用于稳定阴道液的酸度和氧化还原状态的基于合适的生化组合物的泌尿生殖器医疗设备制剂
阅读：588发布：2020-05-13
专利汇可以提供用于稳定阴道液的酸度和氧化还原状态的基于合适的生化组合物的泌尿生殖器医疗设备制剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及用于 阴道 或可替代地经口施用的组合物，以及此类组合物用于稳定阴道酸度或可替代地肠道酸度，并且建立用于泌尿生殖器或可替代地胃肠道中的病原体抑制和乳杆菌生长的有利条件的用途。，下面是用于稳定阴道液的酸度和氧化还原状态的基于合适的生化组合物的泌尿生殖器医疗设备制剂专利的具体信息内容。
1.一种用于在治疗或预防由女性受试者中的致病性微生物引起的泌尿生殖器感染中使用的组合物，其中所述组合物包含有效量的以下中的每一种，
a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，
其中所述治疗或预防包括将组合物阴道内施用于受试者，用于将受试者的阴道液的酸度稳定在约pH 4.5或更低的生理值下。
2.根据权利要求1使用的组合物，其中所述阴道制剂是用于个人使用的润滑凝胶。
3.根据权利要求1或2使用的组合物，其进一步包含可被乳杆菌同化的足够的硫源。
4.根据权利要求3使用的组合物，其中所述硫源至少是含硫化合物。
5.根据权利要求4使用的组合物，其中所述含硫化合物是选自硫酸盐、亚硫酸盐、硫化物、N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、硫代硫酸钠及其混合物中的至少一种。
6.根据前述权利要求中任一项使用的组合物，其包含调节阴道液中的氧化还原电位的组分。
7.根据权利要求6使用的组合物，其中调节阴道液中的氧化还原电位的所述组分是选自以下的氧化还原系统中的至少一种：基于硫的系统如硫代硫酸钠/亚硫酸氢钠、处于还原态（GSH）和氧化态（GSSG）的谷胱甘肽、半胱氨酸/胱氨酸对，基于氧的氧化还原系统如甲硫氨酸、醌/氢醌，基于氮的氧化还原系统如亚硝酸盐/硝酸盐和基于硒的氧化还原系统（亚硒酸盐/硒酸盐和硒化物）及其混合物。
8.根据前述权利要求中任一项使用的组合物，其中将选自以下的一种或多种乳杆菌菌株加入制剂中：加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、乳酸乳杆菌、约氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌KS 400。
9.根据前述权利要求中任一项使用的组合物，其中将选自以下的一种或多种乳杆菌菌株加入制剂中：加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、乳酸乳杆菌和约氏乳杆菌。
10.根据前述权利要求中任一项使用的组合物，所述乳杆菌属菌株选自詹氏乳杆菌KS
109，具有登录号CNCM I-3482、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心的加氏乳杆菌KS 114.1，具有登录号CNCM I-3483、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌116.1，具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，具有登录号CNCM I-
3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，具有登录号CNCM I-3219、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 121.1，詹氏乳杆菌KS 122.1，具有登录号CNCM I-3485、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌123.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3，加氏乳杆菌126.2，具有登录号CNCM I-3486、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌127.1，詹氏乳杆菌KS 130.1，具有登录号CNCM I-3360、于2005年2月10日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的瑞士乳杆菌KS 300以及嗜酸乳杆菌KS 400。
11.根据权利要求10使用的组合物，其中所述乳杆菌属菌株选自具有登录号CNCM I-
3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌
120.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3。
12.根据前述权利要求中任一项使用的组合物，其中所述制剂进一步包含有效量的能够抑制或根除泌尿生殖器病原体的治疗有效的抗微生物剂，所述泌尿生殖器病原体包括寄生虫、原生动物、细菌、病毒和/或真菌。
13.根据权利要求12使用的组合物，其中所述制剂进一步包含有效量的能够抑制或根除泌尿生殖器区域中的真菌的治疗有效的抗真菌剂。
14.根据权利要求13使用的组合物，其中所述治疗有效的抗真菌剂是山梨酸或其盐。
15.一种用于治疗或预防由女性受试者中的致病性微生物引起的泌尿生殖器感染的方法，其包括任选地在泌尿生殖器感染的抗感染治疗后，将有效量的以下中的每一种阴道内施用于受试者：
a）缓冲剂，
b）阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，
其中所述治疗或预防包括将所述组合物阴道内施用于所述受试者。
16.一种用于将受试者的阴道液的酸度稳定在约pH 4.5或更低的生理值下的方法，其包括将有效量的以下中的每一种阴道内施用于受试者：
a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖
其中所述治疗或预防包括将所述组合物阴道内施用于所述受试者。
17.根据权利要求15或16的方法，其中所述缓冲剂a）是选自包含以下或可替代地由以下组成的酸或其盐：有机酸如脂肪族酸包括乙酸、丙酸、丁酸，二羧酸包括草酸、丙二酸、琥珀酸，羟酸如乳酸、柠檬酸，二羧酸如苹果酸。
18.根据权利要求15-17中任一项的方法，其中所述防腐剂b）是乳酸或其衍生物和/或盐。
19.根据权利要求15-18中任一项的方法，其中所述氮源c）是铵盐、尿素、天然存在的或合成的氨基酸例如谷氨酸及其混合物。
20.根据权利要求15-19中任一项的方法，其中所述碳源d）是不可消化的碳水化合物，例如：低聚果糖、低聚半乳糖、葡糖低聚糖及其混合物。
21.根据权利要求15-20中任一项的方法，其中所述组合物进一步包含可被乳杆菌同化的足够的硫源。
22.根据权利要求21的方法，其中所述硫源至少是含硫化合物。
23.根据权利要求22的方法，其中所述含硫化合物是选自硫酸盐、亚硫酸盐、硫化物、N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、硫代硫酸钠及其混合物中的至少一种。
24.根据权利要求15-23中任一项的方法，其包含调节阴道液中的氧化还原电位的组分。
25.根据权利要求24的方法，其中调节阴道液中的氧化还原电位的所述组分是选自以下的氧化还原系统中的至少一种：基于硫的系统如硫代硫酸钠/亚硫酸氢钠、处于还原态（GSH）和氧化态（GSSG）的谷胱甘肽、半胱氨酸/胱氨酸对，基于氧的氧化还原系统如甲硫氨酸、醌/氢醌，基于氮的氧化还原系统如亚硝酸盐/硝酸盐和基于硒的氧化还原系统（亚硒酸盐/硒酸盐和硒化物）及其混合物。
26.一种pH范围为4至5的适合于经口施用的制剂，其中所述组合物包含有效量的以下中的每一种：
a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖。
27.权利要求26的制剂，其中将至少一种乳杆菌菌株加入所述制剂中，所述菌株选自加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌和约氏乳杆菌。
28.权利要求27的制剂，其中将至少一种乳杆菌菌株加入所述制剂中，所述菌株选自詹氏乳杆菌KS 109，具有登录号CNCM I-3482、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心的加氏乳杆菌KS 114.1，具有登录号CNCM I-3483、于2005年7月
22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌116.1，具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，具有登录号CNCM I-3219、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 121.1，詹氏乳杆菌KS 122.1，具有登录号CNCM I-3485、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌123.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3，加氏乳杆菌126.2，具有登录号CNCM I-3486、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌127.1，詹氏乳杆菌KS 130.1，具有登录号CNCM I-
3360、于2005年2月10日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的瑞士乳杆菌KS 300以及嗜酸乳杆菌KS 400。
29.权利要求28的制剂，其中所述乳杆菌属菌株选自具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS
119.1，具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3以及嗜酸乳杆菌KS 400。
30.根据权利要求26-29中任一项的制剂，其中所述组合物进一步包含可被乳杆菌同化的足够的硫源。
31.根据权利要求30的制剂，其中所述硫源至少是含硫化合物。
32.根据权利要求31的制剂，其中所述含硫化合物是选自硫酸盐、亚硫酸盐、硫化物、N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、硫代硫酸钠及其混合物中的至少一种。
33.根据权利要求26-32中任一项的制剂，其包含调节生物流体中的氧化还原电位的组分。
34.根据权利要求33的制剂，其中调节阴道液中的氧化还原电位的所述组分是选自以下的氧化还原系统中的至少一种：基于硫的系统如硫代硫酸钠/亚硫酸氢钠、处于还原态（GSH）和氧化态（GSSG）的谷胱甘肽、半胱氨酸/胱氨酸对，基于氧的氧化还原系统如醌/氢醌，基于氮的氧化还原系统如亚硝酸盐/硝酸盐和基于硒的氧化还原系统（亚硒酸盐/硒酸盐和硒化物）及其混合物。
35.根据权利要求1-14中任一项使用的组合物、或根据权利要求26-34中任一项的制剂，其中所述缓冲剂a）是选自包含以下或可替代地由以下组成的酸或其盐：有机酸如脂肪族酸包括乙酸、丙酸、丁酸，二羧酸包括草酸、丙二酸、琥珀酸，羟酸如乳酸、柠檬酸，二羧酸如苹果酸。
36.根据权利要求1-14或35中任一项使用的组合物、或根据权利要求26-35中任一项的制剂，其中所述防腐剂b）是乳酸或其衍生物和/或盐。
37.根据权利要求1-14或35-36中任一项使用的组合物、或根据权利要求26-36中任一项的制剂，其中所述氮源c）是铵盐、尿素、天然存在的或合成的氨基酸例如谷氨酸及其混合物。
38.根据权利要求1-14或35-37中任一项使用的组合物、或根据权利要求26-37中任一项的制剂，其中所述碳源d）是不可消化的碳水化合物，例如：低聚果糖、低聚半乳糖、葡糖低聚糖及其混合物。
39.根据权利要求1-14或35-38中任一项使用的组合物、或根据权利要求26-38中任一项的制剂，如果固体在溶解/悬浮后至3 ml的体积，则其具有43至4.6的pH，并且其包含下述成分/单个剂量：
Ca-乳酸五水合物：30-90，优选60 mg
二代柠檬酸镁：15-45，优选30mg
益生元纤维：50-150，优选100 mg
谷氨酸：20-60，优选40 mg
半胱氨酸/硫代硫酸盐：10-50，优选30 mg
赋形剂加入400-1100 mg：适量。
40.根据权利要求39使用或配制的组合物，其进一步包含以下的冻干产物：
具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，和/或
加氏乳杆菌124.3和/或具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，和/或
具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，对于总共20亿至100亿c.f.u.总计50至200 mg。
用于稳定阴道液的酸度和氧化还原状态的基于合适的生化组
合物的泌尿生殖器医疗设备制剂
发明领域
[0001] 本发明涉及泌尿生殖器制剂的生化组合物，其稳定阴道中的酸度，并且在其中建立用于泌尿生殖器病原体抑制和乳杆菌生长的合适条件。本发明提供了用于阴道或可替代地经口施用的组合物，以及此类组合物用于稳定阴道或可替代地肠道酸度，并且建立用于泌尿生殖器或可替代地胃肠道中的病原体抑制和乳杆菌生长的有利条件的用途。这些组合物基于化学确定的成分，避免常用的天然或成分不确定（ill-defined）的营养组分，并且组合物可能与具有特定抗微生物和/或抗炎特性的人阴道菌株相关。此外，注意此类制剂的阴道施用后氧化还原电位的适当值，特别是关于阴道加德纳菌（G. vaginalis）类型的细菌性阴道病（BV）相关病原体的抑制。
[0003] 发明背景众所周知，有用的、耐受良好的非致病性细菌，即所谓的人天然微生物群，在健康状态下在肠、阴道和尿道/膀胱中占优势，而致病性和机会性微生物如细菌、酵母、病毒和原生动物的过度生长经常导致这些器官中的生态失调感染。
[0004] 术语“需氧细菌”和“厌氧细菌”通常分别用于描述需要空气的那些微生物和不能在空气的存在下生长的微生物。
[0005] 值得注意的是，可以在阴道中发现的一些非致病性和致病性细菌可以定义为“非兼性厌氧菌”，即它们可以在空气的存在和不存在两者下生长，并且基本上不受生长培养基中的氧化条件影响。此类非兼性厌氧细菌的非限制性实例是大肠杆菌（E. coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），其已知引起通常指示为“需氧菌性阴道炎”的阴道状况。
[0006] 可以在阴道中发现的其它微生物是“专性厌氧菌”，即它们在游离氧的存在下不生长，并且实际上可以在氧或氧化条件的存在下被杀死。
[0007] 从会阴迁移到阴道内、或通过性交获得的厌氧生物如阴道加德纳菌（一种专性厌氧菌）可以引起具有少数症状的生态失调，随后为全面细菌性阴道病（BV），其为最常见的阴道感染。BV对孕妇中的早产构成严重风险，并且增加了对性传播感染的风险（参考文献1）。在由厌氧菌引起的阴道生态失调或阴道感染的此类情况下，阴道环境的pH从3.5-4.5的生理值增加到达到5-6或甚至更高的值。pH中的这种增加是用于诊断BV的关键临床参数，并且是与BV相关的风险的主要原因之一。乳杆菌Doderlein微生物群对阴道中存在的糖原和其它碳水化合物的代谢产物的发酵作用主要产生乳酸以及较少程度的其它有机酸，并且导致阴道液的低pH值。另外，起于肠道并首先迁移到阴道，并且之后迁移到尿道/膀胱的革兰氏阴性大肠杆菌的某些菌株，是性活跃女性中尿道炎/膀胱炎的最常见原因。这种同样的大肠杆菌也可以引起阴道中的生态失调，这种状况称为需氧性阴道炎，其也伴有阴道微生物群的扰动、阴道酸度中的降低和相应pH值的增加（参考文献2）。
[0008] 特别是在怀孕期间引起阴道感染的另一种病原体是酵母念珠菌属（Candida），其机会性地表现并且经常与乳杆菌共存。
[0009] 念珠菌是表现为兼性厌氧菌的唯一酵母生物，即它基本上不受空气和氧化条件的存在或不存在的影响。
[0010] 这些感染通常通过针对病原体的抗感染治疗至少在一定程度上治愈，所述病原体在此类治疗的过程中预期被成功根除。然而，在约多达70%的病例中，患者经历在初次治疗后3个月内的复发或再感染（参考文献3），因为病原体未被充分杀死或由于通过恢复的固有的阴道微生物群而缺乏保护。这种微生物群实际上经常由于抗感染治疗而受损。固有的阴道微生物群，历史上称为Doderlein微生物群，对许多抗感染剂，特别是抗生素敏感。它经常被抗感染治疗扰乱或甚至根除，并且因此不能抑制永远存在的机会性的，经常是致病性生物的增殖。因此，通过特异性针对厌氧菌的窄谱抗生素如克林霉素治疗的细菌性阴道病可以导致酵母感染，因为乳杆菌消耗的阴道微生物群不能再抑制机会性酵母。
[0011] 在1892年的开创性著作中，发现外源性乳杆菌属（Lactobacillus）的医生Albert Doderlein本人已经提出了将外源性乳杆菌属直接应用于阴道以治疗阴道生态失调或感染的可能性（参考文献4）。从那时起，这一概念已在科学和专利文献中得到广泛发展，并且最近得到全面评论（参考文献5）。
[0012] WO 2009/123982 A2涉及用于乳杆菌替换疗法的方法和组合物，即通过使阴道壁与活的微生物细胞的干燥制剂接触用所需微生物物种定殖阴道粘膜。
[0013] WO 2016/020861 A1涉及薄膜或海绵组合物，以及用于预防和治疗阴道感染的方法，其中所述薄膜或海绵包含至少一种粘膜聚合物（polumer）、至少一种益生菌和/或益生元和以药理学有效量的至少一种活性化合物例如抗真菌剂或抗生素剂。
[0014] 近年来，本发明人对与最常见的泌尿生殖器病原体竞争相关的人阴道起源的先前未知的乳杆菌属菌株的特性进行了彻底的研究。特别地，本发明人研究了涉及乳酸、过氧化氢和进一步试剂相互作用的机制，发现其解释了例如加氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）针对致病性阴道加德纳菌和二路普雷沃菌（Prevotella bivia）特别强烈和特异性的抗生素样活性（参考文献6）以及詹氏乳杆菌（L jensenii）和卷曲乳杆菌（L crispatus）针对尿道致病性大肠杆菌的活性（参考文献7）。如所提及的论文和专利（参考文献8）中描述的方法进一步具有使用从完全健康的女性的相同区域分离的菌株用于靶向泌尿生殖道的治疗应用的优点。由此，与使用并非来自人起源且并非来自健康年轻女性的泌尿生殖道的此类菌株相比，关于外源施用的乳杆菌属菌株的耐受性的可能问题可以在很大程度上减少。对于非人起源的菌株，治疗学例如泌尿生殖器应用中的安全性和耐受性问题不是明确先验的，并且因此必须进行后验评价。
[0015] 为了提供用于药学可接受的载体的合适组合物，本发明人研究了益生菌产品中使用的和/或文献中描述的不同制剂。在一种公开的方法（参考文献9）中，发明人声称通过同时抑制不期望的尿路病原体的生长，脱脂乳分别称为LGF（乳杆菌属生长因子）或NGF（天然生长因子）的脱脂乳制剂和衍生物的使用有利于所需乳杆菌属的生长。根据同一发明人，在微生物生长培养基中也发现了用于阴道应用的此类专用生长因子。用于乳杆菌属菌株的最常用的此类生长培养基实际上是MRS（DeMan-Rogosa-Sharp）培养基（参考文献10）。除了矿物质和维生素外，这种肉汤还含有蛋白胨、碳源且尤其是化学成分不确定组成的氮。其它发明人也推荐在含有乳杆菌属菌株的阴道药物的保存基质中使用复合蛋白质物质如脱脂乳和白蛋白（参考文献11）。
[0016] 在我们看来，虽然含有天然营养素如脱脂乳或蛋白胨的制剂可能可用于特殊应用，但它们不适合作为用于阴道应用的含有乳杆菌属的药物制剂中的成分。这是因为，首先，它们具有生物（尤其是动物）起源，其次，这些天然成分经常具有化学成分不确定的组成，并且因此，如下文进一步解释的，它们携带了在患者中引起不利效应的增加风险。此外，从选择性功效的角度来看，这些NGF可能无法达到抑制尿路病原体生长的所需效应。在已与阴道液接触并混合后，不仅乳杆菌属菌株，而且众多病原体可以在此类丰富的成分（具有蛋白质、碳水化合物、维生素、矿物质等等）如脱脂乳中生长。病原体如大肠杆菌有时在乳中比在营养肉汤中更快速地生长。
[0017] 就在泌尿生殖器微生物群中通常发现的2种病原体，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌来说，当在对于乳杆菌属特异性的培养基如MRS（表1）中接种时这两种病原体也在约20小时内生长几个对数，而用脱脂乳也获得了类似的结果（未在下文显示）。
[0018] 表1：2种病原体在MRS肉汤中的生长性能。
[0019] 即使从相对高浓度的108 cfu/ml开始，这些病原体也可以在MRS中进一步生长几个对数，仅在约20小时后通过它们生成的低pH终止。也就是说，所谓对于乳杆菌高度特异性的生长培养基也可以促进危险病原体的生长。为了抑制此类病原体的生长，必须在制剂中加入有效且选择性的抑制剂。
[0020] 因此，如果受试者主要具有在阴道中以足够数量存在的健康乳杆菌属菌株，则施用LGF可能是适当的，因为这些固有的乳杆菌属细菌可以代谢它们。然而，对于已经感染或缺乏有益乳杆菌属的生态失调性阴道施用任何种类的LGF或此类非特异性生长因子是不适当的，因为这些可能加强存在的病原体的生长，而不是罕见的乳杆菌属菌株的生长。在用LGF的此类治疗下，生态失调或感染甚至可能变得恶化，所述风险应该被避免。
[0021] 总之：脱脂乳制剂或乳杆菌属生长培养基如MRS的组分在某些情况下可能维持易生（eubiotic）、固有的阴道乳杆菌属的生长。然而，一般而言，它们不适合作为待应用于生态失调性阴道中的药物制剂的治疗成分，因为它们对于乳杆菌属具有低选择性并且不是化学成分良好确定的。本发明预期克服这些缺点。
[0022] 由于通过生理性Doderlein（即阴道）微生物群的乳酸和不同脂肪酸产生，阴道液显示出平均在3.5和4.5之间的酸性pH，这看起来对于阴道稳态是最佳的，因为乳杆菌属物种仍然可以在该pH下生长，由此抑制大多数病原体和机会性微生物。在pH 4.5以上，病原体可以容易地生长，但是在pH 3.5以下，Doderlein乳杆菌属本身的生长变得越来越受抑制。如通过经由Doderlein微生物群的内源性碳水化合物如糖原代谢产物的发酵产生的这种酸性阴道液，是阴道针对感染的防御机制的非常生化基础，并且对于女性的生殖健康至关重要（参考文献12）。
[0023] 考虑到这些因素，在文献中发现关于在阴道组合物中包括未指定的pH缓冲剂的参考文献（例如参考文献13）并不令人惊讶。在另一个申请（参考文献14）中，推荐含有缓冲剂（在所提到的参考文献中化学成分不确定）的组合物，以便将阴道的酸度稳定在范围pH 3.5 - 5.0内。
[0024] 然而，本发明人发现，在所有情况下，仅仅酸性pH不足以预防病原体的生长。在发明人的实验室中进行的实验（下文所示）指示即使在pH 5以下，相关的病原体如金黄色葡萄球菌和大肠杆菌也可以快速地生长。使用的培养基含有乳糖作为碳源和15% MRS作为生长起始促进剂。
[0025] 总之：酸性阴道pH的重要性在科学界是无异议的，并且一些作者已认识到将缓冲剂添加到设计用于阴道应用的药物制剂中的有用性。pH范围从而必须根据生理学清楚地限定在3.5至4.5之间的范围内。有意选择在生理范围上限的pH 4.5值，因为它被患者良好地耐受。pH值约为4或更低的更酸性的值可以引起不适如瘙痒和灼热，因为阴道上皮在生态失调和感染的情况下更敏感。
[0026] 此外，缓冲剂化学组合物和剂量必须在关于例如胶囊的药物配方中指示。最后，缓冲液必须是这样的，以便在阴道内施用后不久发挥其作用并且至少持续直至下一次施用，即12至24小时。
[0027] 除了在上文节段中阐述的酸性缓冲液和营养因子外，还存在在用于阴道应用的有效前或促或共生制剂的设计中起作用的其它因素。一种此类因素是在装置应用后阴道液的氧化还原电位。
[0028] 如我们将显示的，这尤其在细菌性阴道病（BV）的情况下具有相关性，在所述细菌性阴道病中病原体是专性厌氧菌（阴道加德纳菌、二路普雷沃菌、阴道阿托波氏菌（Atopobium vaginae）……）。氧化还原电位确实可以影响这些最后提到的病原体的生长。
[0029] 氧化还原电位对阴道菌丛中的微生物生长和存活的作用显示于图3中（根据参考文献22，Eschenbach等人1985）最后，另一种潜在危险的微生物是真菌白色念珠菌，其经常作为阴道菌丛中的机会菌存在。作者将提出控制真菌生长而不抑制阴道乳杆菌生长的方法。
[0030] 本发明旨在提供解决这些目标的解决方案。
[0031] 发明概述在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗或预防由女性受试者中的致病性微生物引起的泌尿生殖器感染中的组合物，其中所述组合物包含有效量的以下中的每一种：
a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，
其中所述治疗或预防包括将组合物阴道内施用于受试者，用于将受试者的阴道液的酸度稳定在约pH 4.5或更低的生理值下。
a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，
其中所述治疗或预防包括将组合物阴道内施用于受试者，用于将受试者的阴道液的酸度稳定在约pH 4.5或更低的生理值下。
[0032] 在一个实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防由女性受试者中的致病性微生物引起的泌尿生殖器感染的方法，其包括任选地在泌尿生殖器感染的抗感染治疗后，将有效量的以下中的每一种阴道内施用于受试者：a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，
其中所述治疗或预防包括将组合物阴道内施用于受试者。
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，
其中所述治疗或预防包括将组合物阴道内施用于受试者。
[0033] 在另一个实施方案中，本发明提供了用于将受试者的阴道液的酸度稳定在约pH 4.5或更低的生理值下的方法，其包括将有效量的以下中的每一种阴道内施用于受试者：
a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，
其中所述治疗或预防包括将组合物阴道内施用于受试者。
a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，
其中所述治疗或预防包括将组合物阴道内施用于受试者。
[0034] 在另一个实施方案中，本发明涉及pH范围为4至5的适合于经口施用的制剂，其中所述组合物包含有效量的以下中的每一种：a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖。
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖。
[0036] 图2：在用多重抗性金黄色葡萄球菌CCOS 461的生长实验中获得的数据的图示。
[0037] 图3：根据阴道微生物群（菌丛）的组成，阴道中的氧化还原电位Eh和酸性pH的示意性二维表示。
[0038] （根据参考文献Eschenbach等人1985年）本发明提供了组合物，根据所附权利要求，其用于将阴道液的pH稳定在约4.5的生理值下，并且任选地使阴道液的氧化还原电位高于150 mV足够的持续时间，并且选择性地有利于乳杆菌属物种的生长。对抗病原体特别是厌氧菌的生长，作为预防、减轻或治疗由致病性微生物引起的阴道和泌尿生殖器感染如BV的方法。
[0039] 根据本发明的组合物可以任选地包括以抑制念珠菌属而不是乳杆菌属细菌的浓度的天然的、化学地确定的物质。
[0040] 酸度和营养素：针对有害厌氧病原体的制剂该方法使用待阴道应用的特异性、生物化学成分充分确定的药物制剂组合物。
[0041] 在本发明上下文中的组合物含有下述生物化学组分：- 将组合物的pH（在体外和体内）在施用后和直到其后12-24小时期间保持在4.0至5.0的所需范围内，优选4.5的生物化学缓冲剂；
- 具有生物化学性质在其它方面与Doderlein（阴道）微生物群的细菌组分完全相容的抗病原体防腐剂；
- 选择用于选择性地加强乳杆菌属物种生长的生物学、化学成分确定的碳源；
- 支持乳杆菌属物种（已经存在或施用的）的充分生长和增殖的生物可利用的，在其它方面化学纯的氮源；以及任选地
- 可被乳杆菌同化的、足够的、化学成分确定的硫源；
- 氧化还原调节剂（以适当的比率与抗氧化剂组合的氧化剂）；
- 就其针对不同种类的病原体如寄生虫和/或原生动物和/或细菌和/或真菌和/或病毒特异性和靶向的抗感染活性而选择的化学化合物（有机和/或无机），以及选择的矿物质、维生素和其它任选组分，其可能与选择的乳杆菌属物种的生长或不需要的病原体的抑制有关。特别是针对念珠菌的抗真菌剂的非限制性实例是山梨酸酯。
- 具有生物化学性质在其它方面与Doderlein（阴道）微生物群的细菌组分完全相容的抗病原体防腐剂；
- 选择用于选择性地加强乳杆菌属物种生长的生物学、化学成分确定的碳源；
- 支持乳杆菌属物种（已经存在或施用的）的充分生长和增殖的生物可利用的，在其它方面化学纯的氮源；以及任选地
- 可被乳杆菌同化的、足够的、化学成分确定的硫源；
- 氧化还原调节剂（以适当的比率与抗氧化剂组合的氧化剂）；
- 就其针对不同种类的病原体如寄生虫和/或原生动物和/或细菌和/或真菌和/或病毒特异性和靶向的抗感染活性而选择的化学化合物（有机和/或无机），以及选择的矿物质、维生素和其它任选组分，其可能与选择的乳杆菌属物种的生长或不需要的病原体的抑制有关。特别是针对念珠菌的抗真菌剂的非限制性实例是山梨酸酯。
[0042] 所述成分可以单独或者与以下组合存在于本发明的组合物中：作为活细胞或其冻干产物、其无细胞培养上清液或其间歇灭菌产物（tyndallisate）的益生菌乳杆菌属菌株，就其特异性特性选择，包括但不限于针对泌尿生殖器病原体的抗生素样活性，与阴道/尿道上皮细胞的粘附，H2O2、乳酸以及相关的细菌素和酶的产生。
[0043] 制剂本身是在药学可接受的载体或递送系统中的适当的盖仑制剂形式。实际的组合物可以以冷冻干燥制剂、乳膏、糊剂、凝胶液体或栓剂、胶囊或片剂/触针的形式滴注，用于肠道、尿道或阴道应用。可替代地，制剂可以是用于阴道递送的胶囊或片剂或栓剂、乳膏或凝胶（润滑剂）。
[0044] 上述益生菌乳杆菌属物种应在方法的实践中作为通常以105至1010 cfu量的活细胞施用，或者作为以液体、半固体或冻干形式的相应培养物的无细胞上清液施用。乳杆菌属物种优选选自卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、加氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌（L. acidophilus）、惰性乳杆菌（L. iners）、植物乳杆菌（L. plantarum）、发酵乳杆菌（L. fermentum）、乳酸乳杆菌（L. lactis）和约氏乳杆菌（L johnsonii）。
[0045] 相反，根据本发明的方法不包括如先前在其它地方所提议的培养基如动物起源的天然乳品营养素或组分的使用。除在临床研究中需要进一步确认所述生长因子的功效的事实之外，出于下述医学原因，此类营养素和组分不适合于药物阴道内或尿道内应用。它们可以含有具有蛋白质性质的已知和未知物质，对阴道和尿道的敏感上皮和/或可能已存活过灭菌并且成为对患者的潜在健康威胁的细菌孢子、病毒、朊病毒或其组分/代谢产物具有致敏性或刺激性潜力。
[0046] 上文关于益生菌制剂的最佳组成详述的相同考虑类似地适用于胃肠道（GI）环境。尽管与泌尿生殖道相比，GI道富含用于常驻微生物群以及其中驻留的病原体的营养素，但益生菌制剂应帮助维持GI道中的最佳酸度和氧化还原状态，与此同时促进健康益生菌的生长同时抑制病原体和机会性物种的生长的概念仍然有效。
[0047] 然而，当焦点从泌尿生殖器转移到作为生态系统的GI道时，需要考虑两个主要差异。
[0048] 首先，由于其性质和长度，GI道中的酸度是可变的（参考文献17）。通常在正常人中测量到下述pH值：a. 胃：1.0至2.5
b. 近端小肠：6.6
c. 回肠末端：7.5
d. 盲肠：6.4
e. 直肠：7.0
与健康阴道中范围为3.5至5的值相比，肠道中的pH在6到7之间变化。
b. 近端小肠：6.6
c. 回肠末端：7.5
d. 盲肠：6.4
e. 直肠：7.0
与健康阴道中范围为3.5至5的值相比，肠道中的pH在6到7之间变化。
[0049] 另一个差异是GI微生物群的主要酸性发酵产物并非占优势的乳酸，而是完全范围的短链脂肪酸（SCFA），包括乙酸盐或丁酸盐，其构成从饮食通过GI微生物群到宿主的主要碳通量以及对宿主代谢的重要贡献（参考文献18）。
[0050] 因此，当应用于肠道时，包含在根据本发明的组合物中以改善Doderlein微生物群的菌株代谢的益生元纤维将不仅有益于乳杆菌属物种，还有益于例如双歧杆菌和其它常驻物种。有利地，根据本发明的组合物包含在不同水平的肠道中起作用的至少两种不同纤维，因为上部肠道和下部肠道中的GI微生物群分别是在某种程度上不同的。
[0051] 用于泌尿生殖器应用的根据本发明的方法可以在不对经口应用的重大改变的情况下进行转变。事实上，含有益生菌的经口制剂的最佳pH是酸奶或凝乳的那种，其在约4.5的区域内（参考文献19），在健康阴道中发现的相同pH。
[0052] 为此，当考虑含有益生菌的合适经口制剂时，上文提出的考虑因素和相应地执行的实验保留其有效性。如上文指出的，主要差异由益生元纤维的选择组成，因为对于肠道优选包括至少两种纤维。
[0053] 如下文使用的，术语“组合物”指如所附权利要求中限定的用于阴道内施用的组合物以及用于经口使用的制剂。
[0054] 根据本发明的组合物可以含有下述生物化学组分：a. 将组合物的pH（在体外以及一旦在体内溶解）保持在4至5的所需范围内，优选4.5的生物化学缓冲剂；
b. 生物化学性质与肠道乳酸微生物群的细菌成分完全相容的抗病原体防腐剂；
c. 支持乳杆菌属物种（已经存在或施用的）的充分生长和增殖的生物可利用的，在其它方面化学纯的氮源；
d. 选择用于选择性地加强乳杆菌属物种生长，并且在乳酸和SCFA中发酵的生物学、化学成分确定的碳源；优选与以下组合
e. 支持乳杆菌属物种（已经存在或施用的）的充分生长和增殖的生物可利用的，在其它方面化学纯的硫源；
f. 调节阴道液中氧化还原电位的组分，其可以在硫源的存在或不存在下包含在组合物中，
g. 选择的矿物质、和/或维生素、氧化剂/抗氧化剂和其它组分，其可能与选择的乳杆菌属物种的生长或病原体的抑制有关，和
h. 作为活细胞或其冻干产物、其无细胞培养上清液或其间歇灭菌产物的益生菌乳杆菌属菌株，就其特异性特性选择，包括但不限于针对泌尿生殖器和/或肠道病原体的抗生素样活性，与肠道以及阴道/尿道上皮细胞的粘附，H2O2、乳酸以及相关的细菌素和酶的产生。
b. 生物化学性质与肠道乳酸微生物群的细菌成分完全相容的抗病原体防腐剂；
c. 支持乳杆菌属物种（已经存在或施用的）的充分生长和增殖的生物可利用的，在其它方面化学纯的氮源；
d. 选择用于选择性地加强乳杆菌属物种生长，并且在乳酸和SCFA中发酵的生物学、化学成分确定的碳源；优选与以下组合
e. 支持乳杆菌属物种（已经存在或施用的）的充分生长和增殖的生物可利用的，在其它方面化学纯的硫源；
f. 调节阴道液中氧化还原电位的组分，其可以在硫源的存在或不存在下包含在组合物中，
g. 选择的矿物质、和/或维生素、氧化剂/抗氧化剂和其它组分，其可能与选择的乳杆菌属物种的生长或病原体的抑制有关，和
h. 作为活细胞或其冻干产物、其无细胞培养上清液或其间歇灭菌产物的益生菌乳杆菌属菌株，就其特异性特性选择，包括但不限于针对泌尿生殖器和/或肠道病原体的抗生素样活性，与肠道以及阴道/尿道上皮细胞的粘附，H2O2、乳酸以及相关的细菌素和酶的产生。
[0055] 在本发明的上下文中，术语“化学纯的”和“化学确定的”指示合成培养基或物质，其中确切的化学组成是已知的（参考教科书"Basic microbiology"第8版，W. A: Volk，J. C，Brown，1997，第39-40页）。
[0056] 复杂（未确定的）培养基是其中培养基的确切化学构成未知的培养基。确定培养基通常由现成的纯生物化学品组成；复杂培养基通常含有生物起源的复杂材料，如血液或乳或酵母提取物或牛肉提取物，其确切的化学组成明显是不确定的。成分确定培养基是基本培养基。制剂本身可以是在药学可接受的载体或递送系统中的合适的盖伦制剂。实际组合物以液体（酸奶饮料）、半固体（酸奶、干酪）或固体形式，后者包括片剂、胶囊、小药囊以及棒。
[0057] 下述是本发明的优选实施方案。
[0058] a. 缓冲剂此类成分的目的是帮助将应用后的阴道液体的pH值保持在pH 4至5的生理范围内。在溶液中具有此类所需特性的酸及其盐是例如有机酸如脂肪族酸：乙酸、丙酸、丁酸等（a.s.o.），二羧酸如草酸、丙二酸、琥珀酸等，羟酸如乳酸、柠檬酸，二羧酸如苹果酸等。另外，在人生物中发现的其它酸也可以考虑用于该用途，例如磷酸。
[0059] b. 与Doderlein微生物群相容的抗病原体防腐剂如名称本身所示，乳酸菌代谢的特异性是乳酸的产生。这是在传统和工业食品制备中使用乳酸发酵来杀死原始营养素中存在的潜在病原体，并且通过有效量的乳酸（例如酸菜）在发酵过程结束时保存它们的主要原因。由于乳杆菌属物种，特别是阴道物种，良好耐受含有乳酸的酸性环境，后一种化合物实际上是Doderlein相容的防腐剂。乳酸其分别选择的盐（钙、镁、钾、钠、铵等）包括在组合物中以达到此类效应。
[0060] c. 支持乳杆菌属物种的生长的生物化学可利用的氮源很多关注目前给予了所谓的益生元的特性和用途，所述益生元是被益生菌如乳杆菌和双歧杆菌特异性代谢的多糖（参见下一点）。益生元广泛与益生菌组合使用以产生所谓的共生菌（symbiotics），当经口摄入时，所述共生菌确保益生菌细菌在GI道中的更好增殖。然而，在阴道环境中，合适营养素对已经存在或外源施用的益生菌细菌的可用性更受限制，特别是关于必需的氮源（N源）。在药学合适的载体中加入合适的有机和/或无机、化学成分确定的和纯的N源看起来作为允许乳杆菌属物种在阴道中生长和增殖的必需因子。
[0062] d. 支持乳杆菌生长的生物的、化学成分确定的碳源显然，碳源（C源）对于阴道乳杆菌的生长也是必需的。优选地，一种此类来源是对于乳杆菌属物种而不是机会性或致病性细菌特异性的营养素。其实例为不可消化的碳水化合物，如：低聚果糖、低聚半乳糖、葡糖低聚糖（glyco-oligosaccharide）以及其它。这些所谓的益生元的存在赋予了在阴道和肠道中关于存在的病原体或机会性细菌的生长，对于乳杆菌属物种生长的另外差异竞争优点。
[0063] 任选地，其它组分存在于根据本发明的组合物中，例如硫源、矿物质、氧化还原（氧还）调节剂和维生素。
[0064] 优选地，根据本发明的组合物包含支持乳杆菌属物种（已经存在或施用的）的充分生长和增殖的生物可利用的、在其它方面化学纯的硫源，其可以是但不限于，有机/无机化合物，例如硫酸盐、亚硫酸盐、硫化物、硫代硫酸盐、含硫氨基酸如半胱氨酸和甲硫氨酸、半胱氨酸（半胱氨酸的氧化二聚体）等。
[0065] 用于不同乳杆菌属物种生长的基本、化学成分确定的培养基已被发现并出版（参考文献18a）。除上文列出的组分之外，在阴道营养素可用性很差的情况下，考虑还将下述组分添加到优选的制剂中可能是有帮助的：金属离子：例如 Mg2+和Mn2+，抗氧化剂：例如维生素C，N-乙酰半胱氨酸，硫代硫酸盐，维生素：例如核黄素和烟酸；单独或彼此组合。
[0066] 优选成分还有作为物种和菌株的活细胞、冻干产物、间歇灭菌产物、干燥或液体的上清液的益生菌，所述物种和菌株具有针对阴道和优选人泌尿生殖器起源的感染性或炎性状况的已证明的活性。此类物种可以在健康年轻女性的Doderlein微生物群中找到并分离，并且在全世界由加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌和惰性乳杆菌代表。
[0067] 优选成分还是具有针对病原体（细菌、病毒、真菌等等）的活性的化合物，其在本发明的意图和理解中是通常能够抑制病原体生长而不干扰益生菌细菌代谢和生长的那些。此类合适的有机或无机起源的抗真菌化合物的实例分别是半胱氨酸、山梨酸盐或硫代硫酸盐。
[0068] 优选地，根据本发明的组合物包含生物可利用的氧化还原调节剂，即调节生物流体中的氧化还原电位的组分。在本发明的上下文中，术语“氧化还原调节剂”指示能够减少或增强某种生物培养基的氧化还原电位的物质或至少一对物质。参考文献22中指示了用于测定细菌性阴道病中的阴道氧化还原电位的方法。
[0069] 所述氧化还原调节剂可以在如上定义的硫源的存在或不存在下包含在本发明的组合物中。
[0070] 当存在氧化还原调节剂时，根据本发明的组合物特别适合于治疗或预防由于专性厌氧菌的感染，例如，细菌性阴道病（BV）。
[0071] 优选地，氧化还原调节剂选自：- 含硫氧化还原系统，如硫代硫酸钠/亚硫酸氢钠和处于还原态（GSH）和氧化态（GSSG）的谷胱甘肽，
- 基于氧的氧化还原系统，如醌/氢醌，
- 基于氮的氧化还原系统，如亚硝酸盐/硝酸盐，
- 基于硒的氧化还原系统（亚硒酸盐/硒酸盐和硒化物）。例如，可以增强氧化还原电位以便变得确定为正的（>150 mV，优选200-300 mV）并抑制厌氧菌如加德纳菌属（Gardnerella）。
- 基于氧的氧化还原系统，如醌/氢醌，
- 基于氮的氧化还原系统，如亚硝酸盐/硝酸盐，
- 基于硒的氧化还原系统（亚硒酸盐/硒酸盐和硒化物）。例如，可以增强氧化还原电位以便变得确定为正的（>150 mV，优选200-300 mV）并抑制厌氧菌如加德纳菌属（Gardnerella）。
[0072] 优选地，在本发明的上下文中，将至少一种乳杆菌菌株加入本发明的组合物中，所述菌株选自加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌（L. helveticus）、植物乳杆菌、发酵乳杆菌和约氏乳杆菌，更优选地，所述菌株选自具有登录号CNCM I-3482、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（Collection Nationale de Cultures de Microorganismes）（CNCM）的加氏乳杆菌KS 114.1，具有登录号CNCM I-3483、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌116.1，具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，具有登录号CNCM I-
3219、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 121.1，具有登录号CNCM I-3485、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌123.1，加氏乳杆菌126.2，具有登录号CNCM I-3486、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌127.1，以及嗜酸乳杆菌KS 400，最优选地所述乳杆菌属菌株选自詹氏乳杆菌KS 119.1 CNCM I-3217、卷曲乳杆菌119.4 CNCM I-3484、加氏乳杆菌120.1 CNCM I-3218和加氏乳杆菌124.3 CNCM I-3220。
3219、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 121.1，具有登录号CNCM I-3485、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌123.1，加氏乳杆菌126.2，具有登录号CNCM I-3486、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌127.1，以及嗜酸乳杆菌KS 400，最优选地所述乳杆菌属菌株选自詹氏乳杆菌KS 119.1 CNCM I-3217、卷曲乳杆菌119.4 CNCM I-3484、加氏乳杆菌120.1 CNCM I-3218和加氏乳杆菌124.3 CNCM I-3220。
[0073] 上述细菌菌株已根据布达佩斯条约的条件进行保藏，并且是公众可获得的。
[0074] 优选地，在本发明的上下文中，缓冲剂a）是选自包含以下或可替代地由以下组成的酸或其盐：有机酸如脂肪族酸包括乙酸、丙酸、丁酸，二羧酸包括草酸、丙二酸、琥珀酸，羟酸如乳酸、柠檬酸，二羧酸如苹果酸。
[0075] 优选地，在本发明的上下文中，防腐剂b）是乳酸或其衍生物和/或盐。
[0076] 优选地，在本发明的上下文中，氮源c）是铵盐、尿素、天然存在的或合成的氨基酸例如谷氨酸及其混合物。
[0077] 优选地，在本发明的上下文中，碳源d）是不可消化的碳水化合物，例如：低聚果糖、低聚半乳糖、葡糖低聚糖及其混合物。优选地，根据本发明的组合物包含例如，基于1 ml成分的溶液/悬浮液的下述成分。通过将成分的数量乘以3获得例如片剂或胶囊的实际组成：。
[0078] 本发明包括下述实施方案（E）。
[0079] E1. 一种用于治疗或预防由女性受试者中的致病性微生物引起的泌尿生殖器感染中的组合物，其中所述组合物包含有效量的以下中的每一种：a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，以及任选地，
e）抗氧化剂组分，
其中所述治疗或预防包括将组合物阴道内施用于受试者，用于将受试者的阴道液的酸度稳定在约pH 4.5或更低的生理值下。
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，以及任选地，
e）抗氧化剂组分，
其中所述治疗或预防包括将组合物阴道内施用于受试者，用于将受试者的阴道液的酸度稳定在约pH 4.5或更低的生理值下。
[0080] E2. 用于根据E1使用的组合物，其中所述阴道制剂是用于个人使用的润滑凝胶。
[0081] E3. 用于根据E1或E2使用的组合物，其中所述抗氧化剂选自含硫化合物，如N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、硫代硫酸钠。
[0082] E4. 用于根据E1-E3中任一项使用的组合物，其中将选自以下的一种或多种乳杆菌菌株加入制剂中：加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、乳酸乳杆菌、约氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌KS 400。
[0083] E5. 根据E1-E4中任一项使用的组合物，其中将选自以下的一种或多种乳杆菌菌株加入制剂中：加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、乳酸乳杆菌和约氏乳杆菌。
[0084] E6. 用于根据E1-E5中任一项使用的组合物，所述乳杆菌属菌株选自詹氏乳杆菌KS 109，具有登录号CNCM I-3482、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心的加氏乳杆菌KS 114.1，具有登录号CNCM I-3483、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌116.1，具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，具有登录号CNCM I-3219、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 121.1，詹氏乳杆菌KS 122.1，具有登录号CNCM I-3485、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌123.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3，加氏乳杆菌126.2，具有登录号CNCM I-3486、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌127.1，詹氏乳杆菌KS 130.1，具有登录号CNCM I-3360、于2005年2月10日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的瑞士乳杆菌KS 300以及嗜酸乳杆菌KS 400。
[0085] E7. 用于根据E1-E6中任一项使用的组合物，其中所述乳杆菌属菌株选自具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3。
[0086] E8. 用于根据E1-E7中任一项使用的组合物，其中所述制剂进一步包含有效量的能够抑制或根除泌尿生殖器病原体的治疗有效的抗微生物剂。
[0087] E9. 一种用于治疗或预防由女性受试者中的致病性微生物引起的泌尿生殖器感染的方法，其包括任选地在泌尿生殖器感染的抗感染治疗后，将有效量的以下中的每一种阴道内施用于受试者：a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，以及任选地，
e）抗氧化剂组分。
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，以及任选地，
e）抗氧化剂组分。
[0088] E10. 一种用于将受试者的阴道液的酸度稳定在约pH 4.5或更低的生理值下的方法，其包括将有效量的以下中的每一种阴道内施用于受试者：a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，以及任选地，
e）抗氧化剂组分。
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，以及任选地，
e）抗氧化剂组分。
[0089] E11. 根据权利要求9或10的方法，其中所述缓冲剂a）是选自包含以下或可替代地由以下组成的酸或其盐：有机酸如脂肪族酸包括乙酸、丙酸、丁酸，二羧酸包括草酸、丙二酸、琥珀酸，羟酸如乳酸、柠檬酸，二羧酸如苹果酸。
[0090] E12. 根据E9-E11中任一项的方法，其中所述防腐剂b）是乳酸或其衍生物和/或盐。
[0091] E13. 根据E9-E12中任一项的方法，其中所述氮源c）是铵盐、尿素、天然存在的或合成的氨基酸例如谷氨酸及其混合物。
[0092] E14. 根据权利要求E9-E13中任一项的方法，其中所述碳源d）是不可消化的碳水化合物，例如：低聚果糖、低聚半乳糖、葡糖低聚糖及其混合物。
[0093] E15. 一种pH范围为4至5的适合于经口施用的制剂，其中所述组合物包含有效量的以下中的每一种：a）缓冲剂，
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，以及任选地，
e）抗氧化剂组分。
b）与阴道微生物群完全相容的防腐剂，
c）可由阴道微生物群利用的纯分子或离子生物化学氮源，
d）可由阴道微生物群发酵的益生元多糖，以及任选地，
e）抗氧化剂组分。
[0094] E16. 权利要求E15的制剂，其中所述抗氧化剂e）选自含硫化合物，如N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、硫代硫酸钠。
[0095] E17. 权利要求E15或E16的制剂，其中将至少一种乳杆菌菌株加入所述制剂中，所述菌株选自加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、嗜酸乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌和约氏乳杆菌。
[0096] E18. E15至E17中任一项的制剂，其中将至少一种乳杆菌菌株加入所述制剂中，所述菌株选自詹氏乳杆菌KS 109，具有登录号CNCM I-3482、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心的加氏乳杆菌KS 114.1，具有登录号CNCM I-3483、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌116.1，具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，具有登录号CNCM I-3219、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 121.1，詹氏乳杆菌KS
122.1，具有登录号CNCM I-3485、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌123.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3，加氏乳杆菌126.2，具有登录号CNCM I-3486、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌127.1，詹氏乳杆菌KS 130.1，具有登录号CNCM I-
3360、于2005年2月10日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的瑞士乳杆菌KS 300以及嗜酸乳杆菌KS 400。
122.1，具有登录号CNCM I-3485、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌123.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3，加氏乳杆菌126.2，具有登录号CNCM I-3486、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌127.1，詹氏乳杆菌KS 130.1，具有登录号CNCM I-
3360、于2005年2月10日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的瑞士乳杆菌KS 300以及嗜酸乳杆菌KS 400。
[0097] E19. E15至E18中任一项的制剂，其中所述乳杆菌属菌株选自具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌
120.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3以及嗜酸乳杆菌KS 400。
120.1，具有登录号CNCM I-3220、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌124.3以及嗜酸乳杆菌KS 400。
[0098] E20. 用于根据E1-E8中任一项使用的组合物、或根据E15-E19中任一项的制剂，其中所述缓冲剂a）是选自包含以下或可替代地由以下组成的酸或其盐：有机酸如脂肪族酸包括乙酸、丙酸、丁酸，二羧酸包括草酸、丙二酸、琥珀酸，羟酸如乳酸、柠檬酸，二羧酸如苹果酸。
[0099] E21. 用于根据E1-E8或E20中任一项使用的组合物、或根据权利要求15-20中任一项的制剂，其中所述防腐剂b）是乳酸或其衍生物和/或盐。
[0100] E22. 用于根据E1-E8或E20-E21中任一项使用的组合物、或根据权利要求15-21中任一项的制剂，其中所述氮源c）是铵盐、尿素、天然存在的或合成的氨基酸例如谷氨酸及其混合物。
[0101] E23. 用于根据E1-E8或E20-E22中任一项使用的组合物、或根据E15-E22中任一项的制剂，其中所述碳源d）是不可消化的碳水化合物，例如：低聚果糖、低聚半乳糖、葡糖低聚糖及其混合物。
[0102] E24. 用于根据E1-E8或E20-E23中任一项使用的组合物、或根据权利要求15-23中任一项的制剂，如果固体在溶解/悬浮后至3 ml的体积，则其具有43至4.6的pH，并且其包含下述成分/单个剂量：Ca-乳酸五水合物：30-90，优选60 mg
二代柠檬酸镁：15-45，优选30mg
益生元纤维：50-150，优选100 mg
谷氨酸：20-60，优选40 mg
半胱氨酸/硫代硫酸盐：10-50，优选30 mg
赋形剂加入400-1100 mg：适量
E25. 用于根据E24使用或配制的组合物，其进一步包含以下的冻干产物：
具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，和/或
加氏乳杆菌124.3和/或具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，和/或
具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，对于总共20亿至100亿c.f.u.总计50至200 mg。
二代柠檬酸镁：15-45，优选30mg
益生元纤维：50-150，优选100 mg
谷氨酸：20-60，优选40 mg
半胱氨酸/硫代硫酸盐：10-50，优选30 mg
赋形剂加入400-1100 mg：适量
E25. 用于根据E24使用或配制的组合物，其进一步包含以下的冻干产物：
具有登录号CNCM I-3218、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的加氏乳杆菌120.1，和/或
加氏乳杆菌124.3和/或具有登录号CNCM I-3484、于2005年7月22日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的卷曲乳杆菌119.4，和/或
具有登录号CNCM I-3217、于2004年6月4日由Medinova AG保藏于法国国家微生物培养物保藏中心（CNCM）的詹氏乳杆菌KS 119.1，对于总共20亿至100亿c.f.u.总计50至200 mg。
[0103] 实施例：实施例1
不同生长培养基的组成和生长条件
假设在阴道环境中完全溶解（体积：2-5 ml），呈现了许多组合物以允许乳杆菌属物种和病原体在测试条件下的比较生长：关于乳杆菌的生长对照（阳性）：MRS
不含pH调节的常规MRS培养基（Biolife）允许乳杆菌属物种的最佳生长，并且选择用于此目的。
不同生长培养基的组成和生长条件
假设在阴道环境中完全溶解（体积：2-5 ml），呈现了许多组合物以允许乳杆菌属物种和病原体在测试条件下的比较生长：关于乳杆菌的生长对照（阳性）：MRS
不含pH调节的常规MRS培养基（Biolife）允许乳杆菌属物种的最佳生长，并且选择用于此目的。
[0104] 关于病原体的生长对照（阳性）：TS选择不含pH调节的常规胰蛋白酶大豆（TS）肉汤（BD，211825）。
[0105] 基线对照（阴性）选择缓冲或非缓冲的所述MRS的稀释溶液（按体积计15%），以确保分别在低水平的生长或抑制下测试的乳杆菌和病原体的存活。
[0106] 培养基17（根据本发明）：根据下表的优化的测试组合物
并且预期稳定pH以及允许乳杆菌属物种的生长以及同时病原体的抑制。
并且预期稳定pH以及允许乳杆菌属物种的生长以及同时病原体的抑制。
[0107] 生长条件和计数程序所有培养物都在37℃下在厌氧条件下生长而不搅动。
[0108] 通过在琼脂平板上划线培养，由在-80℃下保存的材料制备第一培养物。在温育不超过24小时后，来自平板的单个菌落用于接种5 mL液体培养物并温育至多18小时，然后用于接种25 mL用于生长实验的各种不同培养基。调节起始细胞密度以对应于0.05的光密度（600 nm）。
[0109] 所有实验都一式两份执行。
[0110] 通过连续稀释物在琼脂平板（cfu/mL）上的铺平板，并且通过使用血细胞计数器（Neubauer改进的）计数总细胞数目，经由测量在600 nm处的光密度、pH来监测培养物的生长。
[0111] 测试的菌株：阴道乳杆菌属物种和泌尿生殖器病原体测试的阴道菌株包括生理性阴道微生物群的所有相关乳杆菌属物种，即加氏乳杆菌、卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌，且特别是加氏乳杆菌120.1 CNCM I-3218、加氏乳杆菌124.3 CNCM I-3220、卷曲乳杆菌119.4 CNCM l-3484和詹氏乳杆菌119.1 CNCM I-3217。
[0112] 选择以下作为这些实验中的代表性病原体：a）革兰氏阴性：尿道致病性大肠杆菌CCOS 492，多重抗性，来自University Hospital Zurich的人临床分离株，在1976年分离。
[0113] b）革兰氏阳性：多重抗性金黄色葡萄球菌，CCOS 461，MRSA，人临床分离株，Hospital in Oxford，UK，在1960年分离。
[0114] 尿道致病性大肠杆菌是引起膀胱炎的最常见菌株。金黄色葡萄球菌与称为需氧性阴道炎（AV）类型的阴道感染有关。
[0115] 注解如本节标题中所提到的，选择酸化、防腐和营养因子用于针对兼性厌氧病原体使用。这些可以由氧产生能量如需氧菌，或者也可以厌氧地产生能量（将糖发酵成乳酸盐等）。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌是这类细菌的代表。
[0116] 比较组合物以下是报道组合物的实例，所述组合物虽然具有与培养基17类似的组成，但不能同样良好地抑制上述病原体的生长。
[0117] 实施例2a：pH略微增加的效应作为第一比较实施例，提供了下述培养基11：
培养基11 物质 来源 浓度
Ca-乳酸盐五水合物 Applichem，A3670 20 mg/ml
二代柠檬酸铵 Sigma 09833 10 mg/ml
三代柠檬酸铵 Sigma 10 mg/ml
溶液的最终pH: 5.00 α-葡糖低聚糖 Bio-Ecolians，UCIB Solabia Group，AB020 20 mg/ml
MRS-肉汤 Biolife 4017292 15 %体积
培养基11 物质 来源 浓度
Ca-乳酸盐五水合物 Applichem，A3670 20 mg/ml
二代柠檬酸铵 Sigma 09833 10 mg/ml
三代柠檬酸铵 Sigma 10 mg/ml
溶液的最终pH: 5.00 α-葡糖低聚糖 Bio-Ecolians，UCIB Solabia Group，AB020 20 mg/ml
MRS-肉汤 Biolife 4017292 15 %体积
[0118] 在该培养基中，研究了上文提到病原体在相似实验条件下的计数进化。
[0119] 大肠杆菌CCOS 492金黄色葡萄球菌CCOS 461
。
。
[0120] 因此，将4.5的pH增加半个单位至5.0的最终值足以允许病原体生长超过一个对数，病原体否则在pH 4.5下被抑制。
[0121] 实施例2b：乳酸盐浓度减少50%的效应作为一个实施方案，制备下述培养基12，并且观察在相同培养基中大肠杆菌计数的进化。
培养基12 物质 来源 浓度
Ca-乳酸盐五水合物 Applichem，A3670 10 mg/ml
二代柠檬酸铵 Sigma 09833 10 mg/ml
三代柠檬酸铵 Sigma 10 mg/ml
溶液的最终pH: 5.18 α-葡糖低聚糖 Bio-Ecolians，UCIB Solabia Group，AB020 20 mg/ml
MRS-肉汤 Biolife 4017292 15 %体积
培养基12 物质 来源 浓度
Ca-乳酸盐五水合物 Applichem，A3670 10 mg/ml
二代柠檬酸铵 Sigma 09833 10 mg/ml
三代柠檬酸铵 Sigma 10 mg/ml
溶液的最终pH: 5.18 α-葡糖低聚糖 Bio-Ecolians，UCIB Solabia Group，AB020 20 mg/ml
MRS-肉汤 Biolife 4017292 15 %体积
[0122] 在该培养基中，以及在作为阳性对照培养基的TSA中，在与实施例2a相似的实验条件下研究上文提到的致病性大肠杆菌CCOS 492的计数进化。
[0123] 大肠杆菌CCOS 492。
[0124] 看起来，如培养基12中的乳酸盐浓度减少至培养基17的一半值，伴随着关于后者的抑制能力的显著减少，导致几乎2个对数的病原体数量的增加。
[0125] 总之，看起来如关于培养基17所例示的活性原理（柠檬酸盐、乳酸盐等）的精确浓度是优选的，以确保其高病原体抑制作用。
[0126] 实施例2：关于加氏乳杆菌120.1 CNCM I-3218的结果的详细讨论用于测试在本申请中使用的药物制剂在阴道中的应用效应的体外模型是含有制剂成分的液体培养基，所述制剂成分的浓度与它在阴道中溶解后的浓度大致相同。因此，待在下文描述的体外实验的目标是找到生长培养基制剂，其允许4.0 - 4.5的生理pH固定且维持一天的持续时间。此外，所述培养基应该允许乳杆菌在其中快速建立自身并生长，同时泌尿生殖器病原体应该被抑制。
[0127] 在MRS培养基上生长19.4小时的加氏乳杆菌KS 120.1 CNCM I-3218的细胞计数达到1x 108 cfu/ml，这是在测试的所有3种培养基中的最高值。如预期的，观察到从6.4到4.0的明确pH下降。该对照实验指示所使用的接种物的良好适合性，并且在其它培养基中观察到的生长曲线是正确的。
[0128] 比较培养基17中获得的生长与MRS对照，观察到略微减少的生长（0.4个对数单位）。由于具有相对简单组成的培养基17仅含有减少量的微量元素，预期这种效应。
[0129] 比较培养基17中的生长与15% MRS培养基中的那种，观察到这些培养基之间最终细胞计数中的4.9对数水平的减少。这明确显示培养基17中存在的另外营养素和组分确实促进了测试的乳杆菌属菌株的生长。
[0130] 酸度：pH值从实验开始到其后至多20小时保持显著稳定在约4.5（从4.58到4.41不等），从而确认了缓冲系统的足够强度。
[0131] 结论：根据本发明的描述配制的所呈现的培养基17诱导接种的加氏乳杆菌的显著生长，略微低于纯MRS，但明显强于稀释的（15%）MRS。系统的pH保持恒定在大约4.5的最佳靶向值。
[0132] 实施例3：关于金黄色葡萄球菌CCOS 461的结果的详细讨论在这种情况下待测试的假设是所选择的培养基17能够抑制所选多重抗性病原体的生长。
[0133] 关于在TS培养基上生长21.1小时的金黄色葡萄球菌CCOS 461的细胞计数达到2x108 cfu/ml，这是在测试的所有3种培养基中的最高值，以在t = 0小时9 x 10^6的值开始。另外，在这种情况下，观察到从7.0到4.8的明确pH下降。该对照实验指示所使用的接种物的良好适应性，并且在其它培养基中观察到的生长曲线是正确的。
[0134] 比较培养基17中获得与TS阳性对照的细胞计数的进化，观察到-5.2对数单位的金黄色葡萄球菌CCOS 461的强烈抑制。关于稀释的MRS，抑制也很高，总计-4.4个对数。
[0135] 酸度：即使在活病原体的存在下，pH值从实验开始到其后至多20小时再次保持显著稳定在约4.5，仅具有略微降低（从最初的4.59变为最终的4.40）。
[0136] 结论：根据本发明的描述配制的所呈现的培养基17诱导接种的病原体金黄色葡萄球菌CCOS 461的显著计数降低：关于阳性对照培养基TS，但甚至关于稀释的MRS。培养基17本身随之显示针对该病原体的抗微生物作用。
[0137] 实施例4：实验系列的概述上文在实施例2中提到的剩余菌株的结果应以表格形式连同最后两个实施例一起呈现并评论。
[0138] 初步意见：测试的所有4种乳杆菌都显示相同的趋势：在培养基17上的良好生长，在15% MRS肉汤上的减少生长，以及在MRS肉汤的对照培养基中的极佳生长。还观察到在非缓冲培养基（15% MRS和纯MRS）中的pH下降。
[0139] 对于所有4种乳杆菌属菌株和2种病原体，设计为在4.5的值下缓冲的pH值，测量确认了培养基的酸度的极佳稳定性至多反应时间的20小时或更久。
[0140] 病原体金黄色葡萄球菌和大肠杆菌也明确不能在培养基17中生长。该培养基中的相应细胞浓度随时间急剧降低。
[0141] 表实例4：培养基17中的pH值和针对参考培养基在培养基17（根据本发明）上生长的测试生物的细胞数目的对数（减少或增加）。
[0142] 在表实例4中，概括了在各个生长实验结束时的对数数目中的差异。在加氏乳杆菌KS 120.1 CNCM I-3218中观察到最强的生长促进效应，与15% MRS相比具有几乎5个对数水平的增加，而在加氏乳杆菌KS 124.3 CNCM I-3220中发现最弱的效应，具有仅0.44的对数水平增加。
[0143] 总体结论：在发酵过程期间，对于测试的所有菌株，培养基17的确将pH稳定在4.5和4.3之间的值下。关于乳杆菌属菌株：它们在培养基17上比在15% MRS培养基上生长得更好。在这种特定的培养基中，作为另外氮源的柠檬酸铵和作为缓冲物质的乳酸钙的添加，以及用于益生菌的选择性碳源（在这种特定情况下，葡糖低聚糖）的使用证明足以差异地刺激测试的乳杆菌的生长。另一方面，2种测试的病原体（大肠杆菌和金黄色葡萄球菌）不在“培养基17”上生长，而是被其抑制实施例5
在导致适当培养基如上述培养基17的系统实验中，可以计算待阴道内应用的药物剂量单位（胶囊、片剂……）的定量组合物。如上文提到的，这需要定量地考虑阴道液的体积，该数量明显根据女性的年龄和健康状况而变化。研究已发现此类流体的体积平均起来为约3 ml（参考文献16）。
在导致适当培养基如上述培养基17的系统实验中，可以计算待阴道内应用的药物剂量单位（胶囊、片剂……）的定量组合物。如上文提到的，这需要定量地考虑阴道液的体积，该数量明显根据女性的年龄和健康状况而变化。研究已发现此类流体的体积平均起来为约3 ml（参考文献16）。
[0144] 表实例5.1：根据本发明的益生元阴道胶囊的定量组合物。
[0145] 表实例5.2：根据本发明的阴道胶囊的定量组合物。
[0146] 表实例5.3：根据本发明的阴道胶囊的定量组合物。
[0147] 表实例5.4：根据本发明的经口共生制剂（小药囊）的定量组合物。
[0148] 表实例5.5：根据本发明的益生元阴道润滑剂的定量组合物。
[0149] 优化阴道液的氧化还原电位在上述实施例5.1中，加入M17中的硫源是半胱氨酸或胱氨酸，在实施例5.2中，它是硫代硫酸钠。所有上文鉴定的3种制剂都导致例如在2-5 ml的相应溶液中约4.5的pH值。从酸度、营养素、防腐剂的角度来看，它们看起来非常相似。
[0150] 我们现在提出的问题是它们关于分配给其的任务是否是等价的，即促进阴道中乳杆菌的生长并抑制病原体的生长。为了说明这个问题，我们必须集中于特定的病原体；我们将选择如上文提到的最常见的阴道感染，所谓的细菌性阴道病或者与病原体如阴道加德纳菌或二路普雷沃菌相关的BV。在1985年，David Eschenbach及同事公开了研究论文（参考文献22），其中他们研究了细菌性阴道病和分别pH下的阴道氧化还原电位之间的相关性。
[0151] 一方面，如预期的，他们确认，在15个患者中，范围4.0至4.5内的pH主要与健康的阴道微生物群相关，而在范围4.5至5.5内，患者显示出厌氧菌的强烈存在伴随少量的乳杆菌以及BV的症状。新颖性是他们还可以显示，阴道中的氧化还原电位Eh在体内也强烈依赖于微生物群的状态：而BV患者中的Eh值在+50和-250mV之间，健康阴道的Eh值范围更高，在100和300 mV之间。他们还发现，这不是个体女性的特征，而是仅依赖于微生物群的状态。在用甲硝唑成功治愈后，所有具有负氧化还原电位的女性都恢复到正氧化还原电位（并且pH恢复到更酸性）。
[0152] 有趣的是，不存在在治疗上使用这一事实来生产用于治疗BV的阴道药物产品的尝试，所述产品保证了更高的氧化还原电位。
[0153] 我们通过下述实验程序研究了这一机会：测试程序的概括
制备由20 mg/mL Ca-乳酸盐、10 mg/mL二代柠檬酸铵、20 mg/mL Ecolians和15% MRS肉汤组成的培养基制剂（对应于上述M17）。在测量氧化还原电位和pH后，向该培养基中加入几种化合物（氮源和硫源），并且测定它们对pH和氧化还原电位的作用。
制备由20 mg/mL Ca-乳酸盐、10 mg/mL二代柠檬酸铵、20 mg/mL Ecolians和15% MRS肉汤组成的培养基制剂（对应于上述M17）。在测量氧化还原电位和pH后，向该培养基中加入几种化合物（氮源和硫源），并且测定它们对pH和氧化还原电位的作用。
[0154] 实验的简要说明氧化还原电极（Mettler Toledo LE 501 ORP，连接至pH计MP230，Mettler Toledo）用于测量测试化合物添加之前和添加之后的培养基制剂的氧化还原电位。在信号稳定至少30秒后读取氧化还原值。另外，使用连接至MP225 pH计（Mettler Toledo）的标准pH电极测量pH。
[0155] 在每个测量系列之前，使用参考溶液（Mettler Toledo，编号51350060，220 mV，pH 7（UH = 427 mV））校准氧化还原电极。
[0156] 分析结果。
[0157] 评论向溶液中添加或不添加15% MRS实际上对pH或Eh没有作用
氮源谷氨酸的添加使得培养基略微更酸性且更正电性/氧化，达到300 mV
在这个特定的实验系列中，硫化合物具有最显著的氧化还原电位效应和对酸度的微小作用：比较例如其中半胱氨酸和胱氨酸互换的设置2和设置3。对于半胱氨酸，Eh降低至-
103.0 mV，而具有相同量的半胱氨酸，它升高至265.2 mV。在其侧面上的pH仅最低限度地改变，从4.30到4.41。
氮源谷氨酸的添加使得培养基略微更酸性且更正电性/氧化，达到300 mV
在这个特定的实验系列中，硫化合物具有最显著的氧化还原电位效应和对酸度的微小作用：比较例如其中半胱氨酸和胱氨酸互换的设置2和设置3。对于半胱氨酸，Eh降低至-
103.0 mV，而具有相同量的半胱氨酸，它升高至265.2 mV。在其侧面上的pH仅最低限度地改变，从4.30到4.41。
[0158] 胱氨酸（半胱氨酸的氧化二聚体形式）和MSM（二甲基砜）两者均维持高的正氧化还原电位，而半胱氨酸和硫代硫酸盐促使溶液变为还原而不是氧化，达到-103和-36 mV的负值结论是添加例如半胱氨酸或硫代硫酸盐，获得有利于厌氧菌增殖的环境，而添加胱氨酸或二甲基砜帮助产生有利于乳杆菌发展的环境。这具有治疗意义，因为我们可以通过此类手段不仅选择哪种pH，而且选择哪种氧化还原电位最适合局部对抗确定的病原体。通过使用适当的“氧化还原调节剂”，可以增加根据本发明的抗BV制剂的功效。
[0159] 上述考虑适用于BV的病原体（加德纳菌属、普雷沃菌属、奇异菌属（Atopobium），其本质上是“专性厌氧菌”，即不能针对氧化剂例如过氧化氢或其它氧化剂防御自身的微生物。针对这些病原体增加氧化还原电位是另外的治疗武器。这在不损害或抑制阴道乳杆菌的情况下起作用：原因是乳杆菌虽然本身是厌氧菌，但却是所谓的“氧耐受的”。也就是说，氧和更一般地具有高氧化还原电位（Eh）的环境不阻止其生长。
[0160] 选择氧化还原调节剂优选地，在本发明的上下文中，术语“氧化还原调节剂”指示能够减少或增强某种生物培养基的氧化还原电位的物质或至少一对物质。优选地，氧化还原调节剂e）选自含硫化合物，半胱氨酸/胱氨酸对，如N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、醌/氢醌，基于硒的氧化还原系统（亚硒酸盐/硒酸盐，例如以钠盐形式），硫代硫酸钠/亚硫酸氢钠，处于还原态（GSH）和氧化态（GSSG）的谷胱甘肽。例如，如果需要增强氧化还原电位以便变为确定阳性（>
150 mV）并且抑制厌氧菌如加德纳菌属，则选择胱氨酸（氧化形式）而不是半胱氨酸用于此目的。
150 mV）并且抑制厌氧菌如加德纳菌属，则选择胱氨酸（氧化形式）而不是半胱氨酸用于此目的。
[0161] 具有增强的氧化潜力的抗BV制剂的具体实例实施例6.1：益生元制剂
表实例6.1：根据本发明的针对BV的益生元阴道胶囊的定量组合物
。
表实例6.1：根据本发明的针对BV的益生元阴道胶囊的定量组合物
。
[0162] 实施例6.2：根据本发明的针对厌氧性阴道感染的共生制剂表实例6.2：针对BV的共生阴道胶囊的定量组合物
。
。
[0163] 根除白色念珠菌如上文提到的，念珠菌属是阴道中经常观察到的微生物，或者作为机会性因子或作为病原体，例如在阴道感染如细菌性阴道病的抗感染治疗后出现。念珠菌属的特点是，与BV中涉及的厌氧病原体不同，它们可以与乳杆菌共存，从而仅对阴道微生物群的组成发挥作用。
在这3种不同状态下的Doderlein菌丛的组成（无感染、BV或念珠菌病）最近已得到详细研究，并且由G.Donders及同事公开（参考文献23）。
在这3种不同状态下的Doderlein菌丛的组成（无感染、BV或念珠菌病）最近已得到详细研究，并且由G.Donders及同事公开（参考文献23）。
[0164] 出于上文提到的原因，作者认为，如果可行的话，塑造预期促进乳杆菌但同时抑制病原体的组合物是有用的，以便对一般而言的酵母和特定的白色念珠菌也具有抑制作用。
[0165] 为此目的使用经典和安全的抗真菌药物如克霉唑是很吸引人的，然而，此类分子还具有针对革兰氏阳性菌如乳杆菌属的杀菌活性（参考文献24"）。在寻找用于我们预期目的的合适分子时，我们发现了天然存在的有机酸（山梨酸），其被广泛用作食品和制药行业中针对酵母和霉菌降解的安全防腐剂。因此，问题是测试山梨酸（通常作为山梨酸钠或山梨酸钾可获得）是否能够在对于阴道乳杆菌非抑制性的浓度下抑制念珠菌属。对于山梨酸酯活性报道的最佳值为约pH 4.5，其完全符合我们选择的范围。实际用于针对酵母和霉菌防腐的浓度是0.1%（参考文献25）。
[0166] 为此，执行下述实验。
[0167] 测试程序的概述测试菌株的新鲜过夜培养物用于接种补充有不同浓度的山梨酸钾的测试培养基。通过测量在开始时、在6小时后和在24小时后的光密度和pH来确定生长。
[0168] 成长条件：用于过夜培养的培养基： 具有Tween的MRS肉汤
测试培养基： 具有Tween的MRS肉汤，稀释至30%，用乳酸将pH调节至4.5
测试体积： 5ml
温育： 37℃，厌氧条件，伴随振荡（120 rpm）
用于接种的细胞密度： 大约107 cfu/ml
山梨酸钾浓度： 0.00%、0.01%、0.05%、0.1%、0.5%、1.0%、1.5%（重量/体积）测量参数： pH，在590 nm下的OD
测量时间： t= 0小时、6小时和24小时
测试培养基： 具有Tween的MRS肉汤，稀释至30%，用乳酸将pH调节至4.5
测试体积： 5ml
温育： 37℃，厌氧条件，伴随振荡（120 rpm）
用于接种的细胞密度： 大约107 cfu/ml
山梨酸钾浓度： 0.00%、0.01%、0.05%、0.1%、0.5%、1.0%、1.5%（重量/体积）测量参数： pH，在590 nm下的OD
测量时间： t= 0小时、6小时和24小时
[0169] 测试的细菌培养物加氏乳杆菌CCOS 960（具有登录号DSM32296，于2016年4月21日由普罗生物瑞士有限公司（Probioswiss GmbH） 保藏于德国微生物保藏中心（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ)））、加氏乳杆菌KS 121.1、卷曲乳杆菌KS
116.1
培养物的制备
通过在MRS琼脂上培养1至3天，从冷冻保存的（-80℃）工作原种中重新激活所有培养物。来自这些平板的单个菌落用于接种5 mL MRS肉汤。在温育过夜后，107 cfu/ml用于进行实验。
116.1
培养物的制备
通过在MRS琼脂上培养1至3天，从冷冻保存的（-80℃）工作原种中重新激活所有培养物。来自这些平板的单个菌落用于接种5 mL MRS肉汤。在温育过夜后，107 cfu/ml用于进行实验。
[0170] 分析结果。
[0171] 结论关于对测试的乳杆菌的生长的强烈抑制作用，需要最低浓度1%（或10 mg/ml）的山梨酸钾，对于轻微抑制，需要0.5%或更高。
[0172] 根据Kramer和Assadian（参考文献25），用于抑制致病性细菌和真菌生长的抑菌浓度要低得多（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌（K. pneumoniae）：50-100 μg/ml，特异青霉素（Penicillium notatum）、黑曲霉（Aspergillus niger）200-500μg/ml，酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）：50-100 μg/ml）。
[0173] 因此，代表标准Doderlein菌丛的测试乳杆菌（加氏乳杆菌、卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌）应该能够在浓度至多0.1 - 0.2%（1.5-3 mg/ml）的山梨酸钾的存在下维持其生长。
[0174] 转化成将溶解于大约3 ml阴道液中的胶囊制剂，这相当于向组合物中加入3至6 mg山梨酸钾（参见下文）。
[0175] 实施例7.1：同样具有抗念珠菌属活性的针对专性厌氧病原体的制剂表实例7.1：不含冻干产物并且还含有山梨酸盐作为抗真菌成分的根据本发明的益生元阴道胶囊的定量组合物，
。
。
[0176] 表实例7.2：含有冻干产物以及山梨酸钾作为抗真菌剂的根据本发明的阴道胶囊的定量组合物。
[0177] 实施例7.3：具有针对BV和念珠菌属的活性的润滑剂益生元制剂表实例7.3：根据本发明的益生元阴道润滑剂的定量组合物
。
。
[0178] 引用的参考文献1. Krauss-Silva L，Almada-Horta A.，Alves M.B.，Camacho K.G.，Moreira M.E.L.，Braga A. 2014. Basic vaginal pH，bacterial vaginosis and aerobic vaginitis: prevalence in early pregnancy and risk of spontaneous preterm delivery，a prospective study in a low socioeconomic and multiethnic South American population. BMC Pregnancy and Childbirth 14:107.
2. Donders G.G.，Vereecken A，Bosmans E.，Dekeersmaecker A.，Salembier G.，Spitz B. 2002. Definition of a type of abnormal vaginal microbiota that is distinct from bacterial vaginosis: aerobic vaginitis. BJOG. 109（1）:34-43.
3. http://www.patient.co.uk/doctor/bacterial-vaginosis-pro（21.05.2015）. Up to 70% of patients have a relapse within three months of successful treatment.
4. Doderlein A. 1892. Das Scheidensekret und seine Bedeutung fur das Puerperalfieber. Zbl. Bakteriol. 11 : 699.
5. Spurbeck R.R.，Arvidson C.G. 2011. Lactobacilli at the front line of defense against vaginally acquired infections. Future Microbiology 6（5）: 567-
582.
6. Atassi F.，Brassart D.，Grob P.，Graf F.，Servin A.L. 2006. Lactobacillus strains isolated from the vaginal microbiota of healthy women inhibit Prevotella bivia and Gardnerella vaginalis in coculture and cell culture. FEMS Immunol Med Microbio 48（3）424-432.
7. Atassi F.，Brassart D.，Grob P.，Graf F.，Servin A.L. 2006. Vaginal Lactobacillus isolates inhibit uropathogenic Escherichia coli. FEMS Microbiol Lett 257（1）: 132-135.
8. EP 1 812 023 B1 ，F. Graf 6/2004.EP 2 561 880 B1 ，F. Graf 6/2004.
9. Reid等人，USP 5,645,830，7/1997.
10. De Man J.C.，Rogosa M.，Sharpe M.E. 1960. A medium for the cultivation of lactobacilli. Journal of Applied Bacteriology 23（1）: 130-135.
11. Chrisope G等人，Gynelogix Inc WO 9846261 www.disknet.com/indiana_biol ab/b028.htm.（21.05.2015）.
12. http://www.cdc.gov/std/treatment/2010/vaginal-discharge.htm .
13. ELLEN AB，Darviczky K等人，2010，WO2010023222.
14. Procter&Gamble Co，Carella A M等人，1997 W09729763.
15. Laxmi N.P.，Mutamed M.A.，Nagendra P. S 2011. Effect of carbon and nitrogen sources on growth of Bifidobacterium animalis BB12 and Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus ATCC 11842 and production of β-galactosidase under different culture condition. International Food Research Journal 18:
373-380.
16. Eschenbach D.A.，Thwin S.S.，Patton D.L.，Hooton T.M.，Stapleton A.E.，Agnew K.，Winter C，Amalia Meier A.，Walter E. Stamm W.E. 2000. Influence of the Normal Menstrual Cycle on Vaginal Tissue，Discharge，and Micromicrobiota. Clinical Infectious Diseases 30（6）: 901-907.
17. Gut. 1988 Aug；29（8）: 1035-41.
Measurement of gastrointestinal pH profiles in normal ambulant human subjects.
Evans DF，Pye G，Bramley R，Clark AG，Dyson TJ，Hardcastle JD.
18. Gut Microbes Volume 7，Issue 3，2016 Special Issue: Gut Microbiota Metabolites in Health and Disease ，Douglas J. Morrison & Tom Preston ，pages
189-200.
18a. Maria Elli等人，EP1038951 A1 ，Societe Des Produits Nestle S.A.
19. https://de.wikipedia.org/wiki/Joghurt.
20. The Journal of Infectious Diseases，Volume 180，Issue 6，pp. 1950-1956. May A. D. Antonio1，Stephen E. Hawes3 and Sharon L. Hillier1.
21. Use and procurement of additional lubricants with male and female condoms: WHO/UNFPA/FHI360 - Advisory Note，http://apps.who.int/iris/bitstream/
10665/76580/1/WHO_RHR_12.33_eng.pdf，WHO 2012.
22. The Journal of Infectious Diseases VOL. 152，No. 2，1985，K.H. Holmes，K.C.S. Chen，CM. Lipinsky and D.A. Eschenbach.
23. B. Vitali等人，Environ. Microbiol. September 2007，Vol. 73 No. 18，5731-
5741.
24. P.R.Sawyer等人，Drugs 1975，Vol. 9，Issue 6，pp. 424-447，"Clotrimazole: A Review of its Antifungal Activity and Therapeutic Efficacy.
25. Kramer A.，Assadian O.（Eds.）2008. WallhauBers Praxis der
Sterilisation，Antiseptik und Konservierung. Georg Thieme Verlag. Stuttgart。
2. Donders G.G.，Vereecken A，Bosmans E.，Dekeersmaecker A.，Salembier G.，Spitz B. 2002. Definition of a type of abnormal vaginal microbiota that is distinct from bacterial vaginosis: aerobic vaginitis. BJOG. 109（1）:34-43.
3. http://www.patient.co.uk/doctor/bacterial-vaginosis-pro（21.05.2015）. Up to 70% of patients have a relapse within three months of successful treatment.
4. Doderlein A. 1892. Das Scheidensekret und seine Bedeutung fur das Puerperalfieber. Zbl. Bakteriol. 11 : 699.
5. Spurbeck R.R.，Arvidson C.G. 2011. Lactobacilli at the front line of defense against vaginally acquired infections. Future Microbiology 6（5）: 567-
582.
6. Atassi F.，Brassart D.，Grob P.，Graf F.，Servin A.L. 2006. Lactobacillus strains isolated from the vaginal microbiota of healthy women inhibit Prevotella bivia and Gardnerella vaginalis in coculture and cell culture. FEMS Immunol Med Microbio 48（3）424-432.
7. Atassi F.，Brassart D.，Grob P.，Graf F.，Servin A.L. 2006. Vaginal Lactobacillus isolates inhibit uropathogenic Escherichia coli. FEMS Microbiol Lett 257（1）: 132-135.
8. EP 1 812 023 B1 ，F. Graf 6/2004.EP 2 561 880 B1 ，F. Graf 6/2004.
9. Reid等人，USP 5,645,830，7/1997.
10. De Man J.C.，Rogosa M.，Sharpe M.E. 1960. A medium for the cultivation of lactobacilli. Journal of Applied Bacteriology 23（1）: 130-135.
11. Chrisope G等人，Gynelogix Inc WO 9846261 www.disknet.com/indiana_biol ab/b028.htm.（21.05.2015）.
12. http://www.cdc.gov/std/treatment/2010/vaginal-discharge.htm .
13. ELLEN AB，Darviczky K等人，2010，WO2010023222.
14. Procter&Gamble Co，Carella A M等人，1997 W09729763.
15. Laxmi N.P.，Mutamed M.A.，Nagendra P. S 2011. Effect of carbon and nitrogen sources on growth of Bifidobacterium animalis BB12 and Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus ATCC 11842 and production of β-galactosidase under different culture condition. International Food Research Journal 18:
373-380.
16. Eschenbach D.A.，Thwin S.S.，Patton D.L.，Hooton T.M.，Stapleton A.E.，Agnew K.，Winter C，Amalia Meier A.，Walter E. Stamm W.E. 2000. Influence of the Normal Menstrual Cycle on Vaginal Tissue，Discharge，and Micromicrobiota. Clinical Infectious Diseases 30（6）: 901-907.
17. Gut. 1988 Aug；29（8）: 1035-41.
Measurement of gastrointestinal pH profiles in normal ambulant human subjects.
Evans DF，Pye G，Bramley R，Clark AG，Dyson TJ，Hardcastle JD.
18. Gut Microbes Volume 7，Issue 3，2016 Special Issue: Gut Microbiota Metabolites in Health and Disease ，Douglas J. Morrison & Tom Preston ，pages
189-200.
18a. Maria Elli等人，EP1038951 A1 ，Societe Des Produits Nestle S.A.
19. https://de.wikipedia.org/wiki/Joghurt.
20. The Journal of Infectious Diseases，Volume 180，Issue 6，pp. 1950-1956. May A. D. Antonio1，Stephen E. Hawes3 and Sharon L. Hillier1.
21. Use and procurement of additional lubricants with male and female condoms: WHO/UNFPA/FHI360 - Advisory Note，http://apps.who.int/iris/bitstream/
10665/76580/1/WHO_RHR_12.33_eng.pdf，WHO 2012.
22. The Journal of Infectious Diseases VOL. 152，No. 2，1985，K.H. Holmes，K.C.S. Chen，CM. Lipinsky and D.A. Eschenbach.
23. B. Vitali等人，Environ. Microbiol. September 2007，Vol. 73 No. 18，5731-
5741.
24. P.R.Sawyer等人，Drugs 1975，Vol. 9，Issue 6，pp. 424-447，"Clotrimazole: A Review of its Antifungal Activity and Therapeutic Efficacy.
25. Kramer A.，Assadian O.（Eds.）2008. WallhauBers Praxis der
Sterilisation，Antiseptik und Konservierung. Georg Thieme Verlag. Stuttgart。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种湿帘根木微生物除臭工艺 | 2020-05-12 | 400 |
| 用于从细菌荚膜多糖基制剂中去除杂质的方法 | 2020-05-13 | 108 |
| 一种油田采出水用阻垢杀菌剂 | 2020-05-14 | 494 |
| 一种高岭石负载生物合成纳米硫铁材料及其制备方法与应用 | 2020-05-08 | 590 |
| 一种利用微生物诱导进行堆场渗漏封堵的方法 | 2020-05-13 | 45 |
| 一种极端酸化矿山土壤的改良方法 | 2020-05-13 | 487 |
| 一种原位去除市政污水管道井硫化氢的零价铁系统及其运行方法 | 2020-05-15 | 44 |
| 一种油田污水的除硫装置和应用 | 2020-05-12 | 987 |
| 自由基产生催化剂、自由基的制造方法、氧化反应产物的制造方法、药剂和农畜产用药剂 | 2020-05-14 | 287 |
| 一种基于臭氧气浮装置的油气田采出水处理系统及方法 | 2020-05-12 | 82 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
硫酸盐还原菌热门专利
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈