向天然杀伤细胞、造血干细胞和巨噬细胞的增强化基因递送
专利汇可以提供向天然杀伤细胞、造血干细胞和巨噬细胞的增强化基因递送专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 包括一种通过给予奥索恩诺((5Z)-7-Oxozeaenol)下调胞内防御的方法。该方法能改善基于RNA的基因载体向天然杀伤细胞、干细胞和巨噬细胞的递送。所得细胞能用于 过继细胞转移 疗法。还提供了通过给予奥索恩诺和 抗病毒 治疗 来治疗病毒诱导的 炎症 的方法。，下面是向天然杀伤细胞、造血干细胞和巨噬细胞的增强化基因递送专利的具体信息内容。
1.一种增强向细胞的基因递送的方法，所述方法包括向营养培养基中的细胞共同给予奥索恩诺(5Z)-7-Oxozeaenol和RNA病毒载体。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述RNA病毒载体选自：逆转录病毒载体和慢病毒载体。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述载体是逆转录病毒载体。
4.如权利要求2所述的方法，其中，所述载体是慢病毒载体。
5.如权利要求1所述的方法，其中，所述细胞选自天然杀伤细胞、干细胞和巨噬细胞。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述细胞是天然杀伤细胞，其为NK92细胞。
7.如权利要求1所述的方法，其中，奥索恩诺抑制所述细胞的胞内防御机制。
8.如权利要求7所述的方法，其中，通过给予有效量的奥索恩诺抑制RIG-I和/或IRF3的表达。如权利要求7所述的方法，所述路径处于RIG-I和/或IRF3的下游。
9.如权利要求1所述的方法，其中，奥索恩诺的给予量足以在所述营养培养基中获得约
0.04μM～约10μM的浓度。
10.一种抑制细胞的胞内防御机制的方法，所述方法包括给予有效量的奥索恩诺以抑制细胞的防御机制。
11.如权利要求10所述的方法，其中，所述细胞选自天然杀伤细胞、干细胞和巨噬细胞。
12.如权利要求10所述的方法，其中，通过给予有效量的奥索恩诺抑制RIG-I和/或IRF3的表达。
13.如权利要求10所述的方法，其中，奥索恩诺的有效量是在营养培养基中约0.04μm～约10μm的浓度。
14.如权利要求13所述的方法，其中，所述有效量是0.4μm～约1.5μm。
15.如权利要求13所述的方法，其中，所述有效量是约0.5μm～约6μm。
16.一种改善细胞转导的方法，所述方法包括使用抑制IFNλ应答的基因递送载体。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述细胞选自天然杀伤细胞、干杀伤细胞、干细胞和巨噬细胞。
18.如权利要求17所述的方法，其中，所述天然杀伤细胞为NK92细胞。
19.如权利要求16所述的方法，其中，通过给予有效量的奥索恩诺抑制IFNλ应答。
20.如权利要求16所述的方法，其中，奥索恩诺的有效量是约0.05μm～约1.5μm的浓度。
21.一种治疗患有能用过继细胞转移治疗的疾病的患者的方法，所述方法包括给予患者用一定量奥索恩诺处理过的细胞，所述奥索恩诺的量有效抑制胞内防御机制。
22.如权利要求21所述的方法，其中，抑制了RIG-I和/或IRF3。
23.如权利要求22所述的方法，其中，给予奥索恩诺以获得0.2μm～6μm的目标浓度。
24.如权利要求23所述的方法，其中，奥索恩诺的浓度是0.2μM～1.5μM。
25.一种治疗患有能用过继细胞转移治疗的疾病的患者的方法，所述方法包括给予患者奥索恩诺和慢病毒载体。
26.如权利要求25所述的方法，其中，所述疾病选自癌症和具有已知基因缺陷的疾病。
27.如权利要求25所述的方法，其中，奥索恩诺的目标血浆浓度为0.2μM～6μM。
28.如权利要求27所述的方法，其中，奥索恩诺的目标血浆浓度是0.2μM～1.5μM。
29.一种通过RNA病毒载体来增强天然杀伤细胞中基因转化的方法，所述方法包括向营养培养基中的天然杀伤细胞共同给予奥索恩诺和RNA病毒载体。
30.如权利要求29所述的方法，其中，所述载体选自：逆转录病毒载体和慢病毒载体。
31.如权利要求30所述的方法，其中，所述载体是逆转录病毒载体。
32.如权利要求30所述的方法，其中，所述载体是慢病毒载体。
33.如权利要求30所述的方法，其中，加入奥索恩诺以在营养培养基中获得0.4μm～约
10μm的浓度。
34.一种治疗癌症的方法，所述方法包括给予通过共同给予奥索恩诺和RNA病毒载体转染的细胞。
35.如权利要求34所述的方法，其中，所述癌症选自：肿瘤、肉瘤、淋巴瘤、白血病和母细胞瘤：急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓细胞性白血病、肾上腺皮质癌、艾滋病相关癌症、肛门癌、星形细胞癌、基底细胞癌、肝外胆管癌(胆管癌)、膀胱癌、骨肿瘤(骨肉瘤/恶性纤维性组织细胞瘤)、脑干神经胶质瘤、脑癌、脑星状细胞瘤/恶性胶质瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视觉途径和下丘脑胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤/类癌、伯基特淋巴瘤、中枢神经系统淋巴瘤、宫颈癌、软骨肉瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性骨髓增殖性疾病、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、促纤维组织增生性小圆细胞肿瘤、子宫内膜癌、室管膜细胞瘤、食道癌、尤因肉瘤、眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃(胃部)癌、胃肠道类癌肿瘤、胃肠道间质瘤(gist)、颅外或性腺外或卵巢生殖细胞肿瘤、妊娠性滋养层细胞瘤、脑干胶质瘤、儿童脑星形细胞瘤胶质瘤、毛细胞白血病、头部颈部癌、心脏癌、肝细胞(肝)癌、霍奇金淋巴瘤、眼内黑色素瘤、胰岛细胞癌(内分泌胰腺)、卡波西肉瘤、肾癌(肾细胞癌)、急性成淋巴细胞白血病(也称急性淋巴细胞性白血病)、急性髓细胞性白血病(也称急性骨髓性白血病)、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病(也称慢性髓细胞性白血病)、毛细胞白血病、唇部和口腔癌、脂肪肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、巨球蛋白血症、瓦尔登斯特伦病 男性乳腺癌、恶性骨纤维性组织细胞瘤/骨肉瘤、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、眼内(眼部)黑色素瘤、默克尔细胞瘤、间皮瘤、转移性鳞状颈癌伴隐蔽性原发口腔癌、多发性内分泌肿瘤综合症、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合症、骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病、慢性骨髓性白血病、急性髓样白血病、骨髓性白血病、多发性骨髓瘤(骨髓的癌症)、骨髓增殖性疾病、粘液瘤、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、成神经细胞瘤、非小细胞肺癌、少突神经胶质瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤/恶性骨纤维性组织细胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌(表面上皮-间质肿瘤)、卵巢生殖细胞肿瘤、卵巢低恶性潜在肿瘤、胰腺癌、胰腺癌、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞癌、松果体星状细胞癌、松果体生殖细胞癌、松果体母细胞癌和幕上原始神经外胚层肿瘤、脑垂体腺瘤、浆细胞癌/多发性骨髓瘤、胸膜肺母细胞瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞癌(肾癌)、肾盂和输尿管移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、软组织肉瘤、子宫肉瘤、Sézary综合症、黑色素瘤和非黑色素瘤皮肤癌、默克尔细胞皮肤癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、鳞状颈部癌伴隐蔽性原发胃癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、T细胞淋巴瘤(蕈样真菌病和sézary综合症)、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂和输尿管的移行细胞癌、滋养细胞肿瘤、输尿管和肾盂移行细胞癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、视觉通路和下丘脑神经胶质瘤、外阴癌、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、维尔姆斯瘤(肾癌)。
36.如权利要求35所述的方法，其中，所述癌症选自肝癌、多发性骨髓瘤或肉瘤。
37.如权利要求36所述的癌症，其中，所述癌症是肝癌症。
38.如权利要求36所述的癌症，其中，所述癌症是多发性骨髓瘤。
39.如权利要求36所述的方法，其中，所述癌症是肉瘤。
40.如权利要求34所述的方法，其中，所述载体是逆转录病毒载体。
41.如权利要求34所述的方法，其中，所述载体是慢病毒载体。
42.一种治疗由基因突变导致的疾病的方法，所述方法包括给予通过共同给予奥索恩诺和RNA病毒载体转染的细胞。
43.如权利要求42所述的方法，其中，所述疾病选自：21-羟化酶缺陷、软骨发育不全症、急性间歇性卟啉症、腺苷酸琥珀酸裂解酶缺陷、肾上腺脑白质失养症、阿拉吉耶综合症、亚力山大病、 综合症、釉质发生不全、生物素酶缺陷、CGD慢性肉芽肿病、先天性胸腺萎缩综合症、范可尼贫血、G6PD缺陷、脂蛋白脂肪酶缺陷、肌肉营养不良、由PHF8基因中的突变引起的邓肯型赛德李斯X连锁精神发育迟缓综合征、X染色体连锁重度联合免疫缺陷病(X-SCID)或X-连锁铁粒细胞性贫血(XLSA)。
44.如权利要求43所述的方法，其中，所述疾病是X染色体连锁重度联合免疫缺陷病。
45.如权利要求42所述的方法，其中，所述载体是逆转录病毒载体。
46.如权利要求42所述的方法，其中，所述载体是慢病毒载体。
47.一种治疗由已知基因突变导致的代谢疾病的方法，所述方法包括给予通过共同给予奥索恩诺和RNA病毒载体转染的细胞。
48.如权利要求45所述的方法，其中，所述载体是逆转录病毒载体。
49.如权利要求45所述的方法，其中，所述载体是慢病毒载体。
50.一种治疗由病毒感染诱导的炎症的方法，所述方法包括共同给予奥索恩诺和抗病毒治疗。
51.如权利要求50所述的方法，其中，所述抗病毒治疗为选自下组的至少一种：金刚烷抗病毒物质，如金刚烷胺和金刚乙胺；抗病毒增效剂，如利托那韦和可比司他；趋化因子受体拮抗剂，如马拉维诺；整合酶链转移抑制剂，如马拉维诺、度鲁特韦和埃替格韦；混合抗病毒物质，如索菲布韦、恩夫韦肽、膦甲酸和福米韦生；神经氨酸酶抑制剂，如帕拉米韦、奥司他韦和扎纳米韦；非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)，如法韦伦、奈韦拉平、地拉夫定、依曲韦林和利匹韦林；NS5a抑制剂，如达卡他韦；核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)，如齐多夫定、地达诺新、司他夫定、拉米夫定、阿巴卡韦、恩曲他滨和恩替卡韦；蛋白酶抑制剂，如沙奎那韦、利托那韦、茚地那韦、奈非那韦、安普那韦、洛匹那韦、阿扎那韦、福沙那韦、替拉那韦和地瑞那韦；以及，嘌呤核苷物质，如利巴韦林、伐昔洛韦、泛昔洛韦、阿昔洛韦、更昔洛韦、缬更昔洛韦和西多福韦。
52.一种提高体内基于病毒的治疗的效力的方法，所述方法包括共同给予奥索恩诺和基于RNA的病毒治疗。
向天然杀伤细胞、造血干细胞和巨噬细胞的增强化基因递送
背景技术
发明内容
旎生物技术公司)，根据制造商说明书获得NK细胞。分离后，将NK细胞以1×10个细胞/ml的浓度置于CellGro SCGM(Cellgenix公司)中培养，该CellGro SCGM中补充有10％人AB血清(瑞士巴塞尔的龙沙公司)和1000U/ml rhIL-2(阿地白介素Proleukin，希龙公司)。为了在转导前初始测试细胞因子刺激(图1)，使用了浓度为20ng/ml的IL-12(美国新泽西州洛基山的派罗科技公司(Peprotech))、IL-15(派罗科技公司)和IL-21(派罗科技公司)。其余试验中，仅使用1000U/ml rhIL-2和20ng/ml IL-21。
孵育结束时，在室温下以1000×g进行第二次离心，然后从孔中分离上清液，在每孔中加入
1ml新鲜NK细胞生长培养基(补充有10％人AB血清的(CellGro SCGM)。将细胞保持在该培养基中，每日加入细胞因子(IL-2：1000U/ml，IL-21：20ng/ml)。如图1所示使用细胞因子的组合。其余试验仅使用IL-2和IL-21至少3天，然后进行eGFP表达采集。在所示试验中，在转导中存在以下抑制剂：BX795(Invivogen公司)和奥索恩诺(iX)(Tocris公司)。
GACTCACGCTGGATAGCCTC(Seq.ID No.3)；CCAGAAAGAGAGAGTAGCGC(Seq.ID No.4)CACAGCTAAGGCCACGGAGC(Seq.ID No.5)；GGCCGAGATGTCTCGCTCCG(Seq.ID No.6)；
TTGCGGGAGCGCATGCCTTT(Seq.ID No.7)；CCACCTCTTGATGGGGCTAG(Seq.ID No.8)；
ATACCTTGGGTTGATCCACT(Seq.ID No.9)；CGTGAGTAAACCTGAATCTT(Seq.ID No.10)；
AAGTCAACTTCAATGTCGGA(Seq.ID No.11)；CATAGATCGAGACATGTAAG(Seq.ID No.12)；
GCTACTCTCTCTTTCTGGCC(Seq.ID No.13)；ACCCAAACCAAGCCTTTCTA(Seq.ID No.14)；和TATAAGTGGAGGCGTCGCGC(Seq.ID No15)。转染后48小时，用抗B2M抗体(克隆：2M2，Bi01egend公司)对细胞进行染色以比较β2m表达的损失。然后如下所述采用流式细胞术分析细胞。
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