本发明的目的在于：提供一种久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药制剂的 质量控制方法，这种方法向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的 手段、技术方法等等；以便更好的控制该中药制剂的质量，保证用药的安全性， 能够更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产 品质地。
本发明涉及黄芪药材或其提取物、女贞子药材或其提取物按照一定的比例 组方制成的中药制剂的质量控制方法，主要包括鉴别、含量测定等项目，它是 将黄芪对照药材、乙酰黄芪苷I、黄芪苷I、黄芪苷II、黄芪苷III、黄芪甲苷、 异黄芪苷I、异黄芪苷II、黄芪皂苷乙、环黄芪醇、大豆皂苷I、芒柄花黄素、 毛蕊异黄酮、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、鼠李柠檬素苷元、 异槲皮苷、棉毛黄芪甲苷、棉毛黄芪苷VI、棉毛黄芪苷II、女贞子对照药材、 齐墩果酸、熊果酸、女贞苷、红景天苷、丁香苷、苦杏仁苷酶、转化酶、乌索 酸、D-甘露醇、A-乌索酸甲酯、萎陵菜酸、胡萝卜苷、己六醇、木犀草素-7-O-B-D- 葡萄糖苷、对羟基苯乙醇-B-D-葡萄糖苷、女贞子酸、阿拉伯糖、葡萄糖、硬脂 酸、油酸、白桦脂醇、磷脂、橄榄苦苷、8-表金银花苷、乙酰齐墩果酸、乙酰 熊果酸、女贞苷酸、β-谷甾醇、有旋-花旗松素、外消旋圣草素、10-羟基 橄榄苷中的全部或部分品种作为该中药制剂的质量控制的检测指标。
本发明所述的一种久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药制剂的质量控制方 法，是将黄芪甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、黄芪对照药 材、葡萄糖、齐墩果酸、熊果酸、红景天苷、甘露醇、己六醇、乌索酸、β- 谷甾醇、女贞子对照药材中的全部或部分品种作为该中药制剂的鉴别方法、含 量测定方法的检测指标。
本发明所述的一种久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药制剂的质量控制方 法，采用以下方法中全部或部分作为质量控制的方法：
对于黄芪的鉴别方法可以采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶GF254或 硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以黄芪对照药材、黄芪 甲苷、山柰素、芦丁、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素、葡萄糖中全部或部分品种 作为对照品，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲 烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，展开剂可以为乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、 三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、环己烷、苯、冰醋酸、 石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光 灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以硫酸乙醇溶液、浓硫酸溶液、 茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化铁乙醇溶液等溶液显色的方法；
对于黄芪的鉴别方法还可以采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器与 高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷 或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，使用C8或C18类型填料的色谱柱， 以乙睛、水、甲醇中的一种或一种以上的溶剂在常规的合适比例条件下为流动 相，以黄芪对照药材、黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、槲皮苷、异鼠李素中全部 或部分品种作为对照品，检测波长在200～600nm范围内；
对于女贞子的鉴别方法也可以采用薄层色谱法，一般使用硅胶G或硅胶 GF254或硅胶H为薄层板，点样量为0.5～30μl之间任一体积，以齐墩果酸、熊 果酸、乌索酸、红景天苷、甘露醇、槲皮苷、己六醇、乌索酸、槲皮素、葡萄 糖、β-谷甾醇、女贞子对照药材中全部或部分品种作为对照品，样品前处理 包括直接取样或者是以甲醇或三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚或无水乙醇或醋酸乙 酯提取后再浓缩的方法，展开剂可以为乙酸乙酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲 烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲酸、环己烷、苯、冰醋酸、石油 醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制而成，检视条件包括紫外光灯下 检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以硫酸乙醇溶液、浓硫酸溶液、茴 香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化铁乙醇溶液等溶液显色的方法；
对于女贞子的鉴别方法还可以采用高效液相色谱法或蒸发光散射检测器 与高效液相色谱联用法，样品前处理包括直接取样或者是以甲醇或三氯甲烷或 二氯甲烷或乙醚或无水乙醇或醋酸乙酯提取后再浓缩的方法，使用C8或C18 类型填料的色谱柱，以乙睛、水、甲醇中的一种或一种以上品种溶剂在常规的 合适比例条件下为流动相，以齐墩果酸、熊果酸、红景天苷、乌索酸、甘露醇、 槲皮苷、槲皮素、己六醇、β-谷甾醇、女贞子对照药材中全部或部分品种作 为对照品，检测波长在200～600nm范围内。
本发明所述的一种久病虚损、气阴不足的贞芪扶正中药制剂的质量控制方 法，对于鉴别技术，最好选用薄层色谱法鉴别黄芪药材，使用硅胶G薄层板， 点样量为0.5μl～30μl之间某一体积，以黄芪对照药材、黄芪甲苷作为对照品， 样品前处理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、正丁醇、苯、 甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一种或者是它们任意混合溶剂提取杂质， 然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一种或者是它们任意混合溶剂提取后再 浓缩方法，再用正丁醇、水、氨试液提取精制的方法，展开剂为环己烷、丙酮、 乙酸乙酯按照常规比例配制而成，检视条件为喷以2～30％硫酸乙醇显色后紫外 下检视的方法；
也可以采用薄层色谱法鉴别女贞子药材，使用硅胶G薄层板，点样量为 0.5μl～30μl之间某一体积，以女贞子对照药材、红景天苷、葡萄糖、齐墩果酸 作为对照品，样品前处理是三氯甲烷、二氯甲烷、醋酸乙酯、丙酮、甲酸乙酯、 正丁醇、苯、甲苯、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚中的一种或者是它们任意混合 溶剂提取杂质，然后用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一种或者是它们任意混合 溶剂提取后再浓缩方法，再用正丁醇、水、氨试液提取精制的方法，展开剂为 环己烷、丙酮、乙酸乙酯按照常规比例配制而成，检视条件为喷以2～30％硫酸 乙醇显色后紫外下检视的方法；
本发明所述的一种久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药制剂的质量控制方 法，最佳的鉴别方法是采用薄层色谱法，使用硅胶G薄层板，点样量为0.5μl～ 30μl之间某一体积，以黄芪对照药材和女贞子对照药材为对照品，样品前处理 是用水超声使其溶解，上清液再用正丁醇提取，正丁醇提取液蒸干，残渣用甲 醇或乙醇溶解，作为供试品溶液，展开剂为环己烷、丙酮、乙酸乙酯按照常规 比例配制而成，检视条件为喷以5～15％硫酸乙醇在加热条件显色后日光灯下检 视的方法。
本发明所述的一种久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药制剂的质量控制方 法，对于含量测定，有以下方法可供选择使用，包括：
方法1：以可见紫外分光光度法测定本品中的总皂苷含量，样品前处理包 括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的 方法，测定波长为200～600nm中某一波长，采用标准曲线法或对照品法测定， 常用对照品为黄芪甲苷。
方法2：以可见紫外分光光度法测定本品中的总黄酮含量，样品前处理包 括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的 方法，测定波长为200～600nm中某一波长，采用标准曲线法或对照品法测定， 常用对照品为槲皮苷或槲皮素中的任何一种；
方法3：以可见紫外分光光度法测定本品中的总糖含量，样品前处理包括 直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方 法，测定波长为200～650nm中某一波长，采用标准曲线法或对照品法测定，常 用对照品为葡萄糖；
方法4：采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中黄芪甲 苷、山柰素、槲皮素、异鼠李素中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样 或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，使用C8 或C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液 中的一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在 200～600nm范围内；
方法5：采用薄层色谱扫描法测定本品中黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、异 鼠李素中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯 甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H 为薄层板，点样量为0.5～30ul之间任一体积，以黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、 异鼠李素中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙 酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，展开剂可以为乙酸乙 酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲 酸、环己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制 而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以 硫酸乙醇溶液、浓硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化铁乙 醇溶液等溶液显色后用薄层扫描仪进行扫描的方法；
方法6：采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中齐墩果 酸、熊果酸、红景天苷、槲皮素、葡萄糖、甘露醇、槲皮苷、己六醇、乌索酸、 β-谷甾醇、女贞子对照药材中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或 者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，使用C8或 C18类型填料的色谱柱，以甲醇、水、乙睛、冰醋酸、四氢呋喃、磷酸溶液中的 一种或一种以上品种溶剂在常规的合适比例条件下为流动相，检测波长在200～ 600nm范围内；
方法7：采用薄层色谱扫描法测定本品中齐墩果酸、熊果酸、红景天苷、 槲皮素、葡萄糖、甘露醇、槲皮苷、己六醇、乌索酸、β-谷甾醇、女贞子对 照药材中全部或部分品种，样品前处理包括直接取样或者是以醋酸乙酯或三氯 甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩方法，使用硅胶G或硅胶GF254或硅胶H 为薄层板，点样量为0.5～30ul之间任一体积，以黄芪甲苷、山柰素、槲皮素、 异鼠李素中全部或部分品种作为对照品，样品前处理包括直接取样、以醋酸乙 酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取后再浓缩的方法，展开剂可以为乙酸乙 酯、甲醇、水、正己烷、三氯甲烷、丙酮、正丁醇、二乙胺、吡啶、甲苯、甲 酸、环己烷、苯、冰醋酸、石油醚中的一种或一种以上试剂按照一定比例配制 而成，检视条件包括紫外光灯下检视、氨气熏后再置紫外光灯下检视、或喷以 硫酸乙醇溶液、浓硫酸水溶液、茴香醛硫酸溶液、10％硫酸溶液、5％三氯化铁乙 醇溶液等溶液显色后用薄层扫描仪进行扫描的方法。
本发明所述的一种久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药制剂的质量控制方 法，最好选用以下方法的一种或全部作为含量测定的方法：
方法1：采用高效液相色谱法测定本品中红景天苷，样品前处理以用氯仿、 无水乙醇、甲醇采用索氏提取或超声波处理的提取方法，使用C18类型填料的色 谱柱，流动相以乙腈和水用低压梯度洗脱，波长为250～350nm。
方法2：采用蒸发光散射检测器与高效液相色谱联用法测定本品中黄芪甲 苷，样品前处理以水、无水乙醇、甲醇采用索氏提取或超声波处理的提取，然后 用醋酸乙酯、正丁醇精制的方法，再用氨试液纯化后大孔吸附树脂柱洗脱精制， 然后洗脱液水浴蒸干，残渣用甲醇或乙醇中的一种溶解的方法，使用C18类型 填料的色谱柱，以乙睛、水在常规的合适比例条件下为流动相。
与现有技术相比，本发明提供的质量控制方法能更好的控制一种久病虚损， 气阴不足的贞芪扶正中药制剂的产品质量，保证用药的安全性，使用本发明后， 从生产开始、选用原材料，到每一个生产过程的工艺步骤均必须严格按照工艺 规程执行，能够保证药物制成品的质量；我们在进行试验时发现：采用本发明 就会要求选用黄芪、女贞子药材的等级必须达到一级以上，否则制成品会出现 不合格的情况；这样更有利于指导生产，使工艺控制更加严格合理，让消费者 全面认识产品品质、放心使用这类药品。在现有贞芪扶正胶囊质量标准中，只测 定了黄芪甲苷的含量，采用的薄层色谱扫描法灵敏度低，误差大，使用紫外检测 器在黄芪甲苷的紫外末端吸收处测定含量，由于制剂成分复杂，需进行梯度洗脱， 色谱条件苛刻，加之对黄芪甲苷灵敏度低，重复性差，而且已有标准中没有收载 女贞子中有效成分的含量测定。采用本发明的检测方法测定，提高了黄芪甲苷测 定的灵敏度，同时也提高了结果的准确度和精密度；而且增加了女贞子的含量测 定，使该中药制剂更易于控制。因此，本申请人经过的一系列考察研究，采用 高效液相色谱-蒸发光散射检测器法进行黄芪中黄芪甲苷的含量测定，结果分离 度好、重现性好、回收率高，得到的图谱能够很好的检测产品质量；同时，由 于贞芪扶正中药制剂制备常用水提工艺，以女贞子为主药的中药制剂常以脂溶 性的齐墩果酸作为质量控制指标，齐敦果酸为酯溶性物质，因此含量很低，测定 含量不具备代表性；考虑到贞芪扶正中药制剂为水提工艺，因此选择水溶性有效 成分红景天苷作为其质量控制指标。红景天苷元及其葡萄糖苷具有抗衰老、抗 寒冷、抗微波辐射等作用，所以我们以红景天苷为对照品建立了测定贞芪胶囊中 红景天苷的高效液相色谱法，更好地控制贞芪扶正制剂的质量。所以本发明选 定了一系列的成分和方法作为控制、检测产品质量的技术手段，使贞芪扶正中 药制剂的生产技术有了保障，得到的制剂更加可靠，达到了发明的目的。
为证明利用本发明提供的质量控制方法能更好的控制一种贞芪扶正中药制 剂的产品质量，得到的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验；
实验例1  黄芪甲苷含量测定的方法学考察
1.1仪器条件：岛津高效液相色谱仪，LC-2010AHT；蒸发光散射检测， ELSD2000。
1.2试药：乙腈为色谱纯，甲醇、醋酸乙酯、正丁醇、氨水均为分析纯，氢 氧化钾为化学纯，水为重蒸水；黄芪甲苷(中国药品生物制品检定所提供，供含 量测定用)，样品贞芪扶正胶囊(贵州信邦制药股份有限公司，批号：20060101)。
1.3色谱条件：色谱柱：迪玛ODS C18柱；流动相：乙腈-水(37：63)柱 温：25℃；流速：0.5ml/min；ELSD漂移管温度：100℃；载气流速：2.7L/min；进 样量：10ul。
1.4系统适应性试验
分别取黄芪甲苷对照品，贞芪扶正胶囊供试品溶液缺黄芪药材的阴性空白 溶液注入色谱仪，在记录的色谱图中看，黄芪甲苷的保留时间为12.1分钟，色 谱峰的对称因子为1.00，阴性空白色谱图在黄芪甲苷位置处无峰，黄芪甲苷与其 相近的其他峰分离度完全(分离度＞1.5)，即本实验条件下黄芪甲苷与其他组分 分离完全。理论板数以黄芪甲苷峰计算，应不低于4000。
1.5供试品溶液的制备
取贞芪扶正胶囊10粒，倾出内容物，混匀，精密称量约0.8g，置50ml锥形瓶中， 加甲醇25ml浸泡过夜，超声1h，过滤并用少量甲醇洗涤残渣，蒸干回收甲醇，残渣 加甲醇适量洗涤，定容到5ml量瓶中，用0.45um微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
1.6标准曲线及线性范围
1.6.1.标准溶液的制备精密取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解，制成每 1ml含黄芪甲苷0.4888mg的对照品溶液。
1.6.2.标准曲线的绘制精密吸取上述对照品溶液4ul、8ul、12ul、16ul、20ul、 24ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱，结果见表1，以峰面积A的对数对质量数X(μ l)的对数进行线性回归计算，得线性回归方程为：LgX＝0.648334LgAx-3.24309， r＝0.99954(黄芪甲苷在1.9552ug～11.7312ug范围内线性关系良好)。
表一  黄芪甲苷线性关系考察
实验次数   1   2   3   4   5   6 进样量(ug) 峰面积A   1.9552   280069   3.9104   812960   5.8656   1618628   7.8208   2438434   9.776   3244520   11.7312   4470872
1.7精密度实验
取贞芪扶正胶囊内容物，按1.5项下供试液的制备方法制备供试液，重复 进样6次，每次10ul，测定峰面积，结果见表二，黄芪甲苷的平均峰面积为 1039616；RSD为1.98％。
表二 黄芪甲苷测定的精密度试验
进样次数 1  2  3  4  5  平均值 RSD(％) 黄芪甲苷 峰面积 1015718  1029926  1033953  1048622  1069860  1039616 1.98
1.8稳定性试验
取贞芪扶正胶囊内容物，按1.5项下供试液的制备方法制备供试液，分别 于0h、2h、4h、8h、12h进样测定黄芪甲苷峰面积，计算结果见表三，黄芪甲 苷的平均峰面积为1049610；RSD为1.79％，说明供试液在12小时内稳定性良好。
表三 贞芪扶正胶囊中黄芪甲苷的稳定性试验
测定时间(h) 0  2  4  8  12   平均值 RSD(％) 黄芪甲苷 峰面积 1020252  1045375  1051908  1061310  1069203   1049610 1.79
1.9重现性试验
取同一样品按1.5项下供试品溶液的制备方法制备6份供试液，分别进样， 测定黄芪甲苷的峰面积，计算含量，RSD为2.3％。
1.10回收率试验
采用加样回收法，分别精密称取6份已测定含量的贞芪扶正胶囊样品(批 号：20060301，黄芪甲苷含量为1.46mg/g)约0.9g，精密加入黄芪甲苷 (0.2630mg/ml)对照品溶液5ml，置具塞锥形瓶中，置水浴挥干溶剂，再照含量 测定项下供试液的制备方法制备，分别吸取20ul注入色谱仪，记录峰面积，以 外标对照法计算样品的平均回收率为99.22％，相对偏差为1.76％，本法加样回 收率良好，结果见表四。
表四 贞芪扶正胶囊中黄芪甲苷的回收率试验
样品量 (g)   含黄芪甲苷   量(mg)   加入黄芪甲苷   量(mg)   测得黄芪甲苷   量(mg)     回收率     (％)   平均回收率   (％)   RSD   (％) 0.9062 0.9079 0.9113 0.9021 0.8971 0.9013   1.3231   1.3255   1.3305   1.3171   1.3098   1.3159   1.3150   1.3150   1.3150   1.3150   1.3150   1.3150   2.6141   2.6281   2.6808   2.6158   2.5994   2.6118     98.17     99.06     102.68     98.76     98.07     98.55   99.22   1.76
1.11样品的含量测定
取贞芪扶正胶囊10批样品，按1.5项下供试品溶液的制备方法制备供试液， 进行含量测定结果见表五。
表五 10批样品中黄芪甲苷含量测定结果
 批号     黄芪甲苷含量mg/g     平均值mg/g     RSD％     1     2  20060301  20060102  20051201  20060201  20060502  20060601  20060701  20060401  20060801  20070101     1.4     1.46     1.33     1.35     1.42     1.38     1.30     1.39     1.41     1.40     1.37     1.44     1.32     1.37     1.41     1.41     1.33     1.37     1.43     1.32     1.38     1.45     1.33     1.36     1.42     1.40     1.32     1.38     1.42     1.33     1.5％     0.98％     0.53％     1.04％     0.5％     1.5％     1.6％     1.0％     1.0％     1.0％
实验例2  红景天苷含量测定的方法学考察
2.1仪器条件：岛津高效液相色谱仪，LC-2010AHT。
2.2试药：甲醇(色谱纯、分析纯)，乙腈(色谱纯)，氯仿(分析纯)，水为高 纯水；红景天苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用)，样品 贞芪扶正胶囊(贵州信邦制药有限公司，批号：20060101)。
2.3色谱条件：色谱柱：迪玛ODS C18柱；流动相：乙腈-水溶液(20∶80)；流速： 1.0ml/min；柱温：30℃；进样量：10ul；检测波长278nm。
2.4系统适应性试验
分别取红景天苷对照品，贞芪扶正胶囊供试品溶液缺女贞子药材的阴性空白 溶液注入色谱仪，在记录的色谱图中看，红景天苷的保留时间为11.5分钟，阴 性空白色谱图在红景天苷位置处无峰，红景天苷与其相近的其他峰分离度完全 (分离度＞2.0)，即本实验条件下红景天苷与其他组分分离完全。理论塔板数以 红景天苷峰计在4000以上。
2.5线性关系考察
2.5.1供试溶液的制备
取贞芪扶正胶囊10粒，倾出内容物，混匀，精密称量约0.8g，置50ml锥形瓶中， 加甲醇25ml浸泡过夜，超声1h，过滤并洗涤，蒸干回收甲醇，残渣加甲醇适量洗涤， 定容到5ml量瓶中，用0.45mg微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
2.5.2标准溶液的制备
精密取红景天苷对照品适量，加甲醇溶解，制成每1ml含红景天苷0.2mg 的对照品溶液。
2.5.3标准曲线的绘制
分别精密吸取上述红景天苷对照品溶液2ul，4ul，8ul，10ul 12ul，16ul，20 ul注入液相色谱，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量(ul)为横坐标绘制标 准曲线，回归方程为A＝269158.5625C+13014.65，相关系数R＝0.9999，红景天苷在 0.4～4ug范围内呈良好的线性关系。
2.6精密度试验
取贞芪扶正胶囊样品按2.5.1方法制备供试品溶液，吸取10ul，重复进样6次， 测定样品中红景天苷的含量见表六，RSD为1.2％，测定方法精密度良好。
表六 红景天苷含量测定的精密度试验
进样次数  1   2   3   4   5   6   平均值     RSD(％) 红景天苷的含量  0.73   0.72   0.72   0.71   0.71   0.73   0.72     1.2％
2.7稳定性试验
取贞芪扶正胶囊内容物，按2.5.1项下供试液的制备方法制备供试液，分 别于0h、1h、2h、4h、8h小时进样10μl，测定峰面积的RSD为2.2说明供试品 溶液在8h内稳定性良好。
2.8重复性试验
取贞芪扶正胶囊内容物，制备方法同2.5.1，平行制备5份供试液，分别进 样10μl，进样，测定含量。计算结果红景天苷的平均含量为0.71mg/g，RSD为 2.4％，测定方法重复性良好，结果见表七。
表七 红景天苷含量测定的重复性试验
进样次数 1   2   3   4   5     平均值     RSD(％) 红景天苷的含量 0.73   0.72   0.72   0.71   0.71     0.71     1.7％
2.9回收率试验
取已知含量的贞芪扶正胶囊内容物，精密称取约0.4g，5份，分别加入对照品 溶液1.5ml，按2.5.1项下制备供试品溶液，分别吸取供试品溶液及红景天苷对照 品溶液10μl注入液相色谱仪，记录峰面积，以外标对照法计算样品的平均回收率 为98.8％，RSD为0.7％，本法加样回收率良好，结果见表八。
表八 贞芪扶正胶囊中红景天苷回收率测定结果
    样品含量(mg)     加入量(mg)     测得量(mg)     回收率     平均回收率     RSD(％)     0.311     0.309     0.312     0.318     0.311     0.3306     0.3306     0.3306     0.3306     0.3306     0.6406     0.6350     0.6353     0.6446     0.6390     99.7     98.6     97.8     98.8     99.2     98.8     0.7
2.10样品测定
按前述方法制备供试液和对照溶液，分别进样10μl，记录色谱图，测定峰面积， 按外标法计算含量，10个批样品中红景天苷含量测定结果见表九。  
表九 10批样品中红景天苷含量测定结果
 批号     含量(％)     平均值mg/g     RSD％     1     2  20060301  20060201  20051201  20050102  20060502  20050601  20060701  20060801  20060401  20051001     0.71     0.70     0.67     0.72     0.76     0.73     0.69     0.74     0.74     0.68     0.69     0.69     0.66     0.75     0.74     0.71     0.71     0.75     0.77     0.69     0.71     0.695     0.665     0.735     0.75     0.72     0.70     0.745     0.755     0.685     2.0％     1.0％     1.1％     2.9％     1.9％     2.0％     2.0％     0.9％     2.8％     1.0％
具体实施例
实施例1  一种用于久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药胶囊剂的质量控制 方法，主要包括鉴别、含量测定等项目。
1、成分：
黄芪1870g  女贞子935g
2、制法：以上两味，将黄芪、掏洗好的女贞子药材投入多功能提取罐内， 加水煎煮三次，第一次加水量为药材的10倍量，煎煮2小时；第二、三次加水 量均为药材的8倍量，分别煎煮1小时，超滤，合并提取液，浓缩至相对密度 为1.07～1.09(50℃)清膏，清膏进行干燥，粉碎。将上述浸膏粉加入适量辅料， 混合均匀，制粒，干燥装胶囊，制成900粒，即得。
3、鉴别：
(1)取本品内容物10g，置具塞锥形瓶中，加水50ml，密塞，超声使其溶 解，离心(3000转每分钟)5分钟，取上清液30ml置分液漏斗中，用水饱和的 正丁醇提取3次(25ml，20ml，20ml)，合并正丁醇提取液，氨试液提取2次(25ml， 20ml)，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解，离心，作为供试品 溶液。另取黄芪对照药材2g，加水100ml煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至约20ml， 用水饱和的正丁醇提取3次(25ml，20ml，20ml)，合并正丁醇提取液，氨试液 提取2次(25ml，20ml)，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解， 离心，作为黄芪对照药材溶液。取女贞子对照药材1g，同法制得女贞子对照药 材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供 试品溶液10μl及两种对照药材溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 环己烷-丙酮-乙酸乙酯(5∶2∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸 乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相 应的位置上，显相同颜色的斑点。
4、含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。
色谱条件与系统适应性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水 (32∶68)为流动相；用蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于 4000。
对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg 的溶液，混匀，即得。
供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混合均匀，研细，取约1.75g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水25ml，超声使其溶解，取出，放冷，离心，精 密量取上清液10ml，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次(25、20、20、20ml)， 合并正丁醇提取液，用氨试液提取3次(20、20、20ml)，弃去氨试液，正丁醇液蒸干， 残渣加水5ml，使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以 水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗 脱，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，加甲醇至刻度， 摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪， 测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
本品含黄芪按黄芪甲苷(C11H68O14)计，每粒不得少于0.3mg。
实施例2一种用于久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药胶囊剂的质量控制方法， 主要包括鉴别、含量测定等项目。
1、处方：
黄芪1666g  女贞子833g
2、制法：以上两味，将黄芪、掏洗好的女贞子两味药材投入多功能提取罐 内，加水煎煮三次，第一次加水量为药材的10倍量，煎煮2小时；第二、三次 加水量均为药材的8倍量，分别煎煮1小时，超滤，合并提取液，浓缩至相对 密度为1.07～1.09(50℃)清膏，清膏进行干燥，粉碎。将上述浸膏粉加入适量辅 料，混合均匀，制粒，干燥装胶囊，制成800粒，即得。
3、鉴别：
(1)取本品内容物5g，加氯仿-乙醚(1∶1)20ml，超声30分钟，弃去氯仿- 乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次，每 次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水洗 涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作为 供试品溶液。另取黄芪对照药材同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照品 加甲醇制成每1ml含2mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液10ul， 供试品溶液15ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)， 10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇 溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视， 供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑 点。
(2)取本品内容物5g，加水30ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣 加无水乙醇-氯仿(3∶2)混合液1ml溶解，作为供试品溶液。另取女贞子对照 药材同法制成对照药材溶液。再取红景天苷对照品加甲醇制成每1ml含2mg的 溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液10ul，供试品溶液15ul，分别点于 同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(5∶2∶1)为，展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日 光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上， 显相同颜色的斑点。
4.含量测定
(1)黄芪甲苷照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动 相：乙腈-水(37∶63)；流速：0.5ml/min；蒸发光散射检测：ELSD漂移管温度：100 ℃；载气流速：2.7L/min；进样量：10ul。
对照品溶液制备  精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含 0.4mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品内容物1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密 加入2％KOH-甲醇50ml，回流1h，甲醇提取液蒸至尽干，加水20ml使溶解后，转移 至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml；合并醋酸乙酯液，加水15ml洗 涤，合并水液；用水饱和正丁醇提取4次，每次20ml；合并正丁醇提取液，用氨试 液洗涤3次，每次20ml；弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解转移至 5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱 仪，测定，即得。
本品含黄芪甲苷(C11H68O14)计，每粒不得少于0.3mg。
(2)红景天苷照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定
色谱条件系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％磷酸 -乙腈(80∶20)为流动相；流速：1ml/min；检测波长278nm；柱温30℃。理论 板数以人红景天苷峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备  精密称量红景天苷对照品约5mg，置25mL量瓶中，先加 适量甲醇溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，备用。
供试品溶液的制备  取10粒胶囊，倾出内容物，混匀，精密称量约0.8g，置 50mL锥形瓶中，加甲醇25mL浸泡过夜，超声1h，过滤并洗涤，蒸干回收甲醇，残渣 加甲醇适量洗涤，定容到5mL量瓶中，用0.45um微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
测定法  分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色 谱仪，测定，即得。
本品含红景天苷计，每粒不得少于0.2mg。
实施例3一种用于久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药颗粒剂的质量控 制方法，主要包括鉴别、含量测定等项目。
1、处方：
黄芪2500g 女贞子1225g
2、制法：以上两味，将黄芪、掏洗好的女贞子两味药材投入多功能提取罐内， 加水煎煮三次，第一次加水量为药材的10倍量，煎煮2小时；第二、三次加水量 均为药材的8倍量，分别煎煮1小时，超滤，合并提取液，浓缩至相对密度为1.07～ 1.09(50℃)清膏，清膏进行干燥，粉碎。将上述浸膏粉加入适量辅料，混合均匀， 制粒，干燥，分装，制成600袋，即得。
3、鉴别：
(1)取本品内容物10g，加甲醇-25％盐酸溶液(4∶1)的混合溶液50ml置 水浴中加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为供试 品溶液。另取黄芪对照药材同法制成对照药材溶液。再取槲皮素对照品加甲醇 制成每1ml含2mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液10ul，供试品 溶液15ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)，10℃以 下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液， 在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品 色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。
(2)取本品内容物10g，加水50ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加无水乙醇-氯仿(3∶2)混合液1ml溶解，作为供试品溶液。另取女贞子对 照药材同法制成对照药材溶液。再取红景天苷对照品加甲醇制成每1ml含2mg 的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液10ul，供试品溶液15ul，分别点 于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(5∶2∶1)为，展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日 光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上， 显相同颜色的斑点。
4.含量测定
(1)黄芪甲苷照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动 相：乙腈-水(37∶63)；流速：0.5ml/min；蒸发光散射检测：ELSD漂移管温度：100 ℃；载气流速：2.7L/min；进样量：10ul。
对照品溶液制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含 0.4mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取颗粒剂5袋，倾出内容物，混匀，精密称量约10g，置具 塞锥形瓶中，精密加入2％KOH-甲醇50ml，回流1h，甲醇提取液蒸至尽干，加水 20ml使溶解后，转移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml；合并醋酸乙 酯液，加水15ml洗涤，合并水液；用水饱和正丁醇提取4次，每次20ml；合并正丁 醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20ml；弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇 使溶解转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱 仪，测定，即得。
本品含黄芪甲苷(C11H68O14)计，每袋不得少于0.6mg。
(2)红景天苷照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。
色谱条件系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％ 磷酸-乙腈(80∶20)为流动相；流速：1ml/min；检测波长278nm；柱温30℃。 理论板数以红景天苷峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备  精密称量红景天苷对照品约5mg，置25mL量瓶中，先加 适量甲醇溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，备用。
供试品溶液的制备取颗粒剂5袋，倾出内容物，混匀，精密称量约10g，置 50mL锥形瓶中，加甲醇25mL浸泡过夜，超声1h，过滤并洗涤，蒸干回收甲醇，残渣 加甲醇适量洗涤，定容到5mL量瓶中，用0.45um微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
测定法  分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色 谱仪，测定，即得。
本品含红景天苷计，每袋不得少于0.4mg。
实施例4  一种用于久病虚损，气阴不足的贞芪扶正中药片剂的质量控制方法， 主要包括鉴别、含量测定等项目。
1、处方：
黄芪1040g 女贞子520g
2、制法：以上两味，将黄芪、掏洗好的女贞子两味药材投入多功能提取罐 内，加水煎煮三次，第一次加水量为药材的10倍量，煎煮2小时；第二、三次 加水量均为药材的8倍量，分别煎煮1小时，超滤，合并提取液，浓缩至相对 密度为1.07～1.09(50℃)清膏，清膏进行干燥，粉碎。将上述浸膏粉加入适量辅 料，混合均匀，制粒，干燥，压制成500片，即得。
3、鉴别：
(1)取本品3片，研细，加氯仿-乙醚(1∶1)20ml，超声30分钟，弃去氯 仿-乙醚液，药渣挥干溶剂，加甲醇20ml，加热回硫30分钟，滤过，滤液蒸干， 残渣加水30ml使溶解，转移到分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取两次， 每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗两次，每次25ml，再用正丁醇饱和的水 洗涤两次，每次25ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加0.5ml甲醇溶解，作 为供试品溶液。另取黄芪对照药材同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照 品加甲醇制成每1ml含2mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液10ul， 供试品溶液15ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)， 10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇 溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视， 供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑 点。
(2)取本品3片，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加无水乙醇-氯仿(3∶2)混合液1ml溶解，作为供试品溶液。另取女 贞子对照药材同法制成对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品加甲醇制成每1ml 含2mg的溶液作为对照品溶液。吸取上述对照品溶液10ul，供试品溶液15μl， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯(5∶2∶1)为，展开剂， 展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。分 别置日光及紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，分别在与对照品色谱相应 位置上，显相同颜色的斑点。
4.含量测定
(1)黄芪甲苷照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定。
色谱条件与系统适应性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动 相：乙腈-水(37∶63)；流速：0.5ml/min；蒸发光散射检测：ELSD漂移管温度：100 ℃；载气流速：2.7L/min；进样量：10ul。
对照品溶液制备  精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含 0.4mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品20片，研细，精密称定3g，置具塞锥形瓶中， 精密加入2％KOH-甲醇50ml，回流1h，甲醇提取液蒸至尽干，加水20ml使溶解后， 转移至分液漏斗中，用醋酸乙酯提取2次，每次20ml；合并醋酸乙酯液，加水15ml 洗涤，合并水液；用水饱和正丁醇提取4次，每次20ml；合并正丁醇提取液，用氨试 液洗涤3次，每次20ml；弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解转移至 5ml量瓶中，精密加甲醇至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，即得。
测定法分别精密吸取上述对照液与供试品溶液10ul，注入高效液相色谱 仪，测定，即得。
本品含黄芪甲苷(C11H68O14)计，每片不得少于0.3mg。
(2)红景天苷照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VID)测定。
色谱条件系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.1％ 磷酸-乙腈(80∶20)为流动相；流速：1ml/min；检测波长278nm；柱温30℃。 理论板数以人参皂苷Re峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备  精密称量红景天苷对照品约5mg，置25mL量瓶中，先加 适量甲醇溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，备用。
供试品溶液的制备  取本品20片，研细，精密称定3g，置50mL锥形瓶中， 加甲醇25mL浸泡过夜，超声1h，过滤并洗涤，蒸干回收甲醇，残渣加甲醇适量洗涤， 定容到5mL量瓶中，用0.45um微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
测定法  分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色 谱仪，测定，即得。
本品含红景天苷计，每片不得少于0.2mg。