本发明涉及用于对角蛋白纤维，尤其是人的角蛋白纤维例如头发，进行氧化 染色的即制即用组合物，以及使用该组合物的染色方法，该组合物包括，在适用 于染色的介质中，至少一种氧化染料和至少一种酶体系，其2-电子或4-电子氧 化还原酶或过氧化物酶被固定在用溶胶-凝胶方法所得到的基体物质上。

用包括下列物质的染料组合物对角蛋白纤维尤其是人发的染色是已知的：氧 化染料母体，尤其是邻-或对-苯二胺、邻-或对-氨基苯酚，和通常称为氧化 显色碱的杂环碱。氧化染料母体或氧化显色碱是无色的或颜色很淡的化合物，当 与氧化性产物结合时，通过氧化缩合可以产生彩色化合物和染料。

同样众所周知的是，通过使氧化显色碱与成色剂或着色改进剂结合，可以改 变用这些氧化显色碱得到的色调，成色剂或着色改进剂具体选自芳族间二胺、间 氨基酚、间二酚和某些杂环化合物。

用作氧化显色碱和成色剂的各类分子可以使所得到的色彩范围很宽。

此外，用这些氧化染料得到的所谓“永久”着色应当满足某些要求。因此， 它们应当是无毒的，它应当能够得到所需强度的色调，相对外部因素(光、恶劣 气候、洗涤、长效卷发、汗、摩擦)，它还应当具有良好的耐久性。

该染料还应当能够遮盖住灰发，最后，它们应当尽可能是非选择的，即它们 应当使沿着同一角蛋白纤维的色差尽可能最小，事实上，纤维的尖和根之间的敏 感性(即受损伤性)是不同的。

角蛋白纤维的氧化染色通常在碱性介质中，在过氧化氢的存在下进行。但 是，在大量过氧化氢的存在下使用碱性介质的缺陷是使纤维明显降解，以及使角 蛋白纤维显著脱色，因此这并不总是理想的。

也可以用除了过氧化氢以外的氧化体系例如酶体系进行角蛋白纤维的氧化 染色。因此，已经有人建议，具体地说是EP-A-0，310，675中建议用包含氧 化显色碱和任选的成色剂的组合物，并结合使用2-电子氧化还原型酶例如比喃 糖氧化酶、葡萄糖氧化酶或尿酸酶，在用于该酶的供体的存在下，对角蛋白纤维 进行染色。

也有人建议，具体地说是FR-A-2112549、FR-A-2694018、EP-A- 504005、WO95/07988、WO95/33836、WO95/33837、WO96/00290、WO97/19998、 WO97/19999和US3 251 742建议用具体包括氧化染料母体和漆酶型酶(4-电子 氧化还原酶)的组合物对角蛋白纤维进行染色。

最后，也有人建议，在少量过氧化氢存在下，用过氧化物酶对角蛋白纤维进 行染色，如专利EP-548 620、BE-775 110和US-3 893 803中所述。与在显著 量过氧化氢存在下进行染色所引起的角蛋白纤维降解相比，虽然在该条件下进行 染色不会导致角蛋白纤维的降解，但这些染色方法仍然不能产生完全令人满意的 着色，这是由于下列物质之间存在着相互作用，一方面是染料或染料载体中的各 种组分，尤其是溶剂和增稠剂，另一方面是所述酶。这些相互作用减小了该酶在 头发染色中的功效。

另外，染料配方中此类酶的不足热稳定性在染色时显示出另一缺陷。

现在申请人已发现，通过使氧化染料和其2-电子或4-电子氧化还原酶或 过氧化物酶被固定在用溶胶-凝胶方法所得到的基体物质上的酶体系结合，可以 得到一种新型的高效染料，它不再具有这些缺陷。

此发现构成了本发明的基础。

根据本发明，可以减少酶的用量，从而减小或甚至避免用于该染料组合物的 染料或载体中的组分与酶之间的相互作用，也可以改善基于该类酶的染料组合物 的热稳定性。

因此，本发明的第一主题是用于对角蛋白纤维尤其是人的角蛋白纤维例如头 发进行氧化染色的即制即用组合物，该组合物包括，在适用于染色的介质中，至 少一种氧化染料和至少一种选自下列的酶体系：

(a)至少一种结合有供体的2-电子氧化还原酶，

(b)至少一种4-电子氧化还原酶，和

(c)(ⅰ)至少一种任选结合有供体的过氧化物酶，

   (ⅱ)过氧化氢或就也生成过氧化氢的酶体系，

其特征是该酶被固定在用溶胶-凝胶方法所得到的基体物质上。

术语“即制即用组合物”表示预期在空气存在下即刻施用到角蛋白纤维上的 任何组合物。

本发明的另一主题是使用该即制即用染料组合物对角蛋白纤维氧化染色的 方法。

将2-电子氧化还原酶在用于该酶供体的存在下用于本发明即制即用染料组 合物，它们可以具体选自吡喃糖氧化酶、葡萄糖氧化酶、甘油氧化酶、乳酸氧化 酶、丙酮酸氧化酶、尿酸酶、胆碱氧化酶、肌氨酸氧化酶、胆红素氧化酶和氨基 酸氧化酶。

根据本发明，术语“供体”指的是该酶发挥作用所需要的各种基质。

根据本发明，2-电子氧化还原酶优选选自源于动物、微生物或生物工程的 尿酸酶。

例如，可以具体提及的是从野猪肝中、球形节杆菌中以及从黄曲霉中提取的 尿酸酶。

2-电子氧化还原酶可以以纯结晶形式或稀释形式(在对该2-电子氧化还原 酶为惰性的稀释剂中)使用。

本发明2-电子氧化还原酶的量优选约为组合物总量的0.01-20％重量，甚 至更优选约为该重量的0.1-10％重量。

酶的量也可以定义为其活度的函数。

本发明2-电子氧化还原酶的酶活度取决于有氧条件下供体的氧化作用。

一个U单位相当于，在25℃和pH为8.5的条件下每分钟产生1μmol H2O2的酶量。优选，本发明2-电子氧化还原酶的量约为每100g染料组合物10-108U 单位。

用于该酶的供体(或基质)的性质依所用2-电子氧化还原酶的性质而变化。 例如，用于吡喃糖氧化酶的供体可以提及的是，D-葡萄糖、L-山梨糖、和D- 木糖；可以提及的用于葡萄糖氧化酶的供体是D-葡萄糖；可以提及的用于甘油 氧化酶的供体是甘油和二羟基丙酮；可以提及的用于乳酸氧化酶的供体是乳酸及 其盐；可以提及的用于丙酮酸氧化酶的供体是丙酮酸及其盐；可以提及的用于尿 酸酶的供体是尿酸及其盐，可以提及的用于胆碱氧化酶的供体是胆碱及其与酸的 加合盐，例如盐酸胆碱和甜菜醛；可以提及的用于肌氨酸氧化酶的供体是肌氨酸、 N-甲基-L-亮氨酸、N-甲基-D，L-丙氨酸和N-甲基-D，L-缬氨酸； 用于胆红素氧化酶的供体可以提及的是胆红素；最后，对用于氨基酸氧化酶的供 体，可以提及的用于L-氨基酸氧化酶的供体是L-甘氨酸、L-丙氨酸、L-缬 氨酸、L-苯基丙氨酸和L-色氨酸，和用于D-氨基酸氧化酶的供体是D-丙氨 酸和D-苯基丙氨酸。

用于本发明的供体(或基质)的量优选约为本发明组合物总量的0.01-20％ 重量，更优选约为该重量的0.1-10％重量。

用于本发明即制即用染料组合物的4-电子氧化还原酶可以具体选自漆酶、 酪氨酸酶、儿茶酚氧化酶、脱氨基氧化酶和多酚氧化酶

根据本发明一个具体和优选的实施方案，4-电子氧化还原酶选自漆酶。

这些漆酶可以具体选自植物源、动物源、真菌源(酵母、霉菌和真菌)或细 菌源(可能是单或多细胞源的有机体)的漆酶。该漆酶也可以是通过生物技术获 得的。

根据本发明，在可以使用的植物源漆酶中，可以提及的是由进行叶绿素合成 的植物所产生的漆酶，例如FR-A-2 694 018中所提到的那些漆酶。

具体地说是，可以提及的是存在于下列物质中的漆酶：漆树属植物的提取 物，例如Magnifera indica、秘鲁乳香树或Pleiogynium timoriense的提取物；罗汉 松科植物、迷迭香属植物(Rosmarinus off)、马铃薯、鸢尾根类(Iris sp)、咖 啡类(Coffea sp)、胡萝卜属胡萝卜(Daucus carrota)、蔓性长春花、鳄梨、长 春花、芭蕉属(Musa sp)、苹果(Malus pumila)、银杏、松下兰(水晶兰)、 七叶树属(Aesculus sp)、欧亚槭、桃(Prunus persica)和黄连木属(Pistacia Palaestina) 的提取物。

根据本发明，在可以使用的由生物技术获得的或不是由生物技术获得的真菌 源漆酶中，可以提及的是，由变色多孔菌、丝核菌(Rhizoctonia praticola)和盐肤 木属(Rhus vernicifera)得到的漆酶，例如FR-A-2112549和EP-A-504005 中所述；WO95/07988、WO95/33863、WO95/33837、WO96/00290、WO97/19998 和WO97/19999中所述的漆酶(上述专利的内容构成了本说明书的一部分)，例 如，由小柱孢素(Scytalidium)、Polyporus pinsitus、嗜热毁丝酶(Myceliophthora thermophila)、茄属丝核菌(Rhizoctonia solanic)、Pyricularia orizae以及它们的 变体得到的漆酶。还可以提及的是由下列物质得到的漆酶：变色栓菌属(Trametes versicolor)、木蹄层孔菌(Fomes fomentarius)、嗜热性毛壳霉(Chaetomium thermophile)、粗糙链孢霉(Neurospora crassa)、Colorius versicol、灰色葡萄 孢(Botrytis cinerea)、木质硬孔菌(Rigidoporus lignosus)、有害木层孔菌(phellinus noxius)、糙皮侧耳、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、雁形柄孢壳菌(Podospora anserine)、双孢蘑菇(agaricus bisporus)、透明灵芝(Ganoderma lucidum)、 苹果枯腐病霉(Glomerella cingulata)、辣乳菇(Lactarius piperatus)、嫩红菇(Russula delica)、Heterobasidion annosum、陆生革菌(Thelephora terrestris)、芽枝状枝孢 (Cladosporium cladosporioides)、Cerrena unicolor、毛革盖菌(Coriolus hirsutus)、 Ceriporiopsis subvermispora、Coprinus cinereus、Panaeolus papilionaceus、Panaeolus sphinctrinus、群交裂褶菌(Schizophyllum commune)、Dichomitius squalens以及 它们的变体。

任选由生物技术获得的或不是有生物技术获得的真菌源漆酶更为优选。

本发明所使用的且在其基质上具有丁香醛连氮的漆酶的酶活性可以由丁香 醛连氮在有氧条件下的氧化作用来确定。一个Lacu单位相当于，在30℃和pH为 5.5的条件下，每分钟催化转化1mmol丁香醛连氮的酶量。一个U单位相当于， 在30℃和 pH为6.5的条件下，用丁香醛连氮作为基质，在波长53nm处，每分 钟产生吸光率δ为0.001的酶量。本发明所使用的漆酶的酶活性也可以由对苯二 胺的氧化作用来确定。一个Ulac单位相当于，在30℃和pH为5的条件下，用对 苯二胺作为基质(64mM)，在波长496.5nm处，每分钟产生吸光率δ为0.001的 酶量。

通常，本发明4-电子氧化还原酶的量优选约为即制即用染料组合物总量的 0.01-20％重量，甚至更优选约为该重量的0.1-10％重量。

具体地说，当使用一种或多种漆酶时，本发明即制即用染料组合物中漆酶的 量将作为所用漆酶性质的函数而变化。优选，漆酶的量约为，每100g即制即用染 料组合物0.5-2000Lacu(即约为10000-40×106U单位或20-20×106Ulac单 位)。

用于本发明即制即用染料组合物中的过氧化物酶可以具体选自Academic出 版社1984年出版的Enzyme Nomenclature中所述的小类为1.11.1的酶。这些酶中 的某些需要有供体存在才能发挥作用。这种情况具体地是，NADH过氧化物酶 (1.11.1)[供体=NADH]、脂肪酸过氧化物酶(1.11.1.3)[供体=脂肪酸，例如 棕榈酸盐]、NADPH过氧化物酶(1.11.1.2)[供体=NADPH]、细胞色素-C过氧 化物酶(1.11.1.5)[供体=铁细胞色素-C]、碘化物过氧化物酶(1.11.1.8)[供体= 碘化物]、氯化物过氧化物酶(1.11.10)[供体=氯化物]、L-抗坏血酸盐过氧化物 酶(1.11.1.11)[供体=L-抗坏血酸盐]和谷胱甘肽过氧化物酶(1.11.1.9)[供体=谷 胱甘肽]。

另外一些过氧化物酶在除了氧化染料而没有供体的条件下发挥作用。这些情 况是过氧化氢酶(1.11.1.6)和单纯过氧化物酶(1.11.1.7)。

根据本发明，优选使用单纯过氧化物酶(1.11.1.7)。

所有过氧化物酶在过氧化氢存在下起作用，这些酶是以天然形式被提供的， 或者是经由酶法(在空气存在下，2-电子氧化酶和供体)就地产生的。

所用的过氧化物酶可以是植物、动物、真菌或细菌源的。它们也可以是通过 生物技术获得的。

因此，过氧化物酶可以由例如下列物质中得到：苹果、杏、大麦、黑萝卜(black radish)、甜菜根、卷心菜、胡萝卜、玉米、棉花、大蒜、葡萄、薄荷、大黄、大豆、 菠菜、墨盖(ink cap)、牛奶或微生物例如过氧化醋杆菌、粪便的葡萄球菌 (Staphylococcus faecalis)或Arthromycesramosus。

单纯过氧化物酶(1.11.1.7)的活性单位可以定义为，在20℃和pH为6的条 件下，在20秒(20s)内由焦倍酚形成1mg红倍酚的单纯过氧化物酶的量。例如， 来自Sigma的黑萝卜过氧化物酶p6782的活性为每mg约250单位。

因此该类酶的工作浓度为每100g组合物25-5×106单位。

本发明过氧化物酶酶的量优选约为组合物总量的0.0001-20％重量，甚至更 优选约为该重量的0.001-10％重量。

由下列现有技术可知溶胶-凝胶法是已知的：见1990年New York的 Academic出版社出版的Sol-Gel Science中C.J.Brinker和G.W.Scherer关于这方面的 文章；该方法是化学合成技术，它可以由金属醇化物制备凝胶和透明玻璃，可以 在室温下通过部分或全部水解和缩聚来生产该凝胶。

已知可以用溶胶-凝胶方法固定生命分子，尤其是酶：见the Acta Mater.46 卷-第3期-737-741页-1998中B.Dunn和J.M.Miller、或Science-1992年2月28日 -255卷1041-1180页中Lisa M.Ellerby或Chem Mater.1994年6月-1605-1614页中 D.Avnir关于这方面的论述。

可以在足够量水(加入的和/或源自周围湿度的)的存在下，和任选在一种或 多种化妆上可接受的有机溶剂存在下，用有机金属母体进行溶胶-凝胶反应。

所用的有机溶剂例如可以选自：

-低级C1-C4醇，例如乙醇；

-丙二醇和丙二醇酯和醚；

-乙二醇和乙二醇酯和醚；

-丙酮或甲基乙基酮；

-乙酸甲基、乙基或丁基酯；

-甘油；

-挥发性的碳基油例如Isopars异链烷烃或异十二烷或非挥发性的碳基油；

-挥发性硅氧烷例如环二甲基硅烷或六甲基二硅醚或非挥发性硅氧烷。

根据所需要的最终产物的性质和所想要的用途，可以在酸性介质或碱性介质 中催化溶胶-凝胶反应。

例如，可以在10℃-85℃，优选20℃-40℃下进行水解/缩合反应

有机金属母体优选选自：

(ⅰ)选自周期表第1b-7b族、第8族或镧系元素的过渡金属的氧化物；

(ⅱ)铝(Al)、硼(B)、硅(Si)和锡(Sn)的氧化物；

(ⅲ)磷酸铝。

可以提到的有机金属母体具体地说是选自下列的金属氧化物：

(1)符合下式之一的硅烷、钛酸盐或锆酸盐：

M(OR1)4                         (Ⅰa)

R-M(OR1)3                       (Ⅰb)

3(OR1)-M-(OR1)3                (Ⅰc)

其中：

M表示Si、Ti或Zr；

R1表示直链或支链，优选C1-C4烷基；

R和R’相互独立地表示直链或支链C1-C30烷基，C1-C30环烷基或芳基或 C1-C30芳烷基或(C1-C30)烷基芳基，它们可以是取代或未取代的，R和R’基 可以被一个或多个氨基、羧基或羟基取代。

(2)符合下式之一的蝥合钛酸盐或锆酸盐：

   Na(OR1)n(X)xb          (Ⅱ)

其中：

N表示Ti或Zr；

X表示配体或螯合基；

R、R’和R1同上述定义；

a表示钛或锆的配位数，是4或6；

b表示配体X的络合度，对于二配位基配体是2，或对于三配位基配体是3；

x是1或2；前提条件是当b是3时，x为1；

n是a-bx；

(3)符合下式之一的蝥合钛酸盐或锆酸盐：

N(OR1)(4-t)(X)t                         (Ⅲa)

R-N(OR1)3-t(X)t                        (Ⅲb)

t(X)3-t(OR1)N-R-N(OR1)3-t(X)t        (Ⅲc)

其中：

N表示Ti或Zr；

t是1或2；

X、R、R’和R1同上述定义；

(4)它们的混合物。

螯合基X可以选自羧酸、β-酮、β-二酮、β-酮酯、β-酮胺、α-和β- 羟基酸、氨基酸，优选β-羟基氨基酸、水杨酸及其衍生物。可以提到的具体是甲 基丙烯酸乙酰乙酰氧基乙基酯、α-羟基甲基丙烯酸甲基酯、ε-N-甲基丙烯酰 基-L-赖氨酸和4-或-5-甲基丙烯酰氨水杨酸。

该物质可以是杂化物，是由部分或全部交联的聚合物网组成的，该聚合物网 是通过下列方法得到的：使上述定义的一种或多种有机金属母体酸解或碱解和缩 合；在至少一种有机聚合物存在下进行溶胶-凝胶反应，该有机聚合物是已经形 成了的或是在溶胶-凝胶反应过程中通过一种或多种有机单体的自由基聚合或缩 聚反应就地形成的。

有机聚合物是官能化的有机聚合物或官能化的硅氧烷聚合物。术语“官能化 的”指的是，有在物理上或化学上可以相互作用的官能团存在。此类聚合物在本 申请人的WO98/44906中有描述。

本发明更优选的一种组合物包括至少一种氧化染料和至少一种上述定义的 酶体系，其酶(2-或4-电子氧化还原酶或过氧化物酶或它们的混合物)被固定 在通过溶胶-凝胶方法得到的基体物质上，该基体物质是由四烷氧基硅烷、烷基 三烷氧基硅烷或氨基烷基三烷氧基硅烷或它们的混合物、水和盐酸制备的，在室 温下通过搅拌将上述物质混合在一起，然后加入该酶的水溶液，在几分钟之内将 形成固体。

然后把所得到的固体磨成所需要的粒度。

本发明还有一个主题是用于对角蛋白纤维尤其是人的角蛋白纤维例如头发 进行氧化染色的即制即用组合物，该组合物包括，在适用于染色的介质中，至少 一种氧化染料和至少一种选自下列的酶体系：

(a)至少一种结合有供体的2-电子氧化还原酶，

(b)至少一种4-电子氧化还原酶，和

(c)(ⅰ)至少一种任选结合有供体的过氧化物酶，

   (ⅱ)过氧化氢或就地生成过氧化氢的酶体系，

其特征是该氧化染料和酶体系被固定在可以用溶胶-凝胶方法所得到的基体 物质上。

本发明另一主题是用于对角蛋白纤维尤其是人的角蛋白纤维例如头发进行 氧化染色的即制即用组合物，该组合物包括，在适用于染色的介质中，至少一种 氧化染料和至少一种选自下列的酶体系：

(a)至少一种结合有供体的2-电子氧化还原酶，

(b)至少一种4-电子氧化还原酶，和

(c)(ⅰ)至少一种任选结合有供体的过氧化物酶，

   (ⅱ)过氧化氢或就地生成过氧化氢的酶体系，

其特征是，包括至少一种结合有供体的2-电子氧化还原酶，和/或至少一种 任选结合有供体的过氧化物酶的酶体系被固定在可以用溶胶-凝胶方法所得到的 基体物质上，4-电子氧化还原酶可以与氧化染料结合，或可以存在于含有酶体系 的基体中。

用于本发明即制即用染料组合物的氧化染料可以具体选自氧化显色碱和/或成 色剂。

具体地说，氧化显色碱是对苯二胺、双碱(double bases)、对氨基苯酚和杂 环氧化显色碱。

作为对苯二胺的例子，可以提及的是下面式(Ⅳ)的化合物及其与酸形成的 加合盐：

其中：

-R2和R3可以相同或不同，它们代表氢原子、C1-C4烷基或C1-C4单羟基 烷基；

-R4代表氢或卤原子、C1-C4烷基或C1-C4单羟基烷基；

-R5代表氢或C1-C4烷基。

上述式(Ⅳ)的对苯二胺优选选自对苯二胺、对甲代苯二胺、2-氯-对苯 二胺、2，3-二甲基-对苯二胺、2，6-二甲基-对苯二胺、2，6-二乙基对苯二胺、 2，5-二甲基-对苯二胺、N，N-二甲基-对苯二胺、N，N-二乙基对苯二胺、N，N -二丙基-对苯二胺、4-氨基-N，N-二乙基-3-甲基苯胺、N，N-二(β-羟 乙基)-对苯二胺、4-N，N-二(β-羟乙基)氨基-2-甲基苯胺、4-N，N-二 (β-羟乙基)氨基-2-氯苯胺、2-β-羟乙基-对苯二胺、2-氟-对苯二胺、 2-异丙基-对苯二胺、N-(β-羟丙基)-对苯二胺、2-羟甲基-对苯二胺、 N，N-二甲基-3-甲基对苯二胺和N-乙基-N-(β-羟乙基)-对苯二胺以及 它们与酸的加合盐。

在可以用作本发明即制即用染料组合物中的氧化显色碱的双碱中，可以提及 的具体地说是含有至少两个其上带有几个氨基和/或羟基的芳核的化合物。

更具体地说，可以提及的该双碱是下面式(V)的化合物及其与酸形成的加 合盐：

其中：

-Z1和Z2可以相同或不同，它们代表羟基或可以被C1-C4烷基或被连接臂 B取代的-NH2；

-连接臂B表示含有1-14个碳原子的直链或支链亚烷基，它可以被一个或 多个含氮基和/或一个或多个杂原子例如氧、硫或氮原子插入或终止，它任选被一 个或多个羟基或C1-C6烷氧基取代；

-R6和R7代表氢或卤原子、C1-C4烷基、C1-C4单羟基烷基、C2-C4多羟 基烷基、C1-C4氨基烷基或连接臂B；

-R8、R9、R10、R11、R12和R13可以相同或不同，它们是氢原子、连接臂B 或C1-C4烷基；

应当理解的是，式(Ⅴ)的化合物每分子只含有一个连接臂B。

在上述式(Ⅴ)的含氮基中，可以提及的具体地说是氨基、-(C1-C4)烷 基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、三(C1-C4)烷基氨基、单羟基(C1-C4)烷 基氨基、咪唑啉鎓基和铵基。

在上述式(V)的双碱中，可以提及的具体地说是N，N-二(β-羟基乙基) -N，N’-二(4’-氨基苯基)-1，3-二氨基丙醇、N，N’-二(β-羟基乙基)- N，N’-二(4’-氨基苯基)乙二胺、N，N’-二(4-氨基苯基)-四亚甲基二胺、 N，N’-二(β-羟基乙基)-N，N’-二(4-氨基苯基)-四亚甲基二胺、N，N’ -二(4-甲基氨基苯基)-四亚甲基二胺、N，N’-二(乙基)-N，N’-二(4’ -氨基-3’-甲基苯基)乙二胺和1，8-二(2，5-二氨基苯氧基)-3，5二氧杂辛 烷，以及它们与酸的加合盐。

在上述式(Ⅴ)的双碱中，N，N’-二(β-羟基乙基)-N，N’-二(4’-氨基 苯基)-1，3-二氨基丙醇和1，8-二(2，5-二氨基苯氧基)-3，5二氧杂辛烷，或 一种它们与酸的加合盐是特别优选的。

在可以用作本发明即制即用染料组合物中的氧化显色碱的对氨基苯酚中，可 以提及的具体地说是相应于下面式(Ⅵ)的化合物及其与酸形成的加合盐：

其中：

-R14和R15可以相同或不同，它们代表氢或卤原子原子、C1-C4烷基、C1 -C4单羟基烷基、(C1-C4)烷氧基(C1-C4)烷基、C1-C4氨基烷基或羟基(C1 -C4)烷基氨基(C1-C4)烷基；

应当理解的是，R14和R15中至少一个是氢原子。

在上述式(Ⅵ)的对氨基苯酚中，可以提及的具体地说是对氨基苯酚、4- 氨基-3-甲基苯酚、4-氨基-3-氟苯酚、4-氨基-3-羟基甲基苯酚、4-氨 基-2-甲基苯酚、4-氨基-2-羟基甲基苯酚、4-氨基-2-甲氧基甲基苯酚、 4-氨基-2-氨基甲基苯酚、4-氨基-2-(β-羟基乙基氨基甲基)苯酚和4- 氨基-2-氟苯酚，以及它们与酸所形成的加合盐。

在可以用作本发明即制即用染料组合物中的氧化显色碱的杂环碱中，可以提 及的具体地说是吡啶衍生物、嘧啶衍生物和吡唑衍生物，以及它们与酸所形成的 加合盐。

在吡啶衍生物中，可以提及的具体地说是，例如GB1，026，978和GB1，153，196 中所描述的化合物例如2，5二氨基吡啶、2-(4-甲氧基苯基)氨基-3-氨基吡 啶、2，3-二氨基-6-甲氧基吡啶、2-(β-甲氧基乙基)氨基-3-氨基-6- 甲氧基吡啶和3，4-二氨基吡啶，以及它们与酸所形成的加合盐。

在嘧啶衍生物中，可以提及的具体地说是，例如DE2，359，399、或JP88-169，571 和JP91-10659或WO96/15765中所描述的化合物，例如2，4，5，6-四氨基嘧啶、 4-羟基-2，5，6-三氨基嘧啶、2-羟基-4，5，6-三氨嘧啶、2，4-二羟基- 5，6-二氨基嘧啶和2，5，6-三氨基嘧啶，以及吡唑并嘧啶衍生物例如FR-A-2 750 048中所提到的那些衍生物，其中可以提及的是，吡唑并〔1，5-a〕嘧啶-3，7 -二胺、2，5，-二甲基吡唑并〔1，5-a〕嘧啶-3，7-二胺、吡唑并〔1，5-a〕嘧 啶-3，5-二胺、2，7-二甲基吡唑并〔1，5-a〕嘧啶-3，5-二胺、3-氨基吡唑并 〔1，5-a〕嘧啶-7-醇、3-氨基吡唑并〔1，5-a〕嘧啶-5-醇、2-(3-氨基 吡唑并〔1，5-a〕嘧啶-7-基氨基)乙醇、2-(7-氨基吡唑并〔1，5-a〕嘧啶 -3-基氨基)乙醇、2-〔(3-氨基吡唑并〔1，5-a〕嘧啶-7-基)-(2-羟 基乙基)氨基〕乙醇、2-〔(7-氨基吡唑并〔1，5-a〕嘧啶-3-基〕-(2-羟 基乙基〕-氨基〕乙醇、5，6-二甲基吡唑并〔1，5-a〕嘧啶-3，7-二胺、2，6- 二甲基吡唑并〔1，5-a〕嘧啶-3，7-二胺和2，5，N7，N7-四甲基吡唑并〔1，5-a〕 嘧啶-3，7-二胺，以及它们的加合盐和它们的互变异构形式(当存在互变异构平 衡时)，以及它们与酸所形成的加合盐。

在吡唑衍生物中，可以提及的具体地说是，例如DE 3，843，892，DE4，133，957 和WO94/08969、WO94/08970、FR-A-2，733，749和DE195 43 988中所描述的化合 物，例如4，5-二氨基-1-甲基吡唑、3，4-二氨基吡唑、4，5-二氨基-1-(4’ -氯苄基)吡唑、4，5-二氨基-1，3-二甲基吡唑、4，5-二氨基-3-甲基-1 -苯基吡唑、4，5-二氨基-1-甲基-3-苯基吡唑、4-氨基-1，3-二甲基-5 -肼基吡唑、1-苄基-4，5-二氨基-3-甲基吡唑、4，5-二氨基-3-叔丁基 -1-甲基吡唑、4，5-二氨基-1-叔丁基-3-甲基吡唑、4，5-二氨基-1- (β-羟基乙基)吡唑、4，5-二氨基-1-(β-羟基乙基)3-甲基吡唑、4，5 -二氨基-1-乙基-3-甲基吡唑、4，5-二氨基-1-乙基-3-(4’-甲氧基 苯基)吡唑、4，5-二氨基-1-乙基-3-羟基甲基吡唑、4，5-二氨基-3-羟 基甲基-1-甲基吡唑、4，5-二氨基-3-羟基甲基-1-异丙基吡唑、4，5-二 氨基-3-羟甲基-1-异丙基吡唑、4，5-二氨基-3-甲基-1-异丙基吡唑、4 -氨基-5-(2’-氨基乙基)氨基-1，3-二甲基吡唑、3，4，5-三氨基吡唑、1 -甲基-3，4，5-三氨基比唑、3，5-二氨基-1-甲基-4-甲基氨基吡唑和3，5- 二氨基-4-(β-羟基乙基)氨基-1-甲基吡唑，以及它们与酸所形成的加合盐。

成色剂具体地说是间氨基酚、间苯二胺、间二酚、萘酚、杂环成色剂例如吲 哚衍生物、二氢吲哚衍生物、芝麻酚及其衍生物、吡啶衍生物、吡唑并三唑 (pyrazolotriazole)衍生物、和吡唑啉酮，以及它们与酸所形成的加合盐。

更具体地说，这些成色剂选自2-甲基-5-氨基酚、5-N-(β-羟乙基) 氨基-2-甲基酚、3-氨基酚、1，3-二羟基苯、1，3-二羟基-2-甲基苯、4-氯 -1，3-二羟基苯、2，4-二氨基-1-(β-羟乙氧基)苯、2-氨基-4-(β-羟 乙基氨基)-1-甲氧基苯、1，3-二氨基苯、1，3-二(2，4-二氨基苯氧基)丙烷、 芝麻酚、1-氨基-2-甲氧基-4，5-亚甲基二氧苯、α-萘酚、2-甲基-1-萘 酚、 6-羟基吲哚、4-羟基吲哚、4-羟基-N-甲基吲哚、6-羟基二氢吲哚、 2，6-二羟基-4-甲基吡啶、1H-3-甲基吡唑-5-酮和1-苯基-3-甲基吡唑 -5-酮，以及它们与酸所形成的加合盐。

通常，可以用于本发明染料组合物的、(氧化显色碱和成色剂)与酸所形成 的加合盐具体选自盐酸化物、氢溴酸化物、硫酸盐、酒石酸盐、乳酸盐和乙酸盐。

根据本发明，氧化染料的量优选约为即制即用染料组合物总量的0.001-20 ％重量，甚至更优选约为该重量的0.01-10％重量。

根据本发明的一个优选实施方案，本发明的即制即用染料组合物也可以含有 一种或多种直接染料，尤其是为了通过闪光使色调变深而改进色调。

适用于本发明即制即用染料组合物染色的介质(或载体)通常由水或水和至 少一种有机溶剂的混合物组成，该有机溶剂可以溶解在水中不能完全溶解的化合 物。可以提及的有机溶剂是，例如C1-C4烷醇如乙醇和异丙醇、丙三醇、乙二醇 和乙二醇醚类如2-丁氧基乙醇、丙二醇、丙二醇-甲基醚、二甘醇-乙基醚和 -甲基醚以及芳族醇如苄醇或苯氧基乙醇，类似产物及其混合物。

溶剂的存在量优选约为即制即用染料组合物总量的1-40％重量，甚至更优 选约为5-30％重量。

选择本发明即制即用组合物的pH值，使得2-电子或4-电子氧化还原酶和 过氧化物酶具有足够的酶活性。该pH值通常约为3-11，优选约为4-9。使用通 常用于对角蛋白纤维染色的酸化或碱化剂将pH值调节到所需要的值。

在酸化剂中，可以提及的是例如无机或有机酸，例如盐酸、磷酸、硫酸、羧 酸如乙酸、酒石酸、柠檬酸或乳酸，和磺酸。

在碱化剂中，可以提及的是例如，氨水、碱性碳酸盐、链烷醇胺例如-、二 和三乙醇胺、2-甲基-2-氨基-1-丙醇及其衍生物，氢氧化钠、氢氧化钾和下 面式(Ⅶ)的化合物：

其中W是任选被羟基或C1-C4烷基取代的亚丙基残基；R16、R17、R18和R19 可以相同或不同，它们是氢原子或C1-C4烷基或C1-C4羟基烷基。

本发明的即制即用染料组合物也可以含有对头发进行染色的组合物中通常 所使用的各种辅助剂，例如阴离子、阳离子、非离子、酸碱两性或两性离子表面 活性剂或其混合物；阴离子、阳离子、非离子、酸碱两性或两性离子聚合物或其 混合物；无机或有机增稠剂、抗氧化剂、渗透剂、螯合剂、香料、缓冲剂、分散 剂、调节剂例如挥发或不挥发性的或改性或未改性的硅氧烷、成膜剂、神经酰胺、 防腐剂和遮光剂。

不必说，本领域的技术人员一定能选择这些任选的辅助化合物，使得这些物 质的加入对与本发明即制即用染料组合物有关的固有利性质不会或基本上不会 受到不利的影响。

本发明的即制即用染料组合物可以是各种形式，例如是任选被压缩的液体、 霜或凝胶形式，摩丝形式或适合对角蛋白纤维尤其是人发染色的其它形式。这时， 氧化染料和一种或多种2-电子或4-电子氧化还原酶存在于同一即制即用组合 物中，因此使用之前，该组合物应当在无氧气下贮藏，以避免氧化染料的任何过 早氧化。

本发明的另一主题是用上述定义的即制即用染料组合物对角蛋白纤维尤其 是人的角蛋白纤维如头发染色的方法。

按照该方法，把至少一种上述定义的即制即用染料组合物施用于纤维上，施 用温度为室温到60℃之间，施用时间为足以形成所需要的显色的时间。

优选的是，之后漂洗纤维，任选用香波洗涤，然后干燥。

施用温度优选为室温到45℃之间，甚至更优选为20℃至37℃之间。

在角蛋白纤维上足以显色的时间一般是1-60分钟，更确切地说是5-30分 钟。

这样，本发明的一个方法包括，在没有空气的存在下贮存一种组合物，该组 合物包括，在适用于染色的介质中，至少一种上述定义的氧化染料(显色碱和/或 成色剂)和至少一种酶体系，该酶体系包括，(ⅰ)4-电子氧化还原酶，或(ⅱ)2 -电子氧化还原酶和至少一种用于该氧化还原酶的供体，或(ⅲ)过氧化物酶和任 选用于该过氧化物酶的供体，和2-电子氧化还原酶和用于该氧化还原酶的供体，

该酶体系被固定在可以用溶胶-凝胶方法所得到的基体物质上，

然后，在空气存在下把该组合物施用到角蛋白纤维上。

本发明的另一个方法包括，在没有空气的存在下，贮存通过溶胶-凝胶方法 所得到的基体物质，该基体物质含有至少一种氧化染料和至少一种酶体系的混合 物，该酶体系包括，(ⅰ)4-电子氧化还原酶，或(ⅱ)2-电子氧化还原酶和至少 一种用于该氧化还原酶的供体，或(ⅲ)过氧化物酶和任选用于该过氧化物酶的供 体，和2-电子氧化还原酶和用于该氧化还原酶的供体，把该基体分散在适用于 染色的介质中，然后，在空气存在下把所得到的组合物施用到角蛋白纤维上。

根据一种变型，该方法包括，在下面所描述的设备中，分别贮存组合物(A)、 组合物(B)和任选的组合物(C)，使用时在空气存在下把它们混合在一起，之 后把该混合物施用到角蛋白纤维上。

本发明的另一主题是多室染色设备或染色“装置”或任何其它的多室包装体 系。

本发明的两室染色设备包括，含有组合物A的第一室，该组合物A包括在 适用于染色的介质中，至少一种上述定义的氧化染料(显色碱和/或成色剂)；和 含有组合物B的第二室，该组合物B包括，在适用于染色的介质中，至少(ⅰ)4 -电子氧化还原酶，或(ⅱ)2-电子氧化还原酶或(ⅲ)过氧化物酶和2-电子氧 化还原酶，在组合物含有2-电子氧化还原酶的(ⅱ)和(ⅲ)情况下，组合物A 或组合物B也可以含有至少一种的供体，该酶体系被固定在可以用溶胶-凝胶方 法所得到的基体物质上；在(ⅲ)情况下，组合物A和B也可能含有用于过氧化 物酶的供体。

本发明的三室染色设备包括，含有组合物A的第一室，该组合物A包括在 适用于染色的介质中，至少一种上述定义的氧化染料(显色碱和/或成色剂)；含 有组合物B的第二室，该组合物B包括，在适用于染色的介质中，至少一种2- 电子氧化还原酶；和含有组合物C的第三室，该组合物C包括，在适用于染色的 介质中，至少一种用于氧化还原酶的供体，该酶体系被固定在可以用溶胶-凝胶 方法所得到的基体物质上。

本发明的另一种三室染色设备包括，含有组合物A的第一室，该组合物A 包括在适用于染色的介质中，至少一种上述定义的氧化染料(显色碱和/或成色 剂)；含有组合物B的第二室，该组合物B包括，在适用于染色的介质中，至少 一种过氧化物酶和至少一种2-电子氧化还原酶；和含有组合物C的第三室，该 组合物C包括，在适用于染色的介质中，至少一种用于氧化还原酶的供体或用于 过氧化物酶的供体，

组合物A或组合物B可能含有一种或多种用于该酶体系的供体，

该酶体系被固定在可以用溶胶-凝胶方法所得到的基体物质上。

本发明的最后一个三室染色设备包括，含有组合物A的第一室，该组合物A 包括在适用于染色的介质中，至少一种上述定义的氧化染料(显色碱和/或成色 剂)；含有组合物B的第二室，该组合物B包括，在适用于染色的介质中，至少 一种过氧化物酶；和含有组合物C的第三室，该组合物C包括，在适用于染色的 介质中，至少一种2-电子氧化还原酶和过氧化氢；组合物A和/或组合物B和/ 或组合物C独立地含有用于该酶的供体，

该酶体系被固定在可以用溶胶-凝胶方法所得到的基体物质上。

对于最后一种设备，当组合物C含有过氧化氢时，用于该酶的供体优选存在 于组合物A和B中。

这些设备可以装备有把所需要的混合物施用到头发上的用具，例如以申请人 的名义申请的FR-2，586，913中所描述的装置。

下面的实施例将进一步说明本发明，但不对本发明的范围构成限制。

实施例1：被固定的尿酸酶的制备

把8克四甲氧基硅烷与3克水和0.2克0.04M盐酸溶液混合。

在室温下搅拌20分钟后，得到均匀的溶液。

向该溶液中加入11.2克浓度为20I.U./mg的尿酸酶球形节杆菌(Sigma公司 出售的，活度为1×106U％)。

几分钟之后，得到硬、脆的固体。

把所得到的固体研磨，用去离子水洗涤，然后干燥，得到晶体粉末。

实施例2：被固定的漆酶的制备

把40克四甲氧基硅烷与0.5克0.04M盐酸溶液混合。

在室温下搅拌20分钟后，得到均匀的溶液。

向该溶液中加入浓度为10×106U单位的漆酶SP809水溶液(Novo Nordisk 公司出售的，活度为6×108U％)。

几分钟之后，得到硬、脆的固体。

把所得到的固体研磨，用去离子水冼涤，然后干燥，得到晶体粉末。

实施例3：染料组合物

制备下面的染料组合物： 对苯二胺二盐酸化物                                1.0g N-乙酰半胱氨酸                                    0.10 6-甲氧基苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基胺盐酸盐       0.71g 1-β-羟基乙氧基-2，4-二氨基苯盐酸盐                0.88g 实施例1的固定尿酸酶                               4.0g 尿酸                                             1.0 聚甘油单油酸酯(Nikko公司以Decaglynl-0名称出售)     1.0g Aculyn22(Rohm&Haas公司制造的)*                   0.75g AM* 2-氨基-2-甲基-1-丙醇 适量 pH                       9.5 软化水  适量                                      100g

*氧乙烯化甲基丙烯酸/丙烯酸乙酯/甲基丙烯酸十八烷基酯三元共聚物 (55/35/10)的30％水分散液。

**表示活性物质

使用时，通过把4g固定尿酸酶与组合物的其余组分混合而制备该组合物， 然后把组合物施用到含有90％白发的自然灰发上。

使该组合物在头发上保持30分钟后，漂洗头发，用标准香波洗涤然后干燥。

头发被染成深黑色。

实施例4：染料组合物

制备下面的染料组合物： 4-氨基酚                                      0.11g N-乙酰半胱氨酸                                0.10g 2-甲基-5-氨基酚                               0.12g 实施例1的固定尿酸酶                            4.0g 尿酸                                          1.0g 聚甘油单油酸酯(Nikko公司以Decaglynl-0名称出售) 1.0g Aculyn22(Rohm&Haas公司制造的)*               0.75g AM* 2-氨基-2-甲基-1-丙醇 适量 pH                  9.5 软化水   适量                                 100g

*氧乙烯化甲基丙烯酸/丙烯酸乙酯/甲基丙烯酸十八烷基酯三元共聚物 (55/35/10)的30％水分散液。

**表示活性物质

使用时，通过把4g固定尿酸酶与组合物的其余组分混合而制备该组合物， 然后把组合物施用到含有90％白发的自然灰发上。

使该组合物在头发上保持30分钟后，漂洗头发，用标准香波冼涤然后干燥。

头发被染成深铜金色。

实施例5：染料组合物

制备下面的染料组合物： 对苯二胺二盐酸化物                            0.18g N-乙酰半胱氨酸                                0.10g 6-羟基苯并吗啉                                0.15g 实施例2的固定漆酶                             2.8g 聚甘油单油酸酯(Nikko公司以Decaglynl-0名称出售) 1.0g Aculyn22(Rohm＆Haas公司制造的)*              0.75g AM* 2-氨基-2-甲基-1-丙醇 适量 pH                  7 软化水   适量                                 100g

*氧乙烯化甲基丙烯酸/丙烯酸乙酯/甲基丙烯酸十八烷酰酯三元共聚物 (55/35/10)的30％水分散液。

**表示活性物质

使用时，通过把2.8g固定尿酸酶与组合物的其余组分混合而制备该组合物， 然后把组合物施用到含有90％白发的自然灰发上。

使该组合物在头发上保持30分钟后，漂洗头发，用标准香波洗涤然后干燥。

头发被染成很自然的灰色。

实施例6：染料组合物

制各下面的染料组合物： 对苯二胺二盐酸化物                                0.18g N-乙酰半胱氨酸                                    0.10g 2-甲基-5-氨基苯酚                                 0.12g 实施例2的固定漆酶                                 2.8g 聚甘油单油酸酯(Nikko公司以Decaglynl-0名称出售)     1.0g Aculyn22(Rohm＆Haas公司制造的)*                  0.75g AM* 2-氨基-2-甲基-1-丙醇 适量 pH                       7 软化水  适量                                      100g

*氧乙烯化甲基丙烯酸/丙烯酸乙酯/甲基丙烯酸十八烷基酯三元共聚物 (55/35/10)的30％水分散液。

**表示活性物质

使用时，通过把2.8g固定尿酸酶与组合物的其余组分混合而制备该组合物， 然后把组合物施用到含有90％白发的自然灰发上。

使该组合物在头发上保持30分钟后，漂洗头发，用标准香波洗涤然后干燥。

头发被染成紫色。