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抗一种或多种病原体的组合物的用途

阅读:337发布:2021-03-20

专利汇可以提供抗一种或多种病原体的组合物的用途专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及用于抗一种或多种 植物 病原体 的组合物,所述组合物包含如 权利要求 1所定义的至少一种拮抗 微 生物 和至少一种盐。本发明还涉及所述组合物作为生物 杀虫剂 的用途。,下面是抗一种或多种病原体的组合物的用途专利的具体信息内容。

1.用于抗一种或多种病原体的组合物,所述组合物包含至少一种拮抗 生物和至少一种盐,所述盐选自:硫酸、单磷酸钙Ca(H2PO4)2、 二碱价磷酸钙(CaHPO4)、三碱价磷酸钙(Ca3(PO4)2)、酸钙(CaCO3)、碳 酸氢钙(Ca(HCO3)2)、醋酸钙、乙酸钙、甘油酸钙、乳酸钙、谷酸钙、赤 藓糖酸钙、calcium theonate、核糖酸钙、阿拉伯糖酸钙、木糖酸钙、来苏 糖酸钙、阿洛糖酸钙、阿卓糖酸钙、葡萄糖酸钙、甘露糖酸钙、古洛糖酸 钙、杜糖酸钙、半乳糖酸钙、塔罗糖酸钙、阿洛庚糖酸钙、阿卓庚糖酸 钙、葡庚糖酸钙、甘露庚糖酸钙、古洛庚糖酸钙、艾杜庚糖酸钙、半乳庚 糖酸钙、塔罗庚糖酸钙、丙醇二酸钙、苹果酸钙、酒石酸钙、柠檬酸钙、 糖二酸钙、半乳糖二酸钙、乳葡糖酸钙、抗坏血酸钙、异柠檬酸钙、或二 甲基苹果酸钙。
2.根据权利要求1的组合物,其中所述盐的量包含在0.005和5g/l 之间,优选在0.01和4g/l重量/体积之间,更优选在0.1和3g/l重量/体 积之间,更优选在0.01和2.5g/l重量/体积之间,并且还更优选在0.1和 2.2g/l重量/体积之间。
3.根据任一项在前权利要求的组合物,其中所述至少一种拮抗微生物 选自包含细菌、真菌酵母的组。
4.根据任一项在前权利要求的组合物,其中所述拮抗微生物选自包含 下列微生物的组:土壤杆菌属物种(Agrobacterium spp.)、白粉寄生菌属物 种(Ampelomyces spp.)、短梗霉菌属物种(Aureobasidium spp);芽孢杆菌 属物种(Bacillus spp.)、布勒担孢酵母属物种(Bulleromyces spp.)、假丝酵母 属物种(Candida spp.)、毛壳菌属物种(Chaetomium spp.)、盾壳霉菌属物种 (Coniothyrium spp.)、隐球酵母属物种(Cryptococcus spp.)、德巴利酵母属物 种(Debaryomyces spp.)、德克酵母属物种(Dekkera spp.)、欧文氏菌属物种 (Erwinia spp.)、Exophilia spp.、GliocIadium spp.、汉逊酵母(Hansenula spp.) 伊萨酵母属物种(Issatchenkia spp.)、克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces spp.)、利亚霉属物种(Mariannaea spp.)、Metschnikovia spp.、微结节菌属 物种(Microdochium spp.)、青霉菌属物种(Penicillium spp.)、Phlebiopsis spp.; 毕赤酵母属物种(Pichia spp.)、假单胞菌属物种(Pseudomonas spp.)、 Pseudozyma spp.、红酵母属物种(Rhodotorula spp.)、酵母属物种 (Saccharomyces spp.)、掷孢酵母属物种(Sporobolomyces spp.)、链霉菌属物 种(Streptomyces sp.)、Talaromyces spp.、木霉菌属物种(Trichoderma spp.)、 Ulocladium spp.、和接合酵母属物种(Zygosaccharomyces spp.),优选放射形 土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地 衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、 Candida oleophila、Candida saitoana、清酒假丝酵母(Candida sake)、Candida tenius、产朊假丝酵母(Candida utilis)、Coniothyrium minitans、浅白隐球酵 母(Cryptococcus albidus)、胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)、 Gliocladium catenalatum、绿粘帚霉(Gliocladium virens)、Hanseniaspora uvarum、耐热克鲁维酵母(Kluyveromyces thermotolerance)、Metschnikovia fructicola、Metschnikowia reukafii、Microdochium dimerum、草酸青霉菌 (Penicillium oxalicum)、Phlebiopsis gigantean、异常毕赤酵母(Pichia anomala)、季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、洋葱假单胞菌 (Pseudomonas cepacia)、绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)、荧光假 单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、Pseudozyma flocullosa、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)、粘质红 酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、酵 母属灰绿链霉菌(Saccharomyces Streptomyces griseoviridis)、黄色蠕形霉 (Talaromyces flavus)、深绿木霉(Trichoderma atroviride)、哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)、多孢木霉(Trichoderma polysporum)、绿色木霉 (Trichoderma viride)、和Ulocladium atrum。
5.根据任一项在前权利要求的组合物,其中所述拮抗微生物以从103 至1011cfu/ml,优选从104至1010cfu/ml的范围内的浓度应用。
6.用于抗病原体的根据任一项在前权利要求的组合物,所述病原体能 够对植物材料引起疾病
7.根据权利要求6的组合物,其中所述植物材料选自包含包括下列物 种的组:苹果属物种(Malus spp.),梨属物种(Pyrus spp.),包括柑桔、柠檬、 葡萄柚、柑橘的柑橘属物种(Citrus spp.);例如物种番茄、青椒、黄瓜、葡 萄藤和草莓的作物;包括马铃薯、胡萝卜的根作物;包括芒果、香蕉、 番石榴、菠萝、鳄梨的热带果;瓜果,和开花植物及其它装饰作物。
8.根据任一项在前权利要求的组合物,其中所述病原体选自包含下列 微生物的组:链格孢属物种(Alternaria spp.)、壳二孢属物种(Ascochyta spp.)、曲酶属物种(Aspergillus spp.)、葡萄孢属物种(Botrytis spp.)、尾孢属 物种(Cercospora spp.)、支孢属物种(Cladosporium spp.)、麦属物种 (Claviceps spp.)、刺盘孢属物种(Colletotrichum spp.)、白粉菌属物种 (Erysiphe spp.)、镰孢属物种(Fusarium spp.)、地霉属物种(Geotrichum spp.)、 吉尔霉属物种(Gilbertella spp.)、盘长孢属物种(Gloeosporium spp.)、长蠕孢 属物种(Helminthosporium spp.)、丛梗孢属物种(Monilia spp.)、链核盘菌属 物种(Monilinia spp.)、Mucov spp.、丛赤壳属物种(Nectria spp.)、青霉菌属 物种(Penicillium spp.)、霜霉属物种(Peronospora spp.)、无柄盘菌属物种 (Pezicula spp.)、拟茎点霉属物种(Phomopsis spp.)、疫霉属物种(Phytophthora spp.)、单轴霉属物种(Plasmopara spp.)、叉丝单囊壳属物种(Podosphaera spp.)、Pseudocercosporium spp.、柄锈菌属物种(Puccinia spp.)、丝核菌属 物种(Rhizoctonia spp.)、根霉属物种(Rhizopus spp.)、Rynchosporium spp.、 核盘霉属物种(Sclerotinia spp.)、壳针孢属物种(Septoria spp.)、单丝壳属物 种(Sphaerotheca spp.)、钩丝壳属物种(Uncinula spp.)、黑粉菌属物种 (Ustilago spp.)、黑星菌属物种(Venturia spp.)、轮枝孢属物种(Verticillium spp.),和细菌或病毒病原体。
9.根据权利要求8的组合物,其中所述病原体选自由下列微生物组成 的组:链格孢(Alternaria alternata)、壳二孢属物种(Ascochyta sp.)、黄曲霉 (Aspergillus flavus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、葱腐葡萄孢(Botrytis alii)、 灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、蚕豆葡萄孢(Botrytis fabae)、尾孢属物种 (Cercospora sp.)、枝孢属物种(Cladosporium sp.)、麦角菌(Claviceps purpurea)、刺盘孢属物种(Colletotrichum sp.)、甜菜白粉菌(Erysiphe betae)、 禾白粉菌(Erysiphe graminis)、尖镰孢(Fusarium oxysporum)、白地霉 (Geotrichum candidum)、Gilbertella persicovia、懿长孢(Gloeosporium perennans)、果生盘长孢(Gloeosporium fructigenum)、长蠕孢属物种 (Helminthosporium sp.)、丛梗孢属物种(Monilia sp.)、Monilinia fructicola、 核果链盒盘菌(Monilinia laxa)、Mucov sp.、朱红丛赤壳(Nectria cinnabarina)、指状青霉(Penicillium digitatum)、扩展青霉(Penicillium expansum)、意大利青霉(Penicillium italicum)、霜霉属物种(Peronospora sp.)、Pezicula malicorticas、Phomopsis viticola、致病疫霉(Phytophthora infestans)、葡萄生单轴霉(Plasmopara viticola)、白叉丝单囊壳(Podosphaera leucotricha)、Pseudocercosporium sp.、禾柄锈菌(Puccinia graminis)、丝核 菌属物种(Rhizoctonia sp.)、少根根霉(Rhizopus arrhizus)、匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)、Rynchosporium sp.、葱核盘菌(Sclerotinia Cepivorum)、核盘菌 (Sclerotinia sclerotiorum)、Septoria apicola、单丝壳属物种(Sphaerotheca sp.)、葡萄钩丝壳(Uncinula necator)、黑粉菌属物种(Ustilago sp.)、苹果黑 星菌(Venturia inaequalis.);黄萎轮枝孢(Verticillium albo-atrum)、和大丽花 轮枝孢(Verticillium dahliae)。
10.根据权利要求8或9的组合物,其中所述病原体选自包含下列微 生物的组:葡萄孢属物种(Botrytis spp.)、青霉菌属物种(Penicillium spp.)、 无柄盘菌属物种(Pezicula spp.)和根霉属物种(Rhizopus spp.)。
11.包含至少一种拮抗微生物和至少一种盐和/或其衍生物的组合物用 于同时、单独或顺序施用到要处理的植物,其中所述盐选自:硫酸钙、单 碱价磷酸钙Ca(H2PO4)2、二碱价磷酸钙(CaHPO4)、三碱价磷酸钙 (Ca3(PO4)2)、碳酸钙(CaCO3)、碳酸氢钙(Ca(HCO3)2)、醋酸钙、乙酸钙、 甘油酸钙、乳酸钙、谷氨酸钙、赤藓糖酸钙、calcium theonate、核糖酸钙、 阿拉伯糖酸钙、木糖酸钙、来苏糖酸钙、阿洛糖酸钙、阿卓糖酸钙、葡萄 糖酸钙、甘露糖酸钙、古洛糖酸钙、艾杜糖酸钙、半乳糖酸钙、塔罗糖酸 钙、阿洛庚糖酸钙、阿卓庚糖酸钙、葡庚糖酸钙、甘露庚糖酸钙、古洛庚 糖酸钙、艾杜庚糖酸钙、半乳庚糖酸钙、塔罗庚糖酸钙、丙醇二酸钙、苹 果酸钙、酒石酸钙、柠檬酸钙、糖二酸钙、半乳糖二酸钙、乳葡糖酸钙、 抗坏血酸钙、异柠檬酸钙、或二甲基苹果酸钙。
12.用于由对植物材料病原体引起的疾病的生物防治方法,所述方法 包含将如权利要求1至11中任一项所限定的组合物应用到所述植物材料 的步骤。
13.用于制造如权利要求1至11中任一项所限定的组合物的方法,所 述方法包含将至少一种拮抗微生物与至少一种盐和/或其衍生物混合的步 骤。
14.如权利要求1至11中任一项所限定的组合物作为生物杀虫剂的用 途。
15.盐作为用于增强包含至少一种拮抗微生物的组合物功效的化合物 的用途,其中所述盐选自:硫酸钙、单碱价磷酸钙Ca(H2PO4)2、二碱价磷 酸钙(CaHPO4)、三碱价磷酸钙(Ca3(PO4)2)、碳酸钙(CaCO3)、碳酸氢钙 (Ca(HCO3)2)、醋酸钙、乙酸钙、甘油酸钙、乳酸钙、谷氨酸钙、赤藓糖酸 钙、calcium theonate、核糖酸钙、阿拉伯糖酸钙、木糖酸钙、来苏糖酸钙、 阿洛糖酸钙、阿卓糖酸钙、葡萄糖酸钙、甘露糖酸钙、古洛糖酸钙、艾杜 糖酸钙、半乳糖酸钙、塔罗糖酸钙、阿洛庚糖酸钙、阿卓庚糖酸钙、葡庚 糖酸钙、甘露庚糖酸钙、古洛庚糖酸钙、艾杜庚糖酸钙、半乳庚糖酸钙、 塔罗庚糖酸钙、丙醇二酸钙、苹果酸钙、酒石酸钙、柠檬酸钙、糖二酸钙、 半乳糖二酸钙、乳葡糖酸钙、抗坏血酸钙、异柠檬酸钙、或二甲基苹果酸 钙。

说明书全文

发明领域

本发明涉及含有拮抗生物和盐的组合物。本发明还涉及所述组合物 作为生物杀虫剂的用途。

发明背景

动物包括人和植物的病原感染,例如真菌感染,在世界范围内的生产 能中产生重大的损失。大量的病原体对农作物收获产品中的重要经济 损失负责。例如,青霉菌(Penicillium)和葡萄孢菌(Botrytis)种对重要的经济 损失负责。这些种在食物中的普遍存在是特别的问题。一些种产生毒素并 且可以使食物变成不可食用的或甚至是危险的。青霉菌(Penicillium)的种可 以引起严重的果实腐烂,例如在苹果(苹果属(Malus))、梨(梨属(Pyrus))和 柠檬(柑桔属(Citrus spp))上。
抗病原体的杀虫剂在本领域中是众所周知的并且已经广泛使用了多 年。用于动物和植物中真菌和细菌感染的预防的和/或处理的处理方法一般 涉及抗真菌和抗细菌的农用化学品的施用或更加环境友好的基于生物防 治试剂的生物杀虫剂的使用。出于一些原因,例如残留减少、环境关注、 耐化学杀虫剂病原体菌株的出现或者化学杀虫剂的使用限制,对于超过化 学防治的生物防治的兴趣正在快速增长。
作为生物防治试剂,对于病原体拮抗的微生物是已知的。已经公布了 涉及包含抗植物病原体酵母的或其它微生物的组合物使用的文献,其中 EP 1238587在其实施例中公开了具有高浓度CaCl2 2%(20g/l)的包含拮抗 微生物的组合物。可以引用WO 99/62340、WO 99/62341、美国专利号 5,525,132、美国专利号5,741,699、美国专利号6,060,429、WO 00/44230、 美国专利号5,288,488和美国专利号5,780,023作为其它实例。
已经成功地使用了抗由病原体引起的植物疾病的细菌、真菌和酵母中 的多种微生物。商业的生物防治产品例如AspireTM(Candida oleophila Montrocher,I-182)和BiosaveTM(丁香假单胞菌(丁香假单胞杆菌 (Pseudomonas syringae))van Hall,Esc-11)曾经和已经分别从Ecogen Inc. (Longhorn,PA)和Ecoscience Corp.(Worcester,MA)可得到并且特别使用在 收获后的苹果上抗损伤疾病。
然而经常发现这些生物杀虫剂不是足够有效的。这些依赖于单一拮抗 剂使用的第一代生物防治产品已经被批评在商业条件下使用时不提供稳 定并可靠的防护活性。为了改善它们的防治真菌并特别是扩展青霉 (Penicillium expansum)感染的天然性能,降低操作体积和成本,已寻找了 新的刺激剂。
事实上,更有效的组合物能够在每次处理使用更少的拮抗微生物的量, 而不降低抗病原体的组合物的功效并且不限制所述组合物抗病原体的功 效的持续时间,并且因此达到收益的经济阈值
考虑到上述,本发明的主要目的是提供适于抗由病原体引起的对植物、 其产物和动物产生的疾病例如由霉菌诱导的疾病使用的新组合物。本发明 的另一个目的是提供至少如本领域技术平同样有效的组合物。本发明的 更进一步的目的是提供包含较低浓度的拮抗微生物同时具有类似或更好 的抗病原体功效的组合物。
发明概述
在第一方面中,本发明提供了适于抗一种或多种病原体使用的新组合 物,所述组合物包含至少一种拮抗微生物和至少一种选自包含式(1)化合 物,磷酸盐,硫酸盐,抗坏血酸、异柠檬酸、柠苹酸、乳葡糖酸(lactogluconic acids)的盐的组的、钠或盐,和/或其衍生物,

其中
A是选自Ca、K或Na的阳离子,优选Ca或K,更优选Ca,其中a、b、 c和d是1至3的整数,条件是a×b=c×d,并且R1选自-O-、-OH或 n是0至5的整数,R2选自H、-OH、-CH3、-CO2 -、-CH2-OH、 -CH2-CO2 -,R3选自H或-CH2-COO-,并且R4选自H、-NH2或OH,其中 当n是1时,如果R4是H,则R3不是H并且R2不是-CH3。
特别是,本发明涉及适于抗一种或多种病原体使用的组合物,所述组 合物包含至少一种拮抗微生物和至少一种选自下列的盐:硫酸钙、单价 磷酸钙Ca(H2PO4)2、二碱价磷酸钙(CaHPO4)、三碱价磷酸钙(Ca3(PO4)2)、 酸钙(CaCO3)、碳酸氢钙(Ca(HCO3)2)、醋酸钙、乙酸钙(calcium ethanoate)、 甘油酸钙、乳酸钙、谷酸钙、赤藓糖酸钙(calcium erythronate)、calcium theonate、核糖酸钙、阿拉伯糖酸钙(calcium arabinoate)、木糖酸钙(calcium xylonate)、来苏糖酸钙(calcium lyxonate)、阿洛糖酸钙(allonate calcium)、 阿卓糖酸钙(altronate calcium)、葡萄糖酸钙、甘露糖酸钙(calcium mannoate)、古洛糖酸钙、杜糖酸钙、半乳糖酸钙、塔罗糖酸钙(calcium talonate)、阿洛庚糖酸钙(calcium alloheptonate)、阿卓庚糖酸钙(calcium altroheptonate)、葡庚糖酸钙、甘露庚糖酸钙、古洛庚糖酸钙(calcium guloheptonate)、艾杜庚糖酸钙(calcium idoheptonate)、半乳庚糖酸钙(calcium galactoheptonate)、塔罗庚糖酸钙(calcium taloheptonate)、丙醇二酸钙、苹 果酸钙、酒石酸钙、柠檬酸钙、糖二酸钙、半乳糖二酸钙、乳葡糖酸钙 (calcium lactogluconate)、抗坏血酸钙、异柠檬酸钙、或二甲基苹果酸钙 (calcium citramalate)。
根据本发明的实施方案,所述至少一种拮抗微生物选自包含细菌、真 菌和酵母的组。在特定的实施方案中,所述拮抗微生物选自包含下列的组: 土壤杆菌属物种(Agrobacterium spp.)、白粉寄生菌属物种(Ampelomyces spp.)、短梗霉菌属物种(Aureobasidium spp);芽孢杆菌属物种(Bacillus spp.)、 布勒担孢酵母属物种(Bulleromyces spp.)、假丝酵母属物种(Candida spp.)、 毛壳菌属物种(Chaetomium spp.)、盾壳霉菌属物种(Coniothyrium spp.)、隐 球酵母属物种(Cryptococcus spp.)、德巴利酵母属物种(Debaryomyces spp.)、 德克酵母属物种(Dekkera spp.)、欧文氏菌属物种(Erwinia spp.)、Exophilia spp.、粘帚霉属物种(Gliocladium spp.)、汉逊酵母(Hansenula spp.)、伊萨 酵母属物种(Issatchenkia spp.)、克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces spp.)、 利亚霉属物种(Mariannaea spp.)、Metschnikovia spp.、微结节菌属物种 (Microdochium spp.),青霉菌属物种(Penicillium spp.)、Phlebiopsis spp.;毕 赤酵母属物种(Pichia spp.)、假单胞菌属物种(Pseudomonas spp.)、 Pseudozyma spp.、红酵母属物种(Rhodotorula spp.)、酵母属物种 (Saccharomyces spp.)、掷孢酵母属物种(Sporobolomyces spp.)、链霉菌属物 种(Streptomyces sp.)、Talaromyces spp.、木霉菌属物种(Trichoderma spp.)、 Ulocladium spp.、接合酵母属物种(Zygosaccharomyces spp.),优选放射形土 壤杆菌(Agrobacterium radiobacter),枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),地衣 芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis),Candida oleophila、Candida saitoana、清酒假丝酵母(Candida sake)、Candida tenius、 产朊假丝酵母(Candida utilis)、Coniothyrium minitans、浅白隐球酵母 (Cryptococcus albidus)、胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)、 Gliocladium catenalatum、绿粘帚霉(Gliocladium virens)、Hanseniaspora uvarum、耐热克鲁维酵母(Kluyveromyces thermotolerance)、Metschnikovia fuucticola、Metschnikowia reukafii、Microdochium dimerum、草酸青霉菌 (Penicillium oxalicum)、Phlebiopsis gigantean、异常毕赤酵母(Pichia anomala)、季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、洋葱假单胞菌 (Pseudomonas cepacia)、绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)、荧光假 单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、Pseudozyma flocullosa、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)、粘质红 酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、灰 绿链霉菌(Streptomyces griseoviridis)、黄色蠕形霉(Talaromyces flavus)、深 绿木霉(Trichoderma atroviride)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、多孢 木霉(Trichoderma polysporum)、绿色木霉(Trichoderma viride)、Ulocladium atrum。
在本发明的实施方案中,在本组合物中要使用的至少一种盐是钙盐。 在优选实施方案中,所述盐是葡萄糖酸钙、柠檬酸钙、碳酸钙、乳酸钙、 碳酸氢钙、单碱价磷酸钙Ca(H2PO4)2、二碱价磷酸钙(CaHPO4)、三碱价磷 酸钙(Ca3(PO4)2)、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)、抗坏血酸钙。
发现所述盐在拮抗微生物的生物活性上具有出乎意料的增强性质。联 合(association)是特别有活性的,甚至在低盐浓度下即低于5g/l。所述联 合显示比单独使用微生物更有效。对于相同量的盐,本发明的发明人获得 了相比当与所述拮抗微生物一起使用高浓度CaCl2 2%(20g/l)时类似的功 效。根据本发明的组合物在低剂量的盐即低于5g/l下显示出乎意料地非常 好的功效,并且相比于包含高浓度CaCl2 2%(20g/l)的含有拮抗微生物的组 合物显示类似或更好的功效。针对由植物和/或动物病原体引起的疾病,本 组合物具有改善的和/或更长的的功效。例如,针对由或者在收获后或者在 植物生命周期期间定居植物部位的霉菌引起的疾病,本组合物是特别有效 的。
所述联合显示比单独使用微生物更有效。本组合物可以使用更低的微 生物量和/或更低的盐量,同时具有类似的或甚至更好的抗病原体功效。
本组合物用于抗一种或多种能够对植物或动物包括人引起疾病的病原 体。所述病原体可以是真菌、酵母、细菌和病毒。
根据本发明的组合物特别用于抗能够对植物材料引起疾病的病原体。 如这里所用的术语“植物”包括全部植物、植物部位、果实和其它植物相 关的材料。植物的无限制的实例包括选自包含下列植物部位的组的植物材 料:果实例如物种苹果属物种(Malus spp.),梨属物种(Pyrus spp.),柑橘属 物种(Citrus spp.)(例如柑桔、柠檬、葡萄柚、柑橘),和作物例如物种番茄、 青椒(bell pepper)、黄瓜、葡萄藤和草莓);根作物(例如,马铃薯、胡萝 卜);热带水果(例如,芒果、香蕉、番石榴、菠萝、鳄梨);瓜果,和开花 植物及其它装饰作物。根据本发明的组合物的功效优于在相同浓度下单独 用拮抗微生物获得的功效并且类似于用微生物在高浓度CaCl2(2%重量/体 积)下获得的功效。
本发明也涉及由对植物材料病原体引起的疾病的生物防治方法,所述 方法包含将根据本发明的组合物施用到所述植物材料的步骤。
本发明还涉及根据本发明的组合物作为生物杀虫剂(biopesticide)的 施用,优选作为生物杀真菌剂、生物杀病毒剂和/或作为生物杀细菌剂,并 且涉及包含根据本发明的组合物的生物杀虫剂的制造方法。
本发明还将在下文中详细公开。给出将进一步支持描述的实例。
详细描述
本发明涉及用于防治真菌和细菌植物病原体的组合物和方法。特别是, 本发明涉及适于抗一种或多种病原体使用的新组合物,所述组合物包含至 少一种拮抗微生物和至少一种选自包含式(1)化合物,磷酸盐,硫酸盐,抗 坏血酸、异柠檬酸、柠苹酸、乳葡糖酸(lactogluconic acids)的盐的组的钙、 钠或钾盐,和/或其衍生物和/或其混合物,

其中
A是选自Ca、K或Na的阳离子,优选Ca或K,更优选Ca,其中a、b、 c和d是1至3的整数,条件是a×b=c×d,并且R1选自-O-、-OH或 n是0至5的整数,R2选自H、-OH、-CH3、-CO2 -、-CH2-OH、 -CH2-CO2 -,R3选自H或-CH2-COO-,并且R4选自H、-NH2或OH,其中 当n是1时,如果R4是H,则R3不是H并且R2不是-CH3。意外地发现 所述组合物的组合得到优于单独的拮抗微生物的防治。
在特定实施方案中,包含所述至少一种盐的量在0.005和5g/l重量/ 体积之间,优选在0.01和4g/l重量/体积之间,更优选在0.1和3g/l重 量/体积之间,更优选在0.01和2.5g/l重量/体积之间,并且还更优选在 0.1和2.2g/1重量/体积之间。在另一个实施方案中,以从103 to 10111cfu/ml 范围内的浓度施用所述拮抗微生物,优选从104至1010cfu/ml。适合的浓 度的另一个实例包括当所述拮抗微生物是真菌时是105至108cfu/ml并且 优选微生物的浓度是从106至108cfu/ml,当所述拮抗微生物是细菌时是105 至1011,并且优选109至1011。
根据优选实施方案,所述盐选自包含下列盐的组:硫酸盐、磷酸盐、 碳酸盐、碳酸氢盐、醋酸盐、乙酸盐(ethanoate salt)、甘油酸盐、谷氨酸盐、 erythronate盐、theonate盐、核糖酸盐(ribonate salt)、阿拉伯糖盐(arabinoate salt)、木糖酸盐、来苏糖酸(lyxonate)盐、阿洛糖酸盐(allonate salt)、阿卓糖 酸盐(altronate salt)、葡糖酸盐、甘露糖酸盐(mannoate salt)、古洛糖酸盐 (gulonate salt)、艾杜糖酸盐(idonate salt)、半乳糖酸盐(galactonate salt)、塔 罗糖酸盐(talonate salt)、阿洛庚糖酸盐(alloheptonate salt)、阿卓庚糖酸盐 (altroheptonate salt)、葡庚糖酸盐(glucoheptonate salt)、甘露庚糖酸盐 (mannoheptonate salt)、古洛庚糖酸盐(guloheptonate salt)、艾杜庚糖酸盐 (idoheptonate salt)、半乳庚糖酸盐(galactoheptonate salt)、塔罗庚糖酸盐 (taloheptonate salt)、丙醇二酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、糖二 酸盐、半乳糖二酸盐、乳酸盐、乳葡糖酸盐(lactogluconate salt)、抗坏血酸 盐、异柠檬酸盐、和二甲基苹果酸盐(citramalate salt)。
所述盐可以是在水合形态下或者是无水的。当然,本组合物也可以含 有盐和/或其聚合物的混合物。
在本发明的实施方案中,要在本组合物中使用的盐是钙盐。
根据优选实施方案,所述盐选自包含下列盐的组:硫酸钙、单碱价磷 酸钙Ca(H2PO4)2、二碱价磷酸钙(CaHPO4)、三碱价磷酸钙(Ca3(PO4)2)、碳 酸钙(CaCO3)、碳酸氢钙(Ca(HCO3)2)、醋酸钙、乙酸钙(calcium ethanoate)、 甘油酸钙、谷氨酸钙、赤藓糖酸钙(calcium erythronate)、calcium theonate、 核糖酸钙、阿拉伯糖酸钙(calcium arabinoate)、木糖酸钙(calcium xylonate)、 来苏糖酸钙(calcium lyxonate)、阿洛糖酸钙(calcium allonate)、阿卓糖酸钙 (altronate calcium)、葡萄糖酸钙、甘露糖酸钙(calcium mannoate)、古洛糖 酸钙、艾杜糖酸钙、半乳糖酸钙、塔罗糖酸钙(calcium talonate)、阿洛庚糖 酸钙(calcium alloheptonate)、阿卓庚糖酸钙(calcium altroheptonate)、葡庚糖 酸钙、甘露庚糖酸钙、古洛庚糖酸钙(calcium guloheptonate)、艾杜庚糖酸 钙(calcium idoheptonate)、半乳庚糖酸钙(calcium galactoheptonate)、塔罗庚 糖酸钙(calcium taloheptonate)、丙醇二酸钙、苹果酸钙、酒石酸钙、柠檬 酸钙、糖二酸钙、半乳糖二酸钙、乳酸钙、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)、抗坏血酸钙、异柠檬酸钙、和二甲基苹果酸钙(calcium citramalate),及其混合物。意外地发现所述组合物是水果和蔬菜中收获后 疾病的特别有效的抑制剂。已经意外地并出乎意料地发现如上定义的至少 一种盐与根据本发明的至少一种拮抗微生物的使用促进植物病原体的改 进防治。如这里所述的盐和所述拮抗微生物的组合提供水果的主要收获后 腐烂的有效防治并且得到比单独使用相同浓度拮抗剂更佳的防治或者得 到比高量的CaCl2(2%)与所述微生物的使用类似的防治。所述组合物特别 具有抗真菌和抗细菌的活性。
根据本发明的实施方案,所述至少一种拮抗微生物选自包含细菌、真 菌和酵母的组。在特定的实施方案中,所述拮抗微生物选自包含下列微生 物的组:土壤杆菌属物种(Agrobacterium spp.)、白粉寄生菌属物种 (Ampelomyces spp.)、短梗霉菌属物种(Aureobasidium spp)、芽孢杆菌属物 种(Bacillus spp.)、布勒担孢酵母属物种(Bulleromyces spp.)、假丝酵母属物 种(Candida spp.)、毛壳菌属物种(Chaetomium spp.)、盾壳霉菌属物种 (Coniothyrium spp.)、隐球酵母属物种(Cryptococcus spp.)、德巴利酵母属物 种(Debaryomyces spp.)、德克酵母属物种(Dekkera spp.)、欧文氏菌属物种 (Erwinia spp.)、Exophilia spp.、粘帚霉属(Gliocladium spp.)、汉逊酵母 (Hansenula spp.)伊萨酵母属物种(Issatchenkia spp.)、克鲁维酵母属物种 (Kluyveromyces spp.)、马利亚霉属物种(Mariannaea spp.)、Metschnikovia spp.、微结节菌属物种(Microdochium spp.)、青霉菌属物种(Penicillium spp.)、 Phlebiopsis spp.;毕赤酵母属物种(Pichia spp.)、假单胞菌属物种 (Pseudomonas spp.)、Pseudozyma spp.、红酵母属物种(Rhodotorula spp.)、 酵母属物种(Saccharomyces spp.)、掷孢酵母属物种(Sporobolomyces spp.)、 链霉菌属物种(Streptomyces sp.)、Talaromyces spp.、木霉菌属物种 (Trichoderma spp.)、Ulocladium spp.、接合酵母属物种(Zygosaccharomyces spp.)。
在特定的实施方案中,所述拮抗微生物优选选自:放射形土壤杆菌 (Agrobacterium radiobacter)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆 菌(Bacillus licheniformis)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、Candida oleophila、Candida saitoana、清酒假丝酵母(Candida sake)、Candida tenius、 产朊假丝酵母(Candida utilis)、Coniothyrium minitans、浅白隐球酵母 (Cryptococcus albidus)、胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)、 Gliocladium catenalatum、绿粘帚霉(Gliocladium virens)、Hanseniaspora uvarum、耐热克鲁维酵母(Kluyveromyces thermotolerance)、Metschnikovia fructicola、Metschnikowia reukafii、Microdochium dimerum、草酸青霉菌 (Penicillium oxalicum)、Phlebiopsis gigantean、异常毕赤酵母(Pichia anomala)、季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、洋葱假单胞菌 (Pseudomonas cepacia)、绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis)、荧光假 单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、Pseudozyma flocullosa、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)、粘质红 酵母(Rhodotorula mucilaginosa)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、灰 绿链霉菌(Streptomyces griseoviridis)、黄色蠕形霉(Talaromyces flavus)、深 绿木霉(Trichoderma atroviride)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、多孢 木霉(Trichoderma polysporum)、绿色木霉(Trichoderma viride)、或 Ulocladium atrum..
在本发明的实施方案中,所述酵母是Candida oleophila或异常毕赤酵 母(Pichia anomala)。Candida oleophila菌株可以是由下列组成的菌株形式: Candida oleophila Montrocher菌株O,于1997年6月17日以MUCL-40564 保藏在BBCMTM/MUCL Culture Collection of the Mycothèque de l’Université Catholique de Louvain,和Candida oleophila Montrocher可商购菌株I-182。
在实施方案中,根据本发明的组合物包含一种盐与一种拮抗微生物的 组合,所述组合选自:CaHPO4+丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、 Ca3(PO4)3+丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、Ca(CO3)+丁香假单 胞杆菌(Pseudomonas syringae)、Ca(HCO3)2+丁香假单胞杆菌 (Pseudomonas syringae)、醋酸钙+丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、谷氨酸钙+丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、CaHPO4+ 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Ca3(PO4)3+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Ca(CO3)+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Ca(HCO3)2+枯草芽 孢杆菌(Bacillus subtilis)、醋酸钙+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、谷氨 酸钙+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、CaHPO4+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、Ca3(PO4)3+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、Ca(CO3)+短小芽孢 杆菌(Bacillus pumilis)、Ca(HCO3)2+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、醋酸 钙+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、谷氨酸钙+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、CaHPO4+Candida oleophila、Ca3(PO4)3+Candida oleophila、 Ca(CO3)+Candida oleophila、Ca(HCO3)2+Candida oleophila、醋酸钙+ Candida oleophila、谷氨酸钙+Candida oleophila、CaHPO4+Candida saitoana、Ca3(PO4)3+Candida saitoana、Ca(CO3)+Candida saitoana、 Ca(HCO3)2+Candida saitoana、醋酸钙+Candida saitoana、谷氨酸钙+ Candida saitoana、CaHPO4+清酒假丝酵母(Candida sake)、Ca3(PO4)3+清 酒假丝酵母(Candida sake)、Ca(CO3)+清酒假丝酵母(Candida sake)、 Ca(HCO3)2+清酒假丝酵母(Candida sake)、醋酸钙+清酒假丝酵母 (Candida sake)、谷氨酸钙+清酒假丝酵母(Candida sake)、CaHPO4+克鲁 维酵母属物种(Kluyveromyces sp.)、Ca3(PO4)3+克鲁维酵母属物种 (Kluyveromyce sp.)、Ca(CO3)+克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces sp.)、 Ca(HCO3)2+克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces sp.)、醋酸钙+克鲁维酵母 属物种(Kluyveromyces sp.)、谷氨酸钙+克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces sp.)、CaHPO4+Metschnikovia fructicola、Ca3(PO4)3+Metschnikovia fructicola、Ca(CO3)+Metschnikovia fructicola、Ca(HCO3)2+Metschnikovia fructicola、醋酸钙+Metschnikovia fructicola、谷氨酸钙+Metschnikovia fructicola、CaHPO4+Microdochium sp.、Ca3(PO4)3+Microdochium sp.、 Ca(CO3)+Microdochium sp.、Ca(HCO3)2+Microdochium sp.、醋酸钙+ Microdochiutm sp.、谷氨酸钙+Microdochium sp.、CaHPO4+异常毕赤酵母 (Pichia anomala)、Ca3(PO4)3+异常毕赤酵母(Pichia anomala)、Ca(CO3)+异 常毕赤酵母(Pichia anomala)、Ca(HCO3)2+异常毕赤酵母(Pichia anomala)、 醋酸钙+异常毕赤酵母(Pichia anomala)、谷氨酸钙+异常毕赤酵母 (Pichia anomala)、CaHPO4+季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、 Ca3(PO4)3+季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、Ca(CO3)+季也蒙毕赤 酵母(Pichia guilliermondii)、Ca(HCO3)2+季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、醋酸钙+季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、谷氨酸 钙+季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、CaHPO4+深绿木霉 (Trichoderma atroviride)、Ca3(PO4)3+深绿木霉(Trichoderma atroviride)、 Ca(CO3)+深绿木霉(Trichoderma atroviride)、Ca(HCO3)2+深绿木霉 (Trichoderma atroviride)、醋酸钙+深绿木霉(Trichoderma atroviride)、谷 氨酸钙+深绿木霉(Trichoderma atroviride)、CaHPO4+哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)、Ca3(PO4)3+哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、 Ca(CO3)+哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、Ca(HCO3)2+哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)、醋酸钙+哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、谷 氨酸钙+哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、CaHPO4+多孢木霉 (Trichoderma polysporum)、Ca3(PO4)3+多孢木霉(Trichoderma polysporum)、 Ca(CO3)+多孢木霉(Trichoderma polysporum)、Ca(HCO3)2+多孢木霉 (Trichoderma polysporum)、醋酸钙+多孢木霉(Trichoderma polysporum)、 谷氨酸钙+多孢木霉(Trichoderma polysporum)、CaHPO4+绿色木霉 (Trichoderma viride)、Ca3(PO4)3+绿色木霉(Trichoderma viride)、Ca(CO3)+ 绿色木霉(Trichoderma viride)、Ca(HCO3)2+绿色木霉(Trichoderma viride)、 醋酸钙+绿色木霉(Trichoderma viride)或谷氨酸钙+绿色木霉 (Trichoderma viride)。
在另一个实施方案中,所述组合选自:葡萄糖酸钙+丁香假单胞杆 菌(Pseudomonas syringae)、葡萄糖酸钙+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、 葡萄糖酸钙+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、葡萄糖酸钙+Candida oleophila、葡萄糖酸钙+Candida saitoana、葡萄糖酸钙+清酒假丝酵母 (Candida sake)、葡萄糖酸钙+克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces sp.)、葡 萄糖酸钙+Metschnikovia fructicola、葡萄糖酸钙+Microdochium sp.、葡 萄糖酸钙+异常毕赤酵母(Pichia anomala)、葡萄糖酸钙+季也蒙毕赤酵 母(Pichia guilliermondii)、酒石酸钙+丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、柠檬酸钙+丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、乳葡糖酸 钙(calcium Iactogluconate)+丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、抗坏 血酸钙+丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、异柠檬酸钙+丁香假 单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+ 丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)、酒石酸钙+枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)、柠檬酸钙+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、乳葡糖酸 钙(calcium lactogluconate)+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、抗坏血酸钙 +枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、异柠檬酸钙+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、酒石酸钙+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、柠檬酸钙+短小 芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+短小芽 孢杆菌(Bacillus pumilis)、抗坏血酸钙+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、 异柠檬酸钙+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+短小芽孢杆菌(Bacillus pumilis)、酒石酸钙+Candida oleophila、柠檬酸钙+Candida oleophila、葡萄糖酸钙+深绿木霉 (Trichoderma atroviride)、葡萄糖酸钙+哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、葡萄糖酸钙+多孢木霉(Trichoderma polysporum)、葡萄糖酸 钙+绿色木霉(Trichoderma viride)、或酒石酸钙+深绿木霉(Trichoderma atroviride)。
在另一个实施方案中,所述组合选自乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+Candida oleophila、抗坏血酸钙+Candida oleophila、异 柠檬酸钙+Candida oleophila、二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+ Candida oleophila、酒石酸钙+Candida saitoana、柠檬酸钙+Candida saitoana、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+Candida saitoana、抗坏血 酸钙+Candida saitoana、异柠檬酸钙+Candida saitoana、二甲基苹果酸 钙(calcium citramalate)+Candida saitoana、酒石酸钙+清酒假丝酵母 (Candida sake)、柠檬酸钙+清酒假丝酵母(Candida sake)、乳葡糖酸钙 (calcium lactogluconate)+清酒假丝酵母(Candida sake)、抗坏血酸钙+清 酒假丝酵母(Candida sake)、异柠檬酸钙+清酒假丝酵母(Candida sake)、 二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+清酒假丝酵母(Candida sake)、酒石 酸钙+克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces sp.)、柠檬酸钙+克鲁维酵母属 物种(Kluyveromyces sp.)、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+克鲁维酵 母属物种(Kluyveromyces sp.)、抗坏血酸钙+克鲁维酵母属物种 (Kluyveromyces sp.)、异柠檬酸钙+克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces sp.)、 二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+克鲁维酵母属物种(Kluyveromyces sp.)、酒石酸钙+Metschnikovia fructicola、柠檬酸钙+Metschnikovia fructicola、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+Metschnikovia fructicola、 抗坏血酸钙+Metschnikovia fructicola、异柠檬酸钙+Metschnikovia fructicola、二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+Metschnikovia fructicola、 酒石酸钙+Microdochium sp.、柠檬酸钙+Microdochium sp.、乳葡糖酸钙 (calcium lactogluconate)+Microdochium sp.、抗坏血酸钙+Microdochium sp.、异柠檬酸钙+Microdochium sp.、二甲基苹果酸钙(calcium citramalate) +Microdochium sp.、酒石酸钙+异常毕赤酵母(Pichia anomala)、柠檬酸 钙+异常毕赤酵母(Pichia anomala)、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+ 异常毕赤酵母(Pichia anomala)、抗坏血酸钙+异常毕赤酵母(Pichia anomala)、异柠檬酸钙+异常毕赤酵母(Pichia anomala)、二甲基苹果酸 钙(calcium citramalate)+异常毕赤酵母(Pichia anomala)、酒石酸钙+季 也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、柠檬酸钙+季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+季也蒙毕赤酵母 (Pichia guilliermondii)、抗坏血酸钙+季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、异柠檬酸钙+季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、二 甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+季也蒙毕赤酵母(Pichia guilliermondii)、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+深绿木霉 (Trichoderma atroviride)、抗坏血酸钙+深绿木霉(Trichoderma atroviride)、 异柠檬酸钙+深绿木霉(Trichoderma atroviride)、二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+深绿木霉(Trichoderma atroviride)、酒石酸钙+哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)、柠檬酸钙+哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、 乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、 抗坏血酸钙+哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、异柠檬酸钙+哈茨木 霉(Trichoderma harzianum)、二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+哈茨木 霉(Trichoderma harzianum)、酒石酸钙+多孢木霉(Trichoderma polysporum)、柠檬酸钙+多孢木霉(Trichoderma polysporum)、乳葡糖酸 钙(calcium lactogluconate)+多孢木霉(Trichoderma polysporum)、抗坏血酸 钙+多孢木霉(Trichoderma polysporum)、异柠檬酸钙+多孢木霉 (Trichoderma polysporum)、二甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+多孢木 霉(Trichoderma polysporum)、酒石酸钙+绿色木霉(Trichoderma viride)、 柠檬酸钙+绿色木霉(Trichoderma viride)、乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)+绿色木霉(Trichoderma viride)、抗坏血酸钙+绿色木霉 (Trichoderma viride)、异柠檬酸钙+绿色木霉(Trichoderma viride)、或二 甲基苹果酸钙(calcium citramalate)+绿色木霉(Trichoderma viride)。
本发明也包含含有如上在这里描述的至少一种拮抗微生物和至少两种 盐的组合物。本发明也包含含有如上在这里描述的至少两种拮抗微生物和 至少一种盐的组合物。
说明书和后附权利要求中所用,单数形式的“一(a)”、“一(an)”和 “the”包括复数的所指事物,除非上下文另外清楚地指示。经由实例,“一 种化合物”指一种化合物或多于一种化合物。
通过边界点的数字范围的列举包括全部整数数字和,在适当时,包含 在那个范围内的分数(例如1至5可以包括1、1.1、1.15、1.2、1.3、1.4、 1.5、2、2.75、3、3.80、4、和5)。
如这里所用,术语“衍生物”指的是化学衍生物,例如溶剂合物、水 合物立体异构形式、外消旋混合物、和酯。如这里所用并且除非另外表明, 术语“溶剂合物”包括可以通过所述盐和适合无机溶剂(例如水合物)或有 机溶剂的任何组合,例如但不限于醇类、类、酯类等。
如这里所述的盐的全部立体异构体包括在本发明的范围内,作为纯的 化合物还有其混合物。单独的对映异构体、非对映异构体、几何异构体及 其组合和混合物全部由本发明所包括。将这里所提及的盐和中间体的纯立 体异构形式限定为基本上无其它对映异构体或非对映异构体形式的所述 化合物或中间体的相同基本分子结构的同分异构体。
如这里所用,术语“增强化合物”指的是能够增强微生物生物学性质 的化合物。例如,它可以促进拮抗微生物抗能够对植物材料引起疾病的病 原体的生物学性质。
如这里所用,术语“拮抗微生物”指的是对于病原体是拮抗剂的微生 物,所述病原体例如能够对植物或动物包括人引起疾病的病原体。在优选 实施方案中所述微生物是对病原体的拮抗剂,所述病原体例如对植物材料 引起疾病的病原体。这类拮抗微生物可以选自包含细菌、真菌和酵母的组。
如这里所用,术语“生物杀虫剂”包括生物杀真菌剂、生物杀细菌剂 和生物杀病毒剂。
本发明的组合物除所述盐和所述微生物外还可以包含至少一种甘露聚 糖和/或其衍生物。所述甘露聚糖的量可以在0.001%和2%重量/体积的 范围内,优选在0.001%和0.2%重量/体积的范围内。
本发明因此提供可以用作植物和动物抗微生物感染的处理中的植物药 物和药物组合物的组合物,所述微生物感染包括细菌、酵母、真菌、病毒 和原生动物感染。
特别是,本组合物针对由植物材料的病原体引起的疾病显示改善的功 效,例如由定居植物部位的霉菌引起的疾病,或者在收获之后或者在植物 生命周期期间。可以由本组合物抑制的植物病原体的例举性种类包括,但 不限于,链格孢属物种(Alternaria spp.)、壳二孢属物种(Ascochyta spp.)、 曲酶属物种(Aspergillus spp.)、葡萄孢属物种(Botrytis spp.)、尾孢属物种 (Cercospora spp.)、支孢属物种(Cladosporium spp.)、麦属物种(Claviceps spp.)、刺盘孢属物种(Colletotrichum spp.)、白粉菌属物种(Erysiphe spp.)、 镰孢属物种(Fusarium spp.)、地霉属物种(Geotrichum spp.)、吉尔霉属物种 (Gilbertella spp.)、盘长孢属物种(Gloeosporium spp.)、长蠕孢属物种 (Helminthosporium spp.)、丛梗孢属物种(Monilia spp.)、链核盘菌属物种 (Monilinia spp.)、Mucov spp.、丛赤壳属物种(Nectria spp.)、青霉菌属物种 (Penicillium spp.)、霜霉属物种(Peronospora spp.)、无柄盘菌属物种(Pezicula spp.)、拟茎点霉属物种(Phomopsis spp.)、疫霉属物种(Phytophthora spp.)、 单轴霉属物种(Plasmopara spp.)、叉丝单囊壳属物种(Podosphaera spp.)、 Pseudocercosporium spp.、柄锈菌属物种(Puccinia spp.)、丝核菌属物种 (Rhizoctonia spp.)、根霉属物种(Rhizopus spp.)、Rynchosporium spp.、核盘 霉属物种(Sclerotinia spp.)、壳针孢属物种(Septoria spp.)、单丝壳属物种 (Sphaerotheca spp.)、钩丝壳属物种(Uncinula spp.)、黑粉菌属物种(Ustilago spp.)、黑星菌属物种(Venturia spp.)、轮枝孢属物种(Verticillium spp.)、和细 菌或病毒的病原体。在特定实施方案中,所述植物病原体可以选自包含下 列微生物的组:链格孢(Alternaria alternata)、壳二孢属物种(Ascochyta sp.)、 黄曲霉(Aspergillus flavus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、葱腐葡萄孢(Botrytis alii)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、蚕豆葡萄孢(Botrytis fabae)、尾孢属物种 (Cercospora sp.)、枝孢属物种(Cladosporium sp.)、麦角菌(Claviceps purpurea)、刺盘孢属物种(Colletotrichum sp.)、甜菜白粉菌(Erysiphe betae)、 禾白粉菌(Erysiphe graminis)、尖镰孢(Fusarium oxysporum)、白地霉 (Geotrichum candidum)、Gilbertella persicovia、懿长孢(Gloeosporium perennans)、果生盘长孢(Gloeosporium fructigenum)、长蠕孢属物种 (Helminthosporium sp.)、丛梗孢属物种(Monilia sp.)、Monilinia fructicola、 核果链盒盘菌(Monilinia laxa)、Mucov sp.、朱红丛赤壳(Nectria cinnabarina)、指状青霉(Penicillium digitatum)、扩展青霉(Penicillium expansum)、意大利青霉(Penicillium italicum)、霜霉属物种(Peronospora sp.)、Pezicula malicorticas、Phomopsis viticola、致病疫霉(Phytophthora infestans)、葡萄生单轴霉(Plasmopara viticola)、白叉丝单囊壳(Podosphaera leucotricha)、Pseudocercosporium sp.、禾柄锈菌(Puccinia graminis)、丝核 菌属物种(Rhizoctonia sp.)、少根根霉(Rhizopus arrhizus)、匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)、Rynchosporium sp.、葱核盘菌(Sclerotinia Cepivorum)、核盘菌 (Sclerotinia sclerotiorum)、Septoria apicola、单丝壳属物种(Sphaerotheca sp.)、葡萄钩丝壳(Uncinula necator)、黑粉菌属物种(Ustilago sp.)、苹果黑 星菌(Venturia inaequalis.);黄萎轮枝孢(Verticillium albo-atrum)、和大丽花 轮枝孢(Verticillium dahliae)。在特定实施方案中所述植物病原体可以选自 包含下列微生物的组:葡萄孢属物种(Botrytis spp.)、青霉菌属物种 (Penicillium spp.)、无柄盘菌属物种(Pezicula spp.)、和根霉属物种(Rhizopus spp.)。例如所述病原体可以是灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、指状青霉 (Penicillium digitatum)、扩展青霉(Penicillium expansum)、意大利青霉 (Penicillium italicum)、无柄盘菌属物种(Pezicula spp.)、和根霉属物种 (Rhizopus spp.)。
在优选实施方案中,本发明的组合物特别用作生物杀虫剂。
根据本发明,可以提供如这里所述的拮抗微生物和盐和/或其衍生物作 为如所述的微生物和盐的混合物。根据本发明的另一个实施方案,可以提 供如这里描述的拮抗微生物和盐作为单独的未混合的制剂,将其混合用于 制备本组合物。例如这里所述的拮抗微生物和盐可以存在于单独包装或以 预备混合形式一起包装在试剂盒中。如这里所述的拮抗微生物和盐可以存 在于作为单独未混合制剂或一起在一种制剂的试剂盒中。
本发明还包括制造根据本发明的组合物的方法,所述方法包含将如这 里所述的至少一种拮抗微生物与至少一种盐混合的步骤。
本发明的另一个方面是包含如这里所述的至少一种拮抗微生物和至少 一种盐的组合物和/或其衍生物,用于同时、单独或顺序施用到要处理的受 试者。
如这里所用术语“受试者”包括,要处理的植物或动物包括人。在本 发明的实施方案中,所述受试者是植物例如植物材料。
本发明的又另一个方面是用于处理植物材料的方法,所述方法包含将 有效量的本发明的至少一种拮抗微生物和如这里所述的至少一种盐和/或 其衍生物同时、单独或顺序施用到所述植物。
通过同时施用指的是将如这里所述的拮抗微生物和盐同时施用到所述 植物。例如作为如这里所述的拮抗微生物和盐的混合物,或者包含所述的 拮抗微生物和如这里所述的盐的组合物。
通过单独施用指的是将所述拮抗微生物和盐同时或基本同时施用到所 述植物。将拮抗微生物和盐作为单独的未混合的制剂施用。例如,所述拮 抗微生物和盐可以存在于单独包装的试剂盒中。
所述拮抗微生物在如这里所述的至少一种盐存在下防治植物病原体的 增强性能是特别出乎意料的。本发明提供包含更低浓度拮抗微生物同时延 长所述组合物抗所述病原体的持续时间的生物杀虫剂组合物。
而且,本发明也涉及,相比于单独的微生物的功效,如这里所述的盐 用作增强包含至少一种拮抗微生物的组合物功效的化合物。盐例如葡萄糖 酸钙、醋酸钙、柠檬酸钙、碳酸钙、碳酸氢钙、磷酸钙、乳酸钙、乳葡糖 酸钙(calcium lactogluconate)、抗坏血酸钙,显示特别促进包含至少一种微 生物的组合物的生物抗病原体功效。
本发明也涉及如这里所述的至少一种盐用作用于在不降低所述组合物 抗病原体功效的情况下降低拮抗微生物浓度的增强化合物。本发明还涉及 如这里所述的至少一种盐用作用于降低拮抗微生物浓度同时延长所述组 合物抗病原体功效持续时间的增强化合物。
在所述方法中,促进所述微生物或微生物基组合物的生物学性质可以 包含在不降低所述组合物抗病原体功效的情况下降低拮抗微生物的浓度。 增强并扩大所述生物学性质也可以包含将低拮抗微生物的浓度同时延长 所述组合物抗病原体功效的持续时间。因为本组合物的意外增加的效果, 本发明可以施用更低浓度的组合物。
本发明也涉及通过施用有效量的新组合物用于处理植物材料例如水果 和蔬菜的方法,用于防治收获后疾病。
本发明也涉及促进组合物中生物杀真菌剂、生物杀细菌剂和/或生物杀 病毒剂的性质的方法,所述方法包含至少将如这里所述的作为增强化合物 的盐加入到所述组合物。更具体而言,本发明包含如这里所述的至少一种 盐和/或其衍生物作为增强生物杀真菌剂、生物杀细菌剂和/或生物杀病毒 剂性质的化合物的使用。
本发明也提供用于抗一种或多种病原体使用的组合物,所述组合物包 含根据本发明的组合物和至少一种农用化学化合物。在本发明的实施方案 中,所述农用化学化合物可以选自包含杀真菌剂、杀细菌剂、线虫剂、 杀虫剂、除草剂等的组。
本发明也涉及用于促进组合物中至少一种农用化学品性质的方法,所 述方法包含将作为增强化合物的如这里所述的至少一种盐加入到所述组 合物。更具体而言,本发明包括如这里所述的至少一种盐和/或其衍生物作 为增强至少一种农用化学化合物性质的化合物的使用。例如,可以通过加 入如这里所述的至少一种盐促进化学化合物的杀虫剂性质。本发明因此也 提供用于抗一种或多种病原体使用的组合物,所述组合物包含如这里所述 的至少一种盐和/或其衍生物和农用化学化合物。在本发明的实施方案中, 所述农用化学化合物可以选自包含杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀虫 剂、除草剂等的组。
将通过实施本发明的一些方法的说明进一步阐明本发明。
实施例1
包括在本发明组合物中的盐和拮抗微生物列在表1和2中。
   表1                                                                                                                                          表2   盐  1   硫酸钙  2   Ca(H2PO4)2   拮抗微生物  a   放射形土壤杆菌   (Agrobacterium   radiobacter)  b   枯草芽孢杆菌(Bacillus  盐   3  CaHPO4   4  Ca3(PO4)2   5  CaCO3   6  Ca(HCO3)2   7  醋酸钙   8  乙酸钙(calcium ethanoate)   9  谷氨酸钙   10  甘油酸钙   11  赤藓糖酸钙(calcium  erythronate)   12  calcium theonate   13  核糖酸钙   14  阿拉伯糖酸钙(calcium  arabinoate)   15  木糖酸钙(calcium xylonate)   16  来苏糖酸钙(calcium lyxonate)   17  阿洛糖酸钙(allonate calcium)   l8  阿卓糖酸钙(altronate calcium)   19  葡萄糖酸钙   20  甘露糖酸钙(calcium mannoate)   21  古洛糖酸钙   22  艾杜糖酸钙   23  半乳糖酸钙  拮抗微生物  subtilis)   c  地衣芽孢杆菌(Bacillus  licheniformis)   d  短小芽孢杆菌(Bacillus  pumilis)   e  Candida oleophila   f  Candida saitoana   g  清酒假丝酵母(Candida  sake)   h  Candida tenius   i  产朊假丝酵母(Candida  utilis)   j  Coniothyrium minitans   k  胡萝卜软腐欧文氏菌  (Erwinia carotovora)   l  Gliocladium catenalatum   m  绿粘帚霉(Gliocladium  virens)   n  Hanseniaspora uvarum   o  克鲁维酵母属物种  (Kluyveromyces sp.)   p  Metschnikovia fructicola   q  Microdochium sp.   r  草酸青霉菌(Penicillium  oxalicum)   s  Phlebiopsis gigantean   t  异常毕赤酵母(Pichia  anomala)   u  季也蒙毕赤酵母(Pichia  guilliermondii)   v  洋葱假单胞菌  (Pseudomonas cepacia)   w  绿针假单胞菌  (Pseudomonas  chlororaphis)   盐   24   塔罗糖酸钙(calcium talonate)   25   阿洛庚糖酸钙(calcium   alloheptonate)   26   阿卓庚糖酸钙(calcium   altroheptonate)   27   葡庚糖酸钙   28   甘露庚糖酸钙   29   古洛庚糖酸钙(calcium   guloheptonate)   30   艾杜庚糖酸钙(calcium   idoheptonate)   31   半乳庚糖酸钙(calcium   galactoheptonate)   32   塔罗庚糖酸钙(calcium   taloheptonate)   33   丙醇二酸钙   34   苹果酸钙   35   酒石酸钙   36   柠檬酸钙   37   糖二酸钙   38   半乳糖二酸钙   39   乳葡糖酸钙(calcium   lactogluconate)   40   抗坏血酸钙   41   异柠檬酸钙   42   二甲基苹果酸钙(calcium   citramalate)  拮抗微生物   x  荧光假单胞菌  (Pseudomonas fluorescens)   y  丁香假单胞杆菌  (Pseudomonas syringae)   z  Pseudozyma flocullosa   aa  粘红酵母(Rhodotorula  glutinis)   bb  粘质红酵母(Rhodotorula  mucilaginosa)   cc  灰绿链霉菌(Streptomyces  griseoviridis)   dd  黄色蠕形霉(Talaromyces  flavus)   ee  深绿木霉(Trichoderma  atroviride)   ff  哈茨木霉(Trichoderma  harzianum)   gg  多孢木霉(Trichoderma  polysporum)   hh  绿色木霉(Trichoderma  viride)   ii  Ulocladium atrum
本发明包括一种或多种1至43的盐与一种或多种a至ii的拮抗微生物 的任何组合。在实施方案中,根据本发明的组合物包含一种盐与一种拮抗 微生物的组合,所述组合选自包含下列组合的组:1+a,2+a,3+a,4+a,5+a, 6+a,7+a,8+a,9+a,10+a,1+b,2+b,3+b,4+b,5+b,6+b,7+b,8+b,9+b,10+b, 1+c,2+c,3+c,4+c,5+c,6+c,7+c,8+c,9+c,10+c,1+d,2+d,3+d,4+d,5+d, 6+d,7+d,8+d,9+d,10+d,1+e,2+e,3+e,4+e,5+e,6+e,7+e,8+e,9+e,10+e, 1+f,2+f,3+f,4+f,5+f,6+f,7+f,8+f,9+f,10+f,1+g,2+g,3+g,4+g,5+g,6+g, 7+g,8+g,9+g,10+g,1+h,2+h,3+h,4+h,5+h,6+h,7+h,8+h,9+h,10+h,1+i, 2+i,3+i,4+i,5+i,6+i,7+i,8+i,9+i,10+i,1+j,2+j,3+j,4+j,5+j,6+j,7+j,8+j, 9+j,10+j,1+k,2+k,3+k,4+k,5+k,6+k,7+k,8+k,9+k,10+k,1+l,2+l,3+l, 4+l,5+l,6+l,7+l,8+l,9+l,10+l,1+m,2+m,3+m,4+m,5+m,6+m,7+m,8+m, 9+m,10+m,1+n,2+n,3+n,4+n,5+n,6+n,7+n,8+n,9+n,10+n,1+o,2+o, 3+o,4+o,5+o,6+o,7+o,8+o,9+o,10+o,1+p,2+p,3+p,4+p,5+p,6+p,7+p, 8+p,9+p,10+p,1+q,2+q,3+q,4+q,5+q,6+q,7+q,8+q,9+q,10+q,1+r,2+r, 3+r,4+r,5+r,6+r,7+r,8+r,9+r,10+r,1+s,2+s,3+s,4+s,5+s,6+s,7+s,8+s, 9+s,10+s,1+t,2+t,3+t,4+t,5+t,6+t,7+t,8+t,9+t,10+t,1+u,2+u,3+u,4+u, 5+u,6+u,7+u,8+u,9+u,10+u,1+v,2+v,3+v,4+v,5+v,6+v,7+v,8+v,9+v, 10+v,1+w,2+w,3+w,4+w,5+w,6+w,7+w,8+w,9+w,10+w,1+x,2+x,3+x, 4+x,5+x,6+x,7+x,8+x,9+x,10+x,11+a,12+a,13+a,14+a,15+a,16+a, 17+a,18+a,11+b,12+b,13+b,14+b,15+b,16+b,17+b,18+b,11+c,12+c, 13+c,14+c,15+c,16+c,17+c,18+c,11+d,12+d,13+d,14+d,15+d,16+d, 17+d,18+d,11+e,12+e,13+e,14+e,15+e,16+e,17+e,18+e,11+f,12+f,13+f, 14+f,15+f,16+f,17+f,18+f,11+g,12+g,13+g,14+g,15+g,16+g,17+g, 18+g,11+h,12+h,13+h,14+h,15+h,16+h,17+h,18+h,11+i,12+i,13+i, 14+i,15+i,16+i,17+i,18+i,11+j,12+j,13+j,14+j,15+j,16+j,17+j,18+j, 11+k,12+k,13+k,14+k,15+k,16+k,17+k,18+k,11+l,12+l,13+l,14+l,15+l, 16+l,17+l,18+l,11+m,12+m,13+m,14+m,15+m,16+m,17+m,18+m,11+n, 12+n,13+n,14+n,15+n,16+n,17+n,18+n,11+o,12+o,13+o,14+o,15+o, 16+o,17+o,18+o,1+aa,2+aa,3+aa,4+aa,5+aa,6+aa,7+aa,8+aa,9+aa, 10+aa,1+bb,2+bb,3+bb,4+bb,5+bb,6+bb,7+bb,8+bb,9+bb,10+bb,1+cc, 2+cc,3+cc,4+cc,5+cc,6+cc,7+cc,8+cc,9+cc,10+cc,1+dd,2+dd,3+dd, 4+dd,5+dd,6+dd,7+dd,8+dd,9+dd,10+dd,1+ee,2+ee,3+ee,4+ee,5+ee, 6+ee,7+ee,8+ee,9+ee,10+ee,1+ff,2+ff,3+ff,4+ff,5+ff,6+ff,7+ff,8+ff, 9+ff,10+ff,1+gg,2+gg,3+gg,4+gg,5+gg,6+gg,7+gg,8+gg,9+gg,10+gg, 1+hh,2+hh,3+hh,4+hh,5+hh,6+hh,7+hh,8+hh,9+hh,10+hh,1+ii,2+ii, 3+ii,4+ii,5+ii,6+ii,7+ii,8+ii,9+ii,10+ii,11+aa,12+aa,13+aa,14+aa,15+aa, 16+aa,17+aa,18+aa,11+bb,12+bb,13+bb,14+bb,15+bb,16+bb,17+bb, 18+bb,11+cc,12+cc,13+cc,14+cc,15+cc,16+cc,17+cc,18+cc,11+dd, 12+dd,13+dd,14+dd,15+dd,16+dd,17+dd,18+dd,11+ee,12+ee,13+ee, 14+ee,15+ee,16+ee,17+ee,18+ee,11+ff,12+ff,13+ff,14+ff,15+ff,16+ff, 17+ff,18+ff,11+gg,12+gg,13+gg,14+gg,15+gg,16+gg,17+gg,18+gg, 11+hh,12+hh,13+hh,14+hh,15+hh,16+hh,17+hh,18+hh,11+ii,12+ii,13+ii, 14+ii,15+ii,16+ii,17+ii,18+ii and 11+p.
在另一个实施方案中,根据本发明的组合物包含一种盐与一种拮抗微 生物的组合,所述组合选自包含下列组合的组:12+p,13+p,14+p,15+p, 16+p,17+p,18+p,11+q,12+q,13+q,14+q,15+q,16+q,17+q,18+q,11+r, 12+r,13+r,14+r,15+r,16+r,17+r,18+r,11+s,12+s,13+s,14+s,15+s,16+s, 17+s,18+s,11+t,12+t,13+t,14+t,15+t,16+t,17+t,18+t,11+u,12+u,13+u, 14+u,15+u,16+u,17+u,18+u,11+v,12+v,13+v,14+v,15+v,16+v,17+v, 18+v,11+w,12+w,13+w,14+w,15+w,16+w,17+w,18+w,11+x,12+x,13+x, 14+x,15+x,16+x,17+x,18+x,19+a,20+a,21+a,22+a,23+a,24+a,25+a, 26+a,27+a,28+a,29+a,30+a,19+b,20+b,21+b,22+b,23+b,24+b,25+b, 26+b,27+b,28+b,29+b,30+b,19+c,20+c,21+c,22+c,23+c,24+c,25+c, 26+c,27+c,28+c,29+c,30+c,19+d,20+d,21+d,22+d,23+d,24+d,25+d, 26+d,27+d,28+d,29+d,30+d,19+e,20+e,21+e,22+e,23+e,24+e,25+e, 26+e,27+e,28+e,29+e,30+e,19+f,20+f,21+f,22+f,23+f,24+f,25+f,26+f, 27+f,28+f,29+f,30+f,19+g,20+g,21+g,22+g,23+g,24+g,25+g,26+g, 27+g,28+g,29+g,30+g,19+h,20+h,21+h,22+h,23+h,24+h,25+h,26+h, 27+h,28+h,29+h,30+h,19+i,20+i,21+i,22+i,23+i,24+i,25+i,26+i,27+i, 28+i,29+i,30+i,19+j,20+j,21+j,22+j,23+j,24+j,25+j,26+j,27+j,28+j, 29+j,30+j,19+k,20+k,21+k,22+k,23+k,24+k,25+k,26+k,27+k,28+k, 29+k,30+k,19+l,20+l,21+l,22+l,23+l,24+l,25+l,26+l,27+l,28+l,29+l, 30+l,19+m,20+m,21+m,22+m,23+m,24+m,25+m,26+m,27+m,28+m, 29+m,30+m,19+n,20+n,21+n,22+n,23+n,24+n,25+n,26+n,27+n,28+n, 29+n,30+n,19+o,20+o,21+o,22+o,23+o,24+o,25+o,26+o,27+o,28+o, 29+o,30+o,19+p,20+p,21+p,22+p,23+p,24+p,25+p,26+p,27+p,28+p, 29+p,30+p,19+q,20+q,21+q,22+q,23+q,24+q,25+q,26+q,27+q,28+q, 29+q,30+q,19+r,20+r,21+r,22+r,23+r,24+r,25+r,26+r,27+r,28+r,29+r, 30+r,19+s,20+s,21+s,22+s,23+s,24+s,25+s,26+s,27+s,28+s,29+s,30+s, 19+t,20+t,21+t,22+t,23+t,24+t,25+t,26+t,27+t,28+t,29+t,30+t,19+u, 20+u,21+u,22+u,23+u,24+u,25+u,26+u,27+u,28+u,29+u,30+u,19+v, 20+v,21+v,22+v,23+v,24+v,25+v,26+v,27+v,28+v,29+v,30+v,19+w, 20+w,21+w,22+w,23+w,24+w,25+w,26+w,27+w,28+w,29+w,30+w, 19+x,20+x,21+x,22+x,23+x,24+x,25+x,26+x,27+x,28+x,29+x,30+x,, 31+a,32+a,33+a,34+a,35+a,36+a,37+a,38+a,39+a,40+a,41+a,42+a, 31+b,32+b,33+b,34+b,35+b,36+b,37+b,38+b,39+b,40+b,41+b,42+b, 31+c,32+c,33+c,34+c,35+c,36+c,37+c,38+c,39+c,40+c,41+c,42+c, 31+d,32+d,33+d,34+d,35+d,36+d,37+d,38+d,39+d,40+d,41+d,42+d, 31+e,32+e,33+e,34+e,35+e,36+e,37+e,38+e,19+aa,20+aa,21+aa,22+aa, 23+aa,24+aa,25+aa,26+aa,27+aa,28+aa,29+aa,30+aa,19+bb,20+bb, 21+bb,22+bb,23+bb,24+bb,25+bb,26+bb,27+bb,28+bb,29+bb,30+bb, 19+cc,20+cc,21+cc,22+cc,23+cc,24+cc,25+cc,26+cc,27+cc,28+cc, 29+cc,30+cc,19+dd,20+dd,21+dd,22+dd,23+dd,24+dd,25+dd,26+dd, 27+dd,28+dd,29+dd,30+dd,19+ee,20+ee,21+ee,22+ee,23+ee,24+ee, 25+ee,26+ee,27+ee,28+ee,29+ee,30+ee,19+ff,20+ff,21+ff,22+ff,23+ff, 24+ff,25+ff,26+ff,27+ff,28+ff,29+ff,30+ff,19+gg,20+gg,21+gg,22+gg, 23+gg,24+gg,25+gg,26+gg,27+gg,28+gg,29+gg,30+gg,19+hh,20+hh, 21+hh,22+hh,23+hh,24+hh,25+hh,26+hh,27+hh,28+hh,29+hh,30+hh, 19+ii,20+ii,21+ii,22+ii,23+ii,24+ii,25+ii,26+ii,27+ii,28+ii,29+ii,30+ii, 31+aa,32+aa,33+aa,34+aa,35+aa,36+aa,37+aa,38+aa,39+aa,40+aa, 41+aa,42+aa,31+bb,32+bb,33+bb,34+bb,35+bb,36+bb,37+bb,38+bb, 39+bb,40+bb,41+bb,42+bb,31+cc,32+cc,33+cc,34+cc,35+cc,36+cc, 37+cc,38+cc,39+cc,40+cc,41+cc,42+cc,31+dd,32+dd,33+dd,34+dd, 35+dd,36+dd,37+dd,38+dd,39+dd,40+dd,41+dd,42+dd,31+ee,32+ee, 33+ee,34+ee,35+ee,36+ee,37+ee and 38+ee.
在另一个实施方案中,根据本发明的组合物包含一种盐和一种拮抗微 生物的组合,所述组合选自包含下列组合的组:39+e,40+e,41+e,42+e, 31+f,32+f,33+f,34+f,35+f,36+f,37+f,38+f,39+f,40+f,41+f,42+f,31+g, 32+g,33+g,34+g,35+g,36+g,37+g,38+g,39+g,40+g,41+g,42+g,31+h, 32+h,33+h,34+h,35+h,36+h,37+h,38+h,39+h,40+h,41+h,42+h,31+i, 32+i,33+i,34+i,35+i,36+i,37+i,38+i,39+i,40+i,41+i,42+i,31+j,32+j, 33+j,34+j,35+j,36+j,37+j,38+j,39+j,40+j,41+j,42+j,31+k,32+k,33+k, 34+k,35+k,36+k,37+k,38+k,39+k,40+k,41+k,42+k,31+l,32+l,33+l, 34+l,35+l,36+l,37+l,38+l,39+l,40+l,41+l,42+l,31+m,32+m,33+m, 34+m,35+m,36+m,37+m,38+m,39+m,40+m,41+m,42+m,31+n,32+n, 33+n,34+n,35+n,36+n,37+n,38+n,39+n,40+n,41+n,42+n,31+o,32+o, 33+o,34+o,35+o,36+o,37+o,38+o,39+o,40+o,41+o,42+o,31+p,32+p, 33+p,34+p,35+p,36+p,37+p,38+p,39+p,40+p,41+p,42+p,31+q,32+q, 33+q,34+q,35+q,36+q,37+q,38+q,39+q,40+q,41+q,42+q,31+r,32+r, 33+r,34+r,35+r,36+r,37+r,38+r,39+r,40+r,41+r,42+r,31+s,32+s,33+s, 34+s,35+s,36+s,37+s,38+s,39+s,40+s,41+s,42+s,31+t,32+t,33+t,34+t, 35+t,36+t,37+t,38+t,39+t,40+t,41+t,42+t,31+u,32+u,33+u,34+u,35+u, 36+u,37+u,38+u,39+u,40+u,41+u,42+u,31+v,32+v,33+v,34+v,35+v, 36+v,37+v,38+v,39+v,40+v,41+v,42+v,31+w,32+w,33+w,34+w,35+w, 36+w,37+w,38+w,39+w,40+w,41+w,42+w,31+x,32+x,33+x,34+x,35+x, 36+x,37+x,38+x,39+x,40+x,41+x,42+x,39+ee,40+ee,41+ee,42+ee, 31+ff,32+ff,33+ff,34+ff,35+ff,36+ff,37+ff,38+ff,39+ff,40+ff,41+ff, 42+ff,31+gg,32+gg,33+gg,34+gg,35+gg,36+gg,37+gg,38+gg,39+gg, 40+gg,41+gg,42+gg,31+hh,32+hh,33+hh,34+hh,35+hh,36+hh,37+hh, 38+hh,39+hh,40+hh,41+hh,42+hh,31+ii,32+ii,33+ii,34+ii,35+ii,36+ii, 37+ii,38+ii,39+ii,40+ii,41+ii,42+ii.
实施例2
实施例2阐明了下列事实:通过使用本发明的组合物可以获得良好的 保护作用,所述组合物包含如这里所定义的盐例如葡萄糖酸钙(CG)和抗由 苹果属种的水果上霉菌引起的收获后疾病活性的拮抗酵母。
植物材料
从比利时的用标准栽培惯例保养的商业果园收获苹果(苹果(Malus domestica)Borkh栽培品种Golden)并放置在正规的长期贮藏库中。使用商 业类别I的水果。它们是从批发商购买并于使用前在4±1℃的低温房间中 贮藏最多15天。
病原体
最初从比利时Gembloux的苹果分离出扩展青霉(Penicillium expansum)(蓝色霉菌)菌株。将来自病原体的分生孢子以悬浮液形式放在甘 油溶液(25%)中并贮藏在-70℃。从这个贮藏的材料出发,在25℃将真菌 菌株转移到PDA培养基。在无菌的Tween 20水溶液(0.05%)中制备分生孢 子悬浮液,并且利用Bürker细胞(Bürker cell)调节到所需浓度(106孢子 /ml)。
拮抗微生物
拮抗酵母菌株是以编号40564保藏在BBCMTM/MUCL Culture Collection of the Mycothèque de l’Université Catholique de Louvain的 Candida oleophila Montrocher,下文中称为“菌株O”。
该拮抗酵母菌株是从苹果表面分离出并贮藏在-70℃的甘油溶液(25%) 中。在使用前,将所述酵母菌株以24小时的间隔在PDA(马铃薯Dextrose Agar)上连续再培养三次。在第三世代,将酵母细胞从培养基除去并悬浮在 等渗水(NaCl 0.85%)中。在建立微生物悬浮液吸光度(在595nm)和相同的 悬浮液铺到PDA上的菌落形成单位(cfu)的关系的回归线之后,将悬浮浓 度调节到所需的值。
处理
通过在次氯酸钠(10%的商售产品)中浸渍2分钟将水果消毒。将它们在 无菌水中漂洗并在分层流动中干透,之后通过从沿着所述水果的一侧的表 面相距4-5cm的三个部位除去4mm直径且2-3mm深的组织块。
通过施用40μl的本领域技术水平的组合物或根据本发明的组合物处 理所述伤口。
在塑料盒中的24h在20℃的培育期之后,将所述伤口用40μl各自病 原体的分生孢子悬浮液接种。在25℃培育所述水果。
在所述病原体接种后7天以后测量围绕所述伤口发展的损伤直径。每 次处理使用至少五个水果(15个伤口)。大多数时间,每次处理使用15个 水果和45个伤口。
利用下式从接种时间后由水果腐烂剂引起的损伤直径计算由不同处理 提供的保护百分比:
D T - D X D T × 100 = Y %
其中Y是保护百分比;DT是未处理的对照的平均损伤直径并且DX是处理 的水果的平均损伤直径。
在受控的条件下评价根据本发明的组合物抗由扩展青霉(P.expansum) 引起的收获后苹果腐烂的效果。
在本说明书的下面部分中,GC代表一水合物形式的葡萄糖酸钙(CAS 号299-28-5),食品级,Jungbunzlauer,Germany。CN代表硝酸钙(四水合物), 98%,VWR。这些产品本身是已知的并且是商购的。
在第一组的实验中,将菌株O的标准组合物用作对照。菌株O使用的 标准浓度是每毫升107菌落形成单位(cfu/ml),而将浓度为105cfu/ml视为 亚最佳的。事实上,在表3中可以看到,当单独使用菌株O用这个浓度获 得的结果(按照如上定义计算的保护百分比表示)不令人满意。
  表3  针对扩展青霉(Penicillium expansum)的保护   对照   菌株O   0   107   105   105   l05   105   钙盐   0   0   0   CG 2g/l   CN 1.2g/l   CN 2.4g/l   平均感染   11.5   0.8   2.00   1.5   7.6   10.9   保护功效(%) -   93.1   82.7   87.3   34.1   5.8
根据本发明,意外地发现,包含亚最佳浓度为105cfu/ml的菌株O和 2g/l CG的组合物改善了所述保护。
此外,发现,包含亚最佳浓度为105cfu/ml的菌株O和或者1.2g/l或 者2.4g/l硝酸钙的组合物在保护所述水果抗扩展青霉中比只含有菌株O的 组合物,或者比根据本发明实施方案的组合物即包含菌株O和2g/l的CG 有较差的效果。
在苹果上的第二组实验中,其结果在表4中给出,将菌株O的标准组 合物用作了对照。
                      表4   对照   菌株O   0   107   105   105   CG   0   0   0   2g   平均感染   12.9   6.1   8.4   1.2   保护功效%   52.6   35.1   90.7
在第一个组合物中,使用的菌株O的浓度是107cfu/ml的标准浓度, 而在第二个中,使用的浓度是105cfu/ml的亚最佳浓度。
此外,意外地发现,包含105cfu/ml的亚最佳浓度的菌株O和2g/l CG 的组合物改善了水果针对所述病原体的保护。
在苹果上的第二组实验中,其结果在表5中给出,将菌株O的标准组 合物用作了对照。
                  表5   对照   菌株O   0   107   105   105   CG   0   0   0   2g   平均感染   13.2   3.7   7.1   2.7   保护功效%   71.7   46.0   79.3
根据本发明,CG的加入可以将菌株O的浓度降低百倍到105cfu/ml 同时获得比107cfu/ml的标准浓度更佳的且增强的抗扩展青霉的功效。这 个结果阐明了根据本发明的组合物的显著特性。
实施例3
植物材料
如实施例2中所述的苹果(苹果(Malus domestica)Borkh栽培品种 Golden)。
病原体
如实施例2中所述的扩展青霉(Penicillium expansum)。
拮抗微生物
拮抗酵母菌株是如实施例2中所述的Candida oleophila。
处理
如实施例2中所述将苹果损伤并且通过施用包含根据本发明的盐、105 cfu的C.oleophila的组合物,或本领域技术水平的组合物处理。使用的所 述盐是葡萄糖酸钙(CG)、柠檬酸三钙:(TC)、碳酸钙(CCa)、乳酸钙(CL)、 乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)(CLG)、抗坏血酸钙(CA)
在培育后,用扩展青霉接种伤口。将所述水果进一步保温。在接种所 述病原体后的7天之后测量在所述伤口周围发展的损伤的直径。如实施例 2中所述计算由不同处理提供的保护百分比。表6a和6b中显示了来自两 组实验的拮抗剂和盐的组合对苹果腐烂的保护效果的结果。将菌株O(107) 的标准组合物用作对照。
                                                表6a   菌株O   对照   无菌   株   107   105   105   105   105   105   105   105   盐   CG   TC   CCa   CL   CLG   CA   浓度   0   0   0   2g/l   0.87g/l   0.47g/l   1.34g/l   1.3g/l   1.96g/l   平均感染   18.4   5.2   9.2   4.8   2.8   4.1   7.7   5.6   5.4   功效%   0   71.8   50.3   73.8   84.8   77.9   58.1   69.4   70.9
                                                表6b   菌株O   对照   无菌株   107   105   105   105   105   105   105   105   盐   CG   TC   CCa   CL   CLG   CA   浓度   0   0   0   2g/l   0.87g/l   0.47g/l   1.34   g/l   1.3g/l   1.96g/l   平均感染   4.07   6.20   5.53   6.50   6.67   3.72   6.06   6.21   5.31   功效%   0   84.3   67.0   74.2   83.3   92.8   82.5   86.3   86.7
根据本发明,不同盐的加入可以将菌株O的浓度降低百倍到105cfu/ml 同时获得比单独的菌株O更佳的保护。
在苹果上的另一组实验中,表7中给出了其结果,将菌株O的标准组 合物用作对照,并且使用的盐是:葡萄糖酸钙(CG)柠檬酸三钙(TC)和碳 酸钙(CCa)。
                      Table 7   菌株O   对照   无菌株   105   107   105   105   105   105   盐   CaCl2   CG   TC   CCA   浓度   20g/l   2g/l   0.87g/l   0.47g/l   平均感染   26.5   6.5   3.4   0.7   1.7   1.0   0.7   功效%   75.5   87.1   97.4   93.5   96.4   97.2
拮抗微生物与根据本发明的不同盐的组合可以将菌株O的浓度降低百 倍到105cfu/ml同时获得比107cfu/ml的浓度更佳的且增强的抗扩展青霉 的功效。这个结果阐明了根据本发明的组合物的显著特性。
另外,相比于用于获得相等保护的现有技术的CaCl2量,根据本发明 的组合物可以显著降低需要的盐量。
实施例4
植物材料
如实施例2中所述的苹果(苹果(Malus domestica)Borkh栽培品种 Golden)。
病原体
如实施例2中所述的扩展青霉(Penicillium expansum)。
拮抗微生物
拮抗酵母菌株是如实施例2中所述的Candida oleophila。
处理
如实施例2中所述将苹果损伤并且通过施用包含根据本发明的盐和 105cfu的C.oleophila的组合物,或本领域技术水平的组合物处理。
在培育后,用扩展青霉接种伤口。将所述水果进一步保温。在接种所 述病原体后的7天之后测量在所述伤口周围发展的损伤的直径。如实施例 2中所述计算由不同处理提供的保护百分比。表8中显示了结果。将菌株 O的标准组合物用作对照。使用的盐是:葡萄糖酸钙(CG)、碳酸钙(CCa)、 碳酸氢钙(CBC)、单碱价磷酸钙(CPM)、和三碱价磷酸钙(CPT)。
                                         表8   菌株O   对照   107   105   105   105   105   105   105   105   盐   CaCl2   CG   CCa   CBC   CPT   CPM   浓度   20g/l   2g/l   0,47g/l   0,762g/l   0,486g/l   1,485g/l   平均感染   2.3   1.0   1.2   0.3   0.5   0.3   0.5   0.4   0.1   功效%   55.8   45.4   87.6   77.4   88.6   76.5   84.1   94.4
在相同的实验中,在接种所述病原体后的11天之后测量在所述伤口周 围发展的损伤的直径。如实施例2中所述计算由不同处理提供的保护百分 比。结果表示在表9中。将菌株O(107)的标准组合物用作对照。使用的盐 是:葡萄糖酸钙(CG)、碳酸钙(CCa)、碳酸氢钙(CBC)、单碱价磷酸钙(CPM)、 和三碱价磷酸钙(CPT)。
                                           表9   菌株O   对照   107   105   105   105   105   105   105   105   盐   CaCl2   CG   CCa   CBC   CPT   CPM   浓度   20g/l   2g/l   0,47g/l   0,762g/l   0,486g/l   1,485g/l   平均感染   51   28   2.8   0.6   1.5   0.8   2.1   0.9   0.7   功效%   45.2   44.1   87.7   70.5   85.1   59.0   82.1   86.6
从表8和9的结果可以看出,当与以相同浓度单独使用所述拮抗微生 物时相比,葡萄糖酸钙、碳酸钙、碳酸氢钙、单碱价磷酸钙、和三碱价磷 酸钙提供抗扩展青霉的良好保护。
实施例4
植物材料
如实施例2中所述的苹果(苹果(Malus domestica)Borkh栽培品种 Golden)。
病原体
灰葡萄孢(Botrytis cinerea)。
拮抗微生物
拮抗酵母菌株是如实施例2中所述的Candida oleophila。
处理
如实施例2中所述将苹果损伤并且通过施用包含根据本发明的盐和 105cfu的C.oleophila的组合物,或本领域技术水平的组合物处理。
在培育后,用扩展青霉接种伤口。将所述水果进一步保温。在接种所 述病原体后的5天之后测量在所述伤口周围发展的损伤的直径。如实施例 2中所述计算由不同处理提供的保护百分比。表10中显示了结果。将菌株 O的标准组合物用作对照。使用的盐是:葡萄糖酸钙(CG)、柠檬酸三钙: (TC)、柠檬酸钾(PC)、谷氨酸钙(CGt)。
                                      表10   菌株O   对照   107   105   105   105   105   105   105   盐   CaCl2   CG   CGt   TC   PC   浓度   20g/l   2g/l   1,805g/l   0,848g/l   0,964g/l   平均感染   1.6   0.3   0.9   0.3   0.6   0.8   0.3   0.5   功效%   84.2   43.3   82.4   60.7   51.3   78.9   66.4
结论
这些实施例中给出的全部结果显示,根据本发明的组合物表明比相同 施用浓度下使用的含有微生物菌株的本领域技术水平的组合物提供更高 的功效。通过本实施例清楚地表明在所述拮抗微生物的保护特性上的如这 里所述盐的惊人特性。利用下列盐与C.oleophila的组合获得了非常好的 结果:葡萄糖酸钙、柠檬酸钙、柠檬酸钾、谷氨酸钾、单碱价磷酸钙、三 碱价磷酸钙、碳酸钙、碳酸氢钙、抗坏血酸钙、乳酸钙或乳葡糖酸钙(calcium lactogluconate)。
本发明中使用的盐是出人意料好的促进化合物,它可以在不降低所述 组合物抗病原体功效的情况下降低拮抗微生物的浓度。它们也可以降低拮 抗微生物的浓度同时延长所述组合物抗病原体功效的持续时间。
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