专利汇可以提供一种山桐子叶片组织培养方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种山桐子 叶片 组织培养方法,包括以下步骤:(1)外植体选择及处理;(2)愈伤组织诱导培养;(3)分化增殖培养;(4)壮苗培养;(5)生根培养;(6)移栽。相对于 现有技术 ,本发明的山桐子叶片组织培养方法,在短期内生产大量优质种苗,使用较少的外植体,繁殖速度快,增殖系数和生根率高,繁殖效率高。,下面是一种山桐子叶片组织培养方法专利的具体信息内容。
1.一种山桐子叶片组织培养方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)外植体选择及处理:采用当年生山桐子的当年生嫩叶片为外植体,经70%酒精消毒
20-25秒,再用0.1%的升汞溶液灭菌7-9分钟,用无菌水冲洗3-5次;
(2)愈伤组织诱导培养:在超净的工作台上,将消毒的外植体接种在诱导愈伤组织培养基的三角瓶中,先将其置于黑暗条件下10天后,再置于普通日光灯为光源、光照强度为
1500-2000lx下,每日光照16小时,温度25-27℃、湿度为60%,培养50天,长成愈伤组织;
所述的诱导愈伤组织培养基为:每升培养基含:玉米素0.2-0.8毫克、6-苄基嘌呤0.5-
1.0毫克、α-萘乙酸0.1-0.2毫克、2,4-二氯苯氧乙酸0.5-1.0毫克;其基本培养基为:每升基本培养基中含有:硝酸钾1550-1900mg,硝酸铵1350-1650mg,磷酸二氢钾140-170mg,硫酸镁
300-370mg,二水氯化钙440mg,碘化钾0.83mg,硼酸6.2mg,四水硫酸锰22.3mg,七水硫酸锌
8.6mg,二水钼酸钠0.25mg,五水硫酸铜0.025mg,氯化钴0.025mg,七水硫酸亚铁27.8mg,乙二胺四乙酸钠37.3mg,维生素B1 0.1mg,维生素B6 0.5mg,VB5 0.5mg,甘氨酸2.0mg,肌醇
100mg,蔗糖30000mg,卡拉胶6500mg;
(3)分化增殖培养:将从(2)步中培养的愈伤组织,转接于含有分化增殖培养基的三角瓶中,进行增殖培养,不断增殖;所述的分化增殖培养基为:每升培养基含:玉米素1.0-1.5毫克、6-苄基嘌呤1.0-1.5毫克、α-萘乙酸0.08-0.1毫克;
(4)壮苗培养:将(3)步中培养的试管苗,接种于含有壮苗培养基的三角瓶中,进行壮苗培养;所述的壮苗培养基为:每升培养基含:玉米素0.5-1.0毫克、6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、α-萘乙酸0.1-0.2毫克;
(5)生根培养:将(4)步中的试管壮苗,去掉基部愈伤组织和部分叶片,留3-4片叶,接种于含有生根培养基的三角瓶中,进行生根培养10-15天;所述的生根培养基为:每升培养基含:α-萘乙酸0.3-0.5毫克、吲哚乙酸0.5-0.8毫克和维生素C50-100毫克;
(6)移栽:将(5)步中生长的生根小苗,取出清洗,移栽到含有泥炭和黄心土体积比为泥炭:黄心土=1:1的基质中,浇透水,保持温度28℃,相对湿度85%以上,前15天遮光70%,后逐渐见光,55天后,全光照;
所述分化增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基中基本培养基均为:每升基本培养基中含有:四水硝酸钙375-560mg,硝酸铵270-400mg,硫酸钾650-990mg,七水硫酸镁250-
370mg,磷酸二氢钾120-170mg,二水氯化钙75-95mg,四水硫酸锰22.4mg,七水硫酸锌8.6mg,硼酸6.2mg,五水硫酸铜0.25mg,二水钼酸钠0.25mg,七水硫酸亚铁34.1mg,乙二胺四乙酸钠
46.6mg,维生素B1 1.0mg,维生素B6 0.5mg,VB5 0.5mg,甘氨酸2.0mg,肌醇100mg,蔗糖
22000mg,卡拉胶6500mg。
2.根据权利要求1所述的山桐子叶片组织培养方法,其特征在于,步骤(4)所述壮苗培养的时间为30天。
3.根据权利要求1所述的山桐子叶片组织培养方法,其特征在于,所述步骤(2)愈伤组织诱导培养和步骤(3)分化增殖培养之间,还包括将培养的愈伤组织用溶液浸泡2天,所述溶液中成分为:吡哆醇5mg/L+甘氨酸1mg/L+蔗糖8g/L。
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