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盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法

阅读:5发布:2022-07-21

专利汇可以提供盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种通过盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导来实现其工厂化的生产方法,包括盾叶薯蓣无菌克隆珠芽诱导、生根、移栽步骤,取盾叶薯蓣清洗灭菌后进行初代培养和株芽诱导,然后转入IAA0.5mg/l+NAA0.5mg/l的MS培养基中进行生根培养,珠芽生根20天后,把 温度 降到24℃培养1周,洗去苗根部的培养基,用0.1%的 杀菌剂 浸泡5min,栽于 河沙 或河沙∶腐质土=1∶1的混合土中,保持基质 相对湿度 80%,外加遮光网和塑料膜 覆盖 。该方法成功地实现了盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽的诱导,解决了愈伤组织分化苗容易变异以及盾叶薯蓣无菌短枝生根难的问题,并提高了移栽成活率。,下面是盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法专利的具体信息内容。

1、通过盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导来实现其工厂化的生产方 法,包括盾叶薯蓣无菌克隆珠芽诱导、生根、移栽步骤,其特征是取 盾叶薯蓣一年生植株的幼嫩顶芽和腋芽为外植体,清洗后,在超菌台 上用75%酒精浸泡30s,再用0.1%升汞灭菌5-8min,最后用无菌冲洗 数次,切成带单个腋芽或顶芽的小节,初代培养基为MS无激素培养 基PH5.8,在光照强度1000LX,光照时间12h/d,温度25±1℃的培养 条件下选取MS培养基加6-BA0.2mg/l+NAA0.1mg/l+IAA0.1mg/l +PH5.8进行株芽诱导,然后转入IAA0.5mg/l+NAA0.5mg/l的MS培 养基中进行生根培养,珠芽生根20天后,把温度降到24℃培养1周, 洗去苗根部的培养基,用0.1%的杀菌剂浸泡5min,栽于河沙或河沙∶ 腐质土=1∶1的混合土中,保持基质相对湿度80%,外加遮光网 和塑料膜覆盖

说明书全文

技术领域:本发明涉及生物技术领域里植物无菌克隆系珠芽诱导 方法,具体地涉及一种盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产 方法。

背景技术:现有技术未见有盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工 厂化生产方法的报道。

发明内容:提供了一种盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化 生产方法,实现了盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽的诱导,解决了愈伤组织 分化苗容易变异以及无菌短枝生根难的问题,提高了移栽成活率。

为了实现本发明的上述目的,本发明提供了如下的技术方案:

通过盾叶薯蓣无菌克隆系的珠芽诱导来实现其工厂化的生产方 法,包括盾叶薯蓣无菌克隆珠芽诱导、生根、移栽步骤,取盾叶薯蓣 一年生植株的幼嫩顶芽和腋芽为外植体,清洗后,在超菌台上用75% 酒精浸泡30s,再用0.1%升汞灭菌5-8min,最后用无菌冲洗数次, 切成带单个腋芽或顶芽的小节,初代培养基为MS无激素培养基PH5.8, 在光照强度1000LX,光照时间12h/d,温度25±1℃的培养条件下选 取MS培养基加6-BA0.2mg/l+NAA0.1mg/l+IAA0.1mg/l+PH5.8进 行株芽诱导,然后转入IAA0.5mg/l+NAA0.5mg/l的MS培养基中进 行生根培养,珠芽生根20天后,把温度降到24℃培养1周,洗去苗 根部的培养基,用0.1%的杀菌剂浸泡5min,栽于河沙或河沙∶腐质土 =1∶1的混合土中,保持基质相对湿度80%,外加遮光网和塑料 膜覆盖

与现有技术相比,本发明存在的优益效果为:

1、用生物技术,在无菌条件下诱导盾叶薯蓣产生珠芽,并筛选出 珠芽发生率为86%、生根率为100%的培养基配方。经查新,本发明 的盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导及其工厂化生产方法尚未见报道。

2、本发明盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导的成功,不但解决了愈伤 组织分化苗容易变异的问题,同时还克服了盾叶薯蓣无菌短枝生根的 难题,并提高了移栽成活率。

具体实施方式:下面结合本发明的实施例来进一步说明本发明的 实质性内容,但本发明的内容并不局限于此。

实施例1:

1、材料与方法

取盾叶薯蓣一年生植株的幼嫩顶芽和腋芽为外植体,用肥皂和自 来水清洗后,在超菌台上用75%酒精浸泡30s,再用0.1%升汞灭菌 5~8min最后用无菌水冲洗数次,切成带单个腋芽或顶芽的小节。初代 培养基为MS无激素培养基PH5.8。在光照强度1000LX,光照时间 12h/d,温度25±1℃的培养条件下进行培养基种类、激素和激素浓度 对盾叶薯蓣生长、株芽诱导及株芽生根的影响。

2.1不同培养基对盾叶薯蓣生长的影响

5种培养基的激素均为6-BA0.2mg/l+NAA0.01+PH5.8,试验结果 (表1)表明,MS培养基较适宜盾叶薯蓣的生长。

表1不同培养基对盾叶薯蓣生长的影响(接种60d的统计结果) 培养基    接种量   (外植体)   芽增殖数    (腋芽)    芽增殖     倍数   长势   叶色    评价   MS   White   B5   GS   H     100     100     100     100     100     275     213     235     168     201     2.75     2.13     2.35     1.68     2.01   健壮   弱   健壮   较弱   较弱   绿色   浅绿色   绿色   黄绿色   浅绿色     优     中     良     差     中

2.2不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣珠芽诱导的影响

试验结果表明(表2),珠芽发生与激素有密切关系,诱导数量的 多少与6-BA有关,珠芽大小与生长素有关。最佳的激素组合为: 6-BA0.2+IAA0.1+NAA0.1。转接60d后珠芽诱导率达86%,珠芽直径 大小0.17cm。珠芽产生的部位在节上,不影响丛芽和其它侧芽的生 长,均可作为下一代的繁殖材料。

2.3不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣珠芽生根的影响

从表3可以看出,激素种类及其不同的浓度对盾叶薯蓣珠芽生 根影响不显著,各个试验的生根率都能达到90%以上。因此,盾叶薯 蓣珠芽的生根比较容易,但在IAA0.5+NAA0.5的MS培养基中能达到 最好的生根效果(100%)。

表2不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣珠芽诱导的影响(接种60d 的统计数)  激素(mg/l) 接种量(个) 产生的珠芽数量 珠芽诱导率(%) 珠芽大小(cm)  BA0.1  BA0.2  BA0.5  BA0.2+IAA0.01  BA0.2+IAA0.1  BA0.2+IAA0.5  BA0.2+NAA0.01  BA0.2+NAA0.1  BA0.2+NAA0.5  BA0.2+IAA0.1+  NAA0.1     100     100     100     100     100     100     100     100     100     100     0     2     0     29     47     41     32     56     43     86     0     2%     0%     29%     47%     41%     32%     56%     43%     86%     0     0.27     0     0.1     0.1     0.1     0.1     0.13     0.15     0.17

表3不同激素及不同激素浓度对盾叶薯蓣珠芽生根的影响(接种30d 的统计数)   激素(mg/l) 转接珠芽数(个) 生根苗数(苗)   生根率(%)  综合评价   IAA.1   IAA0.5   IAA1.0   NAA0.1   NAA0.5   NAA1.0   IAA0.5+NAA0.5     100     100     100     100     100     100     100     92     98     90     94     96     98     100     92     98     90     94     96     98     100     优     优     良     优     优     良     优

2.4珠芽生根苗移栽

珠芽生根20d后,把温度降到24℃培养1周左右,取出苗用 自来水洗去根部的培养基,用0.1%的多菌灵浸泡5min,栽于河沙或 河沙∶腐质土=1∶1的混合土中。保持基质湿度80%左右,外加 遮光网和塑料膜覆盖,一周后揭膜,30d后的成活率达90%以上。

盾叶薯蓣无菌克隆系珠芽诱导的成功,不但解决了愈伤组织分化 苗容易变异的问题,同时还克服了盾叶薯蓣无菌短枝生根的难题,并 提高了移栽成活率。

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