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一种卷丹百合提取皂苷的方法

阅读：446发布：2024-01-09

专利汇可以提供一种卷丹百合提取皂苷的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供一种卷丹百合提取皂苷的方法，属于植物提取领域，包括以下步骤：首先以饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，将其清洗后剥离鳞片，将所得鳞片于特定条件下放于乙醇溶液中，并于超声波环境中进行提取，提取后离心分离固形物和上清液，再将所得固形物质采用微波萃取的方式进行提取，提取后再次离心分离固形物和上清液，然后用自制的活性液对所得固形物进行酶解提取，酶解后再将所得物质及所述上清液混合放入大孔树脂的层析柱中进行洗脱，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷，本发明可提高卷丹百合提取皂苷的提取率和纯化率。，下面是一种卷丹百合提取皂苷的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种卷丹百合提取皂苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原料：选取饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；
(2)超声波处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5-6mm的节段后，再向其中加入鳞片4-5倍体积的乙醇溶液，将混合液放于超声波环境中，在温度为45-48℃的条件下提取40-45min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为10000-12000r/min的条件下离心8-10min，分别将所得固形物a和上清液a保留备用；
(3)微波处理：将步骤(2)所述固形物a中加入其3-4倍体积的乙醇溶液，于功率为500-
550W的微波萃取设备中提取3-4min后，放于50-53℃的水浴中提取30-40min，后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为10000-12000r/min的条件下离心7-9min，分别将所得固形物b和上清液b保留备用；
(4)酶解处理：将步骤(3)所述固形物b放入超高压均质机中，按照8-12g/100g的用量加入活性液，于压力为180-200MPa、温度为23-25℃的条件下处理6-8min，得到混合物c；
(5)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b和步骤(4)所述混合物c通过填充有大孔树脂的层析柱，用体积浓度为25-28％的乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。
2.根据权利要求1所述的一种卷丹百合提取皂苷的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述的活性液由下述方法制备：将绿色木霉菌株转接至查式斜面培养基中，在20-24℃下培养
12-14h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为26-28℃、振荡速度为120-140r/min的条件下振荡30-40min，然后稀释成浓度为107-9个/mL的菌悬液，接着将菌悬液放置在距离紫外灯28-32cm处的振荡箱中，于180-200r/min的振荡速度的下反应
12-18s，得到活性液。
3.根据权利要求2所述的一种卷丹百合提取皂苷的方法，其特征在于，所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、硫酸镁、氯化铜、氯化铁、氨基酸、葡萄糖、水按照2-3:0.01-0.02:
0.02-0.04:0.02-0.03:2-3:1-2:1000的质量比混合制成。
4.根据权利要求1所述一种卷丹百合提取皂苷的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述乙醇的体积浓度为70-75％。
5.根据权利要求1所述一种卷丹百合提取皂苷的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述超声波的频率为40-50KHz。
6.根据权利要求1所述一种卷丹百合提取皂苷的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述乙醇的体积浓度为50-55％。

说明书全文

一种卷丹百合提取皂苷的方法

【技术领域】

[0001] 本发明涉及植物提取领域，尤其是一种卷丹百合提取皂苷的方法。【技术背景】

[0002] 卷丹百合，是一种美丽的花卉，花极香，含有芳香油，可作香料，其鳞茎呈球形或近球形，高2.5-5厘米，鳞片白色，富含淀粉，卷丹百合的鳞茎是著名的保健食物，鲜品可用于制作菜肴，麟茎及花均具有养阴润肺、清心安神的功效，可用于治疗阴虚久咳，痰中带血，虚烦惊悸，失弭民多梦，精神恍惚等症。百合是药食两用品，其营养成分主要有蛋白质、多种维生素和胡萝卜素等，其中所含的百合皂苷具有镇静催眠、抗炎、抗肿瘤、抗菌和抗病毒、降低胆固醇、降血糖和免疫调节等多方面的生物活性和药理特性，常食用其加工品对人体非常有益。

[0003] 综上所述，百合具有较高的经济利用价值，但是在提取百合皂苷时还存在诸多问题，例如百合皂苷难以提取，且现有的提取方法难以去除其中的各类杂质，从而导致百合皂苷的提取率和纯化率较低，不能满足当今消费人群的需求。【发明内容】

[0004] 鉴于以上提出的问题，本发明提供了一种卷丹百合提取皂苷的方法，可以较为完全的保持其中的营养成分，还能提高卷丹百合提取皂苷的提取率和纯化率。

[0005] 本发明的技术方案如下：

[0006] 一种卷丹百合提取皂苷的方法，包括以下步骤：

[0007] (1)原料：选取饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；

[0008] (2)超声波处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5-6mm的节段后，再向其中加入鳞片4-5倍体积的乙醇溶液，将混合液放于超声波环境中，在温度为45-48℃的条件下提取40-
45min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为10000-12000r/min的条件下离心8-10min，分别将所得固形物a和上清液a保留备用；

[0009] (3)微波处理：将步骤(2)所述固形物a中加入其3-4倍体积的乙醇溶液，于功率为500-550W的微波萃取设备中提取3-4min后，放于50-53℃的水浴中提取30-40min，后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为10000-12000r/min的条件下离心7-
9min，分别将所得固形物b和上清液b保留备用；

[0010] (4)酶解处理：将步骤(3)所述固形物b放入超高压均质机中，按照8-12g/100g的用量加入活性液，于压力为180-200MPa、温度为23-25℃的条件下处理6-8min，得到混合物c；

[0011] (5)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b和步骤(4)所述混合物c通过填充有大孔树脂的层析柱，用体积浓度为25-28％的乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。

[0012] 进一步地，在步骤(4)中，所述的活性液由下述方法制备：将绿色木霉菌株转接至查式斜面培养基中，在20-24℃下培养12-14h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为26-28℃、振荡速度为100-110r/min的条件下振荡36-40min，然后稀释成浓度为107-9个/mL的菌悬液，接着将菌悬液放置在距离紫外灯28-32cm处的振荡箱中，于180-200r/min的振荡速度的下反应12-18s，得到活性液。

[0013] 进一步地，所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、硫酸镁、氯化铜、氯化铁、氨基酸、葡萄糖、水按照2-3:0.01-0.02:0.02-0.04:0.02-0.03:2-3:1-2:1000的质量比混合制成。

[0014] 进一步地，在步骤(3)中，所述乙醇的体积浓度为70-75％。

[0015] 进一步地，在步骤(2)中，所述超声波的频率为40-50KHz。

[0016] 进一步地，在步骤(2)中，所述乙醇的体积浓度为50-55％。

[0017] 本发明提供了一种卷丹百合提取皂苷的方法，与现有技术相比，具有以下有益效果：

[0018] 1.本发明先以饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，将其清洗后剥离鳞片，将所得鳞片于特定条件下放于乙醇溶液中，并于超声波环境中进行提取，提取后离心分离固形物和上清液，再将所得固形物质采用微波萃取的方式进行提取，提取后再次离心分离固形物和上清液，然后用自制的活性液对所得固形物进行酶解提取，酶解后再将所得物质及所述上清液混合放入大孔树脂的层析柱中进行洗脱，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。其中，将百合鳞片于特定条件下放于乙醇溶液中，并于超声波环境中进行提取，可分离出百合鳞片中易溶于乙醇中的皂苷类、脂类和酮类等成分，进而使后续提取的效率，且结合了超声波进行提取，能通过特定范围频率的超声波振动和强烈的空化作用，迫使百合鳞茎的细胞破裂，细胞内的多种极性成分加速提取到水中，从而缩短了提取时间，并且有利于保护营养成分的活性；然后将超声提取所得的物质离心分离固形物和上清液，将其中的固形物采用微波萃取的方式进行提取，这种方法样品及溶剂中的偶极分子在高频微波能的作用下，高速速度变换其正、负极，产生偶极涡流、离子传导和高频率摩擦，从而在短时间内产生大量的热量，偶极分子旋转导致的弱氢键破裂、离子迁移等加速了溶剂分子对样品基体的渗透，在较短时间内即町将植物的组织细胞壁破坏，形成微小的孔洞和裂纹，这样细胞外的萃取介质便非常容易进入细胞内，溶解并释放细胞内的物质；然后将微波萃取所得的物质离心分离固形物和上清液，对剩余固形物利用自制的活性液进行酶解处理，其中酶解处理是于超高压均质机中进行的，两者相结合的方式可使酶解过程于湍流、空穴、剪切等复合力的作用下进行，可使所得产品更为均质、乳化，进而提高多糖的提取效率；可以较为完全的保持其营养成分，还能提高卷丹百合提取皂苷的提取率。本发明所采用的每一技术手段都是相互配合、相互促进的，且步步为营、环环相扣的，所产生的总的技术效果远远高于单个技术手段所产生的技术手段的简单加和。

[0019] 2.本发明所制备的活性液的工艺能够高效制备纤维素酶等，进而为本发明的酶解过程提供充足的活性酶，本发明以绿色木霉作为菌种，采用自制方法得到营养液进行培养，其中，所述营养液是由硫酸铵、硫酸镁、氯化铜、氯化铁、氨基酸、葡萄糖、水按照特定的比例制作而成，在营养液的作用下能够满足绿色木霉诱变时对渗透压的要求，为促进霉的诱变提供能量，各无机离子为产生的酶活性提供了促进作用，本发明中所采用的技术手段相互配合、相互促进，从不同方面和角度促进活性液的制备，大幅提升提高制备效率。

[0020] 总之，本发明提供的卷丹百合提取皂苷的方法，可以较为完全的保持其营养成分，还能提高卷丹百合提取皂苷的率和纯化率，具有丰富的营养价值和良好的保健效果。【具体实施方式】

[0021] 下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。

[0022] 实施例1

[0023] 一种卷丹百合提取皂苷的方法，包括以下步骤：

[0024] (1)原料：选取饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；

[0025] (2)超声波处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5mm的节段后，再向其中加入鳞片4倍体积的乙醇溶液，将混合液放于超声波环境中，在温度为45℃的条件下提取40min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为10000r/min的条件下离心8min，分别将所得固形物a和上清液a保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为50％，所述超声波的频率为40KHz；

[0026] (3)微波处理：将步骤(2)所述固形物a中加入其3倍体积的乙醇溶液，于功率为500W的微波萃取设备中提取3min后，放于50℃的水浴中提取30min，后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为10000r/min的条件下离心7min，分别将所得固形物b和上清液b保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为70％；

[0027] (4)酶解处理：将步骤(3)所述固形物b放入超高压均质机中，按照8g/100g的用量加入活性液，于压力为180MPa、温度为23℃的条件下处理6min，得到混合物c；

[0028] 其中，所述的活性液由下述方法制备：将绿色木霉菌株转接至查式斜面培养基中，在20℃下培养12h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为26℃、振荡速度为100r/min的条件下振荡36min，然后稀释成浓度为107个/mL的菌悬液，接着将菌悬液放置在距离紫外灯28cm处的振荡箱中，于180r/min的振荡速度的下反应12s，得到活性液；

[0029] 所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、硫酸镁、氯化铜、氯化铁、氨基酸、葡萄糖、水按照2:0.01:0.02:0.02:2:1:1000的质量比混合制成；

[0030] (5)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b和步骤(4)所述混合物c通过填充有大孔树脂的层析柱，用体积浓度为25％的乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。

[0031] 实施例2

[0032] 一种卷丹百合提取皂苷的方法，包括以下步骤：

[0033] (1)原料：选取饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；

[0034] (2)超声波处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成6mm的节段后，再向其中加入鳞片5倍体积的乙醇溶液，将混合液放于超声波环境中，在温度为48℃的条件下提取45min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为12000r/min的条件下离心10min，分别将所得固形物a和上清液a保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为55％，所述超声波的频率为50KHz；

[0035] (3)微波处理：将步骤(2)所述固形物a中加入其4倍体积的乙醇溶液，于功率为550W的微波萃取设备中提取4min后，放于53℃的水浴中提取40min，后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为12000r/min的条件下离心9min，分别将所得固形物b和上清液b保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为75％；

[0036] (4)酶解处理：将步骤(3)所述固形物b放入超高压均质机中，按照12g/100g的用量加入活性液，于压力为200MPa、温度为25℃的条件下处理8min，得到混合物c；

[0037] 其中，所述的活性液由下述方法制备：将绿色木霉菌株转接至查式斜面培养基中，在24℃下培养14h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为28℃、振荡速度为110r/min的条件下振荡40min，然后稀释成浓度为109个/mL的菌悬液，接着将菌悬液放置在距离紫外灯32cm处的振荡箱中，于200r/min的振荡速度的下反应18s，得到活性液；

[0038] 所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、硫酸镁、氯化铜、氯化铁、氨基酸、葡萄糖、水按照3:0.02:0.04:0.03:3:2:1000的质量比混合制成；

[0039] (5)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b和步骤(4)所述混合物c通过填充有大孔树脂的层析柱，用体积浓度为28％的乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。

[0040] 实施例3

[0041] 一种卷丹百合提取皂苷的方法，包括以下步骤：

[0042] (1)原料：选取饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；

[0043] (2)超声波处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5.5mm的节段后，再向其中加入鳞片4.5倍体积的乙醇溶液，将混合液放于超声波环境中，在温度为46℃的条件下提取42min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为11000r/min的条件下离心
9min，分别将所得固形物a和上清液a保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为52％，所述超声波的频率为48KHz；

[0044] (3)微波处理：将步骤(2)所述固形物a中加入其3.2倍体积的乙醇溶液，于功率为520W的微波萃取设备中提取3.5min后，放于52℃的水浴中提取37min，后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为11000r/min的条件下离心8min，分别将所得固形物b和上清液b保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为72％；

[0045] (4)酶解处理：将步骤(3)所述固形物b放入超高压均质机中，按照9g/100g的用量加入活性液，于压力为190MPa、温度为24℃的条件下处理7min，得到混合物c；

[0046] 其中，所述的活性液由下述方法制备：将绿色木霉菌株转接至查式斜面培养基中，在23℃下培养13h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为27℃、振荡速度为105r/min的条件下振荡38min，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液，接着将菌悬液放置在距离紫外灯29cm处的振荡箱中，于185r/min的振荡速度的下反应15s，得到活性液；

[0047] 所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、硫酸镁、氯化铜、氯化铁、氨基酸、葡萄糖、水按照2.5:0.015:0.03:0.025:2.5:1.2:1000的质量比混合制成；

[0048] (5)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b和步骤(4)所述混合物c通过填充有大孔树脂的层析柱，用体积浓度为27％的乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。

[0049] 对比例1

[0050] 一种卷丹百合提取皂苷的方法，包括以下步骤：

[0051] (1)原料：选取饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；

[0052] (2)将步骤(1)分离出的鳞片切成5.5mm的节段后，再向其中加入鳞片4.5倍体积的乙醇溶液，在温度为46℃的条件下浸泡提取42min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为11000r/min的条件下离心9min，分别将所得固形物a和上清液a保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为52％；

[0053] (3)微波处理：将步骤(2)所述固形物a中加入其3.2倍体积的乙醇溶液，于功率为520W的微波萃取设备中提取3.5min后，放于52℃的水浴中提取37min，后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为11000r/min的条件下离心8min，分别将所得固形物b和上清液b保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为72％；

[0054] (4)酶解处理：将步骤(3)所述固形物b放入超高压均质机中，按照9g/100g的用量加入活性液，于压力为190MPa、温度为24℃的条件下处理7min，得到混合物c；

[0055] 其中，所述的活性液由下述方法制备：将绿色木霉菌株转接至查式斜面培养基中，在23℃下培养13h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为27℃、振荡速度为105r/min的条件下振荡38min，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液，接着将菌悬液放置在距离紫外灯29cm处的振荡箱中，于185r/min的振荡速度的下反应15s，得到活性液；

[0056] 所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、硫酸镁、氯化铜、氯化铁、氨基酸、葡萄糖、水按照2.5:0.015:0.03:0.025:2.5:1.2:1000的质量比混合制成；

[0057] (5)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b和步骤(4)所述混合物c通过填充有大孔树脂的层析柱，用体积浓度为27％的乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。

[0058] 对比例2

[0059] 一种卷丹百合提取皂苷的方法，包括以下步骤：

[0060] (1)原料：选取饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；

[0061] (2)超声波处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5.5mm的节段后，再向其中加入鳞片4.5倍体积的乙醇溶液，将混合液放于超声波环境中，在温度为46℃的条件下提取42min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为11000r/min的条件下离心
9min，分别将所得固形物a和上清液a保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为52％，所述超声波的频率为48KHz；

[0062] (3)将步骤(2)所述固形物a中加入其3.2倍体积的乙醇溶液，放于52℃的水浴中提取37min，后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为11000r/min的条件下离心8min，分别将所得固形物b和上清液b保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为72％；

[0063] (4)酶解处理：将步骤(3)所述固形物b放入超高压均质机中，按照9g/100g的用量加入活性液，于压力为190MPa、温度为24℃的条件下处理7min，得到混合物c；

[0064] 其中，所述的活性液由下述方法制备：将绿色木霉菌株转接至查式斜面培养基中，在23℃下培养13h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为27℃、振荡速度为105r/min的条件下振荡38min，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液，接着将菌悬液放置在距离紫外灯29cm处的振荡箱中，于185r/min的振荡速度的下反应15s，得到活性液；

[0065] 所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、硫酸镁、氯化铜、氯化铁、氨基酸、葡萄糖、水按照2.5:0.015:0.03:0.025:2.5:1.2:1000的质量比混合制成；

[0066] (5)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b和步骤(4)所述混合物c通过填充有大孔树脂的层析柱，用体积浓度为27％的乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。

[0067] 对比例3

[0068] 一种卷丹百合提取皂苷的方法，包括以下步骤：

[0069] (1)原料：选取饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；

[0070] (2)超声波处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5.5mm的节段后，再向其中加入鳞片4.5倍体积的乙醇溶液，将混合液放于超声波环境中，在温度为46℃的条件下提取42min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为11000r/min的条件下离心
9min，分别将所得固形物a和上清液a保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为52％，所述超声波的频率为48KHz；

[0071] (3)微波处理：将步骤(2)所述固形物a中加入其3.2倍体积的乙醇溶液，于功率为520W的微波萃取设备中提取3.5min后，放于52℃的水浴中提取37min，后得到固液混合物b；

[0072] (4)成品：将步骤(2)所述上清液a和步骤(3)所述固液混合物b通过填充有大孔树脂的层析柱，用体积浓度为27％的乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。

[0073] 对比例4

[0074] 一种卷丹百合提取皂苷的方法，包括以下步骤：

[0075] (1)原料：选取饱满的卷丹百合鳞茎作为原料，洗净百合鳞茎表面的泥土后，将鳞片从百合鳞茎上剥离出备用；

[0076] (2)超声波处理：将步骤(1)分离出的鳞片切成5.5mm的节段后，再向其中加入鳞片4.5倍体积的乙醇溶液，将混合液放于超声波环境中，在温度为46℃的条件下提取42min后得到固液混合物a，将所述固液混合物a通过离心机于转速为11000r/min的条件下离心
9min，分别将所得固形物a和上清液a保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为52％，所述超声波的频率为48KHz；

[0077] (3)微波处理：将步骤(2)所述固形物a中加入其3.2倍体积的乙醇溶液，于功率为520W的微波萃取设备中提取3.5min后，放于52℃的水浴中提取37min，后得到固液混合物b，将所述固液混合物b通过离心机于转速为11000r/min的条件下离心8min，分别将所得固形物b和上清液b保留备用；其中，所述乙醇的体积浓度为72％；

[0078] (4)酶解处理：将步骤(3)所述固形物b按照9g/100g的用量加入活性液处理7min，得到混合物c；

[0079] 其中，所述的活性液由下述方法制备：将绿色木霉菌株转接至查式斜面培养基中，在23℃下培养13h，然后把培养好的菌株的孢子放入装有营养液的锥形瓶中，在温度为27℃、振荡速度为105r/min的条件下振荡38min，然后稀释成浓度为108个/mL的菌悬液，接着将菌悬液放置在距离紫外灯29cm处的振荡箱中，于185r/min的振荡速度的下反应15s，得到活性液；

[0080] 所述的营养液包括以下原料：硫酸铵、葡萄糖、水按照2.5:1.2:1000的质量比混合制成；

[0081] (5)成品：将步骤(2)所述上清液a、步骤(3)所述上清液b和步骤(4)所述混合物c通过填充有大孔树脂的层析柱，用体积浓度为27％的乙醇溶液洗脱后，将所得洗脱液减压浓缩并回收乙醇后，进行真空干燥即得所述百合皂苷。

[0082] 实验例

[0083] 实验分为7组，每组各分别按照实施例1-3和对比例1-4的提取方法提取卷丹百合鳞茎中的皂苷，记录所得卷丹百合提取皂苷的提取率，具体结果见表1。

[0084] 表1卷丹百合提取皂苷的提取率

[0085] 实施例1 实施例2 实施例3 对比例1 对比例2 对比例3 对比例4
提取率(mg/g) 3.318 3.265 3.251 3.011 2.612 2.137 2.415

[0086] 表1的结果表明：实施例1-3的卷丹百合提取皂苷的提取率较高，说明采用本发明的提取方法可提高卷丹百合皂苷提取率。

[0087] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

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一种卷丹百合提取皂苷的方法

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