专利汇可以提供一种原料中含有人参和附子的药物制剂及其制备方法和质量控制方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种原料中含有人参和附子的药物制剂及其制备方法和 质量 控制方法。该药物制剂中含有人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的 生物 碱 类成分。在每一单位剂量的制剂中,含有人参总皂苷1mg~90mg,人参总多糖2mg~282mg,附子总生物碱0.02mg~22mg。该药物制剂中可以添加或不添加起协同作用的药物。该药物制剂的制备方法为提取人参和附子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分,添加或不添加起协同作用的药物,添加或不添加辅料,制成口服 固体制剂 、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂。本发明还提供了该药物制剂的质量控制方法。,下面是一种原料中含有人参和附子的药物制剂及其制备方法和质量控制方法专利的具体信息内容。
1.一种原料中含有人参和附子的药物制剂,其特征在于所述制剂中含有人参中的皂苷类成分、人参中的多糖类成分、附子中的生物碱类成分。
2.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于所述药物制剂的原料主要为人参、附子,人参∶附子的比例为1-10∶1-10,或1-4∶1-8,或1-2∶1-4,或1∶2。
3.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于所述人参和附子为野生品或人工栽培品,为道地药材或非道地药材。
4.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于所述人参和附子为其鲜药材或依传统方法炮制而成的炮制品或依现代方法炮制而成的炮制品。
5.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于在每一单位剂量的制剂中,含有人参总皂苷1mg~90mg,人参总多糖2mg~282mg,附子总生物碱0.02mg~22mg;或者含有人参总皂苷2mg~60mg,人参总多糖4mg~188mg,附子总生物碱0.05mg~15mg;或者含有人参总皂苷2.5mg~45mg,人参总多糖6mg~141mg,附子总生物碱0.06mg~11mg。
6.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于在每一单位剂量的制剂中,含有人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计为8mg~15mg,人参总多糖以葡萄糖计为25mg~47mg,附子总生物碱0.2mg~3.6mg;或在每一单位剂量的制剂中,含有人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计为16mg~30mg,人参总多糖以葡萄糖计为50mg~94mg,附子总生物碱0.4mg~7.2mg;或在每一单位剂量的制剂中,含有人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计为40mg~75mg,人参总多糖以葡萄糖计为125mg~235mg,附子总生物碱1mg~18mg;或在每一单位剂量的制剂中,含有人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计为2.5mg~5mg,人参总多糖以葡萄糖计为8mg~16mg,附子总生物碱0.06mg~1.2mg。
7.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于在每一单位剂量的制剂中,含乌头类生物碱以乌头碱(C24H47NO11)计,不得高于10.0mg,或不得高于5.0mg,或不得高于3.0mg,或不得高于2.0mg,或不得高于1.0mg。
8.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于所述制剂为口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、或注射剂;所述口服固体制剂可为片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、滴丸剂、固体分散剂、散剂、颗粒剂、微颗粒剂、微丸剂、微囊剂、微球剂、或者其它药学上可接受的口服固体制剂;所述口服液体制剂可为口服液或者其它药学上可接受的口服液体制剂;所述注射剂可为注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂、葡萄糖注射液、氯化钠注射液或者其它药学上可接受的注射剂。
9.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于所述制剂是片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、固体分散剂、口服液、注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂、葡萄糖注射液、或者氯化钠注射液。
10.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于本发明的药物制剂在必要时还含有或使用药物可接受的辅料(或载体),所述辅料为药学上可接受的制剂辅助剂;对于口服固体制剂和口服半固体制剂,所述辅料选自稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、助流剂、抗粘剂、润滑剂、色、香、味及其调节剂、固体分散体载体材料、抗氧化剂、表面活性剂、稳定剂、PH调节剂和其它药学上可接受的口服固体制剂、口服半固体制剂用辅料中的一种或一种以上的物质,每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质;所述稀释剂是选自淀粉、可压性淀粉、糖粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇、硫酸钙、碳酸钙和其它药学上可接受的稀释剂中的一种或一种以上的物质;所述润湿剂是选自乙醇、水和其它药学上可接受的润湿剂中的一种或一种以上的物质;所述粘合剂是选自羟丙甲纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙纤维素、淀粉浆、聚维酮、明胶、聚乙二醇、50%至70%蔗糖溶液、海藻酸钠溶液和其它药学上可接受的粘合剂中的一种或一种以上的物质;所述崩解剂是选自羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、干淀粉、交联聚维酮、泡腾崩解剂和其它药学上可接受的崩解剂中的一种或一种以上的物质;所述助流剂、抗粘剂、润滑剂是选自滑石粉、微粉硅胶、硬脂酸镁、聚乙二醇类、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、氢化植物油和其它药学上可接受的助流剂、抗粘剂、润滑剂中的一种或一种以上的物质;所述色、香、味及其调节剂是选自药用色素、食用色素、香精和其它药学上可接受的色、香、味及其调节剂中的一种或一种以上的物质;所述的固体分散体载体材料是选自聚乙二醇类、纤维素衍生物、有机酸类、表面活性剂类、聚维酮类、糖类与醇类、纤维素类、聚丙烯酸树脂类、β-谷甾醇、胆固醇、胆固醇硬脂酸酯、棕榈酸甘油酯、氢化蓖麻油、蓖麻油蜡、蜂蜡、巴西棕榈蜡和其它药学上可接受的固体分散体载体材料中的一种或一种以上的物质,每类固体分散体载体材料可不选或选用该类固体分散体载体材料中的一种或一种以上的物质;所述的pH调节剂可以是至少一种药学上可接受的用于调节pH值的物质,所述调节pH值的物质是选自碱性化合物、缓冲系统、酸和其它药学上可接受的用于调节pH值的物质中的一种或一种以上的物质;对于口服液体制剂,所述辅料选自溶剂、增溶剂、助溶剂、潜溶剂、防腐剂、矫味剂、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、金属离子络合剂和其它药学上可接受的液体制剂附加剂中的一种或一种以上的物质,每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质;所述的溶剂是选自水、一定浓度的乙醇、甘油、丙二醇和其它药学上可接受的液体制剂用溶剂中的一种或一种以上的物质;所述的防腐剂是选自对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等对羟基苯甲酸酯类、山梨酸及其盐、苯甲酸及其盐、薄荷油和其它药学上可接受的液体制剂用防腐剂中的一种或一种以上的物质;所述的矫味剂是选自蔗糖、单糖浆、果汁糖浆、山梨醇、甘油、甘露醇、糖精钠、薄荷挥发油和其它药学上可接受的液体制剂用矫味剂中的一种或一种以上的物质;对于注射剂,所述辅料选自药学上可接受的注射用溶剂、增溶剂、抑菌剂、抗氧剂、稳定剂、络合剂、镇痛剂、等渗调节剂、缓冲剂、pH调节剂,以及药学上可接受的具有其它辅助功能的药物中的一种或一种以上的物质,每种辅助剂可不选或选用该种辅助剂中的一种或一种以上的物质;所述的注射用溶剂是选自注射用水、一定浓度的乙醇、甘油、丙二醇、苯甲醇和其它药学上可接受的注射用溶剂中的一种或一种以上的物质;所述的增溶剂是选自聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚山梨酯40、聚山梨酯60和其它药学上可接受的注射剂用增溶剂中的一种或一种以上的物质;所述的抑菌剂是选自羟丙丁酯、羟丙甲酯、苯甲醇、苯酚、三氯叔丁醇和其它药学上可接受的注射剂用抑菌剂中的一种或一种以上的物质;所述的抗氧剂是选自焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠和其它药学上可接受的注射剂用抗氧剂中的一种或一种以上的物质;所述的络合剂是选自乙二胺四醋酸二钠、环己二胺四醋酸钠、N-羟基二乙胺三醋酸、二乙基三胺六醋酸和其它药学上可接受的络合剂中的一种或一种以上的物质;所述的pH调节剂是选自一定浓度的氢氧化钠溶液、一定浓度的盐酸溶液、磷酸、醋酸-醋酸钠缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲溶液和其它药学上可接受的pH调节剂中的一种或一种以上的物质;其中所述的注射用冻干制剂还可以在制剂中不加入或加入了一种或一种以上的药物可接受的适量的赋形剂。所述赋形剂选自甘露醇、山梨醇、甘氨酸、乳糖、氯化钠、葡萄糖和其它药学上可接受的赋形剂中的一种或一种以上的物质。所述的赋形剂优选甘露醇、山梨醇。
11.根据权利要求1所述的药物制剂,其特征在于所述的药物制剂中含有量均分子量为30~36×104、8~12×104、3.5~7.5×104的人参的多糖类成分中的一种或几种,其中量均分子量为33.0445×104、或9.8878×104、或5.4087×104的人参的多糖类成分的含量较高。
12.一种权利要求1所述的药物制剂的制备方法,其特征在于所述药物制剂的制备方法为:提取人参和附子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分,添加或不添加起协同作用的药物,添加或不添加辅料,制成一种原料中含有人参和附子的口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂。
13.一种权利要求1所述的药物制剂的制备方法,其特征在于所述药物制剂的制备方法包括以下步骤:一、人参和附子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分的提取:(1)人参的处理:人参采用一定浓度的乙醇提取(提取方法采用回流提取法或超声提取法或渗漉法或浸渍法或连续提取法或减压提取法),所得提取液滤过,滤液回收乙醇至无醇味,调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药0.5~4.5g,用水饱和的正丁醇萃取,合并正丁醇液,回收正丁醇至无正丁醇味,转水溶,滤过,得人参的皂苷类成分中间体,备用;(2)人参药渣的处理:人参被一定浓度的乙醇提取后的药渣先用水提取(提取方法采用煎煮法或回流提取法或超声提取法或渗漉法或浸渍法或连续提取法或减压提取法),所得提取液滤过,调整药液浓度为0.2~2.4g生药/ml,温度为20~70℃,加入85~95%的乙醇醇沉使含醇量达到70~90%,静置过夜,滤过,沉淀干燥,加适量水溶解后,离心,合并上清液(或不离心,滤过后直接调整药液浓度),调整上清液药液浓度为0.7~6g生药/ml,加入85~95%的乙醇使含醇量达60~80%,静置过夜,滤过,沉淀干燥,加适量水溶解后,离心,取上清液(或不离心,滤过后直接取滤液),上一步所得上清液或滤液即为人参的多糖类成分中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备;上一步所得上清液采用截留分子量100K~900K的超滤膜超滤,超滤液即为人参的多糖类成分中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;或将上一步所得上清液先用截留分子量100K~900K的超滤膜超滤,然后将所得超滤液用截留分子量1K~10K的超滤膜除去小分子量杂质,即得人参的多糖类成分中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;(3)附子的处理:附子药材先用水提取(提取方法采用煎煮法或回流提取法或超声提取法或渗漉法或浸渍法或连续提取法或减压提取法),所得提取液滤过,调整药液的相对密度为1.0~1.25,温度20~65℃,用85~95%的乙醇醇沉使乙醇含量达60~80%,静置过夜,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,调整药液的相对密度为1.05~1.45时加入85~95%的乙醇使醇含量达75~90%,静置过夜,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,滤过,即得附子中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备;滤液加热至沸,保持微沸10~60分钟,冷却,冷藏,滤过,即得附子中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味,调整药液至每1ml相当于含人参生药0.7~2.5g,每次加入0.5~3倍量的二氯甲烷萃取2~9次,合并二氯甲烷液,回收二氯甲烷至尽,转水溶,滤过,即得附子中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;二、起协同作用的药物的处理:(4)起协同作用的药物的处理:起协同作用的药物是中药或天然药物的,提取其有效部位或有效成分单体,(精制),水溶,调节pH值至5.5~8.5,滤过,即得中间体,备用;起协同作用的药物是化学药物的,水溶,pH值调至5.5~8.5,滤过,即得中间体,备用;其中用于制备口服固体制剂、口服半固体制剂时可不水溶;三、各药物制剂成品的制备:(5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体,混匀;(6)将“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体合并,混匀,所得药液滤过,浓缩成清膏[或将“(5)”所得药液滤过,浓缩成清膏,与“(4)”未水溶的中间体混合],加入适量的口服固体制剂、口服半固体制剂用辅料混匀,制软材,制粒,烘干,压片或装入胶囊,制成一种原料中含有人参和附子的片或胶囊;(7)将“(5)”所得药液用纯化水或注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.1~2.0g生药/ml,调节pH值至5.5~8.5,加热至沸,保持微沸20~60分钟,冷却,冷藏过夜;滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的口服液体制剂用辅料或不加辅料,或滤液加入适量的口服液体制剂用辅料或不加辅料;混匀,(滤过)],调节pH值至5.5~8.5,加纯化水或注射用水调整体积至全量,测pH值,滤过,按剂量分装至口服液包装容器中,封口,常规方法灭菌,即得一种原料中含有人参和附子的口服液;(8)将“(5)”所得药液用注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.1~2.0g生药/ml,调节pH值至5.5~8.5,加热至沸,保持微沸20~60分钟,冷却,冷藏过夜;滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料或不加辅料,或滤液加入适量的注射剂用辅料或不加辅料;混匀,(滤过)],(调节pH值至5.5~8.5),加入0.02~0.5%活性炭加热至沸,保持微沸10~60分钟,滤过,调节pH值至5.5~8.5,加注射用水调整体积至全量,测pH值,精滤(过0.22~0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器),按剂量分装至注射液包装用容器中,封口,常规方法灭菌,即得一种原料中含有人参和附子的注射液;(9)将“(5)”所得药液用注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.3~2.0g生药/ml,调节pH值至5.5~8.5,加热至沸,保持微沸20~60分钟,冷却,冷藏过夜;滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料,或滤液加入适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料;混匀,(滤过)],调节pH值至5.5~8.5,加入0.02~0.5%活性炭加热至沸,保持微沸10~60分钟,滤过,调节pH值至5.5~8.5,加注射用水调整体积至全量,测pH值,精滤(过0.22~0.50μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器),无菌分装至每支管制注射剂玻璃瓶中含1~8ml药液,冷冻干燥,压盖、轧盖,即得一种原料中含有人参和附子的注射用冻干制剂;(10)冷冻干燥工艺如下:a预冻阶段:普通预冻,预冻温度-60℃~-40℃,预冻时间约2.5~6小时;或选择反复预冻,预冻温度-60℃~-40℃,回温温度-15℃~-7℃,预冻时间约3~9小时;b升华干燥阶段:当冷凝器的温度降至-60℃~-45℃以下,开启真空泵,将搁板的温度设置在-30℃~-15℃,制品慢慢升温,观察升华界面,至游离水全部走净,升华干燥阶段结束;c再干燥阶段:搁板温度慢慢升至-5℃~30℃,用真空度下降法来判断再干燥的终点,再干燥时间3~12小时。
14.根据权利要求13所述的药物制剂的制备方法,其特征在于所述药物制剂的制备方法包括以下步骤:一、人参和附子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分的提取:(1)人参的处理:人参分别加3~9倍量(第一次因为是干药材,多加1~3倍量)60~80%乙醇回流提取或超声提取1~4次,每次0.5~3小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药0.75~3.0g,每次加入0.7~3倍量的水饱和的正丁醇萃取2~9次,合并正丁醇液,回收正丁醇至无正丁醇味,转水溶,滤过,得人参的皂苷类成分中间体,备用;(2)人参药渣的处理:醇提后的人参药渣分别加6~13.5倍量水(第一次因为是干药材,多加1~5倍量)煎煮提取或回流提取2~6次,每次0.5~4小时,合并提取液,滤过,调整药液浓度为0.4~1.6g生药/ml,温度为20~60℃,加入90~95%的乙醇醇沉使含醇量达到75~85%,静置过夜,滤过,沉淀干燥,加适量水溶解后,离心,合并上清液(或不离心,滤过后直接调整药液浓度,用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备),调整上清液药液浓度为1.0~4.0g生药/ml,加入90~95%的乙醇使含醇量达65~75%,静置过夜,滤过,沉淀干燥,加适量水溶解后,离心,取上清液;或不离心,滤过后直接取滤液,用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备;上一步所得上清液或滤液即为人参的多糖类成分中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备;上一步所得上清液采用截留分子量100K~700K的超滤膜超滤,超滤液即为人参的多糖类成分中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;或将上一步所得上清液先用截留分子量100K~700K的超滤膜超滤,然后将所得超滤液用截留分子量1K~8K的超滤膜除去小分子量杂质,即得人参的多糖类成分中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;(3)附子的处理:附子药材加4~12倍量水(第一次因为是干药材,多加1~4倍量),煎煮提取或回流提取2~6次,每次0.5~3小时,合并提取液,滤过,调整药液的相对密度为1.01~1.21,温度20~60℃,用90~95%的乙醇醇沉使乙醇含量达65~75%,静置过夜,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,调整药液的相对密度为1.15~1.40时加入90~95%的乙醇使醇含量达80~90%,静置过夜,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,滤过,即得附子中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备;滤液加热至沸,保持微沸15~55分钟,冷却,冷藏,滤过,即得附子中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味,调整药液至每1ml相当于含人参生药0.8~2.0g,每次加入0.8~2倍量的二氯甲烷萃取3~7次,合并二氯甲烷液,回收二氯甲烷至尽,转水溶,滤过,即得附子中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;二、起协同作用的药物的处理:(4)起协同作用的药物的处理:起协同作用的药物是中药或天然药物的,提取其有效部位或有效成分单体,(精制),水溶,调节pH值至6~8,滤过,即得中间体,备用;起协同作用的药物是化学药物的,水溶,pH值调至6~8,滤过,即得中间体,备用;用于制备口服固体制剂、口服半固体制剂时可不水溶;三、各药物制剂成品的制备:(5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中间体,混匀;(6)将“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中间体合并,混匀,所得药液滤过,浓缩成清膏[或将“(5)”所得药液滤过,浓缩成清膏,与“(4)”未水溶的中间体混合],加入适量的口服固体制剂、口服半固体制剂用辅料混匀,制软材,制粒,烘干,压片或装入胶囊,制成一种原料中含有人参和附子的片或胶囊;(7)将“(5)”所得药液用纯化水或注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.1~1.5g生药/ml,调节pH值至6.0~8.0,加热至沸,保持微沸20~60分钟,冷却,冷藏过夜;滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的口服液体制剂用辅料或不加辅料,或滤液加入适量的口服液体制剂用辅料或不加辅料;混匀,(滤过)],调节pH值至6.0~8.0,加纯化水或注射用水调整体积至全量,测pH值,滤过,按剂量分装至口服液包装容器中,封口,常规方法灭菌,即得一种原料中含有人参和附子的口服液;(8)将“(5)”所得药液用注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.1~1.5g生药/ml,调节pH值至6.0~8.0,加热至沸,保持微沸20~60分钟,冷却,冷藏过夜;滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料或不加辅料,或滤液加入适量的注射剂用辅料或不加辅料;混匀,(滤过)],(调节pH值至6.0~8.0),加入0.02~0.3%活性炭加热至沸,保持微沸10~40分钟,滤过,调节pH值至6.0~8.0,加注射用水调整体积至全量,测pH值,精滤(过0.22~0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器),按剂量分装至注射液包装用容器中,封口,常规方法灭菌,即得一种原料中含有人参和附子的注射液;(9)将“(5)”所得药液用注射用水调整体积至相当于药液浓度为0.5~2.0g生药/ml,调节pH值至6.0~8.0,加热至沸,保持微沸20~60分钟,冷却,冷藏过夜;滤过[或滤液加入“(4)”所得的中间体和适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料,或滤液加入适量的注射剂用辅料、注射用冻干制剂用辅料或不加辅料;混匀,(滤过)],调节pH值至6.0~8.0,加入0.02~0.3%活性炭加热至沸,保持微沸10~40分钟,滤过,调节pH值至6.0~8.0,加注射用水调整体积至全量,测pH值,精滤(过0.22~0.45μm微孔滤膜或相似孔径的垂熔玻璃滤器),无菌分装至每支管制注射剂玻璃瓶中含1~6ml药液,冷冻干燥,压盖、轧盖,即得一种原料中含有人参和附子的注射用冻干制剂;(10)冷冻干燥工艺如下:a预冻阶段:普通预冻,预冻温度-60℃~-45℃,预冻时间约2.5~6小时;或选择反复预冻,预冻温度-60℃~-45℃,回温温度-13℃~-8℃,预冻时间约3~9小时;b升华干燥阶段:当冷凝器的温度降至-60℃~-45℃以下,开启真空泵,将搁板的温度设置在-26℃~-15℃,制品慢慢升温,观察升华界面,至游离水全部走净,升华干燥阶段结束;c再干燥阶段:搁板温度慢慢升至0℃~25℃,用真空度下降法来判断再干燥的终点,再干燥时间3~12小时。
15.根据权利要求14所述的药物制剂的制备方法,其特征在于所述药物制剂的制备方法中的“人参和附子中的人参的皂苷类成分、人参的多糖类成分、附子的生物碱类成分的提取”的方法可以更优选为:(1)人参的处理:人参分别加5~7倍量(第一次因为是干药材,多加1~2倍量)65~75%乙醇回流提取2~3次,每次1.5~2.5小时,合并提取液,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,调整药液浓度至每1ml相当于含人参生药1.0~2.0g,每次加入0.8~1.2倍量的水饱和的正丁醇萃取5~7次,合并正丁醇液,回收正丁醇至无正丁醇味,转水溶,滤过,得人参的皂苷类成分中间体,备用;(2)人参药渣的处理:醇提后的人参药渣分别加8~10倍量水(第一次因为是干药材,多加2~4倍量)煎煮提取或回流提取2~4次,每次1.5~2.5小时,合并提取液,滤过,调整药液浓度为0.6~1.0g生药/ml,温度为20~45℃,加入95%的乙醇醇沉使含醇量达到75~85%,静置过夜,滤过,沉淀干燥,加适量水溶解后,离心,合并上清液(或不离心,滤过后直接调整药液浓度,用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备),调整上清液药液浓度为1.5~2.5g生药/ml,加入95%的乙醇使含醇量达65~75%,静置过夜,滤过,沉淀干燥,加适量水溶解后,离心,取上清液;或不离心,滤过后直接取滤液,用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备;上一步所得上清液或滤液即为人参的多糖类成分中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备;上一步所得上清液采用截留分子量100K~600K的超滤膜超滤,超滤液即为人参的多糖类成分中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;或将上一步所得上清液先用截留分子量100K~600K的超滤膜超滤,然后将所得超滤液用截留分子量1K~8K的超滤膜除去小分子量杂质,即得人参的多糖类成分中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;(3)附子的处理:附子药材加7~9倍量水(第一次因为是干药材,多加1~3倍量),煎煮提取或回流提取2~4次,每次0.5~1.5小时,合并提取液,滤过,调整药液的相对密度为1.05~1.16,温度40~55℃,用95%的乙醇醇沉使乙醇含量达65~75%,静置过夜,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,调整药液的相对密度为1.21~1.35时加入95%的乙醇使醇含量达80~90%,静置过夜,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,滤过,即得附子中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂的制备;滤液加热至沸,保持微沸30~45分钟,冷却,冷藏,滤过,即得附子中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备;或第一次醇沉液回收乙醇至无醇味,调整药液至每1ml相当于含人参生药0.8~1.2g,每次加入0.8~1.2倍量的二氯甲烷萃取4~6次,合并二氯甲烷液,回收二氯甲烷至尽,转水溶,滤过,即得附子中间体,备用,可用于口服固体制剂、口服半固体制剂、口服液体制剂、注射剂的制备。
16.一种权利要求1所述的药物制剂的质量控制方法,其特征在于所述的优选的提供的一种原料中含有人参和附子的注射剂的质量控制方法,包括下述的鉴别、检查、含量测定、指纹图谱;所述的鉴别、检查、含量测定、指纹图谱及其中的单个的具体方法可分别选用或任意组合使用,用于一种原料中含有人参和附子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制;所述的一种原料中含有人参和附子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法如下:[1]鉴别[1.1]人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的鉴别:取制备好的注射剂内容物1.0g,加水30ml溶解,加氯仿30~50ml,振摇,取水液蒸干,残渣加水2ml使溶解,加入水饱和的正丁醇8~12ml超声处理25~40分钟,取正丁醇液置分液漏斗中,加入2~4倍量的氨试液,洗涤,洗液弃去,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取人参药材1g(过60目筛),加乙醇20~40ml,加热回流20~40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml使溶解,滤过,滤液同法制成人参药材溶液。再分别取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量,加甲醇分别制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验,吸取上述四种溶液各2.5~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(14~16∶38~42∶21~23∶9~11)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与人参药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;[1.2]附子的鉴别:取制备好的注射剂内容物3.5g,加水30ml溶解,用氨试液调节pH值至9~11,加乙醚振摇提取2~4次,每次40~50ml,醚液低温蒸干,残渣加无水乙醇2ml使溶解,做为供试品溶液。另取附子药材粗粉20g,置具塞锥形瓶中,加乙醚130~170ml,振摇9~12分钟,加氨试液9~11ml,振摇25~35分钟,放置1~2小时,分取醚层,挥干,残渣加无水乙醇2ml使溶解,作为附子药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述两种溶液各12~30μl,分别点于同一硅胶G薄层板(厚500μm)上,层析缸先以氨水饱和,以石油醚-乙醚-丙酮(4.8~5.2∶2.8~3.2∶2.8~3.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以碘化铋钾试液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与附子药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;[2]检查[2.1]乌头类生物碱的限量检查:[2.1.1]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的乌头碱对照品5mg,精密称定,置50ml量瓶中,加0.01mol/L盐酸溶液使溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得;[2.1.2]标准曲线的制备 精密量取上述对照品溶液0.2~0.3ml、0.4~0.6ml、0.65~0.85ml、0.9~1.1ml、1.4~1.6ml、1.65~1.85ml、1.9~2.1ml,分别置分液漏斗中,分别加入0.01mol/L盐酸溶液1.85~1.65ml、1.6~1.4ml、1.35~1.15ml、1.1~0.9ml、0.6~0.4ml、0.35~0.15ml、0.00ml,分别精密加入醋酸-醋酸钠缓冲液(取0.2mol/L醋酸溶液250ml,用0.2mol/L醋酸钠溶液调pH值至3.1)8~12ml,溴甲酚绿液(取溴甲酚绿50mg,加0.05mol/L氢氧化钠溶液1.6ml研磨使溶解,加水至100ml,用氯仿振摇提取3次,每次30ml,弃去氯仿液)1.5~2.5ml,氯仿8~12ml,振摇2~6分钟,静置,分取氯仿液,随行空白,照分光光度度法(中国药典2005年版一部附录V A)在415nm波长处测定吸光度。以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线;[2.1.3]供试品溶液的制备 取制备好的注射剂内容物0.35g,精密称定,加水10ml溶解,转移至分液漏斗中,加氨试液调节pH值至10~11,用等量的氯仿振摇提取3~5次,合并氯仿液,蒸干。残渣加0.01mol/L盐酸溶液分次溶解,并转入10ml量瓶中,稀释至刻度摇匀,即得;[2.1.4]测定法 精密量取上述供试品溶液2ml,分别置分液漏斗中,照“标准曲线的制备”项下自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起,依法测定吸光度,计算,即得;[2.1.5]制备好的注射剂每支含乌头类生物碱以乌头碱(C24H47NO11)计,不得高于1.0mg;[3]含量测定[3.1]人参皂苷Rg1和Re的含量测定:照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。[3.1.1]色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈-0.1%磷酸溶液(17~23∶75~85)为流动相,检测波长203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于5000;[3.1.2]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rg1及人参皂苷Re对照品适量,精密称定,加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg、人参皂苷Re0.2mg的溶液,即得;[3.1.3]供试品溶液的制备 取装量差异项下的制备好的注射剂内容物0.35g,精密称定,置5ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。[3.1.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10~30μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[3.1.5]制备好的注射剂每支含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量之和应为0.2~2.0mg;[3.2]人参总皂苷的含量测定:[3.2.1]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rb10.3mg的溶液,即得;[3.2.2]标准曲线的制备 精密量取上述人参皂苷Rb1对照品溶液0.05~0.15ml,0.15~0.25ml,0.25~0.35ml,0.35~0.45ml,0.45~0.55ml,0.55~0.65ml,0.65~0.75ml,分别置具塞试管中,挥去溶剂,各加入5%香草醛—冰醋酸溶液(新鲜配制)0.15~0.25ml及高氯酸0.6~1.0ml,于55~65℃水浴上加热12~18min,取出,迅速冷却,加冰醋酸3~7ml,摇匀,同时以相应的试剂作为空白,照分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)于556nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,取样量为横坐标,绘制标准曲线;[3.2.3]样品溶液的制备 取装量差异项下的制备好的注射剂内容物0.35g,精密称定,加蒸馏水10ml溶解,置分液漏斗中,用氯仿振摇提取3~5次,每次8~12ml,弃去氯仿液,水液再以水饱和的正丁醇振摇提取3~5次,每次8~12ml,合并正丁醇液,再用正丁醇饱和的水洗涤2~3次,每次8~12ml,弃去水液,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至10ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,即得;[3.2.4]测定法 精密量取样品溶液0.1ml置具塞试管中,照“标准曲线制备”项下自“挥去溶剂”起依法测定吸光度,计算,即得;[3.2.5]制备好的注射剂每支含人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计,应为2.0~20.0mg;[3.3]人参中多糖类成分的含量测定[3.3.1]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的葡萄糖对照品适量,精密称定,加蒸馏水制成每1ml含葡萄糖0.2mg的溶液,即得;[3.3.2]标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液0.05~0.15ml,0.15~0.25ml,0.25~0.35ml,0.35~0.45ml,0.45~0.55ml,0.55~0.65ml,0.65~0.75ml,0.75~0.85ml,分别置具塞试管中,分别加水使成1.0ml,各精密加入新鲜配制的0.2%蒽酮硫酸(硫酸浓度为80%)溶液6~10ml,摇匀,在100℃水浴中加热8~12分钟,迅速冷却后,随行空白,照分光光度法在620nm波长处测定吸光度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线;[3.3.3]样品溶液的制备 取装量差异项下的制备好的注射剂内容物3.5g,精密称定,加水25~35ml溶解后,加入乙醇使含醇量达75~85%,离心,沉淀挥干乙醇后加入蒸馏水溶解,并定容至100ml量瓶中。取上述溶液1~3ml置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得;[3.3.4]测定法 精密量取0.2ml于具塞试管中,按“标准曲线的制备”项下自“分别加蒸馏水至1.0ml”起依法测定吸光度,计算,即得;[3.3.5]制备好的注射剂每支含人参中的多糖类成分以葡萄糖计,应为4~60mg;[4]指纹图谱参照高效液相色谱法,结合指纹图谱的要求进行测定[4.1]人参药材指纹图谱[4.1.1]药材名称和来源本人参药材指纹图谱中的人参选用红参,红参为五加科植物人参Panaxginseng C.A.Mey.的栽培品(习称“园参”)经蒸制后的干燥根及根茎;[4.1.2]人参药材指纹图谱的测定[4.1.2.1]色谱条件 色谱柱:ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱,填料粒径5μm;流动相:乙腈与水为流动相,梯度条件见下表梯度条件
柱温:25~35℃;分析时间:60~120min;流速:0.6~1.0ml/min;ELSD漂移管100~120℃,载气流速2.0~4.0ml/min。理论板数以人参皂苷Rb1峰计应不低于5000;[4.1.2.2]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品2mg,精密称定,置5ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得;[4.1.2.3]供试品溶液的制备 取红参药材粉末(过20目筛)2g,精密称定,加70%乙醇回流提取2次,每次0.8~1.5小时,第一次加6~8倍量,第二次加5~7倍量;提取液滤过,滤液回收乙醇,浓缩,用等量水饱和的正丁醇振摇提取4~6次,合并正丁醇液,并用等量的氨试液洗涤;洗涤液弃去,正丁醇液蒸干,残渣加水溶解并转移至10ml量瓶中,定容至刻度,摇匀,即得;[4.1.2.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[4.1.2.5]结果 将人参皂苷Rb1峰设定为参照物峰,并以其峰面积的对数作为1.000,根据人参皂苷Rb1峰的保留时间计算,共标定出10个共有峰,其相对保留时间分别为:0.056±10%、0.102±10%、0.372±10%、0.632±10%、0.931±10%、1.000、1.040±10%、1.084±10%、1.181±10%、1.662±10%;并规定相对保留时间为0.632±10%、1.040±10%、1.084±10%、1.181±10%的峰的相对峰面积比(峰面积对数比)为0.682~1.266、0.346~0.644、0.262~0.486、0.103~0.191;[4.2]附子药材指纹图谱[4.2.1]附子药材的名称和来源附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品。本附子药材指纹图谱中的附子选用黑顺片;[4.2.2]附子药材指纹图谱的测定[4.2.2.1]色谱条件 色谱柱:ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱,填料粒径5μm;流动相:甲醇与0.1%磷酸-0.04%三乙胺-水溶液为流动相,梯度条件见下表梯度条件
柱温:25~35℃;检测波长:235nm;分析时间:60~120min;流速:0.7~1.3ml/min;理论板数以新乌头碱峰计算应不低于2000;[4.2.2.2]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的新乌头碱对照品5mg,精密称定,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;[4.2.2.3]供试品溶液的制备 附子药材粗粉10g,用氨试液3~5ml、乙醚40~60ml冷浸过夜,滤过;药渣加乙醚∶氯仿(2.8~3.2∶0.8~1.2)混合溶液40~60ml,超声处理25~40min,滤过,药渣用混合溶液洗涤3~4次,每次14~16ml,洗液与滤液合并,低温蒸干,残渣加甲醇5ml溶解,用0.45μm的滤膜滤过,即可进行测定;[4.2.2.4]测定法 分别精密吸取内标溶液15~25μl和供试品溶液30~50μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[4.2.2.5]结果 将新乌头碱峰设定为参照物峰,根据新乌头碱峰的保留时间计算,共标定出8个共有峰,其相对保留时间分别为:0.146±10%、0.254±10%、0.531±10%、0.630±10%、0.727±10%、0.833±10%、1.000、1.114±10%;并以峰面积最稳定且较大的相对保留时间为0.531±10%的峰之峰面积作为1.000,并规定相对保留时间为0.727±10%、1.114±10%的峰的相对峰面积比为0.182~0.272、0.373~0.552;[4.3]人参皂苷指纹图谱[4.3.1]色谱条件 色谱柱:ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱,填料粒径5μm;乙腈与水为流动相,梯度条件见下表:梯度条件
柱温:25~35℃;分析时间:60~120min;流速:0.6~1.0ml/min;ELSD参数:漂移管100~120℃,载气流速2.0~4.0ml/min。理论板数以人参皂苷Rb1峰计算应不低于5000;[4.3.2]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品2mg,精密称定,置5ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得;[4.3.3]供试品溶液的制备 取制备好的注射剂内容物0.35g,精密称定,加水溶解至8~12ml,用等量的水饱和正丁醇振摇提取4~6次,合并正丁醇液,用等量的氨试液洗涤1~2次,分取正丁醇液,回收正丁醇,残渣用蒸馏水溶解并定容至5ml量瓶中,摇匀,即得;[4.3.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5~15μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[4.3.5]结果 将人参皂苷Rb1峰设定为参照物峰,并以其峰面积的对数作为1.000,根据人参皂苷Rb1峰的保留时间计算,共标定出10个共有峰,其相对保留时间分别为:0.441±10%、0.632±10%、0.942±10%、1.000、1.042±10%、1.062±10%、1.089±10%、1.188±10%、1.701±10%、1.737±10%;并规定相对保留时间为0.441±10%、0.632±10%、1.042±10%、1.089±10%的峰的相对峰面积比(峰面积对数比)分别为0.688~1.148、0.673~1.121、0.692~1.154、0.688~1.146;[4.4]生物碱指纹图谱[4.4.1]色谱条件 色谱柱:ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱,填料粒径5μm;甲醇与0.1%磷酸-0.04%三乙胺水溶液为流动相,梯度条件见下表:梯度条件
柱温25~35℃;检测波长:235nm;分析时间:60~120min;理论板数以新乌头碱峰计算应不低于2000;[4.4.2]内标溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的新乌头碱对照品5mg,精密称定,置25ml量瓶中,加1%磷酸溶液3ml,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;[4.4.3]供试品溶液的制备 精密量取制备好的注射剂内容物1.0g,加水溶解至8~12ml,置分液漏斗中,加氨试液调pH值至9~11,用等量的乙醚-氯仿(2.8~3.2∶0.8~1.2)的混合液振摇提取4~6次,合并萃取液,低温挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,加入内标溶液40~60μl,滤过,作为供试品溶液;[4.4.4]测定法 分别精密吸取内标溶液15~25μl和供试品溶液30~50μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[4.4.5]结果 将新乌头碱峰设定为相对保留时间的参照物峰,根据新乌头碱峰的保留时间计算,共标定出5个共有峰,其相对保留时间分别为:0.259±10%、0.342±10%、0.532±10%、0.724±10%、1.000±10%;并以峰面积最稳定且较大的相对保留时间为0.532±10%的峰之峰面积作为1.000,并规定相对保留时间为0.724±10%的峰的相对峰面积比为0.455~0.683。
17.根据权利要求16所述的药物制剂的质量控制方法,其特征在于所述的一种原料中含有人参和附子的注射液、注射用冻干制剂、注射用无菌分装制剂的质量控制方法,其各具体步骤如下:[1]鉴别[1.1]人参、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的鉴别:取制备好的注射剂内容物1.0g,加水30ml溶解,加氯仿40ml,振摇,取水液蒸干,残渣加水2ml使溶解,加入水饱和的正丁醇10ml超声处理30分钟,取正丁醇液置分液漏斗中,加入3倍量的氨试液,洗涤,洗液弃去,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取人参药材1g(过60目筛),加乙醇30ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水30ml使溶解,滤过,滤液同法制成人参药材溶液。再分别取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品适量,加甲醇分别制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述四种溶液各2.5~5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与人参药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;[1.2]附子的鉴别:取制备好的注射剂内容物3.5g,加水30ml溶解,用氨试液调节pH值至10,加乙醚振摇提取3次,每次45ml,醚液低温蒸干,残渣加无水乙醇2ml使溶解,做为供试品溶液。另取附子药材粗粉20g,置具塞锥形瓶中,加乙醚150ml,振摇10分钟,加氨试液10ml,振摇30分钟,放置1~2小时,分取醚层,挥干,残渣加无水乙醇2ml使溶解,作为附子药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述两种溶液各12~30μl,分别点于同一硅胶G薄层板(厚500μm)上,层析缸先以氨水饱和,以石油醚-乙醚-丙酮(5∶3∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以碘化铋钾试液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与附子药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;[2]检查[2.1]乌头类生物碱的限量检查:[2.1.1]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的乌头碱对照品5mg,精密称定,置50ml量瓶中,加0.01mol/L盐酸溶液使溶解,并稀释至刻度,摇匀,即得;[2.1.2]标准曲线的制备 精密量取上述对照品溶液0.25ml、0.50ml、0.75ml、1.00ml、1.50ml、1.75ml、2.00ml,分别置分液漏斗中,分别加入0.01mol/L盐酸溶液1.75ml、1.50ml、1.25ml、1.00ml、0.50ml、0.25ml、0.00ml,分别精密加入醋酸-醋酸钠缓冲液(取0.2mol/L醋酸溶液250ml,用0.2mol/L醋酸钠溶液调pH值至3.1)10ml,溴甲酚绿液(取溴甲酚绿50mg,加0.05mol/L氢氧化钠溶液1.6ml研磨使溶解,加水至100ml,用氯仿振摇提取3次,每次30ml,弃去氯仿液)2ml,氯仿10ml,振摇3分钟,静置,分取氯仿液,随行空白,照分光光度度法(中国药典2005年版一部附录VA)在415nm波长处测定吸光度。以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线;[2.1.3]供试品溶液的制备 取制备好的注射剂内容物0.35g,精密称定,加水10ml溶解,转移至分液漏斗中,加氨试液调节pH值至10~11,用等量的氯仿振摇提取4次,合并氯仿液,蒸干。残渣加0.01mol/L盐酸溶液分次溶解,并转入10ml量瓶中,稀释至刻度摇匀,即得;[2.1.4]测定法 精密量取上述供试品溶液2ml,分别置分液漏斗中,照“标准曲线的制备”项下自“各精密加醋酸-醋酸钠缓冲液10ml”起,依法测定吸光度,计算,即得;[2.1.5]制备好的注射剂每支含乌头类生物碱以乌头碱(C24H47NO11)计,不得高于1.0mg;[3]含量测定[3.1]人参皂苷Rg1和Re的含量测定:照高效液相色谱法测定;[3.1.1]色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)为流动相,检测波长203nm。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于5000;[3.1.2]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rg1及人参皂苷Re对照品适量,精密称定,加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg10.3mg、人参皂苷Re0.2mg的溶液,即得;[3.1.3]供试品溶液的制备 取 装量差异项下的制备好的注射剂内容物0.35g,精密称定,置5ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。[3.1.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[3.1.5]制备好的注射剂每支含人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量之和应为0.8~1.4mg;[3.2]人参总皂苷的含量测定:[3.2.1]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rb10.3mg的溶液,即得;[3.2.2]标准曲线的制备 精密量取上述人参皂苷Rb1对照品溶液0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml,0.6ml,0.7ml,分别置具塞试管中,挥去溶剂,各加入5%香草醛—冰醋酸溶液(新鲜配制)0.2ml及高氯酸0.8ml,于60℃水浴上加热15min,取出,迅速冷却,加冰醋酸5ml,摇匀,同时以相应的试剂作为空白,照分光光度法于556nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,取样量为横坐标,绘制标准曲线;[3.2.3]样品溶液的制备 取装量差异项下的制备好的注射剂内容物0.35g,精密称定,加蒸馏水10ml溶解,置分液漏斗中,用氯仿振摇提取4次,每次10ml,弃去氯仿液,水液再以水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次10ml,合并正丁醇液,再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次10ml,弃去水液,正丁醇液置水浴上蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至10ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,即得;[3.2.4]测定法 精密量取样品溶液0.1ml置具塞试管中,照“标准曲线制备”项下自“挥去溶剂”起依法测定吸光度,计算,即得;[3.2.5]制备好的注射剂每支含人参总皂苷以人参皂苷Rb1(C54H92O23)计,应为8.0~15.0mg;[3.3]人参中多糖类成分的含量测定[3.3.1]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的葡萄糖对照品适量,精密称定,加蒸馏水制成每1ml含葡萄糖0.2mg的溶液,即得;[3.3.2]标准曲线的制备 精密量取葡萄糖对照品溶液0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml,0.6ml,0.7ml,0.8ml,分别置具塞试管中,分别加水使成1.0ml,各精密加入新鲜配制的0.2%蒽酮硫酸(硫酸浓度为80%)溶液8ml,摇匀,在100℃水浴中加热10分钟,迅速冷却后,随行空白,照分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)在620nm波长处测定吸光度,以浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线;[3.3.3]样品溶液的制备 取装量差异项下的制备好的注射剂内容物3.5g,精密称定,加水30ml溶解后,加入乙醇使含醇量达80%,离心,沉淀挥干乙醇后加入蒸馏水溶解,并定容至100ml量瓶中。取上述溶液2ml置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。[3.3.4]测定法 精密量取0.2ml于具塞试管中,按“标准曲线的制备”项下自“分别加蒸馏水至1.0ml”起依法测定吸光度,计算,即得;[3.3.5]制备好的注射剂每支含人参中的多糖类成分以葡萄糖计,应为27~47mg;[4]指纹图谱参照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID),结合指纹图谱的要求进行测定[4.1]人参药材指纹图谱[4.1.1]药材名称和来源本人参药材指纹图谱中的人参选用红参,红参为五加科植物人参Panaxginseng C.A.Mey.的栽培品(习称“园参”)经蒸制后的干燥根及根茎;[4.1.2]人参药材指纹图谱的测定[4.1.2.1]色谱条件 色谱柱:ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱,填料粒径5μm;流动相:乙腈与水为流动相,梯度条件见下表梯度条件
柱温:30℃;分析时间:60min;流速:0.8ml/min;ELSD漂移管110℃,载气流速3.0ml/min。理论板数以人参皂苷Rb1峰计应不低于5000;[4.1.2.2]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品2mg,精密称定,置5ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得;[4.1.2.3]供试品溶液的制备 取红参药材粉末(过20目筛)2g,精密称定,加70%乙醇回流提取两次,每次1小时,第一次加7倍量,第二次加6倍量;提取液滤过,滤液回收乙醇,浓缩,用等量水饱和的正丁醇振摇提取5次,合并正丁醇液,并用等量的氨试液洗涤;洗涤液弃去,正丁醇液蒸干,残渣加水溶解并转移至10ml量瓶中,定容至刻度,摇匀,即得;[4.1.2.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[4.1.2.5]结果 将人参皂苷Rb1峰设定为参照物峰,并以其峰面积的对数作为1.000,根据人参皂苷Rb1峰的保留时间计算,共标定出10个共有峰,其相对保留时间分别为:0.056±10%、0.102±10%、0.372±10%、0.632±10%、0.931±10%、1.000、1.040±10%、1.084±10%、1.181±10%、1.662±10%;并规定相对保留时间为0.632±10%、1.040±10%、1.084±10%、1.181±10%的峰的相对峰面积比(峰面积对数比)为0.682~1.266、0.346~0.644、0.262~0.486、0.103~0.191;[4.2]附子药材指纹图谱[4.2.1]附子药材的名称和来源附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品;本附子药材指纹图谱中的附子选用黑顺片;[4.2.2]附子药材指纹图谱的测定[4.2.2.1]色谱条件 色谱柱:ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱,填料粒径5μm;流动相:甲醇与0.1%磷酸-0.04%三乙胺-水溶液为流动相,梯度条件见下表梯度条件
柱温:30℃;检测波长:235nm;分析时间:60min;流速:1.0ml/min;理论板数以新乌头碱峰计算应不低于2000;[4.2.2.2]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的新乌头碱对照品5mg,精密称定,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;[4.2.2.3]供试品溶液的制备 附子药材粗粉10g,用氨试液4ml、乙醚50ml冷浸过夜,滤过;药渣加乙醚∶氯仿(3∶1)混合溶液50ml,超声处理30min,滤过,药渣用混合溶液洗涤3~4次,每次15ml,洗液与滤液合并,低温蒸干,残渣加甲醇5ml溶解,用0.45μm的滤膜滤过,即可进行测定;[4.2.2.4]测定法 分别精密吸取内标溶液20μl和供试品溶液40μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[4.2.2.5]结果 将新乌头碱峰设定为参照物峰,根据新乌头碱峰的保留时间计算,共标定出8个共有峰,其相对保留时间分别为:0.146±10%、0.254±10%、0.531±10%、0.630±10%、0.727±10%、0.833±10%、1.000、1.114±10%;并以峰面积最稳定且较大的相对保留时间为0.531±10%的峰之峰面积作为1.000,并规定相对保留时间为0.727±10%、1.114±10%的峰的相对峰面积比为0.182~0.272、0.373~0.552;[4.3]人参皂苷指纹图谱[4.3.1]色谱条件 色谱柱:ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱,填料粒径5μm;乙腈与水为流动相,梯度条件见下表:梯度条件
柱温:30℃;分析时间:60min;流速:0.8ml/min;ELSD参数:漂移管110℃,载气流速3.0ml/min。理论板数以人参皂苷Rb1峰计算应不低于5000;[4.3.2]对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的人参皂苷Rb1对照品2mg,精密称定,置5ml量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀,即得;[4.3.3]供试品溶液的制备 取制备好的注射剂内容物0.35g,精密称定,加水溶解至10ml,用等量的水饱和正丁醇振摇提取5次,合并正丁醇液,用等量的氨试液洗涤1次,分取正丁醇液,回收正丁醇,残渣用蒸馏水溶解并定容至5ml量瓶中,摇匀,即得;[4.3.4]测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[4.3.5]结果 将人参皂苷Rb1峰设定为参照物峰,并以其峰面积的对数作为1.000,根据人参皂苷Rb1峰的保留时间计算,共标定出10个共有峰,其相对保留时间分别为:0.441±10%、0.632±10%、0.942±10%、1.000、1.042±10%、1.062±10%、1.089±10%、1.188±10%、1.701±10%、1.737±10%;并规定相对保留时间为0.441±10%、0.632±10%、1.042±10%、1.089±10%的峰的相对峰面积比(峰面积对数比)分别为0.688~1.148、0.673~1.121、0.692~1.154、0.688~1.146;[4.4]生物碱指纹图谱[4.4.1]色谱条件 色谱柱:ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱,填料粒径5μm;甲醇与0.1%磷酸-0.04%三乙胺水溶液为流动相,梯度条件见下表:梯度条件
柱温30℃;检测波长:235nm;分析时间:60min;理论板数以新乌头碱峰计算应不低于2000;[4.4.2]内标溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的新乌头碱对照品5mg,精密称定,置25ml量瓶中,加1%磷酸溶液3ml,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;[4.4.3]供试品溶液的制备 精密量取制备好的注射剂内容物1.0g,加水溶解至10ml,置分液漏斗中,加氨试液调pH值至10,用等量的乙醚-氯仿(3∶1)的混合液振摇提取5次,合并萃取液,低温挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,加入内标溶液50μl,滤过,作为供试品溶液;[4.4.4]测定法 分别精密吸取内标溶液20μl和供试品溶液40μl,注入液相色谱仪,测定,即得;[4.4.5]结果 将新乌头碱峰设定为相对保留时间的参照物峰,根据新乌头碱峰的保留时间计算,共标定出5个共有峰,其相对保留时间分别为:0.259±10%、0.342±10%、0.532±10%、0.724±10%、1.000±10%;并以峰面积最稳定且较大的相对保留时间为0.532±10%的峰之峰面积作为1.000,并规定相对保留时间为0.724±10%的峰的相对峰面积比为0.455~0.683。
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