一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法
专利汇可以提供一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶 发酵 液的发酵方法，属于 生物 与医药技术领域，取备用的12α-羟基类固醇脱氢酶表达基因的重组大肠杆菌为菌种按体积份数为2-6％的接种量接种到新型无菌发酵培养基中进行培养，2h后流加诱导培养基，共计流加8h。该发酵方法是在含12α-羟基类固醇脱氢酶表达基因的重组大肠杆菌为菌种发酵生产12α-羟基类固醇脱氢酶(12α-HSDH)的过程中，以高营养低成本的新型培养基替代传统的LB培养基以及采用过程流加诱导培养基，通过培养，使培养菌菌体 密度 OD(600)达到50～60，同时12α-羟基类固醇脱氢酶的酶活达到700～900U/L。，下面是一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法专利的具体信息内容。
1.一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：取备用的12α-羟基类固醇脱氢酶表达基因的重组大肠杆菌为菌种按体积份数为2-6％的接种量接种到新型无菌发酵培养基中进行培养，2h后流加诱导培养基，共计流加8h。
2.根据权利要求1所述的一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：所述12α-羟基类固醇脱氢酶表达基因的重组大肠杆菌为二级发酵菌种，保存在甘油管，按体积分数为1-5％接种量接入含所述LB液体无菌培养基三角摇瓶中，置于37℃，40-
50RH％，240rpm的摇床中培养12h备用。
3.根据权利要求1所述的一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：所述新型无菌发酵培养基，按重量百分比，包括玉米粉0.1-0.5％、玉米浆2-6％，硝酸盐0.05-0.2％、铵盐0.05-0.2％、氨水0.1-1％、磷酸盐0.1-0.5％、氯化钠0.2-0.5％、硫酸镁0.02-0.05％、硫酸锌0.02-0.05％、消泡剂0.05％、余量为水。
4.根据权利要求3所述的一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：所述新型无菌发酵培养基，按重量百分比，包括玉米粉0.3％、玉米浆4％，硝酸盐
0.075％、铵盐0.075％、氨水0.45％、磷酸盐0.3％、氯化钠0.15％、硫酸镁0.015％、硫酸锌
0.015％、消泡剂0.05％、余量为水。
5.根据权利要求1所述的一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：所述诱导培养基，按重量百分比，包括乳酸0.1-0.5％，乳糖5-10％，甘油2-10％，葡萄糖0.5-2％，铵盐0.05-0.2％，氯化钠0.2-0.5％、硫酸镁0.02-0.05％、硫酸锌0.02-
0.05％、消泡剂0.05％，余量为水。
6.根据权利要求5所述的一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：所述诱导培养基，按重量百分比，包括乳酸0.3％，乳糖7.5％，甘油6％，葡萄糖
1.2％，铵盐0.12％，氯化钠0.35％、硫酸镁0.03％、硫酸锌0.04％、消泡剂0.05％，余量为水。
7.根据权利要求1所述的一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：接种到新型无菌发酵培养基中进行培养时的培养条件为0-3小时温度37℃，3小时后温度25-33℃，0-8小时pH为6-7，8小时后pH为7-8，通入无菌空气同时开启搅拌反应，通过调节通气比0.3～2.0和搅拌功率20～50HZ使溶解氧量0-6小时不低于15％，6小时以后保持在15-30％即可；诱导培养基按照第一个2小时流加流量为5ml/(L*H)，第二个2小时流加流量为15ml/(L*H)，第三个2小时流加流量为35ml/(L*H)，第四个2小时流加流量为20ml/(L*H)，共计流加8h即可。
8.根据权利要求7所述的一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：接种到新型无菌发酵培养基中进行培养时的培养条件为0-3小时温度37℃，3小时后温度29℃，0-8小时pH为6.5，8小时后pH为7.5，通入无菌空气同时开启搅拌反应，通过调节通气比0.3～2.0和搅拌功率20～50HZ使溶解氧量0-6小时不低于15％，6小时以后保持在
22％即可；诱导培养基按照第一个2小时流加流量为5ml/(L*H)，第二个2小时流加流量为
15ml/(L*H)，第三个2小时流加流量为35ml/(L*H)，第四个2小时流加流量为20ml/(L*H)，共计流加8h即可。
9.根据权利要求1所述的一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：发酵15.5-16.5小时放罐。
10.根据权利要求1所述的一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法，其特征在于：发酵16小时放罐。
一种高含量12α-羟基类固醇脱氢酶发酵液的发酵方法
技术领域
背景技术
发明内容
0.5％、硫酸镁0.02-0.05％、硫酸锌0.02-0.05％、消泡剂0.05％、余量为水。
0.015％、硫酸锌0.015％、消泡剂0.05％、余量为水。
0.02-0.05％、消泡剂0.05％，余量为水。
0.05％，余量为水。
具体实施方式
6％，葡萄糖1.2％，铵盐0.12％，氯化钠0.35％、硫酸镁0.03％、硫酸锌0.04％、消泡剂
0.05％，余量为水；接种到新型无菌发酵培养基中进行培养时的培养条件为0-3小时温度37℃，3小时后温度29℃，0-8小时pH为6.5，8小时后pH为7.5，通入通气比为0.3的无菌空气同时开启搅拌功率为20HZ的搅拌进行反应，通过调节通气比0.3～2.0和搅拌功率20～50HZ使溶解氧量0-6小时不低于15％，6小时以后保持在22％即可；诱导培养基按照第一个2小时流加流量为5ml/(L*H)，第二个2小时流加流量为15ml/(L*H)，第三个2小时流加流量为35m1/(L*H)，第四个2小时流加流量为20ml/(L*H)，共计流加8h即可；发酵16小时放罐，发酵液中细胞密度OD(600)达到57，12α-羟基类固醇脱氢酶的酶活达到890U/mL。
20m1/(L*H)，共计流加8h即可；发酵16.5小时放罐，发酵液中细胞密度OD(600)达到56，12α-羟基类固醇脱氢酶的酶活达到781U/mL。
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