技术领域
[0001] 本
发明涉及一种粤草组织培养快速繁殖育种方法,属于种植技术领域。
背景技术
[0002] 粤草( Pennisetum Siness Roxb) 是一种多功能型巨菌草新品种,属禾本科,形似芦苇又似细竹。粤草植株高大,根系发达,
生物量大,耐寒、耐旱、耐高温、耐污、耐涝、耐盐
碱,具有很强的环境适应能
力,可以适应比较恶劣的环境条件,在沙地、荒地、盐碱地等均可种植。粤草是优质
饲草,可作为可食用菌的优质菌料,也是优质
密度板、可纺原
纤维、造纸、
生物质燃料发电的原料,同时能治理
水土流失、
净化水体。目前,尚缺乏简便易行成本低廉的快速繁殖的方法。因此,探索粤草的组培育苗方法是非常有必要的。
[0003] 组培技术的应用很广泛,很多种
植物都实现了利用组培育苗的方法进行快繁。目前花叶芦竹组培试验中取材多为秋季植物茎秆的侧芽为外植体,取材受季节和材料的限制,在春季不能进行有效组培快繁。本发明以茎段作为外植体,取材方便,不受季节限制,筛选合适的培养基使茎段在节处产生侧芽,进而生出新根形成组培苗,建立和优化粤草的组培快繁技术体系,为粤草的组培快繁生产提供操作流程和数据参考,为批量生产粤草组培苗并应用于生产牧草、生物质燃料、治理荒漠、改良
土壤、改善生态环境等方面提供技术指导。
发明内容
[0004] 本发明涉及一种粤草组织培养快速繁殖育种方法,具体是以粤草为材料,取其带节的茎段作为外植体,采用组织培养的方法,经分化培养(光照强度150lx左右)、增殖培养(光照2000-4000lux,10小时/天)、生根阶段培养(光照4000-8000lux,10小时/天)、炼苗后得到可移栽的优质粤草组培苗,以期通过建立和优化粤草组织培养快速繁殖技术体系,为粤草的组培快繁生产提供操作流程和数据参考,为批量生产粤草组培苗并应用于生产牧草、生物质燃料、治理荒漠、改良土壤、改善生态环境等方面提供技术指导。
[0005] 为了达到上述目的,本发明所采用的技术方案是:一种粤草组织培养快速繁殖育种方法,包括以下步骤:
(1)外植体的消毒:取粤草带节的茎段作为外植体,用无菌水洗3 次,用70%
乙醇消毒30 s,无菌水冲洗3 次,0.1% 氯化汞消毒5 min,无菌水冲洗5 次,冲洗过的外植体放在已灭菌的
滤纸上吸干水分,待用;
(2)接种:将消毒后的外植体在组培室内剪成长约1.5cm 的小段,接入分化(启动)培养基中;
(3)分化培养:在
温度为25-28℃、湿度50%-70%、弱光照(光照强度150lux左右)的条件下培养25 d后,观察,观察节段的侧芽生长情况;
(4)增殖培养:将分化后的侧芽剪成1.5cm小段,接种至增殖培养基,在培养温度为25-
28℃,湿度50%-70%,光照强度为2000-4000lux,每天光照10h的条件下培养 25 d后记录阶段侧芽的分化数及生长情况;
(5)生根培养:将增殖培养后所得粗壮侧芽切成1.5cm小段转入生根培养基,培养温度为 25-28℃,湿度50%-70%,光照强度为4000-8000lux,每天光照 10h,25 d后,观察外植体的生根情况;
(6)移栽:当组培苗长到6~7 cm 的时候,根系能主动吸收环境中的营养和水分,可以进行移栽,把组培苗移栽到含有
腐殖质和沙土的营养袋里,注意保湿保温和光照。
[0006] 所述所用分化(启动)培养基为MS+6-BA4-5mg/L+NAA0.05 -0.1mg/L,所述增殖培养基为MS+6-BA2-4 mg/L+NAA0.1-0.2 mg/L,所述生根培养基为MS+NAA0.2 mg/L +活性
碳1-3mg/L。
[0007] 本发明具有如下优点:本发明以茎段作为外植体,取材方便,不受季节限制,筛选合适的培养基使茎段在节处产生侧芽,进而生出新根形成组培苗,建立和优化粤草的组培快繁技术体系,为粤草的组培快繁生产提供操作流程和数据参考,为批量生产粤草组培苗并应用于人工湿地建设和园林水景建设提供技术指导。
具体实施方式
[0008] 下面通过
实施例对本发明做进一步详细说明,这些实施例仅用来说明本发明,并不限制本发明的范围。
[0009] 实施例1一种粤草组织培养快速繁殖育种方法,包括以下步骤:
(1)外植体的消毒:取粤草带节的茎段作为外植体,用无菌水洗3 次,用70%乙醇消毒30 s,无菌水冲洗3 次,0.1% 氯化汞消毒5 min,无菌水冲洗5 次,冲洗过的外植体放在已灭菌的滤纸上吸干水分,待用;
(2)接种:将消毒后的外植体在组培室内剪成长约1.5cm 的小段,接入分化(启动)培养基中;
(3)分化培养:在温度为27℃、湿度65%、弱光照(光照强度150lux左右)的条件下培养25 d后,观察,观察节段的侧芽生长情况;
(4)增殖培养:将分化后的侧芽剪成1.5cm小段,接种至增殖培养基,在培养温度为27℃,湿度65%,光照强度为3500lux,每天光照10h的条件下培养 25 d后记录阶段侧芽的分化数及生长情况;
(5)生根培养:将增殖培养后所得粗壮侧芽切成1.5cm小段转入生根培养基,培养温度为 27℃,湿度65%,光照强度为5000lux,每天光照 10h,25 d后,观察外植体的生根情况;
(6)移栽:当组培苗长到6cm 的时候,根系能主动吸收环境中的营养和水分,可以进行移栽,把组培苗移栽到含有腐殖质和沙土的营养袋里,注意保湿保温和光照。
[0010] 所述所用分化(启动)培养基为MS+6-BA4-5mg/L+NAA0.05 -0.1mg/L为增殖培养基,所述增殖培养基为MS+6-BA2-4 mg/L+NAA0.1-0.2 mg/L,所述生根培养基为MS+NAA0.2 mg/L +活性碳1-3mg/L。
[0011] 实施例2一种粤草组织培养快速繁殖育种方法,包括以下步骤:
(1)外植体的消毒:取粤草带节的茎段作为外植体,用无菌水洗3 次,用70%乙醇消毒30 s,无菌水冲洗3 次,0.1% 氯化汞消毒5 min,无菌水冲洗5 次,冲洗过的外植体放在已灭菌的滤纸上吸干水分,待用;
(2)接种:将消毒后的外植体在组培室内剪成长约1.5cm 的小段,接入分化(启动)培养基中;
(3)分化培养:在温度为28℃、湿度70%、弱光照(光照强度150lux左右)的条件下培养25 d后,观察,观察节段的侧芽生长情况;
(4)增殖培养:将分化后的侧芽剪成1.5cm小段,接种至增殖培养基,在培养温度为28℃,湿度70%,光照强度为4000lux,每天光照10h的条件下培养 25 d后记录阶段侧芽的分化数及生长情况;
(5)生根培养:将增殖培养后所得粗壮侧芽切成1.5cm小段转入生根培养基,培养温度为 28℃,湿度70%,光照强度为7000lux,每天光照 10h,25 d后,观察外植体的生根情况;
(6)移栽:当组培苗长到6 cm 的时候,根系能主动吸收环境中的营养和水分,可以进行移栽,把组培苗移栽到含有腐殖质和沙土的营养袋里,注意保湿保温和光照。
[0012] 所述所用分化(启动)培养基为MS+6-BA4-5mg/L+NAA0.05 -0.1mg/L为增殖培养基,所述增殖培养基为MS+6-BA2-4 mg/L+NAA0.1-0.2 mg/L,所述生根培养基为MS+NAA0.2 mg/L +活性碳1-3mg/L。
[0013] 实施例3一种粤草组织培养快速繁殖育种方法,包括以下步骤:
(1)外植体的消毒:取粤草带节的茎段作为外植体,用无菌水洗3 次,用70%乙醇消毒30 s,无菌水冲洗3 次,0.1% 氯化汞消毒5 min,无菌水冲洗5 次,冲洗过的外植体放在已灭菌的滤纸上吸干水分,待用;
(2)接种:将消毒后的外植体在组培室内剪成长约1.5cm 的小段,接入分化(启动)培养基中;
(3)分化培养:在温度为26℃、湿度60%、弱光照(光照强度150lux左右)的条件下培养25 d后,观察,观察节段的侧芽生长情况;
(4)增殖培养:将分化后的侧芽剪成1.5cm小段,接种至增殖培养基,在培养温度为26℃,湿度60%,光照强度为2000lux,每天光照10h的条件下培养 25 d后记录阶段侧芽的分化数及生长情况;
(5)生根培养:将增殖培养后所得粗壮侧芽切成1.5cm小段转入生根培养基,培养温度为 26℃,湿度60%,光照强度为8000lux,每天光照 10h,25 d后,观察外植体的生根情况;
(6)移栽:当组培苗长到6cm 的时候,根系能主动吸收环境中的营养和水分,可以进行移栽,把组培苗移栽到含有腐殖质和沙土的营养袋里,注意保湿保温和光照。
[0014] 所述所用分化(启动)培养基为MS+6-BA4-5mg/L+NAA0.05 -0.1mg/L为增殖培养基,所述增殖培养基为MS+6-BA2-4 mg/L+NAA0.1-0.2 mg/L,所述生根培养基为MS+NAA0.2 mg/L +活性碳1-3mg/L。
[0015] 实施例4一种粤草组织培养快速繁殖育种方法,包括以下步骤:
(1)外植体的消毒:取粤草带节的茎段作为外植体,用无菌水洗3 次,用70%乙醇消毒30 s,无菌水冲洗3 次,0.1% 氯化汞消毒5 min,无菌水冲洗5 次,冲洗过的外植体放在已灭菌的滤纸上吸干水分,待用;
(2)接种:将消毒后的外植体在组培室内剪成长约1.5cm 的小段,接入分化(启动)培养基中;
(3)分化培养:在温度为25℃、湿度50%、弱光照(光照强度150lux左右)的条件下培养25 d后,观察,观察节段的侧芽生长情况;
(4)增殖培养:将分化后的侧芽剪成1.5cm小段,接种至增殖培养基,在培养温度为25℃,湿度50%,光照强度为4000lux,每天光照10h的条件下培养 25 d后记录阶段侧芽的分化数及生长情况;
(5)生根培养:将增殖培养后所得粗壮侧芽切成1.5cm小段转入生根培养基,培养温度为 25℃,湿度50%,光照强度为8000lux,每天光照 10h,25 d后,观察外植体的生根情况;
(6)移栽:当组培苗长到7 cm 的时候,根系能主动吸收环境中的营养和水分,可以进行移栽,把组培苗移栽到含有腐殖质和沙土的营养袋里,注意保湿保温和光照。
[0016] 所述所用分化(启动)培养基为MS+6-BA4-5mg/L+NAA0.05 -0.1mg/L,所述增殖培养基为MS+6-BA2-4 mg/L+NAA0.1-0.2 mg/L,所述生根培养基为MS+NAA0.2 mg/L +活性碳1-3mg/L。