗涤缓冲液。50mL+450mL去 离子水。对细胞培养上清液(β-TC-6细胞培养)进行1∶10稀释。
2.使用一列(8个孔)孔用于标准样品和QC1和QC2，典型地是 0和5ng/mL的胰岛素。在一些板上，如下所示获得胰岛素的完全标 准曲线。
3.覆盖未用的孔。用每次300μL的1X洗涤缓冲液将每个孔 洗涤三次(在振荡器上每次洗涤步骤为2分钟)。将洗涤缓冲液倾析掉 并通过将板反转从所有孔中除去残余量并进行若干次剧烈敲击以将其 敲到吸收毛巾上。在进行下一步之前不让孔干燥。
4.将20μL试验缓冲液加入到空白孔中，将10μL标准样品 和样品加入到那些孔中。
5.将10μL大鼠胰岛素标准样品和样品加入到适当的孔中。
6.将80μL检测抗体加入到全部孔中。将板覆盖并在室温下 培养2小时。
7.扯掉板覆盖物并从板倾析掉溶液。轻敲以除去孔中的残余溶 液。
8.用每次300μL的稀的洗涤缓冲液将每个孔洗涤3次(在振 荡器上每次洗涤步骤为2分钟)。如前所述轻敲以除去残余溶液。
9.将100μL酶溶液加入到各个孔中。用密封物覆盖板并在微 量滴定板振荡器上在轻度摇动下在室温下培养30分钟。
10.除去密封物，从板倾析掉溶液并轻敲板以除去残余流体。
11.用每次300μL的稀的洗涤缓冲液将每孔洗涤6次。在每次 洗涤后进行倾析和轻敲以除去残余缓冲液。
12.制备100μL Amolex Red试剂的5mL工作溶液，其包含 2.0mM H2O2，4.45mL的1x反应缓冲液+50μL的10mM的Amplex试 剂+500μL的20mM的H2O2。
13.向各孔中加入100μL的Amplex Red试剂/H2O2。
14.将反应物进行培养。在室温下培养30分钟，避光保存(使用 箔纸包裹板)。然后在Molecular Devices FlexStation中在多个时 间点测量在590nm的荧光(激发波长范围为530-560nm)。
上述过程或其微小变化用于测定TRPM5抑制剂对胰岛素分泌的增 强。
实施例26
对包含TRPM5的细胞进行的电生理学研究
从急性胰蛋白酶化βTC-6细胞和表达TRPM5的HEK细胞获得TRP 通道电流的全细胞记录。浴溶液是Hank氏平衡盐液，组成为(mM)： 1.2 CaCl2，0.5 MgCl2-6H2O，0.4 MgS4-7H2O，5.3 KCl，0.4 KH2PO4，137.9 NaCl，0.3 Na2HPO4-7H2O和5.5D-葡萄糖，含20mM HEPES(Invitrogen)，pH 7.4(NaOH)。内部移液管溶液包含(以mM表 示)：135谷氨酸，8NaCl，9CaCl2，10HEPES和10EGTA，pH 7.2(CsOH)(Sigma)。在内部溶液中游离钙的计算浓度是1.5 μM(http://www.stanford.edu/～cpatton/webmaxc/webmaxcS.htm)。 使用Flaming/Brown微量吸液管拉拔器(Sutter Instruments)从火焰 抛光硼硅玻璃拉出记录移液管至大约2MΩ。
使用在Clampex 9.2软件(Axon Instruments)上运行的 MultiClamp 700B扩增器和Digidata 1322A转换器以全细胞方式获得 了电压钳记录。记录在室温下进行。记录规程包括从-80mV电位上升 到+80mV电位的斜线，然后阶跃到-80mV。在以下三个不同的电压测 量峰电流：-80mV，在斜线上升到+80mV，然后返回到-80mV。在坡 度变化(break-in)后立即自动补偿串联电阻，并且将得到的电容测量 值用于电流密度的计算。在5kHz下采集数据并在1kHz下进行过 滤。
将化合物制备成DMSO储液。在实验当天，将它们溶于浴溶液中达 到0.1％的最终DMSO浓度。使用多管实施器(SF-72，Warner)实现迅速 的溶液交换(～100ms)。
实施例27
在小鼠βTC6细胞中mTRPM5的存在
使βTC-6细胞生长然后旋转减慢，并使用得自Qiagen RNA的 RNeasy迷你试剂盒(Cat #：74104)制备了制备物。将该制备物第二次 使用Invitrogen脱氧核糖核酸酶I(Cat #：18068-015)进行脱氧核糖 核酸酶化处理。使用用于RT-PCR的Invitrogen Superscript First- Strand Synthesis System(Cat #：12731-019)制备第一链cDNA合成 物。制备了RT(+)和RT(-)cDNA以检查基因组污染的可能性。
使用得自Invitrogen的铂Taq DNA聚合酶(Cat #：10966-018) 和mtrpM5特异性的正向引物和反向引物，使RT(+)和RT(-)cDNA都发 生聚合酶链反应。观察到适合尺寸带的RT(+)产物并且从RT(-)cDNA 的带的缺乏可看出没有基因组污染。结果如图14所示。
实施例28
被选择的化合物的活性
检验了被选择的本发明的化合物增加胰岛素分泌的能力。结果如 下表所示。对浓度为10μM的化合物进行试验。数据显示，相对于葡 萄糖依赖性胰岛素生成，由供试化合物引起的胰岛素分泌的增强百分 数。在下表中还提供了甲苯磺丁脲的活性，甲苯磺丁脲在30μM进行 试验。
  实施例编号   胰岛素分泌的增强   百分数(10μM)   IC50TRPM5   (μM)   3   250   0.6   4   111   0.6   8   39   3   23   208   0.5
  24   207   0.4   甲苯磺丁脲(30μM)   228   --
实施例29
使用GLUTag细胞测定TRPM5抑制剂对GLP-1释放的影响的试验
小鼠GLUTag细胞是表达TRPM5的原初肠细胞系。该细胞系从多伦 多大学的医学系的内分泌学科的Daniel J.Drucker医生处获得，并 在含有10％胎牛血清(FBS)和1X青霉素/链霉素抗生素混合物的高葡萄 糖Invitrogen Dulbecco氏伊格尔培养基(DMEM)(Cat #：11995)中在 含5％CO2的37℃培养箱中进行生长。在开始实验之前将所有试剂和培 养基预温热到室温。在即将使用之前将底物稀释物和光敏底物解冻。
细胞板的接种
使用100μL的铺板培养基(Invitrogen的(Cat #：31985)OPTI- 改性伊格尔培养基(MEM)，含10％FBS和1X青霉素/链霉素抗生素混合 物)将含GLUTag细胞的BD 96孔Matrigel覆层板(Fisher，Cat #： 08-774-166)进行再水合处理，并在含5％CO2的37℃保温箱中培养30 分钟。然后对GLUTag细胞进行胰蛋白酶化并计数。制备了具有接种密 度为7.5×105个细胞/毫升的GLUTag细胞的细胞稀释物。将再水合培 养基从Matrigel覆层板中吸出。将100μL的细胞稀释物铺板在板的各 个孔内。然后将该板在含5％CO2的37℃培养箱中培养过夜。
以下规程采用Millipore GLP-1酶联免疫吸附测定试剂盒(Cat. #： EGLP-35K)来分析在TRPM5抑制剂/增强剂和葡萄糖存在的条件下GLP- 1从GLUTag细胞的分泌。
酶联免疫吸附测定试验第一天
制备了TRPM5抑制剂或增强剂的储备溶液板和稀释物板。在即将 使用前将1％的牛血清清蛋白(BSA)加入到Krebb′s Ringer碳酸氢盐缓 冲液(KRBB)中。KRBB组成：118.5mM NaCl，2.54mM CaCl2·2H2O， 1.19mM KH2PO4，4.74mM KCl，25mM NaHCO3，1.19mM MgSO4·7H2O 和10mM HEPES缓冲液，pH 7.4。将细胞板与100μL的KRBB培养30 分钟。然后将KRBB缓冲液吸出。将该培养步骤重复一次。将KRBB缓 冲液吸出并替换为包含各种浓度的TRPM5抑制剂或增强剂和葡萄糖即 12.5mM葡萄糖和1.5μM TRPM5抑制剂的150μL同样的缓冲液。还一 式三份检测了不含TRPM5抑制剂/增强剂和葡萄糖的KRBB缓冲液。然 后在含5％CO2的37℃培养箱中将经过处理的细胞进行静态培养2小 时。
在2小时培养的最后30分钟期间，如下制备96孔酶联免疫吸附 测定板。将涂有抗GLP-1单克隆抗体的GLP-1(活性)酶联免疫吸附测 定板用300μL/孔的洗涤缓冲液(洗涤缓冲液浓缩物(10mM的含吐温20 和叠氮化钠的PBS缓冲液)的1∶10稀释物)洗涤三次。然后将200μL的 试验缓冲液(0.05M的包含蛋白酶抑制剂的PBS(pH 6.8)，含吐温 20、0.08％叠氮化钠和1％BSA)加入到非特异性结合孔A10-A12中。将 以100μL总量的试验缓冲液加入到GLP-1标准孔中。将试验缓冲液 (98μL)和二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂(Linco Cat# DPP4)(2μL)的 组合以100μL加入到所有的细胞样品孔中。将100μL的在试验缓冲液 中的GLP-1酰胺酶联免疫吸附测定标准样品(GLP-1(7-36个酰胺)： 2、5、10、20、50和100pM)一式两份以递增顺序加入到适当的孔 中。然后将100μL的样品加入到细胞板的剩余孔中。将酶联免疫吸附 测定(ELISA)板轻轻振摇用于适当混合。
然后用粘封物将酶联免疫吸附测定板覆盖并在4℃培养过夜(20- 24小时)。
然后从ELISA板中倾淅掉液体，并通过敲击将过量流体敲到吸收 毛巾上。使用300μL的洗涤缓冲液将ELISA板的每孔洗涤5次，在第 4次洗涤时将ELISA板在洗涤缓冲液中在室温下培养5分钟。在第5 次洗涤后，通过敲击将过量的缓冲液敲到吸收毛巾上。然后立刻将 200μL的检测结合物(抗GLP-1碱磷酸盐结合物)加入到每个孔内，然 后在室温下培养2小时。然后将检测结合物倾淅掉，然后用300μL的 洗涤缓冲液将每个孔洗涤3次。通过敲击将过量流体敲到纸巾上。将 200μL的被稀释底物加入到每个孔内并在黑暗中在室温下培养至少20 分钟。将10mg光敏感底物MUP(甲基伞形酮磷酸盐(Methyl Umbelliferyl Phosphate))加入到Millipore′s GLP-1酶联免疫吸 附测定试剂盒中并在即将使用前在1mL去离子水中进行水合。在底物 稀释物中制备1∶200的稀释物(例如100μL水合的底物在20mL底物 稀释物中)。每一次在即将使用前制备新鲜的稀释物。在20分钟后， 在355nm/460nm读板。当在标准曲线最低点内具有足够的信噪比 (即2pM)以及在读板器的最大相对荧光装置(RFU)读数内有最高标准 点(即，100pM)时，不要求额外的培养期。否则的话，需要另外的培 养期。
当信号充分时，将50μL的终止溶液按照与底物加入顺序是相同的 顺序加入到每个孔内，然后在黑暗中在室温下培养5分钟以取得磷酸 酶活度。然后在荧光读板器上使用355nm的激发波长/460nm的发射 波长对ELI SA板进行读数。结果如图16-19所示。
目前已经充分描述了本发明，本领域普通技术人员可理解，在不 影响本发明或其任何实施方案的范围的条件下，可以在条件、制剂和 其它参数的较宽的但等价的范围内进行同样的实施。本文引用的所有 的专利和公报以全文并入本文作为参考。