发明领域

糖酵解是在文献中用生化详细描述的第一批代谢过程之一。尽管已知 碳水化合物在生物体中的一般流动，尽管糖酵解途径中所有的酶都已得到 阐明，但通过刺激糖酵解来决定代谢诱导的信号还未阐明。已提出了几个 尤其是依据酵母中的情况的假说，但没有一个得到毫无疑问的证实。

对碳水化合物分配方向的影响不仅直接影响糖酵解和碳水化合物储 存的细胞过程，而且也被用于影响继发性的或衍生的过程例如细胞分裂、 生物量的产生和储存化合物的积累，因而决定生长和生产能力。

尤其在植物中，碳水化合物的存在经常直接影响一个组织的特性，碳 水化合物分配的方向能产生重要的差别。

植物的生长、发育和产量取决于这种植物在光合作用过程中能从CO2 固定衍化而来的能量。光合作用主要发生在叶内，较次一些程度的光合作 用发生在茎中，而其它植物组织如根、种子或块茎对光同化作用基本上没 有贡献。这些组织的生长和营养完全依靠光合作用活跃的组织。这就意味 着有一个从光合作用衍化而来的产物(共同称为光合产物)到植物光合作 用不活跃部位的流动。

光合作用活跃的部分命名为“源”，它们定义为光合产物的净输出者。 光合作用不活跃的部分命名为“池”，它们被定义为光合产物的净输入者。

假定光合作用的效率和碳水化合物的分配在一个植物内都是必需 的。新生长的组织如新叶或其它部分如根和种子完全依赖于源内的光合作 用。影响碳水化合物分配的可能性会对一个植物的形态有很大影响，例如 它的高度、结间距、叶的大小和形状以及根系统的大小和结构。

此外，光同化作用产物的分配对于植物生物量和产物的产量很重要。 一个例子是上个世纪中小麦的培育。它的光合能力没有显著的的变化，但 小麦产量却大大增加，即收获指数(可收获生物量/总生物量的比率)增加。 根本的原因是通过传统育种改变了池对源的比率，使可收获的池，即种子 部分增加。然而调节光同化作用产物的分配以及相应的源和池形成的机制 还未知。此机制被认为位于碳水化合物代谢途径和其调节中的某一位置。 在最近的研究中，明确了己糖激酶可以在代谢信号传递和代谢流动的控制 中起很重要的作用。已推定了许多调节己糖激酶活性的机制(Graham等 人(1994)，植物细胞(The Plant Cell)6:761；Jang & Sheen(1994)，植 物细胞6,1665；Rose等人，欧洲生物化学杂志(Eur.J.Biochem.)199, 511-518,1991；Blazquez等人,(1993),FEBS 329,51；Koch,Annu.Rev. Plant Physiol.Plant.Mol.Biol.(1996)47,509；Jang等人，(1997)，植物 细胞9,5。这些己糖激酶调节理论中推定在酵母中的一个提到了海藻糖 及其相关单糖(Thevelein和Hohmann(1995),TIBS 20,3)。然而，因 为海藻糖的合成被认为限定于某些种类，很难看出这是一个广泛的机制。

因此，仍需要阐明引导体内细胞、组织和器官的组成和/或发育改变 的信号。

                       发明概述

现已发现通过导入海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)和/或海藻糖-6-磷酸磷 酸酶(TPP)从而在海藻糖-6-磷酸(T-6-P)的代谢途径上诱导一个改变，导致 细胞内T-6-P可得量的改变，就有可能在体内改变细胞、组织和器官的发 育和/或组成。导入TPS从而诱导细胞内T-6-P浓度的增加，这引起糖酵 解方向碳流的抑制、光合作用的促进、生长的抑制、池相关活性的促进和 资源储存的增加。导入TPP从而诱导细胞内T-6-P浓度的降低，这引起 糖酵解方向碳流的促进、生物量的增加和光合作用活性的降低。通过用一 种能影响T-6-P水平的基因构建体对生物进行基因工程改造或外源性地 (口服地、局部地、非肠道地等)补充能影响这些水平的化合物均可以影响 T-6-P的水平。可用于此发明的基因构建体是包含磷酸海藻糖合成酶(TPS) 基因的构建体，此酶能催化从葡萄糖-6-磷酸和UDP-葡萄糖变成T-6-P的 反应。另一方面，一种编码催化从T-6-P至海藻糖反应的磷酸海藻糖磷酸 酶(TPP)的构建体，一旦表达，可降低T-6-P的产量。

另一方面，含有反义TPS或TPP的基因构建体也能用于调节T-6-P 的细胞内可得量。

此外，最近已报道一种来源于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的细胞 内磷酸-α-(1,1)-葡糖苷酶(TreA)，其能将T-6-P水解成葡萄糖和葡萄 糖6-磷酸(Schock等人，基因，170,77-88,1996)。对于大肠杆菌已描 述了一个类似的酶(Rimmele和Boos(1996)，细菌学杂志(J.Bact.) 176(18),5654-)。

为了过量表达，不得不使用异源或同源基因构建体。一般认为内源性 T-6-P形成和/或降解酶受变构调节和受共价修饰的调节。通过使用异源基 因可以避开这种调节。

另一方面，异源或同源基因的突变也可以用于消除调节。

本发明也提供了在植物中改变源-池关系和资源分配的能力。植物的 整个碳系统，包括源组织内同化生产和源组织内的使用都可以被改变，这 可以导致收获产品生物量的增加。通过此方法，可实现生产能力增加以及 收获指数和产品质量的改善。源组织中的这些变化例如通过光合酶输出的 增加能导致池组织中的变化。反之，池组织中的改变也能导致源组织中的 改变。

在一种细胞器、组织或一种生物的其它部位中的特异性表达使得上述 提到的一般效应定向于特定局部应用。通过将编码TPS、TPP的基因或 TPS、TPP的反义基因置于特异性启动子的控制下，可以建立这种特异 性表达。特异性表达使不同的组织中能同时表达TPS和TPP酶，因而局 部地增加T-6-P的水平和降低T-6-P的水平。

通过使用特异性启动子也可能建立一个时间的差异。为了此目的可以 使用在植物各个部位的组织发生的特定时期中有特异活性的启动子。这样 就有可能首先影响将要发育的器官的量，然后使这些器官充满储存物质如 淀粉、油或蛋白质。

另一方面，可诱导的启动子也可以用于选择性地开启或关闭本发明基 因的表达。通过例如病原体、应激反应、化学制剂、或光/黑暗刺激可以 实现诱导。

                       定义 -己糖激酶活性是在细胞中发现的酶的活性，其催化己糖至己糖-6-磷酸 的反应。己糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖或任何其它C6糖。已知有许多 同功酶都能在所述生化反应中起作用。通过催化此反应，己糖激酶在己糖 (葡萄糖)信号传递中构成一个关键酶。 -己糖信号传递是调节机制，通过它使细胞感受到己糖(葡萄糖)的可得 量。 -糖酵解是将葡萄糖转化为丙酮酸并伴随有ATP产生的反应。 -冷甜化是马铃薯块茎收获后在低温储存时可溶性糖的积累。 -资源材料的储存是这样的过程，其中主要产物葡萄糖被代谢成适于在 细胞中或在一特定组织中储存的分子形式。这些形式可以不同。在植物界 中，储存大多以碳水化合物和多聚碳水化合物如淀粉、果聚糖和纤维素， 或以更简单的单-和二糖象果糖、蔗糖和麦芽糖的形式发生；以油的形式 如花生(arachic)油或油酸(oleic)油和以蛋白质的形式例如十字花素 (cruciferin)、napin和油菜种子中的种子储存蛋白。在动物细胞中也形成 多聚碳水化合物例如糖原，但也有大量富含能量的碳化合物转化为脂肪和 脂质。 -生物量是生物材料的总量。

                    附图说明 图1质粒pVDH275的图解说明，其带有两侧连接35S花椰菜花叶病病 毒启动子(P35S)和终止子(T35S)的新霉素磷酸转移酶基因(NPTⅡ)作为选 择性标记；带有一个含有豌豆质体蓝素启动子(pPCpea)和胭脂碱合成酶终 止子(Tnos)的表达盒；带有右(RB)和左(LB)T-DNA边缘序列和一个细菌 卡那霉素抗性(kanR)标记基因。 图2转基因烟草植物的Northern杂交分析。组A表示在pMOG799转 基因烟草植物叶子中otsA mRNA的表达。对照组“C”含有来自未转化 的烟草植物(N.tabacum)的总RNA。 图3使用Wisconsin GCG序列分析包(Devereux等人(1984)A comprehensive set of sequence analysis programs of the VAX.核酸研究 (Nucl.Acids Res.),12,387)与TPSyeast序列比较植物来源的TPS编码 序列直列图。分别编码拟南芥属(Arabidopsis)和水稻(Rice)TPS酶的 TPSatal 3/56、142 TPSrice3(SEQ ID NO:53)和RiceTPS源自EST 数据库序列。 分别编码向日葵(Sunflower)和卷柏属(Selaginella)TPS酶的TPSsun10, TPSse143,(SEQ ID NO:44)和TPSse18(SEQ ID NO:42)源自由PCR 技术分离的序列(见实施例3)。 图4PCR扩增的烟草TPS cDNA片段与编码酵母TPS1基因的TPS的序 列比较。方框表示所有四个所列序列之间的氨基酸相同。 图5PCR扩增的烟草TPP cDNA片段与编码酵母TPS2基因的TPP的序 列比较。方框表示所有四个所列序列之间的氨基酸相同。 图6PCR扩增的向日葵TPS/TPP两分cDNA(SEQ ID NO:24)片段与 编码酵母TPS2基因的TPP的序列比较。方框表示两个序列之间的氨基 酸相同。 图7拟南芥属TPS1和水稻EST克隆的片段与编码酵母TPS1基因的TPS 的序列比较。方框表示全部三个序列之间的氨基酸相同。 图8PCR扩增的人TPS cDNA片段(SEQ ID NO:10)与编码酵母TPS1 基因TPS的序列比较。方框表示两个序列之间的氨基酸相同。 图9在pMDG1027(35S反义海藻糖酶)转基因马铃薯植物块茎中海藻糖 的积累。 图10加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型马铃薯(Solanum tuberosum cv. Kardal)块茎抽提液的己糖激酶活性。 图11加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型马铃薯块茎抽提液的己糖激酶活 性。果糖或葡萄糖用作检测底物。 图12加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型烟草叶(Nicotiana tabacum cv. SR1)抽提液的己糖激酶活性。果糖或葡萄糖用作检测底物。 图13烟草己糖激酶活性测量的曲线图。 数据系列1：烟草植物抽提液 数据系列2：烟草植物抽提液+1mM海藻糖-6-磷酸 数据系列3：来源于酵母的商业化己糖激酶抽提液(1/8单位) 图14加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型水稻叶(Oryza sativa)抽提液的己 糖激酶活性。使用不同量的抽提液重复进行实验。果糖或葡萄糖用作检测 底物。 图15加和不加海藻糖-6-磷酸的野生型玉米叶(Zea mais)抽提液的己糖激 酶活性。果糖和葡萄糖用作检测底物。 图16野生型(三角)、PC-TPS(四方形)和35S-TPP(叉)烟草叶的荧光特 征。上两组表明在标明的光强度(PAR)下的电子传递效率(ETE)。测量经 过黑暗时期后(左上组)和经过光照时期后(右上组)的植物。 下端两组表示由于同化产物积累(非光化学淬灭)造成的荧光下降。左和右 组同前。 图17PC-TPS(饥饿)和35S-TPP(足养)转基因烟草植物的各个植物部位的 相对池活性。表明的是不同植物部分经过光(D)或光+黑暗(D+N)后以总碳 含量的百分比表示的净碳积累。 图18PC-TPS(饥饿)和35S-TPP(足养)转基因烟草植物的各个植物部分的 碳的实际分布。表明的是不同植物部分经过光(D)或光+黑暗(D+N)后以总 日积累的新碳百分比表示的净碳积累。 图19与野生型植物相比在表达PC-TPS或PC-TPP的转基因莴苣植物中 减少或增加的抽苔。下面的图表示叶的形态和颜色。 图20在转基因莴苣(上方图)和转基因甜菜(下方图)品系的抽提液中可溶 糖的情况(图20/1)。上图中是与PC-TPS和PC-TPP转基因品系相比较的 对照GUS-转基因品系。下图中所有的转基因都是PC-TPS。淀粉的情况 在图20/2中描述。 图21与野生型植物(对照)相比，表达PC-TPS(TPS)或PC-TPP(TPP) 的转基因甜菜品系的植物和叶的形态。TPS A-型的叶与野生型类似，而 TPS D-型的叶明显更小。与对照相比，TPP转基因品系的叶子的绿色更 淡，柄更大且尺寸增加。 图22转基因甜菜品系(PC-TPS)的主根直径。上方图中A、B、C和D 表示与对照(A)相比叶尺寸下降。下方图中显示了对照和PC-TPS品系 286-2的各个克隆。 图23 pMOG799(35S TPS)转基因马铃薯品系的块茎产量。 图24 pMOG1010(35S TPP)和pMOG1124(PC-TPP)转基因马铃薯品系 的块茎产量。 图25 22株独立的0生型马铃薯(S.tuberosum)克隆的块茎产量。 图26 pMOG1093(PC-TPS)转基因马铃薯品系与野生型相比的块茎产 量。B、C、D、E、F、G表示与野生型(B/C)相比下降的叶尺寸。 图27与野生型(图27-2)相比，pMOG845(Pat-TPS)转基因马铃薯品系 的块茎产量。B、C表示叶尺寸。 图28 pMOG1129(845-11/21/28)转基因马铃薯品系的块茎产量。 图29 TPP(下方图)和TPS(上方图)转基因烟草植物叶的横切面。在TPS 横切面上可见增加的细胞层和增加的细胞大小。 图30 4℃储存之前和储存之后TPSEcoli转基因品系块茎的HPLC-PED分 析，马铃薯C、F、B、G和H是未转基因对照品系。 图31 35S TPS转基因烟草(上方叶)、野生型(中间叶)和35S TPP转基因烟 草(下方叶)叶的形态、颜色和大小。 图32 35S TPS(pMOG799)、35S TPP(pMOG1010)、野生型(WT)PC- TPS(pMOG1177)和PC-TPP(pMOG1124)转基因烟草品系代谢情况。表 示的是海藻糖、可溶性糖(图32-1)、淀粉和叶绿素(图32-2)的水平。 图33与野生型马铃薯品系相比pMOG1027(35S反义海藻糖酶(as-海藻 糖酶))和pMOG1027(845-11/22/28)(35S反义海藻糖酶Pat TPS)转基因 马铃薯品系块茎产量。 图34与野生型马铃薯品系相比pMOG1027(35S反义海藻糖酶)和 pMOG1027(845-11/22/28)(35S反义海藻糖酶Pat TPS)转基因马铃薯品 系的淀粉含量。在此描述的所有品系的顺序与图33相同。 图35与野生型马铃薯品系相比pMOG1028(Pat反义海藻糖酶)和 pMOG1028(845-11/22/28)(Pat反义海藻糖酶Pat TPS)转基因马铃薯品 系的产量。 图36与图35中所描述的野生型马铃薯品系相比pMOG1092(PC反义 海藻糖酶)转基因马铃薯品系的产量。 图37与图35中所描述的野生型马铃薯品系相比pMOG1130(PC反义 海藻糖酶PC TPS)转基因马铃薯品系的产量。

                       发明详述

本发明涉及通过T-6-P的水平在体内改变代谢的研究结果。T-6-P细 胞内浓度的降低促进糖酵解的活性。相反，T-6-P浓度的增加将抑制糖酵 解的活性并促进光合作用。

通过T-6-P水平变化而建立的这些改变最有可能是己糖激酶信号传 递作用的结果，已知己糖激酶的活性受T-6-P调节。已证实在通过参与葡 萄糖-6-磷酸反应的己糖激酶的流量增加(即葡萄糖量的增加)可抑制植物 中光合活性。此外，通过己糖激酶流量的增加不仅促进糖酵解，而且也促 进细胞分裂活性。

              海藻糖-6-磷酸调节碳代谢的理论

在一个正常的植物细胞中，碳水化合物的形成发生在光合作用的过程 中，其中CO2被固定且被还原为磷酸化的己糖，终产物为蔗糖。一般情 况下，这些蔗糖被从细胞外运至细胞或组织中，这些细胞或组织通过吸收 这些蔗糖能将碳水化合物用作它们代谢的材料或能将碳水化合物储存为 如淀粉。在此方面，在植物中，能够进行光合作用因而能产生碳水化合物 的细胞被命名为源，而消耗或储存碳水化合物的细胞被称为池。

在动物和大多数微生物细胞中，无光合作用发生，碳水化合物不得不 从外源获取，通过从糖中直接吸收(如酵母和其它微生物)或者通过碳水化 合物的消化(动物)。碳水化合物的运输在这些生物体中经常以葡萄糖的形 式发生，其中葡萄糖经过主动运输穿过细胞膜。

进入细胞后，代谢途径中第一个步骤之一是由己糖激酶催化将葡萄糖 磷酸化为葡萄糖6-磷酸。已表明在植物中被己糖激酶(HXK)磷酸化的糖控 制着参与光合作用的基因的表达(Jang & Sheen(1994)，植物细胞6， 1665)。因此已提出HXK也许有双重功能，可以做为碳水化合物介导的 基因表达调节的关键感受器和信号递质。认为这种调节通常就起始产物即 葡萄糖的可得量向细胞发出信号。通过导入影响T-6-P水平的TPS或TPP 可以观察到类似的效果。此外，已表明体外T-6-P的水平影响己糖激酶的 活性。通过增加T-6-P的水平，细胞接收到存在碳水化合物输入短缺的信 号。相反，T-6-P水平的下降则产生存在充足葡萄糖的信号，因而导致光 合作用的下调。它表明用于糖酵解的底物以及随后用于细胞生长和细胞分 裂过程的能量供应是充分可得的。认为这个信号传递由通过己糖激酶的流 量增加所起始(J.J.Van Oosten,在Rijks Universiteit Utrecht的公开演 讲，4月19日，1996)。

通过调节海藻糖-6-磷酸水平的调节植物中己糖激酶信号传递的理论 暗示所有植物都需要存在着能产生和分解海藻糖-6-磷酸信号分子的酶系 统。尽管海藻糖在真菌、细菌、酵母和藻类以及一些无脊椎动物的多种种 类中普遍存在，但推测只有非常有限范围的维管植物被能合成此糖 (Elbein(1974),Adv.Carboh.Chem.Biochem.30,227)。一个至今仍无法 理解的现象是尽管明显缺少海藻糖合成酶，但所有植物确实含有海藻糖 酶，此酶能将海藻糖分解为两个葡萄糖分子。

通过此处所述的用海藻糖酶抑制剂如有效霉素A或用反义海藻糖酶 转化的实验可以获得存在海藻糖代谢途径的间接证据。

如果海藻糖中间产物T-6-P过度影响代谢活性，其产生将会受阻。优 选的，为了积累高水平的海藻糖而不影响通过海藻糖-6-磷酸作用的代谢 产物的分配，需要过量表达一个两分TPS/TPP酶。这个酶与在酵母中发 现的一个遗传结构相类似，当与大肠杆菌OtsA和OstB基因相比较时， TPS2基因产物带有一个TPS和TPP同源区域(Kaasen等人，(1994)，基 因(Gene)145,9)。使用此酶时，海藻糖-6-磷酸不能被其它细胞组分所 自由获得。Zentella和Iturriaga(植物生理(Plant physiol.)(1996),111 摘要88)给出了另一个两分酶的例子，他们从卷柏(Selaginella lepidophylla)中分离出一个编码一个推测的海藻糖-6-磷酸合成酶/磷酸酶 的3.2kb的cDNA。也设想构建一个截断的TPS-TPP基因产物，籍此只 保留TPS的活性，其对于T-6-P的合成同大肠杆菌的OtsA基因一样有 效，当在同源系统中应用时也有同样效果。

在分子水平上我们有资料表明除了卷柏属之外海藻糖合成基因也存 在于拟南芥属、烟草、水稻和向日葵中。使用简并性引物，依据TPSE.coli 和TPSyeast之间的保守序列，我们能够在向日葵和烟草中确定编码推定的 海藻糖-6-磷酸产生酶的基因。序列比较表明这些序列与来源于酵母和大 肠杆菌的TPS基因，以及与来源于拟南芥属和水稻(也见表6b，其含有 已发现的同源EST编号)的EST(表达序列标签)序列有着显著的同源性。

最近已阐明一个拟南芥属基因(公开于GENEBANK Acc.No. YO8568,示于SEQ ID NO:39)，依据其同源性可以认为是一个两分酶。这 些资料表明，与目前的认识相反，大多数植物确实含有编码磷酸海藻糖合 成酶的基因，其使它们能合成T-6-P。通过在表达TPS的植物中海藻糖 的积累所证实，植物也含有非特异性或特异性磷酸酶，其能使T-6-P去磷 酸化成为海藻糖。海藻糖酶在所有植物中的存在也可实现海藻糖的转换。

此外，我们也提供在人体组织中T-6-P参与调节碳水化合物途径的资 料。我们已阐明了一个人TPS基因(描述于SEQ ID NO:10)，其与酵母、 大肠杆菌和植物的TPS基因都表现出同源性。此外，我们展示了己糖激 酶活性在哺乳动物(小鼠)组织中受到影响的资料。

通过TPP酶的表达(或TPS酶的抑制)降低细胞内海藻糖-6-磷酸的浓 度产生的“充足”信号则会给所有细胞系统一个增加糖酵解碳流量并抑制 光合作用的信号。这在实验部分中有很好地展示，例如实例2中描述了 TPP酶得到表达的转基因烟草植物，其叶子大小增加，分枝增加，叶绿 素的量减少。但是，因为“充足”的信号在缺乏葡萄糖充分供应时产生， 细胞内的碳水化合物库被迅速耗竭。

这样，假设保持人为的“充足”信号，碳水化合物的减少最终将会限 制细胞生长和分裂，即细胞将会用光所有储存的碳水化合物，会处于“饥 饿”状态。这样，带有低储存量碳水化合物的叶子将会形成。另一方面， 表达一个带有编码增加细胞内T-6-P量的TPS基因的构建体的植物，其 表现为叶子大小的减少，同时叶子呈深绿色，含有的叶绿素量增加。

在酵母中，葡萄糖诱导的信号传递的一个主要作用是将代谢从新生/ 呼吸方式转换为发酵方式。几个信号传递途径参与此现象(Thevelein和 Hohmann,(1995)TIBS 20,3)。除了己糖激酶信号传递的可能作用外， RAS-环状单磷酸腺苷(cAMP)途径也已表明可被葡萄糖活化。通过葡萄糖 对RAS-cAMP途径的活化需要葡萄糖磷酸化，但无进一步葡萄糖代谢。 到目前为止，已表明此途径可以活化海藻糖酶和6-磷酸果糖-2-激酶(因而 促进糖酵解)，而通过cAMP-依赖性蛋白质磷酸化，果糖-1,6-二磷酸酶 被抑制(这样防止葡萄糖异生)。此信号传导路线和它所引起的代谢效应能 被设想为一个与己糖激酶信号传递途径有平行作用的信号途径，而且显示 它受海藻糖-6-磷酸水平的影响。

如在本发明中所述，表达反义海藻糖酶的转基因植物显示有类似现 象，如深绿的叶子，产量升高，如表达TPS基因时所观察到的。似乎是 在双重构建体(double-construct)中反义海藻糖酶的表达增强了由TPS表 达所引起的效应。已表明海藻糖酶活性存在于如植物、昆虫、动物、真菌 和细菌中，但是只在有限数目的物种中，海藻糖被积累。

虽然海藻糖酶存在于几乎所有植物种类中，至今海藻糖酶的作用仍未 知。据推测其参与植物病原体的相互作用和/或植物防御反应。我们已经 分离了一个马铃薯海藻糖酶基因，表明在马铃薯叶和块茎组织中海藻糖酶 活性的抑制会导致块茎产量的增加。反义海藻糖酶的果实特异性表达在西 红柿中与TPS表达一起显著改变果实的发育。

依据本发明的一个实施方案，在通过引入一个编码磷酸海藻糖合成酶 (TPS)的表达性基因构建体而导入产生T-6-P的能力的细胞中造成 T-6-P的积累。只要它能在所述细胞中生产能产生T-6-P的磷酸海藻糖合 成酶，可以使用在细胞中DNA表达所必需的调控元件控制下的任何磷酸 海藻糖合成酶基因，无论其是特异性还是组成性地。依据本发明的开放阅 读框架之一是如SEQ ID NO:2中所描述的编码TPS酶的开放阅读框 架。另一些例子是描述于SEQ ID NO:10、18-23、41和45-53中的 开放阅读框架。如上面述及的序列所示，众所周知多个DNA序列可以编 码相同的酶，此由密码子的简并性引起。如需要，编码磷酸海藻糖合成酶 活性的开放阅读框架可以改造成所选择宿主的适用密码子，但不必须这样 做。

由例如SEQ ID NO:2中所描述的分离的核酸序列，通过PCR技 术和/或通过用其它来源的DNA与来源于大肠杆菌基因的DNA或RNA 片段杂交，可以用以鉴定其它生物体中的磷酸海藻糖合成酶基因，随后分 离并克隆它们。优选地，通过在或多或少地严格条件下(受杂交混合物的 温度和离子强度等因素影响)杂交而克隆这些DNA序列。杂交条件是否严 格也依赖于杂交的本身，即DNA∶DNA、DNA∶RNA、RNA∶RNA 以及最短杂交片段的长度。那些本领域一般技术人员很容易就能建立一个 足够严格以避免非特异杂交并分离TPS基因的杂交方法。因为可以获得 参与其它来源的海藻糖合成的基因，可以依据本发明用这些基因以类似的 方法去获取一个表达性磷酸海藻糖合成酶的基因。更详细的内容在实验部 分给出。

用于分离磷酸海藻糖合成酶活性的来源包括微生物(如细菌、酵母、 真菌)、植物、动物等等。从其它来源分离的编码磷酸海藻糖合成酶活性 的DNA序列也可以类似地用于依据本发明的用于产生T-6-P的方法中。 作为一实施例，来自酵母的用于产生T-6-P的基因已公开于WO93/17093 中。

本发明也包括这样的核酸序列，它是通过突变一个或多个密码子来改 变SEQ ID NO:1中所述核酸序列获得的，突变造成所编码的蛋白质中氨 基酸改变，只要氨基酸序列的突变不完全消除磷酸海藻糖合成酶的活性。

依据发明另一个实施方案，通过在细胞中DNA表达所必需的调控元 件控制下的磷酸海藻糖磷酸酶编码基因，海藻糖-6-磷酸在细胞中可被转 换为海藻糖。依据本发明一个优选的开放阅读框架是SEQ ID NO:4中 所描述的编码一种TPP酶的开放阅读框架。(Kaasen等人，(1994)基因， 145,9)。众所周知，多个DNA序列可以编码相同的酶，此是由遗传密 码子的简并性造成的。如有需要，编码磷酸海藻糖磷酸酶活性的开放阅读 框架可以改造成所选择宿主使用的密码子，但并不必须这样做。

由SEQ ID NO:3中所描述的分离的核酸序列，通过PCR技术和/ 或通过用从大肠杆菌基因中获取的DNA或RNA片段与其它来源的DNA 杂交，可用以鉴定其它生物体中磷酸海藻糖磷酸酶基因，随后分离并克隆 它们。优选地，通过在或多或少严格条件下(受杂交混合物的温度和离子 强度等因素影响)杂交而筛选这些DNA序列。条件是否严格也依赖于杂交 的本身，即DNA∶DNA、DNA∶RNA、RNA∶RNA以及最短杂交 片段的长度。那些本领域一般技术人员很容易就能建立一个足够严格以避 免非特异杂交并分离TPP基因的杂交方法。因为可以获得参与其它来源 的海藻糖合成的基因，依据本发明，这些基因可以用于类似的方法中去获 取一个表达性磷酸海藻糖磷酸酶基因。更详细的内容在实验部分给出。

用于分离磷酸海藻糖磷酸酶活性的来源包括微生物(如细菌、酵母、 真菌)、植物、动物等等。来自其它来源的分离的编码磷酸海藻糖磷酸酶 活性的DNA序列也可以类似地使用。

只要氨基酸序列的突变不完全消除磷酸海藻糖磷酸酶的活性，本发明 也包括这样的改变过的核酸序列，它是通过突变一个或多个密码子来改变 SEQ ID NO:3中所描述的核酸序列获得的，突变造成编码的蛋白质中 产生了氨基酸改变。

具有TPS或TPP活性的其它酶通过所谓两分酶表示。设想特异性编 码两种活性之一的序列部分能从编码另一活性的两分酶部分中分离出 来。一种分离活性的方法是向编码不选择的活性的序列中插入一个突变， 通过此突变表达的蛋白受损或缺少此活性，这样只执行另一个功能。这种 方法能用于TPS和TPP活性的编码序列。这样，以此方法得到的编码序 列能用以形成可表达具有TPS或TPP活性的酶的新型嵌合开放阅读框 架。

依据发明的另一个实施方案，尤其是植物能被遗传改变以在植物的特 定部分产生和积累上述提到的酶。酶表达优选的部位是叶子和植物的储存 部分。特别是马铃薯的块茎被认为是合适的植物部位。在微块茎和马铃薯 块茎中实现选择性表达TPS酶的优选启动子获自马铃薯patatin基因开放 阅读框架的上游区域。

用于特异性表达的另一个合适启动子是质体蓝素启动子，其特异于植 物的光同化作用部分。此外，设想在植物部位的特异性表达可对植物生长 和繁殖或该植物的经济用途产生有利的作用。在此方面有用的启动子是： 果实特异性的E8启动子(EP0409629)和2A11启动子(Van Haaren和 Houck(1993)，植物分子生物学(Plant Mol.Biol.),221,625)；种子特 异性的十字花素启动子，napin启动子和ACP启动子；PAL-启动子； 花特异性的查耳酮异构酶启动子；叶特异性的SSU启动子和铁氧化还原 蛋白启动子；根特异性的TobRb7启动子，韧皮部特异性的RolC启动子 和分生组织特异性的HMG2启动子(Enjuto等人(1995)，植物细胞7， 517)和水稻PCNA启动子(Kosugi等人，(1995)，植物杂志(Plant J.)7, 877)。

本发明中另一个选择是使用可诱导的启动子。已知可以被病原体、应 激反应、化学制剂或光/黑暗刺激所诱导的启动子。可以想象为了诱导特 定的现象，例如发芽、抽苔、种子形成、储存组织的填充，通过外界刺激 诱导本发明基因的活性是有益的。这使得植物的正常发育和期望现象的诱 导性的优点均在控制之下。符合以此方式使用的启动子是在DE 4446342(真菌和生长素诱导的PRP-1),WO96/28561(真菌诱导的PRP- 1),EP 0 586 612(线虫诱导的)EP 0 712 273(线虫诱导的)、WO 96/34949(真菌诱导的)，PCT/EP 96/02437(线虫诱导的)、EP 0 330 479(应激反应诱导的)，US5,510,474(应激反应诱导的)、WO 96/12814(寒冷诱导的)、EP 0 494 724(四环素诱导的)、EP 0 619 844(乙 烯诱导的)、EP 0 337 532(水杨酸所诱导的)、WO95/24491(维生素B1 诱导的)和WO92/19724(光诱导)中所描述的病原体诱导的启动子。其它 化学制剂可诱导的启动子在EP 0 674 608,EP 637 339,EP 455 667和 US 5,364,780中描述。

依据发明的另一实施方案，用可以抑制内源性表达TPS或TPP的功 能的构建体转化细胞。对不期望的内源性酶活性的抑制可以由许多方法实 现，这些方法的选择对本发明并不关键。一种抑制基因表达的方法可以通 过所谓“反义方法”来实现。在此表达一个DNA序列，它产生一种与编 码要被阻断的酶活性的RNA至少部分互补的RNA。优选使用同源反义 基因，因为它们比异源基因更有效。阻断不期望的酶活性合成的另一个可 选择的方法是向植物宿主基因组中导入在植物宿主中存在的一种内源基 因的附加拷贝。经常可以观察到这种基因的附加拷贝抑制了内源基因：这 种效应在文献中称为共同抑制效应或共同抑制。增强底物可得量的步骤的 细节在WO95/01446的实施例中提供，此处引入作为参考。

宿主细胞可以是任何细胞，只要其中通过T-6-P水平的改变可以实现 己糖激酶信号传递的改变。这样，相应地，所有真核细胞都适用于本发明。 从经济学的观点来看，最适合于代谢化合物产生的细胞最适合本发明。这 些生物体除了其它之外是植物、动物、酵母、真菌。然而，也设想在特殊 的动物细胞(象胰腺的β细胞和脂肪细胞)中表达。

优选的植物宿主在种子植物门(Spermatophytae)中是被子植物纲 (Angiospermae)，突出的是双子叶植物纲((Dicotyledoneae)，包括除了其 它之外的茄科(Solanaceae)作为一个代表性家族，和单子叶植物纲 (Monocotyledoneae)，包括除了其它之外的禾本科(Gramineae)作为一个 代表家族。在本发明范围内所定义的合适的宿主植物包括植物(以及该植 物的各个部分和细胞)及其子代，其中通过例如用重组DNA技术在期望的 植物或植物器官中引起或增加TPS或TPP的产量，而使其子代含有一个 改变了的T-6-P水平。依据本发明的作物包括有花的象花椰菜(Brassica oleracea)、朝鲜蓟(Cynara scolymus)，切花象康乃馨(Dianthus caryophyllus)、玫瑰(Rose spp.)，菊属(Chrysanthemum)、矮牵牛属 (Petunia)、六出花属(Alstromeria)、扶郎花属(Gerbera)、唐菖蒲属 (Gladiolus)、百合(Lilium spp.)、蛇麻草(Humulus luplus)、硬花球花柳 (Broccoli)，盆载植物象杜鹃花属(Rhododendron)、Azalia、大丽花属 (Dahlia)、秋海棠属(Begonia)、倒挂金钟属(Fuchsia)、牛龙牛苗属 (Geranium)等；果实类例如苹果(Malus，如domesticus)、香蕉(Musa，如 Acuminata)、杏(Prunus armeniaca)、橄榄(Oliva sativa)、菠萝(Ananas comosus)、椰子(Cocos nucifera)、芒果(Mangifera indica)、猕猴桃、油 梨(Persea americana)、浆果(例如葡萄干、红醋栗)、樱桃(例如欧洲甜樱 桃(Prunus avium))，黄瓜(如：Cucumis sativus)、葡萄(如：Vitis vinifera)、柠檬(Citrus limon)、甜瓜(Cucumis melo)、芥末(Simapis alba 和Brassica nigra)、坚果(例如核桃(如：Juglans regia)、落花生(如： Arachis hypogeae))、桔子(如：Citrus maxima)、桃子(如：Prunus persica)、梨(如：Pyra communis)、胡椒(如：Solaum capsicm)、李子 (如：Prunus domestica)、草莓(如：麝香草莓Fragaria moschata)、西 红柿(如：Lycopersicon esculentum)；叶例如苜蓿(Medicaqo sativa)、卷 心菜(如：甘蓝Brassica oleracea)、菊苣(如：Cichoreum endivia)、葱 (Allium porrum)、莴苣(lactuca sativa)、菠菜(Spinacia oleraceae)、烟草 (Nicotiana tabacum)，草本类例如羊茅属(Festuca)、早熟禾属(Poa)、黑 麦草属(如：黑麦草(Lolium perence)，多花黑麦草(Lolium multiflorm)和 Arrenatherum spp.)、Amenity草，草皮草、海草、菊苣(Cichorium intybus)、茶(Thea sinensis)、旱芹、绉叶欧芹(Petroselinum crispum)、 chevil和其它草类；根例如竹芋(Maranta arundinacea)、甜菜根(Beta vulgaris)、胡萝卜(Daucus carota)，木薯(Manihot esculenta)、人参(Panax ginseng)、芜菁(Brassica rapa)、萝卜(Raphanus sativus)、番薯(Dioscorea esculenta)、甘薯(Ipomoea batatas)、芋；种子例如菜豆(Phaseolus vulgaris)、豌豆(Pisum sativum)、大豆(Glycin max)、小麦(Triticum aestivum)、大麦(Hordeum vulgare)、玉米(Zea mays)，水稻(Oryza sativa)，矮菜豆和蚕豆(Vicia faba)、棉花(Gossypium spp.)、咖啡(Coffea arabica和C.canephora)；块茎例如擘蓝(Brassica oleraceae)，马铃薯 (Solanum tuberosum)；鳞茎植物例如洋葱(Allium cepa)、亚实基隆葱， 郁金香(Tulipa spp.)，黄水仙(Narcissus spp.)、蒜(Allium sativum)；茎例 如栓皮栎，甘蔗(Saccharum spp.)，菠萝剑麻(Sisal spp.)，亚麻(Linum vulgare)，黄麻；树象橡胶树，橡树(Quercus spp.)，山毛榉(Betula spp.)， 赤杨(Alnus spp.)，水曲柳(Acer spp.)，榆树(Ulmus spp.)，棕榈，蕨类， ivies等等。

通过周知的载体系统例如pBluescript、pUC和病毒载体系统如 RSV和SV40，利用本领域周知的转化技术，可以完成酵母、真菌或动物 细胞的转化。

只要基因能在所述植物细胞中表达，将表达性磷酸海藻糖合成酶基 因、表达性磷酸海藻糖磷酸酶基因或其它任何有义或反义基因导入受体植 物细胞的方法并不关键。

尽管发明的一些实施方案目前还不能实施，例如因为一些植物种类还 很难进行转化，但本发明在这些植物种类中的实行只是时间的问题而不是 原则问题，因为这种遗传转化的完成与本发明下面的实施方案不相关。

植物种类的转化对大量的植物种类，包括双子叶植物和单子叶植物是 很常规的。依据此发明，原则上任何转化方法都可以将嵌合DNA导入合 适的祖细胞。合适的方法可以从用于原生质体的钙/聚乙二醇(Krens等人 (1982)，自然296,72,Negrutiu等人(1987)，植物分子生物学8， 363)，原生质体的电穿孔(Shillito等人(1985)Bio/Technol.3,1099)， 显微注射进植物组织(Crossway等人(1986),Mol.Gen.Genet.202), (DNA或RNA包被的)颗粒轰击各种植物组织(Klein等人(1987)，自然 327,70)，用(非整合)病毒感染，通过成年植物的浸润或成熟花粉或孢子 的转化以在植物内根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的基 因转移(EP 0 301 316)等等中选择。依据发明的一个优选方法包括土壤杆 菌介导的DNA转移。尤其优选的是公开于EP A120516和美国专利4, 940,838中使用的称为二元载体的技术。

尽管认为进行遗传转化更难一些，单子叶植物易于转化，有繁殖力的 转基因植物可以从转化的细胞或胚胎或其它植物组织中再生。目前，用于 单子叶植物转化优选的方法是胚胎、外植体或悬浮细胞的微粒轰击和 DNA直接吸收或(组织)电穿孔法(Shimamoto等人(1989)，自然338, 274-276)。通过微粒轰击将编码phosphinothricin酰基转移酶(能灭活除草 剂phosphinothricin的一种酶)的吸水链霉菌(Streptomy ces hygroscopicus)bar基因导入玉米悬浮培养物的胚胎细胞来获得转基因玉 米植物(Gordon-kamm(1990)植物细胞，2,603)。将遗传物质导入其它 单子叶作物例如小麦和大麦的糊粉原生质体也已报道(Lee(1989)，植物分 子生物学13,21)。通过选择用于建立胚发生悬浮培养物的胚发生愈伤 组织，小麦植株已从胚发生悬浮培养物中再生(Vasil(1990)Bio/Technol.8, 429)。用于这些作物的转化系统的组合使本发明可应用于单子叶植物。

单子叶植物，包括商业上重要的作物例如水稻和玉米均能通过土壤杆 菌菌株进行DNA转移(Vide WO94/00977；EP 0 159 418 B1；Gould 等人(1991)植物生理95,426-434)。

为了获得能组成性表达多于一种嵌合基因的转基因植物，也可采用许 多其它方法，包括如下： A．带有与另一个选择性标记基因连接的一系列改变了的基因的DNA， 如二元质粒上的T-DNA的使用。这种方法的优点是嵌合基因是物理相连 的，因而可以做为单个孟德尔位点转移。 B．各自已能表达一种或多种嵌合基因且优选的与一种选择性标记基因连 接的转基因植物与来自含有连接到另一种选择性标记上的一种或多种嵌 合基因的转基因植物的花粉交叉授粉。通过这种杂交而得到的种子可以依 据两种选择标志的出现或依据嵌合基因自身的出现来选择。从选择的种子 获得的植物以后能用于进一步杂交。原则上嵌合基因不在单一位点上，因 此这些基因可以做为独立的位点分离。 C．许多复嵌合DNA分子的使用，例如质粒，每一个含有一种或多种嵌 合基因和一种选择性标记。如果共转化的频率很高，那么依据一种标记进 行选择就足够了。在其它情况下，优选依据多种标记的选择。 D．用选择性含有一种选择性标记基因的新的嵌合DNA去连续转化已含 有一种、两种(等等)嵌合基因的转基因植物。如方法B中，嵌合基因原则 上不在单一位点上，因此嵌合基因可以做为独立的位点分离。 E．上述提及策略的联合。

实际的策略也许取决于几种考虑，如很容易决定的例如亲本的目的 (直接生长、用在繁殖计划中、用于产生杂种)，但对所描述的发明它并不 关键。

众所周知，实际上所有的植物都可以从培养的细胞或组织中再生，但 总的来说要首先提供转化的原生质体悬浮液或含有转化外植体的培养 皿。芽可以直接被诱导，也可以通过器官发生或胚胎发生以及随后生根而 间接地从愈伤组织中诱导。除了选择性标记，培养基中一般含有各种氨基 酸和激素，例如生长素和细胞因子。向培养基中加入谷氨酸和脯氨酸也是 有好处的，尤其对于玉米和首蓿这样的物种。有效的再生取决于培养基、 培养物的基因型和历史。如果控制这三个变量，再生通常是可以重复的。 在将转化的基因序列稳定整合入转基因植物中后，由它们所赋予的特性可 以通过性杂交传给其它植物。根据要杂交的种类，可以使用任何标准的繁 殖技术。

用于控制植物表达性基因(包括标记基因)表达的合适DNA序列，例 如转录启始区域、增强子、非转录性引导子等等，可以源自能在植物细胞 中表达的任何基因。也考虑使用含有多种启动子功能部分的杂合启动子或 其合成的等效物。除了组成性启动子，诱导性启动子或以它们的表达方式 例如发育性地或细胞类型特异性的启动子调节的启动子依据本发明都可 以用于控制表达性基因的表达。

为了选择或筛选细胞，依据发明优选的包括一个标记基因，此基因与 待转入植物细胞的植物表达性基因相连。在植物转化中合适的标记基因的 选择为本领域一般技术人员熟知；一般常规使用的标记基因的实例为新霉 素磷酸转移酶基因，其赋予卡那霉素抗性(EP-B131623)，来自大鼠肝脏 的谷胱苷肽-S-转移酶基因，其赋予对源自除草剂的谷胱苷肽的抗性(EP- A256223)，谷氨酰胺合成酶，其一旦过量表达则赋予对谷氨酰胺合成酶 抑制剂phosphinothricin的抗性(WO87/05327)，来自绿色产色链霉菌 (Streptomyces viridochromogenes)的乙酰转移酶基因赋予了对选择性试 剂phosphinothricin的抗性(EP-A275957)，编码5-烯醇式莽草酸3-磷酸 酯合成酶(EPSPS)的基因赋予了对N-膦酰甲基甘氨酸的抗性，bar基因 赋予了对双丙氨酰膦的抗性(例如WO91/02071)等等。只要与所选择的植 物细胞联合时标记是有功能的(即有选择性的)，标记的具体选择并不重 要。

标记基因和目的基因并不必相连，因为不连接基因的共转化(美国专 利4,399,216)在植物转化中也是有效方法。

转化的优选植物材料，尤其对双子叶作物来说是叶盘，它能很容易被 转化并有很好的再生能力(Horsch等人(1985)，科学227,1229)。

可以设想以下列方式特异使用本发明：从实施例中可以看出TPP表 达的效果(其引起细胞内T-6-P浓度的降低)是叶子尺寸的增加、导致叶子 数目增加、分枝的增加、总的叶生物量增加、成熟叶变白、形成更小的花 和绝育。这些效果在下列情况下尤其有用：叶尺寸的增加(同时叶数目增 加)对多叶蔬菜例如菠菜、莴苣、韭葱、苜蓿、青贮饲料玉米；对于通过 绿草和花园植物达到土地覆盖和草的控制；对于叶子做为产品的作物例如 烟草、茶、大麻和玫瑰(香水)；对于卷心菜类作物如花椰菜的matting up 是有着经济上的重要性的。

这些叶子代谢活性被促进的事实的另一个好处是它们将消耗掉所有 细胞间的资源，这就意味着它们是低淀粉含量的。就目前低热量食品的趋 势而言，对意味着消费低淀粉含量的植物是有利的。淀粉含量的降低对叶 的味道和质地也有影响。通过TPP的表达而产生的蛋白质/碳水化合物平 衡的升高对多叶作物例如青贮饲料玉米尤其重要。

伴随有较大直径的茎的趋势的分枝增加在由茎负责产生经济上有吸 引力的产品的作物中是有利的。在此范围内的实例是用于增加木材产量的 树，木材也是纸生产的初始材料；如用于生产绳子和亚麻布的大麻、菠萝 剑麻、亚麻等作物；如竹子和甘蔗；橡胶树的作物，栓皮栎；防止作物或 作物某一部分倒伏的，例如谷类、玉米、豆科植物和草莓。

第三个现象是叶的进一步变白(由光合活性的降低所引起)。对于作物 菊苣、芦笋优选颜色更少的叶子。对于切花，也期望花瓣变白，例如在六 出花属中。

一个总的效果是由于代谢活性的增加造成生物量的增加。这就意味着 生物量含有代谢化合物例如蛋白质和脂肪，相应的，在成熟的叶子中蛋白 质/碳水化合物平衡增加，这对于如青贮饲料玉米和所有被青贮的饲料的 作物是有利的。可以在果实、块茎和其它可食的植物部分建立类似的蛋白 质/碳水化合物的平衡的增加。

在植物界以外，代谢的增加对在微生物或真核细胞培养物中蛋白质的 生产有益。内源性蛋白和异源性蛋白的生产都可被加强，这就意味着在酵 母或其它单细胞生物培养物中异源性蛋白的生产可以以这种方法得到增 强。对酵母来说，这将产生一个更有效的发酵，其导致酒精产量的增加， 所以对酿酒过程、酒精生产等等是有利的。

在动物和人体中，可以设想通过在受影响的细胞中稳定表达TPP或 TPS可以克服由代谢缺损所引起的疾病。在人类细胞中，许多肿瘤细胞葡 萄糖消耗的增加在很大程度上依赖于己糖激酶的过量表达(Remple等人 (1996)FEBS Lett.385,223)。可以设想海藻糖-6-磷酸合成酶的表达可以 影响葡萄糖进入肿瘤细胞代谢的流量。已表明己糖激酶的活化可以被 cAMP/PKA(蛋白激酶A途径)强化。因此，这个信号传导途径的灭活可以 影响葡萄糖的吸收和瘤形成的增殖。在哺乳动物细胞中能合成海藻糖-6- 磷酸和海藻糖以及降解海藻糖的酶活性已示于例如兔肾皮质细胞中 (Sacktor(1968)美国国家科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci)60,107)。已 在胰腺β-细胞中胰岛素分泌缺陷中发现另一实例，其中由己糖激酶催化 的葡萄糖-6-磷酸的生产是主要反应，其可将外源葡萄糖水平的增加和胰 岛素的分泌偶联在一起(Efrat等人(1994),TIBS19,535)。由细胞内 T-6-P降低引起的己糖激酶活性的增加将在胰岛素分泌缺陷的细胞中促进 胰岛素的生产。

在转基因动物中蛋白质/碳水化合物平衡的增加也是有利的。代谢特 性的增加和蛋白质生产的增加在畜牧业中是很重要的，其中动物能尽可能 多的长肉。将TPP转化到产肉动物例如鸡、牛、绵羊、火鸡、山羊、鱼、 龙虾、螃蟹、小虾、蜗牛等中，会产生生长更快且具有含更高蛋白质的肉 的动物。

同样，这种代谢的增加意味着碳水化合物消耗率的增加，因而可以防 止肥胖。

由细胞内T-6-P浓度降低产生的更多的植物特异性效应是花数目的 增加(尽管它们似乎不导致种子的形成)。然而花数目的增加对切花植物和 盆载花植物和适于园艺培养的所有植物都是有利的。

这种开花现象的另一效应是绝育，因为植物并不产生种子。绝育的植 物在杂交育种中有利。

另一个经济上重要的方面是防止培养作物如莴苣、菊苣和欣赏及饲养 型草的抽苔。这是一个有益的特性，因为它使作物生长而不必将代谢作用 花费在开花和种子生产上。此外，在象莴苣、菊苣和草的作物中，商业性 产品应用是不抽苔的。

TPP在植物某一部分(池)中的特异性表达会产生其它有益的效应。可 以设想由一个在种子形成早期有活性的启动子引导的TPP的表达能使发 育的种子生长增加。通过一个花特异性的启动子来表达TPP可以取得类 似的效果。简言之，如果通过合适的特异性启动子进行TPP的表达，就 有可能使植物某一部分过度生长。果实中的特异性表达能导致相对于果肉 来说果皮生长的增加。这能改善果实的脱皮，其对自动脱皮工业是有好处 的。

在储油种子发芽过程中TPP的表达防止油的降解。在发芽的过程 中，乙醛酸循环是非常活跃的。代谢途径将乙酰辅酶A经苹果酸转化为 蔗糖，蔗糖可被运输并做为幼苗生长过程中的能量来源。此过程中的关键 酶是苹果酸合成酶和异柠檬酸裂解酶。两个酶的表达被认为由己糖激酶信 号传递来调节。这种调节的一种指征是2-脱氧葡萄糖和甘露糖均被己糖激 酶磷酸化并能在不被进一步代谢的情况下传导它们的信号，苹果酸合成酶 和异柠檬酸裂解酶表达的降低，种子中TPP的表达，降低了对己糖激酶 的抑制，因而抑制苹果酸合成酶和异柠檬酸裂解酶以维持油储存至种子 中，防止发芽。

与TPP效果相反，由TPS的表达引起的T-6-P的增加导致象在实施 例中所述的其它效应。从此可知T-6-P量的增加引起矮化生长(尤其在TPS 高表达时)、更多的披针形叶的形成、由于叶绿素的增加而颜色加深以及 淀粉含量的增加。如上所知，一个反义海藻糖酶构建体的导入也会促成与 TPS导入类似的效应。因此，使用反义海藻糖酶也同样可以实现由TPS 所示的反应。此外，使用TPS和反义海藻糖酶的双重构建体可加强单个 构建体的效果。

矮化是园艺植物中期望的现象，其中日本bonsai树是一个经典的实 例。在如多子植物、玫瑰、孤挺花属(Amaryllis)、Hortensia、桦树和棕 榈的植物中创造微型花会创造经济上的机会。除了植物界，矮化在动物也 是需要的。它也可以在培养的作物例如莴苣中诱导抽苔，因为这样能迅速 产生种子，所以是有益的。理想的，用于这些效果的TPS的表达在一种 可诱导性启动子的控制下。顶端优势的丢失也引起多个芽的形成，这在例 如苜蓿中有经济上的重要性。

生长的降低也是“蔬菜型快餐”工业所需，其中蔬菜被认为以快餐的 形式消费。樱桃番茄是一个在市场上成功的大小缩小了的蔬菜的实例。可 以想象微型尺寸的其它蔬菜如卷心卷、花椰菜、胡萝卜、甜菜、甘薯和果 实如苹果、梨、桃子、甜瓜和几种热带水果如芒果和香蕉是有市场的。

对于所有对生物体产生损害的细胞如病原体细胞和癌细胞都期望生 长降低。在后一方面通过改变T-6-P的水平，能看到在调节生长方面的作 用。T-6-P水平的增加能降低癌组织的生长和代谢。一种升高细胞内T- 6-P水平的方法是通过引入在内源TPP基因中引起一种突变的特异性重 组事件来敲除这些细胞中的TPP基因。这样做的一种方法是通过一种癌 细胞特异性内源化抗体在内源基因上导入一个能介导突变的DNA序列。 另一种方法是用该DNA进行定点微粒轰击。第三种方法是可以使用一个 癌细胞特异性病毒载体。

伴随T-6-P浓度的升高可见绿色更深的现象，这对于盆载花植物以及 一般地用于园艺的种类和用于欣赏的草都是一种需要的特性。

T-6-P水平的增加也引起储存碳水化合物例如淀粉和蔗糖的增加。这 将意味着储存碳水化合物的组织将会储存更多的物质。这可以通过实施例 来说明，其中所示在植物中储存器官例如块茎生物量增加和如在甜菜中形 成变粗的根(蔗糖的储存)。

可从中受益的作物是马铃薯、甜菜、胡萝卜、菊苣和甘蔗。

在马铃薯中另一个经济上重要的效应是用编码TPS基因的DNA转化 后(造成T-6-P的增加)，即使在低温(4℃)下收获和储存块茎，也可以发现 可溶性糖量降低。正常情况下为了防止早发芽，需要更冷的储存条件，但 这样会造成马铃薯的过度甜化。还原糖量的减少对食品工业是很重要的， 因为在还原糖和氨基酸之间发生美拉德反应(Maillard reaction)会变黑， 故甜化的马铃薯块茎材料不适合于加工。

同样用编码TPS酶的多核苷酸转化甜菜，也可以获得蔗糖酶活性的 抑制。在甜菜抑制其蔗糖酶的活性在经济上是非常重要的。

同样，在果实和种子中，可以改变储存。这不仅能导致储存量的增加， 而且使储存化合物的组成也发生变化。种子产量的提高对玉米、水稻、谷 类、豌豆、油籽油菜、向日葵、大豆和豆科植物的作物极其重要。此外， 对所储存的碳水化合物的组成和量进行改变对于所有带果实的植物是重 要的。尤其是对水果，储存产物的组成在硬度上产生改变，这对于如西红 柿、香蕉、草莓、桃子、樱桃和葡萄等软水果尤其重要。

与TPP表达所看到的效应相反，TPS的表达降低了叶中蛋白质/碳水 化合物的比率。这种效果在多叶作物例如饲料草和苜蓿中重要。此外，生 物量降低的叶在amenity草中重要，但更重要的是它们有相对增加的能量 含量。这个特性对如洋葱、韭葱和青贮玉米等作物是尤其有益的。

此外细胞内T-6-P可得量的水平可影响种子的生存力。

TPP在一种植物的一部分表达与TPS在此植物另一部分的表达的联 合能协同增加上述描述的效果，也有可能通过使用特异性启动子在发育过 程中连续表达基因。最后，通过将编码序列置于可诱导性启动子的控制 下，也有可能诱导所参与的基因中任意一个的表达。可以想象所描述的应 用方法的联合对本领域技术人员而言是显而易见的。

本发明通过下面的实施例进一步阐明。应强调这些实施例表示本发明 特殊的实施方案，但应清楚的是本发明也覆盖这些实施例中的变化以及使 用其它植物或表达系统。

                          实施例 DNA操作

所有DNA操作(从大肠杆菌中分离DNA、限制性酶切、连接，转化， 等)均依据标准实验方法(Sambrook等人。(1989)分子克隆：实验室手册 (Molecular cloning:a laboratory manual)，第二版Cold spring Harbor laboratory出版社，CSH，纽约)来进行。 菌种

在所有实施例中大肠杆菌K-12菌种DH5α被用于克隆。用于植物 转化实验的根癌土壤杆菌菌种是EHA105和MOG101(Hood等人(1993) Trans.Research2,208)。 土壤杆菌菌种MOG101的构建

土壤杆菌菌种MOG101的构建如WO96/21030中所述。 大肠杆菌OtsA基因的克隆和pMOG799的构建

在大肠杆菌中磷酸海藻糖合成酶(TPS)由位于操纵子OtsBA中的 OtsA基因所编码。otsA基因的克隆和序列测定在WO95/01446的实施 例Ⅰ中被详述，此处引用作为参考。为了实现它在植物细胞中的表达，如 在WO95/01446的实施例Ⅰ中更详细说明，开放阅读框架已与CaMV 35S RNA启动子的转录调节元件、ALMV引导子的转录增强子以及nos基因 的转录终止子相连，得到pMOG799。含有pMOG799的大肠杆菌样品 已按照布达佩斯条约于1993年8月23日(星期一)保藏在真菌菌种保藏中 心(CBS),Oosterstraat 1,P.O.Box 273,3740 AG Baarn，荷兰： 国际保藏研究所的保藏号为CBS430.93。 patatin启动子的分离/pMOG546的构建

利用聚合酶链式反应将一个patatin启动子片段从马铃薯(Solanum. tuberosum)的染色体DNA中分离出来。合成一套与λpat21 patatin基因 上游区域序列(Bevan等人(1986)核酸研究14,5564)互补的一套寡核苷 酸，包括下列序列： 5′AAG CTT ATG TTG CCA TAT AGA GTA G 3′    PatB32.2 (SEQIDNO:5) 5′GTA GTT GCC ATG GTG CAA ATG TTC   3′    PatATG.2 (SEQIDNO:6) 以从马铃薯中分离的染色体DNA为模板，用这些引物进行PCR以扩增 一个1123bp的DNA片段。扩增的片段与λpat21 patatin序列有很高程度 的类似性，并用EcoRⅠ接头克隆进pUC18载体，得到质粒pMOG546。 构建pMOG845

pMOG845的构建在WO96/21030中描述。 pVDH318，质体蓝素-TPS的构建

质粒pMOG798(在WO95/01446中描述)用HindⅢ消化，且与寡核 苷酸二聚体TCV11和TCV12连接(见pMOG845的构建)。产生的载体用 PstⅠ和HindⅢ酶切，再插入PotPiⅡ终止子产生pTCV118。质粒 pTCV118用SmaⅠ和HindⅢ酶切产生含有TPS编码区域和PotPiⅡ终 止子的DNA片段。加入BglⅡ接头，将所得片段插入用BamHⅠ消化的 植物二元表达载体pVDH275(图.1)中，产生pVDH318。pVDH275是 pMOG23(Sijmons等人。(1990),Bio/Technol.8.217)的衍生质粒，其 带有在35S CaMV启动子控制下的NPTⅡ选择标记和含有豌豆质体蓝素 (PC)启动子以及nos终止子序列的表述盒。存在于pVDH275中的质体蓝 素启动子已由Pwee Gray(1993)植物杂志(Plant J.)3,437描述。使 用PCR扩增和含有合适克隆位点的引物将此启动子转入二元载体中。 大肠杆菌otsB基的克隆和pMOG1010的构建(35S CaMV TPP)

合成一套与大肠杆菌TPP基因(SEQ ID NO:3)序列互补的寡核苷 酸，TPPⅠ(5′CTCAGATCTGGCCACAAA 3′)(SEQ ID NO:56) 和TPPⅡ(5′GTGCTCGTCTGCAGGTGC 3′)(SEQ ID NO: 57)。使用pMOG748(WO95/01446)做为模板，将这些引物用于PCR扩 增375bp的DNA片段，此片段带有大肠杆菌TPP基因编码区域的3′ 部分，并在终止密码子的下游10bp处导入一个PstⅠ位点。此PCR片段 用BglⅡ和PstⅠ酶切并克隆进pMOG445(EP0449376A2实施例7a)， 并用BglⅡ和PstⅠ线性化。产生的载体用PstⅠ和HindⅢ酶切，插入 一个PotPiⅡ终止子(见pMOG845的构建)。前面描述的载体用BglⅡ和 HindⅢ酶切，分离产生的1325bp片段，并和用SmaⅠ和BglⅡ酶切的 5′TPPPCR片段一同克隆进用SmaⅠ和HindⅢ线性化的pUC18中。 产生的载体称为pTCV124。此载体用EcoRⅠ和SmaⅠ线性化并用于插 入35S CaMV启动子(一个从含有35S CaMV双增强子启动子的 pMOG18中分离的850bp EcoRⅠ-‘NcoⅠ’(NcoⅠ位点由绿豆核酸酶 处理变成平端)片段)。此载体称为pTCV127。从这个载体中分离一个含 有完整35S TPP表达盒的2.8kb EcoRⅠ-HindⅢ片段，并克隆进二元载 体pMOG800，产生pMOG1010载体。 pVDH321，质体蓝素(PC)TPP的构建

通过BamHⅠ消化、补平及随后再连接，去除质粒pTCV124的BamH Ⅰ位点。随后再用HindⅢ和EcoRⅠ酶切产生一个包含TPP编码区域和 PotPiⅡ终止子的DNA片段。加入BamHⅠ接头，将所得片段插入植物 二元表达载体pVDH275中(用BamHⅠ消化)，产生pVDH321。 Patatin TPP表达载体的构建

与Patatin TPS表达载体的构建(见pMOG845的构建)类似，构建一 个Patatin TPP表达载体以产生一个二元载体(pMOG1128)，其在转化以 后能以块茎特异性的方式实现TPP的表达。 其它表达载体的构建

与上述提及的载体的构建类似，使用带有NPTⅡ基因或潮霉素抗性 基因做为选择性标记基因的二元载体，应用联合TPS、TPP或海藻糖酶 的不同的启动子构建基因构建体。带有HPT选择标记的二元载体 pMOG22的说明见Goddijn等人(1993)植物杂志4,863。 三亲交配

在与含质粒pRK2013的大肠杆菌菌株HB101(Ditta等人(1980)美国 国家科学院院报77,7347)的三亲交配中二元载体被移至根癌土壤杆菌 菌株MOG101或EHA105中并用于转化。 烟草(Nicotiana tabacum cv.SR1或cv.Samsun NN)的转化

通过植物组织与含有所述的目的二元载体的根癌土壤杆菌菌株 MOG101共同培养转化烟草。使用如由Horsch等人(1985)科学227， 1229中描述的烟草叶盘共培养进行转化。转基因植物从生长在含有卡那 霉素的培养基的苗中再生，生根并转移到土壤中。 马铃薯的转化

马铃薯(Solanum tuberosum cv.Kardal)用含有目的二元载体的土壤 杆菌菌株EHA105转化。基本培养基是MS30R3培养基，其包括MS盐 (Murashige和Skoog(1962)植物生理14,473),R3维生素(Ooms等人 (1987)Theor.Appl.Genet.73,744),30g/L蔗糖，0.5g/L MES，最终 pH5.8(用KOH调节)，需要时用8g/L Daichin琼脂固化。马铃薯的块茎 削皮后并通过在96％乙醇中燃烧5秒钟进行表面消毒。在无菌水中熄灭 火焰，切成约2mm厚的片。用一个钻从脉管组织中切出园片，在含有带 二元载体的1-5×108细菌/ml的土壤杆菌EHA105的MS30R3培养基中 孵育20分钟。用MS30R3培养基冲洗块茎园片并转移到凝固的后培养 (Postculthre)培养基(PM)中。PM包括补充有3.5mg/L玉米素核苷和 0.03mg/L吲哚乙酸(IAA)的M30R3培养基。两天后将园片转移至含有 200mg/L头孢噻肟和100mg/L万古霉素的新鲜PM培养基中。三天后， 块茎园片被转移到苗诱导培养基(SIM)中，其包括加有250mg/L羧苄青霉 素和100mg/L卡那霉素的PM培养基。4-8周后，剪去从园片中生出的 苗，置于生根培养基上(加有100mg/L头孢噻肟，50mg/L万古霉素和 50mg/L卡那霉素的MS30R3培养基)。经过分生组织切割无菌性地繁殖 苗。 莴苣的转化

依据Curtis等人(1994)J.Exp.Bot.45,1441进行莴苣(Lattuac sativa cv.Evola)的转化。 甜菜的转化

依据Fry等人(1991)ISPMB第三届国际大会，Tucson USA文摘NO. 384，或依据Krens等人(1996)植物科学(Plant Sci)116,97进行甜菜 (Beta vulagaris维持群)的转化。 番茄(Lycopersicon esculentum)的转化

依据Van Roekel等人(1993)Plant cell Rep.12,644进行西红柿的转 化。 拟南芥(Arabidopsis)的转化

通过Clarke等人(1992)Plant.Mol.Biol.Rep.10,178描述的方法或 通过Valvekens等人(1988)美国国家科学院学报，85,5536描述的方法 进行拟南芥(Arabidopsis thaliana)的转化。 微块茎的诱导

带有辅助性分生组织的体外马铃薯植物的茎片段被转移到微块茎诱 导培养基中。微块茎诱导培养基含有补充R3维生素、0.5g/L MES(最终 pH=5.8，用KOH调节)和用8g/L Daichin琼脂固化的、60g/L蔗糖和 2.5mg/L激动素的1X MS盐。在24℃下黑暗中生长3至5周后，形成微 块茎。 有效霉素A的分离

已发现有效霉素A是各种来源的范围从(IC50)10-6M至10-10M的海藻 糖酶的高度特异抑制剂(Asano等人(1987)抗生素杂志(J.Antibiot.)40, 526；Kameda等人(1987)抗生素杂志40,563)。除了海藻糖酶，它并 不特异性抑制任何α-或β-糖基水解酶(glycohydrolase)活性。有效霉素A 从Solacol,由Kendall等人(1990)植物化学(Phytochemistry)29,2525 所描述的一种商业化农用制剂(Takeda chem.Indust.,Tokyo)中分离。步 骤包括将3％Solacol农用制剂经过离子交换层析(QAE-Sephadex A-25 (Pharmacia)，床体积10ml，平衡缓冲液0.2mM Na-Pi,pH7)。将1ml Solacol上柱并用水洗脱为7个流份，实际上所有的有效霉素均从第4流 份内回收。依据100％的回收率，使用这个步骤，有效霉素A的浓度在 MS培养基中被调至1.10-3M以用于海藻糖积累实验。此外，有效霉素A 和B也可如Iwasa等人(1971)抗生素杂志24,119所述的直接从吸水链 霉菌柠檬亚种(Strepotomyces hygroscopicus var.Limoneus)中纯化，此处 引入其内容作为参考。 碳水化合物分析

通过带有脉冲电化学探测的阴离子交换层析来定量测定碳水化合 物。通过用80％乙醇抽提匀浆的冷冻材料制备抽提液。在室温下抽提15 分钟后，蒸发可溶部分并溶于蒸馏水中。样品(25μl)在配有4×250mm Dionex 35391 Carbopac PA-1柱和4×50mm Dionex 43096 Carbopac PA-1预柱的Dionex DX-300液相层析仪上分析。用1ml/min的100mM NaOH及随后的NaAC梯度洗脱。用脉冲电化学探测器(Dionex,PED)来 检测糖。商业可得的碳水化合物(Sigma)用作标准品。 淀粉分析

淀粉分析如在Aman等人(1994)碳水化合物方法(Methods in Carbohydrate Chemistry),Volume x(BeMiller等人编)，111-115页所 述进行。 表达分析

导入各种植物种类中的基因的表达用Northern杂交分析来监测。 海藻糖-6-磷酸磷酸酶测定

通过测定从[14C]海藻糖-6-磷酸而来的[14C]海藻糖的生成 (Londesborough和Vuorio(1991)普通微生物学杂志(J.of Gen. Microbiol.)137,323)在37℃下测定TPP。粗抽提液在含5.5mM MgCl2,25mM Tris-HCl,pH7.4中制备。样品在含有1mg/ml BSA 的抽提缓冲液中稀释至1mg/ml的蛋白质浓度。标准测定混合物(终体积 50μl)含有27.5mM Tris-HCl,pH7.4,5.5mM MgCl2,1mg/ml BSA和 0.55M T-6-P(特异性活性854cpm/nmol)。通过加入5μl酶起始反应，1 小时后通过在沸水中加热5分钟终止反应。加入AG1-X8(甲酸盐)阴离子 交换树脂(BioRad)，反应混合物在室温下平衡20分钟后离心。通过液体 闪烁计数仪测定样品上清中(400μl)的放射性。 用于己糖激酶测定的植物抽提液的制备

在液氮中研磨冷冻植物材料且用含有完全蛋白酶抑制剂(Boehringer Mannheim)的抽提缓冲液(EB:100mM HEPES pH7.0(KOH),1％ (w/v)PVP,5mM MgCl2,1.5mM EDTA,0.1％v/v β-MeOH)匀浆30 秒。离心后上清中的蛋白质用80％硫酸铵沉淀，并溶于Tris-HCl pH7.4 中，抽提液用100mM Tris-HCl pH7.4透析过夜。一部分样品用于己糖激 酶的测定。 己糖激酶测定

在含有0.1M Hepes-KOH pH7.0,4mM MgCl2,5mM ATP,0.2mM NADP+,10U/ml磷酸肌酸激酶(溶于50％甘油，0.1％BSA,50mM Hepes pH7.0中),3.5mM磷酸肌酸、7U/ml葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和 2mM葡萄糖的测定液中通过测定25℃下340nm OD值的上升而测定己 糖激酶活性。当用2mM果糖而不是用葡萄糖作为己糖激酶反应的底物 时，还包括3.8U/ml磷酸葡糖异构酶。另外，使用由Gancedo等人(1977) 生物化学(J.Biol.Chem.)252,4443所述的己糖激酶测定法。

                      实施例1

大肠杆菌otsA基因(TPS)在烟草和马铃薯中的表达

产生了带有由de35S CaMV启动子(pMOG799)或质体蓝素启动子 (pVDH318)启动的otsA基因的转基因烟草植物。

产生了带有由马铃薯块茎特异性Patatin启动子(pMOG845)启动的 otsA基因的转基因马铃薯植物。

使用根癌土壤杆菌用二元载体pMOG799转化烟草叶盘。在卡那霉 素上选择转基因苗。一些土壤生长型植物的叶子在侧向上并不完全展开， 导致了一种披针形形态(图.31)。此外，顶端优势的降低导致矮化生长及几 个腋生芽的形成。32株植物中的7株表现为严重的生长减退，在开花时 植物长度达到4-30cm(表1)。 表1．otsA转基因烟草植物叶样品中海藻糖的积累和在开花时植株的高度    植物品系  海藻糖mg.g-1鲜重    高度cm     对照      0.00     60-70     799-1      0.04     ND     799-3      0.02     10     799-5      0.08     4     799-15      0.055     30     799-24      0.02     12     799-26      0.05     25     799-32      0.055     30     799-40      0.11     25

ND=未测定

对照植物在开花时长度达到60-70cm。带有矮化生长表型的转基因 品系产生较少的种子。Northern杂交分析证实有矮化生长表型的植物表 达了来源于大肠杆菌的otsA基因(图2)。在对照植物中检测不到转录物。 通过对来自32株转基因的温室生长烟草植物的叶材料的碳水化合物分析 证明了所导入基因的功能性，揭示在长度减少的植物中存在每克鲜重 (Fresh weight)中范围从0.02至0.12mg的海藻糖(表1)，表明TPS催化的 反应产物被植物磷酸酶去磷酸化。通过用猪海藻糖酶处理粗抽提液获得在 烟草中海藻糖积累的进一步证据。延长烟草叶抽提液与海藻糖酶的孵育导 致海藻糖的完全降解(数据未显示)。在对照植物或没有异常表型的转基因 烟草植物中没有检测到海藻糖。 表1a初始PC-TPS烟草转化物   植物品系      叶      fw     (g)   叶面积    cm2  分枝数    植物    高度     cm 叶色  腋生芽      Fw/     面积     g/cm2   干物质     ％     干物质     /面积      g/cm2    对照1     8.18   349.37     1  wt     0.023     7.21     0.0017    对照2     10.5   418.89     1  wt     0.025     9.52     0.0024    对照3     9.99   373.87     1  wt     0.027     12.91     0.0035    对照4     9.91   362.92     1  wt     0.027     9.59     0.0026    对照5     9.82   393.84     1  wt     0.025     11.51     0.0029    平均     0.0254     10.148     0.0026     2     8.39    290     2     105  wt     0.029     12.16     0.0035     3     9.34    296     1     123  wt     0.032     12.21     0.0039     4     8.36    254     2     130  wt   许多     0.033     10.05     0.0033     6     2.28    106     5     90  wt     0.022     11.40     0.0025     8     5.21    133     4     100  深   许多     0.039     7.49     0.0029     10     8.08    258     2     165  深   许多     0.031     12.25     0.0038     11     2.61    64     12     95  深   许多     0.041     9.20     0.0038     13     2.83    92     1     150  深   许多     0.031     8.48     0.0026     16     5.86    209     3     130  深   许多     0.028     10.58     0.0030     17     5.15    224     2     155  wt     0.023     11.65     0.0027     18     17.2    547     1     133  wt     0.031     10.35     0.0033     19     2.13    63     4     80  深   许多     0.034     11.74     0.0040     20     3.44    113     4     90  wt+Da   许多     0.030     8.14     0.0025     21     9.88    246     1     105  深   许多     0.040     8.50     0.0034     22     13.1    409     1     135  wt     0.032     10.68     0.0034     23     2.50    73     6     55  深   许多     0.034     8.80     0.0030     24     8.76    286     2     130  wt     0.031     15.07     0.0046     27     7.91    219     1     124  wt     0.036     14.41     0.0052     28     10.0    269     2     117  深   许多     0.038     8.62     0.0032     29     4.17    142     1     85  深   许多     0.029     10.07     0.0030     30     10.2    343     1     160  wt     0.030     9.56     0.0029     32     1.95    61     3     75  深   许多     0.032     8.21     0.0026     33     2.85    96     5     95  wt+Da   许多     0.030     11.23     0.0033     34     8.38    244     1     123  wt     0.034     13.60     0.0047     35     5.59    173     3     126  wt     0.032     14.49     0.0047     36     3.28    84     3     100  深   许多     0.039     11.28     0.0044     37     7.80    222     1     125  wt+Da   许多     0.035     11.28     0.0040     39     3.70    131     2     123  wt     0.028     17.84     0.0050     40     2.40    68.5     3     108  深   许多     0.035     9.58     0.0034   平均     0.032     11.00     0.0035

pVDH318转基因烟草植物发育成矮化生长，并长出比对照叶子绿色 更深且稍厚的小叶子，一种类似于pMOG799转基因植物的表型(表1a)。 进一步分析这些叶子表明与对照相比每个叶面积的鲜重和干重量(表1a和 2)增加。深绿色叶子表明在转基因叶子中存在更多的叶绿素(表1b)。 pMOG799(35STPS)和pMOG1177(PCTPS)转基因的植物在可溶性碳水 化合物、叶绿素、海藻糖和淀粉方面进行分析(图.32)。pMOG1177在功 能上与pVDH318相同。

表1b.PC-TPS转基因烟草(N.tabacum)叶(To)中叶绿素的含量      样品     叶绿素     (mg/g叶)     对照1      0.59    PC TPS 10-1      0.75    PC TPS 10-2      0.80    PC TPS 11      0.60    PC TPS 13      0.81    PC TPS 16      0.90    PC TPS 19      0.64    PCT PS 37      0.96 注：生长过程中光照条件会显著影响叶绿素的确切水平。叶绿素的计算含 量只可在一次实验内收获和分析的植物之间进行比较。

表2．质体蓝素TPS E.coli转基因叶材料的鲜重和干重

PC-TPS转基因烟草N.Tabacum cv.Samsun NN    转基因     对照    鲜重(g)     0.83     0.78    干重(g)     0.072     0.079     ％干物质     8.70％     10.10％     鲜重/面积     39(139％)     28(100％)     干重/面积     3.46(121％)     2.87(100％)     面积(单位)     208     275

长出的叶长度和宽度之比的计算清楚地表明PC-TPS转基因植物的 叶更具披针形(表3)。

用带有二元载体pMOG845的根癌土壤杆菌EHA105转化马铃薯块 茎园片(Solanum tuberosum cv.Kardal)。以类似于空载体对照的转化频 率获得转基因植物。所有获得的植物在形态上与野生型植物没有区别，表 明组织特异性启动子的使用防止了在组成性启动子启动TPS基因的植物 中所观察到的表型。在加有10-3M有效霉素A的微块茎诱导培养基上培 养的转基因和野生型植物的茎部分以诱导微块茎。作为对照，在不加有效 霉素A的培养基上诱导微块茎。在加有效霉素A的培养基上诱导的微块 茎显示比在未加有效霉素A的培养基上诱导的微块基中海藻糖水平升高 (表4)。在野生型植物中少量海藻糖的存在表明存在一个有功能的海藻糖 生物合成途径。 表3 pVDH318转基因烟草植物(cv.samsum NN) 转化物    长度(cm)    宽度(cm)     比例1/w 对照1      12      8      1.50 对照2      13      8.5      1.53 对照3      12      7.5      1.60 对照4      15      9      1.67 对照5      25      16      1.56 对照6      24      16.5      1.45 对照7      28      20      1.40 对照8      25      16      1.56 对照9      26      19      1.37 对照10      21      15      1.40 1318-28      16      8.5      1.88* 1318-29      11      6.5      1.69 1318-30      19      14      1.36 1318-35      19      12      1.58 1318-39      21      16.5      1.27 1318-40      14      7      2.00* 1318-34      21      13      1.62 1318-36      13.5      7      1.93* 1318-37      17      9      1.89* 1318-4      20.5      12      1.71 1318-23      14      4.5      3.78* 1318-22      27      18      1.50 1318-19      9      4      2.25* 1318-2      27      19      1.42 1318-15      11      5      2.20* 1318-10      20      13      1.54 1318-3      25      18      1.39 1318-21      17      8.5      2.00* 1318-16      20      10      2.00* 1318-6      19      10.5      1.81 1318-20      13      5      2.60* 1318-33      12      5      2.40* 1318-27      23      20      1.15 1318-11      12      5      2.40* 1318-8      18.5      6.5      2.85* 1318-24      27      17      1.59 1318-13      15      7      2.14* 1318-17      24      16      1.50 1318-18      23      16.5      1.39 *典型的TPS表型                 对照的l/w比例平均为1.50

                 表4．海藻糖(％鲜重)    +有效霉素A     -有效霉素A 845-2      0.016          - 845-4       -          - 845-8      0.051          - 845-11      0.015          - 845-13      0.011          - 845-22      0.112          - 845-25      0.002          - 845-28      0.109          - 野生型马铃薯(kardal)      0.001          - 实施例2

         大肠杆菌otsB基因(TPP)在烟草中的表达

产生了带有由35S CaMV启动子(pMOG1010)和质体蓝素启动子 (pVDH321)双重加强启动的otsB基因的转基因烟草植物。

用pMOG1010转化的烟草(cv.Samsun NN)表明在温室中非常大的 叶子的发育过程，(叶面积平均增加高达约140％)，当其完全长成时会开 始生成萎黄病(图.31)。此外，与对照相比生成了更粗的茎，在一些情况下 导致茎的胀破。在一些情况下从植物的基部生成多个茎(分枝)(表5)。长成 大叶的植物的叶样品与对照植物相比表明，海藻糖-6-磷酸磷酸酶活性增 加了5-6倍，这证明了所导入基因的功能。异常大叶子的干和鲜重/cm2 与对照叶相类似，表明叶子大小的增加是由于干物质的增加而不是水含量 的增大。花序也受TPP表达的影响。有矮化表型的植物可能是由于TPP 基因在所有植物部分的组成性表达引起。其长出许多并未完全成熟并掉落 或坏死的小花。花的发育和种子形成在不太矮化的植物中似乎所受的影响 也较少。 表5  pMOG1010,de35SCaMV TPP转基因烟草植物     行    高度    (cm)    叶面     积     cm2  变白  (5级)   分枝    Fw/cm2     (g)   DW/cm2    (g)    荧光    Norm./    茎直径     (mm)     1     63     489     5     +   0.096   0.0031     A     13     2     90     472     3     +   0.076   0.0035     A     19     3     103     345     0   0.072   0.0023     N     16     4     90     612     4     +   0.096   0.0039     A     5,6,7,8,14     5     104     618     1     +   0.08   0.0035     N     17     6     110     658     3     +   0.078   0.0035    N/A     19     7     120     427     0   0.074   0.0037     N     18     8     90     472     2   0.076   0.0023     A     6,7,18     9     60     354     3     +   0.092   0.0031     N     9,13     10     103     342     0   0.084   0.0025     N     16     11     110     523     1     +   0.076   0.0031     A     18     12     90     533     1     +   0.098   0.0023     N     5,16     13     53     432     4     +   0.084   0.0043     A     5,6,6,14     14     125     335     0   0.086   0.0023     N     17     15     85     251     0   0.094   0.0031     N     14     16     64     352     0   0.076   0.0028     A     9,13     17     64     267     0     +   0.11   0.0018     N     15     18     71     370     2   0.086   0.0032     A     5,7,8,14     19     92     672     4     +   0.076   0.0034     N     16     20     21     94     517     4     +   0.07   0.0044     N     17     22     96     659     3     +   0.082   0.0031     N     17     23     110     407     0   0.082   0.0042     N     16     24     90     381     0   0.1   0.0034     A     15     25     120     535     0   0.076   0.003     N     16     26     42     511     5   0.08   0.0038     15     27     100     468     0   0.086   0.0018     N     17     28     83     583     3   0.072   0.0034    N/A     17     29     27     452     5     +   0.104   0.004     ？     7,7,15     30     23     479     4     +   0.076   0.0027     ？     6,6,7,9,14     31     103     308     1   0.086   0.0027     N     14     32     48     286     0   0.108   0.002     N     16     33     67     539     5     +   0.102   0.0056     A     18     34     40     311     5     +   0.084   0.0051     A     7,7,12 表6初始PC-TPP烟草转化物  植物品系      叶     fw(g)    叶面积     cm2  分枝数   植物   高度    cm   叶色       变白     Fw/    面积    干物质      ％    干物质    /面积    对照1     8.18  349.37   0.023     7.213    对照2     10.5  418.89   0.025     9.524    对照3     9.99  373.87   0.027    12.913    对照4     9.91  362.92   0.027     9.586    对照5     9.82  393.84   0.025    11.507       平均   0.0255    10.149   0.0026     11     11.5  338     3    114    wt   0.0340     6.43   0.0022     12     20.1  742    浅白       变白   0.0272     9.82   0.0027     14     9.61  345     1    150    wt   0.0279     11.65   0.0032     16     5.99  234     5    54    浅白       变白   0.0256     12.85   0.0033     17     9.10  314     3    105    wt   0.0290     8.79   0.0025     18     3.78  158     3    75    浅白   0.0239     7.67   0.0018     19     2.98  130     1    70    浅白   0.0229     10.74   0.0025     20     8.33  296     3    70    浅白       变白   0.0281     7.56   0.0021     22     11.5  460     1    117    浅白       变白   0.0251     3.03   0.0008     24     9.42  369     1    155    wt   0.0255     10.62   0.0027     25     15.9  565     1    170    wt   0.0282     9.54   0.0027     26     8.07  343     2    155    wt   0.0235     15.37   0.0036     28     11.7  411     2    65    浅白       变白   0.0286     6.90   0.0020     29     11.6  420     1    117    浅白       变白   0.0277     3.53   0.0010     31     8.21  307     2    153    wt   0.0267     12.79   0.0034     32     4.03  175     1    70    浅白   0.0230     18.86   0.0043     34     4.81  203     1    107    浅白   0.0237     20.58   0.0049     35     7.86  307     3    10    浅白   0.0256     11.45   0.0029     36     4.90  206     2    95    浅白   0.0238     22.65   0.0054     37     13.9  475     1    135    wt   0.0293     4.82   0.0014     38     16.6  614     1    90    浅白       变白   0.0271     3.31   0.0009     39     14.9  560     1    112    wt       变白   0.0267     6.08   0.0016     40     24.5  843   0.0292     9.80   0.0029     41     8.86  343     1    115    wt   0.0258     2.93   0.0008     42     6.93  289     1    wt   0.0240     3.32   0.0008     43     11.3  433    136    135    wt   0.0261     6.73   0.0018     44     10.0  341     2    135    wt   0.0294     6.49   0.0019     45     9.40  327     2    135    wt   0.0287     8.51   0.0024     46     9.18  284     2    115    wt   0.0323     15.69   0.0051       平均   0.027     9.60   0.0025 wt=野生型

用pVDH321转化的烟草植物(cv.Samsun NN)揭示了在温室中与 pMOG1010转基因植物相类似的一种发育模式(表6)。

pMOG1010(35S-TPP)和pMOG1124(PC-TPP)转基因植物在碳水化 合物、叶绿素、海藻糖和淀粉方面经过分析。(图.32)。叶绿素数据也见表 6a。

表6a.PC-TPP转基因烟草叶(To)(N.tabacum)的叶绿素含量 样品      叶绿素     (mg/g叶)     叶表型 对照1      1.56     野生型 对照2      1.40     野生型 对照3      1.46     野生型 对照4      1.56     野生型 对照5      1.96     野生型 PC TPP 12      0.79     变白 PC TPP 22      0.76     变白 PC TPP 25      1.30     野生型 PC TPP 37      0.86     野生型 PC TPP 38      0.74     变白 注：生长过程中的光照条件会显著影响叶绿素的确切水平。叶绿素的计算 含量只可在一次实验内收获和分析的植物之间进行比较。

                          实施例3 编码来源于卷柏(Selaginella lepidophylla)和向日葵(Helianthus annuus) 的海藻糖-6-磷酸合成酶的基因片段的分离

来自大肠杆菌和酿酒酵母的TPS蛋白质序列的比较表明存在几个保 守区域。这些区域被用于设计简并性引物，这些引物在使用大肠杆菌和酵 母的基因组DNA做为模板的PCR扩增中进行测试。使用了一个带有退 火和延伸步骤之间的温度循环以促进简并性引物的退火的PCR程序。

使用引物组TPSdeg 1/5和TPSdeg 2/5并以卷柏的cDNA为模板进行 PCR扩增。

所使用的简并性引物(IUB密码) TPSdeg1:GAY ITI ATI TGG RTI CAY GAY TAY CA   (SEQ ID NO:7) TPSdeg2:TIG GIT KIT TYY TIC AYA YIC CIT TYC C(SEQ ID NO:8) TPSdeg5:GYI ACI ARR TTC ATI CCR TCI C        (SEQ ID NO:9)

克隆了预期大小的PCR片段并测序。因为分离了许多同源序列，用 Southern杂交分析确定哪一个克隆可与卷柏属基因组DNA杂交。分离到 两个克隆，其中克隆8的序列在SEQ ID NO:42(PCR引物组合1/5)中 给出，克隆43的序列在SEQ ID NO:44(PCR引物组合2/5)中给出， 它们在氨基酸水平上显示出与大肠杆菌和酵母来源的TPS基因有高百分 比的相同区域。

使用PCR组合TPSdeg 2/5在以向日葵基因组DNA为模板的PCR 扩增中从向日葵中分离了一个TPS基因。序列分析和Southern杂交证实 与来源于大肠杆菌、酵母和卷柏属的TPS基因有同源性。用各种生物体 中来源的EST序列(表达的序列标鉴)与这些序列比较，见表6b和SEQ ID NOS 45-53和41，表明在水稻和拟南芥属中存在高度同源基因，这支持 了我们的发明即大多数植物均含有TPS同源基因(图.3)。 Table 6b.  dbEST ID.  Genbank  保藏号  生物 功能  35567  D22143  水稻 TPS  58199  D35348  Caenorhabditis elegans TPS  60020  D36432  Caenorhabditis elegans TPS  87366  T36750  酿酒酵母 TPS  35991  D22344  水稻 TPS  57576  D34725  Caenorhabditis elegans TPS  298273  H37578  拟南芥 TPS  298289  H37594  拟南芥 TPS  315344  T76390  拟南芥 TPS  315675  T76758  拟南芥 TPS  317475  R65023  拟南芥 TPS  71710  D40048  水稻 TPS  401677  D67869  Caenorhabditis elegans TPS  322639  T43451  拟南芥 TPS  76027  D41954  水稻 TPP  296689  H35994  拟南芥 TPP  297478  H36783  拟南芥 TPP  300237  T21695  拟南芥 TPP  372119  U37923  水稻 TPP  680701  AA054930  Brugia malayi 海藻糖酶  693476  C12818  Caenorhabditis elegans 海藻糖酶  311652  T21173  拟南芥 TPP  914068  AA273090  Brugia malayi 海藻糖酶  43328  T17578  Saccharomyces cerevisiae TPP  267495  H07615  Brassica napus 海藻糖酶  317331  R64855  拟南芥 TPP  15008  T00368  Caenorhabditis elegans 海藻糖酶  36717  D23329  水稻 TPP  71650  D39988  水稻 TPP  147057  D49134  水稻 TPP  401537  D67729  Caenorhabditis elegans 海藻糖酶  680728  AA054884  Brugia malavi 海藻糖酶  694414  C13756  Caenorhabditis elegans 海藻糖酶  871371  AA231986  Brugia malayi 海藻糖酶  894468  AA253544  Brugia malayi 海藻糖酶  86985  T36369  酿酒酵母 TPP

                      实施例4

从烟草(Nicotiana tabacum)中分离植物TPS和TPP基因

使用PCR在来源于烟草叶总RNA制备物的cDNA上分离出植物编 码TPS和TPP的cDNA片段。表7中“嵌套式”一栏表示是否需要用引 物组3和4进行第二轮PCR扩增以获取相应的DNA片段。引物均包括 在序列表中(表7)。用提及的引物组获得的DNA片段的亚克隆和随后的序 列分析表明其与已知的TPS基因基本同源(图.4&5)。

        表7植物来源的TPS和TPP cDNA的扩增 TPS-cDNA 引物1 引物2 嵌套式 引物3 引物4 “825”bp SEQ ID.NO 22&23 Tre-TPS-14 SEQ ID NO30 Deg1 SEQ ID NO7 否 “840”bp SEQ ID NNO 18&19 Tre-TPS-14 SEQ ID NO30 Tre-TPS-12 SEQ ID NO31 是 Tre-TPS-13 SEQ ID NO32 Deg5 SEQ ID NO9 “630”bp SEQ ID NO 20&21 Tre-TPS-14 SEQ ID NO30 Tre-TPS-12 SEQ ID NO31 是 Deg2 SEQ ID NO8 Deg5 SEQ ID NO9

TPP-cDNA 引物1 引物2 嵌套式 “723”bp SEQ ID NO16&17 Tre-TPP-5 SEQ ID NO35 Tre-TPP-16 SEQ ID NO38 否 “543”bp SEQ ID NO14 Tre-TPP-7 SEQ ID NO36 Tre-TPP-16 SEQ ID NO38 否 “447”bp SEQ ID NO12 Tre-TPP-11 SEQ ID NO37 Tre-TPP-16 SEQ ID NO38 否

                        实施例5 来自向日葵(Helianthus annuus)和烟草(Nicotiana tabacum)的一种两分 TPS/TPP基因的分离

使用来自向日葵的TPS基因片段的序列信息，利用RACE-PCR技术 获得一全长向日葵TPS克隆。全长克隆的序列分析以及TPS和TPP编码 序列与来自酵母的TPS2的序列比较(图.6)表明分离的克隆编码一种 TPS/TPP两分酶(SEQ ID NO 24,26和28)。分离的两分克隆 (pMOG1192)依布达佩斯条约的规定已于1997年4月21日以保藏号 CBS692.97保藏于菌种保藏中心局(Central Bureau for Strain collections) 中。随后我们考察了是否其它植物种类也含有TPS/TPP两分克隆。从烟 草中扩增出来一种TPS/TPP cDNA。用引物TPS deg1/TRE-TPP-16 PCR 以及用引物TPS deg2/TRE-TPP-15(SEQ ID NO:33)嵌套式PCR(nested PCR)后检测到一个预期大小的DNA产物(即1.5kb)。用TPS deg1/TRE- TPP-6(SEQ ID NO:34)PCR以及用引物TPS deg2/TRE-TPP-15嵌套式 PCR后出现相同的带。后一片段在Southern杂交实验中可与向日葵两分 cDNA杂交。此外使用计算机数据检索，确认了一种拟南芥(Arabidopsis) 两分克隆(SEQ ID NO:39)。

                     实施例6

         植物来源的TPS基因在植物中的表达

通过分离TPS基因相应的全长cDNA克隆并随后在植物中35S CaMV动子控制下表达这些克隆，获得来源于向日葵和卷柏(Selaginella lepidophylla)TPS基因功能的进一步证据。通过卷柏属酶的表达产生的海 藻糖的积累已被Zentella和Iturriaga(1996)(植物生理111，文摘88) 所报道。

                     实施例7

      来自单子叶植物种类的编码TPS和TPP的基因

在Genebank序列中的计算机检索表明存在几个与来自酵母的TPS1 和TPS2同源的水稻EST序列(图.7)，它们已包括在序列表中(SEQ ID NO:41,51,52和53)。

                    实施例8

                人TPS基因的分离

从人cDNA中分离TPS基因。使用简并性TPS引物deg2和deg5在 人cDNA上进行PCR反应。这产生了预期的0.6kb的TPS片段。序列分 析(SEQ ID NO 10)和与TPSyeast的序列比较表明分离的序列编码一个同 源的TPS蛋白(图.8)

                    实施例9

          通过反义抑制以抑制内源性TPS的表达

通过在需要抑制的细胞或组织中在启动反义TPS基因的启动子控制 下，同源TPS基因的反义表达可以抑制内源性TPS基因的表达。尽管在 一反义表达载体中并不需要表达完整的编码区域，此方法中，优选使用与 所要抑制的TPS基因完全相同的序列。这种编码区域的片段已证明在基 因表达的反义抑制中是有功能的。此外，与内源基因有足够的同源性的异 源基因可以用于反义的方法。

只要保证所抑制的导入基因的编码区域以反方向导入也可使用与 pMOG845和pMOG1010类似的二元载体。适于在靶组织中启动基因表 达的所有合适的启动子也适合于基因的反义表达。

                       实施例10

          通过反义抑制以抑制内源性TPP的表达

与可用于在细胞和组织中启动TPS反义表达的载体的构建相类似(实 施例9)，构建了启动TPP基因反义表达的载体。

                       实施例11

在有效霉素A上生长的野生型烟草和马铃薯植物中海藻糖的积累

通过在有10-3M海藻糖酶抑制剂有效霉素A中培养野生型植物获得 了在烟草中存在海藻糖生物合成途径的证据。经过处理的植物积累非常少 量的海藻糖，最多达0.0021％(鲜重)。在培养于未加抑制剂的任何对照植 物中从未检测到海藻糖的积累。用培养于有效霉素A中的野生型微块茎 也可获得类似数据。17个品系中有10个积累平均0.001％海藻糖(鲜 重)(表4)。在未加有效霉素A的培养基上诱导的微块茎中未观察到海藻 糖。

                      实施例12

     在反义海藻糖酶转基因马铃薯植物中海藻糖的积累

用一个35S CaMV反义海藻糖酶构建体(SEQ ID NO:54和55, pMOG1027；描述于WO96/21030中)转化野生型马铃薯植物获得存在 内源性海藻糖生物合成基因的进一步证据。一个pMOG1027转基因马铃 薯苗在鲜重基础上表现出海藻糖积累达0.008％。通过用海藻糖酶特异性 降解积累的海藻糖证实了所观察到的海藻糖峰是相同的。一些 pMOG1027转基因品系的茎显示积累了少量海藻糖(图.9)。

                       实施例13

        通过海藻糖-6-磷酸抑制植物己糖激酶的活性

为了证明海藻糖-6-磷酸对己糖激酶活性的调节作用，制备植物抽提 液并在缺少和存在海藻糖-6-磷酸的情况下检测己糖激酶活性。 ·用果糖(图.10，图.11)和葡萄糖(图.11)作为底物检测马铃薯块茎抽提液。 依据Gancedo等人(1997)生物化学杂志(J.Biol.Chem.)252,4443使用 1mM T-6-P和果糖作为底物进行马铃薯块茎检测。依据在实验部分描述 的方法对烟草，水稻和玉米进行下列检测。 ·使用果糖(图.12)和葡萄糖(图.12和图.13)作为底物检测烟草叶抽提液。 ·使用果糖和葡萄糖(图.14)作为底物检测水稻叶抽提液。 ·使用果糖和葡萄糖(图.15)作为底物检测玉米叶抽提液。

                         实施例14

通过海藻糖-6-磷酸在动物细胞培养物中抑制己糖激酶的活性

为了证明在动物细胞中己糖激酶活性的调节，从小鼠杂交瘤细胞培养 物中制备总细胞抽提液。在如Gancedo等人所述的条件(见上)下使用葡萄 糖或果糖作为底物进行己糖激酶检测。通过将细胞沉淀先后置于20％蔗 糖和蒸馏水中将小鼠杂交瘤细胞渗透压休克。此粗蛋白抽提液被用于己糖 激酶测定(50μl抽提液相应于约200μg蛋白质)中。

         表8．通过T-6-P抑制动物己糖激酶的活性 底物 浓度 (mM) T6P (mM) V0 (ODU/min) V1 (ODU/min) 抑制(％) 葡萄糖 2 0.83 0.0204 0.0133 35 葡萄糖 20 0.83 0.214 0.0141 35 葡萄糖 100 0.83 0.0188 0.0125 34 果糖 20 0.23 0.0207 0.0205 1 果糖 20 0.43 0.0267 0.0197 26 果糖 20 0.83 0.0234 0.0151 35 果糖 20 1.67 0.0246 0.0133 46

获得的资料清楚地表明在小鼠细胞抽提液中的己糖激酶活性被海藻 糖-6-磷酸抑制。观察到此效果的T-6-P浓度范围与在粗植物抽提液中观 察到的类似。使用葡萄糖或果糖为酶的底物，在用海藻糖-6-磷酸对己糖 激酶活性抑制的效率上没有可观察到的差别。

                   实施例15

     表达TPS和TPP烟草植物的光合作用和呼吸作用 使用35S-TPP(1010-5),PC-TPS(1318-10和1318-37)转基因烟草植物和 野生型烟草(Samsum NN)植物，确定在叶子中这些基因的表达对光合作 用和呼吸作用的效果。

在气体交换实验装置上进行测量。使用远红外气体分析设备依据进气 和出气之间浓度上的差别计算气体交换速度。测定了来源于相同叶子的光 合作用和呼吸作用。每一个转基因植物中使用最年轻的，完全成熟的叶(上 叶)和其下3-4层叶子的一个叶(下叶)。

在350vpm和950vpm的CO2浓度下四个样品中以0-975μmol. m-2.S-1(200Watt m-2)的光合活性光强度(PAR)的函数测量光合作用。

使用两个不同的时间尺度来测量呼吸作用。光合作用后短暂的黑暗时 期内进行的测量在表9中记作RD。这些数值反应了瞬时活性，因为呼吸 作用基本上在黑暗时期发生变化。由此，整个夜间的数值也被总结在表 10(只在350vpm CO2下测量)中。 表9  光合作用和呼吸作用的速率，STD为标差差  上叶  350ppm   950ppm     μl/m2/s      STD     μl/m2/s      STD  野生型  RD      0.0826     0.048      1.016     0.142  EFF      0.060     0.004      0.087     0.004  AMAX      11.596     0.588      19.215     0.942  1010-5  RD      0.873     0.060      1.014     0.134  EFF      0.059     0.002      0.090     0.007  AMAX      12.083     1.546      18.651     1.941  1318-10  RD      0.974     0.076      1.078     0.108  EFF      0.064     0.003      0.088     0.008  AMAX      16.261     2.538      24.154     1.854  1318-37  RD      1.067     0.140      1.204     0.116  EFF      0.061     0.002      0.084     0.011  AMAX      16.818     2.368      25.174     2.093  下叶  野生型  RD      0.0438     0.079      0.526     0.112  EFF      0.068     0.002      0.085     0.004  AMAX      6.529     1.271      11.489     1.841  1010-5  RD      0.455     0.068      0.562     0.118  EFF      0.064     0.002      0.085     0.006  AMAX      8.527     0.770      13.181     1.038  1318-10  RD      0.690     0.057      0.828     0.086  EFF      0.064     0.008      0.085     0.005  AMAX      11.562     1.778      20.031     1.826  1318-37  RD      0.767     0.033      0.918     0.099  EFF      0.073     0.006      0.103     0.004  AMAX      13.467     1.818      19.587     1.681 表10．在12小时黑暗时期内的呼吸作用(mmol CO2)STD是标准差     上叶   标准差     下叶   标准差 野生型     25.17    0.82     13.19    1.98 1010-5     30.29    5.09     13.08    1.52 1318-10     28.37    4.50     20.47    0.87 1318-37     32.53    2.01     17.7    1.03

与上叶中的呼吸作用相比较，在下叶中TPS转基因植物的呼吸作用 显著高于野生型和TPP植物(表10)，表明代谢活性更高。对于TPS转基 因植物在叶衰老过程中呼吸作用的下降明显较少。

同样，在TPS转基因植物、TPP转基因植物和野生对照植物之间光 合特征显著不同。AMAX值(在光饱和时光合作用最大值)、光合作用的 效率(EFF)和光合作用测量后在短暂黑暗时期内呼吸作用速率(RD)示于 表9。平均来说，TPS上叶比TPP和野生型的上叶AMAX值高35％。 下叶则显示光合作用增加的速率更高(88％)。

为了排除光吸收的不同所引起的不同的光合速率，用SPAD-502 (Minolta)测量吸收值。在吸收上未测出显著差异(表11)。

     表11．转基因品系的光吸收值 吸收(％)    上叶    下叶 野生型Samson NN     84     83 1010-5     84     82 1318-10     85     86 1318-37     86     86

                    实施例16

         表达TPS和TPP烟草植物的叶绿素荧光

使用35S-TPP(1010-5)、PC-TPS(1318-10和1318-37)转基因烟草植 物和野生型烟草(Samsum NN)植物，确定表达这些基因对叶材料的叶绿 素荧光所产生的效果。测量了荧光的两个特征：1)ETE(电子传递效率)， 做为对电子传递速度和还原力产生的测量，及2)非光化学淬灭，一种对 由同化产物积累所引起的能量分配的测量。

植物生长在加有100μmol.m-2.S-1(04:00-20:00小时)光的温室 中。白天/夜晚T=21℃/18℃；R.H.±75％。在测量前的夜时期(持续16 小时)，将每个基因型的两株植物转移到黑暗中，两株转移到光照(±430 μmol.m-2.S-1,20℃,R.H.70％)中。测量最年轻的完全成熟的叶子。 PSⅡ(光系统Ⅱ)的光化学效率和“非光化学淬灭”参数被定为光强度增加 的函数。在每一个光强度，采用300秒稳定时间。用3次闪光/分的频率， 在350ppm CO2和20％O2的条件下分别对5,38,236,422和784 μmol m-2.S-1 PAR进行测量。使用相同的植物逆转从黑暗至光的预处理 重复此实验，反之亦然。荧光特征描述于图.16。

在TPP和野生型植物之间电子传递效率(ETE)的降低相差不大。 TPS植物明显对光强度增加的反应较小。这种差异在光预处理下最清楚。 这些观察与“非光化学”淬灭数据一致。与TPP和野生型植物相比，TPS 植物明显对由光提供的附加的同化产物补给反应较小。在TPS植物中， 对光合作用积累性同化产物的负调节显著降低。

                   实施例17

   在表达TPS和TPP烟草植物中同化产物的输出和分配

使用35S-TPP(1010-5)和PC-TPS(1318-37)转基因烟草植物， 1)由完全长成的叶中碳同化产物的输出(表明“相对源活性”，Koch (1996)Annu.Rev.Plant Physiol.Plant.mol.Biol.47,509)和 2)确定在光照和黑暗时期在池中光同化产物的净积累(“相对池活性”)。

植物的发育阶段：花芽刚刚可见。使用的标记技术：稳定态高丰度13C- 标记的光合产物(De Visser等人(1997)Plant Cell Environ 20,37)。对于 两个基因型的8株植物，使用完全长成的叶子进行标记，在光照时期(10 小时)用原子百分比5.1的13CO2标记，当合适时随后接着一个黑暗时期(14 小时)。标记之后植物被分成：1)苗尖，2)新的正生长的叶，3)新的完 全长成的叶(在被标记叶的上方)，4)新茎(在被标记叶的上方)，5)标记 的叶，6)标记叶的柄和基底，7)正在老化的叶，8)低于标记叶的其它 叶和最老的叶，9)低于标记叶的茎，10)根尖。确定了数目，鲜重和干 重以及13C占C的百分比(13C原子百分比)。除了如生物量、干物质和叶 数目的一般参数，还计算了：1)被标记叶输出的碳；2)在植物各个部 分输入碳的相对量；3)在植物各个部分输入碳的绝对量，4)在光照时 期和一个完全光照和黑暗时期输入C的相对分布。

与TPS转基因植物相比，TPP转基因植物土壤以上部分的生物量大 27％(P＜0.001)；TPP转基因植物的根系统也发育得更好。与TPS植物 相比，TPP植物的干物质分布有明显改变，叶和茎所占生物量分别为 +39％和+10％。TPS植物有大量的叶子，但每个叶的叶面积较小。每个 TPS植物总叶面积与野生型(0.4m2植物-1)类似 -完全发育叶的相对源活性

使用植物(无被标记叶)中“新碳”量作为尺度，通过夜间“新碳”的 百分比相对下降(对TPP为39％和对TPS为56％)和通过在植物中总的固 定量确定被标记叶光合产物的净输出率。光照时期以后，相比于TPS叶 的51％的输出，TPP叶输出为37％(表11)。在随后的黑暗时期内，此比 例分别增加为52％(TPP)和81％(TPS)。两种方法都支持这种结论：相比 于TPP转基因植物，TPS转基因植物的光合产物输出率显著提高。 -在植物各个部分中“新碳”的绝对量

与TPP转基因植物相比，TPS转基因植物的输出明显高。新生长的 TPS叶的碳输入强于新生长的TPP叶。 -在植物各个部分中“新碳”的相对增加：池强度

“新碳”在相关植物部分的相对组成描述于图.17中。此比例是池强 度的一个标尺。在TPS转基因植物中池强度显著较高，尤其在苗尖、被 标记叶以上和以下的茎中以及被标记叶的柄中。 表11.一个完全长成的被标记叶的源活性：碳积累和输出。在光照时期(天) 经稳定态13C标记后在标记叶和整个植物(土壤以上)中碳同化产物的净日 积累量和输出量。N=4:LSD值表示对于P＜0.05时最小的显著性差 异 时间 (结束) 转基因                   长成叶的源活性  在源叶中的     新碳  (叶中总碳     的％)   夜间净碳输     出与  “每日”的％  源叶中新碳  (植物中新    碳的％)  对植物的净   碳输出  (总的新碳    的％) 白天 TPS     17.8       -     48.7     51 TPP     22.6       -     63.0     37 白天+ 夜晚 TPS     7.8       56     16.6     81 TPP     13.8       39     48.4     52 LSD0.05     2.4     6.1 -在植物各个部分之间“新碳”在植物内的相对分布：相对池强度

在植物器官之间固定碳的分布(图.18)证实了上述的结论。TPS转基 因植物显示出对苗尖、新的正生长的叶子(白天)和最老的叶子(无腋生分生 组织)以及新茎和老茎均有相对大的同化产物的输出。

                  实施例18：莴苣

         PC-TPS和PCTPP转基因莴苣植物的特性

在莴苣转化实验中使用的构建体：PC-TPS和PC-TPP。通过将外 植体培养在60g/L蔗糖中在再生过程中挽救PC-TPS转基因植物。TPS 和TPP转基因植物的表型均与野生型对照有明显区别的；与野生型植物 相比，TPS转基因植物有厚、深绿色的叶子，TPP转基因植物带有较光 滑叶边缘的淡绿色叶子。

叶子的形态，最显著的是叶子边缘，明显地受TPS和TPP的表达的 影响。PC-TPS转基因的叶子比有着较光滑和圆形的PC-TPP转基因的 叶子有更多的“缺刻”(图.19)。分析了转基因莴苣品系的叶提取物中的糖 和淀粉(图.20)

                     实施例19：甜菜

         PC-TPS和PC-TPP转基因甜菜植物的特性

在甜菜转基因实验中所用构建体是：PC-TPS和PC-TPP。用TPS 和TPP构建体获得的转化效率和对照类似。TPS和TPP转基因植物的 表型和野生型对照均有明显区别；与野生型植物相比较，TPS转基因植 物有厚、深绿色的叶子，TPP转基因植物则带有稍细长柄的淡绿色叶子 (图.21)。在温室中生长约8周以后测定所有植物的主根直径。具有与对照 植物类似叶尺寸的一些PC-TPS转基因品系主根直径明显更大(图.22)。与 非转基因对照相比，PC-TPP转基因品系形成一个较小的主根。分析了转 基因甜菜品系的叶抽提液中的糖和淀粉(图.20)。

                实施例20：拟南芥属

        PC-TPS和PC-TPP转基因的拟南芥属的特性

用于拟南芥属转基因实验的构建体：PC-TPS和PC-TPP。TPS和 TPP转基因植物的表型均与野生型对照有明显区别的；与野生型植物相 比，TPS转基因植物有厚、深绿色的叶子，TPP转基因植物有更大的变 白的叶子。具有高水平TPP表达的植物不结种。

                实施例21：马铃薯

  TPS和TPP结构转基因马铃薯(Solanum tuberosum)的特性

构建体：35S-TPS pMOG799

pMOG799转基因植物生长在温室中，测定块茎产量(图.23)。与野生 型对照相比，大多数转基因植物的叶子较小。与对照品系相比，具有较小 叶子的植物产生较小的块茎量(图.25)。

构建体：35S-TPP pMOG1010和PC-TPP pMOG1124

pMOG1010和pMOG1124转基因植物生长于温室中，测定块茎的产 量。块茎量(图.24)与野生型对照品系类似或更少(图.25)。

构建体：PC-TPS pMOG1093

pMOG1093转基因植物生长于温室中，测定块茎的产量。与对照植 物相比，许多转基因品系的叶大小与野生型(B-C)类似，叶子颜色上略微 显浅绿色且产生更多的块茎(图.26)。比对照植物叶子小的植物(D-G)产生 较少的块茎量。

构建体：Pat-TPP pMOG1128

在Pat-TPP转基因植物的外植体上体外诱导微块茎。形成的微块茎 的平均鲜重生物量基本上低于对照品系。

构建体：Pat-TPS pMOG845

pMOG845转基因植物生长在温室中，测定了块茎产量。与对照品系 相比，三个Pat-TPS品系产生更多的块茎量(图.27)。

构建体：PC TPS Pat TPS；pMOG1129(845-11/22/28)

用带有PC TPS构建体和一个潮霉素抗性标记基因的pMOG1129构建 体再转化Pat-TPS品系(卡那霉素抗性)产生同时表达PC TPS和Pat-TPS 的植物，即产生基因型pMOG1129(845-11)、pMOG1129(845-22)和 pMOG1129(845-28)。所产的块茎量在几乎不产生至与对照植物类似或高 于对照植物的量之间变化(图.28)。

                  实施例22：烟草

    TPS和TPP构建体转化烟草(N.tabacum)植物的特性 根系统

35S TPP(pMOG1010或35S TPS(pMOG799)转基因烟草植物生长 在温室中。在即将开花前测定根大小。与pMOG799转基因植物和非转 基因野生型烟草植物相比，pMOG1010转基因品系的根大小明显较小/ 较大。 TPS和/或TPP表达对开花的影响。

35S-TPS,PC-TPS、35S-TPP或PC-TPP转基因烟草植物培养在 温室中。与野生型植物相比，TPS基因表达水平高的植物的生长速率较 低。在这些植物中较低的叶的开花和老化被延迟，导致正常的正在老化叶 的常绿表型。TPP基因表达水平高的植物不产生任何花或产生异常的未 完全发育的花芽，以至于绝育。 TPS和/或TPP的表达对种子形成的影响

35S-TPS、PC-TPS、35S-TPP或PC-TPP转基因烟草植物培养在 温室中。TPP基因高水平表达的植物花的发育较差或不发育，并无种子 形成。 TPS和/或TPP的表达对种子萌发的影响

35S TPP(pMOG1010)或PC TPP转基因烟草植物生长于温室中。有 着低表达水平的转基因的某些转基因品系可以开花并结种。S1种子一旦 萌发，与来源于野生型植物的S1种子相比，可观察到萌发频率的显著降 低(或不萌发)(表12)。

      表12 35S-TPP转基因植物种子的萌发   种子号     变白     Rel.   [TPPmRNA]     萌发 1010-2      +     15.8     延迟 1010-3      -     5.3     延迟 1010-4      +     4.2     延迟 1010-5      +     5.2     延迟 1010-6      +     3.9     延迟 1010-7      -     2.8     延迟 1010-8      +     6.5     延迟 1010-9      +     4.6     延迟 1010-10      -     1.9     正常 1010-11      -     5.7     正常 1010-12      +     1.4     正常 1010-14      -     0.1     正常 1010-15      -     0.3     正常 1010-18      +     5.6     延迟 1010-20      +     6.4     延迟 1010-21      +     9.5     延迟 1010-22      +     8.8    不萌发 1010-23      -     4.5     正常 1010-24      -     10.2     延迟 1010-25      -     4.7  延迟(较少) 1010-27      -     4.8     正常 1010-28      +     22.1     延迟 1010-31      +     9.4  延迟(较少) 1010-32      -     0.3  延迟(较少) 1010-33      +     14.7     延迟 TPS和/或TPP的表达对种子产量的影响

测定了pMOG1010-5转基因植物S1代的种子产量。平均来说，与野 生型植物7.8g种子/每株植物(n=8)相比，pMOG1010-5产生4.9g种子/ 每株植物(n=8)。对pMOG1010-5品系“1000粒”重量是0.06g而野生 型烟草(Samsun NN)是0.08g。这些数据可以通过从源叶子中碳水化合物 输出降低，导致种子“池”组织发育较差加以解释。 TPS和TPP的表达对叶形态的影响

固定温定内生长的PC-TPS转基因、PC-TPP转基因和非转基因对 照烟草叶的片段，包埋于塑料中，制备包埋块(coupe)以用光学显微镜研 究细胞结构。PC-TPP转基因植物横切面的细胞结构和形态与在对照植 物中所观察到的类似。PC-TPS转基因植物的横切面与野生型和TPP转 基因植物中有3层海绵质细胞相比表明，其海绵质细胞层由7层细胞组成 (图.29)。这个发现与我们的观察是一致的，即与TPP转基因植物和对照 植物相比，TPS转基因品系形成更厚和更硬的叶子。

                       实施例23

         通过磷酸海藻糖合成酶的表达抑制冷甜化

产生了带有马铃薯块茎特异性Patatin启动子控制下的TPS基因 (pMOG845；实施例1)的转基因马铃薯植物(Solanum tuberosum cv. Kardal)。转基因植物和野生型对照植物生长于温室中并且收获块茎。在 收获后直接进行块茎材料样品的糖分析和4℃下储存6个月后取块茎材料 的样品进行糖分析。来自HPLC-PED分析的数据描述于图.30。

清楚表明的是在收获后TPSE.coli转基因马铃薯植物累积于决茎中的 总糖(葡萄糖、果糖和蔗糖)量较低。在4℃下储存6个月后，与野生型对 照品系相比，在转基因品系中可溶糖的增加明显较少。

                      实施例24 在干旱逆境下35S TPS 35S TPP(pMOG851)转基因烟草植物特性的改善

产生带有在35S CaMV启动子控制下来自大肠杆菌的TPS和TPP基 因的转基因烟草植物。使用Northern杂交和酶活性测定在获得的品系中 证实了TPS和TPP基因的表达。用pMOG851-2转化的植物显示积累了 0.008mg海藻糖g-1鲜重，pMOG851-5积累了0.09mg海藻糖·g-1鲜重。 在干旱逆境下这两个基因的表达对植物形态和生长特性有显著作用。当在 由限制水供应而施加的干旱逆境下生长时，所检测的两个转基因烟草品 系，pMOG851-2和pMOG851-5产生比野生型烟草高28％(P＜0.01) 和39％(P＜0.001)的总干重量。这些干重的增加主要是由于叶生产的增 长：对pMOG851-5转基因植物，叶干重增加达85％。在水供应良好的 条件下没有观察到显著差异。 干旱逆境实验

从初始转化物pMOG851-2和pMOG851-5自体受精获得的F1种子 (Goddijn等人(1997)植物生理113,181)用于此研究。种子在20％家用 漂白剂中消毒10分钟，在无菌水中冲洗5遍，播种在含有10g.L-1蔗糖 和100mg.L-1卡那霉素的半强度Murashige和Skoog培养基中。野生型 SR1种子播种在无卡那霉素的盘中。两星期后，各个品系的幼苗转到土壤 (沙质壤土)中，在22℃，约100μE.m-2光强度、14h·d-1条件下生长 于生长小室中。所有植物都在3.8升盆内相等量的土壤中生长。植物每天 用半强度Hoagland营养液浇水。pMOG851-2和pMOG851-5的幼苗比 野生型幼苗生长稍慢。因为我们认为在相同发育阶段开始实验最为重要， 当幼苗在相同高度(10cm)、相同发育阶段(4叶)和相同干重(从每个品系的 另两株植物测量)时，我们开始对每个品系进行干旱逆境处理。这就意味 着对pMOG851-2的处理比野生型晚两天，对pMOG851-5的处理比野生 型晚7天。每个品系中，6株植物承受干旱逆境，4株保持良好的供水条 件作为对照。通过将野生型烟草植物保持在萎蔫点附近对野生型烟草植物 进行干旱处理：当下半部分的叶子萎蔫时，向植物施营养液使植物暂时重 新获得生机。实际上，这就意味着每3天供应50ml营养液；对照植物每 天浇水以保持其田间持水量。pMOG851-2和pMOG851-5植物以与野生 型完全相同的方式浇水，即，它们象野生型一样在相同时间间隔后补充相 同量的营养液。在整个研究过程中，定期测量茎高度。所有植物在同一天 (野生型植物处理开始后32天)收获，因为在较晚阶段收获转基因植物会 使品系的比较更为复杂。收获时用Delta-T Devices叶面积仪(Santa Clara, CA)测量总的叶面积。此外，测定了叶、茎和根的干重和鲜重。 以基本上相同的方式进行第二个实验以分析植物的渗透势。在干旱逆境中 35天后，在光照时期开始时从最年轻的成熟的叶子中取样(n=3)。 离脱叶的空气干燥

从供水良好的、4周龄pMOG851-2,pMOG851-5和野生型植物中 测量自空气干燥的离脱叶的水分丢失。每个品系中使用5株植物，从每株 植物中分离2个最新成熟的叶子，在25％的相对湿度中空气干燥。每个 叶子的鲜重测量32小时。为了测量渗透势和测定可溶性糖的含量，在实 验时从类似的供水良好的叶中取样。 渗透势测量

用于渗透势分析的叶样品立即储存在带帽的1ml注射器中并在干冰 上冷冻。在即将分之前将叶子汁被挤入一个小瓶内、混合并用以浸润一个 纸片。在Wescor C52小室内用Wescor HR-33T露点微伏计测定渗透势。 叶绿素荧光

在干旱处理20天后，使用脉冲调节(PAM)荧光计(Walz,Effeltrich, 德国)测量野生型、pMOG851-2和pMOg851-5植物的叶绿素荧光。在测 量之前，植物在黑暗中保存两小时，随后为一小时光照期。随后，最年轻 的成熟的叶子适应黑暗20分钟。在每一个测量开始时，打开一个小的(调 节为1.6kHz的0.05μmol m-2S-1)测量光束，并测量最小荧光水平(F0)。 通过持续使用4000μmol m-2S-1800ms的饱和光脉冲测定最大荧光水平 (Fm)。又经过20秒后，当信号衰减至接近F0时，以2秒的黑暗间隔30 秒内重复给予有光化性的光(波长800ms,4000μmol m-2S-1)的简短饱 和脉冲。从荧光/时间曲线依据Bolhar-Nordenkampf和Oquist(1993)的 方法确定光化学(qQ)和非光化学(qE)淬灭组分。在测定时，所研究的叶子 无可见的萎蔫。使用程序Number Cruncher统计系统(Dr.J.L.Hintze, 865 East 400 North,Kaysville,UT 84037，美国)通过变量的单边(che-way) 分析获得统计数据。

干旱逆境处理的植物的叶绿素荧光分析表明在pMOG851-5中有较 高的光化学淬灭(qQ)和一个较高的可变荧光对最大荧光(Fv/Fm)的比率， 表明是一个更为有效的的光合工作机制(表13)。 表13.野生型(wt)和积累海藻糖的(pMOG851-2,pMOG851-5)转基因烟 草植物的叶绿素荧光参数。从分析每个品系在供水良好条件下(对照)或干 旱条件下生长的植株之间的差异以及在供水良好或干旱条件下生长的转 基因品系和野生型的每一个之间的差异，通过ANOVA检测分析可以得 到P(概率)值。Fm：最大荧光；Fv：可变荧光(Fm-F0)；qQ：光化学淬 灭；qE：非光化学淬灭。Fm,Fv以任意单位(表mm)表示。   野生型   pMOG851-1   pMOG851-5   8-51-2/WT   815-5 FM 对照   174.4     180.4     175.6    ns   ns 干旱   151.5     155.7     167.8    ns   0.0068 P(ctrl.dry)   0.0004     0.0000     ns FV 对照   134.6     143.3     142.8    ns   ns 干旱   118.4     122.1     135.6    ns   0.0011 P(ctrl.dry)   0.006     0.0000     ns FV/FM 对照   0.771     0.794     0.813    0.059   0.0052 干旱   0.782     0.784     0.809    ns   0.0016 P(ctrl.dry)   ns     ns     ns qE 对照   15.2     23.8     29.9    0.259   0.0085 干旱   25.4     21.6     23.5    ns   ns P(ctrl.dry)   0.048     ns     ns qQ 对照   91.3     92.4     90.4    ns   ns 干旱   73.69     78.5     92.75    ns   0.0005 P(ctrl.dry)   0.005     0.006     ns 碳水化合物分析

在收获时，pMOG851-5植物含有0.2mg·g-1干重海藻糖，而在 pMOG851-2和野生型中不管在逆境或非逆境条件下，海藻糖水平均低于 检测限度。pMOG851-5植物的海藻糖含量与在逆境和非逆境中的植物 类似(分别为0.19和0.20mg.g-1干重)。在供水良好的条件下， pMOG851-5植物中葡萄糖和果糖水平比野生型中高两倍。逆境处理的 pMOG851-5植物的叶子所含的四种非结构碳水化合物淀粉、蔗糖、葡萄 糖和果糖的各自水平比逆境处理的野生型植物叶高约3倍。在 pMOG851-2叶子中，碳水化合物的水平象叶绿素荧光值一样和野生型的 叶子中的无显著差异。与非逆境处理的植物相比，所有逆境处理的品系的 植物含有水平增高的葡萄糖和果糖。 干旱逆境处理的植物和对照植物的渗透势

在第二个类似的温室条件下的实验中，转基因植物表现出与上述相同 的表型，pMOG851-5植物在干旱逆境下再次比pMOG851-2和野生型植 物在生长上下降较少。干旱处理的pMOG851-5植物的叶的渗透势(-1.77 ±0.39Mpa)显著(P=0.017)低于野生型叶(-1.00±0.88Mpa)； pMOG851-2表现为中间值(-1.12±0.05Mpa)。类似的，在供水良好的条 件下pMOG851-5植物的渗透势(-0.79±0.05Mpa)显著(P=0.038)低于野 生型叶的渗透势(-0.62±0.03Mpa),pMOG851-2为中间值(0.70± 0.01Mpa)。 离脱叶的空气干燥

分离pMOG851-2、pMOG851-5和野生型植物的叶，它们鲜重的测 量在空气干燥下持续32小时。pMOG851-2和pMOG851-5植物的叶子 失水显著(P＜0.05)少于野生型的叶子：经过32小时后，pMOG851-5 和pMOG851-2的叶子分别剩下鲜重的44％和41％，而野生型为30％。 在实验时，为了测定渗透势以及进行海藻糖、蔗糖、葡萄糖和果糖的分析， 从类似的、供水良好的叶子中取样。两个转基因品系的渗透势低于野生型 (P＜0.05),pMOG851-5的水势能最低(-0.63±0.03Mpa)，野生型最高 (-0.51±0.02Mpa),pMOG851-2居中(-0.57±0.04Mpa)。在 pMOG851-5植物叶子中所检测的全部糖水平显著高于野生型叶子中 的，导致四种糖的联合水平高出3倍(P=0.002)。pMOG851-2植物含有 高出2倍的四种糖的联合水平(P=0.09)。在pMOG851-5植物中海藻糖的 水平为0.24±0.02mg·g-2DW，在pMOG851-2和野生型中低于检测 水平。

                    实施例25

     在干旱逆境下TPS和TPP转基因莴苣品系的特性

初始TPS和TPP转化物和野生型对照植物经受干旱逆境。TPP转 基因品系首先达到萎蔫点，然后是对照植物，接下来是TPS转基因植物， 这表明，如在其它植物种类中所观察到的，在干旱应激中TPS转基因品 系比TPP和野生型植物有明显优势。

                    实施例26

     PGPS或PC-TPP转基因莴苣植物的抽苔受到影响

在PC-TPP转基因莴苣植物中的抽苔减少(表14)。与野生型莴苣植物 相比，PC-TPS转基因品系显示抽苔增加。

                           表14．莴苣植物的抽苔  PC-TPP  植物系 植物 总数      1．  正常抽苔     2．  抽苔减少      3．  可见的花序      4．  可能的扁化      5．  完全生长的  1A  4     4  2A  3     1     2  3A  2     2  4A  5     1     1     1     2  5A  5     1     1     3  7A  1     1  8A  5     4     1  9A  5     5  10A  3     1     2  11A  5     2     3  12A  4     4  对照  5     5

                    实施例27

           TPS和TPP转基因西红柿植物的特性

在西红柿转化实验中使用的构建体：35S TPP、PC-TPS,PC-TPS 反义海藻糖酶、PC-TPP、E8-TPS、E8-TPP、E8TPS、E8反义海 藻糖酶。由质体蓝素启动子和35S启动子启动的TPP转基因植物具有在 其它植物中所观察到的类似表型：叶子变白，花形成减少或无花形成，导 致小的果实或无果实。少数35S-TPP转基因品系产生极大的果实。这些 果实呈现出果皮的增生。由质体蓝素启动子和35S启动子启动的TPS转 基因植物并不形成小披针形叶子。一些严重矮化的植物确实形成小而深绿 叶子。与对照植物相比，PC-TPS或PC反义海藻糖酶转基因植物确实形 成较小和较深绿色的叶子。

与其它作物中所观察到的相类似，35S或PC启动的TPS和TPP转 基因植物的颜色和叶缘有明显区别。

带有在果实特异的E8启动子控制下的TPS和TPP基因的植物与野 生型果实相比并未表现出表型上的差异。E8 TPS E8反义海藻糖酶转基 因植物产生具有黄皮和不完全成熟的异常果实。

                       实施例28

     反义海藻糖酶和/或TPS转基因马铃薯植物的表现 构建体：35S反义海藻糖酶(pMOG1027)和35S反义海藻糖酶Pat TPS (pMOG1027(845-11/22/28)。

用带有35S反义海藻糖酶构建体和一个潮霉素抗性标记基因的构建 体pMOG1027再转化Pat-TPS品系(卡那霉素抗性)，产生了同时表达35S 反义海藻糖酶和Pat-TPS的植物，即基因型pMOG1027(845-11)、 pMOG1027(845-22)和pMOG1027(845-28)。在体外诱导微块茎，并测 定微块茎的鲜重。对带有pMOG1027(pMOG845-11/22/28)的转基因品系 平均鲜重产量增加。获自pMOG1027转基因品系的微块茎的鲜重生物量 仅比野生型对照植物稍高。产生的植物生长于温室中，测定块茎产量 (图.33)。与对照品系相比，35S反义海藻糖酶或35S反义海藻糖酶和 Pat-TPS联合的转基因品系产生的块茎明显更多。淀粉测定表明在由较高 产量的品系所产生的块茎中淀粉含量并无差别(图34)。许多1027(845- 11/22/28)品系在土壤以上的叶的腋生芽之外产生块茎，表明所使用的构建 体对植物发育有显著影响。35S反义海藻糖酶转基因植物只是不在土壤 以上形成块茎。 构建体：Pat反义海藻糖酶(pMOG1028)和Pat反义海藻糖酶Pat TPS (pMOG1028(845-11/22/28))

用带有Pat反义海藻糖酶构建体和潮霉素标记基因的构建体 pMOG1028再转化Pat-TPS品系(卡那霉素抗性)，产生了同时表达反义 海藻糖酶和Pat-TPS的植物，即基因型pMOG1028(845-11)、 pMOG1028(845-22)和pMOG1028(845-28)。植物生长于温室中，测定 块茎产量(图.25)。与对照品系相比，许多pMOG1028转基因品系产生的 块茎明显更多。同时具有Pat-TPS和Pat反义海藻糖酶的单个转基因植 物的块茎产量从几乎不产生到类似或高于对照品系的块茎产量之间变化 (图.35)。 构建体：PC反义海藻糖酶(pMOG1092)

pMOG1092转基因植物生长于温室中，测定了块茎产量。与对照相 比，一些品系形成深绿色的叶子。与非转基因植物相比块茎产量显著增加 (图.36)。 构建体：PC反义海藻糖酶PC-TPS(pMOG1130)

pMOG1130转基因植物生长于温室中，测定块茎产量。几个转基因 品系具有小而深绿色的叶子且为严重矮化生长，表明植物用TPS转化时 观察到的表型的效果比反义海藻糖酶基因同时表达时更为严重(见实施例 21)。与对照植物相比，所产的块茎量在几乎没有至明显更高的产量之间 变化(图.37)。

                    实施例29

在烟草(N.tabacum)中马铃薯海藻糖酶cDNA的过量表达 构建体：de35S CaMV海藻糖酶(pMOG1078)

初始pMOG1078转基因烟草转化物具有与野生型烟草不同的表型， 一些转基因植物有深绿色的叶和更厚的叶(叶的形状不是披针形)，表明了 海藻糖酶基因的表达对植物代谢的影响。初始转化物自交的种子被播种并 在卡那霉素上选择。在S1代中表型以孟德尔方式分离。

                          保藏

下列保藏按布达佩斯条约进行。克隆于1997年4月21号保藏在真菌 菌种保藏中心(CBS)，Oosterstraat 1,P.O.Box 273,3740 AG Baarn, 荷兰，获得下列保藏号： 大肠杆菌    DH5alpha/pMOG1192    CBS 692.97

        DH5alpha/pMOG1240    CBS 693.97

        DH5alpha/pMOG1241    CBS 694.97

        DH5alpha/pMOG1242    CBS 695.97

    DH5alpha/pMOG1243    CBS 696.97

    DH5alpha/pMOG1244    CBS 697.97

    DH5alpha/pMOG1245    CBS 698.97 保藏的克隆： pMOG1192    带有插入多拷贝载体pGEM-T(Promega)中的向日葵

        (Helianthus annusis)TPS/TPP两分cDNA。 pMOG1240    带有插入pCRscript(Stratagene)中的烟草TPS

        “825”bp cDNA片段。 pMOG1241    带有插入pGEM-T(Promega)中的烟草TPS

        “840”bp的cDNA片段。 pMOG1242    带有插入pGEM-T(Promega)中的烟草TPS

        “630”bp的cDNA片段。 pMOG1243    带有插入pGEM-T(Promega)中的烟草TPP

        “543”bp的cDNA片段。 pMOG1244    带有插入pUC18质粒中的烟草TPP“723”bp的

        cDNA片段。 pMOG1245    带有插入pGEM-T(Promega)中的烟草TPP

        “447”bp的片段。 相关pMOG###和pVDH###克隆的清单 1．二元载体 pMOG23      带有NPTⅡ选择标记的二元载体(约10Kb) pMOG22      pMOG23的衍生物，NPTⅡ基因已被赋予潮霉素抗

        性的HPT-基因取代 pVDH275     从pMOG23衍生而来的二元载体，带有一个质体蓝素

        启动子-nos终止子的表达盒。 pMOG402     pMOG23的衍生物，已恢复在NPTⅡ基因中的一个

        点突变，在多位点接头中无KpnⅠ限制性位点存在。 pMOG800      pMOG402的衍生物，在多位点接头中带有恢复的

         KpnⅠ位点。 2．TPS/TPP表达构建体 pMOG799      35S-TPS-3′nos1

pMOG810  同上，带有潮霉素标记 pMOG845      Pat-TPS-3′PotpiⅡ

pMOG925  同上，带有潮霉素标记 pMOG851      35S-TPS-3′nos 35S-TPP(atg)2 pMOG1010     de 35S CaMV amv引导子TPP(gtg)PotPiⅡ

pMOG1142 同上，带有潮霉素标记 pMOG1093     质体蓝素-TPS-3′nos

pMOG1129 同上，带有潮霉素标记 pMOG1177     质体蓝素-TPS-3′PotPiⅡ 3′nos pVDH318      与pMOG1177相同

         功能上与pMOG1093相同 pMOG1124     质体蓝素-TPP(gtg)3′PotPiⅡ3′nos pVDH321      与pMOG1124相同 pMOG1128     Patatin TPP(gtg)3′PotPiⅡ pMOG1140     E8-TPS-3′nos pMOG1141     E8-TPP(gtg)-3′PotPiⅡ 3．海藻糖酶构建体 pMOG1028     Patatin反义海藻糖酶3′PotPiⅡ，潮霉素抗性标记 pMOG1078     de35S CaMV amv引导子海藻糖酶3′nos pMOG1090     de35S caMV amv引导子反义海藻糖酶3′nos

pMOG1027 同上，带有潮霉素标记 pMOG1092     质体蓝素-反义海藻糖酶-3′nos pMOG1130     质体蓝素-反义海藻糖酶-3′nos质体蓝素-TPS-3′

         nos pMOG1153     E8-TPS-3′nos E8-反义海藻糖酶-3′PotPiⅡ 1．除非另外注明，所有构建体均带有NPTⅡ选择性标记 2．使用了两种类型的TPP构建体，如在Goddijn等人(1997)植物生理 113,181中所述。

                  序列表 (1)一般信息   (ⅰ)申请人

(A)姓名：MOGEN International nv

(B)街道：Einsteinweg 97

(C)城市：Leiden

(E)国家：荷兰

(F)邮政编码(ZIP):2333CB

(G)电话：(0)71-5258282

(H)电传：(0)71-5221471   (ⅱ)发明名称：通过改变海藻糖-6-磷酸的水平来调节代谢   (ⅲ)序列数目：57   (ⅳ)计算机可读信息：

(A)介质类质：软盘

(B)计算机：IBM PC兼容机

(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS

(D)软件：Patentln Release#1.0,Version#1.25(EPO)   (ⅵ)在先申请数据：

(A)申请号：EP96.201.225.8

(B)递交日：1996年5月3日   (ⅵ)在先申请数据：

(A)申请号：EP96.202.128.3

(B)递交日：1996年7月26日   (ⅵ)在先申请数据：

(A)申请号：EP96.202.395.8

(B)递交日：1996年8月29日 (2)SEQ ID NO:1的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：1450个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：DNA(基因组)   (ⅲ)假设：非   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：21..1450 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:1的序列描述 ATAAAACTCT CCCCGGGACC ATG ACT ATG AGT CGT TTA GTC GTA GTA TCT       50

                  Met Thr Met Ser Arg Leu Val Val Val Ser

                    1               5                  10 AAC CGG ATT GCA CCA CCA GAC GAG CAC GCC GCC AGT GCC GGT GGC CTT     98 Asn Arg Ile Ala Pro Pro Asp Glu His Ala Ala Ser Ala Gly Gly Leu

             15                  20                  25 GCC GTT GGC ATA CTG GGG GCA CTG AAA GCC GCA GGC GGA CTG TGG TTT    146 Ala Val Gly Ile Leu Gly Ala Leu Lys Ala Ala Gly Gly Leu Trp Phe

         30                  35                  40 GGC TGG AGT GGT GAA ACA GGG AAT GAG GAT CAG CCG CTA AAA AAG GTG    194 Gly Trp Ser Gly Glu Thr Gly Asn Glu Asp Gln Pro Leu Lys Lys Val

     45                  50                  55 AAA AAA GGT AAC ATT ACG TGG GCC TCT TTT AAC CTC AGC GAA CAG GAC    242 Lys Lys Gly Asn Ile Thr Trp Ala Ser Phe Asn Leu Ser Glu Gln Asp

 60                  65                  70 CTT GAC GAA TAC TAC AAC CAA TTC TCC AAT GCC GTT CTC TGG CCC GCT    290 Leu Asp Glu Tyr Tyr Asn Gln Phe Ser Asn Ala Val Leu Trp Pro Ala  75                  80                  85                  90 TTT CAT TAT CGG CTC GAT CTG GTG CAA TTT CAG CGT CCT GCC TGG GAC    338 Phe His Tyr Arg Leu Asp Leu Val Gln Phe Gln Arg Pro Ala Trp Asp

             95                 100                 105 GGC TAT CTA CGC GTA AAT GCG TTG CTG GCA GAT AAA TTA CTG CCG CTG    386 Gly Tyr Leu Arg Val Asn Ala Leu Leu Ala Asp Lys Leu Leu Pro Leu

        110                 115                 120 TTG CAA GAC GAT GAC ATT ATC TGG ATC CAC GAT TAT CAC CTG TTG CCA     434 Leu Gln Asp Asp Asp Ile Ile Trp Ile His Asp Tyr His Leu Leu Pro

    125                 130                 135 TTT GCG CAT GAA TTA CGC AAA CGG GGA GTG AAT AAT CGC ATT GGT TTC     482 Phe Ala His Glu Leu Arg Lys Arg Gly Val Asn Asn Arg Ile Gly Phe

140                 145                 150 TTT CTG CAT ATT CCT TTC CCG ACA CCG GAA ATC TTC AAC GCG CTG CCG     530 Phe Leu His Ile Pro Phe Pro Thr Pro Glu Ile Phe Asn Ala Leu Pro 155                 160                 165                 170 ACA TAT GAC ACC TTG CTT GAA CAG CTT TGT GAT TAT GAT TTG CTG GGT     578 Thr Tyr Asp Thr Leu Leu Glu Gln Leu Cys Asp Tyr Asp Leu Leu Gly

            175                 180                 185 TTC CAG ACA GAA AAC GAT CGT CTG GCG TTC CTG GAT TGT CTT TCT AAC     626 Phe Gln Thr Glu Asn Asp Arg Leu Ala Phe Leu Asp Cys Leu Ser Asn

        190                 195                 200 CTG ACC CGC GTC ACG ACA CGT AGC GCA AAA AGC CAT ACA GCC TGG GGC     674 Leu Thr Arg Val Thr Thr Arg Ser Ala Lys Ser His Thr Ala Trp Gly

    205                 210                 215 AAA GCA TTT CGA ACA GAA GTC TAC CCG ATC GGC ATT GAA CCG AAA GAA     722 Lys Ala Phe Arg Thr Glu Val Tyr Pro Ile Gly Ile Glu Pro Lys Glu

220                 225                 230 ATA GCC AAA CAG GCT GCC GGG CCA CTG CCG CCA AAA CTG GCG CAA CTT     770 Ile Ala Lys Gln Ala Ala Gly Pro Leu Pro Pro Lys Leu Ala Gln Leu 235                 240                 245                 250 AAA GCG GAA CTG AAA AAC GTA CAA AAT ATC TTT TCT GTC GAA CGG CTG     818 Lys Ala Glu Leu Lys Asn Val Gln Asn Ile Phe Ser Val Glu Arg Leu

            255                 260                 265 GAT TAT TCC AAA GGT TTG CCA GAG CGT TTT CTC GCC TAT GAA GCG TTG     866 Asp Tyr Ser Lys Gly Leu Pro Glu Arg Phe Leu Ala Tyr Glu Ala Leu

        270                 275                 280 CTG GAA AAA TAT CCG CAG CAT CAT GGT AAA ATT CGT TAT ACC CAG ATT     914 Leu Glu Lys Tyr Pro Gln His His Gly Lys Ile Arg Tyr Thr Gln Ile 

    285                 290                 295 GCA CCA ACG TCG CGT GGT GAT GTG CAA GCC TAT CAG GAT ATT CGT CAT     962 Ala Pro Thr Ser Arg Gly Asp Val Gln Ala Tyr Gln Asp Ile Arg His

300                 305                 310 CAG CTC GAA AAT GAA GCT GGA CGA ATT AAT GGT AAA TAC GGG CAA TTA    1010 Gln Leu Glu Asn Glu Ala Gly Arg Ile Asn Gly Lys Tyr Gly Gln Leu 315                 320                 325                 330 GGC TGG ACG CCG CTT TAT TAT TTG AAT CAG CAT TTT GAC CGT AAA TTA    1058 Gly Trp Thr Pro Leu Tyr Tyr Leu Asn Gln His Phe Asp Arg Lys Leu

            335                 340                 345 CTG ATG AAA ATA TTC CGC TAC TCT GAC GTG GGC TTA GTG ACG CCA CTG    1106 Leu Met Lys Ile Phe Arg Tyr Ser Asp Val Gly Leu Val Thr Pro Leu

        350                 355                 360 CGT GAC GGG ATG AAC CTG GTA GCA AAA GAG TAT GTT GCT GCT CAG GAC    1154 Arg Asp Gly Met Asn Leu Val Ala Lys Glu Tyr Val Ala Ala Gln Asp

    365                 370                 375 CCA GCC AAT CCG GGC GTT CTT GTT CTT TCG CAA TTT GCG GGA GCG GCA    1202 Pro Ala Asn Pro Gly Val Leu Val Leu Ser Gln Phe Ala Gly Ala Ala

380                 385                 390 AAC GAG TTA ACG TCG GCG TTA ATT GTT AAC CCC TAC GAT CGT GAC GAA    1250 Asn Glu Leu Thr Ser Ala Leu Ile Val Asn Pro Tyr Asp Arg Asp Glu 395                 400                 405                 410 GTT GCA GCT GCG CTG GAT CGT GCA TTG ACT ATG TCG CTG GCG GAA CGT    1298 Val Ala Ala Ala Leu Asp Arg Ala Leu Thr Met Ser Leu Ala Glu Arg

            415                 420                 425 ATT TCC CGT CAT GCA GAA ATG CTG GAC GTT ATC GTG AAA AAC GAT ATT    1346 Ile Ser Arg His Ala Glu Met Leu Asp Val Ile Val Lys Asn Asp Ile

        430                 435                 440 AAC CAC TGG CAG GAG TGC TTC ATT AGC GAC CTA AAG CAG ATA GTT CCG    1394 Asn His Trp Gln Glu Cys Phe Ile Ser Asp Leu Lys Gln Ile Val Pro

    445                 450                 455 CGA AGC GCG GAA AGC CAG CAG CGC GAT AAA GTT GCT ACC TTT CCA AAG    1442 Arg Ser Ala Glu Ser Gln Gln Arg Asp Lys Val Ala Thr Phe Pro Lys

460                 465                 470 CTC TGC AG                                                         1450 Leu Cys 475 (2)SEQ ID NO:2的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：476个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:2的序列描述 Met Thr Met Ser Arg Leu Val Val Val Ser Asn Arg Ile Ala Pro Pro   1               5                  10                  15 Asp Glu His Ala Ala Ser Ala Gly Gly Leu Ala Val Gly Ile Leu Gly

         20                  25                  30 Ala Leu Lys Ala Ala Gly Gly Leu Trp Phe Gly Trp Ser Gly Glu Thr

     35                  40                  45 Gly Asn Glu Asp Gln Pro Leu Lys Lys Val Lys Lys Gly Asn Ile Thr

 50                  55                  60 Trp Ala Ser Phe Asn Leu Ser Glu Gln Asp Leu Asp Glu Tyr Tyr Asn  65                  70                  75                  80 Gln Phe Ser Asn Ala Val Leu Trp Pro Ala Phe His Tyr Arg Leu Asp

             85                  90                  95 Leu Val Gln Phe Gln Arg Pro Ala Trp Asp Gly Tyr Leu Arg Val Asn

        100                 105                 110 Ala Leu Leu Ala Asp Lys Leu Leu Pro Leu Leu Gln Asp Asp Asp Ile

    115                 120                 125 Ile Trp Ile His Asp Tyr His Leu Leu Pro Phe Ala His Glu Leu Arg

130                 135                 140 Lys Arg Gly Val Asn Asn Arg Ile Gly Phe Phe Leu His Ile Pro Phe 145                 150                 155                 160 Pro Thr Pro Glu Ile Phe Asn Ala Leu Pro Thr Tyr Asp Thr Leu Leu

            165                 170                 175 Glu Gln Leu Cys Asp Tyr Asp Leu Leu Gly Phe Gln Thr Glu Asn Asp

        180                 185                 190 Arg Leu Ala Phe Leu Asp Cys Leu Ser Asn Leu Thr Arg Val Thr Thr

    195                 200                 205 Arg Ser Ala Lys Ser His Thr Ala Trp Gly Lys Ala Phe Arg Thr Glu

210                 215                 220 Val Tyr Pro Ile Gly Ile Glu Pro Lys Glu Ile Ala Lys Gln Ala Ala 225                 230                 235                 240 Gly Pro Leu Pro Pro Lys Leu Ala Gln Leu Lys Ala Glu Leu Lys Asn

            245                 250                 255 Val Gln Asn Ile Phe Ser Val Glu Arg Leu Asp Tyr Ser Lys Gly Leu

        260                 265                 270 Pro Glu Arg Phe Leu Ala Tyr Glu Ala Leu Leu Glu Lys Tyr Pro Gln

    275                 280                 285 His His Gly Lys Ile Arg Tyr Thr Gln Ile Ala Pro Thr Ser Arg Gly

290                 295                 300 Asp Val Gln Ala Tyr Gln Asp Ile Arg His Gln Leu Glu Asn Glu Ala 305                 310                 315                 320 Gly Arg Ile Asn Gly Lys Tyr Gly Gln Leu Gly Trp Thr Pro Leu Tyr

            325                 330                 335 Tyr Leu Asn Gln His Phe Asp Arg Lys Leu Leu Met Lys Ile Phe Arg

        340                 345                 350 Tyr Ser Asp Val Gly Leu Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu

    355                 360                 365 Val Ala Lys Glu Tyr Val Ala Ala Gln Asp Pro Ala Asn Pro Gly Val

370                 375                 380 Leu Val Leu Ser Gln Phe Ala Gly Ala Ala Asn Glu Leu Thr Ser Ala 385                 390                 395                 400 Leu Ile Val Asn Pro Tyr Asp Arg Asp Glu Val Ala Ala Ala Leu Asp

            405                 410                 415 Arg Ala Leu Thr Met Ser Leu Ala Glu Arg Ile Ser Arg His Ala Glu

        420                 425                 430 Met Leu Asp Val Ile Val Lys Asn Asp Ile Asn His Trp Gln Glu Cys

    435                 440                 445 Phe Ile Ser Asp Leu Lys Gln Ile Val Pro Arg Ser Ala Glu Ser Gln

450                 455                 460 Gln Arg Asp Lys Val Ala Thr Phe Pro Lys Leu Cys 465                 470                 475 (2)SEQ ID NO:3的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：835个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：DNA(基因组)   (ⅲ)假设：非   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：18..818 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:3的序列描述 ATAAAACTCT CCCCGGG ATG ACA GAA CCG TTA ACC GAA ACC CCT GAA CTA        50

               Met Thr Glu Pro Leu Thr Glu Thr Pro Glu Leu

                 1               5                  10 TCC GCG AAA TAT GCC TGG TTT TTT GAT CTT GAT GGA ACG CTG GCG GAA       98 Ser Ala Lys Tyr Ala Trp Phe Phe Asp Leu Asp Gly Thr Leu Ala Glu

         15                  20                  25 ATC AAA CCG CAT CCC GAT CAG GTC GTC GTG CCT GAC AAT ATT CTG CAA     146 Ile Lys Pro His Pro Asp Gln Val Val Val Pro Asp Asn Ile Leu Gln

     30                  35                  40 GGA CTA CAG CTA CTG GCA ACC GCA AGT GAT GGT GCA TTG GCA TTG ATA     194 Gly Leu Gln Leu Leu Ala Thr Ala Ser Asp Gly Ala Leu Ala Leu Ile

 45                  50                  55 TCA GGG CGC TCA ATG GTG GAG CTT GAC GCA CTG GCA AAA CCT TAT CGC     242 Ser Gly Arg Ser Met Val Glu Leu Asp Ala Leu Ala Lys Pro Tyr Arg  60                  65                  70                  75 TTC CCG TTA GCG GGC GTG CAT GGG GCG GAG CGC CGT GAC ATC AAT GGT     290 Phe Pro Leu Ala Gly Val His Gly Ala Glu Arg Arg Asp Ile Asn Gly

             80                  85                  90 AAA ACA CAT ATC GTT CAT CTG CCG GAT GCG ATT GCG CGT GAT ATT AGC     338 Lys Thr His Ile Val His Leu Pro Asp Ala Ile Ala Arg Asp Ile Ser

         95                 100                 105 GTG CAA CTG CAT ACA GTC ATC GCT CAG TAT CCC GGC GCG GAG CTG GAG     386 Val Gln Leu His Thr Val Ile Ala Gln Tyr Pro Gly Ala Glu Leu Glu

    110                 115                 120 GCG AAA GGG ATG GCT TTT GCG CTG CAT TAT CGT CAG GCT CCG CAG CAT     434 Ala Lys Gly Met Ala Phe Ala Leu His Tyr Arg Gln Ala Pro Gln His

125                 130                 135 GAA GAC GCA TTA ATG ACA TTA GCG CAA CGT ATT ACT CAG ATC TGG CCA     482 Glu Asp Ala Leu Met Thr Leu Ala Gln Arg Ile Thr Gln Ile Trp Pro 140                 145                 150                 155 CAA ATG GCG TTA CAG CAG GGA AAG TGT GTT GTC GAG ATC AAA CCG AGA     530 Gln Met Ala Leu Gln Gln Gly Lys Cys Val Val Glu Ile Lys Pro Arg

            160                 165                 170 GGT ACC AGT AAA GGT GAG GCA ATT GCA GCT TTT ATG CAG GAA GCT CCC     578 Gly Thr Ser Lys Gly Glu Ala Ile Ala Ala Phe Met Gln Glu Ala Pro

        175                 180                 185 TTT ATC GGG CGA ACG CCC GTA TTT CTG GGC GAT GAT TTA ACC GAT GAA     626 Phe Ile Gly Arg Thr Pro Val Phe Leu Gly Asp Asp Leu Thr Asp Glu

    190                 195                 200 TCT GGC TTC GCA GTC GTT AAC CGA CTG GGC GGA ATG TCA GTA AAA ATT     674 Ser Gly Phe Ala Val Val Asn Arg Leu Gly Gly Met Ser Val Lys Ile 

205                 210                 215 GGC ACA GGT GCA ACT CAG GCA TCA TGG CGA CTG GCG GGT GTG CCG GAT     722 Gly Thr Gly Ala Thr Gln Ala Ser Trp Arg Leu Ala Gly Val Pro Asp 220                 225                 230                 235 GTC TGG AGC TGG CTT GAA ATG ATA ACC ACC GCA TTA CAA CAA AAA AGA     770 Val Trp Ser Trp Leu Glu Met Ile Thr Thr Ala Leu Gln Gln Lys Arg

            240                 245                 250 GAA AAT AAC AGG AGT GAT GAC TAT GAG TCG TTT AGT CGT AGT ATC TAA     818 Glu Asn Asn Arg Ser Asp Asp Tyr Glu Ser Phe Ser Arg Ser Ile  *

        255                 260                 265 CCGGATTGCA CCTGCAG 855

     270 (2)SEQ ID NO:4的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：272个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:4的序列描述 Met Thr Glu Pro Leu Thr Glu Thr Pro Glu Leu Ser Ala Lys Tyr Ala   1               5                  10                  15 Trp Phe Phe Asp Leu Asp Gly Thr Leu Ala Glu Ile Lys Pro His Pro

         20                  25                  30 Asp Gln Val Val Val Pro Asp Asn Ile Leu Gln Gly Leu Gln Leu Leu

     35                  40                  45    Ala Thr Ala Ser Asp Gly Ala Leu Ala Leu Ile Ser Gly Arg Ser Met

 50                  55                  60 Val Glu Leu Asp Ala Leu Ala Lys Pro Tyr Arg Phe Pro Leu Ala Gly  65                  70                  75                  80 Val His Gly Ala Glu Arg Arg Asp Ile Asn Gly Lys Thr His Ile Val

             85                  90                  95 His Leu Pro Asp Ala Ile Ala Arg Asp Ile Ser Val Gln Leu His Thr

        100                 105                 110 Val Ile Ala Gln Tyr Pro Gly Ala Glu Leu Glu Ala Lys Gly Met Ala

    115                 120                 125 Phe Ala Leu His Tyr Arg Gln Ala Pro Gln His Glu Asp Ala Leu Met

130                 135                 140 Thr Leu Ala Gln Arg Ile Thr Gln Ile Trp Pro Gln Met Ala Leu Gln 145                 150                 155                 160 Gln Gly Lys Cys Val Val Glu Ile Lys Pro Arg Gly Thr Ser Lys Gly

            165                 170                 175 Glu Ala Ile Ala Ala Phe Met Gln Glu Ala Pro Phe Ile Gly Arg Thr

        180                 185                 190 Pro Val Phe Leu Gly Asp Asp Leu Thr Asp Glu Ser Gly Phe Ala Val

    195                 200                 205 Val Asn Arg Leu Gly Gly Met Ser Val Lys Ile Gly Thr Gly Ala Thr

210                 215                 220 Gln Ala Ser Trp Arg Leu Ala Gly Val Pro Asp Val Trp Ser Trp Leu 225                 230                 235                 240 Glu Met Ile Thr Thr Ala Leu Gln Gln Lys Arg Glu Asn Asn Arg Ser

            245                 250                 255 Asp Asp Tyr Glu Ser Phe Ser Arg Ser Ile   *

        260                 265 (2)SEQ ID NO:5的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：27个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:5的序列描述 AAGCTTATGT TGCCATATAG AGTAGAT                                   27 (2)SEQ ID NO:6的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：29个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:6的序列描述 GTAGTTGCCA TGGTGCAAAT GTTCATATG                                 29 (2)SEQ ID NO:7的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：26个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:7的序列描述 GAYITIATIT GGRTICAYGA YTAYCA                              26 (2)SEQ ID NO:8的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：28个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:8的序列描述 TIGGITKITT YYTICAYAYI CCITTYCC                            28 (2)SEQ ID NO:9的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：22个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:9的序列描述 GYIACIARRT TCATICCRTC IC                                  22 (2)SEQ ID NO:10的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：743个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：人(Homo sapiens)   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：1..743

(D)其它信息：部分 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:10的序列描述 GAC GTG ATG TGG ATG CAC GAC TAC CAT TTG ATG GTG TTG CCT ACG TTC     48 Asp Val Met Trp Met His Asp Tyr His Leu Met Val Leu Pro Thr Phe   1               5                  10                  15 TTG AGG AGG CGG TTC AAT CGT TTG AGA ATG GGG TTT TTC CTT CAC AGT     96 Leu Arg Arg Arg Phe Asn Arg Leu Arg Met Gly Phe Phe Leu His Ser

         20                  25                  30 CCA TTT CCC TCA TCT GAG ATT TAC AGG ACA CTT CCT GTT AGA GAG GAA    144 Pro Phe Pro Ser Ser Glu Ile Tyr Arg Thr Leu Pro Val Arg Glu Glu

     35                  40                  45 ATA CTC AAG GCT TTG CTC TGT GCT GAC ATT GTT GGA TTC CAC ACT TTT    192 Ile Leu Lys Ala Leu Leu Cys Ala Asp Ile Val Gly Phe His Thr Phe

 50                  55                  60 GAC TAC GCG AGA CAC TTC CTC TCT TGT TGC AGT CGG ATG TTG GGT TTA    240 Asp Tyr Ala Arg His Phe Leu Ser Cys Cys Ser Arg Met Leu Gly Leu  65                  70                  75                  80 GAG TAT CAG TCT AAA AGA GGT TAT ATA GGG TTA GAA TAC TAT GGA CGG    288 Glu Tyr Gln Ser Lys Arg Gly Tyr Ile Gly Leu Glu Tyr Tyr Gly Arg

             85                  90                  95 ACA GTA GGC ATC AAG ATT ATG CCC GTC GGG ATA CAT ATG GGT CAT ATT    336 Thr Val Gly Ile Lys Ile Met Pro Val Gly Ile His Met Gly His Ile

        100                 105                 110 GAG TCC ATG AAG AAA CTT GCA GCG AAA GAG TTG ATG CTT AAG GCG CTA     384 Glu Ser Met Lys Lys Leu Ala Ala Lys Glu Leu Met Leu Lys Ala Leu 

    115                 120                 125 AAG CAG CAA TTT GAA GGG AAA ACT GTG TTG CTT GGT GCC GAT GAC CTG     432 Lys Gln Gln Phe Glu Gly Lys Thr Val Leu Leu Gly Ala Asp Asp Leu

130                 135                 140 GAT ATT TTC AAA GGT ATA AAC TTA AAG CTT CTA GCT ATG GAA CAG ATG     480 Asp Ile Phe Lys Gly Ile Asn Leu Lys Leu Leu Ala Met Glu Gln Met 145                 150                 155                 160 CTC AAA CAG CAC CCC AAG TGG CAA GGG CAG GCT GTG TTG GTC CAG ATT     528 Leu Lys Gln His Pro Lys Trp Gln Gly Gln Ala Val Leu Val Gln Ile

            165                 170                 175 GCA AAT CCT ACG AGG GGT AAA GGA GTA GAT TTT GAG GAA ATA CAG GCT     576 Ala Asn Pro Thr Arg Gly Lys Gly Val Asp Phe Glu Glu Ile Gln Ala

        180                 185                 190 GAG ATA TCG GAA AGC TGT AAG AGA ATC AAT AAG CAA TTC GGC AAG CCT     624 Glu Ile Ser Glu Ser Cys Lys Arg Ile Asn Lys Gln Phe Gly Lys Pro

    195                 200                 205 GGA TAT GAG CCT ATA GTT TAT ATT GAT AGG CCC GTG TCA AGC AGT GAA     672 Gly Tyr Glu Pro Ile Val Tyr Ile Asp ArG Pro Val Ser Ser Ser Glu

210                 215                 220 CGC ATG GCA TAT TAC AGT ATT GCA GAA TGT GTT GTT GTC ACG GCT GTG     720 Arg Met Ala Tyr Tyr Ser Ile Ala Glu Cys Val Val Val Thr Ala Val 225                 230                 235                 240 AGC GAC GGC ATG AAC TTC GTC TC                                      743 Ser Asp Gly Met Asn Phe Val

            245 (2)SEQ ID NO:11的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：247个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:11的序列描述 Asp Val Met Trp Met His Asp Tyr His Leu Met Val Leu Pro Thr Phe   1               5                  10                  15 Leu Arg Arg Arg Phe Asn Arg Leu Arg Met Gly Phe Phe Leu His Ser

         20                  25                  30 Pro Phe Pro Ser Ser Glu Ile Tyr Arg Thr Leu Pro Val Arg Glu Glu

     35                  40                  45 Ile Leu Lys Ala Leu Leu Cys Ala Asp Ile Val Gly Phe His Thr Phe

 50                  55                  60 Asp Tyr Ala Arg His Phe Leu Ser Cys Cys Ser Arg Met Leu Gly Leu  65                  70                  75                  80 Glu Tyr Gln Ser Lys Arg Gly Tyr Ile Gly Leu Glu Tyr Tyr Gly Arg

             85                  90                  95 Thr Val Gly Ile Lys Ile Met Pro Val Gly Ile His Met Gly His Ile

        100                 105                 110 Glu Ser Met Lys Lys Leu Ala Ala Lys Glu Leu Met Leu Lys Ala Leu

    115                 120                 125 Lys Gln Gln Phe Glu Gly Lys Thr Val Leu Leu Gly Ala Asp Asp Leu

130                 135                 140 Asp Ile Phe Lys Gly Ile Asn Leu Lys Leu Leu Ala Met Glu Gln Met 145                 150                 155                 160 Leu Lys Gln His Pro Lys Trp Gln Gly Gln Ala Val Leu Val Gln Ile

            165                 170                 175 Ala Asn Pro Thr Arg Gly Lys Gly Val Asp Phe Glu Glu Ile Gln Ala

        180                 185                 190 Glu Ile Ser Glu Ser Cys Lys Arg Ile Asn Lys Gln Phe Gly Lys Pro

    195                 200                 205 Gly Tyr Glu Pro Ile Val Tyr Ile Asp Arg Pro Val Ser Ser Ser Glu

210                 215                 220 Arg Met Ala Tyr Tyr Ser Ile Ala Glu Cys Val Val Val Thr Ala Val 225                 230                 235                 240 Ser Asp Gly Met Asn Phe Val

            245 (2)SEQ ID NO:12的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：395个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(Nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：1..395

(D)其它信息：部分 (ⅹⅰ) SE Q ID NO:12的序列描述 GCG AAA CCG GTG ATG AAA CTT TAC AGG GAA GCA ACT GAC GGA TCA TAT      48 Ala Lys Pro Val Met Lys Leu Tyr Arg Glu Ala Thr Asp Gly Ser Tyr   1               5                  10                  15 ATA GAA ACT AAA GAG AGT GCA TTA GTG TGG CAC CAT CAT GAT GCA GAC      96 Ile Glu Thr Lys Glu Ser Ala Leu Val Trp His His His Asp Ala Asp

         20                  25                  30 CCT GAC TTT GGC TCC TGC CAG GCA AAG GAA TTG TTG GAT CAT TTG GAA     144 Pro Asp Phe Gly Ser Cys Gln Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu

     35                  40                  45 AGC GTA CTT GCA AAT GAA CCT GCA GTT GTT AAG AGG GGC CAA CAT ATT     192 Ser Val Leu Ala Asn Glu Pro Ala Val Val Lys Arg Gly Gln His Ile

 50                  55                  60 GTT GAA GTC AAG CCA CAA GGT GTG ACC AAA GGA TTA GTT TCA GAG AAG     240 Val Glu Val Lys Pro Gln Gly Val Thr Lys Gly Leu Val Ser Glu Lys  65                  70                  75                  80 GTT CTC TCG ATG ATG GTT GAT AGT GGG AAA CCG CCC GAT TTT GTT ATG     288 Val Leu Ser Met Met Val Asp Ser Gly Lys Pro Pro Asp Phe Val Met

             85                  90                  95 TGC ATT GGA GAT GAT AGG TCA GAC GAA GAC ATG TTT GAG AGC ATA TTA     336 Cys Ile Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Glu Ser Ile Leu

        100                 105                 110 AGC ACC GTA TCC AGT CTG TCA GTC ACT GCT GCC CCT GAT GTC TTT GCC     384 Ser Thr Val Ser Ser Leu Ser Val Thr Ala Ala Pro Asp Val Phe Ala

    115                 120                 125 TGC ACC GTC GG                                                      395 Cys Thr Val

130 (2)SEQ ID NO:13的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：131个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:13的序列描述 Ala Lys Pro Val Met Lys Leu Tyr Arg Glu Ala Thr Asp Gly Ser Tyr   1               5                  10                  15 Ile Glu Thr Lys Glu Ser Ala Leu Val Trp His His His Asp Ala Asp

         20                  25                  30 Pro Asp Phe Gly Ser Cys Gln Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu

     35                  40                  45 Ser Val Leu Ala Asn Glu Pro Ala Val Val Lys Arg Gly Gln His Ile

 50                  55                  60 Val Glu Val Lys Pro Gln Gly Val Thr Lys Gly Leu Val Ser Glu Lys  65                  70                  75                  80 Val Leu Ser Met Met Val Asp Ser Gly Lys Pro Pro Asp Fhe Val Met

             85                  90                  95 Cys Ile Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Glu Ser Ile Leu 

        100                 105                 110 Ser Thr Val Ser Ser Leu Ser Val Thr Ala Ala Pro Asp Val Phe Ala

    115                 120                 125 Cys Thr Val

130 (2)SEQ ID NO:14的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：491个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(Nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：1..491

(D)其它信息：部分 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:14的序列描述 GGG CTG TCG GCG GAA CAC GGC TAT TTC TTG AGG ACG AGT CAA GAT GAA      48 Gly Leu Ser Ala Glu His Gly Tyr Phe Leu Arg Thr Ser Gln Asp Glu   1               5                  10                  15 GAA TGG GAA ACA TGT GTA CCA CCA GTG GAA TGT TGT TGG AAA GAA ATA      96 Glu Trp Glu Thr Cys Val Pro Pro Val Glu Cys Cys Trp Lys Glu Ile

         20                  25                  30 GCT GAG CCT GTT ATG CAA CTT TAC ACT GAG ACT ACT GAT GGA TCA GTT     144 Ala Glu Pro Val Met Gln Leu Tyr Thr Glu Thr Thr Asp Gly Ser Val

     35                  40                  45 ATT GAA GAT AAG GAA ACA TCA ATG GTC TGG TCT TAC GAG GAT GCG GAT     192 Ile Glu Asp Lys Glu Thr Ser Met Val Trp Ser Tyr Glu Asp Ala Asp

 50                  55                  60 CCT GAT TTT GGA TCA TGT CAG GCT AAG GAA CTT CTT GAT CAC CTA GAA     240 Pro Asp Phe Gly Ser Cys Gln Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu  65                  70                  75                  80 AGT GTA CTA GCT AAT GAA CCG GTC ACT GTC AGG AGT GGA CAG AAT ATA     288 Ser Val Leu Ala Asn Glu Pro Val Thr Val Arg Ser Gly Gln Asn Ile

             85                  90                  95 GTG GAA GTT AAG CCC CAG GGT GTA TCC AAA GGG CTT GTT GCC AAG CGC     336 Val Glu Val Lys Pro Gln Gly Val Ser Lys Gly Leu Val Ala Lys Arg

        100                 105                 110 CTG CTT TCC GCA ATG CAA GAG AAA GGA ATG TCA CCA GAT TTT GTC CTT     384 Leu Leu Ser Ala Met Gln Glu Lys Gly Met Ser Pro Asp Phe Val Leu

    115                 120                 125 TGC ATA GGA GAT GAC CGA TCG GAT GAA GAC ATG TTC GAG GTG ATC ATG     432 Cys Ile Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Glu Val Ile Met

130                 135                 140 AGC TCG ATG TCT GGC CCG TCC ATG GCT CCA ACA GCT GAA GTC TTT GCC      480 Ser Ser Met Ser Gly Pro Ser Met Ala Pro Thr Ala Glu Val Phe Ala 145                 150                 155                 160 TGC ACC GTC GG                                                       491 Cys Thr Val (2)SEQ ID NO:15的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：163个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:15的序列描述 Gly Leu Ser Ala Glu His Gly Tyr Phe Leu Arg Thr Ser Gln Asp Glu   1               5                  10                  15 Glu Trp Glu Thr Cys Val Pro Pro Val Glu Cys Cys Trp Lys Glu Ile

         20                  25                  30 Ala Glu Pro Val Met Gln Leu Tyr Thr Glu Thr Thr Asp Gly Ser Val

     35                  40                  45 Ile Glu Asp Lys Glu Thr Ser Met Val Trp Ser Tyr Glu Asp Ala Asp

 50                  55                  60 Pro Asp Phe Gly Ser Cys Gln Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu  65                  70                  75                  80 Ser Val Leu Ala Asn Glu Pro Val Thr Val Arg Ser Gly Gln Asn Ile

             85                  90                  95 Val Glu Val Lys Pro Gln Gly Val Ser Lys Gly Leu Val Ala Lys Arg

        100                 105                 110 Leu Leu Ser Ala Met Gln Glu Lys Gly Met Ser Pro Asp Phe Val Leu

    115                 120                 125 Cys Ile Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Glu Val Ile Met

130                 135                 140 Ser Ser Met Ser Gly Pro Ser Met Ala Pro Thr Ala Glu Val Phe Ala 145                 150                 155                 160 Cys Thr Val (2)SEQ ID NO:16的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：361个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:16的序列描述 TTTGATTATG ATGGGACGCT GCTGTCGGAG GAGAGTGTGG ACAAAACCCC GAGTGAAGAT    60 GACATCTCAA TTCTGAATGG TTTATGCAGT GATCCAAAGA ACGTAGTCTT TATCGTGAGT   120 GGCAGAGGAA AGGATACACT TAGCAAGTGG TTCTCTCCGT GTCCGAGACT CGGCCTATCA   180 GCAGAACATG GATATTTCAC TAGGTGGAGT AAGGATTCCG AGTGGGAATC TCGTCCATAG   240 CTGCAGACCT TGACTGGAAA AAAATAGTGT TGCCTATTAT GGAGCGCTAC ACAGAGCACA   300 GATGGTTCGT CGATAGAACA GAAGGAAACC TCGTGTTGGC TCATCAAATG CTGGCCCCGA   360 A                                                                   361 (2)SEQ ID NO:17的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：118个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:17的序列描述 GGAAACCCAC AGGATGTAAG CAAAGTTTTA GTTTTTGAGA TCTCTTGGCA TCAAGCAAAG     60 TAGAGGGAAG TCACCCGATT CGTGCTGTGC GTAGGGATGA CAGATCGGAC GACTTAGA      118 (2)SEQ ID NO:18的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：417个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:18的序列描述 TTGTGGCCGA TGTTCCACTA CATGTTGCCG TTCTCACCTG ACCATGGAGG CCGCTTTGAT    60 CGCTCTATGT GGGAAGCATA TGTTTCTGCC AACAAGTTGT TTTCACAAAA AGTAGTTGAG   120 GTTCTTAATC CTGAGGATGA CTTTGTCTGG ATTCATGATT ATCATTTGAT GGTGTTGCCA   180 ACGTTCTTGA GGAGGCGGTT CAATCGTTTG AGAATGGGGT TTTTCCTTCA CAGTCCATTC   240 CTTCATCTGA GATTTACAGG ACACTTCCTG TTAGAGAGGA AATACTCAAG GCTTTGCTCT   300 GTGCTGACAT TGTTGGATTC CACACTTTTG ACTACGCGAG ACACTTCCTC TCTTGTTGCA   360 GTCGATTTTG GGTAGAGTAC AGTCTAAAAA AAGTTATATT GGGTTAAAAT ACTATGG      417 (2)SEQ ID NO:19的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：411个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:19的序列描述 GGGTCATATT GATCCATGAA GAAATTGCAG CGAAAGAGTG ATGCTTTAAT GCGTAAAGCA    60 GCAATTTGAA GGGAAAACTG TGTTGTTAGG TGCCGATGAC CTGGATATTT TCAAAGGTAT   120 GAACTTAAAG CTTCTAGCTA TGGAACAGAT GCTCAAACAT CACCCCAAGT GGCAAGGGCA   180 GGCTGTGTTG GTCCAAGATT GCAAATCCTA CGAGGGGTAA AGGAGTAGAT TTTGACGAAA   240 TACGGCTGAG ACATCGGAAA GCTGTAAGAG AATCAATAAG CAATTCGGCA AGCCTGGATA   300 TGAGCCTATA GTTTATATTG ATAGGCCCGT GTCAAGCAGT GAACGCATGG CATATTACAG   360 TATTGCAGGA TGTGTTGTGG TCACGCTGTG AGCGATGGCA TGAATCTGTT C            411 (2)SEQ ID NO:20的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：405个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:20的序列描述 TGGGGTGGTT CCTGCATACG CCGTTTCCTT CTTCTGAGAT ATATAAAACT TTGCCTATTC      60 GCGAAAGATC TTACAGCTCT CTTGAATTCA ATTTGATTGG GTTCCACACT TTTGACTATG     120 CAGGCACTTC CTCTCGTGTT GCAGTCGGAT GTTAGGTATT TCTTATGATC AAAAAGGGGT     180 TACATAGGCC TCGATATTAT GGCAGGACTG TAATATAAAA ATTCTGCCAG CGGGTATTCA     240 TATGGGGCAG CTTCAGCAAG TCTTGAGTCT TCCTGAAACG GAGGCAAAAT CTCGGAACTC     300 GTGCAGCATT TAATCATCAG GGGGAGGACA TTGTTGCTGG GATTGATGAC TGGACATATT     360 TAAAGGCTCA TTTGAATTTA TTACCATGGA ACAACTCTAT TGCAC                     405 (2)SEQ ID NO:21的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：427个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:21的序列描述 ATCATATGGG GCAGCTTCAG CAATCTTGAT CTTCCTGAAA CGGAGGCAAA AGTCTTCGGA    60 ACTCGGCAGC AGTTTAATCA TCAGGGGAGG ACATTGTTGC TGGGAGTTGA TGACATGGAC   120 ATATTTAAAG GCATCAGTTT GAAGTTATTA GCAATGGAAC AACTTCTATT GCAGCACCCG   180 GAGAAGCAGG GGAAGGTTGT TTTGGTGCAG ATAGCCAATC CTGCTAGAGG CAAAGGAAAA   240 GATGTCAAAG AAGTGCAGGA AGAAACTCAT TGACGGTGAA GCGAATTAAT GAAGCATTTG   300 GAAGACCTGG GTACGAACCA GTTATCTTGA TTGATAAGCC ACTAAAGTTT TATGAAAGGA   360 TTGCTTATTA TGTTGTTGCA GAGTGTTGCC TAGTCACTGC TGTCAGCGAT GGCATGAACC   420 TCGTCTC                                                             427 (2)SEQ ID NO:22的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：315个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:22的序列描述 GATGTGGATG CATGACTACC AATCCAAGAG GGGGTATATT GGTCTTGACT ATTATGGTAA    60 ACTGTGACCA TTAAAATCCT TCCAGTTGGT ATTCACATGG GACAACTCCA AAATGTTATG   120 TCACTACAGA CACGGGAAAG AAAGCAAAGG AGTTGAAAGA AAAATATGAG GGGAAAATTG   180 TGATGTTAGG TATTGATGAT ATGGACATGT TTAAAGGAAT TGGTCTAAAG TTTCTGGCAA   240 TGGGGAGGCT TCTAGATGAA AACCCTGTCT TGAGGGGTAA AGTGGTATTG GTTCAATCAC   300 CAGGCCTGGA AATTA                                                    315 (2)SEQ ID NO:23的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：352个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：烟草(nicotiana tabacum)

(B)种类：Samsun NN

(F)组织类型：叶 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:23的序列描述 AGAAGTAAAG GGAGTGAGTC CCCGAGGTTC AAAAAGAGGT CAACAGAATT GCAGTGAAAT    60 TAATAAAAAA TATGGCAAAC CGGGGTACAA GCCGATTGTT TGTATCAATG GTCCAGTTTC   120 GACACAAGAC AAGATTGCAC ATTATGCGGT CTTGAGTGTG TTGTTGTTAA TGCTGTTAGA   180 GATGGGATGA ACTTGGTGCC TTATGAGTAT ACGGTCTTTA GGCAGGGCAG CGATAATTTG   240 GATAAGGCCT TGCAGCTAGA TGGTCCTACT GCTTCCAGAA AGAGTGTGAT TATTGTCTTG   300 AATTCGTTGG GTGCTCGCCA TCTTTAGTGG CGCCATCCGC GTCAACCCCT GG           352 (2)SEQ ID NO:24的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：2640个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：向日葵(Helianthus annuus)

(F)组织类型：叶   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：171..2508   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：不定

(B)位置：置换(2141..2151,“caatnnntta”)   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：不定

(B)位置：置换(2237.2243,“actnaaa”)   (ⅹⅰ)SE Q ID NO:24的序列描述 GGATCCTGCG GTTTCATCAC ACAATATGAT ACTGTTACAT CTGATGCCCC TTCAGATGTC    60 CCAAATAGGT TGATTGTCGT ATCGAATCAG TTACCCATAA TCGCTAGGCT AAGACTAACG   120 ACAATGGAGG GTCCTTTTGG GATTTCACTT GGGACGAGAG TTCGATTTAC ATG CAC      176

                                                   Met His

                                                     1 ATC AAA GAT GCA TTA CCC GCA GCC GTT GAG GTT TTC TAT GTT GGC GCA     224 Ile Lys Asp Ala Leu Pro Ala Ala Val Glu Val Phe Tyr Val Gly Ala

      5                  10                  15 CTA AGG GCT GAC GTT GGC CCT ACC GAA CAA GAT GAC GTG TCA AAG ACA     272 Leu Arg Ala Asp Val Gly Pro Thr Glu Gln Asp Asp Val Ser Lys Thr

 20                  25                  30 TTG CTC GAT AGG TTT AAT TGC GTT GCG GTT TTT GTC CCT ACT TCA AAA     320 Leu Leu Asp Arg Phe Asn Cys Val Ala Val Phe Val Pro Thr Ser Lys  35                  40                  45                  50 TGG GAC CAA TAT TAT CAC TGC TTT TGT AAG CAG TAT TTG TGG CCG ATA     368 Trp Asp Gln Tyr Tyr His Cys Phe Cys Lys Gln Tyr Leu Trp Pro Ile

             55                  60                  65 TTT CAT TAC AAG GTT CCC GCT TCT GAC GTC AAG AGT GTC CCG AAT AGT     416 Phe His Tyr Lys Val Pro Ala Ser Asp Val Lys Ser Val Pro Asn Ser

         70                  75                  80 CGG GAT TCA TGG AAC GCT TAT GTT CAC GTG AAC AAA GAG TTT TCC CAG     464 Arg Asp Ser Trp Asn Ala Tyr Val His Val Asn Lys Glu Phe Ser Gln

     85                  90                  95 AAG GTG ATG GAG GCA GTA ACC AAT GCT AGC AAT TAT GTA TGG ATA CAT     512 Lys Val Met Glu Ala Val Thr Asn Ala Ser Asn Tyr Val Trp Ile His

100                 105                 110 GAC TAC CAT TTA ATG ACG CTA CCG ACT TTC TTG AGG CGG GAT TTT TGT     560 Asp Tyr Mis Leu Met Thr Leu Pro Thr Phe Leu Arg Arg Asp Phe Cys 115                 120                 125                 130 CGT TTT AAA ATC GGT TTT TTT CTG CAT AGC CCG TTT CCT TCC TCG GAG     608 Arg Phe Lys Ile Gly Phe Phe Leu His Ser Pro Phe Pro Ser Ser Glu

            135                 140                 145 GTT TAC AAG ACC CTA CCA ATG AGA AAC GAG CTC TTG AAG GGT CTG TTA     656 Val Tyr Lys Thr Leu Pro Met Arg Asn Glu Leu Leu Lys Gly Leu Leu

        150                 155                 160 AAT GCT GAT CTT ATC GGG TTC CAT ACA TAC GAT TAT GCC CGT CAT TTT     704 Asn Ala Asp Leu Ile Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg His Phe

    165                 170                 175 CTA ACG TGT TGT AGT CGA ATG TTT GGT TTG GAT CAT CAG TTG AAA AGG     752 Leu Thr Cys Cys Ser Arg Met Phe Gly Leu Asp His Gln Leu Lys Arg

180                 185                 190 GGG TAC ATT TTC TTG GAA TAT AAT GGA AGG AGC ATT GAG ATC AAG ATA     800 Gly Tyr Ile Phe Leu Glu Tyr Asn Gly ArG Ser Ile Glu Ile Lys Ile 195                 200                 205                 210 AAG GCG AGC GGG ATT CAT GTT GGT CGA ATG GAG TCG TAC TTG AGT CAG     848 Lys Ala Ser Gly Ile His Val Gly Arg Met Glu Ser Tyr Leu Ser Gln

            215                 220                 225 CCC GAT ACA AGA TTA CAA GTT CAA GAA CTA AAA AAA CGT TTC GAA GGG     896 Pro Asp Thr Arg Leu Gln Val Gln Glu Leu Lys Lys Arg Phe Glu Gly

        230                 235                 240 AAA ATC GTG CTA CTT GGA GTT GAT GAT TTG GAT ATA TTC AAA GGT GTG     944 Lys Ile Val Leu Leu Gly Val Asp Asp Leu Asp Ile Phe Lys Gly Val

    245                 250                 255 AAC TTC AAG GTT TTA GCG TTG GAG AAG TTA CTT AAA TCA CAC CCG AGT     992 Asn Phe Lys Val Leu Ala Leu Glu Lys Leu Leu Lys Ser His Pro Ser

260                 265                 270 TGG CAA GGG CGT GTG GTT TTG GTG CAA ATC TTG AAT CCC GCT CGC GCG    1040 Trp Gln Gly Arg Val Val Leu Val Gln Ile Leu Asn Pro Ala Arg Ala 275                 280                 285                 290 CGT TGC CAA GAC GTC GAT GAG ATC AAT GCC GAG ATA AGA ACA GTC TGT    1088 Arg Cys Gln Asp Val Asp Glu Ile Asn Ala Glu Ile Arg Thr Val Cys

            295                 300                 305 GAA AGA ATC AAT AAC GAA CTG GGA AGC CCG GGA TAC CAG CCC GTT GTG    1136 Glu Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Pro Val Val

        310                 315                 320 TTA ATT GAT GGG CCC GTT TCG TTA AGT GAA AAA GCT GCT TAT TAT GCT    1184 Leu Ile Asp Gly Pro Val Ser Leu Ser Glu Lys Ala Ala Tyr Tyr Ala

    325                 330                 335 ATC GCC GAT ATG GCA ATT GTT ACA CCG TTA CGT GAC GGC ATG AAT CTT    1232 Ile Ala Asp Met Ala Ile Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu

340                 345                 350 ATC CCG TAC GAG TAC GTC GTT TCC CGA CAA AGT GTT AAT GAC CCA AAT    1280 Ile Pro Tyr Glu Tyr Val Val Ser Arg Gln Ser Val Asn Asp Pro Asn 355                 360                 365                 370 CCC AAT ACT CCA AAA AAG AGC ATG CTA GTG GTC TCC GAG TTC ATC GGG    1328 Pro Asn Thr Pro Lys Lys Ser Met Leu Val Val Ser Glu Phe Ile Gly

            375                 380                 385 TGT TCA CTA TCT TTA ACC GGG GCC ATA CGG GTC AAC CCA TGG GAT GAG    1376 Cys Ser Leu Ser Leu Thr Gly Ala Ile Arg Val Asn Pro Trp Asp Glu

        390                 395                 400 TTG GAG ACA GCA GAA GCA TTA TAC GAC GCA CTC ATG GCT CCT GAT GAC    1424 Leu Glu Thr Ala Glu Ala Leu Tyr Asp Ala Leu Met Ala Pro Asp Asp

    405                 410                 415 CAT AAA GAA ACC GCC CAC ATG AAA CAG TAT CAA TAC ATT ATC TCC CAT    1472 His Lys Glu Thr Ala His Met Lys Gln Tyr Gln Tyr Ile Ile Ser His

420                 425                 430 GAT GTA GCT AAC TGG GCT CGT AGC TTC TTT CAA GAT TTA GAG CAA GCG    1520 Asp Val Ala Asn Trp Ala Arg Ser Phe Phe Gln Asp Leu Glu Gln Ala 435                 440                 445                 450 TGC ATC GAT CAT TCT CGT AAA CGA TGC ATG AAT TTA GGA TTT GGG TTA    1568 Cys Ile Asp His Ser Arg Lys Arg Cys Met Asn Leu Gly Phe Gly Leu

            455                 460                 465 GAT ACT AGA GTC GTT CTT TTT GAT GAG AAG TTT AGC AAG TTG GAT ATA    1616 Asp Thr ArG Val Val Leu Phe Asp Glu Lys Phe Ser Lys Leu Asp Ile

        470                 475                 480 GAT GTC TTG GAG AAT GCT TAT TCC ATG GCT CAA AAT CGG GCC ATA CTT    1664 Asp Val Leu Glu Asn Ala Tyr Ser Met Ala Gln Asn Arg Ala Ile Leu

    485                 490                 495 TTG GAC TAT GAC GGC ACT GTT ACT CCA TCT ATC AGT AAA TCT CCA ACT    1712 Leu Asp Tyr Asp Gly Thr Val Thr Pro Ser Ile Ser Lys Ser Pro Thr

500                 505                 510 GAA GCT GTT ATC TCC ATG ATC AAC AAA CTG TGC AAT GAT CCA AAG AAC    1760 Glu Ala Val Ile Ser Met Ile Asn Lys Leu Cys Asn Asp Pro Lys Asn 515                 520                 525                 530 ATG GTG TTC ATC GTT AGT GGA CGC AGT AGA GAA AAT CTT GGC AGT TGG    1808 Met Val Phe Ile Val Ser Gly Arg Ser Arg Glu Asn Leu Gly Ser Trp

            535                 540                 545 TTC GGC GCG TGT GAG AAA CCC GCC ATT GCA GCT GAG CAC GGA TAC TTT    1856 Phe Gly Ala Cys Glu Lys Pro Ala Ile Ala Ala Glu His Gly Tyr Phe

        550                 555                 560 ATA AGG TGG GCG GGT GAT CAA GAA TGG GAA ACG TGC GCA CGT GAG AAT    1904 Ile Arg Trp Ala Gly Asp Gln Glu Trp Glu Thr Cys Ala Arg Glu Asn

    565                 570                 575 AAT GTC GGG TGG ATG GAA ATG GCT GAG CCG GTT ATG AAT CTT TAT ACA    1952 Asn Val Gly Trp Met Glu Met Ala Glu Pro Val Met Asn Leu Tyr Thr

580                 585                 590 GAA ACT ACT GAC GGT TCG TAT ATT GAA AAG AAA GAA ACT GCA ATG GTT    2000 Glu Thr Thr Asp Gly Ser Tyr Ile Glu Lys Lys Glu Thr Ala Met Val 595                 600                 605                 610 TGG CAC TAT GAA GAT GCT GAT AAA GAT CTT GGG TTG GAG CAG GCT AAG    2048 Trp His Tyr Glu Asp Ala Asp Lys Asp Leu Gly Leu Glu Gln Ala Lys

            615                 620                 625 GAA CTG TTG GAC CAT CTT GAA AAC GTG CTC GCT AAT GAG CCC GTT GAA    2096 Glu Leu Leu Asp His Leu Glu Asn Val Leu Ala Asn Glu Pro Val Glu

        630                 635                 640 GTG AAA CGA GGT CAA TAC ATT GTA GAA GTT AAA CCA CAG GTA CCC CAT    2144 Val Lys Arg Gly Gln Tyr Ile Val Glu Val Lys Pro Gln Val Pro His

    645                 650                 655 GGG TTA CCT TCT TGT TAT GAC ATT CAT AGG CAC AGA TTT GTA GAA TCT    2192 Gly Leu Pro Ser Cys Tyr Asp Ile His Arg His Arg Phe Val Glu Ser

660                 665                 670 TTT AAC TTA AAT TTC TTT AAA TAT GAA TGC AAT TAT AGG GGG TCA CTG    2240 Phe Asn Leu Asn Phe Phe Lys Tyr Glu Cys Asn Tyr Arg Gly Ser Leu 675                 680                 685                 690 AAA GGT ATA GTT GCA GAG AAG ATT TTT GCG TTC ATG GCT GAA AAG GGA    2288 Lys Gly Ile Val Ala Glu Lys Ile Phe Ala Phe Met Ala Glu Lys Gly

            695                 700                 705 AAA CAG GCT GAT TTC GTG TTG AGC GTT GGA GAT GAT AGA AGT GAT GAA    2336 Lys Gln Ala Asp Phe Val Leu Ser Val Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu

        710                 715                 720 GAC ATG TTT GTG GCC ATT GGG GAT GGA ATA AAA AAG GGT CGG ATA ACT    2384 Asp Met Phe Val Ala Ile Gly Asp Gly Ile Lys Lys Gly Arg Ile Thr

    725                 730                 735 AAC AAC AAT TCA GTG TTT ACA TGC GTA GTG GGA GAG AAA CCG AGT GCA    2432 Asn Asn Asn Ser Val Phe Thr Cys Val Val Gly Glu Lys Pro Ser Ala

740                 745                 750 GCT GAG TAC TTT TTA GAC GAG ACG AAA GAT GTT TCA ATG ATG CTC GAG    2480 Ala Glu Tyr Phe Leu Asp Glu Thr Lys Asp Val Ser Met Met Leu Glu 755                 760                 765                 770 AAG CTC GGG TGT CTC AGC AAC CAA GGA T GATGATCCGG AAGCTTCTCG        2528 Lys Leu Gly Cys Leu Ser Asn Gln Gly

            775 TGATCTTTAT GAGTTAAAAG TTTTCGACTT TTTCTTCATC AAGATTCATG GGAAAGTTGT  2588 TCAATATGAA CTTGTGTTTC TTGGTTCTGG ATTTTAGGGA GTCTATGGAT CC          2640 (2)SEQ ID NO:25的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：779个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:25的序列描述 Met His Ile Lys Asp Ala Leu Pro Ala Ala Val Glu Val Phe Tyr Val   1               5                  10                  15 Gly Ala Leu Arg Ala Asp Val Gly Pro Thr Glu Gln Asp Asp Val Ser

         20                  25                  30 Lys Thr Leu Leu Asp Arg Phe Asn Cys Val Ala Val Phe Val Pro Thr

     35                  40                  45 Ser Lys Trp Asp Gln Tyr Tyr His Cys Phe Cys Lys Gln Tyr Leu Trp

 50                  55                  60 Pro Ile Phe His Tyr Lys Val Pro Ala Ser Asp Val Lys Ser Val Pro  65                  70                  75                  80 Asn Ser Arg Asp Ser Trp Asn Ala Tyr Val His Val Asn Lys Glu Phe

             85                  90                  95 Ser Gln Lys Val Met Glu Ala Val Thr Asn Ala Ser Asn Tyr Val Trp

        100                 105                 110 Ile His Asp Tyr His Leu Met Thr Leu Pro Thr Phe Leu Arg Arg Asp

    115                 120                 125 Phe Cys Arg Phe Lys Ile Gly Phe Phe Leu His Ser Pro Phe Pro Ser

130                 135                 140 Ser Glu Val Tyr Lys Thr Leu Pro Met Arg Asn Glu Leu Leu Lys Gly 145                 150                 155                 160 Leu Leu Asn Ala Asp Leu Ile Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg

            165                 170                 175 His Phe Leu Thr Cys Cys Ser Arg Met Phe Gly Leu Asp His Gln Leu

        180                 185                 190 Lys Arg Gly Tyr Ile Phe Leu Glu Tyr Asn Gly Arg Ser Ile Glu Ile

    195                 200                 205 Lys Ile Lys Ala Ser Gly Ile His Val Gly Arg Met Glu Ser Tyr Leu

210                 215                 220 Ser Gln Pro Asp Thr Arg Leu Gln Val Gln Glu Leu Lys Lys Arg Phe 225                 230                 235                 240 Glu Gly Lys Ile Val Leu Leu Gly Val Asp Asp Leu Asp Ile Phe Lys

            245                 250                 255 Gly Val Asn Phe Lys Val Leu Ala Leu Glu Lys Leu Leu Lys Ser His

        260                 265                 270 Pro Ser Trp Gln Gly Arg Val Val Leu Val Gln Ile Leu Asn Pro Ala

    275                 280                 285 Arg Ala Arg Cys Gln Asp Val Asp Glu Ile Asn Ala Glu Ile Arg Thr

290                 295                 300 Val Cys Glu Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Pro 305                 310                 315                 320 Val Val Leu Ile Asp Gly Pro Val Ser Leu Ser Glu Lys Ala Ala Tyr

            325                 330                 335 Tyr Ala Ile Ala Asp Met Ala Ile Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met

        340                 345                 350 Asn Leu Ile Pro Tyr Glu Tyr Val Val Ser Arg Gln Ser Val Asn Asp

    355                 360                 365 Pro Asn Pro Asn Thr Pro Lys Lys Ser Met Leu Val Val Ser Glu Phe

370                 375                 380 Ile Gly Cys Ser Leu Ser Leu Thr Gly Ala Ile Arg Val Asn Pro Trp 385                 390                 395                 400 Asp Glu Leu Glu Thr Ala Glu Ala Leu Tyr Asp Ala Leu Met Ala Pro

            405                 410                 415 Asp Asp His Lys Glu Thr Ala His Met Lys Gln Tyr Gln Tyr Ile Ile

        420                 425                 430 Ser His Asp Val Ala Asn Trp Ala Arg Ser Phe Phe Gln Asp Leu Glu

    435                 440                 445 Gln Ala Cys Ile Asp His Ser Arg Lys Arg Cys Met Asn Leu Gly Phe

450                 455                 460 Gly Leu Asp Thr Arg Val Val Leu Phe Asp Glu Lys Phe Ser Lys Leu 465                 470                 475                 480 Asp Ile Asp Val Leu Glu Asn Ala Tyr Ser Met Ala Gln Asn Arg Ala

            485                 490                 495 Ile Leu Leu Asp Tyr Asp Gly Thr Val Thr Pro Ser Ile Ser Lys Ser

        500                 505                 510 Pro Thr Glu Ala Val Ile Ser Met Ile Asn Lys Leu Cys Asn Asp Pro

    515                 520                 525 Lys Asn Met Val Phe Ile Val Ser Gly Arg Ser Arg Glu Asn Leu Gly

530                 535                 540 Ser Trp Phe Gly Ala Cys Glu Lys Pro Ala Ile Ala Ala Glu His Gly 545                 550                 555                 560 Tyr Phe Ile Arg Trp Ala Gly Asp Gln Glu Trp Glu Thr Cys Ala Arg

            565                 570                 575 Glu Asn Asn Val Gly Trp Met Glu Met Ala Glu Pro Val Met Asn Leu

        580                 585                 590 Tyr Thr Glu Thr Thr Asp Gly Ser Tyr Ile Glu Lys Lys Glu Thr Ala

    595                 600                 605 Met Val Trp His Tyr Glu Asp Ala Asp Lys Asp Leu Gly Leu Glu Gln

610                 615                 620 Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu Asn Val Leu Ala Asn Glu Pro 625                 630                 635                 640 Val Glu Val Lys Arg Gly Gln Tyr Ile Val Glu Val Lys Pro Gln Val

            645                 650                 655 Pro His Gly Leu Pro Ser Cys Tyr Asp Ile His Arg His Arg Phe Val

        660                 665                 670 Glu Ser Phe Asn Leu Asn Phe Phe Lys Tyr Glu Cys Asn Tyr Arg Gly

    675                 680                 685 Ser Leu Lys Gly Ile Val Ala Glu Lys Ile Phe Ala Phe Met Ala Glu

690                 695                 700 Lys Gly Lys Gln Ala Asp Phe Val Leu Ser Val Gly Asp Asp Arg Ser 705                 710                 715                 720 Asp Glu Asp Met Phe Val Ala Ile Gly Asp Gly Ile Lys Lys Gly Arg

            725                 730                 735 Ile Thr Asn Asn Asn Ser Val Phe Thr Cys Val Val Gly Glu Lys Pro

        740                 745                 750 Ser Ala Ala Glu Tyr Phe Leu Asp Glu Thr Lys Asp Val Ser Met Met

    755                 760                 765 Leu Glu Lys Leu Gly Cys Leu Ser Asn Gln Gly

770                 775 (2)SEQ ID NO:26的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：2130个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：向日葵(Helianthus annuus)   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：171..2130

(D)其它信息：部分 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:26的序列描述 GGATCCTGCG GTTTCATCAC ACAATATGAT ACTGTTACAT CTGATGCCCC TTCAGATGTC    60 CCAAATAGGT TGATTGTCGT ATCGAATCAG TTACCCATAA TCGCTAGGCT AAGACTAACG   120 ACAATGGAGG GTCCTTTTGG GATTTCACTT GGGACGAGAG TTCGATTTAC ATG CAC      176

                                                   Met His

                                                     1 ATC AAA GAT GCA TTA CCC GCA GCC GTT GAG GTT TTC TAT GTT GGC GCA     224 Ile Lys Asp Ala Leu Pro Ala Ala Val Glu Val Phe Tyr Val Gly Ala

      5                  10                  15 CTA AGG GCT GAC GTT GGC CCT ACC GAA CAA GAT GAC GTG TCA AAG ACA     272 Leu Arg Ala Asp Val Gly Pro Thr Glu Gln Asp Asp Val Ser Lys Thr

 20                  25                  30 TTG CTC GAT AGG TTT AAT TGC GTT GCG GTT TTT GTC CCT ACT TCA AAA     320 Leu Leu Asp Arg Phe Asn Cys Val Ala Val Phe Val Pro Thr Ser Lys  35                  40                  45                  50 TGG GAC CAA TAT TAT CAC TGC TTT TGT AAG CAG TAT TTG TGG CCG ATA     368 Trp Asp Gln Tyr Tyr His Cys Phe Cys Lys Gln Tyr Leu Trp Pro Ile

             55                  60                  65 TTT CAT TAC AAG GTT CCC GCT TCT GAC GTC AAG AGT GTC CCG AAT AGT     416 Phe His Tyr Lys Val Pro Ala Ser Asp Val Lys Ser Val Pro Asn Ser

         70                  75                  80 CGG GAT TCA TGG AAC GCT TAT GTT CAC GTG AAC AAA GAG TTT TCC CAG     464 Arg Asp Ser Trp Asn Ala Tyr Val His Val Asn Lys Glu Phe Ser Gln

     85                  90                  95 AAG GTG ATG GAG GCA GTA ACC AAT GCT AGC AAT TAT GTA TGG ATA CAT     512 Lys Val Met Glu Ala Val Thr Asn Ala Ser Asn Tyr Val Trp Ile His

100                 105                 110 GAC TAC CAT TTA ATG ACG CTA CCG ACT TTC TTG AGG CGG GAT TTT TGT     560 Asp Tyr His Leu Met Thr Leu Pro Thr Phe Leu Arg Arg Asp Phe Cys 115                 120                 125                 130 CGT TTT AAA ATC GGT TTT TTT CTG CAT AGC CCG TTT CCT TCC TCG GAG     608 Arg Phe Lys Ile Gly Phe Phe Leu His Ser Pro Phe Pro Ser Ser Glu

            135                 140                 145 GTT TAC AAG ACC CTA CCA ATG AGA AAC GAG CTC TTG AAG GGT CTG TTA     656 Val Tyr Lys Thr Leu Pro Met Arg Asn Glu Leu Leu Lys Gly Leu Leu

        150                 155                 160 AAT GCT GAT CTT ATC GGG TTC CAT ACA TAC GAT TAT GCC CGT CAT TTT     704 Asn Ala Asp Leu Ile Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg His Phe

    165                 170                 175 CTA ACG TGT TGT AGT CGA ATG TTT GGT TTG GAT CAT CAG TTG AAA AGG     752 Leu Thr Cys Cys Ser Arg Met Phe Gly Leu Asp His Gln Leu Lys Arg

180                 185                 190 GGG TAC ATT TTC TTG GAA TAT AAT GGA AGG AGC ATT GAG ATC AAG ATA     800 Gly Tyr Ile Phe Leu Glu Tyr Asn Gly Arg Ser Ile Glu Ile Lys Ile 195                 200                 205                 210 AAG GCG AGC GGG ATT CAT GTT GGT CGA ATG GAG TCG TAC TTG AGT CAG     848 Lys Ala Ser Gly Ile His Val Gly Arg Met Glu Ser Tyr Leu Ser Gln

            215                 220                 225 CCC GAT ACA AGA TTA CAA GTT CAA GAA CTA AAA AAA CGT TTC GAA GGG     896 Pro Asp Thr Arg Leu Gln Val Gln Glu Leu Lys Lys Arg Phe Glu Gly

        230                 235                 240 AAA ATC GTG CTA CTT GGA GTT GAT GAT TTG GAT ATA TTC AAA GGT GTG     944 Lys Ile Val Leu Leu Gly Val Asp Asp Leu Asp Ile Phe Lys Gly Val

    245                 250                 255 AAC TTC AAG GTT TTA GCG TTG GAG AAG TTA CTT AAA TCA CAC CCG AGT    992 Asn Phe Lys Val Leu Ala Leu Glu Lys Leu Leu Lys Ser His Pro Ser

260                 265                 270 TGG CAA GGG CGT GTG GTT TTG GTG CAA ATC TTG AAT CCC GCT CGC GCG   1040 Trp Gln Gly Arg Val Val Leu Val Gln Ile Leu Asn Pro Ala Arg Ala 275                 280                 285                 290 CGT TGC CAA GAC GTC GAT GAG ATC AAT GCC GAG ATA AGA ACA GTC TGT   1088 Arg Cys Gln Asp Val Asp Glu Ile Asn Ala Glu Ile Arg Thr Val Cys

            295                 300                 305 GAA AGA ATC AAT AAC GAA CTG GGA AGC CCG GGA TAC CAG CCC GTT GTG   1136 Glu Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Pro Val Val

        310                 315                 320 TTA ATT GAT GGG CCC GTT TCG TTA AGT GAA AAA GCT GCT TAT TAT GCT   1184 Leu Ile Asp Gly Pro Val Ser Leu Ser Glu Lys Ala Ala Tyr Tyr Ala

    325                 330                 335 ATC GCC GAT ATG GCA ATT GTT ACA CCG TTA CGT GAC GGC ATG AAT CTT   1232 Ile Ala Asp Met Ala Ile Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu

340                 345                 350 ATC CCG TAC GAG TAC GTC GTT TCC CGA CAA AGT GTT AAT GAC CCA AAT   1280 Ile Pro Tyr Glu Tyr Val Val Ser Arg Gln Ser Val Asn Asp Pro Asn 355                 360                 365                 370 CCC AAT ACT CCA AAA AAG AGC ATG CTA GTG GTC TCC GAG TTC ATC GGG   1328 Pro Asn Thr Pro Lys Lys Ser Met Leu Val Val Ser Glu Phe Ile Gly

            375                 380                 385 TGT TCA CTA TCT TTA ACC GGG GCC ATA CGG GTC AAC CCA TGG GAT GAG   1376 Cys Ser Leu Ser Leu Thr Gly Ala Ile Arg Val Asn Pro Trp Asp Glu

        390                 395                 400 TTG GAG ACA GCA GAA GCA TTA TAC GAC GCA CTC ATG GCT CCT GAT GAC   1424 Leu Glu Thr Ala Glu Ala Leu Tyr Asp Ala Leu Met Ala Pro Asp Asp

    405                 410                 415 CAT AAA GAA ACC GCC CAC ATG AAA CAG TAT CAA TAC ATT ATC TCC CAT   1472 His Lys Glu Thr Ala His Met Lys Gln Tyr Gln Tyr Ile Ile Ser His

420                 425                 430 GAT GTA GCT AAC TGG GCT CGT AGC TTC TTT CAA GAT TTA GAG CAA GCG   1520 Asp Val Ala Asn Trp Ala Arg Ser Phe Phe Gln Asp Leu Glu Gln Ala 435                 440                 445                 450 TGC ATC GAT CAT TCT CGT AAA CGA TGC ATG AAT TTA GGA TTT GGG TTA   1568 Cys Ile Asp His Ser Arg Lys Arg Cys Met Asn Leu Gly Phe Gly Leu

            455                 460                 465 GAT ACT AGA GTC GTT CTT TTT GAT GAG AAG TTT AGC AAG TTG GAT ATA   1616 Asp Thr Arg Val Val Leu Phe Asp Glu Lys Phe Ser Lys Leu Asp Ile

        470                 475                 480 GAT GTC TTG GAG AAT GCT TAT TCC ATG GCT CAA AAT CGG GCC ATA CTT    1664 Asp Val Leu Glu Asn Ala Tyr Ser Met Ala Gln Asn Arg Ala Ile Leu

    485                 490                 495 TTG GAC TAT GAC GGC ACT GTT ACT CCA TCT ATC AGT AAA TCT CCA ACT    1712 Leu Asp Tyr Asp Gly Thr Val Thr Pro Ser Ile Ser Lys Ser Pro Thr

500                 505                 510 GAA GCT GTT ATC TCC ATG ATC AAC AAA CTG TGC AAT GAT CCA AAG AAC    1760 Glu Ala Val Ile Ser Met Ile Asn Lys Leu Cys Asn Asp Pro Lys Asn 515                 520                 525                 530 ATG GTG TTC ATC GTT AGT GGA CGC AGT AGA GAA AAT CTT GGC AGT TGG    1808 Met Val Phe Ile Val Ser Gly Arg Ser Arg Glu Asn Leu Gly Ser Trp

            535                 540                 545 TTC GGC GCG TGT GAG AAA CCC GCC ATT GCA GCT GAG CAC GGA TAC TTT    1856 Phe Gly Ala Cys Glu Lys Pro Ala Ile Ala Ala Glu His Gly Tyr Phe

        550                 555                 560 ATA AGG TGG GCG GGT GAT CAA GAA TGG GAA ACG TGC GCA CGT GAG AAT    1904 Ile Arg Trp Ala Gly Asp Gln Glu Trp Glu Thr Cys Ala Arg Glu Asn

    565                 570                 575 AAT GTC GGG TGG ATG GAA ATG GCT GAG CCG GTT ATG AAT CTT TAT ACA    1952 Asn Val Gly Trp Met Glu Met Ala Glu Pro Val Met Asn Leu Tyr Thr

580                 585                 590 GAA ACT ACT GAC GGT TCG TAT ATT GAA AAG AAA GAA ACT GCA ATG GTT    2000 Glu Thr Thr Asp Gly Ser Tyr Ile Glu Lys Lys Glu Thr Ala Met Val 595                 600                 605                 610 TGG CAC TAT GAA GAT GCT GAT AAA GAT CTT GGG TTG GAG CAG GCT AAG    2048 Trp His Tyr Glu Asp Ala Asp Lys Asp Leu Gly Leu Glu Gln Ala Lys

            615                 620                 625 GAA CTG TTG GAC CAT CTT GAA AAC GTG CTC GCT AAT GAG CCC GTT GAA    2096 Glu Leu Leu Asp His Leu Glu Asn Val Leu Ala Asn Glu Pro Val Glu

        630                 635                 640 GTG AAA CGA GGT CAA TAC ATT GTA GAA GTT AAA C                      2130 Val Lys Arg Gly Gln Tyr Ile Val Glu Val Lys

    645                 650 (2)SEQ ID NO:27的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：653个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:27的序列描述 Met His Ile Lys Asp Ala Leu Pro Ala Ala Val Glu Val Phe Tyr Val   1               5                  10                  15 Gly Ala Leu Arg Ala Asp Val Gly Pro Thr Glu Gln Asp Asp Val Ser

         20                  25                  30 Lys Thr Leu Leu Asp Arg Phe Asn Cys Val Ala Val Phe Val Pro Thr

     35                  40                  45 Ser Lys Trp Asp Gln Tyr Tyr His Cys Phe Cys Lys Gln Tyr Leu Trp

 50                  55                  60 Pro Ile Phe His Tyr Lys Val Pro Ala Ser Asp Val Lys Ser Val Pro  65                  70                  75                  80 Asn Ser Arg Asp Ser Trp Asn Ala Tyr Val His Val Asn Lys Glu Phe

             85                  90                  95 Ser Gln Lys Val Met Glu Ala Val Thr Asn Ala Ser Asn Tyr Val Trp

        100                 105                 110 Ile His Asp Tyr His Leu Met Thr Leu Pro Thr Phe Leu Arg Arg Asp

    115                 120                 125 Phe Cys Arg Phe Lys Ile Gly Phe Phe Leu His Ser Pro Phe Pro Ser

130                 135                 140 Ser Glu Val Tyr Lys Thr Leu Pro Met Arg Asn Glu Leu Leu Lys Gly 145                 150                 155                 160 Leu Leu Asn Ala Asp Leu Ile Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg

            165                 170                 175 His Phe Leu Thr Cys Cys Ser Arg Met Phe Gly Leu Asp His Gln Leu

        180                 185                 190 Lys Arg Gly Tyr Ile Phe Leu Glu Tyr Asn Gly Arg Ser Ile Glu Ile

    195                 200                 205 Lys Ile Lys Ala Ser Gly Ile His Val Gly Arg Met Glu Ser Tyr Leu

210                 215                 220 Ser Gln Pro Asp Thr Arg Leu Gln Val Gln Glu Leu Lys Lys Arg Phe 225                 230                 235                 240 Glu Gly Lys Ile Val Leu Leu Gly Val Asp Asp Leu Asp Ile Phe Lys

            245                 250                 255 Gly Val Asn Phe Lys Val Leu Ala Leu Glu Lys Leu Leu Lys Ser His

        260                 265                 270 Pro Ser Trp Gln Gly Arg Val Val Leu Val Gln Ile Leu Asn Pro Ala

    275                 280                 285 Arg Ala Arg Cys Gln Asp Val Asp Glu Ile Asn Ala Glu Ile Arg Thr

290                 295                 300 Val Cys Glu Arg Ile Asn Asn Glu Leu Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Pro 305                 310                 315                 320 Val Val Leu Ile Asp Gly Pro Val Ser Leu Ser Glu Lys Ala Ala Tyr

            325                 330                 335 Tyr Ala Ile Ala Asp Met Ala Ile Val Thr Pro Leu Arg Asp Gly Met

        340                 345                 350 Asn Leu Ile Pro Tyr Glu Tyr Val Val Ser Arg Gln Ser Val Asn Asp

    355                 360                 365 Pro Asn Pro Asn Thr Pro Lys Lys Ser Met Leu Val Val Ser Glu Phe

370                 375                 380 Ile Gly Cys Ser Leu Ser Leu Thr Gly Ala Ile Arg Val Asn Pro Trp 385                 390                 395                 400 Asp Glu Leu Glu Thr Ala Glu Ala Leu Tyr Asp Ala Leu Met Ala Pro

            405                 410                 415 Asp Asp His Lys Glu Thr Ala His Met Lys Gln Tyr Gln Tyr Ile Ile

        420                 425v                 430 Ser His Asp Val Ala Asn Trp Ala Arg Ser Phe Phe Gln Asp Leu Glu

    435                 440                 445 Gln Ala Cys Ile Asp His Ser Arg Lys Arg Cys Met Asn Leu Gly Phe

450                 455                 460 Gly Leu Asp Thr Arg Val Val Leu Phe Asp Glu Lys Phe Ser Lys Leu 465                 470                 475                 480 Asp Ile Asp Val Leu Glu Asn Ala Tyr Ser Met Ala Gln Asn Arg Ala

            485                 490                 495 Ile Leu Leu Asp Tyr Asp Gly Thr Val Thr Pro Ser Ile Ser Lys Ser

        500                 505                 510 Pro Thr Glu Ala Val Ile Ser Met Ile Asn Lys Leu Cys Asn Asp Pro

    515                 520                 525 Lys Asn Met Val Phe Ile Val Ser Gly Arg Ser Arg Glu Asn Leu Gly

530                 535                 540 Ser Trp Phe Gly Ala Cys Glu Lys Pro Ala Ile Ala Ala Glu His Gly 545                 550                 555                 560 Tyr Phe Ile Arg Trp Ala Gly Asp Gln Glu Trp Glu Thr Cys Ala Arg

            565                 570                 575 Glu Asn Asn Val Gly Trp Met Glu Met Ala Glu Pro Val Met Asn Leu

        580                 585                 590 Tyr Thr Glu Thr Thr Asp Gly Ser Tyr Ile Glu Lys Lys Glu Thr Ala

    595                 600                 605 Met Val Trp His Tyr Glu Asp Ala Asp Lys Asp Leu Gly Leu Glu Gln

610                 615                 620 Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu Asn Val Leu Ala Asn Glu Pro 625                 630                 635                 640 Val Glu Val Lys Arg Gly Gln Tyr Ile Val Glu Val Lys

            645                 650 (2)SEQ ID NO:28的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：390个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：向日葵(Helianthus annuns)   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：3..258

(D)其它信息：/部分 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:28的序列描述 TT GCA GAG AAG ATT TTT GCG TTC ATG GCT GAA AAG GGA AAA CAG GCT      47    Ala Glu Lys Ile Phe Ala Phe Met Ala Glu Lys Gly Lys Gln Ala

 1               5                  10                  15 GAT TTC GTG TTG AGC GTT GGA GAT GAT AGA AGT GAT GAA GAC ATG TTT     95 Asp Phe Val Leu Ser Val Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe

             20                  25                  30 GTG GCC ATT GGG GAT GGA ATA AAA AAG GGT CGG ATA ACT AAC AAC AAT    143 Val Ala Ile Gly Asp Gly Ile Lys Lys Gly Arg Ile Thr Asn Asn Asn

         35                  40                  45 TCA GTG TTT ACA TGC GTA GTG GGA GAG AAA CCG AGT GCA GCT GAG TAC    191 Ser Val Phe Thr Cys Val Val Gly Glu Lys Pro Ser Ala Ala Glu Tyr

     50                  55                  60 TTT TTA GAC GAG ACG AAA GAT GTT TCA ATG ATG CTC GAG AAG CTC GGG    239 Phe Leu Asp Glu Thr Lys Asp Val Ser Met Met Leu Glu Lys Leu Gly

 65                  70                  75 TGT CTC AGC AAC CAA GGA T GATGATCCGG AAGCTTCTCG TGATCTTTAT         288 Cys Leu Ser Asn Gln Gly  80                  85 GAGTTAAAAG TTTTCGACTT TTTCTTCATC AAGATTCATG GGAAAGTTGT TCAATATGAA  348 CTTGTGTTTC TTGGTTCTGG ATTTTAGGGA GTCTATGGAT CC                     390 (2)SEQ ID NO:29的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：85个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:29的序列描述 Ala Glu Lys Ile Phe Ala Phe Met Ala Glu Lys Gly Lys Gln Ala Asp   1               5                  10                  15 Phe Val Leu Ser Val Gly Asp Asp Arg Ser Asp Glu Asp Met Phe Val

         20                  25                  30 Ala Ile G1y Asp Gly Ile Lys Lys Gly Arg Ile Thr Asn Asn Asn Ser

     35                  40                  45 Val Phe Thr Cys Val Val Gly Glu Lys Pro Ser Ala Ala Glu Tyr Phe

 50                  55                  60 Leu Asp Glu Thr Lys Asp Val Ser Met Met Leu Glu Lys Leu Gly Cys  65                  70                  75                  80 Leu Ser Asn Gln Gly

             85 (2)SEQ ID NO:30的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：24个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:30的序列描述 CCAIGGRTTI ACICKDATIG CICC                                24 (2)SEQ ID NO:31的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：23个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:31的序列描述 ATHGTIGTIW SIAAYMRIYT ICC                                 23 (2)SEQ ID NO:32的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：20个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:32的序列描述 YTITGGCCIA TITTYCAYTA                                     20 (2)SEQ ID NO:33的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：20个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:33的序列描述 TGRTCIARIA RYTCYTTIGC                                     20 (2)SEQ ID NO:34的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：20个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:34的序列描述 TCRTCIGTRA ARTCRTCICC                                     20 (2)SEQ ID NO:35的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：20个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:35的序列描述 TTYGAYTAYG AYGGIACIYT                                     20 (2)SEQ ID NO:36的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：20个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:36的序列描述 GGIYTIWBNG CIGARCAYGG                                     20 (2)SEQ ID NO:37的信息： (ⅰ)序列特征：

(A)长度：20个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:37的序列描述 ATIGCIAARC CIGTIATGAA                                     20 (2)SEQ ID NO:38的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：20个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:38的序列描述 CCIACIGTRC AIGCRAAIAC                                     20 (2)SEQ ID NO:39的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：2982个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：拟南芥(Arabi dopsis thaliana)   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：64..2982 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:39的序列描述 ATAAACTTCC TCGCGGCCGC CAGTGTGAGT AATTTAGTTT TGGTTCTGTT TTGGTGTGAG   60 CGT ATG CCT GGA AAT AAG TAC AAC TGC AGT TCT TCT CAT ATC CCA CTC    108

Met Pro Gly Asn Lys Tyr Asn Cys Ser Ser Ser His Ile Pro Leu

  1               5                  10                  15 TCT CGA ACA GAA CGC CTC TTG AGA GAT AGA GAG CTT AGA GAG AAG AGG    156 Ser Arg Thr Glu Arg Leu Leu Arg Asp Arg Glu Leu Arg Glu Lys Arg

             20                  25                  30 AAG AGC AAC CGA GCT CGT AAT CCT AAT GAC GTT GCT GGC AGT TCC GAG    204 Lys Ser Asn Arg Ala Arg Asn Pro Asn Asp Val Ala Gly Ser Ser Glu

         35                  40                  45 AAC TCT GAG AAT GAC TTG CGT TTA GAA GGT GAC AGT TCA AGG CAG TAT    252 Asn Ser Glu Asn Asp Leu Arg Leu Glu Gly Asp Ser Ser Arg Gln Tyr

     50                  55                  60 GTT GAA CAG TAC TTG GAA GGG GCT GCT GCT GCA ATG GCG CAC GAT GAT    300 Val Glu Gln Tyr Leu Glu Gly Ala Ala Ala Ala Met Ala His Asp Asp

 65                  70                  75 GCG TGT GAG AGG CAA GAA GTT AGG CCT TAT AAT AGG CAA CGA CTA CTT    348 Ala Cys Glu Arg Gln Glu Val Arg Pro Tyr Asn Arg Gln Arg Leu Leu  80                  85                  90                  95 GTA GTG GCT AAC AGG CTC CCA GTT TCT CCC GTG AGA AGA GGT GAA GAT    396 Val Val Ala Asn Arg Leu Pro Val Ser Pro Val Arg Arg Gly Glu Asp

            100                 105                 110 TCA TGG TCT CTT GAG ATC AGT GCT GGT GGT CTA GTC AGT GCT CTC TTA    444 Ser Trp Ser Leu Glu Ile Ser Ala Gly Gly Leu Val Ser Ala Leu Leu

        115                 120                 125 GGT GTA AAG GAA TTT GAG GCC AGA TGG ATA GGA TGG GCT GGA GTT AAT    492 Gly Val Lys Glu Phe Glu Ala Arg Trp Ile Gly Trp Ala Gly Val Asn

    130                 135                 140 GTG CCT GAT GAG GTT GGA CAG AAG GCA CTT AGC AAA GCT TTG GCT GAG    540 Val Pro Asp Glu Val Gly Gln Lys Ala Leu Ser Lys Ala Leu Ala Glu

145                 150                 155 AAG AGG TGT ATT CCC GTG TTC CTT GAT GAA GAG ATT GTT CAT CAG TAC    588 Lys Arg Cys Ile Pro Val Phe Leu Asp Glu Glu Ile Val His Gln Tyr 160                 165                 170                 175 TAT AAT GGT TAC TGC AAC AAT ATT CTG TGG CCT CTG TTT CAC TAC CTT    636 Tyr Asn Gly Tyr Cys Asn Asn Ile Leu Trp Pro Leu Phe His Tyr Leu

            180                 185                 190 GGA CTT CCG CAA GAA GAT CGG CTT GCC ACA ACC AGA AGC TTT CAG TCC    684 Gly Leu Pro Gln Glu Asp Arg Leu Ala Thr Thr Arg Ser Phe Gln Ser

        195                 200                 205 CAA TTT GCT GCA TAC AAG AAG GCA AAC CAA ATG TTC GCT GAT GTT GTA    732 Gln Phe Ala Ala Tyr Lys Lys Ala Asn Gln Met Phe Ala Asp Val Val

    210                 215                 220 AAT GAG CAC TAT GAA GAG GGA GAT GTC GTC TGG TGC CAT GAC TAT CAT    780 Asn Glu His Tyr Glu Glu Gly Asp Val Val Trp Cys His Asp Tyr His

225                 230                 235 CTT ATG TTC CTT CCT AAA TGC CTT AAG GAG TAC AAC AGT AAG ATG AAA    828 Leu Met Phe Leu Pro Lys Cys Leu Lys Glu Tyr Asn Ser Lys Met Lys 240                 245                 250                 255 GTT GGA TGG TTT CTC CAT ACA CCA TTC CCT TCG TCT GAG ATA CAC AGG    876 Val Gly Trp Phe Leu His Thr Pro Phe Pro Ser Ser Glu Ile His Arg

            260                 265                 270 ACA CTT CCA TCA CGA TCA GAG CTC CTT CGG TCA GTT CTT GCT GCT GAT    924 Thr Leu Pro Ser Arg Ser Glu Leu Leu Arg Ser Val Leu Ala Ala Asp

        275                 280                 285 TTA GTT GGC TTC CAT ACA TAT GAC TAT GCA AGG CAC TTT GTG AGT GCG    972 Leu Val Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg His Phe Val Ser Ala

    290                 295                 300 TGC ACT CGT ATT CTT GGA CTT GAA GGA ACA CCT GAG GGA GTT GAG GAT   1020 Cys Thr Arg Ile Leu Gly Leu Glu Gly Thr Pro Glu Gly Val Glu Asp

305                 310                 315 CAA GGC AGG CTC ACT CGT GTA GCT GCT TTT CCA ATT GGC ATA GAT TCT    1068 Gln Gly Arg Leu Thr Arg Val Ala Ala Phe Pro Ile Gly Ile Asp Ser 320                 325                 330                 335 GAT CGG TTT ATA CGA GCA CTT GAG GTC CCC GAA GTC AAA CAA CAC ATG    1116 Asp Arg Phe Ile Arg Ala Leu Glu Val Pro Glu Val Lys Gln His Met

            340                 345                 350 AAG GAA TTG AAA GAA AGA TTT ACT GAC AGA AAG GTG ATG TTA GGT GTT    1164 Lys Glu Leu Lys Glu Arg Phe Thr Asp Arg Lys Val Met Leu Gly Val

        355                 360                 365 GAT CGT CTT GAC ATG ATC AAA GGG ATT CCA CAA AAG ATT CTG GCA TTC    1212 Asp Arg Leu Asp Met Ile Lys Gly Ile Pro Gln Lys Ile Leu Ala Phe

    370                 375                 380 GAA AAA TTT CTC GAG GAA AAT GCA AAC TGG CGT GAT AAA GTG GTC TTA    1260 Glu Lys Phe Leu Glu Glu Asn Ala Asn Trp Arg Asp Lys Val Val Leu

385                 390                 395 TTG AAA ATT GCG GTG CCA ACA AGA CCT GAC GTT CCT GAG TAT CAA ACA    1308 Leu Lys Ile Ala Val Pro Thr Arg Pro Asp Val Pro Glu Tyr Gln Thr 400                 405                 410                 415 CTC ACA AGC CAA GTT CAT GAA ATT GTT GGC CGC ATT ATT GGT CGT CTC    1356 Leu Thr Ser Gln Val His Glu Ile Val Gly Arg Ile Ile Gly Arg Leu

            420                 425                 430 GGG ACA CTG ACT GCA GTT CCA ATA CAT CAT CTG GAT CGG TCT CTG GAC    1404 Gly Thr Leu Thr Ala Val Pro Ile His His Leu Asp Arg Ser Leu Asp

        435                 440                 445 TTT CAT GCT TTA TGT GCA CTT TAT GCC GTC ACA GAT GTT GCG CTT GTA    1452 Phe His Ala Leu Cys Ala Leu Tyr Ala Val Thr Asp Val Ala Leu Val

    450                 455                 460 ACA TCT TTG AGA GAT GGG ATG AAT CTT GTC AGT TAT GAG TTT GTT GCT    1500 Thr Ser Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu Val Ser Tyr Glu Phe Val Ala

465                 470                 475 TGC CAA GAG GCC AAA AAG GGC GTC CTC ATT CTC AGT GAA TTT GCA GGT    1548 Cys Gln Glu Ala Lys Lys Gly Val Leu Ile Leu Ser Glu Phe Ala Gly 480                 485                 490                 495 GCT GCA CAG TCT CTG GGT GCT GGA GCT ATT CTT GTG AAT CCT TGG AAC    1596 Ala Ala Gln Ser Leu Gly Ala Gly Ala Ile Leu Val Asn Pro Trp Asn

            500                 505                 510 ATC ACA GAA GTT GCT GCC TCC ATT GGA CAA GCC CTA AAC ATG ACA GCT    1644 Ile Thr Glu Val Ala Ala Ser Ile Gly Gln Ala Leu Asn Met Thr Ala

        515                 520                 525 GAA GAA AGA GAG AAA AGA CAT CGC CAT AAT TTT CAT CAT GTC AAA ACT    1692 Glu Glu Arg Glu Lys Arg His Arg His Asn Phe His His Val Lys Thr

    530                 535                 540 CAC ACT GCT CAA GAA TGG GCT GAA ACT TTT GTC AGT GAA CTA AAT GAC    1740 His Thr Ala Gln Glu Trp Ala Glu Thr Phe Val Ser Glu Leu Asn Asp

545                 550                 555 ACT GTA ATT GAG GCG CAA CTA CGA ATT AGT AAA GTC CCA CCA GAG CTT    1788 Thr Val Ile Glu Ala Gln Leu Arg Ile Ser Lys Val Pro Pro Glu Leu 560                 565                 570                 575 CCA CAG CAT GAT GCA ATT CAA CGG TAT TCA AAG TCC AAC AAC AGG CTT    1836 Pro Gln His Asp Ala Ile Gln Arg Tyr Ser Lys Ser Asn Asn Arg Leu

            580                 585                 590 CTA ATC CTG GGT TTC AAT GCA ACA TTG ACT GAA CCA GTG GAT AAT CAA    1884 Leu Ile Leu Gly Phe Asn Ala Thr Leu Thr Glu Pro Val Asp Asn Gln

        595                 600                 605 GGG AGA AGA GGT GAT CAA ATA AAG GAG ATG GAT CTT AAT CTA CAC CCT    1932 Gly Arg Arg Gly Asp Gln Ile Lys Glu Met Asp Leu Asn Leu His Pro

    610                 615                 620 GAG CTT AAA GGG CCC TTA AAG GCA TTA TGC AGT GAT CCA AGT ACA ACC    1980 Glu Leu Lys Gly Pro Leu Lys Ala Leu Cys Ser Asp Pro Ser Thr Thr

625                 630                 635 ATA GTT GTT CTG AGC GGA AGC AGC AGA AGT GTT TTG GAC AAA AAC TTT    2028 Ile Val Val Leu Ser Gly Ser Ser Arg Ser Val Leu Asp Lys Asn Phe 640                 645                 650                 655 GGA GAG TAT GAC ATG TGG CTG GCA GCA GAA AAT GGG ATG TTC CTA AGG    2076 Gly Glu Tyr Asp Met Trp Leu Ala Ala Glu Asn Gly Met Phe Leu Arg

            660                 665                 670 CTT ACG AAT GGA GAG TGG ATG ACT ACA ATG CCA GAA CAC TTG AAC ATG    2124 Leu Thr Asn Gly Glu Trp Met Thr Thr Met Pro Glu His Leu Asn Met

        675                 680                 685 GAA TGG GTT GAT AGC GTA AAG CAT GTT TTC AAG TAC TTC ACT GAG AGA    2172 Glu Trp Val Asp Ser Val Lys His Val Phe Lys Tyr Phe Thr Glu ArG

    690                 695                 700 ACT CCC AGG TCA CAC TTT GAA ACT CGC GAT ACT TCG CTT ATT TGG AAC    2220 Thr Pro Arg Ser His Phe Glu Thr Arg Asp Thr Ser Leu lle Trp Asn

705                 710                 715 TAC AAA TAT GCA GAT ATC GAA TTC GGG AGA CTT CAA GCA AGA GAT TTG    2268 Tyr Lys Tyr Ala Asp Ile Glu Phe Gly Arg Leu Gln Ala Arg Asp Leu 720                 725                 730                 735 TTA CAA CAC TTA TGG ACA GGT CCA ATC TCT AAT GCA TCA GTT GAT GTT    2316 Leu Gln His Leu Trp Thr Gly Pro Ile Ser Asn Ala Ser Val Asp Val

            740                 745                 750 GTC CAA GGA AGC CGC TCT GTG GAA GTC CGT GCA GTT GGT GTC ACA AAG    2364 Val Gln Gly Ser Arg Ser Val Glu Val Arg Ala Val Gly Val Thr Lys

        755                 760                 765 GGA GCT GCA ATT GAT CGT ATT CTA GGA GAG ATA GTG CAT AGC AAG TCG    2412 Gly Ala Ala Ile Asp Arg Ile Leu Gly Glu Ile Val His Ser Lys Ser

    770                 775                 780 ATG ACT ACA CCA ATC GAT TAC GTC TTG TGC ATT GGT CAT TTC TTG GGG    2460 Met Thr Thr Pro Ile Asp Tyr Val Leu Cys Ile Gly His Phe Leu Gly

785                 790                 795 AAG GAC GAA GAT GTT TAC ACT TTC TTC GAA CCA GAA CTT CCA TCC GAC    2508 Lys Asp Glu Asp Val Tyr Thr Phe Phe Glu Pro Glu Leu Pro Ser Asp 800                 805                 810                 815 ATG CCA GCC ATT GCA CGA TCC AGA CCA TCA TCT GAC AGT GGA GCC AAG    2556 Met Pro Ala Ile Ala Arg Ser Arg Pro Ser Ser Asp Ser Gly Ala Lys

            820                 825                 830 TCA TCA TCA GGA GAC CGA AGA CCA CCT TCA AAG TCG ACA CAT AAC AAC    2604 Ser Ser Ser Gly Asp Arg Arg Pro Pro Ser Lys Ser Thr His Asn Asn

        835                 840                 845 AAC AAA AGT GGA TCA AAA TCC TCA TCA TCC TCT AAC TCT AAC AAC AAC    2652 Asn Lys Ser Gly Ser Lys Ser Ser Ser Ser Ser Asn Ser Asn Asn Asn

    850                 855                 860 AAC AAG TCC TCA CAG AGA TCT CTT CAG TCA GAG AGA AAA AGT GGA TCC    2700 Asn Lys Ser Ser Gln Arg Ser Leu Gln Ser Glu Arg Lys Ser Gly Ser

865                 870                 875 AAC CAT AGC TTA GGA AAC TCA AGA CGT CCT TCA CCA GAG AAG ATC TCA    2748 Asn His Ser Leu Gly Asn Ser Arg Arg Pro Ser Pro Glu Lys Ile Ser 880                 885                 890                 895 TGG AAT GTG CTT GAC CTC AAA GGA GAG AAC TAC TTC TCT TGC GCT GTG    2796 Trp Asn Val Leu Asp Leu Lys Gly Glu Asn Tyr Phe Ser Cys Ala Val

            900                 905                 910 GGT CGT ACT CGC ACC AAT GCT AGA TAT CTC CTT GGC TCA CCT GAC GAG    2844 Gly Arg Thr Arg Thr Asn Ala Arg Tyr Leu Leu Gly Ser Pro Asp Asp

        915                 920                 925 GTC GTT TGC TTC CTT GAG AAG CTC GCT GAC ACC ACT TCC TCA CCT TAA    2892 Val Val Cys Phe Leu Glu Lys Leu Ala Asp Thr Thr Ser Ser Pro  *

    930                 935                 940 TAT CCC GAG ACA GTG TCA AGT GAG TTC ATG TAA CCC AAT AAA AAC TAT    2940 Tyr Pro Glu Thr Val Ser Ser Glu Phe Met  *  Pro Asn Lys Asn Tyr

945                 950                 955 TGT TTT GTA ACA AAA AGC AGC CAT TAC CAG ACT CTT TAG TGG            2982 Cys Phe Val Thr Lys Ser Ser His Tyr Gln Thr Leu  *  Trp 960                 965                 970 (2)SEQ ID NO:40的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：973个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:40的序列描述 Met Pro Gly Asn Lys Tyr Asn Cys Ser Ser Ser His Ile Pro Leu Ser   1               5                  10                  15 Arg Thr Glu Arg Leu Leu Arg Asp Arg Glu Leu Arg Glu Lys Arg Lys

         20                  25                  30 Ser Asn Arg Ala Arg Asn Pro Asn Asp Val Ala Gly Ser Ser Glu Asn

     35                  40                  45 Ser Glu Asn Asp Leu Arg Leu Glu Gly Asp Ser Ser Arg Gln Tyr Val

 50                  55                  60 Glu Gln Tyr Leu Glu Gly Ala Ala Ala Ala Met Ala His Asp Asp Ala  65                  70                  75                  80 Cys Glu Arg Gln Glu Val Arg Pro Tyr Asn Arg Gln Arg Leu Leu Val

             85                  90                  95 Val Ala Asn Arg Leu Pro Val Ser Pro Val Arg Arg Gly Glu Asp Ser

        100                 105                 110 Trp Ser Leu Glu Ile Ser Ala Gly Gly Leu Val Ser Ala Leu Leu Gly

    115                 120                 125 Val Lys Glu Phe Glu Ala Arg Trp Ile Gly Trp Ala Gly Val Asn Val

130                 135                 140 Pro Asp Glu Val Gly Gln Lys Ala Leu Ser Lys Ala Leu Ala Glu Lys 145                 150                 155                 160 Arg Cys Ile Pro Val Phe Leu Asp Glu Glu Ile Val His Gln Tyr Tyr

            165                 170                 175 Asn Gly Tyr Cys Asn Asn Ile Leu Trp Pro Leu Phe His Tyr Leu Gly

        180                 185                 190 Leu Pro Gln Glu Asp Arg Leu Ala Thr Thr Arg Ser Phe Gln Ser Gln

    195                 200                 205 Phe Ala Ala Tyr Lys Lys Ala Asn Gln Met Phe Ala Asp Val Val Asn

210                 215                 220 Glu His Tyr Glu Glu Gly Asp Val Val Trp Cys His Asp Tyr His Leu 225                 230                 235                 240 Met Phe Leu Pro Lys Cys Leu Lys Glu Tyr Asn Ser Lys Met Lys Val

            245                 250                 255 Gly Trp Phe Leu His Thr Pro Phe Pro Ser Ser Glu Ile His Arg Thr

        260                 265                 270 Leu Pro Ser Arg Ser Glu Leu Leu Arg Ser Val Leu Ala Ala Asp Leu

    275                 280                 285 Val Gly Phe His Thr Tyr Asp Tyr Ala Arg His Phe Val Ser Ala Cys

290                 295                 300 Thr Arg Ile Leu Gly Leu Glu Gly Thr Pro Glu Gly Val Glu Asp Gln 305                 310                 315                 320 Gly Arg Leu Thr Arg Val Ala Ala Phe Pro Ile Gly Ile Asp Ser Asp

            325                 330                 335 Arg Phe Ile Arg Ala Leu Glu Val Pro Glu Val Lys Gln His Met Lys

        340                 345                 350 Glu Leu Lys Glu Arg Phe Thr Asp Arg Lys Val Met Leu Gly Val Asp

    355                 360                 365 Arg Leu Asp Met Ile Lys Gly Ile Pro Gln Lys Ile Leu Ala Phe Glu

370                 375                 380 Lys Phe Leu Glu Glu Asn Ala Asn Trp Arg Asp Lys Val Val Leu Leu 385                 390                 395                 400 Lys Ile Ala Val Pro Thr Arg Pro Asp Val Pro Glu Tyr Gln Thr Leu

            405                 410                 415 Thr Ser Gln Val His Glu Ile Val Gly Arg Ile Ile Gly Arg Leu Gly

        420                 425                 430 Thr Leu Thr Ala Val Pro Ile His His Leu Asp Arg Ser Leu Asp Phe

    435                 440                 445 His Ala Leu Cys Ala Leu Tyr Ala Val Thr Asp Val Ala Leu Val Thr

450                 455                 460 Ser Leu Arg Asp Gly Met Asn Leu Val Ser Tyr Glu Phe Val Ala Cys 465                 470                 475                 480 Gln Glu Ala Lys Lys Gly Val Leu Ile Leu Ser Glu Phe Ala Gly Ala

            485                 490                 495 Ala Gln Ser Leu Gly Ala Gly Ala Ile Leu Val Asn Pro Trp Asn Ile

        500                 505                 510 Thr Glu Val Ala Ala Ser Ile Gly Gln Ala Leu Asn Met Thr Ala Glu

    515                 520                 525 Glu Arg Glu Lys Arg His Arg His Asn Phe His His Val Lys Thr His

530                 535                 540 Thr Ala Gln Glu Trp Ala Glu Thr Phe Val Ser Glu Leu Asn Asp Thr 545                 550                 555                 560 Val Ile Glu Ala Gln Leu Arg Ile Ser Lys Val Pro Pro Glu Leu Pro

            565                 570                 575 Gln His Asp Ala Ile Gln Arg Tyr Ser Lys Ser Asn Asn Arg Leu Leu

        580                 585                 590 Ile Leu Gly Phe Asn Ala Thr Leu Thr Glu Pro Val Asp Asn Gln Gly

    595                 600                 605 Arg Arg Gly Asp Gln Ile Lys Glu Met Asp Leu Asn Leu His Pro Glu

610                 615                 620 Leu Lys Gly Pro Leu Lys Ala Leu Cys Ser Asp Pro Ser Thr Thr Ile 625                 630                 635                 640 Val Val Leu Ser Gly Ser Ser Arg Ser Val Leu Asp Lys Asn Phe Gly

            645                 650                 655 Glu Tyr Asp Met Trp Leu Ala Ala Glu Asn Gly Met Phe Leu Arg Leu

        660                 665                 670 Thr Asn Gly Glu Trp Met Thr Thr Met Pro Glu His Leu Asn Met Glu

    675                 680                 685 Trp Val Asp Ser Val Lys His Val Phe Lys Tyr Phe Thr Glu Arg Thr

690                 695                 700 Pro Arg Ser His Phe Glu Thr Arg Asp Thr Ser Leu Ile Trp Asn Tyr 705                 710                 715                 720 Lys Tyr Ala Asp Ile Glu Phe Gly Arg Leu Gln Ala Arg Asp Leu Leu

            725                 730                 735 Gln His Leu Trp Thr Gly Pro Ile Ser Asn Ala Ser Val Asp Val Val

        740                 745                 750 Gln Gly Ser Arg Ser Val Glu Val Arg Ala Val Gly Val Thr Lys Gly

    755                 760                 765 Ala Ala Ile Asp Arg Ile Leu Gly Glu Ile Val His Ser Lys Ser Met

770                 775                 780 Thr Thr Pro Ile Asp Tyr Val Leu Cys Ile Gly His Phe Leu Gly Lys 785                 790                 795                 800 Asp Glu Asp Val Tyr Thr Phe Phe Glu Pro Glu Leu Pro Ser Asp Met

            805                 810                 815 Pro Ala Ile Ala Arg Ser Arg Pro Ser Ser Asp Ser Gly Ala Lys Ser

        820                 825                 830 Ser Ser Gly Asp Arg Arg Pro Pro Ser Lys Ser Thr His Asn Asn Asn

    835                 840                 845 Lys Ser Gly Ser Lys Ser Ser Ser Ser Ser Asn Ser Asn Asn Asn Asn

850                 855                 860 Lys Ser Ser Gln Arg Ser Leu Gln Ser Glu Arg Lys Ser Gly Ser Asn 865                 870                 875                 880 His Ser Leu Gly Asn Ser Arg Arg Pro Ser Pro Glu Lys Ile Ser Trp

            885                 890                 895 Asn Val Leu Asp Leu Lys Gly Glu Asn Tyr Phe Ser Cys Ala Val Gly

        900                 905                 910 Arg Thr Arg Thr Asn Ala Arg Tyr Leu Leu Gly Ser Pro Asp Asp Val

    915                 920                 925 Val Cys Phe Leu Glu Lys Leu Ala Asp Thr Thr Ser Ser Pro  *  Tyr

930                 935                 940 Pro Glu Thr Val Ser Ser Glu Phe Met  *  Pro Asn Lys Asn Tyr Cys 945                 950                 955                 960 Phe Val Thr Lys Ser Ser His Tyr Gln Thr Leu  *  Trp

            965                 970 (2)SEQ ID NO:41的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：300个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：水稻(Oryza sativa) (ⅹⅰ)SE Q ID NO:41的序列描述 ATAAACTTCC TCGGACCAAA GAAGAGCATG TTGGTTGTGT CGGAGTTTAT TGGTTGCTCA    60 CCTTCACTGA GTGGAGCCAT TCGTGTTAAC CCGTGGAATA TCGAGGCAAC TGCAGAGGCA   120 CTGAATGAGG CCATCTCAAT GTCAGAGCGT AAAAGCAGCT GAGGCACGAA AAACATTACC   180 GTTATGTCAG CACCCATGAT GTTGCATATT GGTCTAAGAG CTTTGTACAG GACCTGGAGA   240 GGGCTTGCAA GGATCACTTT AGGAAACCAT GCTGGGGCAT TGGATTGGAT TTCGCTCAGG   300 (2)SEQ ID NO:42的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：627个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：卷柏(Selaginella lepidophylla)   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：4..627

(D)其它信息：/部分 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:42的序列描述 ATT ATG TGG GTG CAT GAT TAC CAC CTC TGT CTG GTC CCT CAG ATG ATC      48

Met Trp Val His Asp Tyr His Leu Cys Leu Val Pro Gln Met Ile

  1               5                  10                  15 CGC CAA AAG CTG CCA GAT GTG CAG ATT GGC TTC TTC CTC CAC ACC GCT      96 Arg Gln Lys Leu Pro Asp Val Gln Ile Gly Phe Phe Leu His Thr Ala

             20                  25                  30 TTT CCC TCG TCA GAG GTC TTC CGC TGC TTG GCC GCA CGA AAG GAG CTG     144 Phe Pro Ser Ser Glu Val Phe Arg Cys Leu Ala Ala Arg Lys Glu Leu

         35                  40                  45 CTG GAC GGC ATG CTT GGT GCC AAC TTG GTT GCT TTC CAG ACG CCA GAG     192 Leu Asp Gly Met Leu Gly Ala Asn Leu Val Ala Phe Gln Thr Pro Glu

     50                  55                  60 TAT GCA CAC CAC TTC CTC CAG ACG TGC AGT CGC ATT TCT CTG CTG AAG     240 Tyr Ala His His Phe Leu Gln Thr Cys Ser Arg Ile Ser Leu Leu Lys

 65                  70                  75 CAA CCG AGG AAG GCG TTC AGC TCG TTT CGT CAA TGT CTG GTC ATA ATG     288 Gln Pro Arg Lys Ala Phe Ser Ser Phe Arg Gln Cys Leu Val Ile Met  80                  85                  90                  95 CAA GAA GCG CTA CGA GGG TCA AGA AGG TCA TCG TTG CGC GTG ACA AGC     336 Gln Glu Ala Leu Arg Gly Ser Arg Arg Ser Ser Leu Arg Val Thr Ser

            100                 105                 110 TGA CAA CAT CGC GTG TAC GCG AGA AGC TTC TGT CGT ACG AGC TGT TCT     384  *  Gln His Arg Val Tyr Ala Arg Ser Phe Cys Arg Thr Ser Cys Ser

        115                 120                 125 TGA ACA AGA ACC CAC AGT GGA GGG ACA AGG TCG TTC TCA TTC AGG TTG     432  *  Thr Arg Thr His Ser Gly Gly Thr Arg Ser Phe Ser Phe Arg Leu

    130                 135                 140 CGA CCT CCA CGA CTG AGG ATT CTG AGC TTG CTG CGA CCG TAT CCG AAA     480 Arg Pro Pro Arg Leu Arg Ile Leu Ser Leu Leu Arg Pro Tyr Pro Lys

145                 150                 155 TTG TTA CAC GTA TTG ACG CTG TGC ACT CGA CGC TCA CAC ACA CCC ACT     528 Leu Leu His Val Leu Thr Leu Cys Thr Arg Arg Ser His Thr Pro Thr 160                 165                 170                 175 CGT CTT CCT CAG GCA AGA CAT TGC GTT CTC GCA GTA CCT CGC ACT TCT     576 Arg Leu Pro Gln Ala Arg His Cys Val Leu Ala Val Pro Arg Thr Ser

            180                 185                 190 CTC GAT CGC CGA TGC TCT TGC AAT CAA CTG TTC GAT GGC ATG AAC CTC     624 Leu Asp Arg Arg Cys Ser Cys Asn Gln Leu Phe Asp Gly Met Asn Leu

        195                 200                 205 GTC                                                                 627 Val (2)SEQ ID NO:43的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：208个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:43的序列描述 Met Trp Val His Asp Tyr His Leu Cys Leu Val Pro Gln Met Ile Arg   1               5                  10                  15 Gln Lys Leu Pro Asp Val Gln Ile Gly Phe Phe Leu His Thr Ala Phe

         20                  25                  30 Pro Ser Ser Glu Val Phe Arg Cys Leu Ala Ala Arg Lys Glu Leu Leu

     35                  40                  45 Asp Gly Met Leu Gly Ala Asn Leu Val Ala Phe Gln Thr Pro Glu Tyr

 50                  55                  60 Ala His His Phe Leu Gln Thr Cys Ser Arg Ile Ser Leu Leu Lys Gln  65                  70                  75                  80 Pro Arg Lys Ala Phe Ser Ser Phe Arg Gln Cys Leu Val Ile Met Gln

             85                  90                  95 Glu Ala Leu Arg Gly Ser Arg Arg Ser Ser Leu Arg Val Thr Ser  *

        100                 105                 110 Gln His Arg Val Tyr Ala Arg Ser Phe Cys Arg Thr Ser Cys Ser  *

    115                 120                 125 Thr Arg Thr His Ser Gly Gly Thr Arg Ser Phe Ser Phe Arg Leu Arg

130                 135                 140 Pro Pro Arg Leu Arg Ile Leu Ser Leu Leu Arg Pro Tyr Pro Lys Leu 145                 150                 155                 160 Leu His Val Leu Thr Leu Cys Thr Arg Arg Ser His Thr Pro Thr Arg

            165                 170                 175 Leu Pro Gln Ala Arg His Cys Val Leu Ala Val Pro Arg Thr Ser Leu

        180                 185                 190 Asp Arg Arg Cys Ser Cys Asn Gln Leu Phe Asp Gly Met Asn Leu Val

    195                 200                 205 (2)SEQ ID NO:44的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：645个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：卷柏(Selaginella lepidophylla) (ⅹⅰ)SE Q ID NO:44的序列描述 GGGTGGTTCT TGCACACGCC GTTTCCCTCG TCTGAGATTT ACAGAACGCT GCCGCTGCGG    60 GCCGAGCTGC TCCAAGGCGT CTTAGGCGCG GACTTAGTGG GGTTCCACAC ATACGACTAT   120 GCAAGGCACT TTGTTAGCGC GATGCACACG GATACTCGGG CTGGAAGGCA CTCCCAGGGT   180 GTCGAGGATC AAGGGAAGAT CACGCGAGTG GCTGCCTTCC CCGTGGATCG ATTCGGAGCG   240 ATTTATCGAC GCGTAGAGAC CGATGCGGTC AAGAAACACA TGCAAGAGCT GAGCCAGGTT   300 TTGCTGTCGT AAGGTTATGT TGGGGTGGAT AGGCTTGACA TGATTAAAGG AATTCCACAG   360 AAGCTGCTAG CCTTTGAAAA ATTCCTCGAG GAGAACTCCG AGTGGCGTGA TAAGGTCGTC   420 CTGGTGCAAA TCGCGGTGCC GACTAGAACG GACGTCCTCG AGTACCAAAA GCTTACGAGC   480 CAGGTTCACG AGATTGTTGG TCGCATAAAT GGACGTTTCG GCTCCTTGAC GGCTGTTCCT   540 ATCCATCACC TCGATCGGTC CATGAAATTT CCGGAGCTTT GTGCGTTATA TGCAATCACT   600 GATGTCCTGC TCGTGACATC CCTGCGCGAC GGCATGAACT TCGTC                   645 (2)SEQ ID NO:45的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：498个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana) (ⅹⅰ)SE Q ID NO:45的序列描述 GCCGTTGTGG ATTCATCGCC TCGCACAAGC ACTCTTGTCG TGTCTGAGTT TATTGGATGC    60 TCACCTTCTT TGAGTGGTGC CATTAGGGTG AATCCATGGG ATGTGGATGC TGTTGCTGAA   120 GCGGTAAACT CGGCTCTTAA AATAGTGAGA CTGAGAAGCA ACTACGGCAT GAGAAACATT   180 ATCATTATAT TAGCACTCAT GATGTTGGTT ATTGGGCAAA GAGCTTTATG CAGGATCTTG   240 AGAGAGCGTG CCGAGATCAT TATAGTAAAC GTTGTTGGGG GATTGGTTTT GGCTTGGGGT   300 TCAGAGTTTT GTCACTCTCT CCAAGTTTTA GGAAGCTATC TGTGGACACA TTTGTTCCAG   360 TTTATAGGAA AACCACAGAG AGGGCTAATA TTCTTTTATA ATGGTACTCT TTGTTCCGAA   420 AGCTCATTGT TCAAGATCCA GCAACGGGTT CCTTGTCCTA AGCCCCTTAA GGCCCCATAA   480 CCGGTGTTTT TTAGTGAG                                                 498 (2)SEQ ID NO:46的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：463个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana) (ⅹⅰ)SE Q ID NO:46的序列描述 GCCGTTGTGG ATTCATCGCC TCGCACAAGC ACTCTTGTCG TGTCTGAGTT TATTGGATGC     60 TCACCTTCTT TGAGTGGTGC CATTGGGTGA ATCCATGGGA TGTGGATGCT GTTGCTGAAG    120 CGGTAAACTC GGCTCTTAAA ATGAGTGAGA CTGAGAAGCA ACTACGGCAT GAGAAACATT    180 ATCATTATAT TAGCACTCAT GATGTTGGTT ATTGGGCAAA GAGCTTTATG CAGGATCTTG    240 AGAGAGCGTG CCGAGATCAT TATAGTAAAC GTTGTTGGGG GATTGGTTTT GGTTTGGGGT    300 TCAGAGTTTT TGTCACTCTC TCCAAGTTTA GGAAGCTATC TTGGGACAAT TGTTCCAGTT    360 TTTAGGGAAA ACACAGGGAA GGTTATTTCC TTGATTATAA TGGACCTTGT CCAAGCCCCA    420 TTTTTAAGGC CCAGGAACCG GGTTTTTTTT TCTTAAAGCC CCT                      463 (2)SEQ ID NO:47的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：394个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana) (ⅹⅰ)SE Q ID NO:47的序列描述 GGTATTGATG TAGAGGAAAT ACGTGGTGAA ATCGAAGAAA GCTGCAGGAG GATCAATGGA    60 GAGTTTGGGA AACCGGATAT CAACCTATCA TATATATTGA TACCCGGTTT CGATTAATGA   120 AATAAATGCT TATACCATAT TGCTGAGTGC GTGGTCGTTA CAGCTGTTAG AGATGGTATG   180 AACCTTACTC CCTACGAATA TATCGTTTGT AGACAAGGTT TACTTGGGTC TGAATCAGAC   240 TTTAGTGGCC CAAAGAAGAG CATGTTGGTT GCATCAAGTT TATTTGGATG TCCCCTTTCG   300 CTTAGTGGGG CTATACGCGT AAACCCATGG AACCGTTGAA GCTACTTGAG GAGCCTTAAT   360 TAGGCCCCTC AAATATGCTG GAACACTACG GATG                               394 (2)SEQ ID NO:48的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：428个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana) (ⅹⅰ)SE Q ID NO:48的序列描述 AAGTCCGTTG TGGATTCACG CCTCGCACAA GCACTCTTGT CGTGTCTAGT TTATTGGATG     60 CTCACCTTCT TTAGTGGTGC CATTAGGGTG AATCCATGGA TGTGGATGCT GTTGCTGAAG    120 CGGTAAACTC GGCTCTTAAA ATAGTGAGAC TGAGAAGCAA CTACGGCATG AGAAACATTA    180 TCATTATATT AGCACTCATG ATGTTGGTTA TTGGGCAAAG AGCTTTATGC AGGACTTAGA    240 GAGCGTGCCG AGATCATTAT AGTAAACGTT GTTGGGGGAT TGGTTTTGGT TTGGGGTTCA    300 AGTTTTGTCA CTCTCTCCAA GTTTTAGGAA GCTATCTTGT GGACACATTG TTCCAGTTTA    360 TAGAAACACA GGGAAGGGGC TATATTCTTG TTTAAATGGG ACCCCTTGTC CCTAAAAGTC    420 CCATTTGT                                                             428 (2)SEQ ID NO:49的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：481个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana) (ⅹⅰ)SE Q ID NO:49的序列描述 CAAACGAAGA GCTTCGTGGG AAAGTGGTTC TCGTGCAGAT TACTAATCCT GCTCGTAGTT    60 CAGGTAAGGA TGTTCAAGAT GTAGAGAAAC AGATAAATTT ATTGCTGATG AGATCAATTC   120 TAAATTTGGG AGACCTGGTG GTTATAAGCC TATTGTTTTG TAATGGACCT GTTAGTACTT   180 TGGATAAAGT TGCTTATTAC GCGATCTCGG AGTGTGTTGT CGTGAATCTG TGAGAGATGG   240 GATGAATTTG GTGCCTTATA AGTACACAGT GACTCGGCAA GGGAGCCCTG CTTTGGATGC   300 AGCTTTGGTT TTGGGGAGGA TGATGTTAGG AAGAGTGTGA TTATTGTTTC TGAGGTTCAA   360 CCGGTTGTCC TCCATCTCTA GTGGTGCGAT CCCTTTTAAT CCGTGGACAT CGATCAGCAC   420 TTACGCCATG AGCTTCAAAT CCGGTTTCCG CAAAGGGAAA ATTGCCCCGA GCTTAAGGCC   480 A                                                                   481 (2)SEQ ID NO:50的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：395个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：拟南芥(Arabidopsis thaliana) (ⅹⅰ)SE Q ID NO:50的序列描述 AGACCTGGTG GTTATAAGCC TATTGTGTTT GTCAATGGAC CTGTTAGTAC TTTGGATAAA    60 TTGCTTATTA CGCGATCTCG GAGTGTGTTG TCGTGAATCT GTGAGAGATG GGATGAATTT   120 GGTGCCTTAT AAGTACACAG TGACTCGGCA AGGGAGCCCT GCTTTGGATG CAGCTTTAGG   180 TTTTGGGGAG GATGATGTTA GGAAGAGTGT GATTATTGTT TCTAGTTCAT CGGTTGTCTC   240 CATCTCTGAG TGGTGCGATC CGTTAATCCG TGGAACATCG TGCAGTCACT AAACGCCATG   300 AGCCTGCAAT ACGATGTCGC AAAGGGAAAA TCTTTGCCAC CAGAAGCATC ATAAGTACAT   360 AAAGCCTCAC AATTGCCTAT TTGGGCCGGG GTTTT                              395 (2)SEQ ID NO:51的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：431个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：水稻(Oryza sativa)   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：misc-feature

(B)位置：1

(D)其它信息：/标准名=“GENBANK ID:D22143” (ⅹⅰ)SE Q ID NO:51的序列描述 GGGAATGGAG GGTCTCCGAG CTGCAGCAGC AATTTGAGGG GAAGACTGTG TTGCTCGGTG    60 TGGATGACAT GGATATCTTC AAGGGTATCA ACTTGAAGCT TCTTGCCTTC GAGAATATGT   120 TGAGGACACA TCCCAAGTGG CAGGGGCGGG CAGTGTTGGT GCAAATTGCT AATCCGGCCC   180 GTGGAAAGGG TAAGGATCTT GAAGCCATCC AGGCTGAGAT TCATGAGAGC TGCAAGAGGA   240 TTAATGGAGA GTTTGGCCAG TCAGGATACA GCCCTGTTGT CTTCATTGAC CGTGATGTGT   300 CAAGTGTGGA GGAAGATTGC CTACTACACA ATAGCAGAAT GTGTGGTGGT GACTGCTGTT   360 AGGGATGGGA TTGACTTGAC ACCATATGGA TATATTGTCT GTAGGGCAGG GGTCTTACTC   420 ACATCAGAGG T                                                        431 (2)SEQ ID NO:52的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：496个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：水稻(Oryza sativa)   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：misc feature

(B)位置：1

(D)其它信息：/标准名=“GENBANK ID:D40048” (ⅹⅰ)SE Q ID NO:52的序列描述 CTACCGTTCC CTCCCTGTTC GCGACGAGAT CCTCAAATCA CTGCTAAACT GCGATCTGAT    60 TGGGTTCCAC ACCTTTGATT ACGCGCGGCA TTTCCTGTCC TGCTGCAGCC GGATGCTGGG   120 GATCGAGTAC CAGTCGAAGA GGGGATATAT CGGTCTCGAT TACTTTGGCC GCACTGTTGG   180 GATAAAGATC ATGCCTGTTG GGATTAACAT GACGCAGCTG CAGACGCAGA TCCGGCTGCC   240 TGATCTTGAG TGGCGTGTCG CGAACTCCGG AAGCAGTTTG ATGGGAAGAC TGTCATGCTC   300 GGTGTGGATG ATATGGACAT ATTTAAGGGG ATTAATCTGA AAGTTCTTGC GTTTTGAGCA   360 GATGCTGAGG ACACACCCAA AATGGCAGCC AAGGCAGTTT TGGTGCAGAT TCAAACCAAG   420 GGTGGTTGTT GGGAGGACTT AGGTACAGCT AGATATGAGT TCAGGGGTAA TGACATTTCA   480 GGCGGTATTT CCTTGG                                                   496 (2)SEQ ID NO:53的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：288个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：水稻(Oryza sativa) (ⅹⅰ)SE Q ID NO:53的序列描述 GGACCAAAGA AGAGCATGTT GGTTGTGTCG GAGTTTATTG GTTGCTCACC TTCACTGAGT    60 GGAGCCATTC GTGTTAACCC GTGGAATATC GAGGCAACTG CAGAGGCACT GAATGAGGCC   120 ATCTCAATGT CAGAGCGTAA AAGCAGCTGA GGCACGAAAA ACATTACCGT TATGTCAGCA   180 CCCATGATGT TGCATATTGG TCTAAGAGCT TTGTACAGGA CCTGGAGAGG GCTTGCAAGG   240 ATCACTTTAG GAAACCATGC TGGGGCATTG GATTGGATTT CGCTCAGG                288 (2)SEQ ID NO:54的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：2207个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：双链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA至mRNA   (ⅲ)假设：非   (ⅲ)反义：否   (ⅵ)初始来源：

(A)生物：马铃薯(Solanum tuberosum)

(B)种类：Kardal   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：CDS

(B)位置：161..1906   (ⅸ)特征：

(A)名称/关键词：misc-feature

(B)位置：842..850

(D)其它信息：/功能=“推定的糖基化位点” (ⅹⅰ)SE Q ID NO:54的序列描述 CTTTTCTGAG TAATAACATA GGCATTGATT TTTTTTCAAT TAATAACACC TGCAAACATT   60 CCCATTGCCG GCATTCTCTG TTCTTACAAA AAAAAACATT TTTTTGTTCA CATAAATTAG  120 TTATGGCATC AGTATTGAAC CCTTTAACTT GTTATACAAT ATG GGT AAA GCT ATA    175

                                        Met Gly Lys Ala Ile

                                          1               5 ATT TTT ATG ATT TTT ACT ATG TCT ATG AAT ATG ATT AAA GCT GAA ACT     223 Ile Phe Met Ile Phe Thr Met Ser Met Asn Met Ile Lys Ala Glu Thr

             10                  15                  20 TGC AAA TCC ATT GAT AAG GGT CCT GTA ATC CCA ACA ACC CCT TTA GTG     271 Cys Lys Ser Ile Asp Lys Gly Pro Val Ile Pro Thr Thr Pro Leu Val

         25                  30                  35 ATT TTT CTT GAA AAA GTT CAA GAA GCT GCT CTT CAA ACT TAT GGC CAT     319 Ile Phe Leu Glu Lys Val Gln Glu Ala Ala Leu Gln Thr Tyr Gly His

     40                  45                  50 AAA GGG TTT GAT GCT AAA CTG TTT GTT GAT ATG TCA CTG AGA GAG AGT     367 Lys Gly Phe Asp Ala Lys Leu Phe Val Asp Met Ser Leu Arg Glu Ser

 55                  60                  65 CTT TCA GAA ACA GTT GAA GCT TTT AAT AAG CTT CCA AGA GTT GTG AAT     415 Leu Ser Glu Thr Val Glu Ala Phe Asn Lys Leu Pro Arg Val Val Asn  70                  75                  80                  85 GGT TCA ATA TCA AAA AGT GAT TTG GAT GGT TTT ATA GGT AGT TAC TTG     463 Gly Ser Ile Ser Lys Ser Asp Leu Asp Gly Phe Ile Gly Ser Tyr Leu

             90                  95                 100 AGT AGT CCT GAT AAG GAT TTG GTT TAT GTT GAG CCT ATG GAT TTT GTG     511 Ser Ser Pro Asp Lys Asp Leu Val Tyr Val Glu Pro Met Asp Phe Val

        105                 110                 115 GCT GAG CCT GAA GGC TTT TTG CCA AAG GTG AAG AAT TCT GAG GTG AGG     559 Ala Glu Pro Glu Gly Phe Leu Pro Lys Val Lys Asn Ser Glu Val Arg

    120                 125                 130 GCA TGG GCA TTG GAG GTG CAT TCA CTT TGG AAG AAT TTA AGT AGG AAA     607 Ala Trp Ala Leu Glu Val His Ser Leu Trp Lys Asn Leu Ser Arg Lys

135                 140                 145 GTG GCT GAT CAT GTA TTG GAA AAA CCA GAG TTG TAT ACT TTG CTT CCA     655 Val Ala Asp His Val Leu Glu Lys Pro Glu Leu Tyr Thr Leu Leu Pro 150                 155                 160                 165 TTG AAA AAT CCA GTT ATT ATA CCG GGA TCG CGT TTT AAG GAG GTT TAT     703 Leu Lys Asn Pro Val Ile Ile Pro Gly Ser Arg Phe Lys Glu Val Tyr

            170                 175                 180 TAT TGG GAT TCT TAT TGG GTA ATA AGG GGT TTG TTA GCA AGC AAA ATG     751 Tyr Trp Asp Ser Tyr Trp Val Ile Arg Gly Leu Leu Ala Ser Lys Met

        185                 190                 195 TAT GAA ACT GCA AAA GGG ATT GTG ACT AAT CTG GTT TCT CTG ATA GAT     799 Tyr Glu Thr Ala Lys Gly Ile Val Thr Asn Leu Val Ser Leu Ile Asp

    200                 205                 210 CAA TTT GGT TAT GTT CTT AAC GGT GCA AGA GCA TAC TAC AGT AAC AGA     847 Gln Phe Gly Tyr Val Leu Asn Gly Ala Arg Ala Tyr Tyr Ser Asn Arg

215                 220                 225 AGT CAG CCT CCT GTC CTG GCC ACG ATG ATT GTT GAC ATA TTC AAT CAG     895 Ser Gln Pro Pro Val Leu Ala Thr Met Ile Val Asp Ile Phe Asn Gln 230                 235                 240                 245 ACA GGT GAT TTA AAT TTG GTT AGA AGA TCC CTT CCT GCT TTG CTC AAG     943 Thr Gly Asp Leu Asn Leu Val Arg Arg Ser Leu Pro Ala Leu Leu Lys

            250                 255                 260 GAG AAT CAT TTT TGG AAT TCA GGA ATA CAT AAG GTG ACT ATT CAA GAT     991 Glu Asn His Phe Trp Asn Ser Gly Ile His Lys Val Thr Ile Gln Asp

        265                 270                 275 GCT CAG GGA TCA AAC CAC AGC TTG AGT CGG TAC TAT GCT ATG TGG AAT    1039 Ala Gln Gly Ser Asn His Ser Leu Ser Arg Tyr Tyr Ala Met Trp Asn

    280                 285                 290 AAG CCC CGT CCA GAA TCG TCA ACT ATA GAC AGT GAA ACA GCT TCC GTA    1087 Lys Pro Arg Pro Glu Ser Ser Thr Ile Asp Ser Glu Thr Ala Ser Val

295                 300                 305 CTC CCA AAT ATA TGT GAA AAA AGA GAA TTA TAC CGT GAA CTG GCA TCA    1135 Leu Pro Asn Ile Cys Glu Lys Arg Glu Leu Tyr Arg Glu Leu Ala Ser 310                 315                 320                 325 GCT GCT GAA AGT GGA TGG GAT TTC AGT TCA AGA TGG ATG AGC AAC GGA    1183 Ala Ala Glu Ser Gly Trp Asp Phe Ser Ser Arg Trp Met Ser Asn Gly

            330                 335                 340 TCT GAT CTG ACA ACA ACT AGT ACA ACA TCA ATT CTA CCA GTT GAT TTG    1231 Ser Asp Leu Thr Thr Thr Ser Thr Thr Ser Ile Leu Pro Val Asp Leu

        345                 350                 355 AAT GCA TTC CTT CTG AAG ATG GAA CTT GAC ATT GCC TTT CTA GCA AAT    1279 Asn Ala Phe Leu Leu Lys Met Glu Leu Asp Ile Ala Phe Leu Ala Asn

    360                 365                 370 CTT GTT GGA GAA AGT AGC ACG GCT TCA CAT TTT ACA GAA GCT GCT CAA    1327 Leu Val Gly Glu Ser Ser Thr Ala Ser His Phe Thr Glu Ala Ala Gln

375                 380                 385 AAT AGA CAG AAG GCT ATA AAC TGT ATC TTT TGG AAC GCA GAG ATG GGG    1375 Asn Arg Gln Lys Ala Ile Asn Cys Ile Phe Trp Asn Ala Glu Met Gly 390                 395                 400                 405 CAA TGG CTT GAT TAC TGG CTT ACC AAC AGC GAC ACA TCT GAG GAT ATT    1423 Gln Trp Leu Asp Tyr Trp Leu Thr Asn Ser Asp Thr Ser Glu Asp Ile

            410                 415                 420 TAT AAA TGG GAA GAT TTG CAC CAG AAC AAG AAG TCA TTT GCC TCT AAT    1471 Tyr Lys Trp Glu Asp Leu His Gln Asn Lys Lys Ser Phe Ala Ser Asn

        425                 430                 435 TTT GTT CCG CTG TGG ACT GAA ATT TCT TGT TCA GAT AAT AAT ATC ACA    1519 Phe Val Pro Leu Trp Thr Glu Ile Ser Cys Ser Asp Asn Asn Ile Thr

    440                 445                 450 ACT CAG AAA GTA GTT CAA AGT CTC ATG AGC TCG GGC TTG CTT CAG CCT    1567 Thr Gln Lys Val Val Gln Ser Leu Met Ser Ser Gly Leu Leu Gln Pro

455                 460                 465 GCA GGG ATT GCA ATG ACC TTG TCT AAT ACT GGA CAG CAA TGG GAT TTT    1615 Ala Gly Ile Ala Met Thr Leu Ser Asn Thr Gly Gln Gln Trp Asp Phe 470                 475                 480                 485 CCG AAT GGT TGG CCC CCC CTT CAA CAC ATA ATC ATT GAA GGT CTC TTA    1663 Pro Asn Gly Trp Pro Pro Leu Gln His Ile Ile Ile Glu Gly Leu Leu

            490                 495                 500 AGG TCT GGA CTA GAA GAG GCA AGA ACC TTA GCA AAA GAC ATT GCT ATT    1711 Arg Ser Gly Leu Glu Glu Ala Arg Thr Leu Ala Lys Asp Ile Ala Ile

        505                 510                 515 CGC TGG TTA AGA ACT AAC TAT GTG ACT TAC AAG AAA ACC GGT GCT ATG    1759 Arg Trp Leu Arg Thr Asn Tyr Val Thr Tyr Lys Lys Thr Gly Ala Met

    520                 525                 530 TAT GAA AAA TAT GAT GTC ACA AAA TGT GGA GCA TAT GGA GGT GGT GGT    1807 Tyr Glu Lys Tyr Asp Val Thr Lys Cys Gly Ala Tyr Gly Gly Gly Gly

535                 540                 545 GAA TAT ATG TCC CAA ACG GGT TTC GGA TGG TCA AAT GGC GTT GTA CTG    1855 Glu Tyr Met Ser Gln Thr Gly Phe Gly Trp Ser Asn Gly Val Val Leu 550                 555                 560                 565 GCA CTT CTA GAG GAA TTT GGA TGG CCT GAA GAT TTG AAG ATT GAT TGC    1903 Ala Leu Leu Glu Glu Phe Gly Trp Pro Glu Asp Leu Lys Ile Asp Cys

            570                 575                 580 TAATGAGCAA GTAGAAAAGC CAAATGAAAC ATCATTGAGT TTTATTTTCT TCTTTTGTTA  1963 AAATAAGCTG CAATGGTTTG CTGATAGTTT ATGTTTTGTA TTACTATTTC ATAAGGTTTT  2023 TGTACCATAT CAAGTGATAT TACCATGAAC TATGTCGTTC GGACTCTTCA AATCGGATTT  2083 TGCAAAAATA ATGCAGTTTT GGAGAATCCG ATAACATAGA CCATGTATGG ATCTAAATTG  2143 TAAACAGCTT ACTATATTAA GTAAAAGAAA GATGATTCCT CTGCTTTAAA AAAAAAAAAA  2203 AAAA                                                               2207 (2)SEQ ID NO:55的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：581个氨基酸

(B)类型：氨基酸

(D)拓扑类型：线性 (ⅱ)分子类型：蛋白质 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:55的序列描述 Met Gly Lys Ala Ile Ile Phe Met Ile Phe Thr Met Ser Met Asn Met   1               5                  10                  15 Ile Lys Ala Glu Thr Cys Lys Ser Ile Asp Lys Gly Pro Val Ile Pro

         20                  25                  30 Thr Thr Pro Leu Val Ile Phe Leu Glu Lys Val Gln Glu Ala Ala Leu

     35                  40                  45 Gln Thr Tyr Gly His Lys Gly Phe Asp Ala Lys Leu Phe Val Asp Met

 50                  55                  60 Ser Leu Arg Glu Ser Leu Ser Glu Thr Val Glu Ala Phe Asn Lys Leu  65                  70                  75                  80 Pro Arg Val Val Asn Gly Ser Ile Ser Lys Ser Asp Leu Asp Gly Phe

             85                  90                  95 Ile Gly Ser Tyr Leu Ser Ser Pro Asp Lys Asp Leu Val Tyr Val Glu

        100                 105                 110 Pro Met Asp Phe Val Ala Glu Pro Glu Gly Phe Leu Pro Lys Val Lys

    115                 120                 125 Asn Ser Glu Val Arg Ala Trp Ala Leu Glu Val His Ser Leu Trp Lys

130                 135                 140 Asn Leu Ser Arg Lys Val Ala Asp His Val Leu Glu Lys Pro Glu Leu 145                 150                 155                 160 Tyr Thr Leu Leu Pro Leu Lys Asn Pro Val Ile Ile Pro Gly Ser Arg

            165                 170                 175 Phe Lys Glu Val Tyr Tyr Trp Asp Ser Tyr Trp Val Ile Arg Gly Leu

        180                 185                 190 Leu Ala Ser Lys Met Tyr Glu Thr Ala Lys Gly Ile Val Thr Asn Leu

    195                 200                 205 Val Ser Leu Ile Asp Gln Phe Gly Tyr Val Leu Asn Gly Ala Arg Ala

210                 215                 220 Tyr Tyr Ser Asn Arg Ser Gln Pro Pro Val Leu Ala Thr Met Ile Val 225                 230                 235                 240 Asp Ile Phe Asn Gln Thr Gly Asp Leu Asn Leu Val Arg Arg Ser Leu

            245                 250                 255 Pro Ala Leu Leu Lys Glu Asn His Phe Trp Asn Ser Gly Ile His Lys

        260                 265                 270 Val Thr Ile Gln Asp Ala Gln Gly Ser Asn His Ser Leu Ser Arg Tyr

    275                 280                 285 Tyr Ala Met Trp Asn Lys Pro Arg Pro Glu Ser Ser Thr Ile Asp Ser

290                 295                 300 Glu Thr Ala Ser Val Leu Pro Asn Ile Cys Glu Lys Arg Glu Leu Tyr 305                 310                 315                 320 Arg Glu Leu Ala Ser Ala Ala Glu Ser Gly Trp Asp Phe Ser Ser Arg

            325                 330                 335 Trp Met ser Asn Gly Ser Asp Leu Thr Thr Thr Ser Thr Thr Ser Ile

        340                 345                 350 Leu Pro Val Asp Leu Asn Ala Phe Leu Leu Lys Met Glu Leu Asp Ile

    355                 360                 365 Ala Phe Leu Ala Asn Leu Val Gly Glu Ser Ser Thr Ala Ser His Phe

370                 375                 380 Thr Glu Ala Ala Gln Asn Arg Gln Lys Ala Ile Asn Cys Ile Phe Trp 385                 390                 395                 400 Asn Ala Glu Met Gly Gln Trp Leu Asp Tyr Trp Leu Thr Asn Ser Asp

            405                 410                 415 Thr Ser Glu Asp Ile Tyr Lys Trp Glu Asp Leu His Gln Asn Lys Lys

        420                 425                 430 Ser Phe Ala Ser Asn Phe Val Pro Leu Trp Thr Glu Ile Ser Cys Ser

    435                 440                 445 Asp Asn Asn Ile Thr Thr Gln Lys Val Val Gln Ser Leu Met Ser Ser

450                 455                 460 Gly Leu Leu Gln Pro Ala Gly Ile Ala Met Thr Leu Ser Asn Thr Gly 465                 470                 475                 480 Gln Gln Trp Asp Phe Pro Asn Gly Trp Pro Pro Leu Gln His Ile Ile

            485                 490                 495 Ile Glu Gly Leu Leu Arg Ser Gly Leu Glu Glu Ala Arg Thr Leu Ala

        500                 505                 510 Lys Asp Ile Ala Ile Arg Trp Leu Arg Thr Asn Tyr Val Thr Tyr Lys

    515                 520                 525 Lys Thr Gly Ala Met Tyr Glu Lys Tyr Asp Val Thr Lys Cys Gly Ala

530                 535                 540 Tyr Gly Gly Gly Gly Glu Tyr Met Ser Gln Thr Gly Phe Gly Trp Ser 545                 550                 555                 560 Asn Gly Val Val Leu Ala Leu Leu Glu Glu Phe Gly Trp Pro Glu Asp

            565                 570                 575 Leu Lys Ile Asp Cys

        580 (2)SEQ ID NO:56的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：18个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：DNA   (ⅲ)假设：非 (ⅹⅲ)SE Q ID NO:56的序列描述 CTCAGATCTG GCCACAAA                                       18 (2)SEQ ID NO:57的信息：   (ⅰ)序列特征：

(A)长度：18个碱基对

(B)类型：核酸

(C)链型：单链

(D)拓扑类型：线性   (ⅱ)分子类型：cDNA   (ⅲ)假设：非 (ⅹⅰ)SE Q ID NO:57的序列描述 GTGCTCGTCT GCAGGTGC                                       18