一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合
及其制备方法和应用
技术领域
背景技术
[0002] 疟疾是全球最严重的三大传染病之一，全世界约一半人口面临疟疾
风险，在我国，仍然有部分地区存在疟疾感染病例。由于疟疾的传播与携带、病情潜伏等方式比较特殊，快速诊断在疟疾检测中显得很重要。
[0003] 疟疾检测技术发展至今，临床检测方法主要包括镜检、免疫检测(
免疫层析法、酶联免疫法)和PCR核酸扩增测试。其中，镜检和PCR核酸扩增存在效率低、检测
费用昂贵等问题；免疫检测则存在产品保存困难，原材料昂贵等问题，无法在东南亚、非洲等疟
疾病情传播严重的发展中国家快速推广应用。
[0004] 因此，需要研发一种新的疟疾检测方法，能够快速、准确检测疟疾的同时，降低检测难度和成本。
发明内容
[0005] 本发明的目的是为了克服
现有技术的上述不足，提供一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合。
[0006] 本发明的另一目的在于提供一种编码上述结合蛋白组合的基因组合。
[0007] 本发明的另一目的在于提供上述结合蛋白组合的制备方法。
[0008] 本发明的另一目的在于提供上述结合蛋白组合在制备检测疟疾的
试剂中的应用。
[0009] 本发明的另一目的在于提供一种检测疟疾的试剂的制备方法。
[0010] 为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
[0011] 一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合，所述结合蛋白组合由检测恶性疟原虫HRP2的结合蛋白1、结合蛋白2和检测间日疟原虫LDH的结合蛋白3、结合蛋白4组成，所述结合蛋白1～4的
氨基酸序列如SEQ ID NO:5～8所示。
[0012] 一种编码上述结合蛋白组合的基因组合，所述基因组合的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～4所示。
[0013] 其中，编码结合蛋白1的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码结合蛋白2 的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，编码结合蛋白3的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，编码结合蛋白4的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
[0014] 本发明还
请求保护上述结合蛋白组合的制备方法，包括以下步骤：将含有上述基因组合(由编码与恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH特异性反应的结合蛋白组合的核苷酸序列组成)的噬菌体加入接种有ER2738大肠杆菌的培养液中，于37℃、90转/分钟条件下培养1小时；然后涂布于LB琼脂培养平皿上，加入100μg/mL羧苄青霉素后在室温下培养过夜；次日，将菌落刮入5mL的2TY培养基，再接种到含有100μg/mL羧苄青霉素的25mL 2TY培养基中，使其浓度达到OD600nm＝0.2，于转速225转/分钟、37℃下培养1 小时，用109复杂度的M13K07辅助噬菌体侵染；在转速90转/分钟下培养1小时后，加入25μg/mL的卡那霉素，细胞在转速170转/分钟下25℃孵育过夜，噬菌体用6％的 PEG8000、0.3M NaCl沉淀析出，重悬于
1mL pH8.0的含有10mM Tris、1mM EDTA的缓冲液中即得。
[0015] 本发明还请求保护上述结合蛋白组合的制备方法，包括以下步骤：
[0016] 扩增编码上述结合蛋白组合的基因组合的核苷酸序列，分别采用Nhel和Pstl限制性内切酶对扩增产物和pET11a质粒进行双酶切；挑取克隆于5mL的LB培养基中，于37℃、 225转/分钟培养过夜；将质粒通
过热休克转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞中并于37℃下培养过夜；次日，将培养液加入到10mL LB培养基中，于250转/分钟、37℃下培养至 OD600nm＝0.6，加入终浓度为1mM的异丙β-D-1硫代半乳糖苷；细胞再培养6小时，于转速3000g条件下离心获得，然后重悬于1mL 1×Bugbuster蛋白抽提试剂中；加入核酸酶，在室温下混合后悬浮20分钟，加热至50℃，于转速9400g条件下离心20分钟；上清液与Ni-NTA纯化
树脂50μL混匀悬浮1小时，用pH7.4的含50mM PBS、500mM NaCl、20mM imidazole的30mL洗液洗3次，然后用pH7.4的含50mM PBS、500mM NaCl、300mM imidazole的0.1mL的洗脱液洗脱，即得
权利要求1所述结合蛋白组合。
[0017] 本发明还请求保护上述结合蛋白组合在制备检测疟疾的试剂中的应用。
[0018] 本发明还请求保护上一种检测疟疾的试剂的制备方法，包括以下步骤：
[0019] S1.胶体金结合垫的制备：
[0020] S11.每1mL胶体金加12μL 0.1mol/L
碳酸
钾溶液，震荡混匀，按16μg/mL加入用于恶性疟原虫HRP2检测的结合蛋白1、结合蛋白2，以按12μg/mL加入用于间日疟原虫LDH 检测的结合蛋白3、结合蛋白4，混匀，反应40min，加入1％PEG20000 20μL/mL胶体金混匀，封闭15min，10000rpm离心15分钟，弃上清，将沉淀用1000μL金标复溶液溶解，置4℃备用；
[0021] S12.制备鼠IgG
抗体标记胶体金结合物，每1mL胶体金加12μL 0.1mol/L碳酸钾溶液，震荡混匀，按20μg/mL加入鼠IgG抗体，混匀，反应40min，加入1％BSA 25μL/mL胶体金混匀，封闭15min，10000rpm离心15分钟，弃上清，将沉淀用1000μL金标复溶液溶解，置4℃备用；所述金标复溶液由以下浓度的各组分组成：0.02mol/L Tris、1％BSA、 0.1％Tween-20和20％
蔗糖；
[0022] S13.将步骤S11和S12所得胶体金结合物混合后按每1mL均匀涂抹于15cm2的玻璃
纤维素膜上，37℃干燥22小时后密封备用；
[0023] S2.包被膜划线制备：
[0024] S21.配置包被缓冲液：10mmol/L的PBS(PH7.4)加入5％的蔗糖；
[0025] S22.恶性疟原虫HRP2检测线划线：将结合蛋白1、结合蛋白2稀释成1mg/mL，按 0.1μL/mm的划线浓度，使用喷膜机划线包被到
硝酸纤维素膜上，37℃干燥过夜后密
封存放备用；
[0026] S23.间日疟原虫LDH检测线划线：将结合蛋白3、结合蛋白4稀释成1mg/mL，按 0.1μL/mm的划线浓度，使用喷膜机划线包被到硝酸纤维素膜上，37℃干燥过夜后密封存放备用；
[0027] S24.质控线C线划线：将羊抗鼠抗体划线，划线浓度为1.5mg/mL按0.1μL/mm的划线浓度，使用喷膜机划线包被到硝酸纤维素膜上，37℃干燥过夜后密封存放备用；
[0028] 步骤S22～S24的三种试剂的划线在同一个硝酸纤维素膜上，依次从吸
水纸端开始分别为C线、T2线(间日疟原虫LDH检测线)、T1线(恶性疟原虫HRP2检测线)；
[0029] S3.样品垫制备：
[0030] S31.配置样品垫处理液：计算称取1％PVP与0.5％BSA溶解在0.1mol/L PBS中，最后加入1％Triton X-100混匀；
[0031] S32.样品垫制备：按每1mL的样品垫处理液均匀涂布于30cm2的玻璃纤维素膜上，于
温度37℃、湿度10％～30％条件下干燥，封袋备用；
[0032] S4.胶体金结合垫、吸水纸、样品垫的裁切：
[0033] 用精密数控裁切机将胶体金结合垫裁成宽度为0.3～0.5cm，将吸水纸裁成宽度为2.3～ 3.3cm，将样品垫裁成条形宽度为2.3～3.3cm；
[0034] S5.组装切条：
[0035] 层析试剂条的各个组成部分为样品垫、胶体金结合垫、NC膜、吸水纸，将各部分组装一起粘合在聚苯乙烯
底板上。
[0036] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0037] 本发明采用噬菌体展示技术以恶性疟原虫富组氨酸蛋白-2(HRP2)和间日疟原虫乳酸脱氢酶(LDH)为靶
抗原，从噬菌体展示蛋白文库中淘选亲和
力高、特异性好的结合蛋白组合。利用基因工程技术进行重组表达和纯化，以此结合蛋白组合试剂替代疟疾免疫检测中用抗体试剂，建立胶体金层析快速检测方法。测试发现用此结合蛋白组合制备的
试剂盒，其储存
稳定性远远高于现有的临床检测产品，对储存条件的要求低、生产成本低，具有可靠、准确、安全、简便、稳定的优点，具有较高的临床应用价值。
附图说明
[0038] 图1为检测试剂条的结构示意图。
具体实施方式
[0039] 下面结合
说明书附图及具体
实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
[0040] 实施例1
[0041] 针对恶性疟L乳酸脱氢酶和富组氨酸蛋白2的蛋白试剂的噬菌体展示库淘选过程：
[0042] (1)先用NHS-EZ藕联试剂(购自Pierce公司)将目标蛋白标记好
生物素。生物素标记效果是通过ELISA方法检测生物素的存在进行确认。生物素标记蛋白的确定是通过将该目标蛋白
吸附于96微孔板(购自Nunc公司)，然后使用链酶亲和素藕联的辣根过
氧化物酶(HRP)进行生物素检测。噬菌体展示库的淘选过程如下：取5μL等分的噬菌体展示库，其包含复杂度1012噬菌体质粒，与含0.1％的吐温20的
磷酸盐缓冲液95μL混匀，然后在高结合力的链酶亲和素包被的板(购自Pierce公司)中预淘选3次，时间总共1小时。往链霉亲和素包被的淘选的孔中加入100μL的100nM的生物素化蛋白，将
振荡器速度预调至第三档(用Heidolph VIBRAMAX 100振荡器)振荡1小时，然后加入预淘选后的噬菌体反应2.5小时。
[0043] (2)淘选的孔用洗板机(Tecan Hydroflex)300μL/孔的PBST洗10次，随后用100μL 的50mM的甘氨酸-
盐酸(pH2.2)洗脱10分钟，用1M的Tris-Hcl(pH9.1)中和，然后进一步用100μL 100mM的三乙胺洗脱6分钟后用50μL 1M的Tris-Hcl(pH7.0)中和。洗脱下来的噬菌体和指数生长期的ER2738大肠杆菌在37℃、90转/分钟条件下一起培养1 小时。细胞涂布于LB琼脂培养平皿上加入100μg/mL的羧苄青霉素后在室温下培养过夜。次日，将菌落刮入5mL的
2TY培养基，再接种到25mL的2TY培养基加入羧苄青霉素 (100μg/mL)使其达到在600nm
波长下0.2的吸光度值，于转速225转/分钟、37℃下培养1个小时，随后用109复杂度的M13K07辅助噬菌体侵染。在转速90转/分钟下培养1 个小时后，加入25μg/mL的卡那霉素，细胞在转速
170转/分钟下25℃孵育过夜，噬菌体用6％的PEG8000、0.3MNaCl沉淀析出，随后重悬于1mL pH8.0的含有10mMTris，1mM EDTA(TE缓冲液)的缓冲液中。
[0044] (3)取2μL的该噬菌体悬浮液，用于第二轮的淘选。这轮淘选，噬菌体展示库是用链酶亲和素标记的
磁珠(购自Invirogen)进行处理。噬菌体用10μL的洗过的磁珠在Stuart SB2旋转混合器上以20转/分钟的转速预淘选1小时，同时这10μL的磁珠是用100μL的 100nM的生物素化蛋白在同样的旋转混合器上标记处理4小时。抗原标记的磁珠用PBST 洗三次后加入预淘选的噬菌体反应1个小时。将400μL PBST稀释的噬菌体和磁珠加入到 KingFisher 96-Flex磁珠提取纯化系统(购自ThermoFisher)中，摇匀孵育1个小时后用 1mL的PBST在10分钟内洗5次。结合的噬菌体用如上的方法洗脱和扩增。最后一轮的淘选用neutravidin高结合力板(购自Pierce公司)处理，操作如先前针对于第一轮淘选所述。
[0045] 实施例2
[0046] 通过ELISA方法检测目标蛋白试剂的噬菌体存在，并对验证结果通过测序进一步确认，过程如下：
[0047] 噬菌体从含有目标蛋白的孔中重新获得，同时质控孔用于判断在目标孔扩增情况，该质控孔表明了针对于结合目标蛋白的试剂高效扩增。为了测试购自展示库里的蛋白，用 ELISA方法检测结合的目标噬菌体。单个的ER2738菌落是购自于从最后一轮淘选的被侵染的细胞，它们在96深孔板中37℃(900转/分钟)下100μL的含有100μg/mL的羧苄青霉素的2TY培养基中培养6小时后挑选出来。将25μL等分的培养液加到含有羧苄青霉素的200μL
2TY培养基中，在37℃(900转/分钟)培养1小时。随后加入辅助噬菌体(10μL 的1011/mL)，然后再加入卡拿霉素至浓度25μg/mL，25℃(450转/分钟)下培养过夜。链酶亲和素包被板(购自Pierce)用2×
酪蛋白封闭液(购自Sigma)37℃下封闭过夜。次日，封闭好的板用0.4nM的生物素化的目标蛋白标记1小时，细菌在3000转/分钟下离心 5分钟得到，将45μL的含有噬菌体的培养液加入到含有生物素标记蛋白或者含有生物素化连接载体的孔中孵育1个小时。反应孔用Tecan Hydroflex洗板机300μL PBST洗3次，然后加入用PBST 1：1000稀释的HRP标记抗噬菌体抗体(购自Seramun)100μL反应1 小时。反应孔用300μL的PBST洗10次，随后结合物用100μL的TMB底物显色液进行检测，最后在560nm波长下检测吸光度值。含有目标蛋白反应孔中
颜色的改变以及质控孔中阴性结果表明了蛋白与抗原发生结合。
[0048] 实施例3
[0049] 将表达目标蛋白特异性DNA序列导入目标质粒中并转入大肠杆菌进行扩增培养，最后提取纯化后用ELISA方法测试蛋白表达情况，步骤如下：
[0050] 随后将所有特异性试剂导入到蛋白表达载体中进行克隆，产物作为ELISA中的捕获试剂进行确定。与目标蛋白反应的结合蛋白的DNA编码序列(SEQ ID NO:1～4)通过PCR 扩增，产物用Nhel和Pstl限制性内切酶处理，将酶切后的
片段导入到含有表达结合蛋白结构和酶切限制性位点的pET11a质粒中。挑取克隆于5ml的LB培养基37℃、225转/分钟培养过夜，质粒DNA用minipreps(来自Qiagen)质粒提取试剂盒提取，然后测序以进一步确定正确插入位点。将质粒通过热休克转入大肠杆菌BL21(DE3)(F–ompT gal dcm lon hsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacI lacUV5-T7gene 1ind1sam7nin5])细胞中并于37℃下培养过夜。次日，将培养液加入到10ml的LB培养基中，于250转/分钟、37℃下培养至600nm 波长处吸光度值0.6，随后加入终浓度为1mM的异丙β-D-1硫代半乳糖苷(IPTG)。细胞再培养6小时候后，在
3000g下离心获得，然后重悬于1ml的1×Bugbuster(来自Novagen) 蛋白抽提试剂中。根据厂商所提供说明加入核酸酶，在室温下混合后悬浮20分钟，加热到50℃20分钟，在9400g下离心20分钟。上清液与Ni-NTA纯化树脂50ul混匀悬浮1 小时，用30ml洗液(含50mM50mM PBS，500mM NaCl，20mM imidazole，pH 7.4)洗 3次，后用0.1ml的洗脱液(含50mM PBS，
500mM NaCl，300mM imidazole，pH 7.4) 洗脱。将以上制备得的结合蛋白用于进一步的
配对筛选测试，得到用于疟疾检测试剂开发的结合蛋白1～4，其氨基酸序列如SEQ ID NO:5～
8所示所示。
[0051] 实施例4
[0052] 运用噬菌体展示技术筛选得到的结合蛋白进行恶性疟原虫富组氨酸蛋白2(HRP2)和间日疟原虫L乳酸脱氢酶(LDH)快速检测试剂(胶体金法)的制备，对工艺进行了优化：
[0053] (1)前期条件的摸索
[0054] 金颗粒标记蛋白的效果主要与溶液的电荷关系比较大，用0.1mol/L的K2CO3加入到胶体金溶液中，每mL胶体金溶液加入0、5、10、15、20μL的K2CO3溶液，随后加入
透析后的两种nABPs 20μg，结果发现每mL的胶体金溶液中加入20μL的0.1mol/L K2CO3用于调节标记的溶液的PH值，通过PH
试纸可以测出调节后的PH值为8.6，与结合蛋白的等电点PH值接近，能形成最佳的标记条件。
[0055] (2)结合蛋白用于包被的及胶体金标记的选择与测试
[0056] 通过调整不同的浓度的配对结合蛋白进行测试，选择出饱和的包被以及标记浓度的测试梯度。
[0057] (3)优化结合蛋白用于制备恶性疟原虫富组氨酸蛋白2(HRP2)和间日疟原虫L乳酸脱氢酶(LDH)快速检测试剂(胶体金法)的工艺过程
[0058] 实验对标记用恶性疟原虫HRP2及间日疟原虫L乳酸脱氢酶(LDH)的结合蛋白进行胶体金标记的优化测试，通过改变封闭液成分进行血样检测灵敏度及特异性的研究。制备过程为每毫升的胶体金中加入0.1mol/L K2CO3 12μL调节好PH值。然后加入标记蛋白反应40min后加入不同的配方试剂进行封闭。反应15min后用10000rpm离心10min。去上清加入复溶液1000μL(复溶液配方：1％BSA，2％蔗糖，溶解于10mmol/L的磷酸盐缓冲液中)。再均匀涂抹于15cm2的玻璃纤维素膜上，37℃干燥22小时后密封保存待测试。经过测试选择出含1％的PEG20000作为金标记封闭工艺配方。然后进行不同复溶液配方的对比测试，确定了含
0.02mol/L Tris+1％BSA的配方为最佳复溶液配方。最后进行多种样品垫的处理液配方的对比测试研究，选择含0.1M PBS的0.5％BSA的配方为最佳样品垫配方。
[0059] 实施例5
[0060] 通过实施例4的工艺采用结合蛋白1～4制备恶性疟原虫富组氨酸蛋白2(HRP2)和间日疟原虫L乳酸脱氢酶(LDH)快速检测试剂(胶体金法)，工艺过程如下所示：
[0061] (1)胶体金结合垫的制备
[0062] 每1mL胶体金加12μL 0.1mol/L碳酸钾溶液，震荡混匀，按16μg/mL加入用于恶性疟原虫HRP2检测的结合蛋白1、结合蛋白2，以按12μg/mL加入用于间日疟原虫LDH检测的结合蛋白3、结合蛋白4，混匀，反应40min，加入1％PEG20000 20μL/mL胶体金混匀，封闭15min，10000rpm离心15分钟，弃上清，将沉淀用1000μL金标复溶液(配方：0.02mol/L Tris+1％BSA+0.1％Tween-20+20％蔗糖)溶解，置4℃备用。
[0063] 与此同时，制备鼠IgG抗体标记胶体金结合物。每1mL胶体金加12μL 0.1mol/L碳酸钾溶液，震荡混匀，按20μg/mL加入鼠IgG抗体，混匀，反应40min，加入1％BSA 25μL/mL 胶体金混匀，封闭15min，10000rpm离心15分钟，弃上清，将沉淀用1000μL金标复溶液(配方：0.02mol/L Tris+1％BSA+0.1％Tween-20+20％蔗糖)溶解，置4℃备用。
[0064] 将以上胶体金结合物混合后按每1mL均匀涂抹于15cm2的玻璃纤维素膜上，37℃干燥22小时后密封备用。
[0065] (2)包被膜划线制备
[0066] 配置包被缓冲液：10mmol/L的PBS(PH7.4)加入5％的蔗糖。
[0067] 恶性疟原虫HRP2检测线划线：将结合蛋白1、结合蛋白2稀释成1mg/mL，按0.1μL/mm 的划线浓度，使用喷膜机划线包被到硝酸纤维素膜上，37℃干燥过夜后密封存放备用。
[0068] 间日疟原虫LDH检测线划线：将结合蛋白3、结合蛋白4稀释成1mg/mL，按0.1μL/mm 的划线浓度，使用喷膜机划线包被到硝酸纤维素膜上，37℃干燥过夜后密封存放备用。
[0069] 质控线C线划线：将羊抗鼠抗体(购自杭州贤至生物公司)划线，划线浓度为1.5mg/mL 按0.1μL/mm的划线浓度，使用喷膜机划线包被到硝酸纤维素膜上，37℃干燥过夜后密封存放备用。
[0070] 以上三种试剂的划线是在同一个硝酸纤维素膜上，依次从吸水纸端开始分别为C线， T2线(间日疟原虫LDH检测线)，T1线(恶性疟原虫HRP2检测线)。
[0071] (3)样品垫制备
[0072] 配置样品垫处理液：计算称取1％PVP与0.5％BSA溶解在0.1mol/L PBS中，最后加入1％Triton X-100混匀。
[0073] 样品垫制备：按每1mL的样品垫处理液均匀涂布于30cm2的玻璃纤维素膜上，放干燥箱干燥(干燥箱温度37℃，湿度10％～30％)，封袋备用。
[0074] (4)胶体金结合垫、吸水纸、样品垫的裁切
[0075] 用精密数控裁切机将胶体金结合垫裁成宽度为0.4±0.1cm，将吸水纸裁成宽度为 2.8±0.5cm，将样品垫裁成条形宽度为2.8±0.5cm。
[0076] (5)组装切条
[0077] 层析试剂条的各个组成成分(样品垫、胶体金结合垫、NC膜、吸水纸)选择及处理完毕后，下一步的工作就是将这些成分组装在一起。目前最常用的平台就是聚苯乙烯底板 (PVC板)，板上涂覆有中等强度的黏合剂，上面有保护膜
覆盖，类似于双面胶，将保护膜揭开后，即可将各组成成分一起粘合在聚苯乙烯底板上。
[0078] 试剂条组装的具体过程如下：
[0080] ②轻轻揭开PVC板上NC膜粘贴处的保护膜，将NC膜从左向右均匀推进，使其牢固的粘贴在PVC板上。
[0081] ③轻轻揭开PVC板上吸收垫粘贴处的保护膜，将吸收垫粘附于其上，均匀、轻微滚动式推进，以加强粘合力，并防止产生气泡，吸收垫覆盖在NC膜上1mm。
[0082] ④轻轻揭开NC膜下缘胶体金垫粘贴处的保护膜，将胶体金结合垫粘附于其上，方法同吸收垫。胶体金结合垫覆盖在NC膜上1mm。
[0083] ⑤轻轻揭开薄板最下端的保护膜，将样品垫粘附于胶体金结合垫上，方法同吸收垫。样品垫覆盖在胶体金结合垫上2mm。
[0084] ⑥在自动切条机上将贴好的聚苯乙烯薄板切成4mm宽的试剂条。
[0085] 形成的产品如图1所示。
[0086] 实施例6
[0087] 恶性疟原虫富组氨酸蛋白2(HRP2)/疟原虫L乳酸脱氢酶(LDH)快速检测试剂(胶体金法)性能评估测试：
[0088] 研究的临床试验样本为来自临床研究所收集的样本，样本所采用的实验对照方法为疟疾检测的金标准
显微镜检法。与对照相比，156例样本检测结果与对照试剂结果一致，其余5例标本检测结果不符。经统计分析，阳性符合率达97.9％，阴性符合率达95.5％，总符合率为96.9％，约登指数达到0.934，Kappa＝0.936，初步临床研究结果表明本发明所制备的检测试剂可靠、准确、安全、简便、稳定，具有较高的临床应用价值。
[0089] 对生产的检测试剂进行稳定性研究，结果如下：
[0090] 通过
加速热稳定(45℃)试验至第十周，所制备的试剂在检测阳性血样测值稍微有所下降。因此选择比较保险的八周的热稳定时间，即在45℃的加速试验中，生产的检测试剂(胶体金法)是稳定的。通过阿伦尼乌斯公式计算，在8周之内即对应的实时存储温度 (22℃)下约40个月稳定，而已经在临床使用的其他免疫检测产品效期大部分在24个月以内。因此，在常温存储下，本发明所制备得到的检测试剂比其他检测产品具有更长的有效期。
[0091] 最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的
基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何
修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
