专利汇可以提供一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种 皮肤 表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法,包括以下步骤:S1:将皮肤表皮 破碎 ,采用不含血清培养基对皮肤表皮干细胞进行培养,当细胞融合度在65%至75%范围内,移去培养基,换成新鲜不含血清的培养基继续对皮肤表皮干细胞进行培养;S2:去除所述S1中的皮肤表皮干细胞,过滤;S3:将所述S2中过滤后的培养液移入离心管中,低温离心,收集上层液;S4:对所述S3中得到的粗液进行过滤处理,对过滤后的粗液浓缩处理,加入PBS缓冲液,高速离心,去除上清液,收集沉淀;S5:取所得沉淀物,通过电镜进行观察鉴定。本发明操作简单,不需要大型且昂贵的设备就能进行作业,成本低,对皮肤表皮干细胞的外泌体分离纯化度高,提高了实验效率。,下面是一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法专利的具体信息内容。
1.一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1:皮肤表皮干细胞培养:将皮肤表皮破碎,采用不含血清培养基对皮肤表皮干细胞进行培养,当细胞融合度在65%至75%范围内,移去培养基,收集皮肤表皮干细胞,换成新鲜不含血清的培养基继续对皮肤表皮干细胞进行培养;
S2:去除所述S1中的皮肤表皮干细胞,过滤;
S3:将所述S2中过滤后的培养液移入离心管中,低温离心,收集上层液得到皮肤表皮干细胞外泌体粗液;
S4:对所述S3中得到的粗液进行过滤处理,对过滤后的粗液浓缩处理,加入PBS缓冲液,高速离心,去除上清液,收集沉淀;
S5:取所得沉淀物,通过电镜进行观察鉴定。
2.根据权利要求1所述的一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法,其特征在于:
所述皮肤表皮组织为活性组织,其来源可以是人或其他表皮与人相似的动物。
3.根据权利要求1所述的一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法,其特征在于:
所述S1中将皮肤表皮组织破碎成0.8-1mm×0.8-1mm大小的虚。
4.根据权利要求1所述的一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法,其特征在于:
所述S1中对皮肤表皮干细胞进行第二次培养时间在24h至36h范围内,待其细胞融合度在
85%至95%范围内时,再进行以下操作。
5.根据权利要求1所述的一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法,其特征在于:
所述S2中采用0.45μm的过滤膜过滤进行过滤。
6.根据权利要求1所述的一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法,其特征在于:
所述S3中离心条件为:4℃,5000-6000g离心25-35min。
7.根据权利要求1所述的一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法,其特征在于:
所述S4中采用0.22μm的过滤膜过滤进行过滤,高速离心条件为:常温,20000g离心10-
15min。
8.根据权利要求1所述的一种皮肤表皮干细胞外泌体的分离和纯化方法,其特征在于:
所述缓冲液为0.01M PBS缓冲液,缓冲液的PH值在7.3至7.4范围内。
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