本发明涉及新的噻吩异羟肟酸衍生物的(R)-和(S)对映异构体，它们的制备 方法，含有它们的药物及其制备，以及这些化合物作为药学上的活性剂的应用。

本发明的新化合物是组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)的抑制剂。几个HDAC抑 制剂的结构类别已经被确定，并在Marks，P.A.，等，J.Nat.Cancer Inst.92 (2000)1210-1216中综述。更具体地，WO 98/55449，US 5,369,108，WO 01/ 38322，WO 01/70675和WO 02/22577中报导烷酰基，链烯基，链烯基烯基， 苄基，和肉桂基异羟肟酸酯具有HDAC抑制活性。

本衍生物是新的式I化合物的(R)-和(S)对映异构体及其生理上可接受的盐

其中

Ar是芳基或杂芳基，其可以是未取代的或被以下基团取代1，2或3 次：

卤素；

苯基；

烷基；

-O-烷基；

-O-苯基；

-O-(CH2)n-O-；

-OH；

-NO2；

-NH2；

-NH-烷基；

-N(烷基)2；

-NH-C(O)-烷基；

-SO2烷基； 

-SO2NH2；

-SO2NH-烷基；

-SO2N(烷基)2；

-C(O)-NH2；

-C(O)-NH-烷基；

-C(O)-N(烷基)2；或

-C(O)-烷基；

R1是氢；

苯基，烷基或链烯基，其可以是未取代的或被以下基团取代一次或数次：

卤素；

-OH；

-NO2；

-NH2；

-O-烷基；

-O-芳基；

-NH(烷基)；

-N(烷基)2；

吗啉代；

4-甲基哌嗪基；或

芳基；或

R1与Ar-基团一起形成四氢萘-，1，2-二氢化茚-或二苯并环庚烷环；

R2是氢或烷基；

n是1，2或3。

转录调节是细胞分化，增殖和编程性细胞死亡过程中的一件主要事 件。一组基因的转录活化确定了细胞的终点，并且由于这个原因，转录被 多种因子严格调节。在这个过程中涉及的它的一个调节机制是DNA三级 结构的改变，其通过调节转录因子对它们的靶DNA片段的可接近性来影 响转录。通过核心组蛋白的乙酰化状况来调节核小体的完整性。在低乙酰 化状态下，核小体是紧密结合的，因此不能转录。另一方面，通过核心组 蛋白的乙酰化松弛核小体，结果可以进行转录。组蛋白的乙酰化状态由组 蛋白乙酰转移酶(HAT)和组蛋白脱乙酰基转移酶(HDAC)的活性的平衡来 控制。近来，已经发现HDAC抑制剂在几种类型的癌细胞，包括结肠癌、 T-细胞淋巴瘤和红白血病细胞中抑制生长和编程性细胞死亡。在编程性细 胞死亡是癌症发展的关键因素的条件下，作为编程性细胞死亡的有效诱导 剂，HDAC抑制剂是治疗癌症的有前途的药剂(Koyama，Y.，等，Blood 96 (2000)1490-1495)。

我们现在发现，某些噻吩异羟肟酸衍生物的对映异构体显示出改进抗细胞 增殖活性和HDAC抑制活性，并且意外地显示出改进的物理化学和药物动力 学性能，如较好的溶解性和改进的血浆稳定性。

本发明的目的是提供新的式I的噻吩异羟肟酸衍生物的(R)-和(S)对映异构 体，及其药用盐，上述化合物的制备，含有它们的药物和它们的制造，以及上 述化合物在疾病控制或预防中的应用，该疾病特别是如上所述的疾病和病症， 或在制备相应的药物中的应用。

在这里使用的术语“烷基”意思是一种直链或支链烃基团，含有从1到8， 优选从1到6个碳原子，如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基， 仲丁基，叔丁基，正戊基，正己基，正庚基以及它们的异构体。

术语“链烯基”意思是一种如上定义的不饱和烷基链，含有一或两个孤立 双键，优选一个双键。例如1-丙烯基，2-丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，1-戊 烯基或1-己烯基。

在这里使用的术语“芳基”指苯基或萘基，如1-萘基，2-萘基或3-萘基。

术语“杂芳基”意思是一种5到10元环的，单-或二环的芳族环，其含有 的环可达到3，优选1或2个杂原子，其独立地选自N，O或S，并且环上剩 余的原子是碳原子。此类杂芳基的例子是噻吩基，呋喃基，吡咯基，咪唑基， 吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基，三嗪基，噻吩基，吡唑基，噁唑基，异噁 唑基，噻唑基，异噻唑基，噻二唑基，噁二唑基，三唑基，吲哚基，喹啉基， 异喹啉基，苯并呋喃基。

在这里使用的术语“卤素”指氟，氯，溴或碘。

本发明的一个实施方案是式I的(R)-和(S)对映异构体及其生理上可接受的 盐，其中

Ar是芳基或噻吩-2-基基团，其任选地被以下基团取代1或2次；

卤素；

苯基；

烷基；

-O-烷基；

-O-(CH2)n-O-；

-OH；

-NO2；

-NH2；

-NH-烷基；

-N(烷基)2；

-NH-C(O)-烷基；

-SO2烷基；

-SO2NH2：

-SO2NH-烷基；

-SO2N(烷基)2；

-C(O)-NH2；

-C(O)-NH-烷基；

-C(O)-N(烷基)2；

-C(O)-烷基；

R1是氢；或

烷基，其任选地被以下基团取代：

卤素；

-OH；

-NO2；

-NH2；

-O-烷基；

-O-芳基；

-NH(烷基)；

-N(烷基)2；

吗啉代；

4-甲基哌嗪基；或

芳基；

R2是烷基或氢；

n是1，2或3。

此类(R)对映异构体是，例如：

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-噻吩-2-基-乙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(5-甲基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}，或

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺-5-[(1-联苯基-4-基-乙基)-酰胺]。

此类(S)对映异构体是，例如：

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-噻吩-2-基-乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺-5-{[1-(5-甲基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}，或

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-联苯基-4-基-乙基)-酰胺]。

本发明的另一个实施方案是式I的(R)-和(S)对映异构体及其生理上可接受 的盐，其中

Ar是苯基，其被以下基团取代一次：

卤素；

烷基；

-O-烷基；

-OH：

-NH2；

-NH-烷基；

-N(烷基)2；

-NH-C(O)-烷基；

-SO2烷基；

-SO2NH2；

-SO2NH-烷基；

-SO2N(烷基)2；

-C(O)-NH2；

-C(O)-NH-烷基；

-C(O)-N(烷基)2；

-C(O)-烷基；

R1是氢；或烷基；

R2是氢。

此类(R)对映异构体是，例如：

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-对甲苯基-乙基)-酰胺]， 

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氟-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氯-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-溴-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(3-甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺}，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺}，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-酰胺}，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-叔丁基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-甲磺酰基-苯基)-乙基]-酰胺}，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氨基甲酰基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺， 或

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-({1-[4-(3-甲基-丁基氨基甲酰基)-苯基]- 乙基}-酰胺)。

此类(S)对映异构体是，例如：

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-对甲苯基-乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氟-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氯-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-溴-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(3-甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺}，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺}，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-酰胺}，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-叔丁基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-甲磺酰基-苯基)-乙基]-酰胺}，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氨基甲酰基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺， 或

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{1-[4-(3-甲基-丁基氨基甲酰基)-苯基]-乙 基}-酰胺)。

本发明的又一个实施方案是式I的(R)-和(S)对映异构体及其生理上可接受 的盐，其中

Ar是苯基；

R1是苯基；或

烷基，其任选地被以下基团取代：

卤素；

-OH；

-NH2；

-O-烷基；

-O-芳基；

-NH(烷基)；

-N(烷基)2；

吗啉基；

4-甲基哌嗪基；

苯基；

R2是氢或烷基。

此类(R)对映异构体是，例如：

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-乙基)-酰胺]

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-丙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-羟基-1-苯基-乙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-羟基-1-苯基-丙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲氧基-1-苯基-乙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-二甲基氨基-1-苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-2-吡咯烷-1-基-乙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-吗啉-4-基-1-苯基-乙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(1，2-二苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-戊基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-丁基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲基-1-苯基-丙基)-酰胺]，或

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-甲基-1-苯基-丁基)-酰胺]。

此类(S)对映异构体是，例如：

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-丙基)酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-羟基-1-苯基-乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-羟基-1-苯基-丙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲氧基-1-苯基-乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-二甲基氨基-1-苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(1-苯基-2-吡咯烷-1-基乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[2-吗啉-4-基-1-苯基-乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(1，2-二苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-戊基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-丁基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲基-1-苯基-丙基)-酰胺]，或

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-甲基-1-苯基-丁基)-酰胺]。

本发明的另一个实施方案是式I的(R)-和(S)-对映异构体，其中

Ar是萘基；

R1和R2独立地是

氢；

烷基-或链烯基，其可以是未取代的或被以下基团取代一次或数次：

烷基；

卤素；

-OH；

-NO2；

-NH2；

-O-烷基；

-O-芳基；

-NH(烷基)；

-N(烷基)2。

此类(R)-对映异构体，例如：

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-萘-1-基-乙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-萘-2-基-乙基)-酰胺]。

此类(S)-对映异构体，例如：

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-萘-1-基-乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-萘-2-基-乙基)-酰胺]。

本发明的另一个实施方案是式I的(R)-和(S)-对映异构体及其生理上可接 受的盐，其中

Ar和R1一起形成四氢萘基；

2，3-二氢化茚基；或

二苯并环庚烷基；

其全部任选地被以下基团取代：

烷基；

卤素；

-OH；

-NO2；

-NH2；

-O-烷基；

-O-芳基；

-NH(烷基)；

-N(烷基)2；

R2是氢。

此类(R)-对映异构体，例如：

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(2，3-二氢化茚)-1-基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1，2，3，4-四氢-萘-1-基)-酰胺]。

此类(S)-对映异构体，例如：

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(2，3-二氢化茚)-1-基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1，2，3，4-四氢-萘-1-基)-酰胺]。

本发明还有另一个实施方案是式I的(R)-和(S)-对映异构体及其生理上可 接受的盐，其中

Ar可以是未取代的或被以下基团取代1，2或3次的杂芳基：

卤素；

苯基；

烷基；

-O-烷基；

-O-苯基；

-O-(CH2)n-O-；

-OH；

-NO2；

-NH2；

-NH-烷基；

-N(烷基)2；

-NH-C(O)-烷基；

-SO2烷基；

-SO2NH2；

-SO2NH-烷基；

-SO2N(烷基)2；

-C(O)-NH2；

-C(O)-NH-烷基；

-C(O)-N(烷基)2；或

-C(O)-烷基；

R1是氢；

苯基，烷基或链烯基，其可以是未取代的或被以下基团取代一次或数次：

卤素；

-OH；

-NO2；

-NH2；

-O-烷基；

-O-芳基；

-NH(烷基)；

-N(烷基)2；

吗啉代；

4-甲基哌嗪基；或

芳基；或

R1与Ar-基团一起形成四氢萘-，1，2-二氢化茚-或二苯并环庚烷环；

R2是氢或烷基；

n是1，2或3。

本发明还有另一个实施方案是式I的(R)-和(S)-对映异构体及其生理上可 接受的盐，其中

Ar可以是未取代的或被以下基团取代1，2或3次的杂芳基：

卤素；

苯基；

烷基；

-O-烷基；

-O-苯基；

-O-(CH2)n-O-；

-OH；

-NO2；

-NH2；

-NH-烷基；

-N(烷基)2；

-NH-C(O)-烷基；

-SO2烷基；

-SO2NH2；

-SO2NH-烷基；

-SO2N(烷基)2；

-C(O)-NH2；

-C(O)-NH-烷基；

-C(O)-N(烷基)2；或

-C(O)-烷基；

R1是氢；

R2是烷基；

n是1，2或3。

本发明还有另一个实施方案是式I的(R)-和(S)-对映异构体及其生理上可 接受的盐，其中

Ar是苯并呋喃-2-基；

异噁唑-3-基；

吡啶-2-基；

吡啶-3-基；

吡啶-4-基；

呋喃-2-基；

吡咯-3-基；其全部可以是未取代的或被以下基团取代1或2次：

苯基；或

烷基；

R1是氢；和

R2是烷基。

此类(R)-对映异构体，例如：

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(1-苯并呋喃-2-基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(5-苯基-异噁唑-3-基)-乙基]-酰胺}，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-2-基-乙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-呋喃-2-基-乙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-3-基-乙基)-酰胺]，

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)-乙基]-酰胺}， 或

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-4-基-乙基)-酰胺]。

此类(S)对映异构体，例如：

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(1-苯并呋喃-2-基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(5-苯基-异噁唑-3-基)-乙基]-酰胺}，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-2-基-乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-呋喃-2-基-乙基)酰胺，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-3-基-乙基)-酰胺]，

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)-乙基]-酰胺}， 或

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-4-基-乙基)-酰胺]。

本发明还有另一个实施方案是式I的(R)-和(S)-对映异构体，其中

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-苯氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺和

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-苯氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺。

本发明还有另一个实施方案是式I的(R)-和(S)对映异构体的立体选择性的 制备方法，该方法通过在适当的活化剂的存在下将式III的化合物与对映异构 体纯的式III-A的(R)-或(S)-胺反应

其中R3是甲基；

                    Ar-C(R1)(R2)-NH2             III-A，

其中Ar，R1和R2具有以上定义的含义，

得到式II的化合物

它用羟胺或它的盐酸盐处理，分别得到式I的对映异构体纯的化合物；并 且如果需要，转化所述化合物为它的药用盐。

式I的化合物，或它的药用盐，可以通过使用任何公知的、化学上相关化 合物的制备方法制备。此类方法，当用于制备一种式I的噻吩异羟肟酸衍生物 或它的一种药学上可接受的盐时，作为本发明的另一特征提供，并通过以下代 表性的实施例说明，其中，除非另有说明，Ar，R1和R2具有任何如上定义的 含义。必需的起始原料可以通过有机化学的标准程序获得。此类起始原料的制 备伴随非-限制性的实施例而被描述。另外，必需的起始原料可通过那些有机 化学普通技术说明的类似程序获得。

(a)一个优选的制备式I的化合物方法包括使式II的化合物与羟胺在适当碱 的存在下反应，

其中Ar，R1和R2具有如上定义的含义，并且R3是一种(C1-C4)的烷基， 优选甲基或乙基。反应是在惰性溶剂或稀释剂如甲醇或乙醇中，温度0℃和 100℃之间，方便地在或接近环境温度下进行，pH在10和12之间。一种合适 的碱是，例如，一种醇化物，例如，甲醇钠。并不是在原位产生羟胺，它可以 被独立地释放和可以作为有机溶剂的溶液中使用，至于例子醇，如甲醇或乙醇。

式II的化合物从式III的化合物制备，其中R3具有如上定义的含义。

这些反应典型地包括一种两步一罐程序(two-step one-pot)。第一步，活化 式III的羧酸酯。反应是在一种惰性溶剂或稀释剂，例如，在二氯甲烷，二噁 烷，或四氢呋喃中进行，其中存在活化剂。一种合适的反应性酸的衍生物是， 例如，一种酰卤，例如一种由酸和一种无机酰基氯反应形成的酰氯，例如亚硫 酰氯；一种混合酐，例如一种由酸和氯甲酸酯，如氯甲酸异丁酯，反应形成的 酸酐；一种由酸和一种苯酚如五氟苯酚反应形成的活性酯类；一种由酸和N- 羟基苯并三唑反应形成的活性酯类；相应的羰基咪唑到III由酸和N，N′-羰基二 咪唑反应形成；一种由酸和一种叠氮化物，如联苯基磷酰叠氮化物反应形成的 酰叠氮；一种由酸和一种氰化物，如二乙基磷酰基氰化物反应形成的酰基氰； 或酸和一种碳化二亚胺，如二环己基碳二亚胺的反应产物，或酸和双-(2-氧代 -3-噁唑烷基)-磷酰基氯的反应产物。反应在-30℃和60℃之间进行，方便地在 低于0℃。第二步，一种对映异构体纯的式Ar-C(R1)(R2)-NH2的胺，其中R1 和R2具有如上定义的含义，在活化温度加入到溶液中，温度慢慢调节到环境 温度。一种合适的清除剂碱，如三乙胺，或二异丙基乙胺可以被加到反应混合 物中。这些方法是本领域技术人员熟悉的方法。原则上，在肽的化学中，用于 酰胺合成的所有方法，被描述在，如Houben-Weyl，″Methoden der organischen Chemie″，Vols.XV/1和XV/2，Georg Thieme Verlag，Stuttgart，均可以应用。

式III的化合物在文献，如US 2,680,31和J.Heterocycl.Chem.28(1991)17 中作为实施例被描述。这些单酯通常是选择性皂化该二酯类或氧化该相应醛而 制备，但是也可以用其它本领域人员熟悉的方法。

对映异构体纯的式Ar-C(R1)(R2)-NH2的胺，其中R1和R2具有如上定义 的含义，是市场上可买到的或可以通过，如J.Am.Chem.Soc.64(1942)477；J. Am.Chem.Soc.105(1983)1578；或Hanano，T.，等，Bioorg.Med.Chem.Lett.10 (2000)881-884中描述的合成化学标准程序而制备。式Ar-C(R1)(R2)-NH2的外 消旋胺，其中R1和R2具有如上定义的含义，可以单独的由已知的方法分离 成它们的对映异构体，例如，在Rasor，P.，和Voss，E.，Applied Catalysis A 221 (2001)145-158和Iglesias，L.E.，等，Tetrahedron：Asymmetry 8(1997)2675-2677 中描述的外消旋物的酶分离。

(b)另一个用于制备式I的化合物的优选方法是式IV化合物的脱保护反应

其中Y是一种合适的保护基并且Ar，R1和R2具有如上定义的含义。

式IV的化合物是新的并包括在本发明内。

合适的保护基可以是苄基-，对甲氧苯甲基-，叔丁氧羰基-，三苯甲基-， 或甲硅烷基基团，如三甲基甲硅烷基-或二甲基-叔丁基甲硅烷-基团。反应的进 行取决于保护基的类型。当保护基是一种苄基-或对甲氧苯甲基基团，反应是 一种在惰性溶剂如醇，如甲醇或乙醇中的氢解进行，该反应在环境温度和压力 下，存在一种贵金属催化剂，如钯，附在一种合适的载体，如碳，硫酸钡，或 碳酸钡上。当保护基是叔丁氧羰基，三苯甲基，或一种甲硅烷基基团，如三甲 基甲硅烷基-或二甲基-叔丁基甲硅烷基，反应是在存在酸，温度-20℃和60℃ 之间，优选在0℃和环境温度之间进行。酸可以是氢氯酸溶于一种惰性溶剂的 溶液，如二乙醚或二噁烷的溶液，或三氟乙酸溶于二氯甲烷。当保护基是一种 甲硅烷基基团，如三甲基甲硅烷基或二甲基叔-丁基甲硅烷基团，反应还可以 是在存在一种氟化物源，如氟化钠或四丁基胺氟化物溶于一种惰性溶剂，如二 氯甲烷中进行。不必要所有的保护基Y适合所有的R1或R2基团。在一些情 况下不允许使用一定的保护基，需要使用其它保护基Y或其它制备方法。

式IV化合物是由式V化合物与式VI化合物反应获得的。

其中Y是一种合适的如上所述的保护基。这些反应典型地包括一种两步 一罐程序。第一步，活化结构式V的羧酸酯。该反应是在一种惰性溶剂或稀释 剂，例如，在二氯甲烷，二噁烷，或四氢呋喃中进行，其中存在活化剂。一种 合适的反应性酸的衍生物是，例如，一种酰卤，例如一种由酸和一种无机酰基 氯反应形成的酰氯，例如亚硫酰氯；一种混合酐，例如一种由酸和氯甲酸酯， 如氯甲酸异丁酯，反应形成的酸酐；一种由酸和一种苯酚如五氟苯酚反应形成 的活性酯类；一种由酸和N-羟基苯并三唑反应形成的活性酯类；一种由酸和 一种叠氮化物，如联苯基磷酰叠氮化物反应形成的酰叠氮；一种由酸和一种氰 化物，如二乙基磷酰基氰化物反应形成的酰基氰；或酸和一种碳化二亚胺，如 二环己基碳二亚胺的反应产物，或酸和双-(2-氧代-3-噁唑烷基)-磷酰基氯的反应 产物。反应在-30℃和60℃之间进行，方便地在低于0℃。在第二步，在活化 温度下将化合物VI加入到溶液中，并且温度被慢慢地调节到环境温度。这些 方法是本领域技术人员熟悉的方法。原则上，在肽的化学中，用于酰胺合成的 所有方法，被描述在，如Houben-Weyl，″Methoden der organischen Chemie″， Vols.XV/1 and XV/2均可使用。

结构式V化合物由式II化合物水解而制备。进行的水解条件取决于基团 R3的性质。当R3是一种甲基或乙基，反应在存在碱的条件下进行，例如，氢 氧化锂，氢氧化钠，或氢氧化钾溶于一种惰性溶剂或稀释剂，例如，甲醇或乙 醇。当R3是叔丁基，反应在存在酸的条件下进行，例如，氢氯酸溶于一种惰 性溶剂如二乙醚或二噁烷的溶液，或三氟乙酸溶于二氯甲烷。当R3是苄基， 反应在存在一种贵金属催化剂，如钯或铂，附在一种合适的载体，如碳上的条 件下进行氢解反应。不一定所有的水解方法均适合R1和R2基团。如果这些 基团的特征不允许使用特定的水解方法，需要使用其它制备方法。

(c)另一个优选的制备式I化合物的方法是式V化合物与羟胺的反应。这 些反应典型地包括一种两步一罐程序。第一步，活化结构式V的羧酸酯。该反 应是在一种惰性溶剂或稀释剂，例如，在二氯甲烷，二噁烷，或四氢呋喃中进 行，其中存在活化剂。一种合适的反应性酸的衍生物是，例如，一种酰卤，例 如一种由酸和一种无机酰基氯反应形成的酰氯，例如亚硫酰氯；一种混合酐， 例如一种由酸和氯甲酸酯，如氯甲酸异丁酯，反应形成的酸酐；一种由酸和一 种苯酚如五氟苯酚反应形成的活性酯类；一种由酸和N-羟基苯并三唑反应形 成的活性酯类；一种由酸和一种叠氮化物，如联苯基磷酰叠氮化物反应形成的 酰叠氮；一种由酸和一种氰化物，如二乙基磷酰基氰化物反应形成的酰基氰； 或酸和一种碳化二亚胺，如二环己基碳二亚胺的反应产物，或酸和双-(2-氧代 -3-噁唑烷基)-磷酰基氯的反应产物。反应在-30℃和60℃之间进行，方便地在 低于0℃。第二步，在活化温度下羟胺加入到溶液中，并且温度被慢慢地调节 到环境温度。这些方法是本领域技术人员熟悉的方法。原则上，在肽的化学中， 用于酰胺合成的所有方法，被描述在，如Houben-Weyl，″Methoden der organischen Chemie″，Vols.XV/1 and XV/2均可使用。

(d)又一个优选的制备式I化合物的方法是根据方法(a)，(b)，(c)或(e)合成的 外消旋化合物应用于式Ar-C(R1)(R2)-NH2的外消旋胺，其中R1和R2具有如 上定义的含义。该外消旋物可以分离成两种对映异构体，在最终产品或式II 的前体的任一阶段。分离可以通过一种分析性的、半制备的或制备级的色谱法 进行，使用合适的旋光固定相和合适的洗脱剂。合适的旋光固定相包括，但不 限于，硅石(如ChiraSper，Merck；Chiralpak OT/OP，Baker)，纤维素酯或氨基甲 酸酯类(如Chiracel OB/OY，Baker)或其它(如Crownpak，Daicel或Chiracel OJ-R， Baker)。其它可以使用的用于对映异构体分离的方法，同样由式I的化合物和 其它旋光化合物形成非对映的化合物，如樟脑磺酸或番木鳖碱，在脱离旋光试 剂之后，这些非对映的化合物被分离。

(e)式I的化合物还可以通过固相支持合成方法制备。2，5-噻吩二羧酸与和 树脂结合的羟胺(-O-NH2)部分反应，如一种王氏树脂(Wang-O-NH2树脂，由 EMC microcollections，Tübingen供应)形成结合树脂的异羟肟酸。第二碳酸结构 部分与胺Ar-C(R1)(R2)-NH2通过如Houben-Weyl，″Methoden der organischen Chemie″，Vols.XV/1和XV/2中描述的形成酰胺键的标准方法反应。此后，异 羟肟酸从固体载体中释放出来。这些可以例如用TFA完成。典型地，异羟肟 酸的裂解是通过环境温度下，存在三异丙基硅烷时，在二氯甲烷中用50％TFA 处理树脂获得。如有必要，粗产物可以通过LC-MS提纯。

本发明的化合物可以以它们的药用盐形式存在。术语“药用盐”指常规的 酸-加成盐或碱-加成盐，保留式I化合物的生物有效性和性能，并形成自合适 的、非毒性的有机或无机酸，或有机或无机碱。酸-加成盐的例子包括那些源 自无机酸，如氢氯酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸和硝酸，和那 些源自有机酸，如对甲苯磺酸酸，水杨酸，甲磺酸，草酸，琥珀酸，柠檬酸， 苹果酸，乳酸，富马酸，等等。碱加成盐例子包括那些源自铵，钾，钠和季铵 氢氧化物，例如，氢氧化四甲铵。药物化合物(也就是一种药物)的化学改性 成盐是药物化学工作者公知的技术，得到化合物改进的物理和化学稳定性，吸 湿性，流动性和溶解性。参见，如Ansel，H.，等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，6th ed.，1995，pp.196和1456-1457。

本发明的一个目的是药物组合物，含有药理学有效量的一种或多种式I的 对映异构体纯的化合物，其与药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂混合。

本发明的另一方面是提供一种药物，含有一种或多种对映异构体纯的式I 化合物作为活性成分和药学上可接受的辅药。此类药物或药物组合物可能以一 种适合口服的形式，例如作为片剂，包衣片剂，糖锭剂，胶囊剂，溶液乳剂 或混悬剂；作为无菌溶液，混悬剂或乳剂用于胃肠外的注射(包括静脉内，皮 下的，肌内，血管内的或输注)；作为一种软膏或乳膏用于局部给药或作为栓 剂用于直肠的给药。这些药物制剂可以通过加工本发明化合物与药学惰性的无 机或有机载体获得。例如，乳糖，玉米淀粉或它的衍生物，滑石，硬脂酸或它 的盐等均可被用作片剂，包衣片剂，糖锭剂，和硬明胶胶囊的载体。软明胶 胶囊的合适载体为，例如，植物油，蜡，脂肪，半固体和液体多元醇等等。然 而，取决于活性物质的性质在软明胶胶囊的情况下通常不需要载体。用于生产 溶液和糖浆剂的合适载体为，例如，水，多元醇，甘油，植物油等等。栓剂的 合适载体为，例如，天然的或硬化油，蜡，脂肪，半液体的或液体多元醇等等。

另外，药物制剂可以含有防腐剂，增溶剂，稳定剂，润湿剂，乳化剂，甜 味剂，着色剂，调味剂，用于改变渗透压的盐，缓冲剂，掩蔽剂或抗氧化剂。 它们还可以含有其它在治疗上有价值的物质。

一种优选的药物制剂，可以通过使用下列片剂配方获得：

项目           成分                      Mg/片

1              化合物1                   25        100

2              无水乳糖                  73        35

3              交联羧甲纤维素钠          6         8

4              聚乙烯基吡咯烷酮K30       5         6

5              硬脂酸镁                  1         1

               总重量                    140       150

步骤：

1、在一种合适的混合器中混合1，2和3项15分钟。

2、使步骤1的混合物粉末与20％聚乙烯基吡咯烷酮K30溶液(项目4) 成粒。

3、在50℃干燥来自步骤2的颗粒。

4、步骤3的颗粒通过一种合适的磨碎设备。

5、加项目5到步骤4中磨碎了的颗粒里并混合3分钟。

6、在合适的压力下，压缩步骤5的颗粒。

化合物1在实施例1中描述。

另一个优选的药物制剂是一种本发明化合物的微混悬剂。为获得该微混悬 剂，使用下列材料：

每注射剂(溶解，用一种孔隙尺寸0.45μm过滤并高压灭菌)的7.5％改性凝 胶XF 20(Braun)的水溶液，过滤器(定做的，筛目尺寸100μm)，过滤支架，连 接，洗过的一种直径0.25mm的玻璃珠并且热消毒Retsch磨碎机。

为制备一批典型的6244mg的化合物1，如实施例1描写，两个50ml烧 瓶中加入30g重量的玻璃珠，用一种刮刀和涡旋分散。然后10ml凝胶载体被 加入到每一瓶子。该瓶子被涡旋，包裹铝箔避光保护。在一种Retsch磨碎机中， 内容物质以30/s被磨碎14小时。然后微混悬剂从珠粒中提取并在过滤支架上 双层过滤(100μm)，连接到一个接受瓶，通过两分钟内离心400g，并且包括六 次洗涤步骤，得到最终容积为130ml。

均化后，该内容物质由HPLC测定为45.7mg/ml，相应产率为95％。微混 悬剂用18.6ml稀释得到最终浓度为40mg/ml。获得的球形、粒状颗粒，通过 显微镜测定，显示直径在1和5μm之间。为了储存，将微混悬剂加入消毒的 小瓶，加盖，标记并保存在-20℃。使用前，微混悬剂必须剧烈涡旋均匀。

该噻吩异羟肟酸衍生物通常以5-5000mg/平方米动物的体表面积，即约 0.1-100mg/kg的单位剂量对温血动物给药，这通常提供了治疗有效的剂 量。单位剂量形式如片剂或胶囊通常包含例如1-250mg的活性成分。优 选地，使用1-100mg/kg的日剂量。然而，依据所治疗的宿主、具体的给 药路径和所治疗的疾病的严重程度，必然需要改变日剂量。因此，最佳剂 量可以由治疗任何具体患者的医师来决定。

为显示本发明化合物的活性，它们对人结肠癌细胞系的影响使用一种标准 MTT分析评价。MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物)广泛 地用于细胞毒性效应或体外肿瘤细胞化学敏感性的定量测定。该分析基于通过 代谢的活细胞将黄色四唑鎓盐(MTT)裂解为紫色甲(formazan)晶体。详细 参见，Rubinstein，L.V.，等，J.Natl.Cancer Inst.82(1990)1113。

我们操作如下：HT-29细胞(人结肠癌细胞系)培养在RPMI 1640，2.5％ FCS，2mM谷氨酰胺，100u/ml青霉素，100ug/ml链霉素中。对于测定在相 同的培养基中将细胞接种到384孔板中，每孔900个细胞。第二天，化合物(在 二甲亚砜溶解的10mM)以30uM-1.5nM的各种浓度加入。5天后，主要根据 厂家(细胞增扩增试剂盒I，MTT，来自Roche Molecular Biochemicals)说明书， 做MTT分析。简言之：在37℃，5％CO2，MTT标记试剂加入到0.5mg/ml的 终浓度，温育4小时。在这个温育期间，形成紫色甲晶体。在加入增溶作 用的溶液(20％十二烷基磺酸钠溶于0.02M HCl)后，该板在37℃，5％CO2下， 温育过夜。小心混合后，该板在550nm，用Victor 2(扫描多孔分光光度计，Wallac) 测量。

在样品中，减少活细胞数量导致总的代谢活性降低。该降低与由紫色甲月 替晶体溶解作用产生的紫色的量直接相关。使用XL-拟合完成IC50的测定。

对照化合物是US专利5,369,108的化合物3。

  本发明的化合物 IC50HT29384[μM]   对照化合物   1.27   实施例2f   0.01   实施例8e   0.01   实施例8d   0.03   实施例2e   0.04   实施例10f   0.04   实施例8f   0.04   实施例2c   0.05   实施例2i   0.05   实施例7   0.06   实施例2g   0.06   实施例2h   0.07   实施例2d   0.08   实施例4l   0.16   实施例1   0.17   实施例2b   0.17   实施例2a   0.19   实施例2m   0.30   实施例10d   0.35   实施例2n   0.35   实施例9   0.52   实施例4i   0.56   实施例10e   0.58   实施例2l   0.58   实施例8c   0.63   实施例4n   0.77   实施例4g   0.78   实施例4a   0.84   实施例4c   0.84   实施例4d   0.88   实施例4f   0.92

为进一步说明本发明的化合物作为HDAC抑制剂的活性，它们影响组蛋 白脱乙酰基酶抑制作用被评价，使用下列生物化学猝灭(quench)分析：

组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)的功能是赖氨酸在如组蛋白H4的脱乙酰化作 用。一种源自组蛋白H4的17个氨基酸的肽用TAMRA在C端，和QSY-7在 N-末端标记，用作底物(组蛋白H4-QSY7的TAMRA-最初17aa)。随着HDAC 的脱乙酰作用，酶Lys C能够切割赖氨酸后的肽。这些导致猝灭效应的丧失和 高的荧光信号。化合物的HDAC抑制导致低的信号，因为Lys C不能切割底物 并且猝灭效应持续。

对于剂量响应曲线，以1∶3稀释稀释10个浓度，起始为30uM。10ul 稀释化合物投入到384孔板的每一孔中。加入10ul HDAC(重组体HDAC-1， 从HEK 293细胞纯化得到；酶活性必须对每个制剂分别评估)。加入10ul肽底 物(1uM终浓度，源自1mM贮备溶液在试验缓冲液中1∶1000稀释)。在室温 下温育90分钟后，加入20ul试验缓冲液停止反应，试验缓冲液包括3ug/ml Lys C和0.075％十二烷基磺酸钠。过夜温育后，TAMRA的荧光信号被测量(Victor 2，来自Wallac，吸收544nm，发射590nm)。二甲亚砜处理的对照孔的O.D. 为100％，化合物处理的孔的抑制作用％相对于100％计算。以10个浓度为基 准，通过使用XL-fit3产生一条IC50曲线。

使用的试验缓冲液：10mM HepespH8，10mMNaCl，10％甘油，0.005％ Triton X100，0.1mM EDTA，0.1mM TCEP的混合物。作为板，使用的是384孔 板(黑色，Greiner，781077)。

对照化合物是US专利5,369,108的化合物3。

  本发明化合物  IC50 HDAC猝灭分析[nM]   对照化合物   12.10   实施例10f   0.58   实施例4n   0.80   实施例8e   1.08   实施例2g   1.18   实施例8d   1.26   实施例2h   1.31   实施例8f   1.33   实施例2m   1.38   实施例10e   1.39   实施例7   1.66   实施例2e   1.73   实施例4h   1.79   实施例2i   1.79   实施例10c   1.94   实施例4i   2.60   实施例10d   2.69   实施例2n   2.86   实施例4m   2.97   实施例2l   3.17   实施例4g   3.19   实施例1   3.40   实施例2a   3.41   实施例2c   3.44   实施例9   3.82   实施例2d   3.88   实施例4l   4.04   实施例8c   4.27   实施例2f   4.97   实施例2b   4.98

使用下列体内试验，获得用于支持本发明化合物活性的补充数据：

测定携带肿瘤的小鼠的组蛋白H3的乙酰化水平

HT-29细胞系衍生自人的结肠腺癌，并从ATCC获得，保存在药物学使用 的细胞库里。细胞在RPMI1640/2mM L-谷氨酰胺培养基中培养，补充有10％ 热失活的FCS。为了接种从培养瓶中去除HT29肿瘤细胞(胰蛋白酶-EDTA，50 U/mg)并转移入培养基(RPMI 1640，10％热失活的FCS)，洗涤并再悬浮在消毒 的PBS中，得到最终的细胞浓度为5×106/100μl。细胞悬液小心地通过规则的 摇振混合，避免细胞聚集，并加入到一个1.0ml刻度注射器中。HT29人结肠 癌细胞(5×106/100μl)s.c.接种在NMRI裸鼠腹部乳房区域的右上面四分之一处 后，动物被每周观察2-3次，直到异种移植物达到粗略地1000mm3体积或更多， 足以进行组蛋白乙酰化的分析。实施例1单个i.p.施用400mg/kg后，在7.5％ 改性明胶与0.22％NaCl溶液中配制成微混悬剂，各组动物分别给药3，6，12， 和24h后被处死。切除肿瘤用于乙酰化的组蛋白(H3)分析。等分量的肿瘤(大 约200mg)用于分析乙酰化的H3。组蛋白使用标准化方法(Richon，V.M.，等， PNAS 97(2000)10014-10019；Yoshida，M.，等，J.Biol.Chem.265 (1990)17174-17179)从异种移植物中提取，分离，并且乙酰化的H3通过Slot Blot 和Immuno Blot技术(SB-IB，Bio-Rad Laboratories GmbH，Munich，Germany)鉴 定，使用抗-乙酰化-H3Pabs(UpState Biotechnology，Cat.#06-599)。组蛋白蛋白 质被测定(Pierce试剂盒)并调节到3mg/ml，应用一种标准化量的1μg的组蛋 白蛋白在SB-IB中进行H3分析。乙酰化H3的量是由ECL(Enhanced Chemo Luminescence，Amersham Pharmacia，HybondTM ECLTM硝化纤维薄膜)测量生物 发光和Lumi-Imager仪器(Roche Diagnostics)测量完成。数据或表示为BLU/μg 组蛋白蛋白质(BLU＝生物发光单位)，或为载体对照的BLU百分数。在实施 例1单次给药后，明显的，乙酰化H3相对于载体对照组显著提高，能持续达 到24h。剂量给药6h后，乙酰化达到最大值。平均值和百分数改变的简要信息 描绘在下面。

  载体   3h   载体   6h   载体   12h   载体   24h  实施例1  3h  实施例1  6h  实施例1  12h  实施例1  24h   BLU/1μg   12409   19646   16868   15215  57824  98717  75378  40965   BLU％   100   100   100   100  466  502  447  269   P＝  0.002  0.002  0.002  0.041

在HCT116异种移植模型中测定抗肿瘤活性

HCT116细胞系(NCI系)源自于一种人的结肠腺癌，并保存在细胞库内。 细胞在RPMI1640/2mM L-谷氨酰胺培养基中培养，补充有10％热失活的FCS。 为了接种从培养瓶中移出HCT116肿瘤细胞(胰蛋白酶-EDTA，50U/mg)并转 入培养基(RPMI1640，10％热失活的FCS)，洗涤并再悬浮在无菌PBS中，得到 最终的细胞浓度为5×106/100μl。细胞悬液小心地通过规则的摇振混合，避免 细胞聚集并加入到一个1.0ml刻度注射器中。肿瘤细胞接种是在右侧腹上四分 之一处，轻微麻醉(安氟醚)下进行的，也就是说，在NMRI裸雄性小鼠的前腿 腋下与中间线区域之间。在这个区域5×106的HCT116肿瘤细胞在100μl体积 的PBS中被s.c.排出。全部过程在SPF条件，穿戴合适的衣服条件下进行。在 肿瘤细胞的s.c.接种后，可测量肿瘤在所有动物中发展。按照原发肿瘤的尺寸， 小鼠在第10天被分级和随机化。使用实施例1和WO 93/07148，WO 95/ 31977，US 5,369,108(‘108专利)中的化合物3作为试验品，进行21天的每日 口服。75只雄性NMRI裸鼠被分成5个研究组。每一组由15只雄性鼠组成。 每个组分别给入试验品，在7.5％改性明胶与0.22％NaCl溶液中配制为微混悬 剂，根据下列治疗流程，每日口服超过29天：3天治疗，2天停药，5天治疗， 2天停药，5天治疗，2天停药，5天治疗，2天停药，3天治疗。使用的体积 是10ml/kg。实施例1的口服剂量选择为50，100和200mg/kg，’108专利的化 合物3为200mg/kg。该治疗导致剂量依赖性的、显著的肿瘤重量抑制，在 200mg/kg，100mg/kg和50mg/kg组，肿瘤重量分别抑制87％，49％和40％。 与使用100mg/kg实施例1化合物的治疗组一样，’108专利的化合物3显示出 相似的结果(49％肿瘤重量抑制)。

在PC-3异种移植模型中测定抗肿瘤活性

PC-3前列腺癌细胞最初从NCI保藏中心获得，并在Roche cell bank Penzberg扩增后被保藏。肿瘤细胞系常规在含有10％FBS和2mm L-谷氨酰胺 的RPMI 1640培养基中，37℃，水饱和氛围，5％CO2中培养。传代培养通过 用胰蛋白酶/EDTA 1x(Roche Diagnostics)分离每周进行两次。细胞第3次传代用 于本发明研究。

在细胞注射的当天，细胞从培养瓶(Greiner T 75)中收获，转入50ml培养 基，洗涤一次并再悬浮于PBS。用另外的PBS洗涤，最终的细胞效价通过 Neubauer-Chamber测定。肿瘤细胞悬浮液(PBS)被小心的涡旋(减少细胞聚集) 并保存在冰中。将细胞悬液加入1.0ml注射器中。为产生原发肿瘤，在100μl 体积的PBS中2×106PC-3肿瘤细胞被皮下注入每一只小鼠(NMRI裸鼠)的右 侧。在肿瘤细胞的s.c.接种后，可测量肿瘤在所有动物中发展。按照原发肿瘤 的尺寸，小鼠在第10天被分级和随机化。使用实施例1和’108专利中的化合 物3作为试验品，进行15天的每日口服。90只雄性NMRI裸鼠被分成6个研 究组。每一组由15只雄性鼠组成。每个组被给入该试验品，在7.5％改性明胶 与0.22％NaCl溶液中的配制为微混悬剂，每日一次口服超过19天(5天治疗和 2天停药期，3个周期)。施用体积是10ml/kg。实施例1的口服剂量选择为25， 50，100，和200mg/kg和’108专利的化合物3为200mg/kg。肿瘤细胞注射后， 当载体组达到终点标准后，研究在第28天后终止。治疗15天后，产生剂量依 赖性的、显著的肿瘤重量抑制，相对于载体小组，100mg/kg和200mg/kg组的 肿瘤重量抑制分别为51％和81％。与使用100mg/kg实施例1化合物的治疗组 一样，’108专利的化合物3显示出相似的结果(53％肿瘤重量抑制)。实施例1 的25mg/kg和50mg/kg小组治疗肿瘤重量抑制分别为15％和36％。

本发明的一个实施方案是一种药物，如上定义，通过诱导肿瘤细胞中组蛋 白的乙酰化用于抑制所述肿瘤细胞增殖。

本发明的另一个实施方案是一种药物，如上定义，用于治疗造血和淋巴系 统瘤。

本发明还有另一个实施方案是一种药物，如上定义，用于治疗癌症。

本发明还有另外的实施方案是一种药物，在此如前定义，用于治疗结肠、 乳腺、肺、前列腺、直肠、胃、膀胱、胰腺或卵巢癌。

本发明的又一个实施方案是一种或多种对映异构体纯的式I化合物在制备 药物中的应用，所述药物通过诱导肿瘤细胞中组蛋白的乙酰化用于抑制所述肿 瘤细胞增殖。

本发明的又一个实施方案是一种或多种对映异构体纯的式I化合物在制备 用于治疗癌症的药物中的应用。

本发明的又一个实施方案是一种或多种对映异构体纯的式I化合物在制备 药物中的应用，所述药物用于治疗结肠、乳腺、肺、前列腺、直肠、胃、膀胱、 胰腺或卵巢癌。

本发明的又一个实施方案是一种或多种对映异构体纯的式I化合物在制备 用于治疗造血和淋巴系统瘤的药物中的应用。

本发明的又一个实施方案是用于抑制肿瘤细胞增殖的一种方法，该方法由 于向肿瘤细胞施用有效量的一种或多种对映异构体纯的式I化合物，诱导所述 肿瘤细胞中的组蛋白乙酰化。根据本发明这方面的另一个特征，提供一种在 需要这种治疗的温血动物，例如人，中产生抗细胞增殖作用的方法，其包 含对所述动物给药有效量的、如上文定义的对映异构体纯的噻吩异羟肟酸衍 生物。

因此本发明还有另一个实施方案为一种方法，如上定义，其中肿瘤是结肠、 乳腺、肺、前列腺、直肠、胃、膀胱、胰腺或卵巢癌。

根据本发明的一个更优选的方面，提供一种如上定义的对映异构体纯的式 I化合物，以通过治疗，在人或动物体的治疗方法中应用。我们现在发现本 发明的化合物具有抗细胞增殖性能，认为该性能是由于它们的组蛋白脱乙酰 转移酶抑制活性而产生的。因此，本发明的化合物提供了一种治疗恶性细 胞增殖的方法。根据本发明的对映异构体纯的化合物，预计通过提供一种抗 增殖作用用于治疗癌症，尤其治疗乳腺、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、 胰腺和卵巢癌。另外，预料本发明的衍生物具有抗一系列的白血病、淋巴 系统恶性肿瘤和实体瘤例如在组织如肝、肾、前列腺和胰腺组织中的癌和 肉瘤的活性。

上文定义的抗细胞增殖治疗可作为一种单独的治疗来应用，或除了本 发明的噻吩异羟肟酸衍生物以外，还可包括一种或多种其它抗肿瘤物质， 例如那些选自例如有丝分裂抑制剂如长春碱；烷基化剂如顺铂，卡铂和环 磷酰胺；微管组装抑制剂，如紫杉醇或其它紫杉烷类；抗代谢物类，如5- 氟尿嘧啶，卡培他滨，阿糖胞苷和羟基脲；或，例如，插入抗生素，例如 阿霉素和博来霉素；免疫刺激剂，如曲妥单抗；DNA合成抑制剂，如吉西 他滨；酶，如天冬酰胺酶；拓扑异构酶抑制剂，如依托伯苷；生物反应调 节物，如干扰素；和抗激素类，如抗雌激素类，如他莫昔芬，或例如抗雄 激素药类，如(4’-氰基-3-(4-氟苯基磺酰基)-2-羟基-2-甲基-3’-(三氟甲基)-N- 丙酰苯胺，或描述于例如Cancer：Principles & Practice of Oncology，Vincent， T.DeVita，Jr.，Samuel Hellmann，Steven A.Rosenberg；第五版， Lippincott-Raven Publishers(1997)的其它治疗剂和原则。这种联合治疗可 通过同时、顺次或分别给药治疗用的单独组分得以实现。依照本发明的这 个方面，提供了一种药品，其包含用于联合治疗癌症的如上文定义的式I 的噻吩异羟肟酸衍生物和如上文定义的另外的抗肿瘤物质。

在下述非限制性的实施例中将举例说明本发明，在所述实施例中，如 果未另外声明：

(i)通过在真空中旋转蒸发来进行蒸发，并且在通过过滤去除残余的固体如 干燥剂后进行加工程序；

(ii)在环境温度即18-25℃，在惰性气体如氩气或氮气气氛下进行操作；

(iii)在购自E.Merck，Darmstadt，德国的Merck Kieselgel二氧化硅或Merck Lichroprep RP-18反相二氧化硅上进行柱色谱(通过快速程序)和高压液 相色谱(HPLC)；

(iv)提供的产率仅是为了举例说明的目的而不必是所达到的最大值；

(v)使用Mettler SP62自动熔点仪，油浴仪或Kofler热板仪测量熔点；

(vi)通过核(通常是质子)磁共振(NMR)和质谱技术(利用APCI的 Micromass台式II仪或利用电雾化的Micromass台式ZMD)确认式I的终产 物的结构；

(Vii)通常不完全表征中间体，并且通过薄层色谱(TLC)评价纯度；

(viii)使用下述缩写：

CH2Cl2  二氯甲烷

CO2      二氧化碳

DMF        N，N-二甲基甲酰胺。

DMSO       二甲亚砜

HCl       盐酸

MeOH      甲醇

rt     室温

SDS    十二烷基磺酸钠

TFA    三氟乙酸

THF    四氢呋喃

mp     熔点

制备实施例

实施例1

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-乙基)-酰胺]

a)合成(R)-5-(1-苯基-乙基氨基甲酰基)-噻吩-2-羧酸甲酯

一种40g(215mmol)的噻吩-2，5-二羧酸甲酯的亚硫酰二氯(200ml)悬 浮液，回流处理约72小时(尾部HCl放出)。反应混合物冷却至室温，减压下 蒸发亚硫酰二氯，从起始原料生成中间体酰氯。(R)-1-苯乙胺(35.5ml，279 mmol)和三乙胺(150ml，1.07mol)的THF(320ml)溶液被冷却至-15℃，慢 慢地加入一种冷的(-15℃)酰氯的THF(400ml)溶液。在相同的温度下继续搅 拌1小时，升温到室温后另外搅拌16小时。过滤反应混合物，减压下蒸发 溶剂。残留物溶解于CH2Cl2中，水处理后，产物被分离，重结晶得到白色 固体(mp＝131-33℃)，83％产率(52g)。

b)合成(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-乙基)-酰胺]

中间体甲酯(35g，120mmol)溶于羟胺的甲醇(605ml，2M)溶液，随 后用氢氧化钾的甲醇溶液(105ml，1.15M)处理。溶液室温搅拌16小时，干 冰处理，减压下蒸发溶剂。固体残基悬浮于水并将pH值调节到9。冷却混 悬剂，过滤沉淀物，干燥，并用快速层析法纯化，使用乙酸乙酯/甲醇洗脱 剂，产出19.7g(56％)希望的浅棕色粉末产物(mp＝180℃)。备选地，产物可 以从甲醇中重结晶提纯。

实施例2

根据实施例1的制备方法，制备下列通式I的噻吩异羟肟酸衍生物，使 用相应(R)-构型的手性胺：

a)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-对甲苯基-乙基)-酰胺]，(mp＝ 189℃)；

b)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氟-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，(mp＝ 200℃)；

c)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氯-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，(mp＝ 195℃)；

d)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-溴-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，(mp＝ 209℃)；

e)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-萘-1-基-乙基)-酰胺]，(mp＝200℃)；

f)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-萘-2-基-乙基)-酰胺]，(mp＝200℃)；

g)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-丙基)-酰胺]，(mp＝ 190-195℃)；

h)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-酰基酰胺5-{[1-(3-甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺}，(mp ＝160℃)

i)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-酰基酰胺5-{[1-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺}，(mp ＝195℃)

j)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-羟基-1-苯基-乙基)-酰胺]；(mp＝ 215℃)

k)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-羟基-1-苯基-丙基)-酰胺]；

l)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲氧基-1-苯基-乙基)-酰胺]；(mp＝ 192℃)

m)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(2，3-二氢化茚)-1-基-酰胺，(mp＝183 ℃)；

n)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1，2，3，4-四氢萘-1-基)-酰胺]，(mp＝ 171℃)。

实施例3

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-对甲苯基-乙基)-酰胺]

a)合成(S)-5-(1-对甲苯基-乙基氨基甲酰基)-噻吩-2-羧酸甲酯 1.4g(7.5mmol)噻吩-2，5-二羧酸甲酯的CH2Cl2(5ml)溶液，用1.5ml(18 mmol)亚硫酰二氯和一滴DMF处理，随后在80℃加热1小时。溶剂和过量的 亚硫酰二氯减压下蒸发，残留物溶解在CH2Cl2(10ml)中，慢慢地用(S)-1-(对 甲苯基)乙胺(1.0g，7.4mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液和三乙胺(2ml，14.2 mmol)处理。另外室温搅拌1小时。在酸后处理后分离产物，重结晶得到黄 色固体(mp＝165℃)，71％产率(1.6g)。

b)合成(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-对甲苯基-乙基)-酰胺]

向一种羟胺的甲醇(15ml，2M)冷溶液中加入(S)-5-(1-对甲苯基-乙基 氨基甲酰基)-噻吩-2-羧酸甲酯(910mg，3mmol)，并随后加入另一氢氧化 钾的甲醇(4ml，0.75M)冷溶液。升温到室温后，溶液在此温度搅拌另外2 小时。然后混合物用干冰处理，过滤除去沉淀物，滤液减压下蒸发到干燥。 固体残留物用水彻底洗涤，过滤，干燥，从甲醇中重结晶得到640mg(70％) 希望的白色固体产物(mp＝189℃)。

实施例4

根据实施例3的制备方法，制备下列通式I的噻吩异羟肟酸衍生物，使 用相应(S)-构型手性胺：

a)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-乙基)-酰胺]；(mp＝198℃)

b)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氟-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，(mp＝ 199℃)；

c)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氯-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，(mp＝ 197℃)

d)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-溴-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺，(mp＝ 183℃)；

e)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-萘-1-基-乙基)-酰胺]，(mp＝ 167℃)；

f)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-萘-2-基-乙基)-酰胺]，(mp＝ 200℃)；

g)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-丙基)-酰胺]，(mp＝210℃)；

h)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(3-甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺)，(mp ＝170℃)；

i)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺}；(mp ＝190℃)

j)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-羟基-1-苯基-乙基)-酰胺]；(mp＝165 ℃)

k)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-羟基-1-苯基-丙基)-酰胺]；

l)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲氧基-1-苯基-乙基)-酰胺]；(mp＝ 189℃)

m)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(2，3-二氢化茚)-1-基-酰胺；(mp＝178 ℃)

n)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1，2，3，4-四氢萘-1-基)-酰胺]；(mp＝173 ℃).

实施例5

噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-噻吩-2-基-乙基)-酰胺]

a)合成5-(1-噻吩-2-基-乙基氨基甲酰基)-噻吩-2-羧酸甲酯

500mg(2.7mmol)噻吩-2，5-二羧酸甲酯的CH2Cl2(20ml)溶液，被617 mg(4mmol)1-羟基苯并三唑水合物和772mg(4mmol)N′-(3-二甲基氨基丙 基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐处理，环境温度下继续搅拌1小时。410mg(3.2 mmol)的1-噻吩-2-基-乙胺加入到反应混合物中，随后环境温度下搅拌过 夜。酸处理后，产物被分离，并在硅胶上提纯，得到蜡状固体，产率84％(0.67 g)。

b)合成噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-噻吩-2-基-乙基)-酰胺]

向冷的羟胺的甲醇(5ml，2M)溶液中加入5-(1-噻吩-2-基-乙基氨基甲酰 基)-噻吩-2-羧酸甲酯(300mg，1mmol)，随后加入另一冷的氢氧化钾甲醇(2 ml，0.5M)溶液。升温到室温后，溶液在此温度搅拌另外3小时。然后混合 物用干冰处理，过滤除去沉淀物，滤液减压下蒸发到干燥。固体残留物用 水彻底洗涤，过滤，干燥，得到260mg(87％)希望的白色固体产物(mp＝173 ℃)。

实施例6

根据实施例5的制备方法，制备下列通式I的噻吩异羟肟酸衍生物：

a)噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-二甲基氨基-1-苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺

b)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-2-吡咯烷-1-基-乙基)-酰胺]

c)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-吗啉-4-基-1-苯基-乙基)-酰胺]

d)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-酰胺}

e)噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-叔丁基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

f)噻吩-2，5-二羧酸2-[(1，2-二苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺

g)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-戊基)-酰胺]

h)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-丁基)-酰胺]

i)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲基-1-苯基-丙基)-酰胺]

j)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-甲基-1-苯基-丁基)-酰胺]

k)噻吩-2，5-二羧酸2-[(1-苯并呋喃-2-基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺

l)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(5-苯基-异噁唑-3-基)-乙基]-酰胺}

m)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-2-基-乙基)-酰胺]

n)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-甲磺酰基-苯基)-乙基]-酰胺}

o)噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

p)噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

q)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-呋喃-2-基-乙基)-酰胺]

r)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-3-基-乙基)-酰胺]

s)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)-乙基]-酰胺}

t)噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

u)噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-苯氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

v)噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

w)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-4-基-乙基)-酰胺]

x)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-联苯基-4-基-乙基)-酰胺]

y)噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氨基甲酰基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

z)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-({1-[4-(3-甲基-丁基氨基甲酰基)-苯基]-乙 基}-酰胺)

aa)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(5-甲基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}

实施例7

(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-噻吩-2-基-乙基)-酰胺]

外消旋化合物噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-噻吩-2-基-乙基)-酰胺] 已在实施例5中描述，通过使用CHIRACELO7CSP固定相色谱分离将(R) 和(S)对映异构体分离。手性技术欧洲(Chiral Technologies Europe)，甲醇/ 水洗脱剂，得到对映异构体富集的(R)-构型产物(mp＝173℃)(对映异构 体的剩余测定，纯度和产率未定)。备选地，可以在5-(1-噻吩-2-基-乙基氨 基甲酰基)-噻吩-2-羧酸甲酯阶段分离两种对映异构体，使用相同的固定相 获得(R)-构型酯类，其随后根据实施例5b的制备方法转变为最终产物。

实施例8

根据实施例7的制备方法，制备下列通式I的噻吩异羟肟酸衍生物：

a)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-二甲基氨基-1-苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺

b)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-2-吡咯烷-1-基-乙基)-酰胺]

c)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-吗啉-4-基-1-苯基-乙基)-酰胺]；(mp ＝88℃)

d)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-酰胺}； (mp＝155℃)

e)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-叔丁基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺；(mp ＝178℃)

f)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(1，2-二苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺；(mp＝190℃)

g)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-戊基)-酰胺]

h)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-丁基)-酰胺]

i)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲基-1-苯基-丙基)-酰胺]

j)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-甲基-1-苯基-丁基)-酰胺]

k)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(1-苯并呋喃-2-基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺

l)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(5-苯基-异噁唑-3-基)-乙基]-酰胺}

m)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-2-基-乙基)-酰胺]

n)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-甲磺酰基-苯基)-乙基]-酰胺}

o)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

p)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

q)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-呋喃-2-基-乙基)-酰胺]

r)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-3-基-乙基)-酰胺]

s)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)-乙基]-酰 胺}

t)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

u)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-苯氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

v)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

w)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-4-基-乙基)-酰胺]

x)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-联苯基-4-基-乙基)-酰胺]

y)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氨基甲酰基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

z)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-({1-[4-(3-甲基-丁基氨基甲酰基)-苯 基]-乙基}-酰胺)

aa)(R)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(5-甲基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}

实施例9

(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-噻吩-2-基-乙基)-酰胺]

外消旋化合物噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-噻吩-2-基-乙基)-酰胺] 已在实施例6中描述，通过使用CHIRACEL O7CSP固定相柱色谱分离两种 (R)和(S)对映异构体，手性技术欧洲，甲醇/水洗脱剂，得到对映异构体地 富集的(S)-构型产物(mp＝170℃)(对映异构体的剩余测定，纯度和产率未 定)。备选地，可以在5-(1-噻吩-2-基-乙基氨基甲酰基)-噻吩-2-羧酸甲酯阶 段分离两种对映异构体，使用相同的固定相获得(S)-构型酯类，其随后根 据实施例5b的制备方法转变为最终产物。

实施例10

根据实施例9的制备方法，制备下列通式I的噻吩异羟肟酸衍生物：

a)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-二甲基氨基-1-苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺

b)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-2-吡咯烷-1-基-乙基)-酰胺]

c)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-吗啉-4-基-1-苯基-乙基)-酰胺]；(mp ＝97℃)

d)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-酰胺}； (mp＝157℃)

e)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-叔丁基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺；(mp ＝142℃)

f)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(1，2-二苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺；(mp＝189℃)

g)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-戊基)-酰胺]

h)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-丁基)-酰胺]

i)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲基-1-苯基-丙基)-酰胺]

j)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-甲基-1-苯基-丁基)-酰胺]

k)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-[(1-苯并呋喃-2-基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺

l)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(5-苯基-异噁唑-3-基)-乙基]-酰胺}

m)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-2-基-乙基)-酰胺]

n)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(4-甲磺酰基-苯基)-乙基]-酰胺}

o)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(3-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

p)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(2-氨基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

q)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-呋喃-2-基-乙基)-酰胺]

r)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-3-基-乙基)-酰胺]

s)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(1-甲基-1H-吡咯-3-基)-乙基]-酰胺}

t)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

u)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-苯氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

v)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-乙氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

w)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-吡啶-4-基-乙基)-酰胺]

x)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-联苯基-4-基-乙基)-酰胺]

y)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-{[1-(4-氨基甲酰基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺

z)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-({1-[4-(3-甲基-丁基氨基甲酰基)-苯基- 乙基}-酰胺)

aa)(S)-噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[1-(5-甲基-噻吩-2-基)-乙基]-酰胺}

参考文献列表

Ansel，H.，等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，6th ed.，1995，pp.196和1456-1457

Cancer：Principles & Practice of Oncology，Vincent T.DeVita，Jr.，Samuel Hellmann，Steven A.Rosenberg；5th ed.，Lippincott-Raven Publishers， 1997

Hanano，T.，等，Bioorg.Med.Chem.Lett.10(2000)881-884

Houben-Weyl，″Methoden der organischen Chemie″，Vols.XV/1和XV/2， Georg Thieme Verlag，Stuttgart

Iglesias，L.E.，等，Tetrahedron：Asymmetry 8(1997)2675-2677

J.Am.Chem.Soc.105(1983)1578

J.Am.Chem.Soc.64(1942)477

J.Heterocycl.Chem.28(1991)17

Koyama，Y.，等，Blood 96(2000)1490-1495

Marks，P.A.，等，J.Nat.Cancer Inst.92(2000)1210-1216

Rasor，P.，和Voss，E.，Applied Catalysis A 221(2001)145-158

Richon，V.M.，等，PNAS 97(2000)10014-10019

Rubinstein，L.V.，等，J.Natl.Cancer Inst.82(1990)1113

US 2,680,731

US 5,369,108

WO 01/38322

WO 01/70675

WO 02/22577

WO 93/07148

WO 95/31977

WO 98/55449

Yoshida，M.，等，J.Biol.Chem.265(1990)17174-17179