本发明涉及具有止痛活性的吲唑酰胺类、其制备方法和含有它们 的药物组合物。

慢性疼痛广泛存在。在成年人群中平均约20％患有该病。这种类 型的疼痛一般与慢性损害和/或变性过程相关。特征在于慢性疼痛的病 理情况的典型实例为类风湿性关节炎、骨关节炎、纤维肌痛、神经病 变等。[Ashburn MA，Staats PS，“慢性疼痛的控制”(Management of chronic pain.)-《柳叶刀》(Lancet)1999；353：1865-69]。

目前使用的止痛药主要属于两类：合并了止痛活性与抗炎活性的 非类固醇类抗炎药(NSAIDs)和麻醉性镇痛剂。这些类型构成了由世界 卫生组织对疼痛的药物治疗提出的具有三种等级的″止痛规模″的基础 [《疼痛教科书》(Textbook of pain.)第4版P.D.Wall和R.Melzack Eds.Churchill Livingstone，1999]。

慢性疼痛通常导致虚弱并使得工作能力丧失和生活质量变差。由 此它会对经济和社会产生影响。此外，有大量患者的疼痛疾病仍然没 有合适的治疗方法[ScholzJ，Woolf CJ.“我们能征服疼痛吗？”(Can we conquer pain？)-《国家神经科学》(Nat Neurosci.)2002年11 月；增刊5：1062-7]。

投入到鉴定合适的止痛化合物上的广泛研究努力尚未产生可观察 到的结果。

目前令人意外地发现一族新的吲唑酰胺类具有这些特性。

本发明由此在第一个方面中涉及通式I的吲唑酰胺及其与药物上 可接受的有机酸和无机酸形成的酸加成盐：

其中

X为NHC(O)或C(O)NH基团；

R1为氢或卤原子或氨基羰基、乙酰氨基、磺酰基甲基、氨基磺酰 基甲基、直链或支链C1-3烷基或C1-3烷氧基；

R2为氢原子或直链或支链C1-6烷基或芳基(C1-3)烷基，其中上述基 团任选被一个或多个选自卤原子、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代；

R3和R4相同或不同，为氢或卤原子或氨基、硝基、羟基、直链 或支链C1-3烷基、C1-3烷氧基、二(C1-3)烷氨基、乙酰氨基或

O-(C1-3)烷基苯基；或R3和R4一起形成5-至7-元环，其中所述 环原子中的一个或两个可以为选自N、S和O的杂原子；

R5、R6、R7和R8相同或不同，为H或甲基。

R1的优选含义为H、甲基和甲氧基；

R2的优选含义为H、甲基和异丙基；

R3的优选含义为H、甲基、羟基、氨基和二甲氨基。

R4的优选含义为H、甲基和羟基。

R5、R6、R7和R8的优选含义为H。

通过两种实验性大鼠模型证实通式(I)化合物的止痛活性：CFA诱 发的机械性痛觉过敏和链脲霉素诱发的糖尿病性神经病中的机械性痛 觉过敏。

正如现有技术中已知的，可以将上述实验模型视为对人体内活性 的预测。

CFA-诱发的痛觉过敏代表了一种综合征，其特征在于致力于控制 炎症反应和与干扰疼痛感觉的情况出现的回路活化。特别地，注射CFA 能够诱导外周″炎性混合物″(炎性反应介体和产生疼痛的媒介物)释 放，而这种″炎性混合物″可以导致局部损伤且重要的是在脊髓中持续 扩大疼痛感觉的生化改变。正如众所周知的，该模型构成了用于治疗 人中的炎性痛且特别是控制诸如痛觉过敏和异常性疼痛这类情况的研 究药物的验证工具。

特征在于这类与变性炎症过程相关的疼痛的人体病理情况的典型 实例为类风湿性关节炎和骨关节炎。

作为组成部分，链脲霉素在大鼠中诱发的糖尿病性神经病代表了 胰岛素依赖性综合征，其特征在于运动和感觉神经传导速度下降且出 现一系列疼痛感觉异常。正如众所周知的，这种实验模型构成了用于 治疗人中神经性疼痛的研究药物的有用工具。该模型特别代表了一大 组类型的神经性疼痛的验证实例，其特征在于诸如作为神经系统原发 损害或机能障碍后发生的痛觉过敏和异常性疼痛这类现象。特征在于 这种类型的机能障碍和存在神经性疼痛的人体病理情况的典型实例为 糖尿病、癌症、免疫缺陷、创伤、局部缺血、多发性硬化、坐骨神经 痛、三叉神经痛和疱疹后综合征。

本发明在第二各方面中涉及制备通式(I)化合物及其与药物上可 接受的有机物和无机酸形成的酸加成盐的方法，其特征在于包括下列 步骤：

a)使通式(II)的胺与通式(IIIa)或通式(IIIb)的吲唑羧酸衍生 物缩合，其中通式(II)的结构式如下：

其中X、R3、R4、R5、R6、R7和R8具有上述给出的含义；

其中通式(IIIa)的结构式如下：

其中：

R1和R2具有上述给出的含义，且

Y为Cl或Br原子或基团OR或OC(O)R，其中R为含有1-6个碳 原子的直链或支链烷基；

其中通式(IIIb)的结构式如下：

其中：

R1具有上述给出的含义；

从而得到通式(I)的吲唑酰胺；和

b)任选使通式(I)的吲唑酰胺与药物上可接受的有机物或无机酸 形成酸加成的盐。

按照常规方法、例如通过用合适的卤化物使异哌啶甲酰胺 (isonipecotamide)烷基化、随后将酰胺还原成伯胺(WO98/07728)或 通过用苯甲醛保护氨基甲基哌啶(《合成通讯》(Synthetic Communications)22(16)，2357-2360，1992)、用合适的卤化物烷 基化并脱保护而得到通式(II)的胺。

通式(II)的中间体为新的，其中X、R3、R4、R5、R6、R7和R8 具有上述含义。

本发明在第三个方面中涉及通式(II)的中间体，其中X、R3、R4、 R5、R6、R7和R8具有上述含义。

还可以按照常规方法获得通式(IIIa)和(IIIb)的吲唑类。例如， 可以使用亚硫酰氯由相应的酸获得通式(IIIa)的化合物，其中Y为氯 (《药物化学杂志》(J.Med.Chem)，1976，Vol.19(6)，pp.778-783)， 同时可以通过乙酯的酯化反应或已知用于形成混合酸酐类的反应获得 通式(IIIa)的化合物，其中Y为OR或OC(O)R(R.C.Larock，《综合 有机转化》(Comprehensive Organic Transformations)，VCH，pp. 965-966)。由此可以按照J.O.C.1958，Vol. 23p. 621获得通式 (IIIb)的化合物。

在本发明方法的一个实施方案中，通过在有合适的稀释剂存在和 0-140℃的温度下使通式(II)的化合物与其中Y为氯的通式(IIIa)的 化合物或与通式(IIIb)化合物反应0.5-20小时的时间进行步骤(a)。

优选反应温度在15-40℃的范围。反应时间有利的是在1-14小 时的范围。

优选所述的稀释剂为质子惰性的、极性或非极性的。甚至更优选 它为质子惰性的非极性稀释剂。合适的质子惰性非极性稀释剂的实例 是芳香烃类，例如甲苯。

合适的质子惰性极性稀释剂的实例为二甲基甲酰胺和二氯甲烷。

在使用通式(IIIa)化合物的实施方案中，其中Y为Cl或Br，上 述步骤(a)可以在有有机酸或无机酸受体存在下进行。

合适的有机酸受体的实例为吡啶、三乙胺等。合适的无机酸受体 的实例为碱金属碳酸盐和碳酸氢盐。

在本发明方法的步骤(b)中，优选首先进行药物上可接受的有机酸 或无机酸与步骤a)中获得的通式(I)的吲唑酰胺的加成，此后进行分 离所述吲唑酰胺的步骤。

药物上可接受的酸的典型实例为：草酸、马来酸、甲磺酸、对甲 苯磺酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、盐酸、磷酸、硫酸。

本发明在第四个方面中涉及药物组合物，它含有有效量的通式(I) 的化合物或其与药物上可接受的酸形成的加成盐以及至少一种药物上 可接受的惰性组分。

可以有用地用本发明的药物组合物治疗的病理情况的典型实例为 慢性疼痛。一般来说，这种慢性疼痛指的是慢性损害或变性过程，例 如类风湿性关节炎、骨关节炎、肿瘤疼痛、神经性疼痛等。

优选将本发明的药物组合物制备成合适的剂型形式。

合适的剂型的实例为：口服给药用片剂、胶囊、包衣片、颗粒、 溶液或糖浆剂；局部给药用霜剂、软膏和含药的贴剂以及注射、喷雾 或眼部给药用无菌溶液。

有利的是，可以将这些剂型配制成可确保通式(I)化合物或其与药 物上可接受酸形成的盐在一定时间内受控释放。特别地，随治疗类型 的不同，所需的释放时间可以极短、正常或持续。

这些剂型还可以含有其它常用组分，诸如：防腐剂、稳定剂、表 面活性剂、缓冲剂、用于调节渗透压的盐、乳化剂、增甜剂、着色剂、 增香剂等。

此外，当需要特定治疗时，本发明的药物组合物可以含有其它同 时给药为有用的药理活性组分。

本发明药物组合物中通式(I)化合物或其与药物上可接受酸形成 的盐的用量可以在宽范围内改变，这取决于已知的因素，例如所治疗 疾病的类型、疾病的严重性、患者体重、剂型、选择的给药途径、每 天的给药次数和所选择的通式(I)化合物的功效。不过，最佳用量易于 且通常由本领域技术人员决定。

一般来说，本发明药物组合物中通式(I)化合物或其与药物上可接 受酸形成的盐的用量照此可以确保在0.001-100mg/kg/天的给药水 平。甚至更优选该用量在0.1-10mg/kg/天。

可以按照制药药剂师众所周知的技术制备本发明药物组合物的剂 型，包括混合、制粒、压片、溶解、灭菌等。

下列实施例用于解释本发明、但不用来限定本发明。

在下列实施例中，使用粗体形式的编号表示芳族环上的取代基(R3 和R4)。

                        实施例1

2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基)-N-苯基乙酰胺二盐酸盐

                  (AF3R279)

(化合物II：R3＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，X＝C(O)NH)

a)N-六氢-4-吡啶基甲基-N-苯基亚甲基胺

将苯甲醛(12.7g；0.12mol)滴加到4-氨基甲基哌啶(13.7g； 0.12mol)在甲苯(50ml)中的溶液中。在室温下搅拌由此获得的溶液。 3小时后，通过在减压条件下蒸发除去溶剂并将残余物用甲苯溶解两 次(2×50ml)。

由此得到N-六氢-4-吡啶基甲基-N-苯基亚甲基胺(25g)且不经 进一步纯化使用它。

b)2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基)-N-苯基乙酰胺

将如上述步骤a)中所述制备的产物(26.3g；0.13mol)溶于无水 乙醇(100ml)并加入到含有如Beilstein(I)在Syst.No 1607，p.243 中所述制备的N-2-氯乙酰基苯胺(22.4g；0.13mol)和无水碳酸钾 (33g；0.24mol)在无水乙醇(250ml)中的混悬液中。

将由此获得的混悬液回流16小时。将该反应混合物冷却至室温并 过滤。在减压条件下蒸发滤液并将由此获得的残余物悬浮于3N HCl(90 ml)中并在室温下搅拌2小时。

将该溶液转入分液漏斗并用乙酸乙酯将酸性水相洗涤4次(4× 50ml)。用6N NaOH将水相碱化至pH 13并用二氯甲烷(80ml)提取。用 Na2SO4干燥有机相并通过在减压条件下蒸发除去溶剂而得到2-(4-(氨 基甲基)-1-哌啶基)-N-苯基乙酰胺(10g)。

c)2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基)-N-苯基乙酰胺二盐酸盐

通过溶于乙醇(60ml)、加入盐酸乙醇(5ml)和从95°乙醇中结晶将 如上述步骤b)中所述制备的产物(4g)转化成相应的二盐酸盐。

由此得到2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基)-N-苯基乙酰胺二盐酸盐 (3.5g)。

m.p.：288℃(分解)

对C14H21N3O·2HCl·H2O的元素分析   C   H   N   测定值％   49.73   7.55   12.21   计算值％   49.71   7.45   12.42

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.44-1.70(m，2H)；1.71-2.20(m，3H)；2.77(s， 2H)；3.04-3.26(m，4H)；4.18(s，2H)；7.12(t，J＝7Hz，1H)；7.35(t， J＝7Hz，2H)；7.66(d，J＝7Hz，2H)；8.33(宽峰s，3H)；10.18(s，1H)； 11.07(s，1H)。

                          实施例2

N3-((1-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙基)-4-哌啶基)甲基)-1-(1-甲 基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺盐酸盐(AF3R172)

(化合物I：R1＝R3＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，R2＝i-C3H7，X＝C(O)NH)

将如FP-A-0 975 623中所述制备的1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑 -3-羧基氯(17.5g；0.079mol)滴加到如实施例1b)中所述制备的产 物(19.5g；0.079mol)在甲苯(300ml)中的混悬液中。

将该反应混合物在室温下搅拌6小时，然后通过在减压条件下蒸 发除去溶剂。将残余物溶于1N NaOH(100ml)和二氯甲烷(100ml) 并转入分液漏斗。分离出有机相并用Na2SO4干燥。然后通过在减压条 件下蒸发除去溶剂并通过急骤色谱法纯化由此获得的残余物(20g)， 用7/3己烷/乙酸乙酯混合物洗脱。

通过溶于乙酸乙酯、加入盐酸乙醇(5ml)和从乙酸乙酯/无水乙醇 的9/1混合物中结晶将获得的产物转化成相应的盐酸盐。

由此得到所需产物(12.8g)。

m.p.：201-202℃(分解)

对C25H31N5O2·HCl的元素分析   C   H   N   测定值％   63.83   6.74   14.75   计算值％   63.89   6.86   14.90

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.55(d，J＝7Hz，6H)；1.50-2.10(m，5H)；3.00- 3.70(m，6H)；4.16(s，2H)；5.08(七重峰，J＝7Hz，1H)；7.11(t，J＝7Hz， 1H)；7.20-7.50(m，4H)；7.66(d，J＝8Hz，2H)；7.79(d，J＝8Hz，1H)；8.18 (d，J＝8Hz，1H)；8.37(t，J＝6Hz，1H)；10.03(宽峰s，1H)；11.04(s， 1H)。

                             实施例3

N3-((1-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙基)-4-哌啶基)甲基)-1H-吲唑 -3-甲酰胺甲苯磺酸盐(AF3R276)

(化合物I：R1＝R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，X＝C(O)NH)

通过滴液漏斗将如实施例1b)中所述制备的产物(5.7g；0.026 mol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液加入到如J.O.C.1958，Vol.23，p. 621中所述制备的7H，14H-吲唑并[2′，3′：4，5]吡唑并[1，2-b]吲唑 -7，14-二酮(3.7g；0.013mol)在甲苯(30ml)中的混悬液中。

在室温下搅拌18小时后，将该反应混合物转入分液漏斗。加入二 氯甲烷(30ml)并用1N NaOH洗涤有机相。分离出有机相并用Na2SO4干燥。然后通过在减压条件下蒸发除去溶剂。

通过溶于乙酸乙酯、加入化学计量的对甲苯磺酸并从95°乙醇中 重结晶将由此获得的产物转化成相应的甲苯磺酸盐。

由此得到所需产物(4.3g)。

m.p.：215.5-217.5℃

对C22H25N5O2·C7H8O3S-1/2H2O的元素分析   C   H   N   测定值％   60.71   5.92   12.24   计算值％   60.82   5.98   12.23

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.48-1.73(m，2H)；1.77-2.10(m，3H)；2.28(s， 3H)；2.93-3.65(m，6H)；4.10(s，2H)；7.07-7.67(m，12H)；8.18(d， J＝8Hz，1H)；8.53(t，J＝6Hz，1H)；9.63(宽峰s，1H)；10.52(s，1H)； 13.57(s，1H)。

                      实施例4

N3-((1-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙基)-4-哌啶基)甲基)-1-苄基 -1H-吲唑-3-甲酰胺盐酸盐(AF3R277)

(化合物I：R1＝R3＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，R2＝C6H5CH2，X＝C(O)NH)

a)1-苄基-1H-吲唑-3-羧基氯

将亚硫酰氯(5.6ml；0.077mol)加入到如《药物化学杂志》(J.Med. Chem.)，1976，Vol.19(6)，pp.778-783中所述制备的1-苄基-1H- 吲唑-3-甲酸(6.5g；0.026mol)在甲苯(65ml)中的混悬液中并将该 反应混合物回流2小时。通过在减压条件下蒸发除去溶剂并将残余物 用甲苯溶解两次(2×50ml)而得到所需产物(7g)，将其不经进一步纯 化使用。

b)N3-((1-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙基)-4-哌啶基)甲基)-1-苄基 -1H-吲唑-3-甲酰胺盐酸盐

通过与实施例2中所述类似的方式操作，使如实施例4a)中所述 制备的产物(8.2g；0.030mol)与如实施例1b)中所述的产物(7.5g； 0.030mol)反应并将反应产物转化成相应的盐酸盐。

由此得到所需产物(4.5g)。

m.p.：196-198℃

对C29H31N5O2·HCl·1/2H2O的元素分析   C   H   N   测定值％   66.19   6.28   13.24   计算值％   66.09   6.31   13.29

1H-NMR(δ，CDCl3)：1.64-2.40(m，5H)；3.10-3.77(m，6H)；4.13(s，2H)； 5.58(s，1H)；7.00-7.40(m，13H)；7.74(d，J＝8Hz，1H)；8.34(d，J＝8Hz， 1H)；10.88(s，1H)；11.26(宽峰s，1H).

                         实施例5

N3-((1-(2-氧代-2-((4-((苯基甲基)氧基)苯基)氨基)乙基)-4- 哌啶基)甲基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺(AF3R331)

(化合物I：R1＝R4＝R5＝R7＝R8＝H，R2＝i-C3H7，R3＝4-OCH2C6H5， X＝C(O)NH)

a)N1-(4-((苯基甲基)氧基)苯基)-2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基) 乙酰胺盐酸盐

按照与实施例1b)中所述类似的方式操作，使如实施例1a)中所 述制备的产物(68g；0.34mol)与如《印度应用化学杂志》(Indian J. Appl.Chem.)1967，Vol.30(3-4)，pp.91-95中所述制备的 N1-(4-((苯基甲基)氧基)苯基)-2-氯乙酰胺(93.7g；0.34mol)反应。

通过急骤色谱法纯化由此获得的油状残余物(120g)，用10/4/1 氯仿/甲醇/氨水混合物洗脱。

通过溶于乙醇、加入盐酸乙醇并从无水乙醇中重结晶将由此获得 的N1-(4-((苯基甲基)氧基)苯基)-2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基)乙酰 胺碱(70g)转化成相应的二盐酸盐而得到65g所需产物。

对C21H27N3O2·2HCl的元素分析   C   H   N   测定值％   58.88   6.75   9.55   计算值％   59.16   6.86   9.85

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.45-1.70(m，2H)；1.70-2.20(m，3H)；2.72(s， 2H)；3.02-3.68(m，4H)；4.12(s，2H)；5.08(s，2H)；7.00(d，J＝9Hz，2H)； 7.26-7.48(m，5H)；8.56(d，J＝9Hz，2H)；8.27(s，3H)；10.14(s，1H)； 10.92(s，1H).

b)N3-((1-(2-氧代-2-((4-((苯基甲基)氧基)苯基)氨基)乙 基)-4-哌啶基)甲基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺

将如EP-A-0 975 623中所述制备的1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3- 羧基氯(31.1g；0.14mol)滴加到如实施例5a)中所述制备的 N1-(4-((苯基甲基)氧基)苯基)-2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基)乙酰胺 (49.5g；0.14mol)在甲苯(500ml)中的混悬液中。

将该反应混合物在室温下搅拌6小时且然后过滤。将由此获得的 固体溶于2N NaOH和二氯甲烷。将该混合物转入分液漏斗。分离出有 机相并用Na2SO4干燥。然后通过在减压条件下蒸发除去溶剂并使由此 获得的残余物(75g)从异丙醇中结晶而得到56g所需产物。

m.p.：113-115℃(分解)

对C32H37N5O3的元素分析   C   H   N   测定值％   71.03   7.19   12.95   计算值％   71.22   6.91   12.98

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.24-1.44(m，2H)；1.54(d，J＝7Hz，6H)；1.48- 1.78(m，3H)；2.10(t，J＝11Hz，2H)；2.87(d，J＝11Hz，2H)；3.05(s，2H)； 3.24(t，J＝6Hz，2H)；5.07(七重峰，J＝7Hz，1H)；5.07(s，2H)；6.96(d， J＝9Hz，2H)；7.20-7.48(m，7H)；7.54(d，J＝9Hz，2H)；7.78(d，J＝9Hz， 1H)；8.19(d，J＝8Hz，1H)；8.23(t，J＝6Hz，1H)；9.52(s，1H).

                   实施例6

N3-((1-(2-((4-羟基苯基)氨基)-2-氧代乙基)-4-哌啶基)甲基) -1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺盐酸盐

(AF3R278)(化合物I：R1＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，R2＝i-C3H7，R3＝4-OH， X＝C(O)NH)

将如实施例5中所述制备的产物(36.5g；0.068mol)在95°乙醇 (1000ml)中的溶液在40psi下用10％Pd-C(3.65g)氢化5小时。然 后过滤该反应混合物并在减压条件下浓缩滤液。

通过溶于无水乙醇、加入盐酸乙醇并从无水乙醇中重结晶将由此 获得的产物转化成相应的盐酸盐而得到20g所需产物。

m.p.：277℃(分解)

对C25H31N5O3·HCl的元素分析   C   H   N   测定值％   61.76   6.76   14.44   计算值％   61.78   6.64   14.41

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.55(d，J＝7Hz，6H)；1.46-1.75(m，2H)；1.75- 2.10(m，3H)；2.95-3.64(m，6H)；4.07(s，2H)；5.08(七重峰，J＝7Hz，1H)； 6.75(d，J＝9Hz，2H)；7.20-7.31(m，1H)；7.35-7.49(m，3H)；7.79(d， J＝9Hz，1H)；8.17(dt，J＝8；1Hz，1H)；8.36(t，J＝6Hz，1H)；9.37(s，1H)； 9.89(宽峰s，1H)；10.62(s，1H).

                       实施例7

N3-((1-(2-氧代-2-((4-硝基苯基)氨基)乙基)-4-哌啶基)甲 基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺(AF3R335)(化合物 I：R1＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，R2＝i-C3H7，R3＝4-NO2，X＝C(O)NH)

a)2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基)-N-4-硝基苯基)乙酰胺

按照与实施例1b)中所述类似的方式操作，使如实施例1a)中所述 制备的产物(28g；0.14mol)与N1-(4-硝基苯基)-2-氯乙酰胺(30g； 0.14mol)反应。

由此得到油状残余物(20g)并通过急骤色谱法纯化，用10/4/1 氯仿/甲醇/氨水混合物洗脱而得到15g所需产物。

对C14H20N4O3的元素分析：   C   H   N   测定值％   57.23   7.00   18.98   计算值％   57.52   6.90   19.16

1H-NMR(δ，DMSO-d6+D2O)：1.20-1.40(m，2H)；1.48-1.78(m，3H)；2.17 (t，J＝12Hz，2H)；2.72(d，J＝7Hz，2H)；2.89(d，J＝12Hz，2H)；3.21(s， 2H)；7.90(d，J＝9Hz，2H)；8.23(d，J＝9Hz，2H).

b)N3-((1-(2-氧代-2-((4-硝基苯基)氨基)乙基)4-哌啶基)甲 基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺

将如EP-A-0975623中所述制备的1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3- 羧基氯(3.1g；0.013mol)滴加到按照实施例7a)中所述制备的产物 (4.07g；0.014mol)在甲苯(300ml)中的混悬液中。

将该反应混合物在室温下搅拌6小时且然后过滤。通过在减压条 件下蒸发除去溶剂。将残余物溶于1N NaOH和二氯甲烷。将该混合物 转入分液漏斗。分离出有机相并用Na2SO4干燥。通过在减压条件下蒸 发除去溶剂。通过急骤色谱法纯化由此获得的残余物，用乙酸乙酯洗 脱而得到2.8g所需产物。

对C25H30N6O4的元素分析   C   H   N   测定值％   62.62   6.38   17.33   计算值％   62.75   6.32   17.56

1H-NMR(δ，CDCl3)：1.36-1.55(m，2H)；1.61(d，J＝7Hz，6H)；1.66-1.98 (m，3H)；2.32(td，J＝12；2Hz，2H)；2.95(d，J＝12Hz，2H)；3.13(s，2H)； 3.46(t，J＝7Hz，2H)；4.89(七重峰，J＝7Hz，1H)；7.19(t，J＝6Hz，1H)； 7.23-7.30(m，1H)；7.35-7.50(m，2H)；7.75(d，J＝9Hz，2H)；8.21(d， J＝9Hz，2H)；8.38(dt，J＝8；1Hz，1H)；9.60(s，1H).

                          实施例8

5-甲基-N3-((1-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙基)-4-哌啶基)甲 基)-1H-吲唑-3-甲酰胺盐酸盐(AF3R295)

(化合物I：R1＝CH3，R2＝R3＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，X＝C(O)NH)

a)2，9-二甲基-7H，14H-吲唑并[2′，3′：4，5]吡唑并[1，2-b]吲唑 -7，14-二酮

将亚硫酰氯(11ml；0.151mol)加入到如《杂环化学杂志》(J. Heterocyclic Chem.)，1964，Vol.1(5)，239-241中所述制备的 5-甲基-1H-吲唑-3-甲酸(12.2g；0.056mol)在甲苯(130ml)中的混 悬液中并将该反应混合物回流4小时。通过在减压条件下蒸发除去溶 剂并将残余物用甲苯溶解两次而得到12g所需产物。

1H-NMR(δ，CDCl3)：2.54(d，J＝1Hz，6H)；7.35(dd，J＝9；2Hz，2H)；7.85 (d，J＝9Hz，2H)；8.01(m，1H).

b)5-甲基-N3-((1-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙基)-4-哌啶基)甲 基)-1H-吲唑-3-甲酰胺盐酸盐

按照与实施例3中所述类似的方式使按照实施例1b)制备的产物 (4.5g；0.018mol)与按照实施例8a)制备的产物(2.8g；0.009mol) 反应。

由此得到3.8g的5-甲基-N3-((1-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙 基)-4-哌啶基)甲基)-1H-吲唑-3-甲酰胺并通过溶于乙酸乙酯、加入盐 酸乙醇并从95/5乙酸乙酯/乙醇混合物中重结晶将其转化成相应的盐 酸盐而得到2.7g所需产物。

m.p.：252℃(分解)

对C23H27N5O2·HCl的元素分析   C   H   N   测定值％   62.62   6.38   15.70   计算值％   62.51   6.39   15.86

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.50-1.72(m，2H)；1.80-2.00(m，3H)；2.43(s， 3H)；2.96-3.64(m，6H)；4.13(s，2H)；7.12(t，J＝7Hz，1H)；7.24(dd J＝9；1.5Hz，1H)；7.36(t，J＝7Hz，2H)；7.50(d，J＝9Hz，1H)；7.62(d， J＝7Hz，2H)；7.95(s，1H)；8.46(t，J＝6Hz，1H)；9.86(宽峰s，1H)； 10.52(s，1H)；13.51(s，1H).

                        实施例9

5-甲基-N3-((1-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙基)-4-哌啶基)甲 基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺盐酸盐(AF3R299)

(化合物I：R1＝CH3，R2＝i-C3H7，R3＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H， X＝C(O)NH)

a)1-(1-甲基乙基)-5-甲基-1H-吲唑-3-甲酸异丙酯

将60％氢化钠在矿物油中的混悬液(17.1g；0.43mol)加入到如 《杂环化学杂志》(J.Heterocyclic Chem.)1964，Vol.1(5)239-241 中所述制备的5-甲基-1H-吲唑-3-甲酸(30g；0.17mol)在二甲基甲 酰胺(450ml)中的混悬液中并将该反应混合物加热至70℃。30分钟后， 加入异丙基溴(48ml，0.51mol)。

将该反应混合物在70℃下搅拌6小时。冷却后，加入水。将该反 应混合物转入分液漏斗并用乙醚提取。用饱和碳酸氢钠溶液洗涤有机 相并通过在减压条件下蒸发最终除去溶剂。

由此得到20g油状物并通过急骤色谱法纯化，用7/3己烷/乙酸 乙酯混合物洗脱而得到12g所需产物。

1H-NMR(δ，CDCl3)：1.47(d，J＝6Hz，6H)；1.64(d，J＝7Hz，6H)；2.50(d， J＝1Hz，3H)；4.92(七重峰，J＝7Hz，1H)；5.39(七重峰，J＝6Hz，1H)；7.23 (dd，J＝9；1Hz，1H)；7.40(d，J＝9Hz，1H)；7.95(五重峰，J＝1Hz，1H).

b)1-(1-甲基乙基)-5-甲基-1H-吲唑-3-甲酸

将按照实施例9a制备的产物(8g，0.03mol)在1M NaOH(42ml) 中的混悬液回流3小时。然后将该体系倾入水、用2M HCl酸化并用二 氯甲烷提取。在减压条件下蒸发出溶剂后，得到7g所需产物。

1H-NMR(6，CDCl3)：1.61(d，J＝7Hz，6H)；2.44(s，3H)；4.88(七重峰， J＝7Hz，1H)；7.19(d，J＝9Hz，1H)；7.34(d，J＝9Hz，1H)；7.97(s，1H)； 9.32(宽峰s，1H).

c)1-(1-甲基乙基)-5-甲基-1H-吲唑-3-羧基氯

按照与实施例4a)中所述类似的方式氯化按照实施例9a)制备的 产物(12.2g；0.056mol)。

由此得到13.3g所需产物且不经进一步纯化使用。

d)5-甲基-N3-((1-(2-氧代-2-(苯基氨基)乙基)-4-哌啶基)甲 基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺盐酸盐

将按照实施例1b)制备的产物(3g；0.012mol)加入到按照实施 例9c)制备的产物(2.9g；0.012mol)在甲苯(60ml)中的混悬液中。

将该反应混合物在室温下搅拌6小时且然后在减压条件下除去溶 剂。将残余物溶于2N NaOH和二氯甲烷。将该混合物转入分液漏斗。 分离出有机相并用Na2SO4干燥。通过在减压条件下蒸发除去溶剂。通 过急骤色谱法纯化由此得到的残余物(4g)，用97/3氯仿/甲醇混合物 洗脱。通过溶于乙酸乙酯、加入盐酸乙醇并从无水乙醇中结晶将所得 产物转化成相应的盐酸盐而得到2.3g所需产物。

m.p.：241℃(分解)

对C26H33N5O2·HCl的元素分析   C   H   N   测定值％   64.69   7.09   14.44   计算值％   64.52   7.08   14.47

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.59(d，J＝7Hz，6H)；1.78-2.25(m，5H)；2.47(s， 3H)；3.06-3.27(m，2H)；3.41(t，J＝6Hz，2H)；3.56-3.77(m，2H)；4.01(s， 2H)；4.83(七重峰，J＝7Hz，1H)；7.06-7.39(m，6H)；7.76(d，J＝8Hz，2H)； 8.12(s，1H)；10.91(s，1H)；11.79(宽峰s，1H).

                          实施例10

N3-((1-(2-氧代-2-((4-(二甲氨基)苯基)氨基)乙基)-4-哌啶基) 甲基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺二盐酸盐(AF3R301)

(化合物I：R1＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，R2＝i-C3H7，R3＝4-N(CH3)2， X＝C(O)NH)

a)2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基)-N-(4-(二甲氨基)苯基)-乙酰胺

按照与实施例1b)中所述类似的方式使按照实施例1a)制备的产 物(25g；0.12mol)与N1-(4-(二甲氨基)苯基)-2-氯乙酰胺(25.5g； 0.12mol)反应。

得到36g的油状残余物并通过急骤色谱法纯化，使用10/4/1氯 仿/甲醇/氨水混合物洗脱而得到25g所需产物。

对C16H26N4O的元素分析：   C   H   N   测定值％   66.53   9.30   18.97   计算值％   66.17   9.02   19.29

1H-NMR(δ，DMSO-d6+D2O)：1.18-1.50(m，2H)；1.55-1.78(m，3H)； 2.15-2.35(m，2H)；2.80-3.10(m，10H)；3.34(s，2H)；6.67(d，J＝9Hz， 2H)；7.39(d，J＝9Hz，2H).

b)N3-((1-(2-氧代-2-((4-二甲氨基)苯基)氨基)乙基)-4-哌啶 基)甲基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺二盐酸盐

通过与实施例2中所述类似的方式进行操作，使按照实施例10a) 制备的产物(6.4g；0.022mol)与1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-羧基 氯(4.9g；0.022mol)反应并将反应产物转化成相应的盐酸盐。

由此得到4.2g的所需产物。

m.p.：203℃(分解)

对C26H36N6O2·2HCl·H2O的元素分析：   C   H   N   测定值％   57.18   7.17   14.68   计算值％   57.14   7.10   14.81

1H-NMR(δ，CDCl3)：1.61(d，J＝7Hz，6H)；1.78-2.30(m，5H)；3.16(s， 6H)；3.00-3.90(m，6H)；4.31(s，2H)；4.90(七重峰，J＝7Hz，1H)；7.25(t， J＝8Hz，1H)；7.35-7.46(m，2H)；7.49(d，J＝9Hz，1H)；7.70(d，J＝9Hz， 2H)；7.86(d，J＝9Hz，2H)；8.30(d，J＝8Hz，1H)；10.65(宽峰s，2H)； 11.55(s，1H).

                        实施例11

N3-((1-(2-氧代-2-((2，6-二甲基苯基)氨基)乙基)-4-哌啶基)甲 基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺草酸盐(AF3R305)

(化合物I：R1＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，R2＝i-C3H7，R3＝2-CH3，R4＝6-CH3， X＝C(O)NH)

a)2-(4-(氨基甲基)-1-哌啶基)-N-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺二 盐酸盐

按照与实施例1b)中所述类似的方式使按照实施例1a)制备的产 物(32g；0.16mol)与N1-(2，6-二甲基苯基)-2-氯乙酰胺(31.6g； 0.16mol)反应。

由此得到54g的残余物并使其从乙酸乙酯中结晶而得到45g所 需产物，通过溶于乙酸乙酯、加入盐酸乙醇并从95°乙醇中重结晶将 其转化成相应的盐酸盐而得到40g所需产物。

对C16H25N3O·2HCl的元素分析   C   H   N   测定值％   55.12   7.77   20.22   计算值％   55.17   7.81   20.36

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.43-1.71(m，2H)；1.73-2.06(m，3H)；2.18(s， 6H)；2.71(s，2H)；3.05-3.66(m，4H)；4.25(s，2H)；7.10(s，3H)；8.35 (宽峰s，3H)；10.19(宽峰s，1H)；10.33(s，1H).

b)N3-((1-(2-氧代-2-((2，6-二甲基苯基)氨基)乙基)-4-哌啶基) 甲基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺草酸盐

将如EP-A-0 975 623中所述制备的1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3- 羧基氯(11.3g；0.051mol)滴加到按照实施例11a)中所述制备的作 为碱的产物(14.1g；0.051mol)在甲苯(200ml)中的混悬液中。

将该反应混合物在室温下搅拌6小时且然后过滤。通过在减压条 件下蒸发除去溶剂后，将残余物溶于1N NaOH和二氯甲烷。将该混合 物转入分液漏斗。分离出有机相并用Na2SO4干燥。通过在减压条件下 蒸发除去溶剂。通过急骤色谱法纯化由此获得的残余物(20g)，用乙酸 乙酯洗脱。通过溶于乙酸乙酯、加入化学计量的草酸并从95°乙醇中 结晶将所得产物转化成相应的草酸盐而得到7.8g所需产物。

m.p.：214℃(分解)

对C27H35N5O2·C2H2O4的元素分析   C   H   N   测定值％   63.09   6.80   12.73   计算值％   63.14   6.76   12.70

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.54(d，J＝7Hz，6H)；1.42-1.64(m，2H)；1.72- 1.92(m，3H)；2.15(s，6H)；2.78(t，J＝12Hz，2H)；3.17-3.40(m，4H)； 3.81(s，2H)；5.08(七重峰，J＝7Hz，1H)；6.20(宽峰s，2H)；7.09(s，3H)； 7.20-7.30(m，1H)；7.38-7.48(m，1H)；7.79(d，J＝9Hz，1H)；8.17(d， J＝8Hz，1H)；8.31(t，J＝6Hz，1H)；9.68(s，1H).

                         实施例12

N3-((1-(2-氧代-2-((4-氨基苯基)氨基)乙基)-4-哌啶基)甲 基)-1-(1-甲基乙基)-1H-吲唑-3-甲酰胺二盐酸盐(AF3R292)

(化合物I：R1＝R4＝R5＝R6＝R7＝R8＝H，R2＝i-C3H7，R3＝4-NH2， X＝C(O)NH)

将如实施例7b)中所述制备的产物(1.4g；0.003mol)在无水乙 醇(50ml)中的溶液在40psi下用10％Pd-C(90mg)氢化3小时。然后 过滤该反应混合物并在减压条件下浓缩滤液。通过溶于乙酸乙酯、加 入盐酸乙醇并从95/5乙酸乙酯/乙醇中结晶将由此获得的产物转化成 相应的二盐酸盐而得到0.7g所需产物。

m.p.：252℃(分解)

对C25H32N6O2·2HCl·H2O的元素分析   C   H   N   测定值％   55.70   6.52   15.44   计算值％   55.66   6.73   15.58

1H-NMR(δ，DMSO-d6)：1.55(d，J＝7Hz，6H)；1.40-2.09(m，5H)；2.96- 3.71(m，6H)；4.16(s，2H)；5.00(七重峰，J＝7Hz，1H)；7.20-7.38(m，3H) 7.30-7.48(m，1H)；7.70(d，J＝9Hz，2H)；7.79(d，J＝9Hz，2H)；8.17(d， J＝8Hz，1H)；8.37(t，J＝6Hz，1H)；10.03(宽峰s，4H)；11.17(s，1H).

                            试验

1.CFA-诱发的大鼠机械性痛觉过敏

使用平均体重为150-200g的雄性CD大鼠。

使用痛觉测量计选择具有对150-180g机械伤害性刺激的效应阈 的大鼠。该仪器能够通过在大鼠左后爪背侧区域上施加逐步增加的压 力记录以克表示的防伤害反应，相当于动物缩爪的力矩 (moment)[Randall LO和Selitto JJ.“对发炎组织止痛活性的测定 方法”(A method for the measurement of analgesic activity on inflamed tissue.)-《国际药效学疗法学报》(Arch.Int. Pharmacodyn. Ther.)1957；111：409-419]。

通过将150μl的″弗氏完全佐剂″(CFA)单侧注入动物左后爪表面 诱发痛觉过敏[Andrew D，Greenspan JD.“对大鼠末梢炎症后的皮肤 伤害性感受器的机械和热致敏作用”(Mechanical and heat sensitization of cutaneous nociceptors after peripheral inflammation in the rat.)-《神经生理学杂志》(J Neurophysiol.)1999；82(5)：2649-2656；Hargreaves K，Dubner R， Brown R，Flores C，Joris J.“用于测定皮肤痛觉过敏中的热伤害 感受性的新的和敏感性方法”(A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.)- 《疼痛》(Pain)1988；32：77-88]。

通过在注射CFA后23小时进行本试验来测试测试化合物(剂量： 10-5mol/kg)。

在治疗后1小时，将在对照组动物中测定的痛阈与在使用测试产 品治疗的动物中测定的痛阈进行比较。使用用于给予测试产品的相同 载体(水)治疗对照组动物。将结果列于表1中。

                表1-对CFA的作用   治疗   大鼠的数目   治疗后1小时的痛阈(g)   载体   12   120±6.1   AF3R172   12   175±10.2   AF3R278   12   164±10.2   AF3R301   12   151±10.7   AF3R276   12   185±15.9   AF3R277   12   170±10.7   AF3R295   12   202±17.0   AF3R299   12   167±8.5   AF3R305   12   174±8.4   AF3R292   12   154±11.5   AF3R331   12   156±8.7   AF3R335   12   168±6.8 相当重量/年龄的正常动物痛阈＝155±2.1g

2.患有链脲霉素诱发的糖尿病的大鼠中的机械性痛觉过敏

使用平均体重为240-300g的雄性CD大鼠。

通过单侧腹膜内(i.p.)注射溶于无菌生理溶液的80mg/kg链脲 霉素诱发糖尿病综合征[Courteix C，Eschalier A，Lavarenne J.“链 脲霉素诱发的糖尿病型大鼠：慢性疼痛模型的行为证据” (Streptozotocin-induced diabetic rats：behavioural evidence for a model of chronic pain.)-《疼痛》(Pain)，1993；53：81-88； Bannon AW，Decker MW，Kim DJ，Campbell JE，Arneric SP.“新胆 碱能通道调节剂ABT-594在神经性疼痛的神经连接和糖尿病性神经病 模型中有效”(ABT-594，a novel cholinergic channel modulator， is efficacious in nerve ligation and diabetic neuropathy models of neuropathic pain.)-《大脑研究》(Brain Res.)1998；801： 158-63]。

在注射链脲霉素后至少3周时，选择具有≥300mg/dl糖血水平和 对≤120g的机械伤害性刺激具有反应阈的大鼠。通过反射计、使用浸 渍了葡糖氧化酶的反应条测定糖血水平。使用痛觉测量计测定痛阈。 该仪器能够通过在大鼠左后爪背侧区域上施加逐步增加的压力记录以 克表示的防伤害反应，相当于动物缩爪的力矩。

在治疗后2小时，将在对照组动物中测定的痛阈与在使用测试产 品治疗的动物中测定的痛阈进行比较(剂量：10-5mol/kg)。

使用用于给予测试产品的相同载体(水)治疗对照组动物。将结果 列于表2中。

              表2-对糖尿病性神经病的作用   治疗   大鼠的数目   治疗后2小时的痛阈(g)   载体   8   114±2.7   AF3R172   8   186±13.0   AF3R278   8   240±16.5   AF3R301   8   201±13.8   AF3R276   8   210±10.9   AF3R277   8   188±11.0   AF3R295   8   212±14.6   AF3R299   8   200±10.7   AF3R305   8   189±9.2   AF3R292   8   202±8.7   AF3R331   8   192±11.5   AF3R335   8   180±13.0

相当重量/年龄的正常动物痛阈＝240±8.7g