用于从细菌荚膜多糖基制剂中去除杂质的方法
专利汇可以提供用于从细菌荚膜多糖基制剂中去除杂质的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及用于对细菌荚膜多糖、更具体地革兰氏阴性细菌的荚膜多糖进行纯化的改进方法。该方法包括：对 收获 物进行浓缩并渗滤，用阴离子 去污 剂和强 碱 进行处理，然后离心、渗滤、和基于阳离子去污剂的细菌多糖沉淀。该方法促成内毒素杂质、 蛋白质 杂质和核酸杂质的显著减少，从而以所需的O-乙酰基 水 平提供了荚膜多糖的更高回收率。该方法是可扩展的和非酶促的，并且采用了较少的纯化步骤。，下面是用于从细菌荚膜多糖基制剂中去除杂质的方法专利的具体信息内容。
1.一种用于从生物样品中分离多糖的方法，所述方法包括下述步骤：
a)将粗制多糖溶液与阴离子去污剂混合；
b)向溶液中加入碱；
c)进行溶液的pH中和；
d)使溶液进行基于醇的沉淀，然后离心并保留上清液；
e)去除所述上清液中存在的去污剂；
f)进行多糖的浓缩和渗滤；
其中，得到的纯化多糖具有60％-80％的回收率，具有最佳的O-乙酰化水平，并且具有包括内毒素、蛋白质和核酸的最少的杂质。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括下述步骤：
g)将多糖溶液与阳离子去污剂混合；
h)将溶液离心并收集沉淀物；
i)将所述沉淀物溶解于乙醇中，然后进行基于盐的多糖沉淀。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述阴离子去污剂选自包括下述各者的组：所述各者为烷基硫酸盐、十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠、十二烷基磺酸钠、s-烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、油基硫酸钠、N-油基聚(氨基酸)钠、烷基苯磺酸钠、α-烯烃磺酸钠、烷基磺酸钠、α-磺基单羧酸酯、脂肪酸磺基烷基酯、琥珀酸酯磺酸盐、烷基萘磺酸盐、烷烃磺酸钠、木质素磺酸钠和烷基甘油醚磺酸钠。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述阴离子去污剂是十二烷基硫酸钠(SDS)。
5.根据权利要求3所述的方法，其中，溶液中的所述阴离子去污剂(SDS)的终浓度在
0.1％-4.0％的范围内，优选地小于1％。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述碱选自包括氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、羟胺、三乙胺和氢氧化锂的组。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述碱是氢氧化钠。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，溶液中的所述碱的终浓度在5mM-50mM的范围内，优选地在5mM-20mM的范围内，并且最优选地在8mM-15mM的范围内。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，在加入所述碱之后溶液的pH在pH9至pH11的范围
内，优选地为pH10.5。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，通过加入温和有机酸来中和溶液(pH7.0)。
11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述温和有机酸是甲酸、乙酸、丙酸、草酸中的一者，优选地是乙酸。
12.根据权利要求1所述的方法，其中，使用钾盐处理、凝胶过滤、乙醇处理、以及离子交换树脂/Amberlite柱中的至少一者或更多者进行去污剂的去除。
13.根据权利要求1所述的方法，其中，通过使用钾盐对去污剂进行沉淀来去除去污剂。
14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述钾盐是下述各者中的一者或者是下述各者中的两者或更多者的组合：所述各者为氯化钾、乙酸钾、硫酸钾、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸钾、磷酸氢钾、磷酸二氢钾、硝酸钾和其他钾盐。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述钾盐是氯化钾。
16.根据权利要求13所述的方法，其中，溶液中所述钾盐的终浓度高于或等于使阴离子表面活性剂充分沉淀的浓度。
17.根据权利要求13所述的方法，其中，溶液中所述钾盐的终浓度小于300mM，优选地为
100mM。
18.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多糖来源于生物源。
19.根据权利要求1和18所述的方法，其中，所述多糖来源于革兰氏阴性细菌。
20.根据权利要求1和18所述的方法，其中，所述多糖是唾液酸残基的聚合物。
21.根据权利要求1和18-20所述的方法，其中，所述多糖来源于脑膜炎奈瑟氏球菌。
22.根据权利要求1和18-21所述的方法，其中，所述多糖来源于脑膜炎奈瑟氏球菌血清型B、脑膜炎奈瑟氏球菌血清型C、脑膜炎奈瑟氏球菌血清型W、脑膜炎奈瑟氏球菌血清型Y。
23.根据权利要求2所述的方法，其中，所述阳离子去污剂是下述各者中的一者或者是
下述各者中的两者或更多者的组合：所述各者为十六烷基三甲基铵盐、四丁基铵盐、十四烷基三甲基铵盐、和溴化己二甲铵。
24.根据权利要求23所述的方法，其中，所述阳离子去污剂是十六烷基三甲基溴化铵
(CTAB)。
25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述阳离子去污剂的浓度小于3％，优选地为
1％。
26.根据权利要求1和2所述的方法，其中，所述醇是亲水性醇。
27.根据权利要求26所述的方法，其中，所述亲水性醇为下述各者中的一者或者为下述各者中的两者或更多者的组合：所述各者为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮和叔丁醇；所述亲水性醇的浓度为<65％或>95％。
28.根据权利要求1和2所述的方法，其中，所述醇是乙醇。
29.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多糖的浓缩和渗滤是使用切向流过滤和
100kDa MWCO膜完成的。
30.根据权利要求2所述的方法，其中，用于沉淀的所述盐是下述各者中的一者或者是
下述各者中的两者或更多者的组合：所述各者为氯化钠、氯化铵、氯化钾。
31.根据权利要求2和30所述的方法，其中，用于沉淀的所述盐是氯化钠。
32.根据权利要求2和30-31所述的方法，其中，所述盐的浓度在0.25M至2M的范围内。
33.一种用于分离多糖的方法，所述方法包括下述步骤：
a)将粗制多糖溶液与阴离子去污剂混合；
b)向溶液中加入EDTA和乙酸钠；
c)使溶液进行乙醇沉淀，然后离心并保留上清液；
d)去除所述上清液中存在的去污剂；
e)进行细菌多糖的浓缩和渗滤；
其中，得到的纯化多糖具有60％-80％的回收率，具有最佳的O-乙酰化曲线，并且具有包括内毒素、蛋白质和核酸的最少的杂质。
34.根据权利要求33所述的方法，其中，所述方法还包括下述步骤：
a)将细菌多糖溶液与阳离子去污剂混合；
b)将溶液离心并收集沉淀物；
c)将所述沉淀溶解于乙醇中，然后进行基于盐的沉淀。
35.根据权利要求33所述的方法，其中，去污剂是阴离子去污剂。
36.根据权利要求35的方法，其中，所述阴离子去污剂是下述各者中的一者或者是下述各者中的两者或更多者的组合：所述各者为烷基硫酸盐、十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸钠、十二烷基磺酸钠、s-烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、油基硫酸钠、N-油基聚(氨基酸)钠、烷基苯磺酸钠、α-烯烃磺酸钠、烷基磺酸钠、α-磺基单羧酸酯、脂肪酸磺基烷基酯、琥珀酸酯磺酸盐、烷基萘磺酸盐、烷烃磺酸钠、木质素磺酸钠、烷基甘油醚磺酸钠、和其他阴离子去污剂。
37.根据权利要求35所述的方法，其中，所述阴离子去污剂是十二烷基硫酸钠(SDS)。
38.根据权利要求35所述的方法，其中，所述十二烷基硫酸钠(SDS)的终浓度在0.1％-
4.0％的范围内，优选地小于1％。
39.根据权利要求33所述的方法，其中，使用钾盐处理、凝胶过滤、乙醇处理、以及离子交换树脂/Amberlite柱中的至少一者或更多者进行去污剂的去除。
40.根据权利要求33所述的方法，其中，通过使用钾盐对去污剂进行沉淀来去除去污
剂。
41.根据权利要求33所述的方法，其中，溶液中所述钾盐的终浓度高于或等于使阴离子表面活性剂充分沉淀的浓度。
42.根据权利要求40所述的方法，其中，所述钾盐是下述各者中的一者或者是下述各者中的两者或更多者的组合：所述各者为氯化钾、乙酸钾、硫酸钾、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸钾、磷酸氢钾、磷酸二氢钾、硝酸钾和其他钾盐。
43.根据权利要求34所述的方法，其中，所述阳离子去污剂是下述各者中的一者或者是下述各者中的两者或更多者的组合：所述各者为十六烷基三甲基铵盐、四丁基铵盐、十四烷基三甲基铵盐、和溴化己二甲铵。
44.根据权利要求42所述的方法，其中，所述阳离子去污剂是十六烷基三甲基溴化铵
(CTAB)。
45.根据权利要求35所述的方法，其中，所述CTAB的终浓度在0.5％-3.0％的范围内，优选地小于1％。
46.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其中，所述多糖来源于包括下述各者的组：所述各者为幽门螺杆菌、肺炎衣原体、沙眼衣原体、解脲脲原体、肺炎支原体、葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、A组链球菌、B组链球菌Ia、Ib、II、III、V、VI或VIII；C组链球菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、失乳链球菌、肺炎链球菌、绿链球菌、粪肠球菌、脑膜炎奈瑟氏球菌、淋病奈瑟氏球菌、伤寒杆菌、炭疽杆菌、沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、霍乱弧菌、巴斯德氏杆菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌、梭状芽孢杆菌、艰难梭菌、分枝杆菌属、结核分枝杆菌、梅毒螺旋体、鲍氏疏螺旋体、伯氏疏螺旋体、钩端螺旋体、杜氏嗜血杆菌、白喉棒杆菌、百日咳博德特氏菌、副百日咳博德特氏菌、支气管败血博德特氏菌、流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、志贺氏菌、埃里希氏菌和立克次氏体；肺炎链球菌1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9A、
9F、9N、9V、10A、11A、12F、14、15A、15B、15C、17F、18C、19F、19A、20、22F、23B、23F、24F、33F、
35B、38和45型的多糖；脑膜炎奈瑟氏球菌血清组A、B、C、D、W135、X、Y、Z、29E的多糖；以及b型流感嗜血杆菌。
47.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其中，所述多糖来源于生物源。
48.一种根据前述权利要求中的任一项所述的方法获得的多糖。
49.根据前述权利要求中的任一项所述的多糖，其中，所述多糖为荚膜多糖、次荚膜多糖或胞外多糖。
50.根据权利要求48所述的多糖，所述多糖通过化学或机械手段进行分级。
51.一种根据前述权利要求中的任一项所述的方法获得的疫苗，所述疫苗包含多糖抗
原。
52.根据前述权利要求中的任一项所述的多糖，所述多糖与载体蛋白缀合，其中，载体蛋白是下述各者中的一者：所述各者为CRM197、肺炎球菌表面粘附素A(PsaA)、白喉类毒素(DT)、破伤风类毒素(TT)、破伤风类毒素的片段C、百日咳类毒素、流感嗜血杆菌的蛋白D、大肠杆菌LT、大肠杆菌ST、铜绿假单胞菌的外毒素A、外膜复合物c(OMPC)、孔蛋白、转铁蛋白结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌表面粘附蛋白A(PsaA)、肺炎球菌PhtD、肺炎球菌表面蛋白BVH-3和BVH-11、炭疽芽孢杆菌的保护性抗原(PA)、排毒杆菌的解毒浮肿因子(EF)、炭疽杆菌的致死因子(LF)、卵清蛋白、匙孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、结核菌素的纯化蛋白衍生物(PPD)；特别地是CRM197、破伤风类毒素、白喉类毒素和/或PsaA。
53.根据前述权利要求中的任一项所述的多糖，所述多糖通过使用还原胺化、氰基化或碳二亚胺共轭化学而缀合至载体蛋白。
54.一种根据前述权利要求中的任一项获得的免疫原性组合物，其中，缀合物包含脑膜炎奈瑟氏球菌(脑膜炎奈瑟氏球菌)的荚膜多糖，所述荚膜多糖选自血清组A、B、C、D、X、Y、Z、
29E和W-135。
55.一种免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含下述各者中的至少一者：
a)(i)脑膜炎奈瑟氏球菌血清组A的荚膜糖与(ii)破伤风类毒素的缀合物；
b)(i)脑膜炎奈瑟氏球菌血清组C的荚膜糖与(ii)CRM197的缀合物；
c)(i)脑膜炎奈瑟氏球菌血清组Y的荚膜糖与(ii)CRM197的缀合物；
d)(i)脑膜炎奈瑟氏球菌血清组W135的荚膜糖与(ii)CRM197的缀合物；以及
e)(i)脑膜炎奈瑟球菌血清组X的荚膜糖与(ii)破伤风类毒素的缀合物。
56.根据权利要求54-55所述的免疫原性组合物，其中，所述组合物包含：
a)至少一种多糖-蛋白质缀合物；
b)浓度约为3％w/v的蔗糖；以及
c)浓度为约0.5％w/v的柠檬酸钠，其中，所述多糖通过根据前述权利要求中的任一项
所述的方法进行纯化。
用于从细菌荚膜多糖基制剂中去除杂质的方法
技术领域
背景技术
洲地区，这些地区也被称为脑膜炎带。据“疾病控制和预防中心(CDC)”和“世界卫生组织”估计，2000年全球脑膜炎球菌病导致171,000人死亡。此外，CDC报道证实了在美国儿童和年轻人中脑膜炎奈瑟氏球菌的出现是脑膜炎和败血病的主要原因。因此，脑膜炎奈瑟氏球菌在
发达国家和发展中国家都继续是公共健康问题。
脑膜炎球菌流行病的疫苗。
组A的影响力逐渐减弱，其他脑膜炎球菌血清组比如脑膜炎球菌血清组-C、脑膜炎球菌血清组-W、脑膜炎球菌血清组-X和脑膜炎球菌血清组-Y的影响力呈上升趋势。为了对抗这种戏
剧性的效果，已经开发并销售了包含上述血清组的各种单价和多价疫苗。尽管自2005年以
来，多价A、C、Y和W结合疫苗 已被批准用于加拿大、美国和欧洲
的儿童和成人，但是由于结合疫苗在市场上以非常高的价格出售，因此对于世界其他地区
而言是无法承受的。
部分以不同的方式相互作用。因此，需要一种利用这些差异来对来自不同血清组的不同细
菌荚膜多糖进行分离的方法。
基三甲基溴化铵)从整个培养物中快速沉淀带负电荷的多糖，然后使用0.9M CaCl2的萃取
和离心作用将去污剂-多糖复合物解离，使用乙醇沉淀技术去除核酸，然而通过使用乙酸钠对多糖进行处理并且然后用含氯仿的丁醇均质化由此去除了蛋白质，但据报道，还可以选
择使用热酚-水混合物。最终的纯化方法是用乙醇(4倍-5倍)和丙酮来沉淀多糖。该方法涉
及氯仿使用不便和乙醇用量大。(参考：T.P.Pato，硕士学位论文，里约热内卢联邦大学，里约热内卢，2003年，第95页。)
中进行大量渗滤，以消除低分子量蛋白质和脂多糖(LPS)。尽管使用了上述改进，分离的多糖制品仍含有值为2％(w/w)的蛋白质和值为1.5％(w/w)的核酸值。[参考：Tanizaki等人；
微生物学方法杂志，第27卷，第1期，1996年9月，第19页-23页和Goncalves等人，2007年；
Formatex；在应用的微生物学中传达当前的研究和教育主题及趋势]。
清液；加入0.5％DOC，在30分钟内加热至55℃，并且进行切向过滤(截止值为100kDa)；阴离子交换色谱法(源15Q)和尺寸排阻色谱法(Sepharose CL-4B)。[参考：T.P.Pato等人/
J.Chromatogr.B 832(2006年)第262页–第267页]。
Nargase来降解残留的蛋白质和/或核酸材料并且然后进行色谱纯化的用途。
使用0.5M至1.5M NaOH在50℃将粗制多糖脱乙酰化30分钟至10小时，并且通过渗滤和疏水
性相互作用色谱法(HIC)进行进一步纯化。
29216880AA]。
的损失。此外，由于存在病毒污染的风险，因此监管机构限制了动物酶在人类产品中的使
用。除了成本高的事实之外，酶的使用还将在cGMP框架中引入了更多的监管问题，例如酶的来源(来自动物或重组体)、不同厂商与批次之间的酶活性变化等。
的情况下破坏内毒素。因此，在去除脱氧胆酸钠之后，内毒素恢复了其生物学活性。此外，基于DOC的方法不能有效地从多糖、尤其是含唾液酸的多糖中去除污染物。这可能是由于DOC
对下游加工期间形成的脂多糖-蛋白质结合的去污活性弱，从而导致最终分离的多糖中内
毒素和蛋白质含量较高。此外，脱氧胆酸钠是一种动物源性产品，即使其在最终产品中的残留存在也可能会导致监管机构和某些宗教团体对该产品的不认可。
菌多糖，但色谱技术的使用仍涉及多步劳动和耗时的样品制备，涉及规模性问题，极大地损害了荚膜多糖的回收率，并且因此对于工业规模的下游加工而言不是可行的低成本选择。
个群体是必要的。
发明内容
CTAB的细菌多糖沉淀。该方法提高了多糖的回收率，是可扩展的和非酶促的，采用了低成本和较少数量的纯化步骤。所述方法促成内毒素杂质、蛋白质杂质和核酸杂质的显著减少，从而实现了多糖的更高回收率并且保持所需的O-乙酰基水平。
附图说明
具体实施方式
分离。本发明的用于对荚膜多糖进行分离的目的细菌是从革兰氏阴性细菌中获得的，所述
革兰氏阴性细菌选自包括但不限于埃希氏菌、奈瑟氏球菌、嗜血杆菌、假单胞菌等的属，更优选地由脑膜炎奈瑟氏球菌血清组表达的荚膜多糖。在本发明的另一方面，多糖可以来源
于包括下述各者的组：所述各者为幽门螺杆菌、肺炎衣原体、沙眼衣原体、解脲脲原体、肺炎支原体、葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、A组链球菌、B组链球菌、Ib、II、III、V、VI或VIII；C组链球菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、失乳链球菌、肺炎链球菌、绿链球菌、粪肠球菌、脑膜炎奈瑟氏球菌、淋病奈瑟氏球菌、伤寒杆菌、炭疽杆菌、沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌、霍乱弧菌、巴斯德氏杆菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌、梭状芽孢杆菌、艰难梭菌、分枝杆菌属、结核分枝杆菌、梅毒螺旋体、鲍氏疏螺旋体、伯氏疏螺旋体、钩端螺旋体、杜氏嗜血杆菌、白喉棒杆菌、百日咳博德特氏菌、副百日咳博德特氏菌、支气管败血博德特氏菌、流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、志贺氏菌、埃里希氏菌和立克次氏体；肺炎链球菌1、2、3、
4、5、6A、6B、7F、8、9A、9F、9N、9V、10A、11A、12F、14、15A、15B、15C、17F、18C、19F、19A、20、22F、
23B、23F、24F、33F、35B、38和45型的多糖；脑膜炎奈瑟氏球菌血清组A、B、C、D、W135、X、Y、Z、
29E的多糖；以及b型流感嗜血杆菌。
脑膜炎奈瑟氏球菌C C11(60E) CBER/FDA，美国
脑膜炎奈瑟氏球菌W S877 CBER/FDA，美国
脑膜炎奈瑟氏球菌Y M10659 CDC，美国
脑膜炎奈瑟氏球菌X M8210 CBER/FDA，美国
中，荚膜多糖来源于脑膜炎奈瑟氏球菌血清组A、C、W、Y和X。
续步骤是非必要的。
钠、氢氧化钾、碳酸钠、羟胺、三乙胺和氢氧化锂的组。
氢氧化钠的pH调节至pH10.5。
向该中和的混合物中加入亲水性醇、优选地乙醇直至终浓度为30％-35％，并且在室温下持续搅拌进行孵育数小时。亲水性醇选自下述各者中的一者或者选自下述各者中的两者或更
多者的组合：所述各者为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮和叔丁醇；其浓度为<65％或>
95％。
将混合物在2℃-8℃下孵育持续>3小时。钾盐选自下述各者中的一者或者选自下述各者中
的两者或更多者的组合：所述各者为氯化钾、乙酸钾、硫酸钾、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸钾、磷酸氢钾、磷酸二氢钾、硝酸钾和其他钾盐。该步骤利用了十二烷基硫酸钾的低溶解度。在加入钾盐优选地为KCl之后，溶液中的SDS被转化为十二烷基硫酸钾，其溶解度较低并且易于
沉淀出来，从而促成SDS被完全去除。本领域技术人员非常清楚的是，可以改变KCl的浓度以获得期望的结果。本领域技术人员可以根据需要对本发明的该实施方式中提到的协议进行
修改。
或更多者的组合：所述各者为十六烷基三甲基铵盐、四丁基铵盐、十四烷基三甲基铵盐、和溴化己二甲铵。本领域技术人员非常清楚的是，阳离子去污剂的浓度可以在0.1％至4％的
范围内变化以获得期望的结果。优选地，阳离子去污剂是CTAB。
心以去除未溶解的残留物。
白。非特异性载体蛋白的示例包括来自但不限于下述各者的组的载体蛋白：所述各者为CRM
197、白喉类毒素、破伤风类毒素、百日咳类毒素、大肠杆菌LT、大肠杆菌ST、铜绿假单胞菌的外毒素A、外膜复合物c(OMPC)、孔蛋白、转铁蛋白结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白(PsaA)、肺炎球菌表面蛋白BVH-3和BVH-11、炭疽芽孢杆菌的保护性抗原(PA)、排毒杆菌的解毒浮肿因子(EF)、炭疽杆菌的致死因子(LF)、卵清蛋白、匙孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白、牛血清白蛋白(BSA)、以及结核菌素(PPD)的纯化蛋白衍生物。
定；并且核酸含量可以通过分光光度法来测定。众所周知，任何其他合适的方法都可以用于内毒素、蛋白质和核酸含量的定量。
氯化钠 5.8
L-精氨酸 1
L-丝氨酸 1
氯化钙 0.028
硫酸铁(II)水合物 0.01
氯化铵 0.3
磷酸氢二钾 4
酵母抽提物 5
氯化镁 0.4
大豆蛋白胨 3
酪蛋白氨基酸 5
L-谷氨酸钠一水合物 10
硫酸铵 1.2
胱氨酸 0.3
L-谷氨酸钠一水合物 150
酪蛋白氨基酸 4
氯化铵 0.2
收获的总多糖产量(mg/L) 703.33
内毒素杂质(多糖的EU/mg) >500
蛋白质杂质(％) 109
核酸杂质(％) 12.3
氯化钠 5.8
硫酸钾 1
L-精氨酸 0.75
L-丝氨酸 0.75
半胱氨酸 0.4
氯化钙 0.025
硫酸铁(II)水合物 0.01
氯化铵 0.15
磷酸氢二钾 4
酵母抽提物 3
氯化镁 0.3
大豆蛋白胨 3
酪蛋白氨基酸 5
盐酸硫胺素 0.05
L-谷氨酸钠一水合物 10
L-色氨酸 0.2
D–水合葡萄糖 200
L-谷氨酸钠一水合物 150
L-精氨酸 1
L-丝氨酸 1
大豆蛋白胨 10
酵母抽提物 16.6
D–水合葡萄糖 10
氯化钠 5.8
硫酸钾 1
L-精氨酸 0.75
L-丝氨酸 0.75
半胱氨酸 0.4
氯化钙 0.025
硫酸铁(II)水合物 0.01
氯化铵 0.25
磷酸氢二钾 4
酵母抽提物 3
氯化镁 0.3
大豆蛋白胨 3
酪蛋白氨基酸 5
盐酸硫胺素 0.05
L-谷氨酸钠一水合物 10
D–水合葡萄糖 200
L-谷氨酸钠一水合物 150
L-精氨酸 4
L-丝氨酸 4
大豆蛋白胨 4
酵母抽提物 4
氯化镁 1.6
氯化钙 0.2
氯化铵 0.8
规格限制。
人(共轭和多糖疫苗，海报79，http：//neisseria.org/ipnc/1996/Neis1996-chap4.pdf)”被优化如下：
商制造和供应，而SDS是经过HALAL认证的合成去污剂并且在全球范围内有多家供应商。DOC在不影响化学成分的情况下分解内毒素，并且一旦去除去污剂即可以恢复其生物学活性，
而SDS因其两亲性质和较高的聚集数而使蛋白质充分变性和溶解，并且还将内毒素不可逆
地破坏成其单体单元。
操作方面以及其他一些优势方面具有明显的优势，所述其他一些优势如下：
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