用于制备非致龋持续性能量释放汁液的方法
阅读：871发布：2020-05-19
专利汇可以提供用于制备非致龋持续性能量释放汁液的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种用于制备非致龋持续性 能量 释放汁液的方法。该方法包括将汁液与固定在Duolite上的酶在30-50℃下 接触 1-5小时；并从酶复合物中分离汁液，其中该酶能够将致龋糖转化为非致龋糖。，下面是用于制备非致龋持续性能量释放汁液的方法专利的具体信息内容。
1.一种用于制备非致龋持续性能量释放汁液的方法，包括：
a)将汁液与固定在DUOLITETM上的酶在30-50℃下接触1-5h；其中所述酶能够将致龋糖转化为非致龋糖；以及
b)从酶复合物中分离汁液。
2.根据权利要求1所述的方法，还任选地包括，
在与固定在DUOLITETM上的所述酶接触之前和之后调节所述汁液的pH；
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述致龋糖是单糖或二糖中一种或多种。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述致龋糖是蔗糖、葡萄糖或果糖中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述非致龋糖选自包括异麦芽酮糖、海藻酮糖和阿洛酮糖的组。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述酶选自包括异麦芽酮糖合成酶、蔗糖异构酶、木糖异构酶和D-阿洛酮糖差向异构酶的组，并且任选地与酶转化酶一起。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述汁液选自包括甘蔗汁、甜高粱汁、甜菜汁、橙汁和葡萄汁的组。
8.通过根据权利要求1至7中任一项所述的方法生产的汁液。
用于制备非致龋持续性能量释放汁液的方法
[0001] 本申请要求于2015年11月12日提交的印度临时申请号2416/CHE/2015和2015年11月12日提交的印度临时申请号2417/CHE/2015的优先权，其通过引用并入本文。
技术领域
[0002] 本发明涉及汁液。特别地，本发明涉及用于制备非致龋持续性能量释放汁液的方法。
背景技术
[0003] 汁液在有价值的营养物(诸如维生素和矿物质等)方面被认为是健康的，但如果不适量食用，高糖含量的存在将成为体重增加的关键因素。此外，这些汁液在较长时间内不稳定，并且其中存在的糖本身是可发酵的因此需要立即食用。近年来，人们越来越关注糖的致龋性。通过用水稀释可以实现糖的减少，并用人造甜味剂调节甜味。然而，这种方法导致汁液的内在质量降低，诸如矿物质和维生素等。实现相同目标的另一种方式是通过定向发酵为其他产品并因此减少糖成分。然而，在这两种情况下，负面影响可能会降低产品的成功，诸如余味或形成会损害口味的不期望的产物。因此，需要开发一种生产非致龋持续性能量释放汁液的方法。
[0004] 本发明通过将汁液中存在的糖转化为其异构体形式或差向异构体形式的方法提供了解决上述问题的方案，该方法不仅保持原始汁液中的天然成分，而且具有较少的热值和较少的血糖指数并且在无任何防腐剂的条件下具有延长的自我寿命。
发明内容
[0005] 一方面，本发明涉及用于制备非致龋持续性能量释放汁液的方法，其包括：
[0006] a.将汁液与固定在Duolite上的酶在30-50℃下接触1-5小时；其中酶能够将致龋糖转化为非致龋糖；以及
[0007] b.从酶复合物中分离汁液。
[0008] 该方法可以任选地包括在与固定化酶接触之前和之后调节汁液的pH。
[0009] 本发明的优点是使用由于固定化而具有增加的寿命的固定化酶而不是游离酶与作为底物的汁液结合以影响如本发明所预期的期望的特性。
[0011] 图1显示了葡萄汁中糖分布的分析
[0012] 葡萄汁是通过破碎和随后澄清新鲜制备的。对汁液溶液进行HPLC分析以鉴定和测量糖的成分。用商购的标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。在与酶接触以改变糖成分之前，将汁液的pH调节至8.0。以图形表示(A)示出了橙汁中糖的成分，且在B中给出了存在的每种糖的量。
[0013] 图2显示了葡萄汁中糖分布的分析
[0014] 将新鲜制备的葡萄汁的pH调节至8.0，并在最佳反应条件下与各自的酶一起温育，以将汁液中存在的天然糖转化为稀有糖。生物转化后，将汁液溶液进行HPLC分析以鉴定和测量糖的成分。用商购的标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。以图形表示(A)示出了被不同酶改变的橙汁中糖成分，且在B中给出了存在的每种糖的量。缩写是：-DPEase：D-阿洛酮糖3-差向异构酶，XIase：木糖异构酶。
[0015] 图3显示了葡萄汁中糖分布的分析
[0016] 将新鲜制备的葡萄汁的pH调节至8.0，并在最佳反应条件下与各自的固定在固体表面上的酶一起温育，以将汁液中存在的天然糖转化为稀有糖。生物转化后，将汁液溶液进行HPLC分析以鉴定和测量糖的成分。用商购的标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。以图形表示(A)示出了被不同酶改变的橙汁中糖成分，且在B中给出了存在的每种糖的量。缩写是：-DPEase：D-阿洛酮糖3-差向异构酶，XIase：木糖异构酶。
[0017] 图4显示了橙汁中糖分布的分析
[0018] 橙汁是通过破碎和随后澄清新鲜制备的。对汁液溶液进行HPLC分析以鉴定和测量糖的成分。用商购的标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。在与酶接触以改变糖成分之前，将汁液的pH调节至8.0。以图形表示(A)示出了汁液中糖的成分，且在B中给出了存在的每种糖的量。
[0019] 图5显示了橙汁中糖分布的分析
[0020] 将新鲜制备的橙汁的pH调节至8.0，并在最佳反应条件下与各自的酶一起温育，以将汁液中存在的天然糖转化为稀有糖。生物转化后，将汁液溶液进行HPLC分析以鉴定和测量糖的成分。用商购的标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。以图形表示(A)示出了被不同酶改变的橙汁中糖成分，且在B中给出了存在的每种糖的量。缩写是：-DPEase：D-阿洛酮糖3-差向异构酶，XIase：木糖异构酶。
[0021] 图6显示了橙汁中糖分布的分析
[0022] 将新鲜制备的橙汁的pH调节至8.0，并在最佳反应条件下与各自的固定在固体表面上的酶一起温育，以将汁液中存在的天然糖转化为稀有糖。生物转化后，将汁液溶液进行HPLC分析以鉴定和测量糖的成分。用商购的标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。以图形表示(A)示出了被不同酶改变的橙汁中糖成分，且在B中给出了存在的每种糖的量。缩写是：-DPEase：D-阿洛酮糖3-差向异构酶，XIase：木糖异构酶。
[0023] 图7显示了橙汁中糖分布的分析
[0024] 将新鲜制备的橙汁的pH调节至8.0，并在最佳反应条件下与固定在固体表面上的酶组合一起温育，以将汁液中存在的天然糖转化为稀有糖。生物转化后，将汁液溶液进行HPLC分析以鉴定和测量糖的成分。用商购的标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。以图形表示(A)示出了被不同酶改变的橙汁中糖成分，且在B中给出了存在的每种糖的量。
[0025] -DPEase：D-阿洛酮糖3-差向异构酶，XIase：木糖异构酶，ISase：异麦芽酮糖合成酶。
具体实施方式
[0026] 在更详细地描述本公开的方法之前，应该理解的是，该方法不限于所描述的特定实施方式，因为这些当然可以变化。还应该理解的是，这里使用的术语仅为了描述特定实施方式的目的，而不旨在限制，因为该方法的范围将仅由所附权利要求限制。
[0027] 在提供数值范围的情况下，应该理解的是在该范围的上限和下限之间的以下限的十分之一单位的每个居间值，除非上下文另有明确规定，以及所述范围内的任何其他指出的值或居间值包括在本方法中。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小的范围内，并且也包括在本方法内，受到规定范围内的任何具体排除限制。如果规定的范围包括一个或两个限值，则排除这些包括的限值之一或两者的范围也包括在本方法中。
[0028] 本文用前面有术语“约”的数值给出了某些范围。在本文中使用的术语“约”为其之后的确切数字以及接近或近似该术语之后的数字的数字提供文字支持。在确定数字是否接近或近似具体列举的数字时，该接近或近似的未列举的数字可以是在其呈现的上下文中提供具体列举数字的实质当量的数字。
[0029] 除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有与该方法所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。虽然任何类似于或等同于本文所述的方法也可用于本方法的实践或测试中，但现在描述代表性的说明性方法和材料。
[0030] 本说明书中引用的所有出版物和专利均通过引用并入本文，如同每个单独的出版物或专利被具体和单独地指示为通过引用并入，并且通过引用并入本文以公开和描述与被引用的出版物相关的方法和/或材料。任何出版物的引用是由于其在提交日期之前公开，并且不应该被解释为承认本方法由于先前的发明而无权先于这些出版物。此外，所提供的出版日期可能与实际出版日期不同，实际出版日期可能需要独立确认。
[0031] 需要注意的是，如本文和所附权利要求中所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指示物。需要进一步注意的是，可以起草权利要求来排除任何可选要素。因此，该陈述旨在用作使用诸如“唯一地”、“仅”等与权利要求要素引用相关的排他术语或使用“否定”限制的先行基础。
[0032] 如本文使用的术语“汁液”是指“糖汁”或水果汁。
[0034] 水果的实例包括但不限于果汁、橙汁和葡萄汁。
[0035] 应该认识到，为了清楚起见，该方法的某些特征在独立实施方式的上下文中被描述，也可以在单个实施方式中组合提供。相反，为了简洁起见，该方法的各种特征在单个实施方式的上下文中被描述，也可以单独地或以任何合适的子组合来提供。实施方式的所有组合都具体地包括在本发明内，并且在本文公开，正如各个和每个组合被单独和明确地公开一样，只要这样的组合包括可操作的方法和/或设备/系统/套件。此外，在描述这些变量的实施方式中列出的所有子组合也具体包括在本发明方法内，并且在本文中公开，正如各个和每个子组合被单独和明确地公开于本文。
[0036] 本领域技术人员在阅读本公开后将显而易见的是，本文描述和示出的各个单独的实施方式具有独立的部分和特征，其可以容易地与任何其他几个实施方式的特征分离或与其组合，而不偏离本方法的范围或精神。任何所述的方法都可以按照所述事件的顺序或以逻辑上可行的任何其它顺序来执行。
[0037] 在一种实施方式中，本发明提供低卡路里、低血糖指数(GI)和持续性能量释放的糖组合物，其包括：
[0038] 选自包括异麦芽酮糖、海藻酮糖和D-阿洛酮糖的组的糖的组合；
[0039] 至少一种以下物质：必需微量元素、可溶性寡糖和填充剂；以及
[0040] 任选地，一种或多种营养性甜味剂。
[0041] 术语非致龋糖主要是异麦芽酮糖、海藻酮糖和阿洛酮糖。
[0042] D-阿洛酮糖((D-核糖-2-己酮糖和C6H12O6)是天然产物中少量存在的低能量单糖。假果糖的甜度约为蔗糖甜度的70％，溶解度高、口味纯净、质地光滑、理想的口感、无卡路里且低血糖指数。
[0043]
[0044] 阿洛酮糖
[0046]
[0047] 海藻酮糖是一种由葡萄糖和果糖组成的二糖碳水化合物，也称为1-O-α-D-吡喃葡萄糖基-β-D-呋喃果糖，比其结构异构体蔗糖更易溶于水。这种糖具有甜味并且具有与蔗糖非常相似的物理和感官特性。
[0048]
[0049] 酶的实例如在US20150361473和US20150344865中所公开的。
[0050] 一般而言，本发明涉及使用对汁液中存在的糖具有特异性的酶来修饰糖成分，并将它们转化为其异构体或差向异构体。所用的酶是通过在由FDA GRAS认证的生物体中分离或生产的。
[0051] 出于经济原因，优选使用固定床形式的固定化酶，含糖汁液溶液以预定流速通过该固定床以获得期望的糖成分。也可以使用具有不同酶复合物的多个固定床反应器来获得低血糖和释放延长的糖。
[0052] 本发明上下文中的术语“固定化酶”理解为酶复合物，其与基质结合或包封在基质中，使得酶复合物能够作用于底物(诸如糖)而不浸入水反应介质中。
[0053] 酶的固定化，例如，以不溶性交联酶的形式聚集，其中载体基质可以是天然的或合成的。天然材料包括多糖如藻酸盐、琼脂糖、琼脂糖凝胶(sepharose)、纤维素及其衍生物(如DEAE或CM纤维素)并且合成的有机聚合物可以是聚苯乙烯衍生物、聚丙烯酸酯、Duolite等。用于固定化的优选的基质是藻酸钙或Duolite。选择DUOLITETM A-568是优选的，因为该基质适用于该实施方式的所有酶，能够承受较高温度并保持酶活性。
[0054] 有利地是，转化糖是不可发酵的并且延长了转化汁液的自我寿命。还有利的是，改变汁液的pH值以使酶活性最大化并且在所需的时间段后将转化汁液的pH调节至原始pH值并且保留天然组分而没有与原始汁液相当的汁液甜味。
[0055] 存在于汁液中的致龋糖可以通过酶部分/完全转化为非致龋糖。
[0056] 本发明提供了用于生产含有低血糖的汁液的方法。汁液包括甘蔗汁、甜高粱汁、甜菜汁、橙汁和葡萄汁。每种汁液中糖成分的量不同，取决于季节、品种、地点和收获时间以及加工前储存的方法。本发明的原始汁液的各种糖浓度是说明性的。作为实例，在下表中提到了新鲜收获的甘蔗原始汁液和甜高粱原始汁液；其中汁液的pH值为约6.0。
[0057] 表1
[0058]
[0059] 表2
[0060]
[0061] 作为实例，在下表中提到了新鲜制备的水果汁的糖成分。水果汁本身通常是酸性的，其中该汁液的pH为约4.5。
[0062]
[0063] 在某些实施方式中，致龋糖是单糖或二糖中的一种或多种。在某些实施方式中，致龋糖是蔗糖、葡萄糖或果糖中的一种或多种。
[0064] 在某些实施方式中，非致龋糖选自包括异麦芽酮糖、海藻酮糖和阿洛酮糖的组。
[0065] 在某些实施方式中，酶选自包括异麦芽酮糖合成酶、蔗糖异构酶、木糖异构酶和D-阿洛酮糖差向异构酶的组，并且任选地连同酶转化酶。在某些实施方式中，本发明提供了通过将汁液与固定化的D-阿洛酮糖3-差向异构酶一起温育来将存在于汁液中的果糖转化为D-阿洛酮糖的方法。
[0066] 在某些实施方式中，本发明提供了通过将汁液与固体化异麦芽酮糖合成酶和/或蔗糖异构酶一起温育来将存在于汁液中的蔗糖转化成异麦芽酮糖和/或海藻酮糖的方法。这些生物转化单独地或组合地提供了汁液中糖成分的不同组合。
[0067] 实施例
[0068] 现在将通过以下实施例来说明本发明，应理解的是，这旨在解释本发明，并且决不限制其范围。
[0069] 实施例1
[0070] 使用异麦芽酮糖合成酶或蔗糖异构酶改变甘蔗糖成分
[0071] 为了改变存在于甘蔗汁中的糖，该汁液通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的甘蔗汁的pH值为5.8±0.2。新鲜制备的汁液含有7.6±0.1％蔗糖、2.2±0.1％葡萄糖和3.2±0.1％果糖。为了将蔗糖转化为异麦芽酮糖和/或海藻酮糖，将汁液(1mL)与固定在DUOLITETM上的纯化的异麦芽酮糖合成酶和/或蔗糖异构酶酶(20IU)接触，并使其在35℃下生物转化2至4h。生物转化后，将汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购的蔗糖、异麦芽酮糖和海藻酮糖标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。当汁液与ISase接触时>98％的蔗糖在给定条件下转化为蔗糖异构体，诸如异麦芽酮糖(>82％)和海藻酮糖(>16％)。异麦芽酮糖和海藻酮糖的量分别达到存在于甘蔗汁中的总糖的>50％和>9％。
[0072] 实施例2
[0073] 用多种酶改变甘蔗糖成分
[0074] 为了改变存在于甘蔗汁中的糖，汁液通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的甘蔗汁的pH值为5.8±0.2。新鲜制备的汁液含有7.6±0.1％蔗糖、2.2±0.1％葡萄糖和3.2±0.1％果糖。为了将现有的蔗糖、葡萄糖和果糖转化成异麦芽酮糖和/或海藻酮糖和阿洛酮糖，将汁液(1mL)与固定在DUOLITETM上的纯化的异麦芽酮糖合成酶或蔗糖异构酶酶、木糖异构酶和D-阿洛酮糖差向异构酶(20IU)接触，并使其在45-50℃下生物转化2至4h。生物转化后，对汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购蔗糖、异麦芽酮糖、海藻酮糖标准品、葡萄糖、果糖和阿洛酮糖(Sigma Aldrich)确认糖峰。当汁液与上述酶接触时>89％蔗糖在给定条件下转化为蔗糖异构体，诸如异麦芽酮糖(>79％)和海藻酮糖(>10％)。异麦芽酮糖和海藻酮糖的量分别达到存在于甘蔗汁中的总糖的>44％和>6％。通过同时添加DPEase和XIase，存在于甘蔗汁中的果糖转化为阿洛酮糖(>30％)。阿洛酮糖的量达到存在于甘蔗汁中的总糖的7％至8％。
[0075] 实施例3
[0076] 使用多种酶通过转化、异构化和差向异构化改变甘蔗糖成分
[0077] 为了改变存在于甘蔗汁中的糖，汁液通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的甘蔗汁的pH值为5.8±0.2。新鲜制备的汁液含有7.6±0.1％蔗糖、2.2±0.1％葡萄糖和3.2±0.1％果糖。为了将现有的蔗糖转化为葡萄糖、果糖和阿洛酮糖，将汁液(1mL)与固定在DUOLITETM上的纯化的转化酶、木糖异构酶和D-阿洛酮糖差向异构酶(20IU)接触，并使其在45-50℃下生物转化2至4h。生物转化后，对汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购蔗糖、葡萄糖、果糖和阿洛酮糖(Sigma Aldrich)确认糖峰。当汁液与转化酶接触时，>
98％的蔗糖在给定的条件下转化为48:52比例的葡萄糖和果糖。通过同时添加DPEase和XIase，存在于蔗汁中的果糖转化成阿洛酮糖(>30％)。阿洛酮糖的量达到存在于甘蔗汁中总糖的7％至8％。
98％的蔗糖在给定的条件下转化为48:52比例的葡萄糖和果糖。通过同时添加DPEase和XIase，存在于蔗汁中的果糖转化成阿洛酮糖(>30％)。阿洛酮糖的量达到存在于甘蔗汁中总糖的7％至8％。
[0078] 实施例4
[0079] 使用异麦芽酮糖合成酶或蔗糖异构酶改变甜高粱杆糖成分
[0080] 为了改变存在于甜高粱杆汁中的糖，汁液通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的水果汁pH值为5.8±0.2。新鲜制备的汁液含有5.2±0.1％蔗糖、4.4±0.1％葡萄糖和3.6±0.1％果糖。为了将现有的蔗糖转化为异麦芽酮糖和/或海藻酮糖，将汁液(1mL)与固定在DUOLITETM上的纯化的异麦芽酮糖合成酶或蔗糖异构酶酶(20IU)接触，并使其在35℃下生物转化2至4h。生物转化后，对汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购蔗糖、异麦芽酮糖和海藻酮糖标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。当汁液与ISase接触时，>89％蔗糖在给定条件下转化为稀有蔗糖异构体，诸如异麦芽酮糖(>78％)和海藻酮糖(>8％)。异麦芽酮糖和海藻酮糖的量分别达到存在于甜高粱杆汁中的总糖的>31％和>3％。
[0081] 实施例5
[0082] 用多种酶改变甘蔗糖成分
[0083] 为了改变存在于甘蔗汁中的糖，汁液通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的甜高粱汁pH值为5.8±0.2。新鲜制备的汁液含有5.2±0.1％蔗糖、4.8±0.1％葡萄糖和3.6±0.1％果糖。为了将现有的蔗糖、葡萄糖和果糖转化成异麦芽酮糖和/或海藻酮糖和阿洛酮糖，将汁液(1mL)与固定在DUOLITETM上的纯化的异麦芽酮糖合成酶或蔗糖异构酶酶、木糖异构酶和D-阿洛酮糖差向异构酶(20IU)接触，并使其在45-50℃下生物转化2至4hrs。生物转化后，将汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购蔗糖、异麦芽酮糖、海藻酮糖标准品、葡萄糖、果糖和阿洛酮糖(Sigma Aldrich)确认糖峰。当汁液与上述酶接触时，>
89％蔗糖在给定条件下转化为稀有蔗糖异构体，诸如异麦芽酮糖(>57％)和海藻酮糖(>
7％)。异麦芽酮糖和海藻酮糖的量分别达到存在于甘蔗汁中的总糖的>22％和>3％。通过同时添加DPEase和XIase，存在于蔗汁中的果糖转化为阿洛酮糖(>30％)。阿洛酮糖的总量达到存在于甜高粱杆汁中总糖的37％。
89％蔗糖在给定条件下转化为稀有蔗糖异构体，诸如异麦芽酮糖(>57％)和海藻酮糖(>
7％)。异麦芽酮糖和海藻酮糖的量分别达到存在于甘蔗汁中的总糖的>22％和>3％。通过同时添加DPEase和XIase，存在于蔗汁中的果糖转化为阿洛酮糖(>30％)。阿洛酮糖的总量达到存在于甜高粱杆汁中总糖的37％。
[0084] 实施例6
[0085] 使用多种酶通过转化、异构化和差向异构化改变甜高粱杆糖成分
[0086] 为了改变甜高粱杆汁中存在的糖，汁液是通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的甜高粱汁的pH值为5.8±0.2。新鲜制备的汁液含有5.2±0.1％的蔗糖、4.38±0.1％的葡萄糖和3.6±0.1％的果糖。为了将现有的蔗糖转化为葡萄糖、果糖和阿洛酮糖，将汁液(1mL)与固定在DUOLITETM上的纯化的转化酶、木糖异构酶和D-阿洛酮糖差向异构酶(20IU)接触，并使其在45-50℃生物转化2至4h。生物转化后，对汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购蔗糖、葡萄糖、果糖和阿洛酮糖(Sigma Aldrich)确认糖峰。当汁液与转化酶接触时，>98％的蔗糖在给定的条件下转化为48:52比例的葡萄糖和果糖。通过同时添加DPEase和XIase，存在于蔗汁中的果糖转化成阿洛酮糖(>30％)。阿洛酮糖的量达到甘蔗汁中总糖的14％至15％。
[0087] 实施例7
[0088] 改变葡萄汁糖成分
[0089] 为了改变存在于葡萄汁中的糖，汁液通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的水果汁的pH值为3.65。新鲜制备的汁液含有7.5±0.1％的葡萄糖和7.8±0.1％的果糖。为了分别通过XIase和/或DPEase酶将现有的葡萄糖转化成果糖和/或果糖转化成阿洛酮糖，在生物转化之前将汁液的pH调节至8.0。使用NaOH/Na2CO3将pH调节至8.0时，糖分布保持不变。然后，将汁液(1mL)与固定在DUOLITETM上的酶(20IU)接触，并使其在45℃至50℃生物转化至少4h。生物转化后，使用Zorbex碳水化合物柱对汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购葡萄糖、果糖和阿洛酮糖标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。当与XIase温育时，葡萄糖成分和果糖成分分别从7.5±0.1％和7.8±0.1％变为7.3±0.1％和7.9±
0.1％。当汁液与DPEase接触时，>17％的果糖在给定的条件下转化为阿洛酮糖。同时添加DPEase和XIase，由于通过XIase的从葡萄糖向果糖的互相转化使得果糖浓度增加，因此阿洛酮糖的形成进一步增加至>21％。阿洛酮糖的量达到存在于葡萄汁中总糖的9％至11％。
0.1％。当汁液与DPEase接触时，>17％的果糖在给定的条件下转化为阿洛酮糖。同时添加DPEase和XIase，由于通过XIase的从葡萄糖向果糖的互相转化使得果糖浓度增加，因此阿洛酮糖的形成进一步增加至>21％。阿洛酮糖的量达到存在于葡萄汁中总糖的9％至11％。
[0090] 实施例8
[0091] 改变葡萄汁糖成分
[0092] 为了改变存在于葡萄汁中的糖，汁液通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的水果汁的pH值为3.65。新鲜制备的汁液含有7.5±0.1％的葡萄糖和7.8±0.1％的果糖。为了分别通过XIase和/或DPEase酶将现有的葡萄糖转化成果糖和/或果糖转化成阿洛酮糖，将汁液的pH调节至8.0。在生物转化之前，使用NaOH/Na2CO3将pH调节至8.0时，糖分布保持不变。然后，将汁液(1mL)与固定在DUOLITETM上的酶(20IU)接触并使其在45℃至50℃生物转化至少4h。生物转化后，使用Zorbex碳水化合物柱对汁液溶液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购葡萄糖、果糖和阿洛酮糖(也称为假果糖(Psicose))标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。当与XIase温育时，葡萄糖成分和果糖成分分别从7.5±0.1％和7.8±
0.1％变为7.5±0.1％和7.8±0.1％。当汁液与DPEase接触时，>25％的果糖在给定条件下转化为阿洛酮糖。同时添加DPEase和XIase，由于通过XIase的从葡萄糖向果糖的互相转化使得果糖浓度增加，阿洛酮糖的形成进一步增加至>26％。阿洛酮糖的量达到存在于葡萄汁中总糖的12％至13％。
0.1％变为7.5±0.1％和7.8±0.1％。当汁液与DPEase接触时，>25％的果糖在给定条件下转化为阿洛酮糖。同时添加DPEase和XIase，由于通过XIase的从葡萄糖向果糖的互相转化使得果糖浓度增加，阿洛酮糖的形成进一步增加至>26％。阿洛酮糖的量达到存在于葡萄汁中总糖的12％至13％。
[0093] 实施例9
[0094] 改变橙汁糖成分
[0095] 为了改变存在于葡萄汁中的糖，汁液通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的水果汁的pH值为3.25。新鲜制备的汁液含有1.84±0.1％葡萄糖，1.79±0.1％和果糖。为了分别通过XIase和/或DPEase将现有的葡萄糖转化成果糖和/或果糖转化成阿洛酮糖，在生物转化之前将汁液的pH调节至8.0。使用NaOH/Na2CO3将pH调节至8.0时，糖分布保持不变。然后，将汁液(1mL)与固定在DUOLITETM上的酶(20IU)接触并使其在45℃至50℃生物转化至少4h。生物转化后，使用Zorbex碳水化合物柱对汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购葡萄糖、果糖和阿洛酮糖(也称为假果糖)(Sigma Aldrich)确认糖峰。当与XIase温育时，葡萄糖成分和果糖成分分别从1.82±0.1％和1.78±0.1％变为1.72±0.1％和1.84±
0.1％。当汁液与DPEase酶接触时，>20％的果糖在给定的条件下转化为阿洛酮糖。同时添加DPEase和XIase，由于通过XIase的从葡萄糖向果糖的互相转化使得果糖浓度增加，阿洛酮糖的形成进一步增加至>21％。阿洛酮糖的量达到存在于橙汁中总糖的6％至7％，而阿洛酮糖的量达到存在于橙汁中总单糖的10％至11％。
0.1％。当汁液与DPEase酶接触时，>20％的果糖在给定的条件下转化为阿洛酮糖。同时添加DPEase和XIase，由于通过XIase的从葡萄糖向果糖的互相转化使得果糖浓度增加，阿洛酮糖的形成进一步增加至>21％。阿洛酮糖的量达到存在于橙汁中总糖的6％至7％，而阿洛酮糖的量达到存在于橙汁中总单糖的10％至11％。
[0096] 实施例10
[0097] 改变橙汁糖成分
[0098] 按照类似于实施例9中所描述的程序，分别通过XIase和/或DPEase将现有的葡萄糖转化为果糖和/或果糖转化为阿洛酮糖。生物转化后，使用Zorbex碳水化合物柱对汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购葡萄糖、果糖和阿洛酮糖(也称为假果糖)(Sigma Aldrich)确认糖峰。当与XIase温育时，葡萄糖成分和果糖成分分别从1.82±0.1％和1.78±0.1％变为1.72±0.1％和1.84±0.1％。当汁液与DPEase接触时，>20％的果糖在给定的条件下转化为阿洛酮糖。同时添加DPEase和XIase，由于通过XIase的从葡萄糖向果糖的互相转化使得果糖浓度增加，阿洛酮糖的形成进一步增加至>21％。阿洛酮糖的量达到存在于橙汁中总糖的6％至7％，而阿洛酮糖的量达到存在于橙汁中总单糖的10％至11％。
[0099] 实施例11
[0100] 使用多种酶改变橙汁糖成分
[0101] 为了改变存在于橙汁中的糖，汁液通过破碎和随后的澄清新鲜制备。新鲜制备的水果汁的pH值为3.25。新鲜制备的汁液含有1.82±0.1％葡萄糖、1.79±0.1％果糖和2.2±0.1％蔗糖。按照类似于实施例9中描述的程序，以通过XIase和/或DPEase和/或ISase酶将现有的葡萄糖转化为果糖和/或果糖转化为阿洛酮糖和/或蔗糖转化为异麦芽酮糖。生物转化后，对汁液进行HPLC分析以鉴定和测量糖成分。用商购葡萄糖、果糖、阿洛酮糖(也称为假果糖)、蔗糖和异麦芽酮糖(也称为帕拉金糖paltinose)标准品(Sigma Aldrich)确认糖峰。
当同时添加DPEase、XIase和ISae时，在给定条件下葡萄糖成分和果糖成分从1.82±0.1％和1.79±0.1％变为1.49±0.1％和1.37±0.1％，并且>35％的果糖转化成阿洛酮糖，>27％蔗糖转化为异麦芽酮糖。阿洛酮糖的量达到了存在于橙汁中总单糖的20％，而异麦芽酮糖的量达到了存在于橙汁中总蔗糖的27％。
当同时添加DPEase、XIase和ISae时，在给定条件下葡萄糖成分和果糖成分从1.82±0.1％和1.79±0.1％变为1.49±0.1％和1.37±0.1％，并且>35％的果糖转化成阿洛酮糖，>27％蔗糖转化为异麦芽酮糖。阿洛酮糖的量达到了存在于橙汁中总单糖的20％，而异麦芽酮糖的量达到了存在于橙汁中总蔗糖的27％。
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