一种早期快速筛查HPV16-E6和HPV18-E6的试剂盒
阅读：30发布：2020-05-08
专利汇可以提供一种早期快速筛查HPV16-E6和HPV18-E6的试剂盒专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种早期快速筛查HPV16-E6和HPV18-E6的 试剂 盒 。本发明通过制备核酸裂解液，核酸清洗液和常温PCR反应液，制备得到一种不依赖仪器和专业操作人员的快速检测HPV16和HPV18的试剂盒。市场上目前的HPV检测方法主要是用qPCR的方法，对人员和仪器要求非常高， 采样 的时候需要用 宫颈 筛，必须依赖医疗人员辅助采样。本发明可以快速检测HPV，采样方便，检测方便，用户购买后，在家就可以完成自检，特别适用于家庭检测以及检测设备缺乏的乡镇医院。，下面是一种早期快速筛查HPV16-E6和HPV18-E6的试剂盒专利的具体信息内容。
一种早期快速筛查HPV16-E6和HPV18-E6的试剂盒
技术领域
背景技术
[0002] HPV是一种无胞膜的小DNA病毒，目前约有170种HPV亚型被识别。HPV分为低危型和高危型，HPV16和HPV18是最主要的两种高危型。研究证实，99.7%的宫颈癌，是由于HPV的长期持续性感染所导致。
[0003] 根据国务院办公厅发布的《关于推进分级诊疗制度建设的指导意见》，指出到2020年，基层首诊、双向转诊、急慢分治、上下联动的分级诊疗模式逐步形成，基本建立符合国情的分级诊疗制度。《中国妇女发展纲要（2011-2020）》指出，要在2020年前，将我国妇女“两癌”发生率控制在较低水平。因此，在未来我国宫颈癌筛查具有巨大的市场空间。而符合大规模筛查需求的HPV检测产品，需要满足成本可控，操作简便，最好是单人份在短时间内即可出结果的产品，即POCT的HPV检测产品，而且此类产品同样适合临床应用开展。
[0004] 目前我国HPV的筛查主要采用荧光定量PCR法，从核酸的提取到样品的检测，耗时过长，对操作人员的技术性和仪器设备的精确性要求非常高，只能在专业的医院或者第三方检测平台开展筛查检测工作。
发明内容
[0005] 本发明的目的则是克服了现有技术的不足，提供一种早期快速筛查HPV16-E6和HPV18-E6的试剂盒。采用快速核酸提取方法、常温核酸扩增系统和免疫层析技术，制备出一款方便快捷的HPV16-E6和HPV18-E6检测试剂盒，该产品不依赖任何检测仪器，用户在家就可以自行检测。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的: S1. 用棉棒刮拭阴道黏膜，获得检测样本，经过裂解和清洗后，获得核酸样本；S2. 将核酸样本放入常温核酸扩增体系中，常温放置30分钟后，获得PCR扩增后的待检测液；
S3. 将免疫层析试纸插入待检测液中，静置5分钟，观察结果。
S3. 将免疫层析试纸插入待检测液中，静置5分钟，观察结果。
[0007] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明采用HPV16-E6和HPV18-E6特殊标记引物，结合了三种快速检测技术，达到了简单、快速并且不依赖仪器和技术人员筛查高危型HPV16型和HPV18型的目的。
附图说明
附图说明
[0008] 图1是本发明主要组成部分。
[0010] 图2是本发明试剂盒检测流程。
[0011] 主要附图标号说明：1：棉棒；2：滤纸；3：试纸条；4：裂解液；5：清洗液；6：PCR反应液。
[0012]
具体实施方式
[0014] 实施例1.待检测样本中核酸快速提取，包括以下步骤：
S1. 收集样本
用棉棒在阴道黏膜来回刮拭6-10次，获得黏膜上皮细胞。
S1. 收集样本
用棉棒在阴道黏膜来回刮拭6-10次，获得黏膜上皮细胞。
[0015] S2. 提取核酸将棉棒放入管1裂解液中，裂解液成分为（20 mM Tris [pH 8.0], 25 mM NaCl, 2.5 mM EDTA, 0.05% SDS），用一根滤纸浸入裂解液中结合核酸，3秒后，将滤纸进入清洗液中，清洗液成分为（pH 8.0的10 mM Tris, 0.1% Tween-20），3秒后将滤纸放入常温核酸扩增管中。
[0016] S3. 常温PCR常温核酸扩增体系包括以下成分：HPV16E6-F1: 5'-BIO-TATGCTGTATGTGATAAATG-3'、HPV16E6-R1: 5'-DIG-TGTTCTAATGTTGTTCCA-3'、HPV18E6-F1: 5'- BIO-
GGTGCCAGAAACCGTTGA-3'、HPV18E6-F1: 5'-DIG-CTGCGTCGTTGGAGTCGT-3'、重组酶、单链结合蛋白、链置换DNA聚合酶、PCR MIX和双蒸水；PCR反应条件为37℃，30分钟。
GGTGCCAGAAACCGTTGA-3'、HPV18E6-F1: 5'-DIG-CTGCGTCGTTGGAGTCGT-3'、重组酶、单链结合蛋白、链置换DNA聚合酶、PCR MIX和双蒸水；PCR反应条件为37℃，30分钟。
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