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一种连续色谱分离装置及其方法

阅读：769发布：2020-05-13

专利汇可以提供一种连续色谱分离装置及其方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种连续色谱分离装置及其方法，该包括样品输液泵、系统输液泵、层析柱、流路选择阀和检测器；样品输液泵首先连接样品流路选择阀，然后样品流路选择阀并联与层析柱数目相等的流路选择阀，流路选择阀再分别连接一个层析柱，层析柱末端分别连接流路选择阀，层析柱前端连接的流路选择阀分别连接未与它连接的层析柱末端所连接的流路选择阀，层析柱末端连接的流路选择阀分别同时连接两个流路选择阀，然后这两个流路选择阀分别连接一个检测器，系统输液泵首先连接系统流路选择阀，然后系统流路选择阀并联层析柱前端连接的流路选择阀。，下面是一种连续色谱分离装置及其方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种连续色谱分离装置，所述连续色谱分离装置包括样品输液泵、系统输液泵、层析柱、流路选择阀和检测器；其特征在于：样品输液泵的数目为一个，系统输液泵的数目为一个或两个，层析柱的数目为两个或两个以上，检测器的数目为两个；样品输液泵首先连接一个样品流路选择阀，然后样品流路选择阀并联与层析柱数目相等的流路选择阀，与层析柱数目相等的流路选择阀再分别连接一个层析柱，层析柱末端分别连接一个流路选择阀，与层析柱前端连接的流路选择阀分别与未与层析柱末端连接的其他流路选择阀连接，层析柱末端连接的流路选择阀分别同时连接两个流路选择阀，然后这两个流路选择阀分别连接一个检测器，系统输液泵首先连接一个系统流路选择阀，然后系统流路选择阀并联层析柱前端连接的流路选择阀。
2.如权利要求1所述的连续色谱分离装置，其特征在于：所述的样品输液泵是柱塞泵、隔膜泵或蠕动泵，柱塞泵或蠕动泵用于实验室工艺优化或工艺放大阶段，隔膜泵或蠕动泵用于规模生产阶段。
3.如权利要求1所述的连续色谱分离装置，其特征在于：所述的流路选择阀可以是旋转选择阀或多通阀组，流路选择阀是4位置5口阀、6位置7口阀、8位置9口阀或10位置11口阀，实现其中一个共同口只能与其他一个口相通；旋转选择阀由电机驱动阀中的转子旋转，确保中间共同口只能与其他的一个口相通，达到流路选择的作用；多通阀组由多个由电磁或气动驱动的两通隔膜电磁阀组成，实现任何一个共同连接端口与其他连接端口相通，达到流路选择的作用；旋转电磁阀常用于实验室工艺优化或工艺放大阶段，隔膜电磁阀组常用于工艺放大或规模生产阶段。
4.如权利要求1所述的连续色谱分离装置，其特征在于：系统输液泵的数目为一个，层析柱的数目为三个，流路选择阀的数目为十个，所述的流路选择阀是6位置7口阀或7口阀组。
5.如权利要求4所述的连续色谱分离装置，其特征在于：样品输液泵(1)连接样品流路选择阀(5)，样品流路选择阀(5)分别并联一号流路选择阀(7)、二号流路选择阀(8)和三号流路选择阀(9)，一号流路选择阀(7)、二号流路选择阀(8)和三号流路选择阀(9)分别连接一号层析柱(C1)、二号层析柱(C2)和三号层析柱(C3)，一号层析柱(C1)、二号层析柱(C2)和三号层析柱(C3)分别连接四号流路选择阀(10)、五号流路选择阀(11)和六号流路选择阀(12)，一号流路选择阀(7)同时连接五号流路选择阀(11)和六号流路选择阀(12)，二号流路选择阀(8)同时连接四号流路选择阀(10)和六号流路选择阀(12)，三号流路选择阀(9)同时连接四号流路选择阀(10)和五号流路选择阀(11)，四号流路选择阀(10)、五号流路选择阀(11)和六号流路选择阀(12)分别同时连接七号流路选择阀(13)和八号流路选择阀(14)，七号流路选择阀(13)连接样品检测器(3)，八号流路选择阀(14)连接系统检测器(4)，系统输液泵(2)连接系统流路选择阀(6)，系统流路选择阀(6)分别并联一号流路选择阀(7)、二号流路选择阀(8)和三号流路选择阀(9)。
6.如权利要求1所述的连续色谱分离装置，其特征在于：系统输液泵的数目为一个，层析柱的数目为四个，流路选择阀的数目为十二个，所述的流路选择阀是6位置7口阀或7口阀组。
7.一种利用权利要求1-3任一项所述的连续色谱分离装置进行连续色谱分离的方法，其特征在于：所述方法的包括如下步骤：
(a)样品输液泵通过流路选择阀接通全部层析柱和样品检测器，对层析柱上样检测；
(b)系统输液泵通过流路选择阀接通其中的一个或一个以上的层析柱和系统检测器，对首先接通的层析柱进行冲洗；同时样品输液泵通过流路选择阀接通剩下的层析柱和检测器，进行上样检测；
(c)系统输液泵通过流路选择阀接通步骤(b)进行冲洗的层析柱和另一个检测器，进行洗脱、再生以及再平衡；同时样品输液泵通过流路选择阀接通剩下的层析柱和检测器，进行上样检测；
(d)然后依次对剩余的层析柱进行冲洗、洗脱、再生以及再平衡；并利用已经冲洗、洗脱、再生以及再平衡后的层析柱进行上样检测，连续循环实现对样品的不间断上样的同时，连续的收集分离后的目标物质，同时交错收集洗脱阶段的由于外水原因流出的目标物以及过载上样流穿的目标物。
8.一种利用权利要求5所述的装置进行连续色谱分离的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：
A.第一步：对一号层析柱(C1)进行上样，样品输液泵(1)连接样品流路选择阀(5)的共同口，样品流路选择阀(5)切换到2号口，样品流路选择阀(5)的2号口与一号流路选择阀(7)的1号口连接，一号流路选择阀(7)切换到1号口，一号流路选择阀(7)的共同口连接一号层析柱(C1)的入口，一号层析柱(C1)的出口与四号流路选择阀(10)的共同口相连，四号流路选择阀(10)切换到1号口，四号流路选择阀(10)的1号口与二号流路选择阀(8)的2号口相连，二号流路选择阀(8)切换到2号口，二号流路选择阀(8)的共同口连接二号层析柱(C2)的入口，二号层析柱(C2)的出口与五号流路选择阀(11)的共同口相连，五号流路选择阀(11)切换到2号口，五号流路选择阀(11)的1号口与三号流路选择阀(9)的2号口相连，三号流路选择阀(9)的共同口连接三号层析柱(C3)的入口，三号层析柱(C3)的出口与六号流路选择阀(12)的共同口相连，六号流路选择阀(12)切换到2号口，六号流路选择阀(12)的2号口连接七号流路选择阀(13)的5号口，七号流路选择阀(13)切换到5号口，七号流路选择阀(13)的共同口连接样品检测器(3)；
B.第二步：对一号层析柱(C1)进行冲洗，系统输液泵(2)依次接通系统流路选择阀(6)、一号流路选择阀(7)、一号层析柱(C1)、四号流路选择阀(10)、三号流路选择阀(9)、三号层析柱(C3)、六号流路选择阀(12)、八号流路选择阀(14)和系统检测器(4)，来自系统输液泵(2)的流动相进行冲洗，三号层析柱(C3)捕获一号层析柱(C1)中由于外水体积中残留的目标物；同时样品输液泵(1)依次接通样品流路选择阀(5)、二号流路选择阀(8)、二号层析柱(C2)、五号流路选择阀(11)、七号流路选择阀(13)和样品检测器(3)，对二号层析柱(C2)上样；
C.第三步：系统输液泵(2)依次接通系统流路选择阀(6)、一号流路选择阀(7)、一号层析柱(C1)、四号流路选择阀(10)、八号流路选择阀(14)和系统检测器(4)，系统输液泵(2)对一号层析柱(C1)进行洗脱、再生以及再平衡，同时样品输液泵(1)依次接通样品流路选择阀(5)、二号流路选择阀(8)、二号层析柱(C2)、五号流路选择阀(11)、三号流路选择阀(9)、三号层析柱(C3)、六号流路选择阀(12)、七号流路选择阀(13)和样品检测器(3)，样品输液泵(1)对二号层析柱(C2)上样，使得三号层析柱(C3)能捕获二号层析柱(C2)中由于上样过载流穿的目标物；
D.第四步：系统输液泵(2)依次接通系统流路选择阀(6)、二号流路选择阀(8)、二号层析柱(C2)、五号流路选择阀(11)、一号流路选择阀(7)、一号层析柱(C1)、四号流路选择阀(10)、八号流路选择阀(14)和系统检测器(4)，二号层析柱(C2)进行冲洗，使得一号层析柱(C1)能捕获二号层析柱(C2)中由于外水体积中残留的目标物；同时样品输液泵(1)依次接通样品流路选择阀(5)、三号流路选择阀(9)、三号层析柱(C3)、六号流路选择阀(12)、七号流路选择阀(13)和样品检测器(3)，样品输液泵(1)对三号层析柱(C3)上样；
E.第五步：系统输液泵(2)依次接通系统流路选择阀(6)、二号流路选择阀(8)、二号层析柱(C2)、五号流路选择阀(11)、八号流路选择阀(14)和系统检测器(4)，系统输液泵(2)对二号层析柱(C2)进行洗脱、再生以及再平衡；同时样品输液泵(1)依次接通样品流路选择阀(5)、三号流路选择阀(9)、三号层析柱(C3)、六号流路选择阀(12)、一号流路选择阀(7)、一号层析柱(C1)、四号流路选择阀(10)、七号流路选择阀(13)和样品检测器(3)，样品输液泵(1)对三号层析柱(C3)上样，使得一号层析柱(C1)能捕获三号层析柱(C3)中由于上样过载流穿的目标物；
F.第六步：系统输液泵(2)依次接通系统流路选择阀(6)、三号流路选择阀(9)、三号层析柱(C3)、六号流路选择阀(12)、二号流路选择阀(8)、二号层析柱(C2)、五号流路选择阀(11)、八号流路选择阀(14)和系统检测器(4)，对三号层析柱(C3)进行冲洗；同时样品输液泵(1)依次接通样品流路选择阀(5)、一号流路选择阀(7)、一号层析柱(C1)、四号流路选择阀(10)、七号流路选择阀(13)和样品检测器(3)，样品输液泵(1)对一号层析柱(C1)上样；
G.第七步：系统输液泵(2)依次接通系统流路选择阀(6)、三号流路选择阀(9)、三号层析柱(C3)、六号流路选择阀(12)、八号流路选择阀(14)和系统检测器(4)，对三号层析柱(C3)进行洗脱、再生以及再平衡；同时样品输液泵(1)依次接通样品流路选择阀(5)、一号流路选择阀(7)、一号层析柱(C1)、四号流路选择阀(10)、二号流路选择阀(8)、二号层析柱(C2)、五号流路选择阀(11)、七号流路选择阀(13)和样品检测器(3)，样品输液泵(1)对一号层析柱(C1)上样，使得二号层析柱(C2)能捕获一号层析柱(C1)中由于上样过载流穿的目标物；
步骤A～G的连续循环，可以实现对样品的不间断上样的同时，连续的收集分离后的目标物质，同时交错收集洗脱阶段的由于外水原因流出的目标物以及过载上样时流穿的目标物。

说明书全文

一种连续色谱分离装置及其方法

技术领域

[0001] 本发明涉及分析化学技术领域，尤其涉及一种连续色谱分离装置及其方法。

背景技术

[0002] 在生物制药工艺流程中，上游工艺中生物样品的培养采用了灌流培养方式，能不间断的输出产物，而目前下游的分离工艺中仍然采用离线式色谱分离，采用层析系统进行单次进样分离，每次上样受到层析柱载量的限制，层析柱中的填料利用率不高。为了提供上样量，只能采用大的层析柱，填料的使用量大，生产设备投入费用高，并且由于填料的上样次数有限制，在固定次数后就需要废弃，造成填料的利用率不高，生产成本高。

发明内容

[0003] 为解决现有技术中的色谱分离装置和方法存在的问题，本发明提供了一种连续色谱分离装置及其方法，应用在制药、化工等行业，能实现对灌流培养的蛋白质样品进行连续进样，并持续输出目标产物。

[0004] 本发明采用如下技术方案：

[0005] 本发明的连续色谱分离装置，包括样品输液泵、系统输液泵、层析柱、流路选择阀和检测器；样品输液泵的数目为一个，系统输液泵的数目为一个或两个，层析柱的数目为两个或两个以上，检测器的数目为两个；样品输液泵首先连接一个样品流路选择阀，然后样品流路选择阀并联与层析柱数目相等的流路选择阀，与层析柱数目相等的流路选择阀再分别连接一个层析柱，层析柱末端分别连接一个流路选择阀，与层析柱前端连接的流路选择阀分别与未与层析柱末端连接的其他流路选择阀连接，层析柱末端连接的流路选择阀分别同时连接两个流路选择阀，然后这两个流路选择阀分别连接一个检测器，系统输液泵首先连接一个系统流路选择阀，然后系统流路选择阀并联层析柱前端连接的流路选择阀。

[0006] 所述的样品输液泵是柱塞泵或隔膜泵，柱塞泵用于实验室工艺优化或工艺放大阶段，隔膜泵用于规模生产阶段。

[0007] 所述的流路选择阀可以是旋转选择阀或多通阀组，流路选择阀是4位置5口阀、6位置7口阀、8位置9口阀或10位置11口阀，实现其中一个共同口只能与其他一个口相通；旋转选择阀由电机驱动阀中的转子旋转，确保中间共同口只能与其他的一个口相通，达到流路选择的作用。多通阀组由多个由电磁或气动驱动的两通隔膜阀组成，实现任何一个共同连接端口与其他连接端口相通。达到流路选择的作用。旋转电磁阀常用于实验室工艺优化或工艺放大阶段，多通阀组常用于工艺放大或规模生产阶段。

[0008] 作为优选的技术方案一：系统输液泵的数目为一个，层析柱的数目为三个，流路选择阀的数目为十个，所述的流路选择阀是6位置7口阀或7口阀组。样品输液泵连接样品流路选择阀，样品流路选择阀分别并联一号流路选择阀、二号流路选择阀和三号流路选择阀，一号流路选择阀、二号流路选择阀和三号流路选择阀分别连接一号层析柱、二号层析柱和三号层析柱，一号层析柱、二号层析柱和三号层析柱分别连接四号流路选择阀、五号流路选择阀和六号流路选择阀，一号流路选择阀同时连接五号流路选择阀和六号流路选择阀，二号流路选择阀同时连接四号流路选择阀和六号流路选择阀，三号流路选择阀同时连接四号流路选择阀和五号流路选择阀，四号流路选择阀、五号流路选择阀和六号流路选择阀分别同时连接七号流路选择阀和八号流路选择阀，七号流路选择阀连接样品检测器，八号流路选择阀连接系统检测器，系统输液泵连接系统流路选择阀，系统流路选择阀分别并联一号流路选择阀、二号流路选择阀和三号流路选择阀。

[0009] 作为优选的技术方案二：系统输液泵的数目为一个，层析柱的数目为四个，流路选择阀的数目为十二个，所述的流路选择阀是6位置7口阀或7口阀组，本方案更优于技术方案一。

[0010] 利用本发明的装置进行连续色谱分离的方法的具体步骤如下：

[0011] (a)样品输液泵通过流路选择阀接通全部层析柱和样品检测器，对层析柱上样检测；

[0012] (b)系统输液泵通过流路选择阀接通其中的一个或一个以上的层析柱和系统检测器，对首先接通的层析柱进行冲洗；同时样品输液泵通过流路选择阀接通剩下的层析柱和检测器，进行上样检测；

[0013] (c)系统输液泵通过流路选择阀接通步骤(b)进行冲洗的层析柱和另一个检测器，进行洗脱、再生以及再平衡；同时样品输液泵通过流路选择阀接通剩下的层析柱和检测器，进行上样检测；

[0014] (d)然后依次对剩余的层析柱进行冲洗、洗脱、再生以及再平衡；并利用已经冲洗、洗脱、再生以及再平衡后的层析柱进行上样检测，连续循环实现对样品的不间断上样的同时，连续的收集分离后的目标物质，同时交错收集洗脱阶段的由于外水原因流出的目标物以及过载上样流穿的目标物。

[0015] 利用优选的技术方案一所述的装置进行连续色谱分离的方法的具体步骤如下：

[0016] A.第一步：对一号层析柱进行上样，样品输液泵连接样品流路选择阀的共同口，样品流路选择阀切换到2号口，样品流路选择阀的2号口与一号流路选择阀的1号口连接，一号流路选择阀切换到1号口，一号流路选择阀的共同口连接一号层析柱的入口，一号层析柱的出口与四号流路选择阀的共同口相连，四号流路选择阀切换到1号口，四号流路选择阀的1号口与二号流路选择阀的2号口相连，二号流路选择阀切换到2号口，二号流路选择阀的共同口连接二号层析柱的入口，二号层析柱的出口与五号流路选择阀的共同口相连，五号流路选择阀切换到2号口，五号流路选择阀的1号口与三号流路选择阀的2号口相连，三号流路选择阀的共同口连接三号层析柱的入口，三号层析柱的出口与六号流路选择阀的共同口相连，六号流路选择阀切换到2号口，六号流路选择阀的2号口连接七号流路选择阀的5号口，七号流路选择阀切换到5号口，七号流路选择阀的共同口连接样品检测器；

[0017] B.第二步：对一号层析柱进行冲洗，系统输液泵依次接通系统流路选择阀、一号流路选择阀、一号层析柱、四号流路选择阀、三号流路选择阀、三号层析柱、六号流路选择阀、八号流路选择阀和系统检测器，来自系统输液泵的流动相进行冲洗，三号层析柱捕获一号层析柱中由于外水体积中残留的目标物；同时样品输液泵依次接通样品流路选择阀、二号流路选择阀、二号层析柱、五号流路选择阀、七号流路选择阀和样品检测器，对二号层析柱上样；

[0018] C.第三步：系统输液泵依次接通系统流路选择阀、一号流路选择阀、一号层析柱、四号流路选择阀、八号流路选择阀和系统检测器，系统输液泵对一号层析柱进行洗脱、再生以及再平衡，同时样品输液泵依次接通样品流路选择阀、二号流路选择阀、二号层析柱、五号流路选择阀、三号流路选择阀、三号层析柱、六号流路选择阀、七号流路选择阀和样品检测器，样品输液泵对二号层析柱上样，使得三号层析柱能捕获二号层析柱中由于上样过载流穿的目标物；

[0019] D.第四步：系统输液泵依次接通系统流路选择阀、二号流路选择阀、二号层析柱、五号流路选择阀、一号流路选择阀、一号层析柱、四号流路选择阀、八号流路选择阀和系统检测器，二号层析柱进行冲洗，使得一号层析柱能捕获二号层析柱中由于外水体积中残留的目标物；同时样品输液泵依次接通样品流路选择阀、三号流路选择阀、三号层析柱、六号流路选择阀、七号流路选择阀和样品检测器，样品输液泵对三号层析柱上样；

[0020] E.第五步：系统输液泵依次接通系统流路选择阀、二号流路选择阀、二号层析柱、五号流路选择阀、八号流路选择阀和系统检测器，系统输液泵对二号层析柱进行洗脱、再生以及再平衡；同时样品输液泵依次接通样品流路选择阀、三号流路选择阀、三号层析柱、六号流路选择阀、一号流路选择阀、一号层析柱、四号流路选择阀、七号流路选择阀和样品检测器，样品输液泵对三号层析柱上样，使得一号层析柱能捕获三号层析柱中由于上样过载流穿的目标物；

[0021] F.第六步：系统输液泵依次接通系统流路选择阀、三号流路选择阀、三号层析柱、六号流路选择阀、二号流路选择阀、二号层析柱、五号流路选择阀、八号流路选择阀和系统检测器，对三号层析柱进行冲洗；同时样品输液泵依次接通样品流路选择阀、一号流路选择阀、一号层析柱、四号流路选择阀、七号流路选择阀和样品检测器，样品输液泵对一号层析柱上样；

[0022] G.第七步：系统输液泵依次接通系统流路选择阀、三号流路选择阀、三号层析柱、六号流路选择阀、八号流路选择阀和系统检测器，对三号层析柱进行洗脱、再生以及再平衡；同时样品输液泵依次接通样品流路选择阀、一号流路选择阀、一号层析柱、四号流路选择阀、二号流路选择阀、二号层析柱、五号流路选择阀、七号流路选择阀和样品检测器，样品输液泵对一号层析柱上样，使得二号层析柱能捕获一号层析柱中由于上样过载流穿的目标物；

[0023] 步骤A～G的连续循环，可以实现对样品的不间断上样的同时，连续的收集分离后的目标物质，同时交错收集洗脱阶段的由于外水原因流出的目标物以及过载上样流穿的目标物。

[0024] 本发明的积极效果如下：

[0025] 本发明的连续色谱分离装置及其方法不但可以实现生物样品的连续进样并分离纯化，使得上下游工艺能连成一体，实现连续不间断分离，提供生产效率，而且可以避免由于层析柱的外水体积在冲洗时被浪费，从而提供生物分离的回收率。

[0026] 本发明的连续色谱分离装置能实现根据工艺的要求连接2根到10根的层析柱。并且具有以下优点：

[0027] 1)与上游灌流培养工艺相结合，可以连续进样并对样品进行分离纯化，持续输出目标产物。提高2～4倍的生产效率。

[0028] 2)能捕获过载上样时的流穿，使得层析柱可以满载上样，填料得到充分利用，降低了生产30～50％的成本，能捕获层析柱由于层析柱外水体积在清洗时的流出的样品，提高了回收率。附图说明

[0029] 图1是本发明的连续色谱分离装置中4位置5口流路选择阀的示意图。

[0030] 图2是本发明的连续色谱分离装置中6位置7口流路选择阀的示意图。

[0031] 图3是本发明的连续色谱分离装置中8位置9口流路选择阀的示意图。

[0032] 图4是本发明实施例1的连续色谱分离装置的示意图。

[0033] 图5是本发明实施例2的连续色谱分离装置的示意图。

[0034] 1为样品输液泵、2为系统输液泵、3为样品检测器、4为系统检测器、5为样品流路选择阀、6为系统流路选择阀、7为一号流路选择阀、8为二号流路选择阀、9为三号流路选择阀、10为四号流路选择阀、11为五号流路选择阀、12为六号流路选择阀、13为七号流路选择阀、
14为八号流路选择阀、15为九号流路选择阀、16为十号流路选择阀、C1为一号层析柱、C2为二号层析柱、C3为三号层析柱、C4为四号层析柱。

具体实施方式

[0035] 结合下面的实施例对本发明作进一步详细描述。

[0036] 实施例1

[0037] 如图4所示，本发明的连续色谱分离装置中，系统输液泵的数目为一个，层析柱的数目为三个，流路选择阀的数目为十个，所述的流路选择阀是6位置7口阀。

[0038] 样品输液泵1连接样品流路选择阀5，样品流路选择阀5分别并联一号流路选择阀7、二号流路选择阀8和三号流路选择阀9，一号流路选择阀7、二号流路选择阀8和三号流路选择阀9分别连接一号层析柱C1、二号层析柱C2和三号层析柱C3，一号层析柱C1、二号层析柱C2和三号层析柱C3分别连接四号流路选择阀10、五号流路选择阀11和六号流路选择阀
12，一号流路选择阀7同时连接五号流路选择阀11和六号流路选择阀12，二号流路选择阀8同时连接四号流路选择阀10和六号流路选择阀12，三号流路选择阀9同时连接四号流路选择阀10和五号流路选择阀11，四号流路选择阀10、五号流路选择阀11和六号流路选择阀12分别同时连接七号流路选择阀13和八号流路选择阀14，七号流路选择阀13连接样品检测器
3，八号流路选择阀14连接系统检测器4，系统输液泵2连接系统流路选择阀6，系统流路选择阀6分别并联一号流路选择阀7、二号流路选择阀8和三号流路选择阀9。

[0039] 本发明的装置进行连续色谱分离的方法的具体步骤如下：

[0040] A.第一步：对一号层析柱C1进行上样，样品输液泵1连接样品流路选择阀5的共同口，样品流路选择阀5切换到2号口，样品流路选择阀5的2号口与一号流路选择阀7的1号口连接，一号流路选择阀7切换到1号口，一号流路选择阀7的共同口连接一号层析柱C1的入口，一号层析柱C1的出口与四号流路选择阀10的共同口相连，四号流路选择阀10切换到1号口，四号流路选择阀10的1号口与二号流路选择阀8的2号口相连，二号流路选择阀8切换到2号口，二号流路选择阀8的共同口连接二号层析柱C2的入口，二号层析柱C2的出口与五号流路选择阀11的共同口相连，五号流路选择阀11切换到2号口，五号流路选择阀11的1号口与三号流路选择阀9的2号口相连，三号流路选择阀9的共同口连接三号层析柱C3的入口，三号层析柱C3的出口与六号流路选择阀12的共同口相连，六号流路选择阀12切换到2号口，六号流路选择阀12的2号口连接七号流路选择阀13的5号口，七号流路选择阀13切换到5号口，七号流路选择阀13的共同口连接样品检测器3；

[0041] B.第二步：对一号层析柱C1进行冲洗，系统输液泵2依次接通系统流路选择阀6、一号流路选择阀7、一号层析柱C1、四号流路选择阀10、三号流路选择阀9、三号层析柱C3、六号流路选择阀12、八号流路选择阀14和系统检测器4，来自系统输液泵2的水进行冲洗，三号层析柱C3捕获一号层析柱C1中由于外水体积中残留的目标物；同时样品输液泵1依次接通样品流路选择阀5、二号流路选择阀8、二号层析柱C2、五号流路选择阀11、七号流路选择阀13和样品检测器3，对二号层析柱C2上样；

[0042] C.第三步：系统输液泵2依次接通系统流路选择阀6、一号流路选择阀7、一号层析柱C1、四号流路选择阀10、八号流路选择阀14和系统检测器4，系统输液泵2对一号层析柱C1进行洗脱、再生以及再平衡，同时样品输液泵1依次接通样品流路选择阀5、二号流路选择阀8、二号层析柱C2、五号流路选择阀11、三号流路选择阀9、三号层析柱C3、六号流路选择阀
12、七号流路选择阀13和样品检测器3，样品输液泵1对二号层析柱C2上样，使得三号层析柱C3能捕获二号层析柱C2中由于上样过载流穿的目标物；

[0043] D.第四步：系统输液泵2依次接通系统流路选择阀6、二号流路选择阀8、二号层析柱C2、五号流路选择阀11、一号流路选择阀7、一号层析柱C1、四号流路选择阀10、八号流路选择阀14和系统检测器4，二号层析柱C2进行冲洗，使得一号层析柱C1能捕获二号层析柱C2中由于外水体积中残留的目标物；同时样品输液泵1依次接通样品流路选择阀5、三号流路选择阀9、三号层析柱C3、六号流路选择阀12、七号流路选择阀13和样品检测器3，样品输液泵1对三号层析柱C3上样；

[0044] E.第五步：系统输液泵2依次接通系统流路选择阀6、二号流路选择阀8、二号层析柱C2、五号流路选择阀11、八号流路选择阀14和系统检测器4，系统输液泵2对二号层析柱C2进行洗脱、再生以及再平衡；同时样品输液泵1依次接通样品流路选择阀5、三号流路选择阀9、三号层析柱C3、六号流路选择阀12、一号流路选择阀7、一号层析柱C1、四号流路选择阀
10、七号流路选择阀13和样品检测器3，样品输液泵1对三号层析柱C3上样，使得一号层析柱C1能捕获三号层析柱C3中由于上样过载流穿的目标物；

[0045] F.第六步：系统输液泵2依次接通系统流路选择阀6、三号流路选择阀9、三号层析柱C3、六号流路选择阀12、二号流路选择阀8、二号层析柱C2、五号流路选择阀11、八号流路选择阀14和系统检测器4，对三号层析柱C3进行冲洗；同时样品输液泵1依次接通样品流路选择阀5、一号流路选择阀7、一号层析柱C1、四号流路选择阀10、七号流路选择阀13和样品检测器3，样品输液泵1对一号层析柱C1上样；

[0046] G.第七步：系统输液泵2依次接通系统流路选择阀6、三号流路选择阀9、三号层析柱C3、六号流路选择阀12、八号流路选择阀14和系统检测器4，对三号层析柱C3进行洗脱、再生以及再平衡；同时样品输液泵1依次接通样品流路选择阀5、一号流路选择阀7、一号层析柱C1、四号流路选择阀10、二号流路选择阀8、二号层析柱C2、五号流路选择阀11、七号流路选择阀13和样品检测器3，样品输液泵1对一号层析柱C1上样，使得二号层析柱C2能捕获一号层析柱C1中由于上样过载流穿的目标物；

[0047] 步骤A～G的连续循环，可以实现对样品的不间断上样的同时，连续的收集分离后的目标物质，同时交错收集洗脱阶段的由于外水原因流出的目标物以及过载上样流穿的目标物。

[0048] 实施例2

[0049] 本发明的连续分离色谱装置连接方式如图5所示，本方法采用的工作方法如下:

[0050] a.样品输液泵1对一号层析柱C1上样。一号层析柱C1后面连接二号层析柱C2，二号层析柱C2捕获一号层析柱C1上样过载后的流穿；

[0051] b.系统输液泵2对一号层析柱C1进行冲洗，并且同时连接四号层析柱C4，使得四号层析柱C4能捕获一号层析柱C1中由于外水体积中残留的目标物。同时样品输液泵1对二号层析柱C2上样。二号层析柱C2后面连接三号层析柱C3，三号层析柱C3捕获二号层析柱C2上样过载后的流穿；

[0052] c.系统输液泵2对一号层析柱C1进行洗脱、再生以及再平衡，同时样品输液泵1对二号层析柱C2上样，并且同时连接三号层析柱C3，使得三号层析柱C3能捕获二号层析柱C2中由于上样过载流穿的目标物；

[0053] d.系统输液泵2对二号层析柱C2进行冲洗，并且同时连接一号层析柱C1，使得一号层析柱C1能捕获二号层析柱C2中由于外水体积中残留的目标物。同时样品输液泵1对三号层析柱C3上样。三号层析柱C3后面连接四号层析柱C4，四号层析柱C4捕获三号层析柱C3上样过载后的流穿；

[0054] e.系统输液泵2对二号层析柱C2进行洗脱、再生以及再平衡，同时样品输液泵1对三号层析柱C3上样，并且同时连接四号层析柱C4，使得四号层析柱C4能捕获三号层析柱C3中由于上样过载流穿的目标物；

[0055] f.系统输液泵2对三号层析柱C3进行冲洗，并且同时连接二号层析柱C2，使得二号层析柱C2能捕获三号层析柱C3中由于外水体积中残留的目标物。同时样品输液泵1对四号层析柱C4上样。四号层析柱C4后面连接一号层析柱C1，一号层析柱C1捕获四号层析柱C4上样过载后的流穿；

[0056] g.系统输液泵2对三号层析柱C3进行洗脱、再生以及再平衡，同时样品输液泵1对四号层析柱C4上样，并且同时连接一号层析柱C1，使得一号层析柱C1能捕获四号层析柱C4中由于上样过载流穿的目标物；

[0057] h.系统输液泵2对四号层析柱C4进行冲洗，并且同时连接三号层析柱C3，使得三号层析柱C3能捕获四号层析柱C4中由于外水体积中残留的目标物。同时样品输液泵1对一号层析柱C1上样。一号层析柱C1后面连接二号层析柱C2，二号层析柱C2捕获一号层析柱C1上样过载后的流穿；

[0058] i.系统输液泵2对四号层析柱C4进行洗脱、再生以及再平衡，同时样品输液泵1对一号层析柱C1上样，并且同时连接二号层析柱C2，使得二号层析柱C2能捕获一号层析柱C1中由于上样过载流穿的目标物。

[0059] 步骤A～I的连续循环，可以实现对样品的不间断上样的同时，连续的收集分离后的目标物质。同时交错收集洗脱阶段的由于外水原因流出的目标物以及过载上样流穿的目标物，不但可以提高回收率，而且可以提高层析填料的利用率。降低生产成本。采用4根层析柱，有1个通道对其中1根层析柱用于上样的同时另外一个通道对根柱子进行清洗、脱、再生和平衡，另外两根层析柱的一根用于捕获上样时的流穿的目标物，另外一根用于捕获清洗阶段的外水造成的目标物。这样可以避免当出现由于上样时间短于清洗时间的情况下上样和清洗不能并行进行。

[0060] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

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