首页 / 专利库 / 酸,碱,盐,酸酐和碱 / 硫酸 / 硫酸盐 / 硫酸镁 / 一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法

一种制备截短侧素的侧耳菌发酵方法

阅读:187发布:2020-05-08

专利汇可以提供一种制备截短侧素的侧耳菌发酵方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种制备截短侧 耳 素的侧耳菌 发酵 方法,所述的方法包括以下具体步骤:S1:培养基配备:准备装有一级培养基的一级培养罐、装有二级培养基的二级 种子 培养罐和装有发酵液的发酵培养罐;S2:一级种子培养:将培养好的侧耳菌母瓶种子液接入到一级种子培养罐中进行一级种子培养,至菌体浓度为15%~25%,pH值为6~8 时移 入到二级种子培养罐中;S3:二级种子培养:至菌液浓度为20%~40%,pH值为6-8时全部移入含有发酵培养罐中;S4:发酵培养:在发酵培养罐中进行发酵液的培养,化学效价达到18000~20000u/ml时发酵终止;S5:补料。采用果糖代替 葡萄糖 作为 碳 源,产量比基本发酵培养基提高了10%,添加 硫酸 亚 铁 ,对于截短侧耳素的合成有促进作用,进一步提高化学效价。,下面是一种制备截短侧素的侧耳菌发酵方法专利的具体信息内容。

1.一种制备截短侧素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:所述的方法包括以下具体步骤:
S1:培养基配备:准备装有一级培养基的一级培养罐、装有二级培养基的二级种子培养罐和装有发酵液的发酵培养罐;
S2:一级种子培养:将已经培养好的侧耳菌母瓶种子液按照1~3L/m3接种量接入到一级种子培养罐中进行一级种子培养,至菌体浓度为15%~25%,pH值为6~8时全部移入到二级种子培养罐中;
S3:二级种子培养:通过二级种子培养罐进行二级种子培养,至菌液浓度为20%~
40%,pH值为6-8时全部移入含有发酵培养罐中;
S4:发酵培养:在发酵培养罐中进行发酵液的培养,至发酵液中菌体浓度为40%~
60%,基氮在5mg/100ml~10mg/100ml,脂肪在1%~2%,还原糖在1%~2%,化学效价达到18000~20000u/ml时发酵终止;
S5:补料:在发酵培养罐中发酵的过程中进行补料。
2.根据权利要求1所述的一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:所述一级培养基的组成为:果糖5~20g/L、冷榨黄豆饼粉20~50g/L、磷酸氢二1~10g/L、硫酸
0.1~0.4g/L、硝酸0.5~1.0g/L、氯化钠0.1~0.2g/L、硫酸亚0.02~0.08g/L、消泡剂
0.3~0.9g/L。
3.根据权利要求1所述的一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:所述二级培养基的组成为:果糖18~24g/L、冷榨黄豆饼粉10~15g/L、磷酸氢二钾1~4g/L、硫酸镁
0.2~0.4g/L、硝酸钙0.2~0.4g/L、氯化钠0.1~0.2g/L、硫酸亚铁0.04~0.08g/L、消泡剂
0.6~0.9g/L。
4.根据权利要求1所述的一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:所述发酵培养基的组成为:果糖20~30g/L、冷榨黄豆饼粉15~20g/L、玉米浆15~20g/L、磷酸氢二钾1~4g/L、硫酸镁0.2~0.4g/L、硝酸钙0.6~1.2g/L、酵母提取物2~5g/L、氯化钠0.1~
0.2g/L、玉米油5~15ml/L、硫酸亚铁0.04~0.08g/L、消泡剂0.6~0.9g/L。
5.根据权利要求1所述的一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:在所述侧耳菌母瓶种子液接入到一级种子培养罐之前,首先要将一级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
6.根据权利要求1所述的一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:在所述一级种子液移入二级种子培养罐之前,首先要将二级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在
10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
7.根据权利要求1所述的一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:在所述二级种子液移入发酵培养罐之前,首先要将发酵培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在6~8;氨基氮含量控制在20mg/
100ml~80mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
8.根据权利要求1所述的一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:所述一级种子培养条件为:罐压:控制在0.02~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;空气流量:0~20h,1~5m3/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在120~150r/min;一级种子培养时间30~60h,
二级种子培养条件为:罐压:控制在0.04~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;空气流量:0~20h,1~5m3/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在160~180r/min;一级种子培养时间40~60h。
9.根据权利要求1所述的一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:在所述发酵培养罐中,发酵培养条件为:
a、氨基氮控制:发酵周期50~180h控制在100~10mg/100ml;发酵周期181h~发酵结束控制在50~10mg/100ml;
b、发酵周期:培养时间200~300h;
c、pH控制:0~60h,pH自然,不受控制;81~180h,pH控制在6~8;181h~发酵结束,pH控制在6.2~7.8;
d、空气流量:0~40h:10~20m3/h;41~180h:20~40m3/h;181h~发酵结束:15~20m3/h;
e、压力控制:罐压0.01~0.05MPa;
f、温度控制:发酵全程温度控制在20~28℃;
g、无菌检查:发酵过程中进行菌检,要求无其它杂菌;
h、菌体浓度:0~90h,菌体自然生长,浓度不受控制;91~180h,菌体浓度控制在50~
60%;181h~发酵结束,菌体浓度控制在30~40%;
I、搅拌转速:0~80h,搅拌转速控制在80~100r/min;81~200h,搅拌转速控制在120~
150r/min;181h~发酵结束,搅拌转速控制在,100~120r/min。
10.根据权利要求1所述的一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,其特征在于:所述在发酵培养罐中发酵的过程中进行补料为:
(1)补油:补充玉米油,在发酵50~180h过程中,当脂肪含量<2%,采用流加的方式补入玉米油,脂肪含量控制在2~3%;在发酵181h~发酵结束过程中,当脂肪含量<1%,采用流加的方式补入玉米油,脂肪含量控制在1~2%;
(2)补糖:补糖选择浓度为29~30%果糖,在发酵60~180h过程中,当还原糖浓度<
2%,补入果溶液,还原糖的含量控制在2~3%,在发酵181h~发酵结束过程中,当还原糖浓度<1%,补入果溶液,还原糖的含量控制在1~2%;
(3)补:在发酵周期91~180h过程中,当菌体浓度>60%,补入已灭菌的自来水,控制菌体浓度在50~60%,在发酵181h~发酵结束,当菌体浓度>40%,补入已灭菌的自来水,控制菌体浓度在30~40%;
2+ 2+ 2+
(4)补Fe :在发酵周期80~180h过程中,当Fe 浓度<0.06%,补入硫酸亚铁溶液,Fe含量控制在0.06~0.08%,在发酵181h~发酵结束过程中,当Fe2+浓度<0.03%,补入硫酸亚铁溶液,Fe2+含量控制在0.03~0.06%.
(5)补酸或补:0~80h:pH处在发酵自然状态;81~180h,pH控制在6~8;181h~发酵结束,pH 6.2~7.8。当pH检测结果低于控制范围的下限,加入10~20%、已灭菌的氢化钠溶液进行调节。

说明书全文

一种制备截短侧素的侧耳菌发酵方法

技术领域

[0001] 本发明涉及发酵技术领域,具体为一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法。

背景技术

[0002] 截短侧耳素(Pleuromutilin)是由侧耳菌(Pleurotus mutilus)通过发酵产生的一类广谱的二萜烯类抗生素,是截短侧耳素类半合成衍生物的前体。截短侧耳素类是一大类具有较好抗菌活性的抗生素家族,能够有效抑制大部分革兰氏阳性菌以及部分革兰氏阴性菌。
[0003] 目前,国内大部分生产厂家侧耳菌的种子培养基基础原料是酵母粉、葡萄糖、糊精、磷酸二氢硫酸铵;发酵培养基基础原料是豆油、葡萄糖、热榨黄豆饼粉、酵母粉、磷酸二氢钾、硫酸镁硝酸氯化钠和硫酸。目前已有通过冷榨黄豆饼粉和玉米油代替传统的豆油和热榨黄豆饼粉以减小其成本以及提高发酵效价,但是仍有待提高,首先采用葡萄糖相比于蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉等虽然能够有效提高截短侧耳素的产量,但是经实验证明,葡萄糖和可溶性淀粉的产量相差不大,但是果糖相对于葡萄糖的产量却能够提高10%左右,而且现有采用的培养基不含有Fe2+,经实验证明添加适量的Fe2+,能够明细对截短侧耳素的产量起到影响。
[0004] 基于此,本发明设计了一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,以解决上述提到的问题。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,以解决上述背景技术中提出的问题。
[0006] 为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,所述的方法包括以下具体步骤:
[0007] S1:培养基配备:准备装有一级培养基的一级培养罐、装有二级培养基的二级种子培养罐和装有发酵液的发酵培养罐;
[0008] S2:一级种子培养:将已经培养好的侧耳菌母瓶种子液按照1~3L/m3接种量接入到一级种子培养罐中进行一级种子培养,至菌体浓度为15%~25%,pH值为6~8时全部移入到二级种子培养罐中;
[0009] S3:二级种子培养:通过二级种子培养罐进行二级种子培养,至菌液浓度为20%~40%,pH值为6-8时全部移入含有发酵培养罐中;
[0010] S4:发酵培养:在发酵培养罐中进行发酵液的培养,至发酵液中菌体浓度为30%~40%,基氮在5mg/100ml~10mg/100ml,脂肪在1%~2%,还原糖在1%~2%,化学效价达到18000~20000u/ml时发酵终止;
[0011] S5:补料:在发酵培养罐中发酵的过程中进行补料。
[0012] 优选的,所述一级培养基的组成为:果糖5~20g/L、冷榨黄豆饼粉20~50g/L、磷酸氢二钾1~10g/L、硫酸镁0.1~0.4g/L、硝酸钙0.5~1.0g/L、氯化钠0.1~0.2g/L、硫酸亚铁0.02~0.08g/L、消泡剂0.3~0.9g/L。
[0013] 优选的,所述二级培养基的组成为:果糖18~24g/L、冷榨黄豆饼粉10~15g/L、磷酸氢二钾1~4g/L、硫酸镁0.2~0.4g/L、硝酸钙0.2~0.4g/L、氯化钠0.1~0.2g/L、硫酸亚铁0.04~0.08g/L、消泡剂0.6~0.9g/L。
[0014] 优选的,所述发酵培养基的组成为:果糖20~30g/L、冷榨黄豆饼粉15~20g/L、玉米浆15~20g/L、磷酸氢二钾1~4g/L、硫酸镁0.2~0.4g/L、硝酸钙0.6~1.2g/L、酵母提取物2~5g/L、氯化钠0.1~0.2g/L、玉米油5~15ml/L、硫酸亚铁0.04~0.08g/L、消泡剂0.6~0.9g/L。
[0015] 优选的,在所述侧耳菌母瓶种子液接入到一级种子培养罐之前,首先要将一级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
[0016] 优选的,在所述一级种子液移入二级种子培养罐之前,首先要将二级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
[0017] 优选的,在所述二级种子液移入发酵培养罐之前,首先要将发酵培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在6~8;氨基氮含量控制在20~80mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
[0018] 优选的,所述
[0019] 一级种子培养条件为:罐压:控制在0.02~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;空气流量:0~20h,1~5m3/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在120~
150r/min;一级种子培养时间30~60h,
[0020] 二级种子培养条件为:罐压:控制在0.04~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;空气流量:0~20h,1~5m3/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在160~
180r/min;一级种子培养时间40~60h。
[0021] 优选的,在所述发酵培养罐中,发酵培养条件为:
[0022] a、氨基氮控制:发酵周期50~180h控制在100~10mg/100ml;发酵周期181h~发酵结束控制在50~10mg/100ml;
[0023] b、发酵周期:培养时间200~300h;
[0024] c、pH控制:0~60h,pH自然,不受控制;81~180h,pH控制在6~8;181h~发酵结束,pH控制在6.2~7.8;
[0025] d、空气流量:0~40h:10~20m3/h;41~180h:20~40m3/h;181h~发酵结束:15~3
20m/h;
[0026] e、压力控制:罐压0.01~0.05MPa;
[0027] f、温度控制:发酵全程温度控制在20~28℃;
[0028] g、无菌检查:发酵过程中进行菌检,要求无其它杂菌;
[0029] h、菌体浓度:0~90h,菌体自然生长,浓度不受控制;91~180h,菌体浓度控制在50~60%;181h~发酵结束,菌体浓度控制在30~40%;
[0030] I、搅拌转速:0~80h,搅拌转速控制在80~100r/min;81~200h,搅拌转速控制在120~150r/min;181h~发酵结束,搅拌转速控制在,100~120r/min。
[0031] 优选的,所述在发酵培养罐中发酵的过程中进行补料为:
[0032] (1)补油:补充玉米油,在发酵50~180h过程中,当脂肪含量<2%,采用流加的方式补入玉米油,脂肪含量控制在2~3%;在发酵181h~发酵结束过程中,当脂肪含量<1%,采用流加的方式补入玉米油,脂肪含量控制在1~2%;
[0033] (2)补糖:补糖选择浓度为29~30%果糖,在发酵60~180h过程中,当还原糖浓度<2%,补入果溶液,还原糖的含量控制在2~3%,在发酵181h~发酵结束过程中,当还原糖浓度<1%,补入果溶液,还原糖的含量控制在1~2%;
[0034] (3)补:在发酵周期91~180h过程中,当菌体浓度>60%,补入已灭菌的自来水,控制菌体浓度在50~60%,在发酵181h~发酵结束,当菌体浓度>40%,补入已灭菌的自来水,控制菌体浓度在30~40%;
[0035] (4)补Fe2+:在发酵周期80~180h过程中,当Fe2+浓度<0.06%,补入硫酸亚铁溶液,Fe2+含量控制在0.06~0.08%,在发酵181h~发酵结束过程中,当Fe2+浓度<0.03%,补入硫酸亚铁溶液,Fe2+含量控制在0.03~0.06%.
[0036] (5)补酸或补:0~80h:pH处在发酵自然状态;81~180h,pH控制在6~8;181h~发酵结束,pH 6.2~7.8。当pH检测结果低于控制范围的下限,加入10~20%、已灭菌的氢化钠溶液进行调节。
[0037] 与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明通过在截短侧耳素发酵生产过程中的种子培养基和发酵培养基的成分配比中,通过冷榨黄豆饼粉和玉米油代替传统的豆油和热榨黄豆饼粉以减小其成本以及提高发酵效价外,采用果糖代替葡萄糖作为源,产量比基本发酵培养基提高了10%,而在培养基中添加硫酸亚铁,首先Fe2+能以硫铁蛋白的形式参与电子传递链反应,通过增加Fe2+—Fe3+之间的电子传递来增加能量的产生,而且铁离子能与血红素结合,参与氧气的运输,增加氧气的摄入,在0.02%~0.04%之间,随着Fe2+的浓度增加,产物产品比基本发酵培养基提高了61.4%,对于截短侧耳素的合成有促进作用,进一步提高化学效价。

具体实施方式

[0038] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
[0039] 下述实施例的菌种选用侧耳菌(Pleurotus mutilus):生产使用的菌种来源为母瓶发酵液。母瓶发酵液质量:pH5~7;菌体浓度10~30%;镜检无杂菌;摇瓶发酵单位13000~14000u/ml。
[0040] 以下实施例中消泡剂选择潍坊金水源化工有限公司生产的。
[0041] 实施例1
[0042] 本发明提供一种技术方案:一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,所述的方法包括以下具体步骤
[0043] S1:培养基配备:准备装有一级培养基的一级培养罐、装有二级培养基的二级种子培养罐和装有发酵液的发酵培养罐;
[0044] 在1m3的一级种子培养罐内加入果糖5kg、冷榨黄豆饼粉20kg、磷酸氢二钾1kg、硫酸镁0.1kg、硝酸钙0.5kg、氯化钠0.1kg、硫酸亚铁0.02kg、消泡剂0.3kg。
[0045] 在1m3的二级种子培养罐内加入果糖18kg、冷榨黄豆饼粉10kg、磷酸氢二钾1kg、硫酸镁0.2kg、硝酸钙0.2kg、氯化钠0.1kg、硫酸亚铁0.04kg、消泡剂0.6kg。
[0046] 在1m3的发酵培养罐内加入果糖20kg、冷榨黄豆饼粉15kg、玉米浆15kg、磷酸氢二钾1kg、硫酸镁0.2kg、硝酸钙0.6kg、酵母提取物2kg、氯化钠0.1kg、玉米油5L、硫酸亚铁0.04kg、消泡剂0.6kg。
[0047] S2:一级种子培养:在所述侧耳菌母瓶种子液接入到一级种子培养罐之前,首先要将一级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
[0048] 将已经培养好的侧耳菌母瓶种子液按照1~3L/m3接种量接入到一级种子培养罐中进行一级种子培养,至菌体浓度为15%~25%,pH值为6~8时全部移入到二级种子培养罐中;
[0049] 一级种子培养条件为:罐压:控制在0.02~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;空气流量:0~20h,1~5m3/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在120~
150r/min;一级种子培养时间30~60h。
[0050] S3:二级种子培养:在一级种子液移入二级种子培养罐之前,首先要将二级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
[0051] 通过二级种子培养罐进行二级种子培养,至菌液浓度为20%~40%,pH值为6-8时全部移入含有发酵培养罐中;
[0052] 二级种子培养条件为:罐压:控制在0.04~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;空气流量:0~20h,1~5m3/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在160~
180r/min;一级种子培养时间40~60h。
[0053] S4:发酵培养:在所述二级种子液移入发酵培养罐之前,首先要将发酵培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在6~8;氨基氮含量控制在20mg/100ml~80mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。在发酵培养罐中进行发酵液的培养,至发酵液中菌体浓度为40%~60%,氨基氮在5mg/100ml~10mg/100ml,脂肪在1%~2%,还原糖在1%~2%,化学效价达到18000~20000u/ml时发酵终止;
[0054] 发酵培养条件为:
[0055] a、氨基氮控制:发酵周期50~180h控制在100~10mg/100ml;发酵周期181h~发酵结束控制在50~10mg/100ml;
[0056] b、发酵周期:培养时间200~300h;
[0057] c、pH控制:0~60h,pH自然,不受控制;81~180h,pH控制在6~8;181h~发酵结束,pH控制在6.2~7.8;
[0058] d、空气流量:0~40h:10~20m3/h;41~180h:20~40m3/h;181h~发酵结束:15~20m3/h;
[0059] e、压力控制:罐压0.01~0.05MPa;
[0060] f、温度控制:发酵全程温度控制在20~28℃;
[0061] g、无菌检查:发酵过程中进行菌检,要求无其它杂菌;
[0062] h、菌体浓度:0~90h,菌体自然生长,浓度不受控制;91~180h,菌体浓度控制在50~60%;181h~发酵结束,菌体浓度控制在30~40%;
[0063] I、搅拌转速:0~80h,搅拌转速控制在80~100r/min;81~200h,搅拌转速控制在120~150r/min;181h~发酵结束,搅拌转速控制在,100~120r/min。
[0064] S5:补料:在发酵培养罐中发酵的过程中进行补料。
[0065] 发酵过程中补玉米油954L;补水834L、补糖4275kg、补Fe2+16.9kg。
[0066] 发酵结束,菌体浓度32%、氨基氮5.3%、脂肪0.03%、还原糖0.10%,发酵效价为18065u/ml、发酵周期246h。
[0067] 实施例2
[0068] 本发明提供一种技术方案:一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,所述的方法包括以下具体步骤
[0069] S1:培养基配备:准备装有一级培养基的一级培养罐、装有二级培养基的二级种子培养罐和装有发酵液的发酵培养罐;
[0070] 所述一级培养基的组成为:果糖15kg、冷榨黄豆饼粉35kg、磷酸氢二钾5kg、硫酸镁0.3kg、硝酸钙0.8kg、氯化钠0.15kg、硫酸亚铁0.05kg、消泡剂0.6kg。
[0071] 所述二级培养基的组成为:果糖20kg、冷榨黄豆饼粉12kg、磷酸氢二钾3kg、硫酸镁0.3kg、硝酸钙0.3kg、氯化钠0.15kg、硫酸亚铁0.06kg、消泡剂0.7kg。
[0072] 所述发酵培养基的组成为:果糖25kg、冷榨黄豆饼粉18kg、玉米浆18kg、磷酸氢二钾3kg、硫酸镁0.3kg、硝酸钙0.9kg、酵母提取物3kg、氯化钠0.15kg、玉米油10L、硫酸亚铁0.06kg、消泡剂0.7kg。
[0073] S2:一级种子培养:在所述侧耳菌母瓶种子液接入到一级种子培养罐之前,首先要将一级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
[0074] 将已经培养好的侧耳菌母瓶种子液按照1~3L/m3接种量接入到一级种子培养罐中进行一级种子培养,至菌体浓度为15%~25%,pH值为6~8时全部移入到二级种子培养罐中;
[0075] 一级种子培养条件为:罐压:控制在0.02~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;3
空气流量:0~20h,1~5m/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在120~
150r/min;一级种子培养时间30~60h。
[0076] S3:二级种子培养:在一级种子液移入二级种子培养罐之前,首先要将二级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
[0077] 通过二级种子培养罐进行二级种子培养,至菌液浓度为20%~40%,pH值为6-8时全部移入含有发酵培养罐中;
[0078] 二级种子培养条件为:罐压:控制在0.04~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;空气流量:0~20h,1~5m3/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在160~
180r/min;一级种子培养时间40~60h。
[0079] S4:发酵培养:在所述二级种子液移入发酵培养罐之前,首先要将发酵培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在6~8;氨基氮含量控制在20mg/100ml~80mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。在发酵培养罐中进行发酵液的培养,至发酵液中菌体浓度为40%~60%,氨基氮在5mg/100ml~10mg/100ml,脂肪在1%~2%,还原糖在1%~2%,化学效价达到18000~20000u/ml时发酵终止;
[0080] 发酵培养条件为:
[0081] a、氨基氮控制:发酵周期50~180h控制在100~10mg/100ml;发酵周期181h~发酵结束控制在50~10mg/100ml;
[0082] b、发酵周期:培养时间200~300h;
[0083] c、pH控制:0~60h,pH自然,不受控制;81~180h,pH控制在6~8;181h~发酵结束,pH控制在6.2~7.8;
[0084] d、空气流量:0~40h:10~20m3/h;41~180h:20~40m3/h;181h~发酵结束:15~20m3/h;
[0085] e、压力控制:罐压0.01~0.05MPa;
[0086] f、温度控制:发酵全程温度控制在20~28℃;
[0087] g、无菌检查:发酵过程中进行菌检,要求无其它杂菌;
[0088] h、菌体浓度:0~90h,菌体自然生长,浓度不受控制;91~180h,菌体浓度控制在50~60%;181h~发酵结束,菌体浓度控制在30~40%;
[0089] I、搅拌转速:0~80h,搅拌转速控制在80~100r/min;81~200h,搅拌转速控制在120~150r/min;181h~发酵结束,搅拌转速控制在,100~120r/min。
[0090] S5:补料:在发酵培养罐中发酵的过程中进行补料。
[0091] 发酵过程中补玉米油835L;补水789L、补糖4086kg、补Fe2+16.2kg。
[0092] 发酵结束,菌体浓度43.2%、氨基氮6.1%、脂肪1.4%、还原糖1.3%,发酵效价为19472u/ml、发酵周期234h。
[0093] 实施例3
[0094] 本发明提供一种技术方案:一种制备截短侧耳素的侧耳菌发酵方法,所述的方法包括以下具体步骤
[0095] S1:培养基配备:准备装有一级培养基的一级培养罐、装有二级培养基的二级种子培养罐和装有发酵液的发酵培养罐;
[0096] 所述一级培养基的组成为:果糖20kg、冷榨黄豆饼粉50kg、磷酸氢二钾10kg、硫酸镁0.4kg、硝酸钙1.0kg、氯化钠0.2kg、硫酸亚铁0.08kg、消泡剂0.9kg。
[0097] 所述二级培养基的组成为:果糖24kg、冷榨黄豆饼粉15kg、磷酸氢二钾4kg、硫酸镁0.4kg、硝酸钙0.4kg、氯化钠0.2kg、硫酸亚铁0.08kg、消泡剂0.9kg。
[0098] 所述发酵培养基的组成为:果糖30kg、冷榨黄豆饼粉20kg、玉米浆20kg、磷酸氢二钾4kg、硫酸镁0.4kg、硝酸钙1.2kg、酵母提取物5kg、氯化钠0.2kg、玉米油15L、硫酸亚铁0.08kg、消泡剂0.9kg。
[0099] S2:一级种子培养:在所述侧耳菌母瓶种子液接入到一级种子培养罐之前,首先要将一级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
[0100] 将已经培养好的侧耳菌母瓶种子液按照1~3L/m3接种量接入到一级种子培养罐中进行一级种子培养,至菌体浓度为15%~25%,pH值为6~8时全部移入到二级种子培养罐中;
[0101] 一级种子培养条件为:罐压:控制在0.02~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;空气流量:0~20h,1~5m3/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在120~
150r/min;一级种子培养时间30~60h。
[0102] S3:二级种子培养:在一级种子液移入二级种子培养罐之前,首先要将二级种子培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在5~8;氨基氮含量控制在10mg/100ml~50mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。
[0103] 通过二级种子培养罐进行二级种子培养,至菌液浓度为20%~40%,pH值为6-8时全部移入含有发酵培养罐中;
[0104] 二级种子培养条件为:罐压:控制在0.04~0.06MPa;罐温:罐温控制在28~30℃;空气流量:0~20h,1~5m3/h;pH控制在7~8;搅拌转速:采用机械搅拌,转速控制在160~
180r/min;一级种子培养时间40~60h。
[0105] S4:发酵培养:在所述二级种子液移入发酵培养罐之前,首先要将发酵培养基灭菌、冷却,并用无菌空气保压,压力控制在0.01~0.02MPa,要求灭菌后的种子液pH控制在6~8;氨基氮含量控制在20mg/100ml~80mg/100ml;还原糖含量控制在1%~5%。在发酵培养罐中进行发酵液的培养,至发酵液中菌体浓度为40%~60%,氨基氮在5mg/100ml~10mg/100ml,脂肪在1%~2%,还原糖在1%~2%,化学效价达到18000~20000u/ml时发酵终止;
[0106] 发酵培养条件为:
[0107] a、氨基氮控制:发酵周期50~180h控制在100~10mg/100ml;发酵周期181h~发酵结束控制在50~10mg/100ml;
[0108] b、发酵周期:培养时间200~300h;
[0109] c、pH控制:0~60h,pH自然,不受控制;81~180h,pH控制在6~8;181h~发酵结束,pH控制在6.2~7.8;
[0110] d、空气流量:0~40h:10~20m3/h;41~180h:20~40m3/h;181h~发酵结束:15~20m3/h;
[0111] e、压力控制:罐压0.01~0.05MPa;
[0112] f、温度控制:发酵全程温度控制在20~28℃;
[0113] g、无菌检查:发酵过程中进行菌检,要求无其它杂菌;
[0114] h、菌体浓度:0~90h,菌体自然生长,浓度不受控制;91~180h,菌体浓度控制在50~60%;181h~发酵结束,菌体浓度控制在30~40%;
[0115] I、搅拌转速:0~80h,搅拌转速控制在80~100r/min;81~200h,搅拌转速控制在120~150r/min;181h~发酵结束,搅拌转速控制在,100~120r/min。
[0116] S5:补料:在发酵培养罐中发酵的过程中进行补料。
[0117] 发酵过程中补玉米油954L;补水834L、补糖4275kg、补Fe2+16.7kg。发酵结束,菌体浓度32%、氨基氮5.3%、脂肪0.03%、还原糖0.10%,发酵效价为18065u/ml、发酵周期242h。
[0118] 在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0119] 以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节,也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然,根据本说明书的内容,可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例,是为了更好地解释本发明的原理和实际应用,从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
高效检索全球专利

专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台,是提供专利分析,专利查询,专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。

我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据,免费查、免费专利分析。

申请试用

分析报告

专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析,涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度,系统通过AI智能系统对图表进行解读,只需1分钟,一键生成行业专利分析报告。

申请试用

QQ群二维码
意见反馈