专利汇可以提供一种基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 属于 生物 技术领域,具体涉及一种基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾 坏死 病毒ISKNV的增殖方法。所述增殖方法为:培养EPC细胞系;用ISKNV感染EPC细胞,恒温培养后收集培养液上清;再用培养液上清中的ISKNV感染EPC细胞,重复操作2~3次,ISKNV毒种复壮后,取培养液上清液氮保存,作为ISKNV扩增毒种;用复壮后的ISKNV毒种感染EPC细胞,恒温培养至CPE>80%,收集上清液,获得ISKNV病毒粒子。本发明以EPC细胞系作为ISKNV感染的敏感细胞,EPC细胞系商品化程度高,易于获得,容易培养,并且和鳜鱼的亲缘关系较远,可大大降低ISKNV用于灭活 疫苗 时的纯化难度,减少不良反应。,下面是一种基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法专利的具体信息内容。
1.一种基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)EPC细胞的培养:将EPC细胞接种于培养基中,培养至细胞长成单层,细胞数量>106/mL;
(2)ISKNV毒种的制备:取EPC细胞,向其中加入含ISKNV病毒的感染液,恒温培养后,收集培养液上清;
(3)ISKNV毒种的复壮:另取EPC细胞,向其中加入收集的培养液上清,用培养液上清中的ISKNV病毒感染EPC细胞,恒温培养后,再次收集培养液上清;重复此步骤2~3次;
(4)ISKNV毒种经多次复壮后,取培养液上清液氮保存,作为ISKNV病毒扩增毒种;
(5)利用ISKNV病毒扩增毒种感染EPC细胞,恒温培养至细胞裂解比例>80%,收集上清液,ISKNV病毒粒子即存在于所述上清液中。
2.根据权利要求1所述的基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法,其特征在于,步骤(1)所述培养基为含10%胎牛血清的M199培养基。
3.根据权利要求1所述的基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法,其特征在于,步骤(1)中EPC细胞的培养时间为2~3天。
4.根据权利要求1所述的基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法,其特征在于,步骤(2)中所述感染液还含2%胎牛血清。
5.根据权利要求1所述的基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法,其特征在于,步骤(2)中所述感染液为含有ISKNV病毒和2%胎牛血清的M199培养基。
6.根据权利要求1所述的基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法,其特征在于,步骤(2)和步骤(3)中所述恒温培养的温度为25℃,时间为8~12天。
7.根据权利要求1所述的基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法,其特征在于,步骤(5)所述恒温培养的温度为25℃,时间为5~6天。
8.根据权利要求1所述的基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法,其特征在于,对步骤(5)收集的上清液进一步离心后取上清液,所述上清液中ISKNV病毒粒子的含量>109/mL。
9.根据权利要求8所述的基于鲤鱼上皮瘤细胞EPC的鳜鱼传染性脾肾坏死病毒ISKNV的增殖方法,其特征在于,所述离心的转速为12000rpm。
ISKNV的增殖方法
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