一种提取鲍肝胰腺RNA的方法
专利汇可以提供一种提取鲍肝胰腺RNA的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及分子 生物 学技术领域，特别涉及一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，具体为：鲍肝胰腺在液氮中 磨碎 后用Trizol进行组织裂解，加入氯仿乳化，用异丙醇和5M NaCl沉淀，后转入RNA 吸附 柱中，经75% 乙醇 和5M NaCl溶液洗涤，再经75%乙醇洗涤后用RNase-free 水 溶解得到鲍肝胰腺总RNA，总RNA经75%乙醇和5M NaCl二次沉淀和后续再纯化，最终得到高 质量 的鲍肝胰腺总RNA，本发明不仅可彻底消除鲍肝胰腺总RNA沉淀过程中产生的褐色沉淀，使得到的鲍肝胰腺总RNA质量好、浓度高、 稳定性 好，而且操作简单、成本低廉；同时，对其它多糖和色素含量高的水产动物组织总RNA的提取有借鉴作用。，下面是一种提取鲍肝胰腺RNA的方法专利的具体信息内容。
1.一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取鲍肝胰腺，在液氮中磨碎后，转入含有Trizol的RNase-free EP管中，混匀后离心，取上清液转入新的RNase-free EP管中；
S2、往步骤S1的上清液中加入1/5上清液体积的氯仿，混匀充分乳化呈乳白色，室温静置2-5 min，离心后取上清液转入新的RNase-free EP管中；
S3、往步骤S2的上清液中分别加入与上清液等体积的异丙醇和5 mol/L NaCl，混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入RNA吸附柱中，离心后弃掉收集管中的液体；
S4、往步骤S3的RNA吸附柱中加入75%乙醇和5 mol/L NaCl，室温静置2-5 min，离心后弃掉液体；
S5、往步骤S4的RNA吸附柱中加入75%乙醇，室温静置2-5 min，离心后弃掉液体；
S6、将步骤S5的RNA吸附柱放入2 mL收集管中，离心2-3 min；
S7、将步骤S6的RNA吸附柱充分晾干；
S8、将步骤S7的RNA吸附柱转入一个新的无RNase的1.5 mL离心管中，加入RNase-free水，室温放置2-5 min，离心后得到鲍肝胰腺总RNA；
S9、往步骤S8的离心管中加入75%乙醇和5 mol/L NaCl进行二次沉淀，充分混合后静置
2-5 min，将混合物转入RNA吸附柱中，离心后弃掉收集管中的液体；
S10、重复步骤S5-S8，最终得到高质量的鲍肝胰腺总RNA。
2.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，所述鲍肝胰腺的用量为50-70 mg。
3.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S1中所述Trizol的用量为1 mL。
4.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S4、S9中所述的75%乙醇和5mol/L NaCl的添加量均为300 μL。
5.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S4和步骤S5的整个操作均重复1次。
6.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S5中所述的
75%乙醇的添加量为500-600 μL。
7.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，在步骤S7中，将步骤S6的RNA吸附柱在室温下放置5-10 min，或者置于超净工作台通风3-5 min，以充分晾干。
8.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S8中所述的RNase-free水的添加量为30-100 μL。
9.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S1中所述的离心为4 ℃、12000 rpm离心5 min，步骤S2中所述的离心为4 ℃、12000 rpm离心10 min，步骤S3、S4、S5、S9中所述的离心均为4 ℃ 、12000 rpm离心30 s，步骤S6、S8中所述的离心为4 ℃、12000 rpm离心2 min。
10.根据权利要求1所述的一种提取鲍肝胰腺RNA的方法，其特征在于，步骤S10中，步骤S5-S8重复1次。
一种提取鲍肝胰腺RNA的方法
技术领域
背景技术
发明内容
S1、取鲍肝胰腺，在液氮中磨碎后，转入含有Trizol的RNase-free EP (eppendorf)管中（该EP管一般为1.5 mL管），混匀后离心，取上清液转入新的RNase-free EP管中；
S2、往S1的上清液中加入1/5上清液体积的氯仿，通过震荡等方式混匀充分乳化呈乳白色，室温静置2-5 min，离心后取上清液转入新的RNase-free EP管中；
S3、往S2的上清液中分别加入与上清液等体积的异丙醇和5mol/L NaCl（即5 M NaCl），混匀，分两次将得到的溶液和沉淀一起转入RNA吸附柱中，离心后弃掉收集管中的液体；
S4、往S3的RNA吸附柱中加入75%体积分数的乙醇和5 M NaCl，室温静置2-5 min，离心后弃掉收集管中的液体；
S5、往S4的RNA吸附柱中加入75%体积分数的乙醇，室温静置2-5 min，离心后弃掉收集管中的液体；
S6、将S5的RNA吸附柱放入2 mL收集管中，离心2-4 min；
S7、将S6的RNA吸附柱充分晾干；
S8、将S7的RNA吸附柱转入一个新的无RNase的1.5 mL离心管中，加入RNase-free水室温放置2 min，离心后得到鲍肝胰腺总RNA；
S9、往S8的离心管中加入75%体积分数的乙醇和5 M NaCl进行二次沉淀，充分混合后静置2-5 min，将混合物转入RNA吸附柱中，离心（该离心时间一般为30s）后弃掉收集管中的液体；
S10、重复步骤S5-S8，最终得到高质量的鲍肝胰腺总RNA。
（2）得到的鲍肝胰腺总RNA质量好、浓度高、稳定性好，克服了市售RNA提取试剂盒提取得到总RNA纯度不高且提取质量参差不齐的问题；（3）对其它多糖和色素含量高的水产动物组织总RNA的提取有借鉴作用；（4）操作步骤简单、成本低廉。
附图说明
图3为经过本发明方法全部步骤后提取得到的皱纹盘鲍肝胰腺总RNA的NanoDrop 2000检测结果；
图4为经过传统Trizol法提取得到的皱纹盘鲍肝胰腺总RNA的NanoDrop 2000检测结果；
图5为经过总RNA提取试剂盒提取得到的皱纹盘鲍肝胰腺总RNA的NanoDrop 2000检测结果；
图6为采用本发明方法提取得到的皱纹盘鲍肝胰腺总RNA的琼脂糖凝胶电泳检测图；
图7为采用本发明方法提取得到的皱纹盘鲍肝胰腺总RNA的Agilent 2100生物分析仪检测分析图；
图8为采用不同提取方法提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA图（a为使用传统Trizol法加入异丙醇离心后产生的褐色沉淀图；b为使用传统Trizol法提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA图；c为使用总RNA提取试剂盒提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA图；d为使用本发明方法提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA图。）；
图9为经过本发明方法步骤S1-S8提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA的NanoDrop 2000检测结果；
图10为经过本发明方法全部步骤后提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA的NanoDrop 2000检测结果；
图11为经过传统Trizol法提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA的NanoDrop 2000检测结果；
图12为经过总RNA提取试剂盒提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA的NanoDrop 2000检测结果；
图13为采用本发明方法提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA的琼脂糖凝胶电泳检测图；
图14为采用本发明方法提取得到的杂色鲍肝胰腺总RNA的Agilent 2100生物分析仪检测分析图。
具体实施方式
S2、往S1的上清液中加入1/5上清液体积的氯仿，用力震荡，充分乳化呈乳白色，室温静置5 min，4 ℃、12000 rpm离心10 min，取上清液转入新的RNase-free EP管中；
S3、往S2的上清液中分别加入与上清液等体积的异丙醇和5 M NaCl，混匀，分两次将得到的溶液和沉淀一起转入RNA吸附柱中，4 ℃、12000 rpm离心30 s，弃掉收集管中的液体；
S4、往S3的RNA吸附柱中加入75%乙醇和5 M NaCl各300 μL，室温静置2 min，4 ℃ 、
12000 rpm离心30 s，弃掉收集管中的液体，重复1次；
S5、往S4的RNA吸附柱中加入600 μL 75%乙醇，室温静置2 min，4 ℃ 、12000 rpm离心
30 s，弃掉收集管中的液体，重复1次；
S6、将S5的RNA吸附柱放入2 mL收集管中，4 ℃、12000 rpm离心2 min；
S7、将S6的RNA吸附柱在室温下放置10 min，或者置于超净工作台通风5 min，以充分晾干；
S8、将S7的RNA吸附柱转入一个新的无RNase的1.5 mL离心管中，加入RNase-free水室温放置2 min，4 ℃、12000 rpm离心2 min，得到鲍肝胰腺总RNA；
S9、往S8的离心管中加入75%体积分数的乙醇和5 M NaCl各300 μL进行二次沉淀，充分混合后静置2 min，将混合物转入RNA吸附柱中，4 ℃ 、12000 rpm离心30 s；
S10、步骤S5-S8重复1次，最终得到高质量的鲍肝胰腺总RNA（如图1-d所示）。
2、4 ℃、12000 rpm离心5 min，取上清液转入新的1.5 mL RNase-free EP管中；
3、加入1/5上清液体积的氯仿，振荡混匀后室温放置5 min；
4、4 ℃、12000 rpm离心10 min；
5、吸取上层水相，至另一干净离心管中；
6、加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置10 min；
7、4 ℃、12000 rpm离心10 min，离心后产生的褐色沉淀（图1-a所示），弃上清，RNA沉于管底；
8、加入1 mL 75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀；
9、4 ℃、8000 rpm离心5 min，弃上清，重复8、9步骤一次；
10、室温晾干或真空干燥10 min；
11、用50 μL RNase-free水溶解RNA样品，得到鲍肝胰腺总RNA（如图1-b所示）。
2、缓慢加入0.5倍体积无水乙醇，混匀。将得到的溶液和沉淀一起转入纯化柱（纯化柱+收集管）中，4℃、12.000 rpm离心30 s，弃掉收集管中的废液；
3、向纯化柱中加入500 uL溶液RPI（使用前按3：2加入无水乙醇，即含40%乙醇），4℃、
12000 rpm离心30 s，弃废液；
4、向纯化柱中加入500 uL溶液RW（使用前按1：4加入无水乙醇，即含80%乙醇），室温静置2min，4℃、12000 rpm离心30 s，弃废液；
5、重复上步操作，去除残余液体；
6、将纯化柱放回2ml收集管中，4℃、12000 rpm空离2 min，去除残余液体；
7、将纯化柱转入一个新的1.5 mL离心管中，加50 uL RNase-free ddH20，室温放置2 min，4 ℃、12000 rpm离心2 min，得到皱纹盘鲍肝胰腺总RNA（如图1-c所示）。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种非油炸方便面及其制备方法 | 2020-05-08 | 830 |
| 一种具有增加骨密度、增强人体免疫力的功能性组合配方奶粉及其生产工艺 | 2020-05-08 | 959 |
| 一种左旋米那普仑缓释胶囊及其制备方法 | 2020-05-08 | 631 |
| 一种无糖汤圆的加工方法 | 2020-05-08 | 95 |
| 一种环保玻璃棉及其制备方法 | 2020-05-08 | 498 |
| 纳米寡肽水溶免洗面膜 | 2020-05-08 | 14 |
| 一种选择性富集微藻中单半乳糖二酰基甘油的方法 | 2020-05-08 | 112 |
| 食糖中硝酸盐检测装置 | 2020-05-08 | 113 |
| 一种啤酒糖化用过滤容器 | 2020-05-11 | 931 |
| 100ml乳果糖溶液保留灌注器 | 2020-05-11 | 807 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
