技术领域
[0001] 本
发明涉及
化妆品领域，具体涉及一种磷脂包裹复合酵母PCY及其制备方法与应用。
背景技术
[0002] 白皙、靓丽的
皮肤一直是东方女性所向往与追求的，“一白遮三丑”的说法也广为流传。人们希望通过化妆品的使用而得到白皙、透亮的皮肤，或减轻老年斑、黄褐斑等色素沉积。因此祛斑美白类化妆品市场日趋活跃，产品销售与日俱增，已成为护肤类化妆品的主流品种之一。化妆品中各种祛斑美白物质，根据不同的作用机制可分为：(1)酪
氨酸酶活
力抑制剂，如汞及其化合物、氢醌、
苯酚、熊果苷、曲酸等；(2)影响黑色素代谢剂，如维生素A酸等；(3)黑色素还原剂，可将黑色素还原为无色的物质，如维生素C、维生素E及其衍
生物等，但这种还原作用是可逆的；(4)
加速角质层细胞代谢，如果酸、亚油酸等。其中，汞及其化合物、氢醌和苯酚为《化妆品卫生规范》(2007年版)规定的禁用组分，不得加入到化妆品中，但是由于此类物质美白功效突出，市场中的祛斑美白类化妆品屡屡检出此类成分，尤其是汞的含量，往往都是严重超标，这也成了目前祛斑美白类化妆品常见及严重问题所在，严重威胁爱美人士的健康。熊果苷、曲酸、烟酰胺、维生素A酸、维生素C及其衍生物、维生素E及其衍生物等为化妆品中常用的美白功效成分，但是这些美白剂的含量较低，且作用途径单一，而皮肤的肤色往往受到内在自身因素和外在环境因素的双重影响，因而效果上并不尽如人意，安全性也存在
风险。另外，
微生物超标，也乃当今化妆品常见的安全
质量问题，危及消费者的健康与安全。
[0003] 随着化妆品市场加速发展，消费者对护肤品的要求不断提高，人们对化妆品的安全性以及功效性提出了更高的要求，化妆品的研发技术也在不断地改进和提高。功能性好、安全性高的化妆品的发展与原料分不开，而如今原料的开发与生命科学的发展紧密相联。天然活性化妆品原料是指通过精细化工、生物化学技术，将具有独特功能和生物活性的化合物从天然原料中提取分离后制成的化妆品原料。多年来，化妆品一直使用从石油中提炼、合成的原料，相比之下，来源于微生物
发酵产物的原料不仅具有高安全性和微生物分解性，用很少的
能源就可以生产，可以说是一环保型的“
可持续性原料”。不仅如此，这种原料还具有化学合成所无法完成的特殊结构，在功能上有其独到之处。
[0004] 酸乳提取物是一种来源于酸奶的提取物，以新西兰进口乳粉为原料，使用专
门筛选的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌菌株进行发酵并提取而成。其主要成份为乳酸菌在酸奶发酵过程中产生的胞外多糖。酸乳提取物具有消除色斑，提亮肤色的功效，是一种安全有效、天然来源的活性成份。
[0005]
啤酒酵母，
别名蛇麻花、酵母花、酒花，是桑科律草属一种多年生草本蔓性
植物。古人取之为药材，也可制成酒花浸膏。
啤酒酵母性平，味苦，主要成分葎草
酮、鞣质、生物
碱。啤酒酵母所含黄酮类物质对结核杆菌、金黄色葡萄杆菌具有抑制作用，对中枢神经有
镇静催眠作用，因此药疗上主要用于
治疗麻风病，
肺结核，痢疾，消食，腹胀，
失眠等症。啤酒酵母提取物(啤酒花)是从天然啤酒花经
超声波低温瞬时提取发酵，保留了啤酒酵母中多种有效活性成分，具有抗衰老、防皱，增强皮肤弹性等作用。
[0006] 二裂酵母发酵产物溶胞物，为从双歧杆菌中获得的生理溶胞产物，由通过生物技术获得的双歧杆菌溶胞产物组成，包含代谢产物、
细胞质成分、细胞壁组分和多糖复合物。经研究表明，二裂酵母发酵产物溶胞物具有修复细胞损伤甚至防止细胞凋亡的重要作用，能帮助表皮细胞和真皮细胞对抗UVB折现的有害影响，保持细胞活力和细胞完整性，从而起到抗免疫抑制活性并能促进DNA修复，美白、抗衰老的作用。
[0007] 由于人体皮肤有独特的屏障功能，不是所有的有效成分都能进入皮肤发挥其作用。磷脂微囊的双分子膜可包裹脂溶性物质，其中心和各双分子膜之间可分别包裹
水溶性成分和脂溶性成份。磷脂微囊可以作为功效物质的载体，提高活性物的溶解性、
稳定性、生物活性，并促进活性物的透皮吸收，提高其在人体中的生物利用度，使活性物质功效得到充分发挥，大大提高化妆品的性能。
[0008] 目前，市面上已有以啤酒酵母提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物、酸乳提取物为原料制成的化妆品，但未见通过微囊技术将啤酒酵母提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物、酸乳提取物包裹而成的包裹物为原料相关报道。
发明内容
[0009] 为解决上述技术问题，本发明提供了一种磷脂包裹复合酵母PCY及其制备方法。
[0010] 本发明所采用的技术方案如下：
[0011] 一种磷脂包裹复合酵母PCY，由磷脂微囊同时包裹酸乳提取物、啤酒酵母提取液和二裂酵母发酵产物溶胞物而成；其中酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物的重量配比为(0.1-1):(2-20):(3-30)，最佳优选重量配比为0.1:2:3。
[0012] 进一步的，以上所述的磷脂包裹复合酵母PCY，所述酸乳提取物由专门筛选的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌菌株以新西兰进口乳粉为原料进行发酵并提取而得；所述啤酒酵母提取液为天然啤酒花经超声低温瞬时提取后发酵而得；所述二裂酵母发酵产物溶胞物为从双歧杆菌中获得的生理溶胞产物，其组成包含代谢产物、细胞质成分、细胞壁组分和多糖复合物。
[0013] 进一步的，以上所述的磷脂包裹复合酵母PCY，包括以下重量百分比的组分：
[0014] 前磷脂微囊 5-30％[0015] 酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物
混合液 5-50％[0016] 缓冲液 余量[0017] 上述所有组分的重量百分比之和为100％。
[0018] 进一步的，以上所述的磷脂包裹复合酵母PCY，所述前磷脂微囊由磷脂、一元醇和水组成。
[0019] 进一步的，以上所述的磷脂包裹复合酵母PCY，所述缓冲液为pH值为5.5-6.5的组氨酸缓冲液、
磷酸缓冲液、
醋酸缓冲液或
柠檬酸缓冲液。
[0020] 以上所述的磷脂包裹复合酵母PCY的制备方法，包括以下步骤：
[0021] R1.配制pH值为5.5-6.5的缓冲液；
[0022] R2.制备酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液；
[0023] R3.按照配方量称取前磷脂微囊和R2制备好的混合液，高速剪切搅拌使其混合均匀，得混合液A；
[0024] R4.在高速搅拌下将R3所得混合液A加入按配方量称取的R1配制好的缓冲液中，高速剪切搅拌，即得粒径在10-500nm的磷脂包裹复合酵母PCY。
[0025] 进一步的，以上所述的磷脂包裹复合酵母PCY的制备方法，所述酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液的制备方法为：
[0026] T1.称取酸乳提取物，加pH值为5.5-6.5缓冲液使溶解，过滤，得上清液；
[0027] T2.取步骤T1的上清液，调节pH值至6.0～6.5；
[0028] T3.分别称取啤酒酵母提取液和二裂酵母发酵产物溶胞物，加入步骤T2的溶液中，搅拌均匀后，调节pH值至5.0-6.5，即得。
[0029] 更进一步的，以上所述的磷脂包裹复合酵母PCY的制备方法，所述酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液的制备方法中步骤T1所加pH值为5.5-6.5缓冲液的量为酸乳提取物的量的9倍。
[0030] 以上所述的磷脂包裹复合酵母PCY在制备美白化妆品中的应用。
[0031] 本发明的有益效果在于：
[0032] 1、本发明本产品采用磷脂包裹多种有效活性物，具有较好的祛斑美白功效，同时也具有保湿、抗衰老、增强皮肤弹性等多重功效；经对本发明产品进行重金属、微生物检测，均未检出砷、镉、汞、铅等重金属，微生物检测结果也均符合规定，表明本发明产品使用安全性较高；经本发明产品作为原料制备成化妆品后进行美白功能试验，结果以本发明产品为原料制备成的化妆品的美白效果均优于阳性对照组，而且使用安全，无毒
副作用，克服了目前市面上祛斑美白产品所存在的安全质量问题。
[0033] 2、本发明本产品将酸乳提取物、啤酒酵母提取物、二裂酵母发酵产物溶胞物3种提取物通过特殊磷脂包裹技术加工而成，具有良好的稳定性和较高的水溶解性，与皮肤有很好的相容性，能更加快速、有效的渗透肌肤，帮助皮肤快速吸收，使活性成分得到最大化的利用，且使用安全性高。
[0034] 3、本发明制备方法将磷脂制成包裹载体，有效的解决磷脂在透明产品中应用时容易形成沉淀或出现混浊的难题，制得的磷脂包裹物可以百分百制得半透明溶液且不需要辅助以其他添加剂。
[0035] 4、本发明方法操作简便易行，耗能低、省时、生产成本低，容易实现工业化生产。
具体实施方式
[0036] 下面结合具体
实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明的保护范围和应用范围：
[0037] 一、磷脂包裹复合酵母PCY的制备方法
[0038] 实施例1
[0039] 前磷脂微囊 15％[0040] 酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液 25％[0041] pH值为5.5-6.5柠檬酸缓冲液 60％[0042] R1.配制pH值为5.5-6.5柠檬酸缓冲液：称取19.2g柠檬酸溶于1L纯化水中，搅拌均匀，即得；
[0043] R2.制备乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液：称取酸乳提取物0.5g，加4.5ml R1配制好的缓冲液使溶解，过滤，得上清液，调节pH值至6.5；分别称取啤酒酵母提取液10g和二裂酵母发酵产物溶胞物15g，加入酸乳上清液中，搅拌均匀后，调节pH值至6.0，即得混合液；
[0044] R3.按照配方量称取前磷脂微囊和R2制备好的混合液，高速剪切搅拌使其混合均匀，得混合液A；
[0045] R4.在高速搅拌下将R3所得混合液A加入按配方量称取的R1配制好的缓冲液中，高速剪切搅拌，即得粒径在10-500nm的磷脂包裹复合酵母PCY。
[0046] 实施例2
[0047] 前磷脂微囊 5％[0048] 酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液 5％[0049] pH值为5.0-6.5组氨酸缓冲液 90％[0050] R1.配制pH值为5.0-6.5组氨酸缓冲液：称取25.2g组氨酸溶于1L纯化水中，搅拌均匀，即得；
[0051] R2.制备乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液：称取酸乳提取物1g，加9ml R1配制好的缓冲液使溶解，过滤，得上清液，调节pH值至6.0；分别称取啤酒酵母提取液20g和二裂酵母发酵产物溶胞物30g，加入酸乳上清液中，搅拌均匀后，调节pH值至5.0，即得；
[0052] R3.按照配方量称取前磷脂微囊和R2制备好的混合液，高速剪切搅拌使其混合均匀，得混合液A；
[0053] R4.在高速搅拌下将R3所得混合液A加入按配方量称取的R1配制好的缓冲液中，高速剪切搅拌，即得粒径在10-500nm的磷脂包裹复合酵母PCY。
[0054] 实施例3
[0055] 前磷脂微囊 30％[0056] 酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液 50％[0057] pH值为5.0-6.5磷酸缓冲液 20％[0058] R1.配制pH值为5.0-6.5磷酸缓冲液：称取6.3g磷酸溶于1L纯化水中，搅拌均匀，即得；
[0059] R2.制备乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液：称取酸乳提取物0.1g，加0.9ml R1配制好的缓冲液使溶解，过滤，得上清液，调节pH值至6.4；分别称取啤酒酵母提取液2g和二裂酵母发酵产物溶胞物3g，加入酸乳上清液中，搅拌均匀后，调节pH至6.5，即得；
[0060] R3.按照配方量称取前磷脂微囊和R2制备好的混合液，高速剪切搅拌使其混合均匀，得混合液A；
[0061] R4.在高速搅拌下将R3所得混合液A加入按配方量称取的R1配制好的缓冲液中，高速剪切搅拌，即得粒径在10-500nm的磷脂包裹复合酵母PCY。
[0062] 实施例4
[0063] 前磷脂微囊 8％[0064] 酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液 12％[0065] pH值为5.0-6.5醋酸缓冲液 80％[0066] R1.配制pH值为5.0-6.5醋酸缓冲液：称取2.2g醋酸溶于1L纯化水中，搅拌均匀，即得；
[0067] R2.制备乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液：称取酸乳提取物0.8g，加7.2ml R1配制好的缓冲液使溶解，过滤，得上清液，调节pH值至6.3；分别称取啤酒酵母提取液15g和二裂酵母发酵产物溶胞物25g，加入酸乳上清液中，搅拌均匀后，调节pH至5.6，即得。
[0068] R3.按照配方量称取前磷脂微囊和R2制备好的混合液，高速剪切搅拌使其混合均匀，得混合液A；
[0069] R4.在高速搅拌下将R3所得混合液A加入按配方量称取的R1制备好的缓冲液中，高速剪切搅拌，即得粒径在10-500nm的磷脂包裹复合酵母PCY。
[0070] 实施例5
[0071] 前磷脂微囊 20％[0072] 酸乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液 30％[0073] pH值为5.0-6.5柠檬酸缓冲液 50％[0074] R1.配制pH值为5.0-6.5柠檬酸缓冲液：称取19.2g柠檬酸溶于1L纯化水中，搅拌均匀，即得；
[0075] R2.制备乳提取物、啤酒酵母提取液、二裂酵母发酵产物溶胞物混合液：称取酸乳提取物0.3g，加2.7ml R1配制好的缓冲液使溶解，过滤，得上清液，调节pH值至6.2；分别称取啤酒酵母提取液15g和二裂酵母发酵产物溶胞物25g，加入酸乳上清液中，搅拌均匀后，调节pH至6.2，即得；
[0076] R3.按照配方量称取前磷脂微囊和R2制备好的混合液，高速剪切搅拌使其混合均匀，得混合液A；
[0077] R4.在高速搅拌下将R3所得混合液A加入按配方量称取的R1配制好的缓冲液中，高速剪切搅拌，即得粒径在10-500nm的磷脂包裹复合酵母PCY。
[0078] 二、产品检测
[0079] 对以上实施例1-5的产品进行了重金属和微生物检测，具体情况如下：
[0080] 1.检测样品
[0081] 实施例1-5所得产品。
[0082] 2.检测要求：
[0083] 2.1化学测试(重金属)：砷、镉、汞、铅。
[0084] 2.2微生物检测：菌落总数，霉菌和酵母菌，耐热大肠菌群，
铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌
[0085] 3.检测方法
[0086] 3.1化学测试(重金属)《：化妆品安全技术规范》2015版第四章第一节1.6，采用ICP MS进行分析。
[0087] 3.2微生物检测：参考《化妆品安全技术规范》2015版第五章微生物检验方法[0088] 4.检测结果
[0089] 结果5个实施例产品均未检出砷、镉、汞、铅，重金属检测结果均符合规定；5个实施例产品的微生物检测结果中，菌落总数、霉菌和酵母菌数均＜10，耐热大肠菌群，铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌均未检出，结果均符合规定，表明本发明实施例产品使用安全性高。详见表1和表2。
[0090] 表1各实施例产品重金属检测结果
[0091]
[0092] 表2各实施例产品微生物检测结果
[0093]
[0094] 三、产品应用试验
[0095] 曾将本发明实施例1产品作为原料制成的化妆品(精华液)，具有色素沉着、肤色暗淡皮肤问题的志愿者身上进行试用。应用试验情况如下：
[0096] 1.试验材料
[0097] 1.1试验用样品
[0098] 试验组1：给予本发明实施例1产品作为原料(含量为0.5％)制成的化妆品(精华液)外用，同时以纯化水做空白对照；
[0099] 试验组2：给予本发明实施例1产品作为原料(含量为1.0％)制成的化妆品(精华液)外用，同时以纯化水做空白对照；
[0100] 阳性对照组：给予市售某美白化妆品(精华液)外用，同时以纯化水做空白对照。
[0101] 1.2受试者
[0102] 选择90例具有色素沉着、肤色暗淡皮肤问题志愿者为受试者，年龄：20-60岁，随机平均分成3个组。
[0103] 1.2测试仪器
[0104] 皮肤黑色素和血红素测试仪Mexameter MX18(德国CK公司)。
[0105] 1.3测试指标
[0106] MI值表征黑色素的指标，仪器的测量范围是0～999，测量数值越高，说明皮肤中黑色素含量越高。
[0107] 1.3试验方法：
[0108] (1)选择受试者左、右手臂作为受试区域，随机循环标记；
[0109] (2)由技术人员使用测试仪器进行初始值
数据采集；
[0110] (3)在经过清水清洗过的受试区(同一区域)，每天早晚各一次，试验期间受试部位不能使用除受测样品外的其它任何化妆品；
[0111] (4)受试者分别连续8周使用各试验样品，并在测试期间定期进行数据采集；
[0112] (5)试验期间同时观察受试者及受试区域的皮肤的不良反应。
[0113] 1.4统计学分析
[0115] 1.5计算公式
[0116] (1)
[0117] (2)
[0118] 式中：Tn---受试区域随时间变化数值
[0119] T0---受试区域起始值
[0120] KTn---空白对照区域随时间变化数值
[0121] KT0---空白对照区域起始值
[0122] 1.6结果
[0123] 连续使用8周后，试验组1和2中受试者肌肤的色素减少较明显，尤其试验组2减少得更明显，对照组中受试者肌肤的色素减少得不明显，两个试验组的试验结果明显优于阳性对照组，说明本发明实施例1产品作为原料制备成化妆品是具有较好的美白肌肤的功效，结果详见表3。在试验期间，试验组1和2中受试者及受试区域皮肤均无不适或皮肤红肿、过敏等不良反应情况出现，阳性对照组中2例受试者受试区域皮肤出现红肿、过敏不良反应，说明本发明实施例1产品作为原料制备成化妆品在使用时安全性高，无毒副作用。
[0124] 表3应用试验结果表
[0125]
