一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂及其制备方法
阅读：531发布：2023-12-22
专利汇可以提供一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开一种具有测温功能的纳米金锥光热 试剂 及其制备方法，涉及光热 治疗 技术领域。所述纳米金锥光热试剂包括纳米金锥、温敏性DNA茎环结构和德克萨斯红 荧光 分子；其中，所述纳米金锥和所述德克萨斯红荧光分子分别连接在DNA茎环结构的两端；所述纳米金锥光热试剂还包括有位于纳米金锥表面的辅助链，所述辅助链用于降低纳米金锥表面的DNA茎环结构的 密度 ；本发明还公开了如上所述的纳米金锥光热试剂的制备方法。该纳米金锥光热试剂在光热治疗领域具有很好的应用前景。，下面是一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂，其特征在于，所述纳米金锥光热试剂包括纳米金锥、温敏性DNA茎环结构和德克萨斯红荧光分子；其中，所述纳米金锥和所述德克萨斯红荧光分子分别连接在DNA茎环结构的两端；
所述纳米金锥光热试剂还包括有位于纳米金锥表面的辅助链，所述辅助链用于降低纳米金锥表面的DNA茎环结构的密度。
2.根据权利要求1所述的纳米金锥光热试剂，其特征在于，所述DNA茎环结构为一端修饰有巯基的SEQ ID No.1序列；所述辅助链为一端修饰有巯基的SEQ ID No.2序列。
3.根据权利要求1所述的纳米金锥光热试剂，其特征在于，所述纳米金锥的等离子共振峰的位置在800nm；所述纳米金锥在808nm激光器的照射下可将光能转化为热能。
4.根据权利要求1所述的纳米金锥光热试剂，其特征在于，所述纳米金锥的纵横比为2:
1～4:1。
5.一种如权利要求1-4任一所述的纳米金锥光热试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)合成具有特定等离子共振峰的纳米金锥；
(2)在纳米金锥表面修饰特定的DNA序列：以金与巯基的化学键合反应修饰上辅助链以及德克萨斯红荧光分子标记的温敏性DNA茎环结构。
6.根据权利要求5所述的纳米金锥光热试剂的制备方法，其特征在于，所述纳米金锥的等离子共振峰的位置在800nm；所述纳米金锥的纵横比为2:1～4:1。
7.根据权利要求5所述的纳米金锥光热试剂的制备方法，其特征在于，合成具有特定等离子共振峰的纳米金锥的步骤包括：
在9.625mL的去离子水中加入125μL 0.01M的氯金酸和250μL 0.01M的柠檬酸钠，搅拌，然后加入150μL 0.01M的硼氢化钠，搅拌，30℃水浴老化2小时，得到种子溶液；
在100mL 0.1M的十六烷基三甲基溴化铵中分别加入5mL 0.01M氯金酸、1mL 0.01M的硝酸银、2mL 1M的盐酸和0.8mL 0.01M的抗坏血酸，搅拌均匀，加入1～3mL所述种子溶液，搅拌均匀，20～30℃水浴8～12小时，离心收集沉淀；
将沉淀放入75mL 0.08M十六烷基三甲基氯化铵中，加入20～25mL 0.01M的硝酸银和6～7.5mL 0.01M的抗坏血酸，搅拌均匀后65℃加热4～6小时；将上清液取出，留下一层沉淀，用30mL去离子水溶解沉淀，加入1mL 25％的氨水和400～500μL 30％双氧水，3～5小时后取出上清液，透析，得到稳定的纳米金锥溶液。
8.根据权利要求5所述的纳米金锥光热试剂的制备方法，其特征在于，在纳米金锥表面修饰特定的DNA序列的步骤包括：
在10μL 100μM的TR-DNA和5μL 100μM的辅助链的混合液中加入15μL pH＝5.2的6mM三(2-羧乙基)膦的醋酸盐缓冲液孵育1小时，用于断裂DNA序列之间的二硫键，得到还原的DNA序列；
将还原的带有巯基的DNA序列加入到1mL纳米金锥中，搅拌10～12小时后，每隔半小时加入10μL 3M的氯化钠，继续搅拌12小时，离心洗涤，得到所述纳米金锥光热试剂。
9.根据权利要求5所述的纳米金锥光热试剂的制备方法，其特征在于，所述DNA茎环结构和辅助链的物质的量比为2:1。
一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂及其制备方法
技术领域
背景技术
[0002] 光热疗法是热疗的一种，通过进入癌细胞内部的纳米材料吸收光转变为热，加热癌细胞，进而杀死癌细胞。光热疗法已经成为一种被广泛关注的肿瘤治疗方式。从光热疗法的原理可以看出，光热疗的关键之一是控制癌细胞的加热温度。温度过低，不足以杀死癌细胞；而温度过高，会通过热传导方式伤及正常细胞，甚至破坏到正常细胞组织。发展可用于光热疗过程中无创伤性的、能够准确反映癌细胞温度分布的测温技术，对光热疗技术在治疗肿瘤方面的发展和应用具有重要意义。
[0003] 为此，人们将光热疗法与荧光测温技术相结合，将荧光探针、纳米金刚石、聚合物纳米颗粒等纳米荧光材料作为温度传感器与光热疗试剂一同注入到肿瘤组织中，根据荧光材料的荧光随温度灵敏变化的特性，实现光热疗过程中温度的测量。这种光热疗试剂与荧光温度传感器分离的技术路线给光热疗的试剂应用带来诸多不便，例如两种材料由于细胞通透性、兼容性等的差别，有可能在不同的细胞或组织区域富集，不但影响测温癌细胞真实温度的准确性，同时也会严重影响测温的空间分辨率。
[0004] 因此，本发明提供了一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂，在光热的同时能够原位测试光热试剂表面的温度，有望应用于光热治疗领域。
发明内容
[0005] 本发明的一个目的在于提供一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂。
[0006] 本发明的另一个目的在于提供一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂的制备方法。
[0007] 为达到上述第一个目的，本发明采用下述技术方案：
[0008] 一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂，所述纳米金锥光热试剂包括纳米金锥、温敏性DNA茎环结构和德克萨斯红荧光分子；其中，所述纳米金锥和所述德克萨斯红荧光分子分别连接在DNA茎环结构的两端；
[0009] 所述纳米金锥光热试剂还包括有位于纳米金锥表面的辅助链，所述辅助链用于降低纳米金锥表面的DNA茎环结构的密度。
[0011] 本发明提供的具有测温功能的纳米金锥光热试剂，利用温度升高，DNA序列中茎环结构解链改变荧光分子与纳米金锥的距离，调控它们之间的相互作用，利用荧光强度的变化实现对温度的检测。
[0012] 此外，优选的方案是，所述DNA茎环结构为一端修饰有巯基的SEQ ID No.1序列；SEQ ID No.1的具体序列为：ATCTAATCATTATTGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTACTATTATGTTTAGATTTTTTTTTTT，巯基可以修饰在SEQ ID No.1的任意一端，巯基的作用是：以金与巯基的化学键合反应在纳米金锥的表面修饰上DNA茎环结构。在本发明的其他可以实现的实施方式中，该DNA茎环结构的序列也可以用其他具有温敏响应的DNA序列。
[0013] 此外，优选的方案是，所述辅助链为一端修饰有巯基的SEQ ID No.2序列，所述SEQ ID No.2序列为TTTTTTTTTT。巯基可以修饰在SEQ ID No.2的任意一端，巯基的作用是：以金与巯基的化学键合反应在纳米金锥的表面修饰上辅助链。
[0014] 此外，优选的方案是，所述纳米金锥的等离子共振峰的位置在800nm；所述纳米金锥在808nm激光器的照射下可将光能转化为热能。光热性能是在808nm激光器的照射下用热电偶温度记录仪记录温度变化；测温性能是在荧光光谱仪上进行测试，激发波长为580nm，发射波长为610nm。
[0015] 此外，优选的方案是，所述纳米金锥的纵横比为2:1～4:1。
[0016] 为达到上述第一个目的，本发明采用下述技术方案：
[0017] 一种如上任一所述的纳米金锥光热试剂的制备方法，包括以下步骤：
[0018] (1)合成具有特定等离子共振峰的纳米金锥；
[0019] (2)在纳米金锥表面修饰特定的DNA序列：以金与巯基的化学键合反应修饰上辅助链以及德克萨斯红荧光分子标记的温敏性DNA茎环结构。
[0020] 此外，优选的方案是，所述纳米金锥的等离子共振峰的位置在800nm；所述纳米金锥的纵横比为2:1～4:1。
[0021] 此外，优选的方案是，合成具有特定等离子共振峰的纳米金锥的步骤包括：
[0022] 在9.625mL的去离子水中加入125μL 0.01M的氯金酸和250μL 0.01M的柠檬酸钠，搅拌，然后加入150μL 0.01M的硼氢化钠搅拌，30℃水浴老化2小时，得到种子溶液；
[0023] 在100mL 0.1M的十六烷基三甲基溴化铵中分别加入5mL 0.01M氯金酸、1mL 0.01M的硝酸银、2mL 1M的盐酸和0.8mL 0.01M的抗坏血酸，搅拌均匀，加入1～3mL所述种子溶液，搅拌均匀，20～30℃水浴8～12小时，离心收集沉淀；
[0024] 将沉淀放入75mL 0.08M十六烷基三甲基氯化铵中，加入20～25mL 0.01M的硝酸银和6～7.5mL 0.01M的抗坏血酸，搅拌均匀后65℃加热4～6小时；将上清液取出，留下一层沉淀，用30mL去离子水溶解沉淀，加入1mL 25％的氨水和400～500μL 30％双氧水，3～5小时后取出上清液，透析，得到稳定的纳米金锥溶液。
[0025] 此外，优选的方案是，在纳米金锥表面修饰特定的DNA序列的步骤包括：
[0026] 用德克萨斯红荧光分子标记DNA茎环结构序列，得到TR-DNA；
[0027] 在10μL 100μM的TR-DNA和5μL 100μM的辅助链的混合液中加入15μL pH＝5.2的6mM三(2-羧乙基)膦的醋酸盐缓冲液孵育1小时，用于断裂DNA序列之间的二硫键，得到还原的DNA序列；
[0028] 将还原的带有巯基的DNA序列加入到1mL纳米金锥中，搅拌12小时后，每隔半小时加入10μL 3M的氯化钠，继续搅拌12小时，离心洗涤，得到所述纳米金锥光热试剂。
[0029] 此外，优选的方案是，所述DNA茎环结构和辅助链的物质的量比为2:1。
[0030] 本发明的有益效果如下：
[0031] 本发明利用纳米金锥的高光热转化效率及荧光能量转移受体的特性，以及DNA茎环结构的热敏性提供了一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂及其制备方法，很好的解决了现有技术中光热疗过程中测温时存在的空间分辨率低等问题。其中纳米金锥的光热转化效率可达到71.1％，温度分辨率低于0.6℃。本发明提供的一种新型光热试剂，在光热疗的过程中能同时反馈温度，在光热治疗领域具有很好的应用前景。附图说明
[0032] 下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
[0033] 图1示出实施例1-3具有测温功能的纳米金锥光热试剂的结构以及工作原理示意图。
[0034] 图2示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂的透射电镜图。
[0035] 图3示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂的吸收光谱图，其中纳米金锥的等离子共振峰位于800nm。
[0036] 图4示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器照射下的光热效应。
[0037] 图5示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器照射下10分钟内温度由28℃上升到60℃的光热效应以及自然冷却15分钟的温度变化。
[0038] 图6示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂荧光强度随温度的变化。
[0040] 图8示出实施例4中具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器的照射下荧光强度随温度的变化。
[0041] 图9示出实施例4具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器的照射下，由热电偶温度记录仪记录的温度随时间的变化。
具体实施方式
[0042] 为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例和附图对本发明做进一步的说明。附图中相似的部件以相同的附图标记进行表示。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
[0043] 具体地，图1示出实施例1-3具有测温功能的纳米金锥光热试剂的结构以及工作原理示意图。图2示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂的透射电镜图。图3示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂的吸收光谱图，其中纳米金锥的等离子共振峰位于800nm。图4示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器照射下的光热效应，以水作为对比，可以看出纳米金锥在10分钟内温度由28℃上升到60℃，其中808nm的激光器的功率为1W·cm-2。图5示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂在
808nm激光器照射下10分钟内温度由28℃上升到60℃的光热效应以及自然冷却15分钟的温度变化，以此计算出光热转化效率为71.1％。图6示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂荧光强度随温度的变化，变化范围为20℃-50℃，间隔为5℃。图7示出实施例1-3中具有测温功能的纳米金锥光热试剂在二价铁、镁离子、钙离子存在时荧光强度随温度的变化，变化范围为20℃-50℃，间隔为5℃。图8示出实施例4中具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器的照射下荧光强度随温度的变化，变化范围为20℃-50℃，间隔为5℃，其中温度由热电偶温度记录仪记录。图9示出实施例4具有测温功能的纳米金锥光热试剂在
808nm激光器的照射下，由热电偶温度记录仪记录的温度随时间的变化。
808nm激光器照射下10分钟内温度由28℃上升到60℃的光热效应以及自然冷却15分钟的温度变化，以此计算出光热转化效率为71.1％。图6示出实施例1中具有测温功能的纳米金锥光热试剂荧光强度随温度的变化，变化范围为20℃-50℃，间隔为5℃。图7示出实施例1-3中具有测温功能的纳米金锥光热试剂在二价铁、镁离子、钙离子存在时荧光强度随温度的变化，变化范围为20℃-50℃，间隔为5℃。图8示出实施例4中具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器的照射下荧光强度随温度的变化，变化范围为20℃-50℃，间隔为5℃，其中温度由热电偶温度记录仪记录。图9示出实施例4具有测温功能的纳米金锥光热试剂在
808nm激光器的照射下，由热电偶温度记录仪记录的温度随时间的变化。
[0044] 下面是本发明中的优选实施方式。
[0045] 实施例1一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂
[0046] 一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂，其制备方法包括以下步骤：
[0047] 1)合成特定等离子共振峰的纳米金锥：
[0048] 首先是制备种子溶液，在9.625mL的去离子水中加入125μL氯金酸(0.01M)和250μL柠檬酸钠(0.01M)，搅拌10分钟后加入150μL硼氢化钠(0.01M)搅拌15分钟，最后在30℃的水浴中老化2小时得到种子溶液；
[0049] 在100mL十六烷基三甲基溴化铵(0.1M)中分别加入5mL氯金酸(0.01M)，1mL硝酸银(0.01M)，2mL盐酸(1M)和0.8mL抗坏血酸(0.01M)，搅拌均匀，最后加入1mL种子溶液，搅拌均匀后放入30℃的水浴中，10小时后，取出离心，收集沉淀；
[0050] 然后将沉淀放入75mL十六烷基三甲基氯化铵(0.08M)中，加入20mL硝酸银(0.01M)和6mL抗坏血酸(0.01M)，搅拌均匀后65℃加热4小时，此时溶液分层，将上清液取出，留下一层沉淀，用30mL去离子水重新溶解沉淀，然后加入1mL氨水(25％)和400μL双氧水(30％)，3小时后，取出粉紫色的上清液，透析，得到稳定的纳米金锥溶液。
[0051] 2)将德克萨斯红荧光分子标记的DNA茎环结构序列(TR-DNA)修饰到纳米金锥上：
[0052] 用德克萨斯红荧光分子标记DNA茎环结构序列，得到TR-DNA；
[0053] 在10μL TR-DNA(100μM)和5μL辅助链(100μM)的混合液中加入15μL三(2-羧乙基)膦的醋酸盐缓冲液(pH＝5.2，6mM)孵育1小时，用于断裂DNA序列之间的二硫键，得到还原的DNA序列；
[0054] 然后将还原好的带有巯基的还原的DNA序列加入到1mL纳米金锥中，搅拌12小时后，每隔半小时加入10μL氯化钠(3M)，用于增加纳米金锥上DNA的负载率，继续搅拌12小时，然后离心洗涤，得到具有测温功能的纳米金锥光热试剂。
[0055] 将纳米金锥光热试剂分散在1mL磷酸盐缓冲溶液中(0.01M)，加入10μL氯化亚铁溶液(5mM)。
[0056] 本实施例中，所述DNA茎环结构的序列如SEQ ID No.1所示；所述辅助链的序列如SEQ ID No.2所示，所述纳米金锥的纵横比的范围为2:1～4:1。
[0057] 将上述所制得的具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器的照射下用热电偶温度记录仪记录温度变化，在荧光光谱仪上进行光热性能和温敏性能测试，激发波长分别为580nm，发射波长分别为610nm，测试范围为20℃-50℃，温度间隔为5℃。结合图4，5，6可以看出，其荧光强度随温度的升高而增强，光热转化效率为71.1％。
[0058] 实施例2一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂
[0059] 一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂，其制备方法包括以下步骤：
[0060] 1)合成特定等离子共振峰的纳米金锥：
[0061] 首先是制备种子溶液，在9.625mL的去离子水中加入125μL氯金酸(0.01M)和250μL柠檬酸钠(0.01M)，搅拌10分钟后加入150μL硼氢化钠(0.01M)搅拌15分钟，最后在30℃的水浴中老化2小时得到种子溶液；
[0062] 在100mL十六烷基三甲基溴化铵(0.1M)中分别加入5mL氯金酸(0.01M)，1mL硝酸银(0.01M)，2mL盐酸(1M)和0.8mL抗坏血酸(0.01M)，搅拌均匀，最后加入2mL种子溶液，搅拌均匀后放入25℃的水浴中，10小时后，取出离心，收集沉淀。
[0063] 然后将沉淀放入75mL十六烷基三甲基氯化铵(0.08M)中，加入25mL硝酸银(0.01M)和7mL抗坏血酸(0.01M)，搅拌均匀后65℃加热5小时，此时溶液分层，将上清液取出，留下一层沉淀，用30mL去离子水重新溶解沉淀，然后加入1mL氨水(25％)和450μL双氧水(30％)，4小时后，取出粉紫色的上清液，透析，得到稳定的纳米金锥溶液。
[0064] 2)将德克萨斯红荧光分子标记的DNA茎环结构序列(TR-DNA)修饰到纳米金锥上：
[0065] 用德克萨斯红荧光分子标记DNA茎环结构序列，得到TR-DNA；
[0066] 在10μL TR-DNA(100μM)和5μL辅助链(100μM)的混合液中加入15μL三(2-羧乙基)膦的醋酸盐缓冲液(pH＝5.2，6mM)孵育1小时，用于断裂DNA序列之间的二硫键；
[0067] 然后将还原好的带有巯基的DNA序列加入到1mL纳米金锥中，搅拌12小时后，每隔半小时加入10μL氯化钠(3M)，用于增加纳米金锥上DNA的负载率，继续搅拌12小时，然后离心洗涤，得到具有测温功能的纳米金锥光热试剂。最后分散在1mL磷酸盐缓冲溶液中(0.01M)，加入10μL氯化镁溶液(5mM)。
[0068] 本实施例中，所述DNA茎环结构的序列如SEQ ID No.1所示；所述辅助链的序列如SEQ ID No.2所示，所述纳米金锥的纵横比的范围为2:1～4:1。
[0069] 将上述所制得的具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器的照射下用热电偶温度记录仪记录温度变化，在荧光光谱仪上进行光热性能和温敏性能测试，激发波长分别为580nm，发射波长分别为610nm，测试范围为20℃-50℃，温度间隔为5℃。图7可以看出，荧光强度随温度的升高而增强，且二价铁，镁离子，钙离子不干扰测温功能。
[0070] 实施例3一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂
[0071] 一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂，包括以下步骤：
[0072] 1)合成特定等离子共振峰的纳米金锥：
[0073] 首先是制备种子溶液，在9.625mL的去离子水中加入125μL氯金酸(0.01M)和250μL柠檬酸钠(0.01M)，搅拌10分钟后加入150μL硼氢化钠(0.01M)搅拌15分钟，最后在30℃的水浴中老化2小时得到种子溶液；
[0074] 在100mL十六烷基三甲基溴化铵(0.1M)中分别加入5mL氯金酸(0.01M)，1mL硝酸银(0.01M)，2mL盐酸(1M)和0.8mL抗坏血酸(0.01M)，搅拌均匀，最后加入3mL种子溶液，搅拌均匀后放入30℃的水浴中，8小时后，取出离心，收集沉淀。
[0075] 然后将沉淀放入75mL十六烷基三甲基氯化铵(0.08M)中，加入25mL硝酸银(0.01M)和7.5mL抗坏血酸(0.01M)，搅拌均匀后65℃加热5小时。此时溶液分层，将上清液取出，留下一层沉淀，用30mL去离子水重新溶解沉淀，然后加入1mL氨水(25％)和500μL双氧水(30％)。3小时后，取出粉紫色的上清液，透析，得到稳定的纳米金锥溶液。
[0076] 2)将德克萨斯红荧光分子标记的DNA序列(TR-DNA)修饰到纳米金锥上：
[0077] 用德克萨斯红荧光分子标记DNA茎环结构序列，得到TR-DNA；
[0078] 在10μL TR-DNA(100μM)和5μL(100μM)10T的混合液中加入15μL三(2-羧乙基)膦的醋酸盐缓冲液(pH＝5.2，6mM)孵育1小时，用于断裂DNA序列之间的二硫键。
[0079] 然后将还原好的带有巯基的DNA序列加入到1mL纳米金锥中，搅拌10小时后，每隔半小时加入10μL氯化钠(3M)，用于增加纳米金锥上DNA的负载率，继续搅拌12小时，然后离心洗涤。最后分散在1mL磷酸盐缓冲溶液中(pH＝7.4，0.01M)，加入10μL氯化钙溶液(5mM)。
[0080] 本实施例中，所述DNA茎环结构的序列如SEQ ID No.1所示；所述辅助链的序列如SEQ ID No.2所示，所述纳米金锥的纵横比的范围为2:1～4:1。
[0081] 将上述所制得的具有测温功能的纳米金锥光热试剂在808nm激光器的照射下用热电偶温度记录仪记录温度变化，在荧光光谱仪上进行光热性能和温敏性能测试，激发波长分别为580nm，发射波长分别为610nm，测试范围为20℃-50℃，温度间隔为5℃。结合图7可以看出，荧光强度随温度的升高而增强，且二价铁，镁离子，钙离子不干扰测温功能。
[0082] 实施例4一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂
[0083] 一种具有测温功能的纳米金锥光热试剂，其制备方法包括以下步骤：
[0084] 1)合成特定等离子共振峰的纳米金锥：
[0085] 首先是制备种子溶液，在9.625mL的去离子水中加入125μL氯金酸(0.01M)和250μL柠檬酸钠(0.01M)，搅拌10分钟后加入150μL硼氢化钠(0.01M)搅拌15分钟，最后在30℃的水浴中老化2小时得到种子溶液；
[0086] 在100mL十六烷基三甲基溴化铵(0.1M)中分别加入5mL氯金酸(0.01M)，1mL硝酸银(0.01M)，2mL盐酸(1M)和0.8mL抗坏血酸(0.01M)，搅拌均匀，最后加入2mL种子溶液，搅拌均匀后放入30℃的水浴中，10小时后，取出离心，收集沉淀。
[0087] 然后将沉淀放入75mL十六烷基三甲基氯化铵(0.08M)中，加入25mL硝酸银(0.01M)和7.5mL抗坏血酸(0.01M)，搅拌均匀后65℃加热5小时，此时溶液分层，将上清液取出，留下一层沉淀，用30mL去离子水重新溶解沉淀，然后加入1mL氨水(25％)和500μL双氧水(30％)。3小时后，取出粉紫色的上清液，透析，得到稳定的纳米金锥溶液。
[0088] 2)将德克萨斯红荧光分子标记的DNA序列(TR-DNA)修饰到纳米金锥上：
[0089] 用德克萨斯红荧光分子标记DNA茎环结构序列，得到TR-DNA；
[0090] 在10μL TR-DNA(100μM)和5μL(100μM)10T的混合液中加入15μL三(2-羧乙基)膦的醋酸盐缓冲液(pH＝5.2，6mM)孵育1小时，用于断裂DNA序列之间的二硫键；
[0091] 然后将还原好的带有巯基的DNA序列加入到1mL纳米金锥中，搅拌12小时后，每隔半小时加入10μL氯化钠(3M)，用于增加纳米金锥上DNA的负载率，继续搅拌12小时，然后离心洗涤，最后分散在1mL磷酸盐缓冲溶液中(0.01M)。
[0092] 本实施例中，所述DNA茎环结构的序列如SEQ ID No.1所示；所述辅助链的序列如SEQ ID No.2所示，所述纳米金锥的纵横比的范围为2:1～4:1。
[0093] 经测试上述所制得的具有测温功能的纳米金锥在808nm激光器的照射下具有高的光热转化效率。故将上述所制得的具有测温功能的纳米金锥光热试剂以808nm激光器的为热源在荧光光谱仪上进行温敏性能测试，激发波长分别为580nm，发射波长分别为610nm，荧光对温度的响应见图8。同时用热电偶温度记录仪记录溶液体系的温度变化，见图9。由此说明设计的具有测温功能的纳米金锥光热试剂可以在激光的照射下产生温度变化和信号响应。
[0094] 结合实施例1，2，3(图7)和4(图8，9)，可以看出，常见的三种二价金属离子对本发明的具有测温功能的纳米金锥并无干扰，且本发明可以实现在光热的同时能够原位测试光热试剂表面的温度，有望应用于光热治疗领域。
[0095] 显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定，对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无法对所有的实施方式予以穷举，凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
[0096]
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