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一种兼性厌 氧菌生物肥

阅读：489发布：2020-05-13

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权利要求

1.一种兼性厌氧菌生物肥，其特征在于，其制备方法包括如下步骤：
步骤一、菌种选择：选择多种既能在有氧条件下快速扩繁、又能在水稻田厌氧环境中生长繁殖的兼性厌氧细菌，按一定比例组合，
步骤二、菌种的活化和纯化；
步骤三、液体摇床扩大培养；
步骤四、固体菌粉的制备；
步骤五、兼性厌氧生物肥的制备。
2.根据权利要求1所述的兼性厌氧菌生物肥，其特征在于，该兼性厌氧菌生物肥应用于水稻田中。
3.根据权利要求1所述的兼性厌氧菌生物肥，其特征在于，所述菌种具体为：反硝化细菌：植物乳杆菌：沼泽红假单胞菌：凝结芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：蜡样芽胞杆菌：多粘类芽孢杆菌，各菌种按数量份数比例为，反硝化细菌：植物乳杆菌：沼泽红假单胞菌：凝结芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：蜡样芽胞杆菌：多粘类芽孢杆菌＝1:1:1:1:1:1:1:1；
其中，沼泽红假单孢，凝结芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，反硝化细菌为购买菌种，植物乳杆菌，蜡样芽孢杆菌，多粘类芽胞杆菌分离自植物内部，为植物内生菌。
4.根据权利要求1所述的兼性厌氧菌生物肥，其特征在于，所述步骤二、菌种的活化和纯化；具体为：将上述7种兼性厌氧菌分别接种到NutrientAgar培养基：Pepton 5g，Beefextract 30g，NaCl 5g，Agar 15g，加dH 2O至1000mL，pH：7.0-7.2或LB培养基上：
Tryptone 10g，Yeast extract 5g，NaCl 10g，加dH 2O至1000mL，pH＝7.0，划线培养，置于
30℃恒温培养箱中培养1-2天。
5.根据权利要求1所述的兼性厌氧菌生物肥，其特征在于，所述步骤三、液体摇床扩大培养具体为：挑取各兼性厌氧细菌的单菌落接种至配制好的Nutrient液体培养基中摇床培养30小时，培养条件为温度30℃，转速为200rpm。
6.根据权利要求1所述的兼性厌氧菌生物肥，其特征在于，所述步骤四、固体菌粉的制备；将米粉、麸皮、豆粉按照质量比65:35:10混合均匀，加磷酸氢二钾0.10％，调整初始pH
7.5；然后加水，调整初始含水量为55％；灭菌处理，制备成培养料；将上述液体培养的各菌种依次接种到该培养料中，接种总质量的10％；发酵温度30℃培养5-8天，取出后揉散。
7.根据权利要求1所述的兼性厌氧菌生物肥，其特征在于，所述步骤五、兼性厌氧生物肥的制备具体为：每公斤上述制备的7种兼性厌氧菌固体菌粉各自混合到5公斤麦麸或米糠中，含水量55％，发酵温度30℃培养1-2天，然后加入到1吨腐熟后的有机肥混合均匀，发酵温度35℃培养5-8天，温度高于35℃时及时翻堆，摊开散热；制备成兼性厌氧菌生物肥。
8.根据权利要求1所述的兼性厌氧菌生物肥，其特征在于，为了避免七类菌相互拮抗，所以液体培养后，用固体培养，然后再搅拌，搅拌后堆肥，温度上升到38-42℃，就翻堆降温，以扩繁菌种。

说明书全文

一种兼性厌氧菌生物肥

技术领域

[0001] 本发明涉及生物肥料领域，特别涉及兼性厌氧菌生物肥。

背景技术

[0002] 目前的肥料多以化学肥料为主，但长期使用化学肥料成本高昂，且对土地造成长时间的不利影响，过量的肥料，不仅增加农业成本，浪费资源，污染环境，还会造成土壤耕层富营养化，引起土壤次生盐渍化、硝酸盐积累以及土壤酸化等一系列问题，使农作物的生长环境变差，以致影响农作物产量和品质。近几年，我国紧紧围绕农业供给侧结构性改革这一工作主线，以粮食生产功能区、重要农产品生产保护区和特色农产品优势区为重点，坚持问题导向，强化绿色引领，主攻质量效益,集成推广化肥减量增效和土壤综合治理技术,探索有机肥替代化肥技术，提升耕地质量,减少不合理化肥投入,加快形成农业绿色生产方式，促进耕地资源永续利用。

发明内容

[0003] 为解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种兼性厌氧菌生物肥。

[0004] 为达到上述目的，本发明的技术方案为：

[0005] 一种兼性厌氧菌生物肥，其制备方法包括如下步骤：

[0006] 步骤一、菌种选择：选择多种既能在有氧条件下快速扩繁、又能在水稻田厌氧环境中生长繁殖的兼性厌氧细菌，按一定比例组合，

[0007] 步骤二、菌种的活化和纯化；

[0008] 步骤三、液体摇床扩大培养；

[0009] 步骤四、固体菌粉的制备；

[0010] 步骤五、兼性厌氧生物肥的制备。

[0011] 进一步的，该兼性厌氧菌生物肥应用于水稻田中。

[0012] 进一步的，所述菌种具体为：反硝化细菌：植物乳杆菌：沼泽红假单胞菌：凝结芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：蜡样芽胞杆菌：多粘类芽孢杆菌，各菌种按数量份数比例为，反硝化细菌：植物乳杆菌：沼泽红假单胞菌：凝结芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：蜡样芽胞杆菌：多粘类芽孢杆菌＝1:1:1:1:1:1:1:1；

[0013] 其中，沼泽红假单孢，凝结芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，反硝化细菌为购买菌种，植物乳杆菌，蜡样芽孢杆菌，多粘类芽胞杆菌分离自植物内部，为植物内生菌；

[0014] 进一步的，所述步骤二、菌种的活化和纯化；具体为：将上述7 种兼性厌氧菌分别接种到Nutrient Agar培养基：Pepton 5g，Beef extract 30g，NaCl 5g，Agar 15g，加dH 2O至1000mL，pH：7.0-7.2 或LB培养基上：Tryptone 10g，Yeast extract 5g，NaCl 10g，加dH 2O 至1000mL，pH＝7.0，划线培养，置于30℃恒温培养箱中培养1-2天。

[0015] 进一步的，所述步骤三、液体摇床扩大培养具体为：挑取各兼性厌氧细菌的单菌落接种至配制好的Nutrient液体培养基中摇床培养30 小时，培养条件为温度30℃，转速为200rpm。

[0016] 进一步的，所述步骤四、固体菌粉的制备；将米粉、麸皮、豆粉按照质量比65:35:10混合均匀，加磷酸氢二钾0.10％，调整初始pH 7.5。然后加水，调整初始含水量为55％；灭菌处理，制备成培养料。将上述液体培养的各菌种依次接种到该培养料中，接种总质量的 10％。发酵温度30℃培养5-8天，取出后揉散。

[0017] 进一步的，所述步骤五、兼性厌氧生物肥的制备具体为：每公斤上述制备的7种兼性厌氧菌固体菌粉各自混合到5公斤麦麸或米糠中，含水量55％，发酵温度30℃培养1-2天，然后加入到1吨腐熟后的有机肥混合均匀，发酵温度35℃培养5-8天，温度高于35℃时及时翻堆，摊开散热。制备成兼性厌氧菌生物肥。

[0018] 进一步的，为了避免七类菌相互拮抗，所以液体培养后，用固体培养，然后再搅拌，搅拌后堆肥，温度上升到38-42℃，就翻堆降温，以扩繁菌种。

[0019] 相对于现有技术，本发明的有益效果为：

[0020] 本发明提供了一种兼性厌氧菌生物肥，解决了长期使用化肥成本高昂且使土地肥力降低的问题，对环境无污染，提升耕地质量,减少不合理化肥投入,加快形成农业绿色生产方式，促进耕地资源永续利用。

具体实施方式

[0021] 下面结合具体实施方式对本发明技术方案做进一步详细描述：

[0022] 一种兼性厌氧菌生物肥，其制备方法包括如下步骤：

[0023] 步骤一、菌种选择：选择多种既能在有氧条件下快速扩繁、又能在水稻田厌氧环境中生长繁殖的兼性厌氧细菌，按一定比例组合，

[0024] 步骤二、菌种的活化和纯化；

[0025] 步骤三、液体摇床扩大培养；

[0026] 步骤四、固体菌粉的制备；

[0027] 步骤五、兼性厌氧生物肥的制备。

[0028] 进一步的，该兼性厌氧菌生物肥应用于水稻田中。

[0029] 进一步的，所述菌种具体为：反硝化细菌：植物乳杆菌：沼泽红假单胞菌：凝结芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：蜡样芽胞杆菌：多粘类芽孢杆菌，各菌种按数量份数比例为，反硝化细菌：植物乳杆菌：沼泽红假单胞菌：凝结芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：蜡样芽胞杆菌：多粘类芽孢杆菌＝1:1:1:1:1:1:1:1；

[0030] 其中，沼泽红假单孢，凝结芽孢杆菌，地衣芽孢杆菌，反硝化细菌为购买菌种，植物乳杆菌，蜡样芽孢杆菌，多粘类芽胞杆菌分离自植物内部，为植物内生菌；

[0031] 进一步的，所述步骤二、菌种的活化和纯化；具体为：将上述7 种兼性厌氧菌分别接种到Nutrient Agar培养基：Pepton 5g，Beef extract 30g，NaCl 5g，Agar 15g，加dH 2O至1000mL，pH：7.0-7.2 或LB培养基上：Tryptone 10g，Yeast extract 5g，NaCl 10g，加dH 2O 至1000mL，pH＝7.0，划线培养，置于30℃恒温培养箱中培养1-2天。

[0032] 进一步的，所述步骤三、液体摇床扩大培养具体为：挑取各兼性厌氧细菌的单菌落接种至配制好的Nutrient液体培养基中摇床培养30 小时，培养条件为温度30℃，转速为200rpm。

[0033] 进一步的，所述步骤四、固体菌粉的制备；将米粉、麸皮、豆粉按照质量比65:35:10混合均匀，加磷酸氢二钾0.10％，调整初始pH 7.5。然后加水，调整初始含水量为55％；灭菌处理，制备成培养料。将上述液体培养的各菌种依次接种到该培养料中，接种总质量的10％。发酵温度30℃培养5-8天，取出后揉散。

[0034] 进一步的，所述步骤五、兼性厌氧生物肥的制备具体为：每公斤上述制备的7种兼性厌氧菌固体菌粉各自混合到5公斤麦麸或米糠中，含水量55％，发酵温度30℃培养1-2天，然后加入到1吨腐熟后的有机肥混合均匀，发酵温度35℃培养5-8天，温度高于35℃时及时翻堆，摊开散热。制备成兼性厌氧菌生物肥。

[0035] 进一步的，为了避免七类菌相互拮抗，所以液体培养后，用固体培养，然后再搅拌，搅拌后堆肥，温度上升到38-42℃，就翻堆降温，以扩繁菌种。

[0036] 实验例：曲靖市麒麟区2018年水稻施用兼性厌氧型

[0037] 生物有机肥田间肥效试验报告

[0038] 1.试验目的和来源

[0039] 由曲靖市土壤肥料工作站主持，为检验、明确该兼性厌氧型生物有机肥在水稻上的肥效，由该单位联合曲靖医学高等专科学校微生物研究所、曲靖枫茂鸭业发展有限公司在曲靖市麒麟区实施了兼性厌氧型生物有机肥单因素水稻田间小区试验，以评定该产品的增产效果和经济效益，为掌握其相关一手数据和扩大试验示范推广面积提供科学依据。

[0040] 2.试验时间和地点

[0041] 试验安排在曲靖市麒麟区潇湘街道冷家屯村委会农户施小华承包水田进行。于2018年3月11日育苗，3月22日出苗，5月13日移栽， 2018年10月14日一次性收获，水稻育秧期63天，大田生育时间155 天，全生育期218天。

[0042] 3.材料与方法

[0043] 3.1供试材料

[0044] 3.1.1供试土壤

[0045] 供试地点海拔1945米，年降雨量1010mm左右,年平均气温13.6℃, 试验地土壤为水稻土，质地中壤，肥力中等，代表面积500亩。前茬为冬闲。试验地土壤养分情况详见表1。

[0046] 表1.试验地土壤养分表

[0047]

[0048] 3.1.2供试肥料

[0049] 供试肥料本发明兼性厌氧型微生物菌种生产的生物有机肥，生产执行标准NY 884—2012，为粉状，主要技术指标：反硝化细菌≥0.2 亿/g、植物乳杆菌≥0.2亿/g、沼泽红假单胞菌≥0.2亿/g、凝结芽孢杆菌≥0.2亿/g、地衣芽孢杆菌≥0.2亿/g、：蜡样芽胞杆菌≥
0.2亿/g、多粘类芽孢杆菌≥0.2亿/g；大量元素(N+P2O5+K2O)含量检测值为 10.10％，其中总氮(N)含量检测值为2.12％,磷(P2O5)含量检测值为 3.35％,钾(K2O)含量检测值为
4.63％，有机质61％；水分25％；pH值 7.8。市场价按1.50元/kg计入。

[0050] 试验用其他肥料：

[0051] 有机肥料：曲靖枫茂鸭业发展有限公司生产的“枫茂”商品有机肥，生产执行标准NY525-2012，为粉末状，有机质≥45％，市场价按 1.00元/kg计入。

[0052] 尿素：云南云天化股份有限公司生产的尿素，颗料，含N≥46％；市场价按2.38元/kg。

[0053] 普钙：云南马龙春雨磷肥有限公司生产的普钙，粉状，含P2O5≥12％；市场价按0.90元/kg。

[0054] 硫酸钾：浙江农资集团有限公司生产的硫酸钾，粉状，含K2SO4≥ 50％；市场价按5.30元/kg。

[0055] 3.1.3供试作物及品种

[0056] 供试作物为水稻，品种为云粳-37。

[0057] 3.2试验方法

[0058] 3.2.1试验设计

[0059] 在丰产栽培管理措施一致的前提下，试验采用随机区组排列试验设计，设四个处理三次重复，小区面积21㎡(6.0m×3.5m),种植行距16.6cm、株距10cm，每丛2苗，每小区种植1265丛，折合每亩种植水稻40160丛，四周设保护行。试验处理为:

[0060] 处理1，亩施活性兼性厌氧型生物有机肥333.33千克+化肥习惯施肥减量25％；

[0061] 处理2，亩施灭活兼性厌氧型生物有机肥333.33千克+化肥习惯施肥减量25％；

[0062] 处理3，亩施常规商品有机肥333.33千克+习惯施用化肥；

[0063] 处理4，空白对照(ck)，不施任何无机肥料和有机肥。

[0064] 试验各处理除了施肥不同外，其他农事操作措施均相同。

[0065] 3.2.2施肥方法

[0066] 施肥根据当地习惯，化肥按照每亩纯N 20.00kg、P2O5 10.00kg、 K2O 10.00kg的施肥方案进行，即亩施尿素43.48kg、普钙83.33kg、硫酸钾20.00kg。生物有机肥、磷、钾肥全部做底肥施用，氮肥按试验总量的30％作底施,50％在分蘖期追施分蘖肥，20％作为穗肥。常规施肥所用NPK化肥，用单质肥料尿素、普钙和硫酸钾。

[0067] 各处理肥料施用情况：

[0068] 处理3(习惯施肥)：于5月13日大田整地划分小区后，亩施普通商品有机肥333.33kg+尿素13.04kg+普钙83.33kg+硫酸钾20.00kg 作底肥施用，施用方法为按照试验设计划分小区后，将所有底肥均匀撒入小区内；作物进入分蘖期前(6月2日)追施分蘖肥，亩施用量为 21.74kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内；进入孕穗期前(7月15日)追施孕穗肥，亩施用量为8.70kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内。

[0069] 处理1(活性兼性厌氧型生物有机肥)：于5月13日大田整地划分小区后，亩施活性兼性厌氧型生物有机肥333.33kg+尿素9.78kg+普钙62.50kg+硫酸钾15.00kg作底肥施用，施用方法为按照试验设计划分小区后，将所有底肥均匀撒入小区内；作物进入分蘖期前(6月2 日)追施分蘖肥，亩施用量为16.31kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内；进入孕穗期前(7月15日)追施孕穗肥，亩施用量为6.53kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内。

[0070] 处理2(灭活兼性厌氧型生物有机肥)：于5月13日大田整地划分小区后，亩施灭活兼性厌氧型生物有机肥333.33kg+尿素9.78kg+普钙62.50kg+硫酸钾15.00kg作底肥施用，施用方法为按照试验设计划分小区后，将所有底肥均匀撒入小区内；作物进入分蘖期前(6月2 日)追施分蘖肥，亩施用量为16.31kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内；进入孕穗期前(7月15日)追施孕穗肥，亩施用量为6.53kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内。

[0071] 处理4：空白对照，5月13日移栽时不施任何有机肥和无机肥料，也不进行追肥。

[0072] 3.2.3试验过程

[0073] 试验于2018年3月11日开始在水稻秧田进行水稻播种育秧，为常规水育秧法，3月22日水稻开始出苗。2018年1月10日试验田人工挖田晒垡，5月4日放水泡田，5月6日小型旋耕机整地，同日划分小区，小区用钢筋焊接龙骨包裹塑料薄膜将不同小区隔开，预留进出水口，保证各小区单独水流进出。5月13日按试验要求在各小区施入底肥。同日水稻秧苗移栽大田。分别于6月2日、7月15日分两次追施分蘖肥和孕穗肥。2018年10月14日一次性全部采收，作物大田生育时间155天，全生育期218天。

[0074] 大田病虫害防治：试验地分别于2018年6月14日和8月1日用三环唑防治叶瘟和穗瘟病，每亩用20％三环唑可湿性粉剂100克，加水50千克喷雾。6月22日和8月6日分别用农药10％蚍虫林可湿性粉剂1500倍液叶面喷雾防治稻飞虱。7月8日用敌杀死防治粘虫，亩用
2.5％乳油20毫升稀释2500倍液兑水喷雾。

[0075] 水稻全生育期未发生任何病虫害和自然灾害天气。

[0076] 4.试验结果分析

[0077] 4.1不同处理对作物生育期的影响

[0078] 表2.不同处理水稻生育期记载表

[0079] 单位：日/月

[0080] 处理播种期出苗期移栽期返青期分蘖期抽穗期结实期收获期全生育期1 11/3 22/3 13/5 22/5 3/6 25/7 6/8 14/10 218天
2 11/3 22/3 13/5 22/5 3/6 25/7 6/8 14/10 218天
3 11/3 22/3 13/5 22/5 3/6 25/7 6/8 14/10 218天
4 11/3 22/3 13/5 22/5 3/6 25/7 6/8 14/10 218天

[0081] 从表2可以看出：施用活性兼性厌氧型生物有机肥的处理1与处理2、3、4相比，水稻的生育期无明显变化。

[0082] 4.2不同处理对作物生物学性状的影响

[0083] 水稻结实期，对作物叶色、长势等指标进行调查，试验收获时，对株高、基本苗、最高茎蘖数、有效穗数、每穗粒数、穗实粒数、空秕率、千粒重等指标进行调查，每小区选3个点，每点连续取2米记录，根据平均数折算各小区生物学性状和主要经济性状。从表3-1、表 3-2可以看出：施用活性兼性厌氧型生物有机肥的处理1与处理2、3、 4相比，水稻的主要生物学性状有明显改善。

[0084] 从叶色和长势看，处理1较处理2、3叶色明显偏绿，长势明显好于处理2、3，处理2、3叶色和长势相近，而处理4叶色浅、长势差；

[0085] 从株高分析：处理1株高最高达142.30cm，与处理2、3、4比较，株高分别增加9.03cm、7.07cm、38.20cm，增6.78％、5.23％、36.70％；处理2株高第三，与处理3、4相比，株高增加-1.97cm、29.17cm，增 -1.45％、28.02％；处理3株高第二，与处理4相比，株高增加
31.13cm，增29.91％；处理4株高最矮，为104.10cm。

[0086] 表3-1.各小区不同处理水稻生物学性状和主要经济性状表1

[0087]

[0088] 从基本苗看：各处理之间基本苗基本一致，无太大差异。处理1 基本苗2509.33苗，与处理2、3、4比较，基本苗分别增加-0.33苗、 1.33苗、0.33苗，增-0.01％、0.05％、0.01％；处理2基本苗与处理3、 4相比，基本苗增加1.67苗、0.67苗，增0.07％、0.03％；处理3基本苗与处理4相比，基本苗增加-1.00苗，增-0.04％；处理4基本苗为 2509.00苗。

[0089] 从最高茎蘖数看：处理1最高茎蘖数最重达7911.33个，与处理2、 3、4比较，最高茎蘖数分别增加425.00个、352.67个、3683.33个，增5.68％、4.67％、87.12％；处理2最高茎蘖数第三，与处理3、4相比，最高茎蘖数增加-72.33个、3258.33个，增-0.96％、77.07％；处理3 最高茎蘖数第二，与处理4相比，最高茎蘖数增加3330.67个，增 78.78％；处理4最高茎蘖数最轻，为4228.00个。

[0090] 从有效穗数看：处理1有效穗数最多达6775.00个，与处理2、3、 4比较，有效穗数分别增加523.00个、426.67个、2643.33个，增8.37％、 6.72％、63.94％；处理2有效穗数第三，与处理3、4相比，有效穗数增加-96.33个、2119.33个，增-1.52％、51.28％；处理3有效穗数第二，与处理4相比，有效穗数增加2215.67个，增53.61％；处理4有效穗数最少，为4132.67个。

[0091] 从每穗粒数看：处理1每穗粒数最多达137.33粒，与处理2、3、 4比较，每穗粒数分别增加7.00粒、5.33粒、27.67粒，增5.37％、 4.04％、25.23％；处理2每穗粒数第三，与处理3、4相比，每穗粒数增加-1.67粒、20.67粒，增-1.26％、18.84％；处理3每穗粒数第二，与处理4相比，每穗粒数增加22.33粒，增20.36％；处理4每穗粒数最少，为109.67粒。

[0092] 从穗实粒数看：处理1穗实粒数最多达116.67粒，与处理2、3、 4比较，穗实粒数分别增加7.67粒、6.33粒、27.00粒，增7.03％、 5.74％、30.11％；处理2穗实粒数第三，与处理3、4相比，穗实粒数增加-1.33粒、19.33粒，增-1.21％、21.56％；处理3穗实粒数第二，与处理4相比，穗实粒数增加20.67粒，增23.05％；处理4穗实粒数最少，为89.67粒。

[0093] 表3-2.各小区不同处理水稻生物学性状和主要经济性状表

[0094]

[0095] 从空秕率看：处理1空秕率最低达15.02％，与处理2、3、4比较，空秕率分别增加-1.36％、-1.35％、-2.99％，增-8.30％、-8.22％、-16.62％；处理2空秕率第二，与处理3、4相比，空秕率增加0.01％、-1.63％，增0.09％、-9.07％；处理3空秕率第三，与处理4相比，空秕率增加 -1.65％，增-9.15％；处理4空秕率最高，为18.02％。

[0096] 从千粒重分析：处理1千粒重最重达25.70g，与处理2、3、4比较，千粒重分别增加2.13g、1.30g、8.93g，增9.05％、5.33％、53.28％；处理2千粒重第三，与处理3、4相比，千粒重增加-0.83g、6.80g，增-3.42％、40.56％；处理3千粒重第二，与处理4相比，千粒重增加
7.63g，增45.53％；处理4千粒重最轻，为16.77g。

[0097] 4.3不同处理对作物产量的影响

[0098] 表4.不同处理小区实收产量表

[0099]

[0100] 表4看出，施用活性兼性厌氧型生物有机肥的处理1与处理2、3、4 相比，水稻有较好的增产效果。处理1亩产量最高672.60kg，比处理 2、3、4分别亩增加产量69.00kg、60.21kg、442.65kg，增幅分别为 11.43％、9.83％、192.50％；处理2亩产量603.60kg居第三，与处理3、 4分别亩增加产量-8.78kg、373.65kg，增幅分别为-1.43％、162.49％；处理3亩产量为612.38kg居第二，比处理4亩增加产量382.44kg，增幅为166.31％；处理4亩产量最低，为229.95kg。

[0101] 通过对不同处理水稻产量进行方差分析可知(见表5)，重复间 F值＝4.935F0.01＝9.780，说明处理间产量差异明显，达到极显著水平。

[0102] 表5.小区实收产量方差分析表

[0103] 变异来源自由度平方和均方 F值 F0.05 F0.01处理间 3 364.852 121.617 387.793** 4.757 9.780
重复间 2 3.096 1.548 4.935 5.143 10.925
误差 6 1.882 0.314 －－－
总变异 11 369.829 －－－

[0104] 处理间产量差异显著性多重比较见表6。

[0105] 通过最小显著极差法比较试验各处理产量(见表6)，可以看出,处理1与处理2、3比较在a＝0.05和a＝0.01水平上产量差异均呈显著水平；处理2与处理3在a＝0.05水平上比较产量差异不显著。

[0106] 表6.不同处理产量最小显著极差法比较表

[0107]

[0108] 试验说明水稻施用兼性厌氧型生物有机肥有极显著的增产效果。

[0109] 4.4不同处理对作物产值的影响及效益分析

[0110] 从表7可看出，各处理由于施用兼性厌氧型生物有机肥的不同，因此投入价格不同。处理1、2亩肥料投入713.38元，处理3亩肥料投入为617.81元，处理4亩肥料投入为0元。

[0111] 表7.不同处理施用肥料成本

[0112]

[0113] 表8.不同处理产值及经济效益表

[0114]

[0115] 从表8来看,水稻施用活性兼性厌氧型生物有机肥有较好的增值、增收效果。各处理产量按水稻采收时产品单价3.00元/kg折算为产值，扣除新增各种肥料投入成本后各处理比较产值。

[0116] 处理1与处理2、3、4比较，分别亩新增加产值206.99元、180.64 元和1327.94元；扣除新增肥料成本后，亩净增收益分别为206.99元、 85.06元和614.56元；处理1和处理4比较产投比为1.86:1。

[0117] 处理2与处理3、4比较，分别亩新增加产值-26.35元和1120.96 元；扣除新增肥料成本后，亩净增收益分别为-121.92元和407.58元；处理2和处理4比较产投比为1.57:1。

[0118] 处理3与处理4比较，亩新增加产值1147.31元；扣除新增肥料成本后，亩净增收益为529.50元；处理3和处理4比较产投比为 1.86:1。

[0119] 说明施用活性兼性厌氧型生物有机肥对提高水稻产值和效益有较好的作用。

[0120] 5.结论与建议

[0121] 5.1试验用兼性厌氧型生物有机肥为粉状，外观均匀，无特殊异味。

[0122] 5.2从试验结果看，在麒麟区水稻上施用兼性厌氧型生物有机肥，可明显改善水稻的生物学性状，提高长势长相株高、最高茎蘖数、有效穗数、每穗粒数、穗实粒数、千粒重均有明显增加；能极显著提高水稻的产量，且增产增收效益十分明显。施用活性兼性厌氧型生物有机肥处理比灭活处理亩增产量69.00kg，增幅为11.43％，产量差异达到极显著水平；比习惯施肥处理亩新增加产值180.64元，比不施肥净增收益614.56元，产投比,1.86:1。

[0123] 5.3本次试验所选择水稻品种为云粳-37，系当地推广优质水稻新品种，市场价格优于当地传统种植品种。尽管如此，但水稻稻谷过低的收购价格，导致试验经济效益计算中产投比不高。

[0124] 5.4通过试验证明，水稻施用曲靖市土壤肥料工作站、曲靖医学高等专科学校微生物研究所、曲靖枫茂鸭业发展有限公司联合研制的兼性厌氧型生物有机肥有较好的增产增收效果，可在当地水稻上扩大示范应用。但仅凭单组、单季的试验结果，无法全面反映该肥料产品的全部功效，还需在多点多年多种作物上开展进一步试验示范，更进一步验证其增产增收效果。

[0125] 实验例2

[0126] 2.试验时间和地点

[0127] 试验安排在曲靖市师宗县漾月街道法雨社区中法雨村委会农户王谷青承包水田进行。于2018年4月4日育苗，4月12日出苗，6月4 日移栽，2018年10月28日一次性收获，水稻育秧期61天，大田生育时间147天，全生育期208天。

[0128] 3.材料与方法

[0129] 3.1供试材料

[0130] 3.1.1供试土壤

[0131] 供试地点海拔1850米，年降雨量1280mm左右,年平均气温13.9℃, 试验地土壤为水稻土，质地中壤，肥力中上等，代表面积1000亩。前茬种植绿肥光叶紫花苕，亩产鲜草2500kg，未进行施肥。试验地土壤养分情况详见表1。

[0132] 表1.试验地土壤养分表

[0133]

[0134] 3.1.2供试肥料

[0135] 供试肥料为使用由曲靖市土壤肥料工作站与曲靖医学高等专科学校微生物研究所、曲靖枫茂鸭业发展有限公司联合研制的兼性厌氧型微生物菌种生产的生物有机肥，生产执行标准NY 884—2012，为粉状，主要技术指标：反硝化细菌≥0.2亿/g、植物乳杆菌≥0.2亿/g、沼泽红假单胞菌≥0.2亿/g、凝结芽孢杆菌≥0.2亿/g、地衣芽孢杆菌≥0.2 亿/g、蜡样芽胞杆菌≥0.2亿/g、多粘类芽孢杆菌≥0.2亿/g；大量元素(N+P2O5+K2O)含量检测值为
10.10％，其中总氮(N)含量检测值为 2.12％,磷(P2O5)含量检测值为3.35％,钾(K2O)含量检测值为4.63％，有机质61％；水分25％；pH值7.8。市场价按1.50元/kg计入。

[0136] 试验用其他肥料：

[0137] 有机肥料：曲靖枫茂鸭业发展有限公司生产的“枫茂”商品有机肥，生产执行标准NY525-2012，为粉末状，有机质≥45％，市场价按1.00元/kg计入。

[0138] 尿素：云南云天化股份有限公司生产的尿素，颗料，含N≥46％；市场价按2.38元/kg。

[0139] 普钙：云南马龙春雨磷肥有限公司生产的普钙，粉状，含P2O5≥12％；市场价按0.90元/kg。

[0140] 硫酸钾：浙江农资集团有限公司生产的硫酸钾，粉状，含K2SO4≥ 50％；市场价按5.30元/kg。

[0141] 3.1.3供试作物及品种

[0142] 供试作物为水稻，品种为云粳-37。

[0143] 3.2试验方法

[0144] 3.2.1试验设计

[0145] 在丰产栽培管理措施一致的前提下，试验采用随机区组排列试验设计，设四个处理三次重复，小区面积20.3㎡(6.0m×3.5m),种植采取双行条栽，大行行距30cm，小行行距15cm，株距10cm,每丛2苗，每小区种植1050丛，折合每亩种植水稻34483丛，四周设保护行。
试验处理为:

[0146] 处理1，亩施活性兼性厌氧型生物有机肥333.33千克+化肥习惯施肥减量25％；

[0147] 处理2，亩施灭活兼性厌氧型生物有机肥333.33千克+化肥习惯施肥减量25％；

[0148] 处理3，亩施常规商品有机肥333.33千克+习惯施用化肥；

[0149] 处理4，空白对照(ck)，不施任何无机肥料和有机肥。

[0150] 试验各处理除了施肥不同外，其他农事操作措施均相同。

[0151] 3.2.2施肥方法

[0152] 施肥根据当地习惯，化肥按照每亩纯N16.00kg、P2O5 8.00kg、K2O 8.00kg的施肥方案进行，即亩施尿素34.79kg、普钙66.67kg、硫酸钾16.00kg。有机肥、磷、钾肥全部做底肥施用，氮肥按试验总量的60％作底施,20％在分蘖期追施分蘖肥，20％作为穗肥。常规施肥所用NPK化肥，用单质肥料尿素、普钙和硫酸钾。

[0153] 各处理肥料施用情况：

[0154] 处理3(习惯施肥)：于6月3日大田整地划分小区后，亩施普通商品有机肥333.33kg+尿素20.87kg+普钙66.67kg+硫酸钾16.00kg 作底肥施用，施用方法为按照试验设计划分小区后，将所有底肥均匀撒入小区内；作物进入分蘖期前(7月3日)追施分蘖肥，亩施用量为6.96kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内；进入孕穗期前(8月2日)追施孕穗肥，亩施用量为6.96kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内。

[0155] 处理1(活性兼性厌氧型生物有机肥)：于6月3日大田整地划分小区后，亩施活性兼性厌氧型生物有机肥333.33kg+尿素15.65kg+普钙50.00kg+硫酸钾12.00kg作底肥施用，施用方法为按照试验设计划分小区后，将所有底肥均匀撒入小区内；作物进入分蘖期前(7月3 日)追施分蘖肥，亩施用量为5.22kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内；进入孕穗期前(8月2日)追施孕穗肥，亩施用量为5.22kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内。

[0156] 处理2(灭活兼性厌氧型生物有机肥)：于6月3日大田整地划分小区后，亩施灭活兼性厌氧型生物有机肥333.33kg+尿素15.65kg+普钙50.00kg+硫酸钾12.00kg作底肥施用，施用方法为按照试验设计划分小区后，将所有底肥均匀撒入小区内；作物进入分蘖期前(7月3 日)追施分蘖肥，亩施用量为5.22kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内；进入孕穗期前(8月2日)追施孕穗肥，亩施用量为5.22kg，施用方法为按照试验设计，将追施的尿素均匀撒入小区内。

[0157] 处理4：空白对照，6月3日大田整地和移栽时不施任何有机肥和无机肥料，也不进行追肥。

[0158] 3.2.3试验过程

[0159] 试验于2018年4月4日开始在水稻秧田进行水稻播种育秧，为常规水育秧法，4月12日水稻开始出苗。2018年4月2日试验田人工挖田晒垡，6月1日放水泡田，6月3日小型旋耕机整地，同日划分小区，小区用木龙骨包裹塑料薄膜将不同小区隔开，预留进出水口，保证各小区单独水流进出。6月3日按试验要求在各小区施入底肥。6月4日水稻秧苗移栽大田。分别于7月3日、8月2日分两次追施分蘖肥和孕穗肥。2018年10月28日一次性全部采收，作物大田生育时间147天，全生育期208天。

[0160] 大田病虫害防治：试验地分别于2018年7月15日和8月18日用三环唑防治叶瘟和穗瘟病，每亩用20％三环唑可湿性粉剂100克，加水50千克喷雾。7月2日和8月25日分别用农药10％蚍虫林可湿性粉剂1500倍液叶面喷雾防治稻飞虱。7月10日用敌杀死防治粘虫，亩用
2.5％乳油20毫升稀释2500倍液兑水喷雾。

[0161] 水稻全生育期未发生任何病虫害和自然灾害天气。

[0162] 4.试验结果分析

[0163] 4.1不同处理对作物生育期的影响

[0164] 表2.不同处理水稻生育期记载表

[0165] 单位：日/月

[0166] 处理播种期出苗期移栽期返青期分蘖期抽穗期结实期收获期全生育期1 4/4 12/4 4/6 15/6 5/7 6/8 17/8 28/10 208天
2 4/4 12/4 4/6 15/6 5/7 6/8 17/8 28/10 208天
3 4/4 12/4 4/6 15/6 5/7 6/8 17/8 28/10 208天
4 4/4 12/4 4/6 15/6 5/7 6/8 17/8 28/10 208天

[0167] 从表2可以看出：施用活性兼性厌氧型生物有机肥的处理1与处理2、3、4相比，水稻的生育期无明显变化。

[0168] 4.2不同处理对作物生物学性状的影响

[0169] 水稻结实期，对作物叶色、长势等指标进行调查，试验收获时，对株高、基本苗、最高茎蘖数、有效穗数、每穗粒数、穗实粒数、空秕率、千粒重等指标进行调查，每小区选3个点，每点连续取2米记录，根据平均数折算各小区生物学性状和主要经济性状。从表3-1、表 3-2可以看出：施用活性兼性厌氧型生物有机肥的处理1与处理2、3、4相比，水稻的主要生物学性状有明显改善。

[0170] 从叶色和长势看，处理1较处理2、3叶色明显偏绿，长势明显好于处理2、3，处理2、3叶色和长势相近，而处理4叶色浅、长势差；

[0171] 表3-1.各小区不同处理水稻生物学性状和主要经济性状表1

[0172]

[0173] 从株高分析：处理1株高最高达153.23cm，与处理2、3、4比较，株高分别增加9.37cm、7.70cm、40.40cm，增6.51％、5.29％、35.81％；处理2株高第三，与处理3、4相比，株高增加-1.67cm、31.03cm，增-1.15％、27.50％；处理3株高第二，与处理4相比，株高增加
32.70cm，增28.98％；处理4株高最矮，为112.83cm。

[0174] 从基本苗看：各处理之间基本苗基本一致，无太大差异。处理1 基本苗2087.33苗，与处理2、3、4比较，基本苗分别增加-1.33苗、 1.00苗、-3.00苗，增-0.06％、0.05％、-0.14％；处理2基本苗与处理 3、4相比，基本苗增加2.33苗、-1.67苗，增0.11％、-0.08％；处理 3基本苗与处理4相比，基本苗增加-4.00苗，增-0.19％；处理4基本苗为2090.33苗。

[0175] 从最高茎蘖数看：处理1最高茎蘖数最重达10399.33个，与处理 2、3、4比较，最高茎蘖数分别增加448.00个、421.33个、3555.67 个，增4.50％、4.22％、51.96％；处理2最高茎蘖数第三，与处理3、4 相比，最高茎蘖数增加-26.67个、3107.67个，增-0.27％、45.41％；处理3最高茎蘖数第二，与处理4相比，最高茎蘖数增加3134.33个，增45.80％；处理4最高茎蘖数最轻，为6843.67个。

[0176] 从有效穗数看：处理1有效穗数最多达8075.33个，与处理2、3、 4比较，有效穗数分别增加422.00个、367.67个、2199.00个，增5.51％、 4.77％、37.42％；处理2有效穗数第三，与处理3、4相比，有效穗数增加-54.33个、1777.00个，增-0.70％、30.24％；处理3有效穗数第二，与处理4相比，有效穗数增加1831.33个，增31.16％；处理4有效穗数最少，为5876.33个。

[0177] 从每穗粒数看：处理1每穗粒数最多达147.67粒，与处理2、3、 4比较，每穗粒数分别增加11.00粒、9.67粒、24.67粒，增8.31％、7.00％、20.05％；处理2每穗粒数第三，与处理3、4相比，每穗粒数增加-1.33粒、13.67粒，增-0.97％、11.11％；处理3每穗粒数第二，与处理4相比，每穗粒数增加15.00粒，增12.20％；处理4每穗粒数最少，为123.00粒。

[0178] 从穗实粒数看：处理1穗实粒数最多达132.67粒，与处理2、3、 4比较，穗实粒数分别增加12.00粒、10.33粒、32.00粒，增9.94％、 8.45％、31.79％；处理2穗实粒数第三，与处理3、4相比，穗实粒数增加-1.67粒、20.00粒，增-1.36％、19.87％；处理3穗实粒数第二，与处理4相比，穗实粒数增加21.67粒，增21.52％；处理4穗实粒数最少，为100.67粒。

[0179] 表3-2.各小区不同处理水稻生物学性状和主要经济性状表

[0180]

[0181] 如表3-2所示：从空秕率看：处理1空秕率最低达10.08％，与处理2、3、4比较，空秕率分别增加-1.59％、-1.25％、-7.93％，增-13.60％、 -11.03％、-44.02％；处理2空秕率第三，与处理3、4相比，空秕率增加0.34％、-6.34％，增2.97％、-35.21％；处理3空秕率第二，与处理4 相比，空秕率增加-6.68％，增-37.08％；处理4空秕率最高，为18.01％。

[0182] 从千粒重分析：处理1千粒重最重达26.76g，与处理2、3、4比较，千粒重分别增加1.89g、1.76g、8.53g，增7.58％、7.02％、46.78％；处理2千粒重第三，与处理3、4相比，千粒重增加-0.13g、6.64g，增-0.52％、36.44％；处理3千粒重第二，与处理4相比，千粒重增加
6.77g，增37.15％；处理4千粒重最轻，为18.23g。

[0183] 4.3不同处理对作物产量的影响

[0184] 表4.不同处理小区实收产量表

[0185]

[0186] 表4看出，施用活性兼性厌氧型生物有机肥的处理1与处理2、3、4 相比，水稻有较好的增产效果。处理1亩产量最高820.26kg，比处理 2、3、4分别亩增加产量107.39kg、91.63kg、460.21kg，增幅分别为 15.06％、12.58％、127.82％；处理2亩产量712.87kg居第三，与处理3、 4分别亩增加产量-15.76kg、352.82kg，增幅分别为-2.16％、97.99％；处理3亩产量为728.63kg居第二，比处理4亩增加产量368.58kg，增幅为102.37％；处理4亩产量最低，为360.05kg。

[0187] 通过对不同处理水稻产量进行方差分析可知(见表5)，重复间 F值＝4.478F0.01＝9.780，说明处理间产量差异明显，达到极显著水平。

[0188] 表5.小区实收产量方差分析表

[0189]变异来源自由度平方和均方 F值 F0.05 F0.01
处理间 3 342.348 114.116 139.564** 4.757 9.780
重复间 2 7.324 3.662 4.478 5.143 10.925
误差 6 4.906 0.818 －－－
总变异 11 354.577 －－－

[0190] 处理间产量差异显著性多重比较见表6。

[0191] 通过最小显著极差法比较试验各处理产量(见表6)，可以看出,处理1与处理2、3、4比较在a＝0.05和a＝0.01水平上产量差异均呈显著水平；处理2与处理3在a＝0.05水平上比较产量差异不显著。处理 2、3与处理4比较在a＝0.05和a＝0.01水平上产量差异均呈显著水平。

[0192] 表6.不同处理小区产量最小显著极差法比较表

[0193]

[0194] 试验说明水稻施用兼性厌氧型生物有机肥有极显著的增产效果。

[0195] 4.4不同处理对作物产值的影响及效益分析

[0196] 表7.不同处理施用肥料成本

[0197]

[0198] 表8.不同处理产值及经济效益表

[0199]

[0200] 从表7可看出，各处理由于施用兼性厌氧型生物有机肥的不同，因此投入价格不同。处理1、2亩肥料投入713.38元，处理3亩肥料投入为617.81元，处理4亩肥料投入为0元。

[0201] 从表8来看,水稻施用活性兼性厌氧型生物有机肥有较好的增值、增收效果。各处理产量按水稻收购产品单价2.50元/kg折算为产值，扣除新增各种肥料投入成本后各处理比较产值。

[0202] 处理1与处理2、3、4比较，分别亩新增加产值268.47元、229.07 元和1150.53元；扣除新增肥料成本后，亩净增收益分别为268.47 元、119.31元和479.84元；处理1和处理4比较产投比为1.72:1。

[0203] 处理2与处理3、4比较，分别亩新增加产值-39.41元和882.05 元；扣除新增肥料成本后，亩净增收益分别为-149.17元和211.36 元；处理2和处理4比较产投比为1.32:1。

[0204] 处理3与处理4比较，亩新增加产值921.46元；扣除新增肥料成本后，亩净增收益为360.53元；处理3和处理4比较产投比为 1.64:1。

[0205] 说明施用活性兼性厌氧型生物有机肥对提高水稻产值和效益有较好的作用。

[0206] 5.结论与建议

[0207] 5.1试验用兼性厌氧型生物有机肥为粉状，外观均匀，无特殊异味。

[0208] 5.2从试验结果看，在师宗县水稻上施用兼性厌氧型生物有机肥，可明显改善水稻的生物学性状，提高长势长相株高、最高茎蘖数、有效穗数、每穗粒数、穗实粒数、千粒重均有明显增加；能极显著提高水稻的产量，且增产增收效益十分明显。施用活性兼性厌氧型生物有机肥处理比灭活处理亩增产量107.39kg，增幅为15.06％，产量差异达到极显著水平；比习惯施肥处理亩新增加产值229.07元，比不施肥净增收益479.84元，产投比,1.72:1。

[0209] 5.3水稻稻谷过低的收购价格，导致试验经济效益计算中产投比不高。但是在化肥用量减少25％的情况下，施用兼性厌氧型生物有机肥的处理较常规施肥仍表现出较好的增产效果。

[0210] 5.4通过试验证明，水稻施用曲靖市土壤肥料工作站、曲靖医学高等专科学校微生物研究所、曲靖枫茂鸭业发展有限公司联合研制的兼性厌氧型生物有机肥有较好的增产增收效果，可在当地水稻上扩大示范应用。但仅凭单组、单季的试验结果，无法全面反映该肥料产品的全部功效，还需在多点多年多种作物上开展进一步试验示范，更进一步验证其增产增收效果。

[0211] 以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。

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