普通感冒通常由所谓的感冒病毒通过病毒感染引起，这些感冒病毒诸如 是鼻病毒(rhino virus)、冠状病毒(corona virus)、腺病毒(adenovirus)、柯萨奇 病毒(coxachie virus)、呼吸道合胞病毒(RS-virus)、艾可病毒(echovirus)或其它 感冒病毒。所有人平均每年都会患2-3次上呼吸道感染，诸如感冒(cold)和流 感(flu)s。通常，在丹麦，发生在九月、十月和十一月的大多数普通感冒由鼻 病毒感染引起，而发生在一月、二月和三月的大多数普通感冒由冠状病毒感 染引起。此外，过敏性综合症，例如哮喘，可能由普通感冒病毒尤其鼻病毒 引起。
最近，用聚合酶链反应(PCR)对受天然鼻病毒感染的人进行研究 (Johnston，1993)发现，与普通感冒综合征有关的鼻病毒感染的实际范围可能 比通过传统细胞培养技术获得的结果(40％)高至少两倍。这表明，在所有普 通感冒患者当中，所述普通感冒患者中达70-75％患有作为单独感染或共感 染的鼻病毒感染(Spector，1995)。
据估计，学龄前儿童每年平均患上呼吸道感染或普通感冒6-10次，而 成年人每年平均患2-4次(Sperber，1989)。普通感冒的影响极少是破坏性的， 但是可以使正常人误工、误学等。高危个体，例如支气管炎或哮喘患者，他 们潜在的疾病可能会加重，甚至危及生命。仅在美国，用于治疗感冒的年平 均费用超过20亿美元(Spector，1995)；在欧盟也达到了差不多的数目。
不幸的是，研发治疗普通感冒的新策略的研究非常复杂，因为据报道人 鼻病毒仅可成功地感染灵长类动物，因此还没有开发出鼻病毒感染的实用动 物模型(Rotbart，2000)。
在正常人体中，天然和实验诱导的鼻病毒感染经由所选的事件引发，其 中所选择的事件可以被认为是依次发生的。鼻病毒发病机理的步骤被认为包 括病毒进入外鼻，通过粘膜纤毛将病毒转运到后咽，在上呼吸道的纤毛和非 纤毛上皮细胞中启动感染。在感染启动后平均48小时内，病毒复制达到高 峰，并持续达3周；感染后，多种炎症机理被激活，其可能包括白细胞介素、 缓激肽、前列腺素以及可能还有组胺的释放或诱导，包括副交感神经反射的 刺激(细胞因子可以在一定水平上相互作用作用，产生很复杂的途径)。所得 临床疾病是鼻窦炎、咽炎和支气管炎，其平均持续1周(Gwaltney，1995)。
有时候，病毒感染后可能会继发细菌或微生物感染，从而产生持续的更 严重的炎症。
过去，人们相信病毒的主要部分在上鼻区产生并分泌(Winther，1993a)。 然而，随后的研究(即对从鼻咽冲洗样品中回收的病毒与鼻拭子和咽拭子中 回收的病毒进行的比较)显示鼻咽冲洗样品中病毒的量一直比后两者中的要 多(Cate，1964)。从一系列深入的研究(Winther，1984a；Winther，1984b； Winther，1984c；Turner，1984；Farr，1984；Hayden，1987；Winther，1987a； Winther，1987b；Winther，1993b；Arruda，1995；Winther，1998)中可以得 到如下结论：
(i)病毒首先从鼻咽部以最高浓度被回收，然后才是从上鼻区(鼻甲骨部) 回收。
(ii)注意到没有证据证明鼻病毒可诱导下侧鼻甲骨的表面纤毛层的损伤， 这与其它研究者的研究结果是一致的，提示了病毒可能是通过所覆粘液中的 粘膜纤毛的清除作用而被转运到鼻咽部。
(iii)在与(ii)相同的区域，中性粒细胞的流入明显增加。
(iv)鼻内接种后，鼻腔内皮层(lining)的感染是不均匀的，并且似乎根本 不产生任何细胞损伤，参见上面(ii)。
(v)在(感染后)第一天，鼻咽部的病毒脱落(viral shedding)速度是高的，但 是感冒症状直到第三天才达到高峰。所述的症状在第一周中减弱，但是鼻病 毒在之后的三周中仍存在。
(vi)中性粒细胞的增加与包括咽喉痛在内的症状的发作有关。所述的症 状包括水肿样症状，这些症状反过来可能引起打喷嚏和咳嗽。
应该着重强调的是，可以从鼻咽部回收最高浓度的病毒，并且病毒通常 在一天或两天后出现在鼻甲骨上，即使所述病毒是经鼻接种的(在自愿者中)； 上呼吸道中的内皮细胞层甚至无肉眼可见的损伤。此外，因为″咽喉痛″通常 与病毒在鼻咽部中的出现同时发生，所以可推导出相对少量的鼻病毒感染的 细胞(rhinovirus cells infected)将产生″信号分子″等等(Van Damme，1988)，这 些″细胞因子样分子″继而激活紧邻鼻咽部下层的″淋巴环(lymphatic ring)″，导 致公知的咽喉痛，继而激发复杂的炎症反应模式，这些炎症反应模式涉及多 种不同的干扰素和细胞因子，它们之间的相互作用目前正在进一步研究中。 这些因子中的一些，例如IL-1，引起患者发热。缓激肽本身可导致通常与普 通感冒伴随的咽喉痛。
已知干扰素是人体内抗病毒感染的非特异性先天免疫应答的一部分，因 此多个小组对上呼吸道病毒感染期间局部产生的干扰素的量进行了研究和 报道。Cate等人(Cate，1969)对志愿者(来自美国federal correctional institutions 的健康成年男性)进行了最早并且可能是最全面的体内研究。作者证实，大 部分参与者在普通感冒期间产生干扰素(在鼻洗液中证实)，其水平至少理论 上应该足以阻断病毒感染本身。
最新的一份出版物证实，免疫系统在炎症作用的传播过程中也“积极地 起作用”，因为实验证据支持以下观点，即鼻病毒可能通过启动局部TNF-α 的产生利用免疫系统的一些效应细胞作为将炎症反应传播到下气道的工具 (Gem，1996)。人们试图得出过敏性鼻炎是通过这种机制引发的结论，因为 已发现哮喘的发病与局部TNF-α的产生有关(Broide等人，1992)。数个小组 认为哮喘综合症是鼻病毒的感染后事件的表现，所述事件由一组不同的细胞 因子引发，这些细胞因子与Th1对Th2应答的“开关”有关(Gem，1999； Winther，1998；Grünberg，1999)。
一般而言，呼吸道感染或过敏性鼻炎和/或哮喘可能会带来严重的健康问 题，因为它们对易感人群来说可能会危及生命，所述易感人群如慢性气道疾 病的老年患者或免疫缺陷的患者诸如AIDS患者、癌症患者等。因此，找到 治疗这些症状/综合症以及可能还有潜在的感染的简单、有效的方法是非常重 要的。
已知病毒和/或其它微生物感染可引发患者的复杂炎症应答(Ginsburg， 1988)，所述炎症应答很可能由包括嗜中性粒细胞在内的数组在感冒期间特 异性地增加的应答细胞介导。后者在所有效应细胞中约占95％以上。每分钟， 约6-9百万个中性粒细胞进入上气道，并沿包绕上气道的内表面缓慢下移。 可以推断，中性粒细胞(其在受到适当刺激时能释放强攻击性(aggressive)酶和 毒性物质)，可使上气道的细菌负荷保持在一个可接受的水平。在鼻咽部发 现的少量化脓性葡萄球菌或金黄色葡萄球菌(否则是几乎无菌的)，可通过所 谓的超抗原刺激中性粒细胞至一定程度，从而限制该部位细菌的数量(动态 平衡/共生)。
根据Ihrcke及同事(Ihrcke，1993)，病毒感染(或内皮细胞层(cell lining) 的任何其它异常)的最早步骤与硫酸肝素蛋白聚糖(与完整的内皮细胞结合的 主要蛋白聚糖)的含量和代谢有关。该模型的第一要素源于这一发现，即硫 酸乙烯肝素是在病毒感染所引发的炎症应答的第一个步骤中从完整的血管 内皮细胞层所释放的。因此，其丢失可能严重损伤血管的完整性，并导致局 部水肿，通过内皮细胞上ICAM-1标志物的上调吸引更多的中性粒细胞，进 一步增强炎症应答。因此，在另外的实验中，激活的中性粒细胞在1小时内 通过随后的肝素酶的释放能够释放所有细胞结合型硫酸乙酰肝素蛋白聚糖 的70％。硫酸肝素的一个重要功能是维持内皮细胞的完整性。硫酸肝素的丢 失可部分地消除内皮细胞的屏障性能，导致炎症的特征性表现，即水肿和血 浆蛋白渗出。
过去已经试图用类黄酮治疗普通感冒。
WO 02/09699描述了用类黄酮诸如曲克芦丁或veneruton治疗普通感冒 及类似症状如枯草热，它们或单独使用或与金属结合。通常使用的包括薄荷 油(peppermint oil)。
US 6,596,313描述了可用于治疗普通感冒的口服药物组合物。该组合物 包含来自各种植物的提取物。该文献提及了薄荷醇可以用作一种香料 (flagrant)。然而，含薄荷醇组合物的作用还没有公开。
US 6,592,896描述了含植物提取物的口服药物组合物。该文献提及了薄 荷醇可以用作一种香料。该组合物可以用于治疗普通感冒。含薄荷醇组合物 的作用没有公开。
WO 01/03681描述了用各种类黄酮治疗病毒感染，包括与普通感冒有关 的感染。
WO 01/49285描述了含类黄酮的药物。该药物可用于治疗普通感冒，但 是这一点并没有得到证实。
发明概述
本发明的一个目的是提供新的且有效的药物组合物，其用于治疗普通感 冒及类似疾病。有趣地是，本发明令人吃惊地披露了香料的选择是非常重要 的。
具体地，本发明证明了各种常用香料添加剂的令人惊奇的作用。有趣地 是，含类黄酮和经纯化的薄荷醇的药物组合物在治疗普通感冒及有关疾病方 面要比含其它香料的类似组合物更为有效。
因此，本发明的第一个目的是提供包含下面物质的药物组合物
i)一种或多种经纯化的类黄酮；和
ii)经纯化的薄荷醇；和
iii)可药用的赋形剂。
本发明的第二个目的是提供一种或多种经纯化的类黄酮和经纯化的薄 荷醇在制备用于治疗有需要的个体中的临床疾病或临床疾病的症状的药物 组合物中的用途。
本发明的第三个目的是提供治疗有需要的个体中的临床疾病的方法，包 括将本发明的药物组合物给予所述的个体。
本发明的另一个目的是提供一种用于治疗临床疾病的药物，该药物包含 作为活性成分的纯化类黄酮和经纯化的薄荷醇。
附图说明
图1A说明在薄荷醇(1∶800)(称为M)存在和不存在的条件下，天然 HuIFN-α(称为HuIFN-α)对稀释度10-2的鼻病毒-T39(称为HRV T39)的抗病毒 活性。
图1B说明在薄荷醇(1∶800)(称为M)存在和不存在的条件下，天然 HuIFN-((称为HuIFN-α)对稀释度10-2.5的鼻病毒-T39(称为HRV T39)的抗病 毒活性。
图2A说明稀释度1∶800的薄荷醇(称为menth)对鼻病毒T39(称为HRV T39)的抗病毒活性。
图2B说明稀释度1∶800和1∶1600的薄荷醇对鼻病毒T39(称为HRV T39) 的抗病毒作用。
图3A说明薄荷油(称为PPO)增强了鼻病毒T39(称为HRV T39)的产生。
图3B说明用稀释度10-2的鼻病毒10(称为RHV 10(-2))作为攻击病毒时， 薄荷油(称为PPO)下调干扰素-α系统。干扰素-α被称为IFN。
图3C说明用稀释度10-2和10-2.5的鼻病毒10(称为RHV 10)作为攻击 病毒时，薄荷油(称为PPO)下调干扰素-α(称为IFN)系统。
图4A说明每位用薄荷醇-锭剂治疗的普通感冒患者的总平均症状得 分。所述的曲线表明3位患者(患者编号161202、020403和270403)的平均 偏差和标准偏差，其中的治疗在24h p.i.开始进行。
图4B说明每位用薄荷醇-锭剂治疗的普通感冒患者的总平均症状得分。 所述的曲线表明患者组的平均偏差和标准偏差，所述患者组是根据治疗开始 (24h、48h和7天p.i.)进行分组的。
图4C说明5位用薄荷醇-锭剂治疗的普通感冒患者的差别症状得分 (differential symptom score)。所述的曲线表示鼻炎(rhinitis)/鼻漏 (rhinorrhea)、咽喉痛(sore throat)、打喷嚏(sneezing)、鼻塞(clogged nose)、 咳嗽(coughing)和头痛(headache)的症状得分。
图4D说明10位用PPO-锭剂治疗(24-36h p.i.开始治疗)的患者的差别症 状得分。所述的曲线表示流鼻涕(running nose)、打喷嚏和鼻塞的症状得 分。
图4E说明具有(ImmuMaxZn)或不具有Zn2+(ImmuMax)的PPO-锭剂治疗 的自然感染的普通感冒患者的总平均症状得分。在临床诊断后的24-36h内 开始进行治疗。
图4F说明用具有(ImmuMaxZn)或不具有Zn2+(ImmuMax)的PPO-锭剂治 疗的自然感染的普通感冒患者的总平均症状得分。在临床诊断后的24h内开 始进行治疗。
发明详述
含类黄酮和薄荷醇的药物组合物
令人吃惊地是，本发明发现某些香料如薄荷醇具有抗病毒作用，例如 抗鼻病毒作用。因此，在一个实施方案中，本发明涉及含类黄酮和薄荷醇 的药物组合物及其用途。
具体地，所述的药物组合物优选包含
i)一种或多种经纯化的类黄酮；和
ii)具有抗病毒作用的经纯化的香料；和
iii)可药用的赋形剂。
优选地，所述的具有抗病毒作用的香料是薄荷醇。然而，可以使用任何 其它具有抗病毒作用的香料，例如柠檬酸或低pH值的类似化合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及含一种或多种类黄酮的药物组合物， 其中所述的组合物基本上不含任何不是薄荷醇的薄荷油组分。优选地，所述 的组合物没有日本薄荷油的任何组分。所述的组合物可以包含除类黄酮外的 一种或多种其它活性成分，例如金属盐和/或金属络合物和/或薄荷醇。所述 的组合物还可能包含除薄荷油外的调味剂。
薄荷油的组分例如可以选自薄荷酮(methone)、乙酸薄荷酯(menthyl acetate)、苧烯(limonene)、新薄荷醇(neomethol)、胡椒酮(piperitone)、薄荷烯 酮(menthenone)、异薄荷酮(isomenthone)、长叶薄荷酮(pulegone)、β-石竹烯 (caryophyllene)、β-石竹烯-环氧化物、α-蒎烯(pinene)、β-蒎烯、大根香叶烯 (germacrene)D、1，8-桉树脑(cineol)、芳樟醇(linalool)、薄荷呋喃(menthofurane)、 莰烯(camphene)和β-己烯基苯乙酸酯(hexenyl phenylacetate)。
所述的类黄酮可以是下文所述的任何类黄酮。薄荷醇是一种式 CH3C6H9(C3H7)OH的萜烯化合物。经纯化的薄荷醇可以从一种植物中提纯 得到，或者它可以是通过化学合成的。从植物中提纯得到的薄荷醇优选基 本上不含所述植物的任何其它化合物。本发明的薄荷醇优选是左旋-(-)-薄荷 醇(也称为(-)-薄荷醇)。有用的可药用的赋形剂将在下面进行描述。
术语“经纯化的类黄酮”是指一种或多种基本上不含任何其它化合物的 类黄酮。因此，“经纯化的类黄酮”组合物包含至少90％的类黄酮，优选包 含至少95％的类黄酮，更优选包含至少98％的类黄酮，更优选包含约100％ 的类黄酮。因此，“经纯化的类黄酮”组合物最优选不含任何其它能检测到 的化合物。具体地，优选经纯化的类黄酮不含存在于从中提纯类黄酮的组 合物中的其它化合物。例如，如果所述的类黄酮纯化自一种植物提取物， 那么该经纯化的类黄酮基本上不含存在于该粗植物提取物中的任何其它化 合物。
优选地，本发明的药物组合物基本上不含粗植物提取物或其级分。所述 的组合物当然可以包含主要由类黄酮或薄荷醇组成的馏分。
在本发明的一个实施方案中，经纯化的类黄酮和经纯化的薄荷醇一起 构成本发明药物组合物的活性成分的至少50％，优选至少60％，更优选至 少70％，更优选至少80％，更优选至少90％，更优选至少95％，诸如至少 98％，例如约100％。
因此，在本发明的一种优选实施方案中，所述的药物组合物基本上由 以下物质组成：
iv)一种或多种经纯化的类黄酮；和
v)经纯化的薄荷醇；和
vi)可药用的赋形剂，其中所述的赋形剂没有治疗活性。
术语“基本上由......组成(essentially consist of)”是指没有其它组分能够 通过常用检测技术检测到。
在本发明的另一个实施方案中，所述的药物组合物还包含一种可药用的 金属络合物和/或金属盐。合适的金属络合物和盐的实例将在下面给出。
虽然没有强制性规定，但是在本发明的这种实施方案中，优选经纯化 的类黄酮和经纯化的薄荷醇以及金属络合物/金属盐一起构成本发明药物组 合物的活性成分的至少50％，优选至少60％，更优选至少70％，更优选至 少80％，更优选至少90％，更优选至少95％，诸如至少98％，例如约 100％。
因此，在本发明的一种非常优选的实施方案中，所述的药物组合物基本 上由以下物质组成：
i)一种或多种经纯化的类黄酮；和
ii)经纯化的薄荷醇；和
iii)一种或多种金属络合物和/或金属盐；以及
iv)可药用的赋形剂，其中所述的赋形剂没有治疗活性。
因此，在本发明的一个实施方案中，优选所述的药物组合物不含上述其 它活性成分，具体优选所述的组合物不含任何维生素，诸如维生素E。该组 合物还优选不含抗体。该组合物还优选不含羟丙基纤维素。
在一个实施方案中，优选所述的药物组合物基本上不含除薄荷醇外的其 它萜烯。因此，在本发明的这种实施方案中，所述的药物组合物优选基本上 不含一种或多种选自薄荷酮、乙酸薄荷酯、苧烯或新薄荷醇的物质。更优选 地，所述的组合物基本上不含一种或多种选自薄荷酮、乙酸薄荷酯、苧烯、 新薄荷醇、胡椒酮、长叶薄荷酮、β-石竹烯、β-石竹烯-环氧化物、α-蒎烯、 β-蒎烯、大根香叶烯D、1，8-桉树脑、芳樟醇、薄荷呋喃、莰烯或β-己烯基 苯乙酸酯的物质。更优选地，所述的药物组合物基本上不含薄荷酮、乙酸薄 荷酯、苧烯和新薄荷醇。更优选地，所述的药物组合物基本上不含薄荷酮、 乙酸薄荷酯、苧烯、新薄荷醇、胡椒酮、长叶薄荷酮、β-石竹烯、β-石竹烯- 环氧化物、α-蒎烯、β-蒎烯、大根香叶烯D、1，8-桉树脑、芳樟醇、薄荷呋喃、 莰烯和β-己烯基苯乙酸酯。所述的药物组合物还优选基本上不含一种或多种 选自薄荷酮、乙酸薄荷酯、苧烯、新薄荷醇、胡椒酮、薄荷烯酮、异薄荷酮、 长叶薄荷酮、β-石竹烯、β-石竹烯-环氧化物、α-蒎烯、β-蒎烯、大根香叶烯 D、1，8-桉树脑、芳樟醇、薄荷呋喃、莰烯或β-己烯基苯乙酸酯的化合物。
术语“药物组合物”应该理解成常规含义，即该术语优选不包括食品、化 妆品、牙膏等等。
薄荷醇作为抗病毒化合物
令人吃惊地，本发明证明了薄荷醇具有抗病毒作用。因此，本发明的还 有一个目的是提供减少组合物中病毒数量的方法，包括用薄荷醇保温培养含 病毒的所述组合物。本发明的还有一个目的是提供减少被所述病毒感染的个 体中的病毒数量的方法，包括将含薄荷醇的药物组合物给予所述的个体，由 此减少所述个体中所述病毒的数量。本发明还涉及薄荷醇在制备用于减少有 需要的个体中的病毒的药物组合物中的用途。
有需要的个体(the individual in need thereof)可以是任何个体。优选地， 所述个体是感染有本文所述一种或多种病毒的个体。
所述的病毒优选是下文“临床疾病”部分中所述的任何病毒。更优选地， 所述的病毒是鼻病毒。
上述方法还可以与一种或多种其它活性化合物联合给药。同时，所述的 药物组合物还可以包含一种或多种其它活性化合物。所述的活性化合物例如 可以选自类黄酮、金属络合物或金属盐。
病毒减少优选最多减少到病毒最初数量的80％，更优选最多70％，更优 选最多60％，诸如最多50％，例如最多40％，例如最多30％，例如最多20％， 例如最多10％。
更优选地，在体外试验系统中，病毒的减少导致细胞存活率增加至少 10％，优选至少20％，更优选至少30％，例如至少40％，诸如至少50％，诸 如至少60％，例如至少70％，诸如至少80％，例如至少90％。细胞存活率 优选如实施例2中所述的那样进行测定。
类黄酮
本发明所用的“类黄酮”可以是本领域熟练技术人员已知的任何类黄酮。 类黄酮是从各种植物中分离得到的多酚化合物，已知的就有4000多种单独 的化合物。本发明的术语“类黄酮”包括天然存在的类黄酮以及其合成的衍生 物。类黄酮包括一系列C15芳香族化合物，并且见于几乎所有的陆生绿色植 物。
优选的本发明的类黄酮包括具有以下通式的类黄酮：

或具有以下通式的类黄酮：

其中
R2′可以选自：-H
              -OH
R3′可以选自：-H
              -OH
              -OCH3
              -OCH2CH2OH
R4′可以选自：-H
              -OH
              -OCH3
              -OCH2CH2OH
R5′可以选自：-H
              -OH
              -OCH3
              -OCH2CH2OH
R6′是-H；
R3包括R31和R32可以独立地选自：
            -H
            -OH
             -O-芸香糖
             -O-糖苷
             -O-葡萄糖-p-香豆酸
            -SOH
             -O-鼠李糖
R4可以选自：-H
            -(O)
            -OH
R5可以选自：-H
            -OH
            -O-CH2CH2OH
R6可以选自：-H
            -OH
            -OCH3
R7可以选自：-H
            -OH
             -O-葡萄糖
            -OCH3
            -OCH2CH2OH
             -O-葡糖醛酸
             -O-芸香糖
             -O-鼠李葡糖苷
R8可以选自：-H
            -OH
此外，类黄酮和/或类黄酮衍生物可以是上述化合物的立体异构体。其它 的类黄酮和/或类黄酮衍生物可以是包含两种类黄酮亚基的二聚物。
此外，本发明中与金属联用的类黄酮和/或类黄酮衍生物可以是本领域熟 练技术人员已知的任何类黄酮和/或类黄酮。例如，这些类黄酮和/或类黄酮 衍生物可以是WO 01/03681中提及的任何类黄酮和/或类黄酮衍生物，该文 献在此全文引入作为参考。
优选地，所述的类黄酮和/或类黄酮衍生物选自具有下面条件的上述通式 化合物，
当R3′选自-OH
          -OCH3
          -OCH2CH2OH
那么R5′选自-H
以及当R5′选自-OH
              -OCH3
              -OCH2CH2OH
那么R3′选自-H
半合成类黄酮也在本发明的范围内。在本发明的一个实施方案中，所述 的类黄酮是一种合成类黄酮，即非天然存在的类黄酮，诸如半合成类黄酮或 天然存在的类黄酮的合成衍生物。
优选地，本发明的类黄酮可以选自：曲克芦丁(troxerutin)、维脑路通 (venoruton)、羟乙基芦丁(hydroxyethylrutosides)、hesperitin、柚苷配基 (narigenin)、川皮苷(nobiletin)、柑桔黄酮(tangeritin)、黄芩素(baicalein)、高 良姜黄素(galangin)、染料木黄酮(genistein)、槲皮黄素(quercetin)、芹菜配基 (apigenin)、山奈酚(kaempferol)、漆树黄酮(fisetin)、芦丁(rutin)、毛地黄黄酮 (luteolin)、白杨素(chrysin)、黄杉素(taxifolin)、eriodyctol、catecithin、表儿 茶精(epicatechin)、表没食子儿茶精(epigallocatechin)、表儿茶精没食子酸盐 (epicatechin gallate)、表没食子儿茶精没食子酸盐(epigallocatechin gallate)、黄 酮(flavone)、sideritoflavone、hypolaetin-8-O-Gl、千层纸黄素(oroxindin)、3- 羟基黄酮(3-hydroxyflavone)、桑黄素(morin)、六羟黄酮(quercetagetin)-7-O-Gl、 坦布里廷(tambuletin)、棉纤维素(gossypin)、hipifolin、柚皮素(naringin)、白 矢车菊苷元(leucocyanidol)、阿曼托黄素(amentoflavone)、其衍生物或其混合 物。
更优选地，一个或多个R链是-OCH2CH2OH，更优选地，至少两个R链 是-OCH2CH2OH，最优选三个R链是-OCH2CH2OH。
在本发明的一个实施方案中，当在体外测试时，所述的类黄酮不包括抗 病毒活性。此外，优选所述的类黄酮可溶于水。
在一种优选实施方案中，至少一种类黄酮是芦丁，更优选地至少一种类 黄酮是羟乙基芦丁。更优选地，所述组合物的所有类黄酮是芦丁，更优选地 是所述组合物的所有类黄酮是羟乙基芦丁。
例如，本发明的药物组合物可以包含羟乙基芦丁的混合物，例如单-、 二-、三-和四-羟乙基芦丁的混合物。
在一种优选实施方案中，本发明的类黄酮衍生物包含单-、二-、三-和四 -羟乙基芦丁的混合物。更优选地，该混合物包含1％-15％的单羟乙基芦丁诸 如5％-10％的单羟乙基芦丁，包含25％-50％的二羟乙基芦丁诸如30％-38％ 的二羟乙基芦丁，包含30％-70％的三羟乙基芦丁诸如45％-55％的三羟乙基 芦丁，以及1％-20％的四羟乙基芦丁诸如3％-12％的四羟乙基芦丁。最优选 地，所述的羟乙基芦丁的混合物是维脑路通。
类黄酮最优选选自曲克芦丁、维脑路通、其可药用的盐或其功能衍生物。
在本发明的一种尤其优选的实施方案中，至少一种类黄酮是下式的曲克 芦丁：

                           曲克芦丁
上述式的曲克芦丁也已知为7，3′，4′-三[O-(2-羟乙基)]芦丁(CAS号 7085-55-4)。
在现有技术中，术语“曲克芦丁”也用于是指羟乙基芦丁的混合物。因此， 本发明的药物组合物还可能包含羟乙基芦丁的混合物(在此称为羟乙基芦丁 混合物)。在优选实施方案中，所述的药物组合物不包含除羟乙基芦丁混合 物外的其它类黄酮。
优选地，所述的羟乙基芦丁混合物包含至少40％，例如约46％，例如至 少50％，例如至少60％，诸如至少70％，例如至少80％的上述通式的曲克 芦丁。所述的羟乙基芦丁混合物还可以包含2-10％，更优选3-7％，甚至更 优选约5％的单羟乙基芦丁。所述的羟乙基芦丁混合物还可以包含20-50％， 更优选30-40％，更优选约34％的二羟乙基芦丁。所述的羟乙基芦丁混合物 还可以包含2-10％，更优选3-7％，更优选约5％的四羟乙基芦丁。可以存在 少量的其它羟乙基化的组分，例如羟乙基化的槲皮黄素，例如四羟基化的槲 皮黄素。
在本发明的一个实施方案中，一些或全部类黄酮是糖苷配基。例如，至 少一种类黄酮可以是芦丁糖苷配基，优选至少一种类黄酮是羟乙基芦丁糖苷 配基，更优选至少一种类黄酮是曲克芦丁糖苷配基。
糖苷配基是至少除去一个糖基的类黄酮。糖苷配基可以使用任何合适的 机理进行制备，例如借助于β-葡糖醛酸酶(glucoronidase)(也参见Shimoi等人， 2001)。
曲克芦丁糖苷配基的化学式如下所示：

在本发明的一个实施方案中，至少一些类黄酮，例如基本上所有的类黄 酮以金属螯合物的形式存在，例如铁(III)、铁(II)、铜(II)或锌(II)的螯合物。 类黄酮优选以Zn2+螯合物的形式存在。多酚的金属螯合例如描述在(Hider等 人，2001)中，所述的类黄酮金属螯合物例如可以通过任何本文所述的机理 形成。优选地，所述的类黄酮金属螯合物是Zn2+/曲克芦丁或Zn2+/维脑路通。
本发明的药物组合物还可以包含一种以上类黄酮的混合物。例如，这样 的一种混合物可以例如包含2种，诸如3种，例如4种，诸如5种，例如6 种，诸如7种，例如8种，诸如9种，例如10种，诸如10以上的不同类黄 酮。优选地，这样的一种混合物包含8-10种不同的类黄酮。
在本发明的一个实施方案中，所述的类黄酮不是黄芪甙。
临床疾病
本发明涉及类黄酮和薄荷醇在制备用于治疗临床疾病的药物中的用途。 本发明还涉及治疗临床疾病的方法。所述的临床疾病可以是任何可以使用类 黄酮和薄荷醇进行治疗的临床疾病。
然而，在本发明的优选实施方案中，所述的临床疾病是一种与普通感冒 有关的疾病，例如上呼吸道和/或下呼吸道和/或眼的普通感冒。与普通感冒 有关的疾病包括普通感冒，上呼吸道和/或下呼吸道和/或眼的病毒感染和/或 细菌感染，鼻炎，具有一种或多种类似于普通感冒症状的症状过敏性疾病例 如过由鼻病毒感染引起的敏性鼻炎，哮喘样恶化(asthma like exacerbation)和/ 或由各种免疫系统功能异常引起的其它异常气道功能，例如枯草热等等。
此外，与普通感冒有关的疾病可以包括原发性病毒感染不久后的继发性 细菌感染。继发性细菌感染例如可以由存在于上呼吸道和/或下呼吸道和/或 眼中的正常菌群(flora)造成。
与普通感冒有关的疾病的症状可以包括，但不局限于：咳嗽、打喷嚏、 肌肉疼痛、咽喉痛、声音嘶哑、咽喉刺痒、头痛、不适、寒战、流鼻涕(nasal discharge)、鼻塞、与鼻窦有关的疼痛、发热、鼻炎、粘膜肿胀、咽炎、哮喘 以及急性支气管炎和慢性支气管炎。
在本发明中，上呼吸道包括口、鼻、鼻窦、咽喉、以及到会厌的呼吸道。 下呼吸道包括支气管树的其余部分，其包括细支气管和肺泡。本发明还涉及 治疗与呼吸道疾病相关的眼部症状，因为该疾病可能涉及呼吸道和眼睛的粘 膜内层(mucosal lining)。本文使用的术语治疗还包括症状的预防，所述的预 防实际上可为减轻症状的发展或预防症状的首次出现，例如当暴露于感染 时。
根据本发明，药学有效量或治疗有效量将被理解为足以引起所需生物学 效果所需的数量。该效果可以是病征、症状或病因例如普通感冒的病因的缓 解，优选地，该效果是病征、症状或病因的显著缓解。例如，有效量通常可 提供症状的主观减轻或由临床医师或其它合格观察员记录得到的客观可鉴 定的改善，优选这样一种症状缓解优选是一种显著性缓解。所述的缓解例如 可以基于一种本文实施例中公开的症状评分法进行评价。因此，根据个体、 待治疗的疾病或症状的情况，有效量可以相差。
大多数普通感冒患者在呼吸道感染后都产生干扰素(Cate等人，1969)， 其本身在原则上应足以减轻感染。
因此，在本发明的一个优选方面，病毒感染的治疗不被认为是一种直接 抗病毒作用，而是被认为是对与位于呼吸道或眼睛的粘膜中的病毒感染的建 立或持续有关的细胞因子或其它有关因素的修饰或抑制。此外，所述的治疗 优选抑制呼吸道或眼睛的粘膜中的炎症过程，并因此减轻普通感冒的症状。 因此，本发明涉及类黄酮和薄荷醇在治疗上呼吸道和/或下呼吸道和/或眼的 病毒感染的症状中的用途，其中所述的类黄酮和/或类黄酮衍生物在体外没有 抗病毒效果。
因此，在本发明的一个实施方案中，所述的类黄酮在体外不具有抗病毒 或抗细菌的效果。体外抗病毒和/或抗菌作用可以在各种实验室试验中进行测 定。优选地，这些实验室试验包含能被待检测细菌或病毒感染的培养细胞系 以及所述的细菌或病毒。更优选地，所述培养的细胞系是WISH细胞，且所 述的病毒是一种选自：鼻病毒1A、鼻病毒15或鼻病毒39的鼻病毒。最优 选地，抗病毒作用使用如实施例1所述的MTS方法进行测定。当抗病毒作 用根据如实施例1所述的MTS方法进行测定时，小于10％，优选小于7.5％， 更优选小于5％，更优选小于3％，最优选小于2％的保护作用被认为在体外 没有抗病毒作用。
优选地，所述的类黄酮和/或类黄酮衍生物的作用是与活生物体密切相关 的，例如该作用是对与受影响粘膜有关的具体因子及生物反应的调节性作 用。确切的机理目前还不清楚。
通常，普通感冒由病毒感染引起，与病毒感染有关或者伴随病毒感染， 这与普通感冒或普通感冒症状有关。在本发明的一个实施方案中，与普通感 冒有关的疾病与上呼吸道和/或下呼吸道和/或眼睛的病毒感染有关。
通常与普通感冒最有关的或最常引发普通感冒的病毒感染是由选自下 组的一种或多种病毒引起：腺病毒、细小病毒、微小RNA病毒、呼肠孤病 毒、正粘病毒、副粘病毒、沙粒病毒、杯状病毒、冠状病毒、正粘病毒、鼻 病毒、流感病毒包括流感病毒A型和B型、艾可病毒、呼吸道合胞病毒(RSV) 或柯萨奇病毒。鼻病毒是被鉴定为与普通感冒有关的最常见病毒。术语鼻病 毒是指任何鼻病毒，例如鼻病毒1-113中的任何鼻病毒。然而，上述病毒通 常存在于没有普通感冒症状的个体。优选地，与本发明普通感冒有关的病毒 感染是鼻病毒或冠状病毒的感染。
通常，普通感冒与细菌感染相关或继发于细菌感染，所述细菌感染与普 通感冒或普通感冒症状有关。在本发明的一个实施方案中，这样的一种细菌 感染可以是原发性感染(例如病毒感染)后的继发性感染。在本发明的一个实 施方案中，与普通感冒有关的疾病与上呼吸道和/或下呼吸道和/或眼睛的细 菌感染有关。
与普通感冒或其症状有关的细菌感染最通常由一种或多种选自下组的 细菌所致：肺炎链球菌(Streptococcus pheumoniae)、溶血链球菌(Streptococcus Haemolyticae)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenxae)或粘膜炎莫拉氏菌 (Moraxella catarrhalis)。
此外，普通感冒可由微生物感染引发。这样的一种微生物感染可以导致 与病毒感染类似的炎性应答，它们涉及相同的效应细胞例如中性粒细胞。因 此，这些微生物感染可以以类似于与普通感冒有关的病毒感染的方式进行治 疗。
许多过敏性反应与类似于普通感冒症状的症状有关，并且令人吃惊地 是，过敏性疾病的这些症状也可以通过本发明公开的方法和用途得到有效治 疗。因此，在本发明的一个实施方案中，与普通感冒有关的疾病是过敏性疾 病。
本发明的过敏性疾病优选选自鼻炎、哮喘、急性支气管炎、慢性支气管 炎或枯草热。与过敏性疾病有关的最常见症状是选自下面的一种或多种症 状：流鼻涕、鼻充血、打喷嚏、咳嗽、粘膜肿胀或鼻炎。更优选地，本发明 的过敏性疾病选自鼻炎或枯草热。在本发明的另一方面，基于所述类黄酮对 本文所述感染或疾病有关的粘膜肿胀的减轻作用，个体的所述症状可以得到 缓减。在本发明的另一方面，包括与昆虫叮咬(insect bites and sticks)有关的 急性过敏性反应，在本发明的另一方面，所述过敏性反应是由食物或其它过 敏原所致，其可导致这种急性反应中的口腔和/或咽喉粘膜的肿胀。
另一方面，对由选自下组的一种或多种因素所引发的过敏性疾病的治疗 也包括在本发明中：污染物，室内尘埃，常见的尘螨例如粉尘螨 (Dermatophagoides Farinae)或屋尘螨(Dermatophagoides Pteronyssinus)，花粉 例如青草花粉、树木花粉或杂草花粉，霉菌，动物皮屑或羽毛，真菌孢子以 及例如小麦粉的慢性吸入。
因此，与普通感冒有关的疾病可以是以选自下组的一种或多种症状为特 征的感染或普通感冒或过敏性疾病：咳嗽、打喷嚏、肌肉疼痛、咽喉痛、声 音嘶哑、咽喉刺痒、头痛、不适、寒战、流鼻涕、鼻塞、与鼻窦有关的疼痛、 鼻炎、粘膜肿胀、咽炎、哮喘、急性支气管炎或慢性支气管炎。
当与普通感冒有关的疾病是一种过敏性疾病时，优选这种疾病通过向需 要该治疗的个体给药类黄酮和薄荷醇，但不同时给药金属来进行治疗。更优 选所述的类黄酮选自曲克芦丁和Veneruton。
常见的普通感冒产生持续约一周的症状。然而，在某些情况下，与普通 感冒有关的疾病产生持续更长时间的症状。这些长时间持续的普通感冒例如 可以持续10天以上，例如超过2周，例如超过3周，例如超过一个月，例 如超过6周。患长时间持续型普通感冒的个体优选通过给予类黄酮和薄荷醇 但不同时给予金属进行治疗。更优选所述的类黄酮选自曲克芦丁或 Veneruton。
相反，患常见普通感冒的个体(其中治疗在普通感冒症状发作后的第1-5 天开始，优选在普通感冒症状发作后的第1-3天开始)，可以通过同时给予本 发明的类黄酮、薄荷醇和金属进行治疗。
金属络合物和金属盐
在本发明的一个实施方案中，所述的药物组合物包含类黄酮、薄荷醇和 一种金属络合物和/或金属盐。
本发明的金属优选选自锌、锰、镉、钴、铁和硒。该金属例如可以是 Zn2+、Mn2+、Cd2+、CO2 +、Fe2+和Se2+的形式。该金属最优选是锌。锌优选 是Zn2+，以其盐和/或络合物或衍生物的形式给出。
在本发明的范围内，锌可以是任何合适的形式，例如葡糖酸锌 (ZnGluconate)、乙酸锌(Zn(acetate)2)、Zn2+氨基螯合物(Zn2+aminochelate)、 Zn2+DL-蛋氨酸、Zn2+L-甲硫氨酸、组氨酸衍生物或与和组氨酸结合的氨基 酸的络合物(complex with amino acids in combination with histidine)等等例如 PolaPreZinc。此外，锌可以以硫酸锌、氯化锌、硝酸锌(Nitric-acid zinc)、 磷酸锌、棕腐酸锌(ulmin acid zinc)、氟化锌、碘化锌、氢氧化锌、碳酸锌、 铬酸锌(zinc chromate)、苯甲酸锌、乙酸锌、对氨基苯甲酸锌、对二甲氨基 苯甲酸锌、对苯酚磺酸锌、对甲氧基肉桂酸锌(p-methoxy cinnamic-acid zinc)、 乳酸锌、葡糖酸锌(gluconi-acid zinc)、柠檬酸锌(citric-acid zinc)、水杨酸锌 (salicylic-acid zinc)、硬脂酸锌(zinc stearate)、月桂酸锌(lauric-acid zinc)、肉 豆蔻酸锌(myristic-acid zinc)、油酸锌(oleic-acid zinc)、2，5-吡啶二羧酸锌 (2，5-pyridine dicarboxylic-acid zinc)、2，6-吡啶二羧酸锌、4-吡啶二羧酸锌、2，4- 二羧基吡啶锌、3-羟基-2-羧基吡啶锌、3-正丙氧基-2-羧基吡啶锌、3-正己氧 基-2-羧基吡啶锌、5-正丙氧基-2-羧基吡啶锌、5-正丁氧基-2-羧基吡啶锌、5-(2- 乙基-己氧基)-2-羧基吡啶锌、6-正丁氧基-2-羧基吡啶锌、3-甲氧基-2-羧基吡 啶锌、5-甲氧基-2-羧基吡啶锌、6-甲氧基-2-羧基吡啶锌、6-正己氧基-2-羧基 吡啶锌、3-甲基-2-羧基吡啶锌、4-甲基-2-羧基吡啶锌、4-叔丁基-2-羧基吡啶 锌、5-甲基-2-羧基吡啶锌、5-正己基-2-羧基吡啶锌、3-正十一烷基-2-羧基吡 啶锌、4-正十一烷基-2-羧基吡啶锌、5-正丁基-2-羧基吡啶锌、6-正十一烷基 -2-羧基吡啶锌、4-硝酸甘油-2-羧基吡啶锌、5-羟基-2-羧基吡啶锌、4-氟-2- 羧基吡啶锌、2-羧基吡啶N-氧化物锌、皮考啉酸锌(picolinic-acid zinc)、烟酸 锌(nicotinic-acid zinc)、烟酰胺锌(nicotinamide zinc)、3，4-二羟基苯甲酸锌、 Screw组氨酸锌(Screw histidine zinc)、扁柏酚锌(hinokitiol zinc)、原卟啉锌 (protoporphyrin zinc)、卟啉锌(porphyrin zinc)或皮考啉酰胺锌(picolinic-acid amide zinc)。
本发明包括这样的情况，其中的锌可以是上述锌盐和/或锌络合物的组 合。这样组合可以包含两种或多种。锌优选选自Zn2+氨基螯合物、Zn2+氨基 酸螯合物、乙酸锌、Zn2+DL-蛋氨酸、Zn2+L-甲硫氨酸、葡糖酸锌和 PolaPreZinc。优选地，锌是葡糖酸锌或PolaPreZinc的形式。
给药、制剂和效果
一方面，本发明涉及治疗方法，包括给予上述任何一种药物组合物。本 发明还涉及类黄酮在制备用于治疗临床疾病诸如普通感冒的药物中的用途。 除薄荷醇外，所述药物优选不含薄荷油的所有化合物。在一个实施方案中， 本发明涉及类黄酮和薄荷醇在制备用于治疗临床疾病如普通感冒的药物中 的用途(参见上文)。
本发明的药物组合物应优选包含有效剂量的类黄酮和薄荷醇以及任选 的金属。本发明还包括有效剂量分布在数个剂量单位中的情况。例如，如果 药物组合物配制成锭剂的形式，那么日有效剂量可以分配在2-20片锭剂中。
本发明还包括类黄酮和薄荷醇分别配制的情况，由此所述的药物组合物 包含两种单独的制剂，其可以同时给予或依次以任何顺序给予。然而，它们 优选同时给予。
类黄酮的有效剂量可以随有需要的个体和具体临床疾病而不同。通常， 有效剂量在5-5000mg每日的范围内。更优选地，每日的有效剂量在10 mg-4000mg，例如在30mg-3000mg，更优选在40mg-2000mg，更优选在 50mg-1000mg的范围内。
此外，所述的类黄酮的有效剂量可以是一种剂量，该剂量与5mg-5000 mg每日的曲克芦丁相当。
维脑路通或曲克芦丁或羟乙基芦丁混合物或其可药用的盐或功能衍生 物或金属螯合物的有效剂量通常在5-5000mg范围内。通常，例如对于一个 成人来说，每日的有效剂量在10mg-4000mg，例如在30mg-3000mg，优选 在40mg-2000mg，更优选在50mg-1000mg，更优选在50mg-500mg，最 优选在100-300mg的范围内。
薄荷醇的有效剂量随待治疗个体而变，并且通常在1mg-200mg每日的 范围内。优选地，对成人而言薄荷醇的日有效剂量在5mg-100mg，更优选 在10mg-50mg，更优选在15mg-40mg，更优选在20mg-35mg的范围内。
本发明类黄酮和薄荷醇的给药优选是在日间非常频繁的给药。如果薄荷 醇和类黄酮是单独配制的，那么类黄酮和薄荷醇的给药频率可以不同。因此， 日剂量可以每日在1-36次分离的剂量中单独给予，所述分离的剂量优选每 日2-24次，更优选每日3-12，例如每日5-8次，例如每日约6次。优选地， 同时给予前两个剂量。日剂量的具体数目可以与各自的给药方式以及所述症 状的严重程度有关。由于有理论认为：在患病期间，在受影响的粘膜中不断 产生与维持症状有关的单独的因子，因此优选的治疗是这样一种治疗，其中 所述的药物尽可能恒定地存在于粘膜中。
在一个实施方案中，本发明的含类黄酮和薄荷醇的药物组合物与第二种 治疗联用，所述第二种治疗例如抗病毒治疗(包括抗流感治疗如TaMiFlu)、 抗鼻炎治疗例如Picovir；或用抗体进行的抗链球菌治疗；或用干扰素(α、β 或γ)及其混合物的治疗。抗病毒药包括TamiFlu或其它神经氨酸苷酶抑制剂 或金刚乙胺或抗RSV抗体。所述治疗还可能是一种金属络合物或金属盐(参 见上文)。
在本发明的另一个实施方案中，所述第二治疗是给予一种抗微生物剂。 优选地，所述的抗微生物剂是特定且特异性的，然而所述的抗微生物剂也可 以是一种广谱抗生素。具体地，可给药抗微生物剂以治疗与细菌感染有关的 疾病。
金属络合物或金属盐的有效剂量将取决于具体的金属络合物或金属盐 以及待治疗的临床疾病。然而，通常每日给予0.1mg-1000g的金属。该金 属优选是锌。锌的有效剂量取决于所给予的锌组分的形式。优选每剂量给予 0.1mg-500mg的Zn2+，例如0.5mg-250mg，例如1mg-150mg，例如5mg-100 mg，例如10mg-50mg。如果所述的锌化合物是葡糖酸锌，那么每剂量给予 5mg-1000mg，更优选10mg-500mg，更优选10mg-100mg，更优选20mg-80 mg，更优选30mg-70mg，最优选约50mg的葡糖酸锌。如果所述的锌化合 物是PolaPreZinc，那么每剂量给予1mg-500mg，更优选5mg-250mg，更 优选10mg-100mg，最优选25mg。
类黄酮、薄荷醇和金属盐和/或金属络合物可以以单独剂型或混合剂型的 形式同时给药，或者也可以以任何次序依次给药。
优选本发明的类黄酮和/或薄荷醇和/或金属以药物制剂的形式给药。因 此，本发明进一步提供用于药物应用的药物制剂，该药物制剂可以作为单一 组合物也可以作为试剂盒的一部分，所述的试剂盒包含本文定义的本发明的 类黄酮和薄荷醇以及任选的金属盐和/或金属络合物或其可药用的盐，以及可 药用的赋形剂。
本发明的药物制剂可以通过常规技术制备，例如如Remington所述：The Science and Practice of Pharmacy 1995，edited by E.W.Martin，Mack Publishing Company，19th edition，Easton，Pa，该药物制剂可以具有本领域熟练技术人员 所知的任何形式。例如，所述的药物制剂可以是溶液、分散液、乳液、悬浮 液、生物粘附性和非生物粘附性凝胶、粉剂、微球体、片剂、锭剂、嚼片、 口香糖剂、丸剂、胶囊、扁囊剂、栓剂、分散粒剂、滴剂、喷雾剂、气雾剂、 吹入剂、吸入剂、贴片、棒状剂、软膏、洗剂、乳剂、泡沫剂、植入物、糖 浆剂或香膏。本领域熟练技术人员基于药物递送系统领域中的常识可以选择 合适的给药形式。
人们相信，通过将本发明的类黄酮和薄荷醇直接局部施用到目的粘膜 上，可以获得最佳的效果。因此，粘膜的直接局部给药是优选的，更优选地 给药上呼吸道和/或下呼吸道和/或眼的粘膜，更优选给药口腔粘膜。通常应 将所述制剂分配到待治疗的具体疾病或症状中所涉及粘膜的主要部位。
在本发明的一种优选实施方案中，所述的药物组合物通过口服给予。因 此，所述的药物组合物优选选自锭剂、含片、胶囊、糖浆剂、片剂、棒状剂、 溶液、分散液、悬浮液、粉剂、微球体、嚼片、口香糖剂、喷雾剂或丸剂。
本发明还优选所述的药物组合物是一种缓释组合物的情况，即组合物中 活性成分的释放持续例如1分钟-24小时，例如1分钟-12小时，例如1分钟 -6小时，例如1分钟-1小时。
在本发明的一种优选实施方案中，所述的药物组合物是锭剂。
本发明的药物组合物通常包含可药用的赋形剂，该赋形剂可以是固体或 液体。优选地，这些可药用的赋形剂不是治疗活性成分，而是所述的赋形剂 可以是一种或多种可用作稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、结合 剂、防腐剂、润湿剂、片剂崩解剂的物质或者是一种胶囊化材料。这些赋形 剂包括药品级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡 萄糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、蔗糖、碳酸镁、西黄蓍胶、甲基纤 维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等等。在本发明的含义中，薄荷 醇不被认为是一种赋形剂。优选地，至少一种可药用的赋形剂是硬脂酸镁。 此外，所述的可药用的赋形剂可以是着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人 工和天然甜味料、分散剂、增稠剂、增溶剂等等。
在粉剂中，赋形剂优选是一种细碎粒状的固体，其与所述细碎粒状的活 性组分混合。在片剂中，可以将所述的活性组分与具有所需结合能力的赋形 剂以合适的比例混合，然后压制成所需的形状和大小。所述的粉剂和片剂优 选含有1-约70％的活性化合物。
适合口腔局部给药的制剂包括在调味基质(通常是蔗糖和阿拉伯胶或西 黄蓍胶)中含活性剂的锭剂；在惰性基质如明胶和/或甘油和/或蔗糖和/或阿拉 伯胶中含活性成分的软锭剂(pastille)；以及在合适的液体载体中含活性成分 的漱口剂。在一种优选实施方案中，所述的锭剂包含山梨醇。
本发明的化合物可以配制成经鼻给药的制剂。用常规方法，例如用滴管、 移液管或喷雾器将溶液或悬浮液直接应用到鼻腔中。所述制剂可以以单剂量 或多剂量的形式提供。在后一种使用滴管或移液管的情况中，这可通过给予 患者合适的、预定用量的溶液或悬浮液来实现。在喷雾剂的情况中，这可通 过例如有刻度的雾化喷雾泵(metering atomizing spray pump)来实现。
本发明的化合物可以配制成用于气雾剂给药的制剂，特别是给药呼吸道 并包括鼻内给药。化合物一般具有小的粒径，例如5微米或更小的数量级。 这种粒径可以通过本领域已知的方法获得，例如通过微粉化(micronization) 的方法获得。可将活性成分与合适的推进剂一起加压包装，所述的推进剂例 如氯氟碳化合物(CFC)如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，二氧 化碳或其它合适的气体。气雾剂还可以方便地含有表面活性剂如卵磷脂。药 物剂量可以通过计量阀进行控制。或者，活性成分可以以干粉形式提供，例 如化合物与合适粉剂基质如乳糖、淀粉、淀粉衍生物如聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 形成的粉末混合物。粉剂载体可以在鼻腔中形成凝胶。所述粉末组合物可以 以单位剂量形式存在，例如可以在胶囊或例如明胶的药筒或泡罩包装(blister pack)中，其中的粉剂通过吸入给药。
令人吃惊地是，本发明披露了虽然普通感冒通常是由上呼吸道和/或下呼 吸道感染所引起的，但是通过局部直接给药到口腔粘膜也可以有效地进行治 疗。由于通过局部直接给药到口腔粘膜对待治疗的个体是非常方便的，因此 通过所述粘膜直接给药是本发明的一个突出优点。此外，本发明披露了过敏 性鼻炎也可以通过将本发明的化合物直接给药到口腔粘膜进行治疗。因此， 本发明的化合物优选配制成能直接给药到口腔粘膜的锭剂、嚼片、口香糖剂、 滴剂、喷雾剂和气雾剂。最优选地，将本发明的化合物配制成能直接应用到 口腔粘膜的锭剂。
需要本发明的治疗的个体可以是任何个体，但是这样的个体优选是人。 所述个体通常具有与症状有关的、根据患者日记中公开的评分系统(参见实 施例)的得分，所述得分至少为4-5，例如至少6，优选至少10，更优选患者 具有至少15的得分，而得到为3分或更低的个体不被认为是有病的。一般 而言，得分在5-6之间或更低的人可以继续其工作。
在本发明的另一方面，所述治疗导致症状的严重程度降低，其对应于从 开始治疗起24小时内根据本文患者日记测定的得分降低了至少15％，例如 至少25％，更优选至少30％。治疗48小时后，所述得分优选在自所述治疗 开始的48小时内降低了至少20％，例如至少30％，例如约40％-60％，更优 选至少40％，更优选至少50％，更优选至少60％，更优选至少70％，尤其 特别优选至少75％。治疗72小时优选导致根据本文所述患者日记测量的得 分从开始治疗起的72小时内降低至少30％，优选至少40％，更优选至少50％， 更优选至少55％，更优选至少59％，更优选至少65％，更优选至少70％， 更优选至少80％，更优选至少85％，更优选至少90％。但是，症状得分的优 选降低取决于与待治疗的普通感冒有关的疾病、治疗方案以及个体患者。
具体优选至少一种症状，优选至少两种症状，更优选至少三种症状在72 小时治疗后基本消失，该症状选自鼻塞、鼻漏、咳嗽、头痛、打喷嚏或咽喉 痛。
已知类黄酮具有抗氧化性质，根据另一方面，所述的类黄酮是具有被测 定为104-109 M-1s-1的1O2淬火速率常数K的单氧淬火(singlet Oxygen Quenching)的一种类黄酮，。优选地，该速度是104-108M-1s-1。单氧淬火可以 使用本领域熟练技术人员已知的各种溶剂进行测定。优选地，所述的溶剂选 自CD3OD、CCl4和CH3OH(1∶3)的混合物、以及CH3CN。
实施例
实施例1
方法
病毒滴度
鼻病毒1A、鼻病毒15和鼻病毒39根据四唑盐(MTS)-方法(Berg等人， 1990)(Hansen等人，1989)进行滴定。将WISH细胞以3000细胞每孔接种到 一个微培养盘(micro tray)中，并在37℃、5％CO2保温过夜；第二天早上，分 别用在新鲜培养基中稀释10倍的鼻病毒1A、鼻病毒15或鼻病毒39替换该 培养基，然后将所述的培养盘在33℃保温4-5天；显微镜检验证实，细胞致 病作用(CytoPathogenic Effect)(CPE)得以充分发展(CPE等于100％)。在随后 的实验中，产生100％破坏的最低量的病毒(即：所述病毒的最高稀释度)被用 作″攻击病毒(chanllenge virus)″。为了在％破坏方面的定量CPE，在所有培养 物中加入MTS(Berg and Owen，2003)，在37℃(无CO2)培养3h后，如前述 在扫描仪中对该培养盘进行读数(Berg等人，1990)。在实验中包括没有感染 病毒的对照细胞培养物；由于这些细胞没有受到破坏，后者获得最高的OD； OD492值有赖于加入到不同孔中的病毒浓度，因此：100％CPE产生低的 OD(＜0.200)；相当于完全没有感染(对照细胞)的0％CPE产生高的 OD(＞1.200)。
干扰素滴定
干扰素滴定如下进行(参见Berg等人，1990)：将3.000 WISH细胞接种 到一个微培养盘中，第二天早上，用在含2％血清的新鲜培养基中稀释2倍 (0-30单位/ml储备液)的HuIFN-α-2b(Intron A)替换该培养基。培养过夜后， 用含攻击病毒(challenge virus)的新鲜培养基替换该培养基，并在33℃、 5％CO2培养3-5天，然后如实施例2所述那样进行处理。
实施例2.(图1A、1B、2A和2B)
实验：将1g纯薄荷醇(-)(来自Sigma)溶于3ml 100％乙醇中，在4℃保 存(薄荷醇储备液)。每次从所述瓶(来自供应商(当地药房(RH))，储存在4℃) 中制备日本薄荷油(Janpanese peppermint oil)(PPO)。这两种储备液以本文/图 中所示的稀释度(最终)使用。
将1∶800稀释度的薄荷醇(-)加入到满底的单层细胞培养物上的干扰素稀 释物中，获得如图1A和1B所示的干扰素单位/ml，然后加入稀释度10-2(图 1A)或10-2.5(图1B)(从RHV-39病毒贮备制备物稀释)的鼻病毒RHV-T-39， 细胞在33℃保温培养3-4天，直到病毒感染的对照培养物单独可造成100％ 破坏(如在显微镜中观察的)；加入MTS(3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-5-[3-羧基甲 氧基苯基]-2-[4-磺酰基]-2H-四唑)/PMS(吩嗪硫酸甲酯)，完整细胞中的脱氢酶 产生一种颜色，随后用ELISA扫描仪根据前述方法(Berg等人，1990；Hansen 等人，1989)测定这种颜色。用干扰素浓度作为横坐标，OD492读数作为纵标 度对结果进行绘图。
结果：下面的曲线(RHVT39，在图1a中)说明单个孔中病毒感染的变化。 可以看出，与没有感染的对照细胞(黑三角形：细胞对照组(-IFN))；上曲线) 相比，约为0.15的OD-水平相当于信号降低50倍。
结论：与未感染的对照细胞(参见在IFN＝0单位/ml时的保护水平)相比， 薄荷醇的存在产生达10-15％的显著的保护作用；
当干扰素在0-8单位/ml时，干扰素曲线+薄荷醇显著高于干扰素曲线， 表明一种特异性增强作用。
类似的结果还在低病毒浓度(10-2，5-图1b)时看出。
为了进一步阐述薄荷醇对人鼻病毒生长的影响，进行下列实验：分别在 存在或不存在各种稀释度的薄荷醇的情况下，用鼻病毒滴定在微培养盘中的 WISH细胞的单层，参见图2A：在1∶800的稀释度(由上述薄荷醇储备液制 备)，由于薄荷醇曲线在病毒的稀释度范围(102-103)位于明显更高的水平，保 护作用获得显著增加，与没有接受薄荷醇的病毒对照组相比，保护作用大致 相当于增加了50％。这种发现可重复出现，参见例如图2B，其显示在随后 的实验中表现出类似的结果。在所使用的全部三种鼻病毒(RHV 1A，17，和 39A)中都可以看见保护作用，参见(Berg等人，2003)。
图1A-2B的结论：上述实验表明，薄荷醇对鼻病毒生长本身具有一种直 接影响，因此可以被认为是在感染鼻病毒或其它已知引起普通感冒综合征的 相关上呼吸道病毒的人中发挥抗病毒活性。此外，还表明，已知在普通感冒 感染期间在人体被激活(Cate等人，1969)的天然干扰素系统，可以如最近由 Berg等人(Berg等人，2001)所述的相同方式一样被进一步加强。
实施例3(图3A，3B，和3C)
为了对日本薄荷油(PPO)与薄荷醇进行比较，进行了一系列如前段中所 述的模拟试验(analog experiment)：在微培养盘中的WISH细胞单层在存在或 不存各个稀释度的PPO的条件下用鼻病毒滴定，其中所述PPO在95％醇中 的日本薄荷油标准储备液(从the Rigshospitalets Pharmacy，Denmark提供)的 PBS(磷酸盐缓冲盐水)中稀释，所述滴定没有成功，因为PPO(在PBS中以 1∶100稀释)对WISH细胞具有相当大的毒性。此外，病毒稀释度和PPO在 PBS中的稀释度之间的剂量-应答曲线被证明是没有任何意义的，因为没能 观察到系统性减少或依赖性。当将没有预稀释的PPO直接加入到感染鼻病 毒的细胞培养物中时，解决了该问题。相反，当培养物用含具体稀释度的 PPO(在水中)的额外微培养盘进行保温培养时(两个培养盘在塑料薄膜中包 裹在一起并在33℃、含5％CO2/水的小盒中进行保温培养)，可以得到可重 复性的且有意义的结果。显然，来自PPO溶液的PPO的特定分压(specific partial pressure)产生的一定量的“PPO-气体”，其反过来被感染了鼻病毒培养 物的有关细胞培养物所吸收，而其本身在对照细胞培养物中不引起毒性问 题。因此，当在感染了所述病毒的细胞培养物中建立一种无毒PPO-环境时， 将200μl(用标准PPO在水中以1∶1000稀释后得到的)溶液充满的微培养盘与 具有细胞和病毒的微培养盘在一起保温被证明是非常有效的。治疗后，经 PPO治疗的孔具有可重复性的、低的但独特的PPO气味。
这样实验的结果表示在图3A中：对含有合适的孔中的相同病毒稀释物 的两个相同的微培养盘进行相同处理；一个培养盘在33℃、不含PPO、含 5％CO2的密闭箱中保温；另一个微培养盘与一个每个孔中充满 200μlPPO(1∶1000稀释)的微培养盘一起保温；两个微培养盘用塑料薄膜包 裹在一起，然后在密闭箱中在与前述箱相同的条件下保温，直到在对照细胞 培养物中形成特定的(distinct)CPE为止(3-4天后)，使用如以前(Berg等人， 1990；Berg等人，2001；Berg等人，2003)和下面所述的MTT/MTS-PMS技 术进行处理。正如所料的那样，随病毒稀释度增加，标准鼻病毒曲线(HRV 对照)以陡曲线上升，表明病毒感染有赖于接种物(innocculum)本身。在103.5 稀释度时，似乎不存在感染。然而，在PPO 1∶1000存在下(在″空″微托盘中) 平行病毒滴定曲线被证明是对病毒产生本身具有非常明显的影响，因为现在 不论所加入病毒的稀释度，病毒都充分产生(full production)；因此，微量 PPO(以气态形式被含有被感染细胞的孔所接受)的确能够明显增强所述产 生。这种现象过去没有在与PPO和鼻病毒有关的文献中描述过。
为了阐明PPO是否会对干扰素系统本身产生任何影响，用鼻病毒和 WISH细胞(Berg等人，2001)在存在或不存在PPO的情况下进行标准干扰素 滴定-参见上述实施例，如图3B和3C所示；结果直接表明，PPO还抑制IFN- 系统本身，尤其是在较低浓度范围(即：＜10单位/ml)时，并有赖于所使用的攻 击病毒浓度(参见10-2相对于10-2.5)。
使用不同的病毒(HRV 1A或HRV 14)观察到类似结果。因此，很有可能 其它RNA病毒，具体是属于呼吸病毒的RNA病毒将类似地与PPO反应。
结论：日本薄荷油(PPO)增加了鼻病毒39以及其它鼻病毒的生长并且下 调了天然人白细胞干扰素系统的保护作用。
实施例4(图4A、B、C、D)
普通感冒患者的治疗
为了评价该新的和令人惊奇的发现，在自然感染了普通感冒的患者中进 行数种体外研究。这些研究的目的是研究体外试验中PPO和薄荷醇间的显 著区别是否同样反映在在体内试验中。所述的研究基本上如专利申请WO 02/09699中所述那样进行，在此将WO 02/09699全部内容并入作为参考。
患者或用薄荷醇锭剂或用PPO锭剂进行治疗。
薄荷醇锭剂
50mg曲克芦丁
25mg葡糖酸锌
4-5mg(-)薄荷醇
882mg山梨醇
10mg硬脂酸镁
PPO锭剂
50mg veneruton
25mg葡糖酸锌
4-5mg(-)薄荷醇
882mg山梨醇
10mg硬脂酸镁
为了评价治疗效果，由患者填写下列患者日记，并计算症状得分。
患者日记
本图表优选应在晚上填写。针对以下症状记录你目前的状况。在下列图 表中，请通过在适当位置填写X值说明今天你的症状的强度(strength)：每种 症状都应该有一个得分：0表示没有任何症状；4表示最严重的所产生的症 状等；0＝没有症状；1＝极轻微症状；2＝令人不适的症状；3＝明显令人不适 的症状；4＝非常令人不适的症状   症状得分   0   1   2   3   4   咳嗽   头痛   声音嘶哑   流鼻涕   打喷嚏   鼻塞   咽喉痛   咽喉刺痒   不适   肌肉疼痛   发热
该治疗对你有任何副作用吗？   有□    无□
具体是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
除这种试验性治疗外，你还接受了任何其它的医学治疗或其它种类的治 疗吗？  有□    无□
具体是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿
上述图表优选用于鉴定需要本发明的治疗的人，并与其它治疗或安慰剂 的效果相比较。
总得分在3到5分或更低被视为正常状态。
————————————————————————————-——
这一部分中的大多数患者在开始出现典型的普通感冒症状后的24-30小 时内在医生办公室接受治疗；优选地，患轻微过敏性鼻炎等的患者被排除在 这些研究之外。要求每位患者每天填写患者日记(第0天＝看病的1st天)并且 按照下面方式给药：应将一剂锭剂放到患者的舌头上或舌头下，该锭剂应在 4-5分钟的最少时间内融化。(接下来的15-20分钟内没有喝水或进食)如有必 要，可以在30分钟后给药患者下一剂锭剂；每天总共给予5-7剂锭剂，相 当于最大日剂量。最后一剂锭剂应在睡觉前给予。治疗一般持续3-4天。
少数患者-由于他们通过电话返回报告，他们没有包括在封闭图表 (enclosed figure)中-在用薄荷醇-锭剂治疗后表现出以惊人的速度快速恢复， 这是由于小于5-6剂薄荷醇-锭剂就可以停止流涕(rhinoea)和咽喉痛-这种效 果在用PPO-锭剂治疗的类似患者中并没有观察到。
为了进一步定量研究用薄荷醇-锭剂治疗的效力，出现常见症状(没有发 烧，开始流涕，打喷嚏等等)后24-30h内向医生办公室报告的普通感冒患者 用薄荷醇锭剂如上所述治疗3-4天。
患者返回它们的日记，然后如图4A中所示评估具体症状得分(SS)。记 录下列结果：
图4A表示3名用薄荷醇锭剂治疗的患者的症状得分，其中在感染后 (p.i.)24h开始治疗。
表1.使用薄荷醇-锭剂的症状得分(SS)的减少(参照图4A)   治疗1天后的SS减少＝32％   治疗2天后的SS减少＝77％   治疗3天后的SS减少＝90％
与以前研究(一组用PPO-锭剂治疗的相似患者，使用相似的给药方案) 相比，这些结果更有利(参见表2和图4E)。本研究在以前的专利申请WO 02/09699，实施例7中有更详细的描述。8名患者用不含Zn2+的PPO-锭剂治 疗。12名患者用PPO-锭剂治疗。治疗在24-36h p.i开始。
上述3名患者的组(治疗在24h p.i.开始)、2名患者的组(治疗在48h p.i. 开始)的症状得分也表示在图4B中。可以看出，在第3天，两组的SS差不 多都减少90％。过敏反应以及7天p.i.开始的治疗明显改变结果，因此一般 被排除在常规方案之外。
对图4B中的两组患者以5名患者每组(在图4C中显示)进行进一步的差 别症状得分研究：在用薄荷醇-锭剂治疗3天后，3种症状似乎100％被消除。 这一结果在使用PPO-锭剂进行的平行治疗中没有观察到，参见图4D，其中 一些症状治疗3天后保持。
表2.使用薄荷油(PPO)-锭剂导致的症状得分(SS)减少(参见图4E)   治疗1天后的SS减少＝34％   治疗2天后的SS减少＝71％   治疗3天后的SS减少＝80％
此外，用薄荷醇-或PPO-锭剂治疗的两组之间的SS变化(比较图4D和 4E的结果)分别明显小于薄荷醇-治疗组，因为记录到更恒定和快速的应答。 薄荷醇-锭剂的另一优点是在薄荷醇锭剂中葡糖酸锌的金属味几乎被消除。
结论：体外发现表明，薄荷醇对鼻病毒(-1A，-14，和-T39)具有具体的 抗病毒作用。这些发现可以解释为什么ImmuTroxZn-薄荷醇锭剂似乎比 ImmuTroxZn-PPO锭剂在治疗普通感冒方面更有效。
实施例5
一名具有常见普通感冒症状(包括轻微发烧)的患者用一种具体锭剂治 疗，所述锭剂不包含锌，含有比实施例4的薄荷醇-锭剂中的曲克芦丁(150mg/ 每锭)高3倍的曲克芦丁以及5mg薄荷醇(ImmuTrox(150mg)薄荷醇(5mg))。 给药如实施例4所述进行。
给药头两剂锭剂后，咽喉痛在30分钟内消失；咳嗽和鼻炎基本上在2-3 h内减轻；在第1天总共给予4剂锭剂，并且在第2天和第2天继续予治疗(每 天4剂锭剂)：在治疗的第3天，超过80-90％的常见症状消失了。
结论：仅包含曲克芦丁和薄荷醇的锭剂在普通感冒的治疗中也有效。
实施例6
对具体的草种(草地看麦娘(Alopecurus pratensis)等)过敏的男性患者(MT) 在过敏后3-4天来看看病时也显示普通感冒，并且所述感冒已经开始；该患 者对所有的流涕感到不快并且伴有咳嗽。该患者用如实施例4中所述的 ImmuTroxZnMent锭剂(50mg曲克芦丁，25mg葡糖酸锌，以及5mg薄荷醇) 治疗，并在3-4天后返回调查表(protocol)；在开始治疗的当天，SS是25； 24h后，SS降低为7；48h后，SS降低为1；72h后，SS＝0。该患者注意到， 他的过敏症状显著减轻了。数周后，该患者报告说，他对草的过敏反应已经 改变了并且不再那么令人讨厌了。
结论：ImmuTroxZnMen锭剂似乎还具有直接抗过敏作用。该观察后来 被患过敏性鼻炎等的其他患者所证实。
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