基于细胞分裂ftsZ基因表达量的蓝藻快速生长期判别方法
专利汇可以提供基于细胞分裂ftsZ基因表达量的蓝藻快速生长期判别方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种基于细胞分裂ftsZ基因表达量的蓝藻快速生长期判别方法，从湖泊原位取样，对样品进行RNA提取和反转录后，利用ftsZ和16SrRNA引物扩增经反转录得到的微囊藻cDNA； 荧光 定量PCR扩增每个样品的ftsZ和16SrRNA基因，以16SrRNA为管家基因，ftsZ为目的基因，推算单位细胞中ftsZ基因的相对表达量；利用湖泊原位分离的微囊藻，通过室内培养实验，建立微囊藻生长率μ和ftsZ基因相对表达量的回归方程，确定微囊藻的快速生长期，以此时ftsZ基因相对表达量作为蓝藻快速生长期窗口的 阈值 ，大于该阈值判定为湖泊蓝藻快速生长期。本发明的方法可以实现快速的高通量检测，在数小时内获得多个样品的检测结果，能够准确判别蓝藻快的速生长期。，下面是基于细胞分裂ftsZ基因表达量的蓝藻快速生长期判别方法专利的具体信息内容。
1.一种基于细胞分裂ftsZ基因表达量的蓝藻快速生长期判别方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）在春初至夏初，在湖泊不同采样点采集完整水柱的藻样，提取各样品RNA，并对RNA进行反转录得到微囊藻cDNA；
（2）利用ftsZ基因和微囊藻16Sr RNA序列的引物扩增步骤（1）得到的微囊藻cDNA；微囊藻cDNA扩增的PCR反应体系为：2mmol/ L dNTP mix 5 μL，25 mmol/L Mg2+ 2μL，10μmol/L上、下游引物各1.5 μL，1U/μL高保真DNA聚合酶1μL，10×PCR buffer 5μL，cDNA 3μL，去离子水补足至50μL；
其中ftsZ基因引物如下：
ftsZF2 GCTGAAGAATCGCGGGAAGA；ftsZR4 ATCCAGCATCGGCCATGAT；
微囊藻16Sr RNA序列的引物序列如下：
184F GCCGCRAGGTGAAAMCTAA；431R AATCCAAARACCTTCCTCCC；
（3）用荧光定量PCR扩增每个样品的ftsZ和16Sr RNA基因，以16Sr RNA为管家基因，ftsZ为目的基因，推算单位细胞中ftsZ基因的相对表达量；
（4）利用采集的完整水柱的藻样分离出的微囊藻，通过室内培养实验，建立微囊藻生长率μ和ftsZ基因相对表达量的回归方程，确定微囊藻的快速生长期，得到此时ftsZ基因相对表达量，作为蓝藻快速生长期窗口的阈值，大于该阈值判定为湖泊蓝藻快速生长期；
将分离取自湖泊的微囊藻群体分若干处理组在不同生长环境中培养，每天取样测量藻细胞的密度变化，获得藻细胞不同生长环境下各生长周期的生长率；生长率计算公式为：μ=（lnNt- lnN0）/t，其中，Nt和N0分别代表t时刻和初始时刻的细胞密度；培养周期30天，每3天对各处理组的微囊藻进行取样，得到单位细胞中ftsZ基因的相对表达量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，在湖泊不同采样点采集完整水柱的藻样，混合过滤，浓缩后快速转移至无RNase的冻存管中放入液氮保存。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，构建获得微囊藻生长率μ和ftsZ基因相对表达量的回归方程如下：
Y=0.059+0.093X。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，根据回归方程确定微囊藻的快速生长期的的生长大于0.13 d-1，得到此时ftsZ基因相对表达量为0.5，该值作为蓝藻快速生长期窗口的阈值，再利用该值推断湖泊原位微囊藻生长率，大于该阈值判定为湖泊蓝藻快速生长期。
基于细胞分裂ftsZ基因表达量的蓝藻快速生长期判别方法
技术领域
背景技术
发明内容
25mmol/L Mg 2μL，10μmol/L上、下游引物各1.5μL，1U/μL高保真DNA聚合酶1μL，10×PCR buffer 5μL，cDNA 3μL，去离子水补足至50μL；
附图说明
具体实施方式
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