一种利用氨基酸发酵尾液制备生物刺激素的方法
专利汇可以提供一种利用氨基酸发酵尾液制备生物刺激素的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于 氨 基酸 发酵 尾液处理领域，公开了一种利用氨基酸发酵尾液制备 生物 刺 激素 的方法，其包括如下步骤：步骤1）分离、烘干以及 粉碎 ，步骤 2）浓缩，步骤3） 微生物 酶解处理，步骤4）制备海藻提取物，步骤5）制备 生物刺激素 。本发明对发酵尾液进行了处理，通过对浓缩液、酶解液、腐植酸以及海藻提取物进行合理配伍，制备出生物刺激素，能够调控作物生理过程，促进植株生长，提高产品品质。，下面是一种利用氨基酸发酵尾液制备生物刺激素的方法专利的具体信息内容。
1.一种利用氨基酸发酵尾液制备生物刺激素的方法，其包括如下步骤：步骤1）分离、烘干以及粉碎，步骤 2）浓缩，步骤3）微生物酶解处理，步骤4）制备海藻提取物，步骤5）制备生物刺激素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤1）分离、烘干以及粉碎：将氨基酸发酵尾液通过碟片分离机进行分离，收集菌体蛋白沉淀和废弃母液，再将菌体蛋白沉淀烘干，然后粉碎成菌体蛋白粉末；
步骤 2）浓缩：将步骤1）所得废弃母液浓缩至原体积的1/5，得到浓缩液；
步骤3）微生物酶解处理：将黑曲霉ATCC 16404接种到种子罐培养基中进行培养，温度控制在30℃，培养至菌浓度为1.0×108cfu/ml，得到种子液；将步骤1）所得菌体蛋白粉末添加到10倍重量的种子液中，调整pH为3.5，温度为30℃，100rpm搅拌42h，然后添加电气石粉，同时调整温度为41℃，继续以100rpm搅拌培养6h，得到酶解液；
步骤4）制备海藻提取物：将海藻晾干，粉碎成粉末，然后添加到两倍重量的6wt%的碳酸氢钠溶液中，浸泡30-50min，再升温至50℃，保温条件下，超声处理，然后降至室温，过滤，收集滤液，浓缩成原体积的1/3，即得海藻提取物；
步骤5）制备生物刺激素：将步骤2）所得浓缩液、步骤3）所得酶解液、腐植酸以及步骤4）所得海藻提取物按添加到搅拌罐中，采用氢氧化钾调节pH为7，然后100rpm搅拌30min，最后置于4℃保存，即得。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述种子罐培养基的成分为：20g/L葡萄糖，6g/L玉米浆，2g/L蛋白胨，0.2g/L磷酸二氢钾，0.2g/L磷酸氢二钾，0.1g/L硫酸镁，0.1g/L硫酸锰，溶剂为水。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述电气石粉的添加量占菌体蛋白粉末的
2wt%。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超声时间为10-15min，超声频率为
20KHz。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2）所得浓缩液、步骤3）所得酶解液、腐植酸以及步骤4）所得海藻提取物的质量比为30-50:20-30:10-15:7-9。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述碟片分离机的转速为5000rpm，离心时间为3min。
一种利用氨基酸发酵尾液制备生物刺激素的方法
技术领域
背景技术
发明内容
5000rpm，离心时间为3min，收集菌体蛋白沉淀和废弃母液，再将菌体蛋白沉淀烘干，然后粉碎机粉碎成菌体蛋白粉末；
步骤 2）浓缩：将废弃母液浓缩至原体积的1/5，得到浓缩液；
步骤3）微生物酶解处理：将黑曲霉ATCC 16404接种到种子罐培养基中进行培养，温度控制在30℃，培养至菌浓度为1.0×108cfu/ml，得到种子液；将步骤1）所得菌体蛋白粉末添加到10倍重量的种子液中，调整pH为3.5，温度为30℃，100rpm搅拌42h，然后添加电气石粉，搅拌均匀，同时调整培养温度为41℃，继续培养6h，得到酶解液；
步骤4）制备海藻提取物：将海藻晾干，然后粉碎成粉末，然后添加到两倍重量的6wt%的碳酸氢钠溶液中，浸泡30-50min，再升温至50℃，保温条件下，超声处理，然后降至室温，过滤，收集滤液，浓缩成原体积的1/3，即得海藻提取物；
步骤5）制备生物刺激素：将浓缩液、酶解液、腐植酸以及海藻提取物按添加到搅拌罐中，采用氢氧化钾调节pH为7，然后100rpm搅拌30min，最后置于4℃保存，即得。
优选地，
所述电气石粉的添加量占菌体蛋白粉末的2wt%。
本发明采用黑曲霉产生的酶来酶解菌体蛋白，避免采用盐酸溶液，不会对设备产生腐蚀，而且黑曲霉具有裂解大分子有机物和难溶性无机物，便于作物吸收利用，改善土壤结构；
本发明通过对黑曲霉产酶条件进行优化改进，提高了菌体蛋白粉末的水解率；电气石能够自动释放负离子，负离子具有较强的氧化性，还持续发生直流静电，释放矿物质和微量元素，对微生物繁殖和产酶起促进作用；适当时间和温度的热处理可以提高菌株的产酶能力以及细胞膜通透性，使得酸性蛋白酶的产量提高，从而水解蛋白的能力相应提升；
本发明通过微生物酶解法，将菌体蛋白酶解成游离氨基酸成分，其能够络合金属离子，将植物所需要的微量元素携带到植物体内，还能够直接为作物提供所需的碳源和氮源，促进植株生长和根系的发育；土壤中的微生物能在自身代谢过程中利用氨基酸合成多种植物生长调节剂，从而调控作物生理过程，促进植株生长；
海藻提取物含有植物生长所必需的无机养分，并含有丰富的细胞色素C、胺类、吲哚类化合物等植物生长物质，可协调作物新陈代谢和生理功能、促进农作物根系生长和地上部生物量和产量的增加、解决药害、预防冻害寒害、对干旱、改善农产品风味和缓解盐渍危害促进作物根系生长效果明显。
具体实施方式
实施例1
一种利用氨基酸发酵尾液制备生物刺激素的方法，其包括如下步骤：
步骤1）分离、烘干以及粉碎：将氨基酸发酵尾液通过碟片分离机进行分离，转速为
5000rpm，离心时间为3min，收集菌体蛋白沉淀和废弃母液，再将菌体沉淀烘干，然后粉碎机粉碎成菌体蛋白粉末；
步骤 2）浓缩：将废弃母液浓缩至原体积的五分之一，得到浓缩液；
步骤3）微生物酶解处理：将黑曲霉ATCC 16404接种到种子罐培养基中进行培养，温度
8
控制在30℃，培养至菌浓度为1.0×10 cfu/ml，得到种子液；所述种子罐培养基的成分为：
20g/L葡萄糖，6g/L玉米浆，2g/L蛋白胨，0.2g/L磷酸二氢钾，0.2g/L磷酸氢二钾，0.1g/L硫酸镁，0.1g/L硫酸锰，溶剂为水；将菌体蛋白粉末添加到10倍重量的种子液中，调整pH为
3.5，温度为30℃，100rpm搅拌42h，然后添加占菌体蛋白粉末2wt%的电气石粉，搅拌均匀，同时调整培养温度为41℃，继续培养6h，得到酶解液；
步骤4）制备海藻提取物：将海藻晾干，然后粉碎成粉末，然后添加到两倍重量的6wt%的碳酸氢钠溶液中，浸泡30min，再升温至50℃，保温条件下，超声处理10min，超声频率为
20KHz，降至室温，过滤，收集滤液，浓缩成原体积的1/3，即得海藻提取物；
步骤5）制备生物刺激素：将浓缩液、酶解液、腐植酸以及海藻提取物按照30:20:10:7的质量比例添加到搅拌罐中，采用氢氧化钾调节pH为7，然后100rpm搅拌30min，最后置于4℃保存，即得。
步骤1）分离、烘干以及粉碎：将氨基酸发酵尾液通过碟片分离机进行分离，转速为
5000rpm，离心时间为3min，收集菌体蛋白沉淀和废弃母液，再将菌体沉淀烘干，然后粉碎机粉碎成菌体蛋白粉末；
步骤 2）浓缩：将废弃母液浓缩至原体积的五分之一，得到浓缩液；
步骤3）微生物酶解处理：将黑曲霉ATCC 16404接种到种子罐培养基中进行培养，温度控制在30℃，培养至菌浓度为1.0×108cfu/ml，得到种子液；所述种子罐培养基的成分为：
20g/L葡萄糖，6g/L玉米浆，2g/L蛋白胨，0.2g/L磷酸二氢钾，0.2g/L磷酸氢二钾，0.1g/L硫酸镁，0.1g/L硫酸锰，溶剂为水；将菌体蛋白粉末添加到10倍重量的种子液中，调整pH为
3.5，温度为30℃，100rpm搅拌42h，然后添加占菌体蛋白粉末2wt%的电气石粉，搅拌均匀，同时调整培养温度为41℃，继续培养6h，得到酶解液；
步骤4）制备海藻提取物：将海藻晾干，然后粉碎成粉末，然后添加到两倍重量的6wt%的碳酸氢钠溶液中，浸泡30-50min，再升温至50℃，保温条件下，超声处理15min，超声频率为
20KHz，降至室温，过滤，收集滤液，浓缩成原体积的1/3，即得海藻提取物；
步骤5）制备生物刺激素：将浓缩液、酶解液、腐植酸以及海藻提取物按照50:30:15:9的质量比例添加到搅拌罐中，采用氢氧化钾调节pH为7，然后100rpm搅拌30min，最后置于4℃保存，即得。
本发明氨基酸发酵尾液中各组分如下（干基%）：菌体蛋白35.2，氨基酸14.1，多糖类物质5.3，氨氮9.9，硫9.0，钙3.2，钾1.3，铁0.9，余量为其他。
对照组1：采用6mol/L的盐酸在60℃温度下搅拌水解16小时来水解菌体蛋白，其余操作同实施例1；
对照组2：采用2mol/L的盐酸在60℃温度下搅拌水解32小时来水解菌体蛋白，其余操作同实施例1；
对照组3：不添加电气石粉，其余操作同实施例1；
对照组4：温度控制在30℃，不提高温度，其余操作同实施例1。
样品水解度的测定：
水解度(DH) 100%=（水解液中氨基酸含量/菌体蛋白总氨基酸含量）×100%；
各组别的水解度和酸性蛋白酶酶活力见表1：
表1
组别 水解度(DH)% 酶活U/ml
实验组 68.4 3504
对照组1 52.9 ----
对照组2 45.7 ----
对照组3 58.6 2891
对照组4 64.3 3166
结论：如表1所示，通过对比发现，实验组采用微生物酶解法使得菌体蛋白的水解度更高，明显优于对照组1-2常规的盐酸水解法，并且对设备无腐蚀；与对照组3-4相比，实验组的水解度和酶活均大幅提高，说明电气石粉以及适当提高温度可以提高产酶量，从而提高黑曲霉对菌体蛋白的水解度，增加氨基酸的含量。
对照组2的产品：制备工艺为采用2mol/L的盐酸在60℃温度下搅拌水解32小时来水解菌体蛋白，其余操作步骤同实施例2；喷洒该产品；
对照组3：喷洒等量水。
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