口服胰岛素药物及其制备方法
专利汇可以提供口服胰岛素药物及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种 治疗 II型糖尿病的口服胰岛素药物，含有胰岛素、一级胆酸、卵磷脂、胆固醇和胆红素，各组分的重量份为：胰岛素1重量份、一级胆酸30～100重量份、卵磷脂：100～300重量份、胆固醇：1～3重量份、胆红素0.08～0.8重量份、胆酸50重量份。本发明按 仿生学 配制出符合 机体 的生理特点的胰岛素药物，并通过动物实验及临床试验，证实了用本发明胰岛素药物经口服途径 给药 ，对II型糖尿病具有确切的疗效。本药物符合机体的生理特点，可使血糖24小时保持相对平稳，不会出现低血糖反应，并在降低血糖的同时，同时还会使II型糖尿病患者体内卵磷脂减少、胆酸代谢紊乱得到逐渐的纠正，对II型糖尿病所引发的并发症有防治作用。，下面是口服胰岛素药物及其制备方法专利的具体信息内容。
1.口服胰岛素药物，其特征是含有胰岛素、一级胆酸、卵磷脂、胆固醇和 胆红素，各组分的重量份为：胰岛素1重量份、一级胆酸30～100重量份、卵 磷脂100～300重量份、胆固醇1～3重量份、胆红素0.08～0.8重量份、胆酸50 重量份。
2.根据权利要求1所述的口服胰岛素药物，其特征是所说一级胆酸包含牛 磺胆酸钠、甘氨胆酸、鹅脱氧牛磺胆酸和/或鹅脱氧甘氨胆酸。
3.根据权利要求2所述的口服胰岛素药物，其特征是所说的一级胆酸为： 牛磺胆酸钠10～30重量份和甘氨胆酸20～70重量份。
4.根据权利要求1所述的口服胰岛素药物，其特征是含有0.2～1重量份 二级胆酸为胆酸和/或脱氧胆酸。
5.根据权利要求1所述的口服胰岛素药物，其特征是所说胰岛素是从哺乳 动物胰腺提取并纯化的胰岛素或经修饰的胰岛素或基因重组的人胰岛素。
6.根据权利要求1所述的口服胰岛素药物，其特征是所说卵磷脂是蛋黄卵 磷脂或大豆卵磷脂。
7.根据权利要求1或2或3或4或5或6所述的口服胰岛素药物，其特征 是含有抗氧化防腐剂鱼精蛋白、山梨酸钾、维生素E或苯酚。
8.权利要求1的口服胰岛素药物的制备方法，其特征是一级胆酸、卵磷脂、 胆红素和胆固醇浸泡于体积浓度为5％～50％的乙醇溶液中，搅拌使之溶解成微乳 系统；将胰岛素粉用弱碱液溶解成溶液，加入微乳系统中，充分混合均匀，再加 双蒸水至胰岛素浓度为8U/毫升；在35-120℃温度下，水浴2-4次，每次30 分钟-1.5小时，温度逐次提高；水浴后，加适量抗氧化剂，放置4℃，过夜； 离心1000rpm，5-10分钟，弃沉淀，得上清液为淡黄色、透明状，低粘度的口服 胰岛素药液。
9.根据权利要求8所述的口服胰岛素药物的制备方法，其特征是所说的弱 碱液溶为醋酸钠、氨水、碳酸氢钠溶液。
技术领域
本发明涉及一种治疗II型糖尿病的口服胰岛素药物及其制备方法。
技术背景
胰岛素(insulin，Ins.)作为降血糖的生化药用于治疗糖尿病已有88年历史，迄今 仍为胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)患者的首选药，亦是越来越多的非胰岛素依赖型糖尿 病(NIDDM)患者的必不可少的药物。目前临床治疗更倾向于对II型糖尿病(2DM)患 者尽早使用胰岛素，这样可使胰岛细胞得到修复，同时更好的减少糖尿病所引起的并发 症。但由于胰岛素是多肽类药物，会被肠胃道的蛋白水解酶降解而不被吸收，所以口服 途径的治疗几乎是无效的，为此，临床常用胰岛素针剂(iv与hip两种)治疗。除速效 型针剂需要每餐饭前30分钟注射，中长效剂注射最长间隔时间也只有36小时，用药的 不便与痛苦，使很多NIDDM病人拒绝使用胰岛素治疗。这造成作为糖尿病并发症的肾病的 发病率越来越高，以至目前慢性肾衰而需血液透析的病人中，因糖尿病而并发肾病的病 人占50％左右或更多。此外，患者长期注射胰岛素药，还会产生许多不良反应，如胰岛素 浮肿、低血糖、肥大性脂肪营养不良及皮下脂肪萎缩等。鉴于以上情况，研制使用方便， 疗效确切，安全可靠的胰岛素新剂型是目前国际、国内医药界共同关注的课题。口服胰 岛素的研制已有40余年的历史。目前国内外有关胰岛素口服制剂的研究大多围绕在寻找 胰岛素的稳定剂，吸收促进剂及以高分子作为载体，并加入蛋白酶抑制剂的微囊、微球、 脂质体或复乳等，但这些制剂普遍存在的问题是吸收差，生物利用度低。从发现胰岛素 以来，迄今为止，人们都认为，因消化道内的蛋白降解酶可使胰岛素失活，因此认为哺 乳动物消化道内(确切地说是肠道)不可能存在有生物活性的胰岛素。人们千方百计从 防蛋白酶降解，避开肝脏第一关卡效应的角度出发，设计了各种非注射的胰岛素制剂， 如各种方式包被的口服胰岛素、喷雾吸入给药、滴眼、滴鼻、直肠给药等的胰岛素，但 都未成功。口服胰岛素的研制现状报道虽多，应用却难，至今尚未见到实际应用在临床 的报道。主要原因是：对蛋白酶降解抑制剂和促吸收剂的研究尚未见突破性进展，口服 胰岛素的生物利用度低，不及注射剂量的20％，同时稳定性的问题亦不能解决。这是长久 以来口服胰岛素不能面市的主要原因。
在较长一段时间里，人们用次级胆酸作为胰岛素的促吸剂，其效果优于常用的促吸剂 如吐温、氮酮等物质，但因纯化的次级胆酸对肠粘膜细胞的损伤，而影响其使用。
发明内容
本口服胰岛素药物含有胰岛素、一级胆酸、卵磷脂、胆固醇和胆红素，各组分的重 量份为：胰岛素1重量份、一级胆酸30～100重量份、卵磷脂100～300重量份、胆固醇 1～3重量份、胆红素0.08～0.8重量份、胆酸50重量份。
所说的一级胆酸包含牛磺胆酸钠、甘氨胆酸、鹅脱氧牛磺胆酸和/或鹅脱氧甘氨胆 酸，优选为牛磺胆酸钠10～30重量份，甘氨胆酸20～70重量份。
本口服胰岛素药物还含有0.2～1重量份的二级胆酸，它为胆酸和/或脱氧胆酸。
所说胰岛素是从哺乳动物胰腺提取并纯化的胰岛素或经修饰的胰岛素或由基因重组 的人胰岛素粉，已商品化，可购得。
所说卵磷脂是蛋黄卵磷脂或大豆卵磷脂。
本口服胰岛素药物还含有适量抗氧化防腐、保鲜剂选自鱼精蛋白、山梨酸钾、维生 素E或苯酚
上述一级胆酸和二级胆酸均从哺乳动物胆汁中提取，已商品化，可购得。
本发明提供口服胰岛素药物的制备方法，按以下步骤：
一级胆酸、卵磷脂、胆红素和胆固醇浸泡于体积浓度为5％～50％(v/v)的乙醇溶液 中，搅拌使之溶解成微乳系统；将胰岛素粉用弱碱液溶解，加入上述的微乳系统中，混 合均匀，再加双蒸水至胰岛素浓度为8U/毫升；在35-120℃温度下，水浴2-4次，每 次30分钟-1.5小时，温度逐次提高；水浴后，加适量抗氧化剂，放置4℃，过夜；离 心1000rpm，5-10分钟，弃沉淀，得上清液为淡黄色、透明状，低粘度的口服胰岛素药液。
所说的弱碱液溶为醋酸钠、氨水、碳酸氢钠溶液。
本发明口服胰岛素药物中，表面活性剂一级胆酸(或还含有二级胆酸)、乳化剂卵磷 脂及水、脂等组分作为胰岛素载体，在适当的比例下，与胰岛素形成一种透明、低粘度、 各向同性且热力学稳定的油水混合系统。作为药物载体可同时增溶不同溶解性能的成分， 分散性能好，利于吸收，大大提高了胰岛素的生物利用度。这种自微乳系统非常符合哺 乳动物消化道的生理内环境。有很好的抗蛋白酶降解的作用，易吸收。它不但能可靠降 低血糖，且在单用本药时，不会发生低血糖反应。同时，本品不但能降低血糖，对II型 糖尿病的并发症亦有很好的防治作用。
本口服胰岛素药物是基于发明人通过试验(见实施例1)发现了哺乳动物消化道内确 实存在有生物活性的胰岛素的基础上，按仿生学的方法配制而成，并已在动物实验和小 量临床试验中获得成功。也就是说，本发明消除了长期以来认为消化道内的蛋白降解酶 可使胰岛素失活，从而哺乳动物消化道内(确切地说是肠道)不可能存在有生物活性的 胰岛素的偏见，按仿生学配制出符合机体的生理特点的胰岛素药物，并通过动物实验及 临床试验，证实了用本发明胰岛素药物经口服途径给药，对II型糖尿病具有确切的疗效。 正因为本制剂的配方非常符合机体的生理特点，因此使II型糖尿病患者体内卵磷脂减少、 胆酸代谢紊乱得到逐渐的纠正。采用本口服胰岛素药物可免除患者每天注射的痛苦，服 用方便，疗效可靠，口服剂量小，一般每天的服用量不超过1毫克(27单位)左右。每 次服用4-8单位，每天1-3次(按病情轻重不同服用)。应用本制剂后，可使血糖24小 时保持相对平稳，不会出现低血糖反应，并在降低血糖的同时，II型糖尿病所引起的各 种不适如四肢发麻、触电感，眼分泌物增多，胸闷不适等症状也得到缓解；可使体重减 轻，血脂下降，血压平稳，对II型糖尿病所引发的并发症有防治作用。
附图说明
图1是胰岛素高效液相色谱分离图。
图2是从猪胆囊胆汁中分离出的胰岛素的质谱图。
具体实施方式
一、用同位素放射免疫的方法证实猪胆汁中胰岛素和C肽
动物标本：共取1000个生猪胆囊的胆汁，分数次，用同位素放射免疫的方法检测胆 汁中放免胰岛素和C肽，分别取其平均值为：
猪胆囊胆汁中放免胰岛素的平均值：400±60iu/ml
放免C肽的平均值：21±5ng/ml
二、胆囊胆汁提取胰岛素高效液相色谱分离图与标准纯胰岛素的比较(见图1)
图1的上图是标准纯胰岛素液相色谱图，中图是猪胆囊胆汁中提取的胰岛素液相色谱 图，下图是标准纯胰岛素与猪胆囊胆汁胰岛素混合物的液相色谱图；从图1可见，猪胆汁 提取的胰岛素与标准纯胰岛素有相同的出峰保留时间，并且标准纯胰岛素与猪胆囊胆汁胰 岛素混合物的峰高是二者峰高的叠加。
三、从胆汁中分离出胰岛素，经质谱分析，证实的分子量为5779D，质谱图如图2。
四、从猪胆汁中分离并纯化的胰岛素生物活性的检测
体重为18～26克的昆明种小鼠41只，雌雄各半。分三组：空白对照组10只，普通 胰岛素组11只，胆汁中提取胰岛素组20只。
空白组：每只动物腹腔注射PH 7.3的双蒸水0.5ml。
胰岛素组：每只动物腹腔注射胰岛素液0.5ml，含胰岛素16μU。
胆汁提取胰岛素组：每只动物腹腔注射从胆汁中提取的胰岛素液0.5ml，含胰岛素 9μU。
三组动物均在腹腔注射前和注射后2小时测血糖，分别如表1、表2、表3。
表1对照组：注射PH 7双蒸水0.5ml/20g
表2医用胰岛素组：注射医用胰岛素16μU/0.5ml/20g
表3胆汁提取胰岛素组：注射胆汁提取的胰岛素9μU/0.5ml/20g
统计结果：用各组注射前后血糖差值做单因素方差分析，得X±SD为：
对照组：014±1.26，
医用胰岛素组：2.32±2.83，
提取胰岛素组：2.87±1.2。
对照组与医用胰岛素组比较P＜0.0008；对照组与胆汁提取胰岛素组比较P＜ 0.0008；医用胰岛素组与胆汁提取胰岛素组比较P＝0.422；显著性差异为P＜0.05。
以上动物实验证实，从猪胆囊胆汁提取的胰岛素与医用胰岛素具有相同的生物活 性。即证实了哺乳动物消化道内的确存在有生物活性的胰岛素。
实施例2口服胰岛素药物的制备
取蛋黄卵磷脂200mg，牛磺胆酸钠20mg，甘氨胆酸40mg，胆红素0.5mg，胆固醇3mg， 用30％(v/v)乙醇溶液10-20ml，浸泡30分钟，充分搅拌均匀。取胰岛素粉1mg用弱碱 溶液溶解，完全溶解后，加入到上述溶液中去。继续搅拌，之后加双蒸水，继续搅拌均 匀，使每毫升液体中含胰岛素8U，之后将溶液放入35～120℃的水浴箱中孵育3次，每 次1小时左右，水浴温度逐次升高。药液温度降至室温后，加适量鱼精蛋白。放置4℃过 夜，离心1000rmp，5分钟，弃沉淀，留上清。制得透明、浅黄色、低粘度的口服胰岛素 药液。
实施例3口服胰岛素药物的制备
取大豆卵磷脂270mg，牛磺胆酸钠28mg，甘氨胆酸120mg，胆红素1mg，胆固醇2mg， 用10-20ml，30％(v/v)乙醇溶液浸泡30分钟，充分搅拌均匀。取胰岛素粉1mg用弱碱 溶液溶解，完全溶解后，加入到上述溶液中去。继续搅拌，之后加双蒸水，继续搅拌均 匀，使每毫升液体中含胰岛素8U，之后将溶液放入35～120℃的水浴箱中孵育3次，每 次1小时左右，水浴温度逐次升高。药液温度降至室温后，加适量鱼精蛋白。放置4℃过 夜，离心1000rmp，5分钟，弃沉淀，留上清。制得透明、浅黄色、低粘度的口服胰岛素 药液。
实施例4本口服胰岛素药物的制备
取蛋黄卵磷脂100mg，鹅脱氧牛磺胆酸钠10mg，鹅脱氧甘氨胆酸40mg，胆红素0.08mg， 胆固醇0.5mg，胆酸50mg，用10-20ml，30％(v/v)乙醇溶液浸泡30分钟，充分搅拌均匀。 取胰岛素粉1mg用弱碱溶液溶解，完全溶解后，加入到上述溶液中去。继续搅拌，之后 加双蒸水，继续搅拌均匀，使每毫升液体中含胰岛素8U，之后将溶液放入35～120℃的 水浴箱中孵育3次，每次1小时左右，水浴温度逐次升高。药液温度降至室温后，加适 量鱼精蛋白。放置4℃过夜，离心1000rmp，5分钟，弃沉淀，留上清。制得透明、浅黄 色、低粘度的口服胰岛素药液。
实施例5口服胰岛素对II型糖尿病SD大鼠模型的降糖实验
一.材料准备
1.药物和仪器：
链脲佐菌酶素，sigma公司产品；
胰岛素：徐州万邦生化有限股份公司生产；
葡萄糖试剂盒东欧生物试剂厂；
血糖仪：日本京都；
口服胰岛素：本实验室配制的实施例1的胰岛素
2.动物的选取：成年雄性SD大鼠38只，每只体重180g-220g，由上海斯莱克实 验动物有限责任公司提供，实验动物质量合格证No.0033960使用许可号： SCXX(沪)2003-0003。
3.建立动物模型：38只大鼠称重，随机抽出8只作为正常组(第一组)，余下动物 分成3组，每组10只，分别为：高脂模型组(第二组)、二甲双胍组(第三组)、口服胰 岛素治疗组(第四组)。第二组～第四组大鼠均喂养高脂、高糖饲料八周。高脂饲料含有 10％猪油、5％蛋黄粉、10％蔗糖、0.5％胆固醇和73％普通饲料；正常组大鼠喂正常饲料。 八周后，第二、三、四组动物禁食24小时，次日，用1％的链脲佐菌酶素按25mg/Kg一次 性腹腔注射(链脲佐菌酶素在使用当天用PH 4的柠檬酸液和柠檬酸三钠加水配制而成)。 15天后，检测各鼠的血糖，以餐前血糖≥7mMol/l，或餐后血糖≥16mMol/l的大鼠为入选 模型。
二.试验
入选为模型的第四组和第三组大鼠在成模后立即开始灌药，并从试验开始起的二十 周内，除第一组喂正常饲料外，其它各组均喂高脂饲料。四组大鼠饲料及给药情况如下：
第一组(正常组)：喂正常饲料，不给药。
第二组(2DM组)：喂高脂饲料，不给药。
第三组(二甲双胍组)：喂高脂饲料，每只大鼠用二甲双胍液灌胃治疗 125mg/Kg(25mg/ml/200g/日)，每日一次。
第四组(口服胰岛素治疗组)：喂高脂饲料，每只大鼠用口服胰岛素灌胃治疗，剂量 为75μIU/1ml/200g/日。
标本采集与检测：
用眼眶静脉丛采血法取血，检测给药前、成模后不同阶段的血糖，用葡萄糖氧化酶 法检测血糖。
第1笼和第2笼为第一组(正常组)，每笼5只大鼠，餐前血糖(FGlu)和餐后血 糖(PGlu)如表4和表5。为节省篇幅，表中某些日期无血糖数据，表示该段日期内血 糖较平稳，故省略(以下各表同)。
表4第1笼
表5第2笼
第3笼和第4笼为第二组(模型组)，每笼5只大鼠，餐前血糖(FGlu)和餐后血糖 (PGlu)如表6和表7。
表6第3笼
表7第4笼
第5笼和第6笼为第三组(二甲双胍组)，每笼5只大鼠，餐前血糖(FGlu)和餐后 血糖(PGlu)如表8和表9。
表8第5笼
表9第6笼
第7笼和第8笼为第四组(口服胰岛素治疗组)，每笼5只大鼠，用本发明口服胰岛 素药物治疗，剂量为75μU/ml/200g。用药三个月内测试的餐前血糖见表10和表11。
表10第7笼
表11第8笼
本实施例动物试验可见，正常组大鼠在试验全过程中血糖平稳。高血脂组大鼠的血糖 一直维持在较高水平，说明造模成功；二甲双胍组大鼠每天一次喂药，喂药后血糖明显 下降，但次日血糖仍很高，降糖效果不十分理想；口服胰胰岛素组用药二月后空腹血糖 恢复正常。
实施例6本发明口服胰岛素药物对临床II型糖尿病病人的临床治疗试验
临床试验例1
病人姓名：徐xx，性别：女，年龄：55，职业：护士长
诊断：II型糖尿病
病史：2008年发现体重急剧下降，自认为减肥成功，未加注意。之后感觉乏力， 多汗。2008年9月因全身不适加重，去医院就诊，发现血糖升高，空腹9.7mMol/l，餐后 20.0mMol/l，开始服降糖药，因降糖效果不佳，加用注射胰岛素。
试验前用药情况：
二甲双胍0.5，每日三次；诺和灵30R早19U，晚13U；注射胰岛素后经常出现低 血糖反应，且不能耐受每天打针。
2008年11月20日开始服用本发明口服胰岛素药物，每日三次，服用剂量分别为： 早8U、中4U，晚8U。同时服用中成药协和胰宝每日三次，每次2粒；协和胰宝中成药 配方：人参、山药、黄芪、麦冬、山茱萸、天花粉、生地黄、生石膏、知母、地骨皮。
未服用本口服胰岛素药物之前检测血糖(mMol/L)记录如表12。
表12
服用本口服胰岛素后检测血糖(mMol/L)记录如表13。
表13
临床试验例2
病人姓名：崔xx，性别：女，年龄：82岁，职业：干部
诊断：2型糖尿病、脑梗塞、高血压、冠心病
病史：2DM病史29年，注射胰岛素15年
试验前用药情况：
曾服二甲双胍、拜糖苹、优降糖、达美康。实验前注射诺和灵，R50早20个单位， 晚12个单位，拜糖苹50毫克每日两次。
2008年11月24日开始服用口服胰岛素药物，早8个单位，中4个单位，晚8个单 位。同时服用拜糖苹50毫克每日两次、协和胰宝每日两次，每次2粒。
未服用口服胰岛素前血糖检测记录如表14：(mMol/L)
表14
服用本口服胰岛素药物后血糖(mMol/L)检测记录如下表15。
表15
临床试验例3
姓名：薛xx，性别：男，年龄：47，职业：干部
诊断：II型糖尿病，
病史：1年，
实验前用药情况：未服药，
口服胰岛素情况：2009年2月4日服用口服胰岛素4U每日一次。
未服用本口服胰岛素药物前血糖(mMol/L)检测记录如表16。
表16
服用本胰岛素药物后血糖(mMol/L)检测记录如表17。
表17
临床试验例4
姓名：袁xx，性别：男，年龄：63岁，职业：医生
诊断：II型糖尿病
病史：6年
实验前用药情况：迪沙(格列吡嗪)早5mg，晚2.5mg，
二甲双胍0.25每日两次；
从2008年11月28日开始，每日一次服用本口服胰岛素药4U，停用以上药物。
未服用本口服胰岛药物之前的血糖(mMol/L)检测记录如表18。
表18
服用本口服胰岛素药物后检测血糖(mMol/L)记录如表19。
表19
临床试验例5
姓名：盛xx，性别：女《年龄84，职业：干部
诊断：II型糖尿病
病史：3年前发现血糖升高
实验前用药情况：未服药
2009年2月5日起服用本口服胰岛素药物，每日一次4U
未服用本口服胰岛药物之前的血糖(mMol/L)检测记录如表20。
表20
服用本口服胰岛素药物后，血糖(mMol/L)检测记录如表21。
表21
临床试验例
姓名：薛xx，性别：女，年龄：48，职业：干部
诊断：II型糖尿病
病史：病史19年(围产期糖尿病)
实验前用药情况：二甲双胍0.25每日两次，协和胰宝3粒每日两次。
2009年3月15日起服用本口服胰岛素：早6U，晚8U，同时服用协和胰宝早2粒， 晚1粒。
未服用口服胰岛素药物之前，纪录血糖(mMol/L)如表22。
表22
服用本口服胰岛素药物后血糖(mMol/L)检测记录如表23。
表23
以上6例病人改服本口服胰岛素药物后，可见大部分时间的空腹血糖控制在4- 7mMol/l，餐后血糖控制在8-10mMol/l左右，较其他药物控制的血糖更平稳，且无一例 发生低血糖反应。有二例在使用注射胰岛素时，每日用量32、34U，改用本口服胰岛素 只需每日用量为20U。对II型糖尿病所引起的各种不适如四肢发麻、触电感，眼分泌物 增多，胸闷不适等症状均得到缓解。同时患者的体重减轻，血脂下降，血压平稳，说明 本制剂对II型糖尿病所引发的并发症有很好的防治作用。
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