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一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法

阅读：144发布：2020-05-13

专利汇可以提供一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明属于果树育种技术领域，具体涉及一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法。本方法通过杂交组合选择，杂交授粉，层积杂交种子，播种移栽，接种梨树腐烂病菌，根据杂交组合内子代株数淘汰感病植株：杂交组合内单株数在500以上的，淘汰发病率在40%以上同时病斑长度在2cm以上的单株，杂交组合内单株数小于500的，淘汰发病率在70%以上同时病斑长度在2cm以上的单株；然后在抗性植株最顶端的10cm内选择最饱满的芽，嫁接到杜梨砧木上。，下面是一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：选择杂交组合，所述杂交组合中至少有一个亲本的腐烂病抗性为中抗以上；
步骤2：采集父本大气球期的花蕾，剥下花药干燥，干燥温度为22～25℃，散粉后4℃密封保存，在母本花蕾处于大气球期时授粉，随即进行套袋隔离，授粉10～14d后去掉隔离；授粉3周后再对果实套袋，套袋前1周内全株喷施一次杀虫剂和杀菌剂，在套袋前用70％甲基托布津500倍液和毒死蜱1000倍液浸湿袋口；
步骤3：采收生理成熟的杂交果实，运回室内散发田间热，然后去掉果袋；预冷24h，预冷温度为15～20℃，然后在冷库储藏，储藏温度为0～2℃，储藏时间为60～80d，将杂交种子取出，在25℃温水下搓洗，然后晾干，室温保存；
步骤4：杂交当年12月下旬或来年1月上旬层积杂交种子：先将杂交种子放在25℃温水中浸泡12h，然后将杂交种子均匀放置于底部放有吸水的滤纸的容器中，并将容器放于0～4℃冷藏，保持滤纸潮湿，待70～80%的杂交种子露白后播种到11cm深的林木专用穴盘中；
步骤5：当杂交苗幼苗长出4片真叶、根长10cm时，将杂交苗幼苗移栽到畦宽80cm的苗圃地，一畦种4行，宽窄行栽植；在移栽当年8月份剪掉主干上的分枝和枝刺，9月下旬复剪一次；
步骤6：移栽当年8月下旬接种梨树腐烂病菌：先将梨树腐烂病菌在25℃培养箱中培养
4d，然后将菌丝用打孔器打成菌饼，对地径在1cm以上的杂交苗进行接种，接种时从杂交苗地面高度80cm开始向上每隔15cm接种一个菌饼，共接种五个；接种方法为在杂交苗主干高
80cm、95cm、110cm、125cm和140cm处用打孔器打孔，孔深触及木质部，将菌饼背面放在用无菌水完全浸湿的三层滤纸或脱脂棉上，然后将有菌丝的一面和杂交苗主干上的孔完全对应，然后用保鲜膜从下至上将其完全缠住；梨树腐烂病菌培养基为PSA培养基；
步骤7：接种3周后淘汰病斑已经延伸到保鲜膜外的单株；接种4周后，杂交组合内单株数在500以上的，淘汰发病率在40%以上同时病斑长度在2cm以上的单株；杂交组合内单株数小于500的，淘汰发病率在70%以上同时病斑长度在2cm以上的单株；
步骤8：来年春季在抗性单株最顶端的10cm内选择最饱满的芽，嫁接到已经定植的株行距0.5m×2m的杜梨砧木上。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括在杂交当年5月份施用壮果肥，每亩施尿素30kg、硫酸钾30kg和沼液水4000kg。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中所述干燥温度为25℃；授粉14d后去掉隔离。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中所述杀虫剂为5%阿维菌素4000倍液，所述杀菌剂为70%甲基托布津800倍液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中所述预冷温度为15℃，所述储藏温度为0℃，所述储藏时间为70d。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括步骤5中所述杂交苗幼苗移栽前在苗圃施有机肥4～7m³/亩，尿素30kg/亩；移栽前杂交苗幼苗浇透水，移栽后苗圃喷灌浇水，从当年5月中旬至8月中旬追肥，每隔10d 施肥1次，每次施尿素2～4kg/亩。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括步骤5中每畦设置2个窄行和1个宽行，宽行行距40cm，窄行行距20cm，株距15～20cm，畦间距50cm。

说明书全文

一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法

技术领域

[0001] 本发明属于果树育种技术领域，具体涉及一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法。

背景技术

[0002] 梨树腐烂病(pear Valsa canker)俗称“烂皮病”，是梨栽培生产中危害最为严重的病害之一，它主要危害梨树主干、主枝和侧枝，造成树皮腐烂、树势衰弱，梨果产量和品质下降。该病具有发生区域广、发病率高、难以控制的特点，发病严重的梨园，树体病疤累累、枝干残缺不全，甚至造成大量死树或毁园。

[0003] 梨在我国的栽培区域较为广泛，是我国栽培分布最广的果树树种之一，果实也是深受消费者喜爱的水果之一。随着整个社会和经济的发展，人们对梨果的要求越来越高，不仅要求外观漂亮，其品质也需要能够满足不同消费群体的需求，而品种选育是改良品种的根本，所以得到越来越多的重视。果实外观美观，品质优良，抗性强，成为梨主要的育种目标。梨育种手段有芽变选种、实生选种、杂交选育、诱变育种等，目前我国通过杂交育种培育的食用品种占新品种的72％，所以杂交育种依然是梨新品种选育的主要方法和途径。

[0004] 杂交育种的流程包括，根据育种目标制定育种计划，采集花粉，授粉并套袋隔离，杂交果实管理，秋季采摘杂交果实，杂交果实冷藏后取种子，杂交种子的清洗干燥保存，杂交种子层积处理，播种，苗期养护，定植或者直接取顶芽嫁接，杂交苗经过5～7年的田间管理开始结果，对果实等进行综合评价，选育出优株，复选，决选，审定成为一个新品种。

[0005] 由于梨树在遗传上高度杂合，杂种后代具有广泛的分离，要想获得聚合了多种优良性状的理想品种，需要配置大杂交群体才能实现。同时梨树的童期长，从杂交种子播种到开始结果往往要5～7年，这5～7年的田间生长，不仅周期长，而且占地面积大，耗费的人力物力多，为缩短育种周期，提高育种效率，果树杂交后代早期性状的预先选择研究一直是育种家关注的热点。如果在苗期就能选择出未来可能成为优良品种的单株，淘汰那些没有目标性状或者劣质性状的单株，将大大节省育种成本。

[0006] 不同品种之间对梨腐烂病的抗性差异较大，这给通过育种选择抗腐烂病梨品种提供了可能。利用抗性品种减少腐烂病发生是生产中防治腐烂病最有效和安全的措施。育种中如何利用早期选择尽快地从杂交苗中选出优株是很多育种者研究工作的重点。

[0007] 现有技术在梨树育种过程中对腐烂病抗性并未进行早期选择，这使得育成品种在推广过程受到很大的限制，比如在梨树腐烂病病区就无法推广，对资源造成了浪费；中国发明专利CN201310468321.X公开了一种梨树腐烂病抗性鉴定的方法，但并没有提示如何将抗性鉴定和育种的早期选择结合起来，对抗性植株筛选标准等还需进一步研究。

发明内容

[0008] 本发明目的在于克服现有技术的不足，提供一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法。

[0009] 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

[0010] 本发明提供一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法，包括以下步骤：

[0011] 步骤1：选择杂交组合，所述杂交组合中至少有一个亲本的腐烂病抗性为中抗以上；

[0012] 杂交后代对腐烂病的抗性受亲本品种的影响，亲本品种的抗性对后代抗性植株的数量影响大，双亲都不是抗性品种的后代中抗病植株的数量很少，双亲或亲本之一是抗病品种的，后代中能产生较多的抗病植株；

[0013] 步骤2：采集父本大气球期的花蕾，剥下花药干燥，干燥温度为22～25℃，散粉后4℃密封保存，在母本花蕾处于大气球期时授粉，随即进行套袋隔离，授粉10～14d后去掉隔离；授粉3周后再对果实套袋，套袋前1周内全株喷施一次杀虫剂和杀菌剂，在套袋前用70％甲基托布津500倍液和毒死蜱1000倍液浸湿袋口；

[0014] 步骤3：采收生理成熟的杂交果实，运回室内散发田间热，然后去掉果袋；预冷24h，预冷温度为15～20℃，然后在冷库储藏，储藏温度为0～2℃，储藏时间为60～80d，将杂交种子取出，在25℃温水下搓洗，然后晾干，室温保存；

[0015] 步骤4：杂交当年12月下旬或来年1月上旬层积杂交种子：先将杂交种子放在25℃温水中浸泡12h，然后将种子均匀放置于底部放有吸水的滤纸的容器中，并将容器放于0～4℃冷藏，保持滤纸潮湿，待70～80％的杂交种子露白后播种到11cm深的林木专用穴盘中；

[0016] 步骤5：当杂交苗幼苗长出4片真叶、根长10cm时，将杂交苗幼苗移栽到畦宽80cm的苗圃地，一畦种4行，宽窄行栽植；在移栽当年8月份剪掉主干上的分枝和枝刺，9月下旬复剪一次；

[0017] 步骤6：移栽当年8月下旬接种梨树腐烂病菌：先将梨树腐烂病菌在25℃培养箱中培养4d，然后将菌丝用打孔器打成菌饼，对地径在1cm以上的杂交苗进行接种，接种时从杂交苗地面高度80cm开始向上每隔15cm接种一个菌饼，共接种五个；接种方法为在杂交苗主干高80cm、95cm、110cm、125cm和140cm处用打孔器打孔，厚到触及木质部，将菌饼背面放在用无菌水完全浸湿的三层滤纸或脱脂棉上，然后将有菌丝的一面和杂交苗主干上的孔完全对应，然后用保鲜膜从下至上将其完全缠住；梨树腐烂病菌培养基为PSA培养基；

[0018] 步骤7：接种3周后淘汰病斑已经延伸到保鲜膜外的单株；接种4周后，统计每个接种点是否发病和病斑的长度，计算每个单株的发病率，发病率＝发病的接种点/总接种点×100％；杂交组合内单株数在500以上的，淘汰发病率在40％以上同时病斑长度在2cm以上的单株；杂交组合内单株数小于500的，淘汰发病率在70％以上同时病斑长度在2cm以上的单株；将淘汰的杂交苗从根部剪除，然后收集起来集中焚烧；

[0019] 步骤8：来年春季在抗性单株最顶端的10cm内选择最饱满的芽，嫁接到已经定植的株行距0.5m×2m的杜梨砧木上；植株最顶端的芽先转化为生殖生长，因此嫁接后的单株能在2～3年内开花结果。

[0020] 进一步地，上述方法还包括在杂交当年5月份施用壮果肥，每亩施尿素30kg、硫酸钾30kg和沼液水4000kg。

[0021] 进一步地，步骤2中所述干燥温度为25℃；授粉14d后去掉隔离。

[0022] 进一步地，步骤2中所述杀虫剂为5％阿维菌素4000倍液，所述杀菌剂为70％甲基托布津800倍液。

[0023] 进一步地，步骤3中所述预冷温度为15℃，所述储藏温度为0℃，所述储藏时间为70d。

[0024] 进一步地，还包括步骤5中所述杂交苗幼苗移栽前在苗圃施有机肥4～7m3/亩，尿素30kg/亩；移栽前杂交苗幼苗浇透水，移栽后苗圃喷灌浇水，从当年5月中旬至8月中旬追肥，每隔10d 施肥1次，每次施尿素2～4kg/亩；追肥前除净杂草，杂交苗在当年的生长量超过1.5m，植株高度达到2.5～3m，平均地径大于1cm。

[0025] 进一步地，还包括步骤5中每畦设置2个窄行和1个宽行，宽行行距40cm，窄行行距20cm，株距15～20cm，畦间距50cm。

[0026] 相比现有技术，本发明的有益效果在于：

[0027] 1、本发明的方法比现有的育种方法节约一半的土地，并能将杂交苗提早2～3年进入结果期，开始后期评价。

[0028] 2、本发明确定了在不同杂交组合大小时，淘汰的发病植株的标准：当杂交组合内单株数量小于500时，淘汰发病率在70％以上同时病斑长度在2cm以上的单株，当组合内单株数在500以上时，淘汰发病率在40％以上同时病斑长度在2cm以上的单株，这样既可以保证每个组合有一定的苗量，同时又能在育种的初始阶段苗圃内淘汰掉感病的单株，减少后续育种中土地的占用量和人力物力。

[0029] 3、本发明中，在杂交苗移栽至苗圃地时，选择了宽窄行栽植，宽行行距40cm，窄行行距20cm，这既能满足育种过程中植株管理时育种者通行的需求，又能满足梨的生长，还节约了土地，节省了成本。

[0030] 4、本发明中，在杂交苗移栽后，在当年8月份剪掉主干上的分枝和枝刺，9月下旬复剪一次，这为后期杂交选育过程中育种者的通行和操作带来了较大的方便，使育种者更加方便。

[0031] 5、利用本发明选育得到的抗腐烂病梨树，可在病区推广，不受腐烂病的限制。

具体实施方式

[0032] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限定本发明的保护范围。若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

[0033] 实施例1

[0034] 一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法，包括以下步骤：

[0035] 步骤1：选择高感腐烂病的品种“新高”为母本，中抗腐烂病的品种“新鸭梨”为父本；

[0036] 步骤2：采集大气球期的花蕾，然后剥下花药，收集后25℃干燥，散粉后4℃密封暂时保存，在母本花蕾大气球期开始授粉，授粉后随即进行套袋隔离，授粉14d后去掉隔离；授粉3周后开始对果实套袋，套袋前1周内全株喷一次70％甲基托布津800倍液和5％阿维菌素4000倍液；并且在套袋的前一天用70％甲基托布津500倍液和1000倍毒死蜱浸湿袋口；套袋时先撑起袋口，托起袋底，令袋体膨起，套上果实后，将袋口绕果柄封好；当年5月施用壮果肥，每亩施尿素30kg、硫酸钾30kg和沼液水4000kg；

[0037] 步骤3：采收生理成熟的杂交果实，采果后运回室内让其散发田间热，然后去掉果袋；再在15℃预冷24h，然后在0℃的冷库储藏；储藏70d后，将杂交果实从冷库取出，横切杂交果实，用镊子将杂交种子从心室中取出，用种子袋收集，然后在25℃温水下搓洗，洗干净后将种子晾干，室温保存；

[0038] 步骤4：当年12月下旬层积杂交种子：先将杂交种子放在25℃温水中充分吸水12h，另外准备保鲜盒，盒子底部放有充分吸水的滤纸，将杂交种子均匀不重叠地铺在滤纸上，然后将容器放于4℃冷藏，之后每10d检查一次，待75％的杂交种子露白后，播种到11cm深的林木专用穴盘，播种前对基质进行杀虫和杀菌处理；

[0039] 步骤5：当杂交苗幼苗长出4片真叶、根长10cm时，将穴盘中的杂交苗幼苗移栽到苗圃；移栽前在苗圃施用有机肥5.5m3/亩，尿素30kg/亩，然后深翻，平整土地，起垄打畦，畦宽80cm，一畦种4行，宽窄行栽植，每畦设置两个窄行，一个宽行，以利于后期接种、除萌等作业，宽行行距40cm，窄行行距20cm，株距17cm，畦间距50cm，移栽前杂交苗幼苗充分浇透水，移栽后苗圃用喷灌浇水，一个月后共计成活142株杂交苗，当年5月中旬至8月中旬追肥，每隔10d施肥1次，每次施尿素3kg/亩，追肥前除净杂草，杂交苗高度平均2.5m，地径平均
1.2cm；实生苗容易长枝刺，作业期间容易被划伤，另外也不利于将来接种作业，在8月份将主干上的分枝和枝刺都剪掉，9月下旬复剪一次；

[0040] 步骤6：8月下旬开始接种腐烂病菌，菌种选择已经筛选过的致病力强且分布广泛的菌株，配置PSA培养基，然后121℃高温高压灭菌25min后，在超净工作台上用无菌培养皿进行分装，然后将菌株接种在培养基上，25℃培养箱培养，4d后菌丝长满培养皿后用打孔器打成菌饼后备用，将滤纸剪成2cm×2cm的正方形，经过高压灭菌后备用，并准备保鲜膜，裁成5cm宽；对地径超过1cm的杂交苗进行接种，从杂交苗地面高度80cm开始，每隔15cm接种一个菌饼，即杂交苗主干高80cm、95cm、110cm、125cm和140cm处分别用打孔器打孔，孔深触及木质部，将菌饼背面放在用无菌水完全浸湿的三层滤纸上，然后将有菌丝的一面和杂交苗主干上的孔完全对应，用手按住滤纸固定，然后用保鲜膜从下至上将其完全缠住，以保持湿度；

[0041] 步骤7：接种3周后调查一次，对于能看到病斑已经延伸到保鲜膜外的单株，直接淘汰；接种4周后第二次调查，解开保鲜膜去掉滤纸，统计每个接种点是否发病和病斑的长度，计算每个单株的发病率，发病率＝发病的接种点/总接种点×100％；该杂交组合内发病率在70％以上的有2株，病斑长度在2cm以上的有43株，发病率在70％以上同时病斑长度在2cm以上的共计43株；该杂交组合内共计142株单株，按照淘汰发病率在70％以上同时病斑长度在2cm以上的单株的标准，共淘汰43株，占杂交组合的30％，相当于有99棵单株进入选育圃进行下一步筛选，至少节约成本30％；淘汰的杂交苗从根部剪除，然后收集起来集中焚烧；

[0042] 步骤8：来年春季在抗性单株最顶端的10cm内选择最饱满的芽，嫁接到已经定植的株行距0.5m×2m的杜梨砧木上。

[0043] 表1新高×新鸭梨杂交苗腐烂病抗性鉴定情况

[0044]发病率(％) 株数(株) 病斑长度(mm) 株数(株)
发病率＜10 30 病斑长度＜10 25
10≤发病率＜20 73 10≤病斑长度＜20 74
20≤发病率＜40 29 20≤病斑长度＜30 32
40≤发病率＜70 8 30≤病斑长度＜40 8
发病率≥70 2 病斑长度≥40 3

[0045] 实施例2

[0046] 一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法，包括以下步骤：

[0047] 步骤1：选择高感腐烂病的品种“新高”为母本，高抗腐烂病的品种“香水”为父本；

[0048] 步骤2：采集大气球期的花蕾，然后剥下花药，收集后22℃干燥，散粉后4℃密封暂时保存，在母本花蕾大气球期开始授粉，授粉后随即进行套袋隔离，授粉10d后去掉隔离；授粉3周后开始对果实套袋，套袋前1周内全株喷一次70％甲基托布津800倍液和5％阿维菌素4000倍液；并且在套袋的前一天用70％甲基托布津500倍液和1000倍毒死蜱浸湿袋口；套袋时先撑起袋口，托起袋底，令袋体膨起，套上果实后，将袋口绕果柄封好；当年5月施用壮果肥，每亩施尿素30kg、硫酸钾30kg和沼液水4000kg；

[0049] 步骤3：采收生理成熟的杂交果实，采果后运回室内让其散发田间热，然后去掉果袋；再在20℃预冷24h，然后在2℃的冷库储藏；储藏60d后，将杂交果实从冷库取出，横切杂交果实，用镊子将杂交种子从心室中取出，用种子袋收集，然后在25℃温水下搓洗，洗干净后将种子晾干，室温保存；

[0050] 步骤4：来年1月上旬层积杂交种子：先将杂交种子放在25℃温水中充分吸水12h，另外准备保鲜盒，盒子底部放有充分吸水的滤纸，将杂交种子均匀不重叠地铺在滤纸上，然后将容器放于0℃冷藏，之后每10d检查一次，待70％的杂交种子露白后，播种到11cm深的林木专用穴盘，播种前对基质进行杀虫和杀菌处理；

[0051] 步骤5：当杂交苗幼苗长出4片真叶、根长10cm时，将穴盘中的杂交苗幼苗移栽到苗圃；移栽前在苗圃施用有机肥4m3/亩，尿素30kg/亩，然后深翻，平整土地，起垄打畦，畦宽80cm，一畦种4行，宽窄行栽植，每畦设置两个窄行，一个宽行，以利于后期接种、除萌等作业，宽行行距40cm，窄行行距20cm，株距15cm，畦间距50cm，移栽前杂交苗幼苗充分浇透水，移栽后苗圃用喷灌浇水，一个月后共计成活896株杂交苗，当年5月中旬至8月中旬追肥，每隔10d施肥1次，每次施尿素2kg/亩，追肥前除净杂草，杂交苗高度平均3m，地径平均1.1cm；
实生苗容易长枝刺，作业期间容易被划伤，另外也不利于将来接种作业，在8月份将主干上的分枝和枝刺都剪掉，9月下旬复剪一次；

[0052] 步骤6：8月下旬开始接种腐烂病菌，菌种选择已经筛选过的致病力强且分布广泛的菌株，配置PSA培养基，然后121℃高温高压灭菌25min后，在超净工作台上用无菌培养皿进行分装，然后将菌株接种在培养基上，25℃培养箱培养，4d后菌丝长满培养皿后用打孔器打成菌饼后备用，将滤纸剪成2cm×2cm的正方形，经过高压灭菌后备用，并准备保鲜膜，裁成5cm宽；对地径超过1cm的杂交苗进行接种，从杂交苗地面高度80cm开始，每隔15cm接种一个菌饼，即杂交苗主干高80cm、95cm、110cm、125cm和140cm处分别用打孔器打孔，孔深触及木质部，将菌饼背面放在用无菌水完全浸湿的三层滤纸上，然后将有菌丝的一面和杂交苗主干上的孔完全对应，用手按住滤纸固定，然后用保鲜膜从下至上将其完全缠住，以保持湿度；

[0053] 步骤7：接种3周后调查一次，对于能看到病斑已经延伸到保鲜膜外的单株，直接淘汰；接种4周后第二次调查，解开保鲜膜去掉滤纸，统计每个接种点是否发病和病斑的长度，计算每个单株的发病率，发病率＝发病的接种点/总接种点×100％；杂交组合内发病率在40％以上的有400株，病斑长度在2cm以上的有297株，发病率在40％以上同时病斑长度在
2cm以上的单株共计453株；该杂交组合内共计896株单株，按照淘汰发病率在40％以上同时病斑长度在2cm以上的单株的标准，共淘汰453株，占杂交组合的51％，将有443株单株进行下一步筛选，443株对于梨树的育种来讲，可以满足后续育种需要；淘汰的杂交苗从根部剪除，然后收集起来集中焚烧；

[0054] 该杂交组合内发病率在70％以上的有89株，病斑长度在2cm以上的有297株，发病率在70％以上同时病斑长度在2cm以上的单株共计297株，如果按照淘汰发病率在70％以上同时病斑长度在2cm以上的单株的标准，将淘汰297株，占杂交组合的33％，将有599株单株进行下一步筛选。两种淘汰情况下，淘汰发病率在40％以上同时病斑长度在2cm以上的单株的方法，比淘汰发病率在70％以上同时病斑长度在2cm以上的单株的方法，多淘汰156株，仅这一个组合就可以节约用地1亩；

[0055] 步骤8：来年春季在抗性单株最顶端的10cm内选择最饱满的芽，嫁接到已经定植的株行距0.5m×2m的杜梨砧木上。

[0056] 表2新高×香水杂交苗腐烂病抗性鉴定情况

[0057]发病率(％) 株数(株) 病斑长度(mm) 株数(株)
发病率＜10 99 病斑长度＜10 241
10≤发病率＜20 163 10≤病斑长度＜20 358
20≤发病率＜40 234 20≤病斑长度＜30 145
40≤发病率＜70 311 30≤病斑长度＜40 100
发病率≥70 89 病斑长度≥40 52

[0058] 实施例3

[0059] 一种高效的梨树腐烂病抗性育种方法，包括以下步骤：

[0060] 步骤1：选择感腐烂病的品种“早红考密斯”为母本，高感腐烂病的品种“晚秀梨”为父本；

[0061] 步骤2：采集大气球期的花蕾，然后剥下花药，收集后24℃干燥，散粉后4℃密封暂时保存，在母本花蕾大气球期开始授粉，授粉后随即进行套袋隔离，授粉12d后去掉隔离；授粉3周后开始对果实套袋，套袋前1周内全株喷一次70％甲基托布津800倍液和5％阿维菌素4000倍液；并且在套袋的前一天用70％甲基托布津500倍液和1000倍毒死蜱浸湿袋口；套袋时先撑起袋口，托起袋底，令袋体膨起，套上果实后，将袋口绕果柄封好；当年5月施用壮果肥，每亩施尿素30kg、硫酸钾30kg和沼液水4000kg；

[0062] 步骤3：采收生理成熟的杂交果实，采果后运回室内让其散发田间热，然后去掉果袋；再在17℃预冷24h，然后在1℃的冷库储藏；储藏80d后，将杂交果实从冷库取出，横切杂交果实，用镊子将杂交种子从心室中取出，用种子袋收集，然后在25℃温水下搓洗，洗干净后将种子晾干，室温保存；

[0063] 步骤4：当年12月下旬层积杂交种子：先将杂交种子放在25℃温水中充分吸水12h，另外准备保鲜盒，盒子底部放有充分吸水的滤纸，将杂交种子均匀不重叠地铺在滤纸上，然后将容器放于2℃冷藏，之后每10d检查一次，待80％的杂交种子露白后，播种到11cm深的林木专用穴盘，播种前对基质进行杀虫和杀菌处理；

[0064] 步骤5：当杂交苗幼苗长出4片真叶、根长10cm时，将穴盘中的杂交苗幼苗移栽到苗圃；移栽前在苗圃施用有机肥7m3/亩，尿素30kg/亩，然后深翻，平整土地，起垄打畦，畦宽80cm，一畦种4行，宽窄行栽植，每畦设置两个窄行，一个宽行，以利于后期接种、除萌等作业，宽行行距40cm，窄行行距20cm，株距20cm，畦间距50cm，移栽前杂交苗幼苗充分浇透水，移栽后苗圃用喷灌浇水，一个月后共计成活137株杂交苗，当年5月中旬至8月中旬追肥，每隔10d施肥1次，每次施尿素4kg/亩，追肥前除净杂草，杂交苗高度平均2.8m，地径平均
1.15cm；实生苗容易长枝刺，作业期间容易被划伤，另外也不利于将来接种作业，在8月份将主干上的分枝和枝刺都剪掉，9月下旬复剪一次；

[0065] 步骤6：8月下旬开始接种腐烂病菌，菌种选择已经筛选过的致病力强且分布广泛的菌株，配置PSA培养基，然后121℃高温高压灭菌25min后，在超净工作台上用无菌培养皿进行分装，然后将菌株接种在培养基上，25℃培养箱培养，4d后菌丝长满培养皿后用打孔器打成菌饼后备用，将滤纸剪成2cm×2cm的正方形，经过高压灭菌后备用，并准备保鲜膜，裁成5cm宽；对地径超过1cm的杂交苗进行接种，从杂交苗地面高度80cm开始，每隔15cm接种一个菌饼，即杂交苗主干高80cm、95cm、110cm、125cm和140cm处分别用打孔器打孔，孔深触及木质部，将菌饼背面放在用无菌水完全浸湿的三层滤纸上，然后将有菌丝的一面和杂交苗主干上的孔完全对应，用手按住滤纸固定，然后用保鲜膜从下至上将其完全缠住，以保持湿度；

[0066] 步骤7：接种3周后调查一次，对于能看到病斑已经延伸到保鲜膜外的单株，直接淘汰；接种4周后第二次调查，解开保鲜膜去掉滤纸，统计每个接种点是否发病和病斑的长度，计算每个单株的发病率，发病率＝发病的接种点/总接种点×100％；该杂交组合内发病率在70％以上的有59株，病斑长度在2cm以上的有77株，发病率在70％以上同时病斑长度在2cm以上的共计82株；该杂交组合共计137株单株，按照淘汰发病率在70％以上同时病斑长度在2cm以上的单株的标准，共淘汰82株，占杂交组合的60％。淘汰的杂交苗从根部剪除，然后收集起来集中焚烧；因为该组合亲本都是感病品种，所以后代中单株的抗病性差，苗期直接淘汰60％，相当于仅有55棵单株进入选育圃进行下一步筛选。亲本品种的抗性对后代抗性植株的数量影响大，本实施例中双亲都不是抗性品种，杂交后代中抗病植株的比例少，这对进一步选育出抗病且果实品质高的品种来说，不利于开展育种工作；

[0067] 步骤8：来年春季在抗性单株最顶端的10cm内选择最饱满的芽，嫁接到已经定植的株行距0.5m×2m的杜梨砧木上。

[0068] 表3早红考密斯×晚秀梨杂交苗腐烂病抗性鉴定情况

[0069] 发病率(％) 株数(株) 病斑长度(mm) 株数(株)发病率＜10 24 病斑长度＜10 24
10≤发病率＜20 0 10≤病斑长度＜20 36
20≤发病率＜40 25 20≤病斑长度＜30 65
40≤发病率＜70 29 30≤病斑长度＜40 6
发病率≥70 59 病斑长度≥40 6

[0070] 以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，仅仅用以解释本发明，并非限制本发明实施范围，对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书中所公开的技术内容，通过置换或改变的方式轻易做出其它的实施方式，故凡在本发明的原理及工艺条件所做的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。

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