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一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物及其培养方法

阅读:856发布:2024-02-27

专利汇可以提供一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物及其培养方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物及其培养方法,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠0.03-0.07%,玉米粉2-6%,黄豆粉0.3-0.9%, 酵母 粉0.1-0.5%,桑叶粉0.1-0.5%,K2HPO40.03-0.07%,MgSO40.03-0.07%,接种量1-5%,pH6-8;本发明提供一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物及其培养方法,促进虫草菌丝的生长发育,节省生产成本;另外,可以最大限度的保证虫草菌丝的 质量 、营养和药用价值,且保证虫草菌丝浸透并充分吸收维生素C钠和桑叶粉的药用成分。,下面是一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物及其培养方法专利的具体信息内容。

1.一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,其特征在于,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠0.03-0.07%,玉米粉2-6%,黄豆粉0.3-0.9%,酵母粉0.1-0.5%,桑叶粉0.1-
0.5%,K2HPO40.03-0.07%,MgSO40.03-0.07%,接种量1-5%,pH6-8。
2.如权利要求1所述的一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,其特征在于,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠0.07%,玉米粉2%,黄豆粉0.9%,酵母粉0.1%,桑叶粉
0.5%,K2HPO40.03%,MgSO40.07%,接种量1-5%,pH6-8。
3.如权利要求1所述的一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,其特征在于,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠0.03%,玉米粉6%,黄豆粉0.3%,酵母粉0.5%,桑叶粉
0.1%,K2HPO40.07%,MgSO40.03%,接种量1-5%,pH6-8。
4.如权利要求1所述的一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,其特征在于,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠0.05%,玉米粉4%,黄豆粉0.6%,酵母粉0.3%,桑叶粉
0.3%,K2HPO40.05%,MgSO40.05%,接种量1-5%,pH6-8。
5.一种如权利要求1至4所述的用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物的培养方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1) 育种:
选取高产、优质、早熟的虫草菌丝子实体,用0.1%升汞溶液,或75%的酒精进行表面消毒后,用无菌清洗表面药液,置于盛有综合培养基容器上方悬空,在21℃-23℃下静置培养,待培养基表面出现星芒状虫草菌落时,在接种箱内挑取单个或多个菌落置试管斜面培养基培养,待虫草菌丝菌丝布满斜面后再提纯,获得的孢子母种出草比较试验后,选取优质虫草子实体再进行一次组织分离,经筛选后用于转扩栽培种;
(2)考种:
将母种扩大培养后,置米饭培养基上,于18℃-20℃下培养20-30d,观察生长情况,纯化有细菌或霉菌污染的母种,继续栽培一个月后即有橙红色子实体产生,用于二级种子培养;
(3)二级种子培养:
将液体培养基分装于500ml三瓶中,每瓶加培养液200ml,用12层纱布外加一层皮纸封口;13-30分钟灭菌后,将母种在无菌条件下用接种钩接入三角瓶中,每支斜面可接10瓶以上;接种后于20℃摇床培养5d左右,待形成均匀小球后,镜检筛选出无污染的母种进行栽培;
(4)液体深层培养法栽培虫草菌丝菌种:
使用权利要求1至4的配比量和酸度环境,制作液体培养基,并进行接种;
(5)控制环境:
A.温度控制:
菌丝生长温度为17℃—23℃;子实体生长温度为19℃—24℃;原基分化时保持4℃—11℃温差;
B.水分和湿度控制:
菌丝生长阶段,培养基含水量保持在60%—65%, 空气相对湿度保持在60%—70%;子实体生长阶段,培养基含水量要达到65%—70%,空气相对湿度保持在80%—90%;
C.空气控制:
菌丝生长阶段保持不通状态;子实体发生期保持通风状态;
D.光照控制:
孢子萌发和菌丝生长阶段保持黑暗环境;生殖生长阶段保持散射光照射,光照度为
120—260勒;
E.酸碱度控制:
菌丝生长发育阶段保持pH为5.2—6.8;
F.维生素控制:
一周加入一次0.1mgVB1;
(6)成熟与采收:
子实体形成后,一周旋转一次培养瓶,保持培养瓶与光源的相对方向,以保证子实体的正常生长形态;子实体慢慢形成橘黄色或橘红色的顶部略膨大的呈棒状的子座,待子实体不再生长,其顶端出现许多小刺时,表明已成熟;采收时,用无菌镊子钳出子实体,然后再加少许营养液,重新包扎好瓶口,继续培养,20d左右,又可长出第二批子座;采收下的子实体晾干或低温烘干后,密封并置于低温干燥处贮存。

说明书全文

一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物及其培养方法

技术领域

[0001] 本发明属于食品、保健食品、药品领域,涉及一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物及其培养方法。

背景技术

[0002] 维生素C钠(即L-抗坏血酸钠)的作用与维生素C相同,但由于是钠盐,所以性能更稳定,同时不再有维生素C的强酸性,可以与多种药物同时服用,更优于维生素C;维生素C钠进入人体后以离子VC状态存在,更容易被人体吸收,参与人体的体内多种代谢过程,增强机体免疫,促进机体健康。
[0003] 另外,虫草菌丝为蛹虫草或者冬虫夏草菌丝体培养的菌种,其营养成分一般等于甚至高于野生的蛹虫草或冬虫夏草,由于冬虫夏草的人工繁殖极为困难,所以市面上常用蛹虫草的菌丝体培养菌种,使其成为虫草菌丝,并收割出售。
[0004] 蛹虫草为子囊菌亚,麦菌目,麦角菌科、虫草属的模式种。学名为Cordycepsmilitaris,又名北冬虫夏草、北虫草等,有部分地区亦称为虫草菌丝,世界性分布天然资源数量很少。由子座(即草部分)与菌核(即虫的尸体部分)两部分组成的复合体
冬季幼虫蛰居土里,菌类寄生其中,吸取营养,幼虫体内充满菌丝而死。到了夏季,自幼虫尸体之上生出幼苗,形似草,夏至前后采集而得。中医认为,虫草入肾二经,既能补肺阴,又能补肾阳,主治肾虚,阳痿遗精,腰膝酸痛,病后虚弱,久咳虚弱,劳咳痰血,自汗盗汗等,是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。虫草菌丝中含有大量的虫草素,虫草素的特殊医疗保健功能已经引起国内外专家的高度重视,已有不少以虫草素为主的保健品、保健食品、化妆品、药品投放市场。据报道,在美国已将虫草素作为抗癌抗病毒新药进入临床试用。在中国也已将由虫草素合成的治疗白血病的新药进入期临床试用。北冬虫夏草的保健功能成分不仅有虫草素,还有虫草多糖是国际医学公认的人体免疫增强剂。中医认为其起扶正固本作用,对老年性慢性支气管炎、肺原性心脏病有显着疗效,能提高肝脏解毒能力,起护肝作用,提高身体抗病毒和抗辐射能力。虫草酸即D-甘露醇是治疗心脑血管疾病的基本药物,具有清除自由基、扩张血管、降低血压的作用。核苷酸具有抑制血小板聚集、防止心脑血栓形成,消除黄褐斑、老年斑、青春痘,抗衰防皱,养颜美容等。人工培养的北冬虫夏草的纯子实体,作为食品用于人体,经研究是完全安全的,可广泛用于保健食品、保健膳食和其它滋补类食品。同时人工培育的北冬虫夏草子实体,色泽鲜艳、气味纯正、实用性强、商品价值高,适合多种不同的人群使用。北冬虫草子实体还可与一些中药配伍,对一些疾病有治疗作用。人工培育北冬虫夏草的过程中产生的培养基残基还可以酿制酱油的原料中添加5% 10%~
的培养基残基,所酿制的酱油口味纯正,营养丰富,具有浓郁的虫草香味
[0005] 桑叶,(Mulberry Leaf),学名:Folium Mori。中药名,是桑科植物桑的干燥叶,是蚕的日常食物,又名家桑、荆桑、桑椹树、黄桑叶等,我国南北各地广泛种植桑树,桑叶产量丰富。蚕的主要食物。完整叶片呈或宽卵形,叶片基部心脏形,顶端微尖,边缘有锯齿,叶脉密生白柔毛。老叶较厚暗绿色。嫩叶较薄,黄绿色。质脆易,握之扎手。气淡,味微苦涩。药用一般认为霜后采者质佳。桑叶有疏散热,清肺润燥,清肝明目的功效。且有治疗风热感冒,肺热燥咳,头晕头痛,目赤昏花的作用。到2014年,有人将桑叶的芽头做成了菜式,而使桑叶有了食疗的价值,因其桑叶的芽头营养价值丰富而被大众喜爱,称为桑芽菜。又以南浔辑里村,国丝文化园的桑树芽最为出众,考虑到穿珠湾灌溉,其桑叶芽的微量元素比一般桑芽的要高出很多。桑叶是桑科植物桑的干燥叶。初霜后采收,除去杂质,晒干而得,是一种发散风热药,既可内服,也可外敷。其性寒,味甘、苦,有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效,可治疗风热感冒,肺热燥咳,头晕头痛,目赤昏花的病症。现代中、西医把桑叶和桑叶生物制剂作为改善糖尿病及其他各种疑难杂症的药物而使用,认为其药效极为广泛。有清肺润燥、止咳、去热、化痰、治盗汗;补肝、清肝明目、治疗头晕眼花、失眠、消除眼部疲劳;消肿、清血‘治疗痢疾、腹痛、减肥、除脚气、利大、小肠;抗应激、凉血、降血压、降血脂、预防心肌梗塞、脑溢血、祛头痛、长发;降血糖、抗糖病等。
[0006] 抗凝血作用,桑叶提取物能明显延长小鼠体内全血凝固时间和显著延长家兔血浆的激活部分凝血活酶(APTI)时间,凝血酶原(PT)时间和凝血酶(TT)时间。由于凝血过程启动环节份外源性和内源性两个环节,APTI反映内源性凝血途径的活性,PT反映外源性凝血途径的活性,而TT反映的是两者共同途径即凝血酶活性,说明桑叶对凝血酶——纤维蛋白原反应有直接抑制作用。
[0007] 降血压作用,桑叶中的芸香苷、槲皮素、槲皮苷能增加离体及在位蛙心的收缩力与输出量,并减少心率。芸香苷使蟾蜍下肢及兔血管收缩,槲皮素可扩张冠状血管,改善心肌循环。γ-基丁酸、芸香苷、槲皮素有降血压的作用。γ-氨基丁酸是神经传达物质,能促进脑组织的新陈代谢和恢复脑细胞功能,同时,能改善脑部血液流动,增强血管紧张素转换酶Ⅰ的活性,促使血压下降。
[0008] 降血糖血脂、降胆固醇、抗血栓形成和抗动脉粥样硬化作用,桑叶有抑制脂肪肝的形成、降低血清脂肪和抑制动脉粥样硬化形成的作用。活性成分包括DNJ、植物甾醇、黄类等。桑叶中含有强化毛细血管、降低血液黏度的黄酮类成分,另外桑叶茶内含有抗体内LDL-脂蛋白化的成分,所以桑叶在减肥、改善高脂血症的同时,又有预防心肌梗死和脑溢血的作用。日本专家土井佳代证实,桑叶提取物对高脂血症血清脂质升高及动脉粥样硬化有抑制作用。桑叶茶可使高脂血症大鼠血清高密度脂蛋白(HDL-C)、HDL-C/TC明显升高(p<0.05),总胆固醇(TC)、LDL-C、三酰甘油(TG)明显降低(p<0.05),过氧化脂质(LPO)显著降低(p<0.001),说明桑叶茶可降低血脂血糖、软化血管、清除体内过氧化物,从而对高脂血症血清脂质升高及动脉粥样硬化有抑制作用(黄代青等,1995)。
[0009] 抑菌、抗炎作用,桑叶汁对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌以及部分酵母菌有良好的抑制生长作用(樊黎生,2001)。而且所需的抑菌浓度低、pH值范围为宽(4 9)、热稳~定性强。桑中的芸香苷能显著抑制大鼠创伤性浮肿,并能阻止结膜炎、耳郭炎、肺水肿的发展。桑叶具有较强的抗炎作用,与祛风、清热功效相符(陈福君等,1995)。
[0010] 抗病毒、抗肿瘤作用,桑叶能预防癌细胞生成,提高人体免疫力,主要功能成分是DNJ、类黄酮、桑素、γ-氨基丁酸及维生素,能抑制染色体突变和基因突变。DNJ有显著的抗逆转录酶病毒活性(Tierney,1995)。其IG30为1.2 2.5 μg/mL,且随DNJ剂量的增加,抑制力~增强(欧阳臻,2003)。DNJ对肿瘤转移的抑制率是80.5%,其抑制机理可能是DNI通过抑制糖苷酶的活性在肿瘤细胞表面产生未成熟的水化合物链,削弱了肿瘤的转移能力。朝鲜学者Kim(2000)发现桑叶中分离纯化的两种类黄酮槲皮素-3-β-D吡喃葡萄糖苷和槲皮素-3-
7-二氧-β-D-吡喃葡萄糖苷对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的生长表现出显著的抑制效应。
桑叶中的桑素具有抗癌活性,桑叶中的维生素具有抑制变异原效应。
[0011] 抗衰老、抗疲劳作用,浙江大学临床药理研究所通过4年的实验,证实桑叶具有类似于人参的补益和抗衰老作用。人参属于热补,而桑叶属于清补,无忌限,无论老幼均可使用,且四季皆宜。
[0012] 另外,桑叶中所含的槲皮素、酚类化合物、维生素C等成分能通过抑制或清除自由基来防止氧化损伤。桑叶具有类似人参的补益与抗衰老、稳定神经系统功能的作用,能缓解生理变化引起的情绪激动,提高体内超氧化物歧化酶的活性,阻止体内有害物质的产生,减少或消除已经产生并积滞于体内的脂褐质(黄东等,2000)。桑叶能提高小鼠对高温刺激的耐受能力和防止由于应激刺激引起的肾上腺皮质分布功能低下,而当肾上腺功能低下时,桑叶可使之恢复正常。桑叶能延长小鼠游泳及转棒时间,具有增强机体耐力作用,能延长果蝇的寿命。能有效地清除生物氧化产生的超氧阴离子,具有延缓衰老的作用(唐法娣等,2000)。
[0013] 抗丝虫病作用,单味桑叶注射液有抗丝虫病的作用,桑叶片可用于治疗丝虫性象皮肿和乳糜尿(姚连初,1996;王培义,1999),其作用机制可能是桑叶所含芸香苷、槲皮素、异槲皮素、香豆素、氯原酸等成分抗炎、消肿、软化组织及抗菌等作用的综合结果。
[0014] 解痉、抗溃疡作用,桑叶中的槲皮素能降低肠、支气管平滑肌的张力,其解痉作用强于芸香苷,芸香苷能降低大鼠的胃运动功能,并能解除氯化钡引起的小肠平滑肌痉挛,皮下注射芸香苷5 10 mg/kg能显著降低大鼠因结扎幽门引起胃溃疡的病灶数(徐爱良等,~2005)。
[0015] 本发明开发的是同时具有维生素C钠、桑叶、虫草菌丝功能效果的药物,以使得虫草菌丝的保健和药用效果更为理想。

发明内容

[0016] 针对背景技术所面临的问题,本发明的目的在于提供一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物及其培养方法,以使得虫草菌丝同时具有维生素C钠、桑叶、虫草菌丝疗效和功能。
[0017] 为了达到上述目的,本发明采用如下技术方案:一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,其特征在于,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠0.03-0.07%,玉米粉2-6%,黄豆粉0.3-0.9%,酵母粉0.1-0.5%,桑叶粉0.1-0.5%,K2HPO40.03-0.07%,MgSO40.03-0.07%,接种量1-5%,pH6-8。
[0018] 进一步,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠0.07%,玉米粉2%,黄豆粉0.9%,酵母粉0.1%,桑叶粉0.5%,K2HPO40.03%,MgSO40.07%,接种量1-5%,pH6-8。
[0019] 进一步,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠0.03%,玉米粉6%,黄豆粉0.3%,酵母粉0.5%,桑叶粉0.1%,K2HPO40.07%,MgSO40.03%,接种量1-5%,pH6-8。
[0020] 进一步,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠0.05%,玉米粉4%,黄豆粉0.6%,酵母粉0.3%,桑叶粉0.3%,K2HPO40.05%,MgSO40.05%,接种量1-5%,pH6-8。
[0021] 本发明的另一目的在于提供一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物的培养方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)育种:
选取高产、优质、早熟的虫草菌丝子实体,用0.1%升汞溶液,或75%的酒精进行表面消毒后,用无菌水清洗表面药液,置于盛有综合培养基容器上方悬空,在21℃-23℃下静置培养,待培养基表面出现星芒状虫草菌落时,在接种箱内挑取单个或多个菌落置试管斜面培养基培养,待虫草菌丝菌丝布满斜面后再提纯,获得的孢子母种出草比较试验后,选取优质虫草子实体再进行一次组织分离,经筛选后用于转扩栽培种;
(2)考种:
将母种扩大培养后,置米饭培养基上,于18℃-20℃下培养20-30d,观察生长情况,纯化有细菌或霉菌污染的母种,继续栽培一个月后即有橙红色子实体产生,用于二级种子培养;
(3)二级种子培养:
将液体培养基分装于500ml三角瓶中,每瓶加培养液200ml,用12层纱布外加一层皮纸封口;13-30分钟灭菌后,将母种在无菌条件下用接种钩接入三角瓶中,每支斜面可接10瓶以上;接种后于20℃摇床培养5d左右,待形成均匀小球后,镜检筛选出无污染的母种进行栽培;
(4)液体深层培养法栽培虫草菌丝菌种:
使用本发明的一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,且按照配比量制作液体培养基,并进行接种。
[0022] (5)控制环境:A.温度控制:
菌丝生长温度为17℃—23℃;子实体生长温度为19℃—24℃;原基分化时保持4℃—11℃温差;
B.水分和湿度控制:
菌丝生长阶段,培养基含水量保持在60%—65%, 空气相对湿度保持在60%—70%;子实体生长阶段,培养基含水量要达到65%—70%,空气相对湿度保持在80%—90%;
C.空气控制:
菌丝生长阶段保持不通风状态;子实体发生期保持通风状态;
D.光照控制:
孢子萌发和菌丝生长阶段保持黑暗环境;生殖生长阶段保持散射光照射,光照度为
120—260勒。
[0023] E.酸度控制:菌丝生长发育阶段保持pH为5.2—6.8;
F.维生素控制:
一周加入一次0.1mgVB1;
(6)成熟与采收:
子实体形成后,一周旋转一次培养瓶,保持培养瓶与光源的相对方向,以保证子实体的正常生长形态;子实体慢慢形成橘黄色或橘红色的顶部略膨大的呈棒状的子座,待子实体不再生长,其顶端出现许多小刺时,表明已成熟;采收时,用无菌镊子钳出子实体,然后再加少许营养液,重新包扎好瓶口,继续培养,20d左右,又可长出第二批子座;采收下的子实体晾干或低温烘干后,密封并置于低温干燥处贮存。
[0024] 与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:(1)本发明开发的是同时具有维生素C钠、桑叶、虫草菌丝功能效果的药物,以使得虫草菌丝的保健和药用效果更为理想,克服现有的虫草菌丝功能药效的局限,可以最大限度的保证虫草菌丝的质量、营养和药用价值,且保证虫草菌丝浸透并充分吸收(注:此处吸收为长久浸泡,物理吸收)维生素C钠和桑叶粉的药用成分。(2)维生素C钠能克服维生素C强酸性带来不良反应和局限性;同时,也可由于维生素C钠稳定性高于维生素C,提高了疗效。(3)桑叶和维生素C钠本身有助于培养基营养成分的均衡,有助于虫草菌丝顺利快速生长和繁殖。

具体实施方式

[0025] 为了更好的理解本发明的目的、特征以及功效等,下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
[0026] 实施例1一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠
0.03-0.07%,玉米粉2-6%,黄豆粉0.3-0.9%,酵母粉0.1-0.5%,桑叶粉0.1-0.5%,K2HPO40.03-0.07%,MgSO40.03-0.07%,接种量1-5%,pH6-8。
[0027] 本发明的另一目的在于提供一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物的培养方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)育种:
选取高产、优质、早熟的虫草菌丝子实体,用0.1%升汞溶液,或75%的酒精进行表面消毒后,用无菌水清洗表面药液,置于盛有综合培养基容器上方悬空,在21℃-23℃下静置培养,待培养基表面出现星芒状虫草菌落时,在接种箱内挑取单个或多个菌落置试管斜面培养基培养,待虫草菌丝菌丝布满斜面后再提纯,获得的孢子母种出草比较试验后,选取优质虫草子实体再进行一次组织分离,经筛选后用于转扩栽培种;
(2)考种:
将母种扩大培养后,置米饭培养基上,于18℃-20℃下培养20-30d,观察生长情况,纯化有细菌或霉菌污染的母种,继续栽培一个月后即有橙红色子实体产生,用于二级种子培养;
(3)二级种子培养:
将液体培养基分装于500ml三角瓶中,每瓶加培养液200ml,用12层纱布外加一层牛皮纸封口;13-30分钟灭菌后,将母种在无菌条件下用接种钩接入三角瓶中,每支斜面可接10瓶以上;接种后于20℃摇床培养5d左右,待形成均匀小球后,镜检筛选出无污染的母种进行栽培;
(4)液体深层培养法栽培虫草菌丝菌种:
使用本发明的一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,且按照配比量制作液体培养基,并进行接种。
[0028] (5)控制环境:A.温度控制
菌丝生长温度为17℃—23℃;子实体生长温度为19℃—24℃;原基分化时保持4℃—11℃温差;
B.水分和湿度控制:
菌丝生长阶段,培养基含水量保持在60%—65%, 空气相对湿度保持在60%—70%;子实体生长阶段,培养基含水量要达到65%—70%,空气相对湿度保持在80%—90%;
C.空气控制:
菌丝生长阶段保持不通风状态;子实体发生期保持通风状态;
D.光照控制:
孢子萌发和菌丝生长阶段保持黑暗环境;生殖生长阶段保持散射光照射,光照度为
120—260勒。
[0029] E.酸碱度控制:菌丝生长发育阶段保持pH为5.2—6.8;
F.维生素控制:
一周加入一次0.1mgVB1;
(6)成熟与采收:
子实体形成后,一周旋转一次培养瓶,保持培养瓶与光源的相对方向,以保证子实体的正常生长形态;子实体慢慢形成橘黄色或橘红色的顶部略膨大的呈棒状的子座,待子实体不再生长,其顶端出现许多小刺时,表明已成熟;采收时,用无菌镊子钳出子实体,然后再加少许营养液,重新包扎好瓶口,继续培养,20d左右,又可长出第二批子座;采收下的子实体晾干或低温烘干后,密封并置于低温干燥处贮存。
[0030] 实施例2一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠
0.07%,玉米粉2%,黄豆粉0.9%,酵母粉0.1%,桑叶粉0.5%,K2HPO40.03%,MgSO40.07%,接种量
1-5%,pH6-8。
[0031] 本发明的另一目的在于提供一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物的培养方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)育种:
选取高产、优质、早熟的虫草菌丝子实体,用0.1%升汞溶液,或75%的酒精进行表面消毒后,用无菌水清洗表面药液,置于盛有综合培养基容器上方悬空,在21℃-23℃下静置培养,待培养基表面出现星芒状虫草菌落时,在接种箱内挑取单个或多个菌落置试管斜面培养基培养,待虫草菌丝菌丝布满斜面后再提纯,获得的孢子母种出草比较试验后,选取优质虫草子实体再进行一次组织分离,经筛选后用于转扩栽培种;
(2)考种:
将母种扩大培养后,置米饭培养基上,于18℃-20℃下培养20-30d,观察生长情况,纯化有细菌或霉菌污染的母种,继续栽培一个月后即有橙红色子实体产生,用于二级种子培养;
(3)二级种子培养:
将液体培养基分装于500ml三角瓶中,每瓶加培养液200ml,用12层纱布外加一层牛皮纸封口;13-30分钟灭菌后,将母种在无菌条件下用接种钩接入三角瓶中,每支斜面可接10瓶以上;接种后于20℃摇床培养5d左右,待形成均匀小球后,镜检筛选出无污染的母种进行栽培;
(4)液体深层培养法栽培虫草菌丝菌种:
使用本发明的一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,且按照配比量制作液体培养基,并进行接种。
[0032] (5)控制环境:A.温度控制:
菌丝生长温度为17℃—23℃;子实体生长温度为19℃—24℃;原基分化时保持4℃—11℃温差;
B.水分和湿度控制:
菌丝生长阶段,培养基含水量保持在60%—65%, 空气相对湿度保持在60%—70%;子实体生长阶段,培养基含水量要达到65%—70%,空气相对湿度保持在80%—90%;
C.空气控制:
菌丝生长阶段保持不通风状态;子实体发生期保持通风状态;
D.光照控制:
孢子萌发和菌丝生长阶段保持黑暗环境;生殖生长阶段保持散射光照射,光照度为
120—260勒。
[0033] E.酸碱度控制:菌丝生长发育阶段保持pH为5.2—6.8;
F.维生素控制:
一周加入一次0.1mgVB1;
(6)成熟与采收:
子实体形成后,一周旋转一次培养瓶,保持培养瓶与光源的相对方向,以保证子实体的正常生长形态;子实体慢慢形成橘黄色或橘红色的顶部略膨大的呈棒状的子座,待子实体不再生长,其顶端出现许多小刺时,表明已成熟;采收时,用无菌镊子钳出子实体,然后再加少许营养液,重新包扎好瓶口,继续培养,20d左右,又可长出第二批子座;采收下的子实体晾干或低温烘干后,密封并置于低温干燥处贮存。
[0034] 实施例3一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠
0.03%,玉米粉6%,黄豆粉0.3%,酵母粉0.5%,桑叶粉0.1%,K2HPO40.07%,MgSO40.03%,接种量
1-5%,pH6-8。
[0035] 本发明的另一目的在于提供一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物的培养方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)育种:
选取高产、优质、早熟的虫草菌丝子实体,用0.1%升汞溶液,或75%的酒精进行表面消毒后,用无菌水清洗表面药液,置于盛有综合培养基容器上方悬空,在21℃-23℃下静置培养,待培养基表面出现星芒状虫草菌落时,在接种箱内挑取单个或多个菌落置试管斜面培养基培养,待虫草菌丝菌丝布满斜面后再提纯,获得的孢子母种出草比较试验后,选取优质虫草子实体再进行一次组织分离,经筛选后用于转扩栽培种;
(2)考种:
将母种扩大培养后,置米饭培养基上,于18℃-20℃下培养20-30d,观察生长情况,纯化有细菌或霉菌污染的母种,继续栽培一个月后即有橙红色子实体产生,用于二级种子培养;
(3)二级种子培养:
将液体培养基分装于500ml三角瓶中,每瓶加培养液200ml,用12层纱布外加一层牛皮纸封口;13-30分钟灭菌后,将母种在无菌条件下用接种钩接入三角瓶中,每支斜面可接10瓶以上;接种后于20℃摇床培养5d左右,待形成均匀小球后,镜检筛选出无污染的母种进行栽培;
(4)液体深层培养法栽培虫草菌丝菌种:
使用本发明的一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,且按照配比量制作液体培养基,并进行接种。
[0036] (5)控制环境:A.温度控制:
菌丝生长温度为17℃—23℃;子实体生长温度为19℃—24℃;原基分化时保持4℃—11℃温差;
B.水分和湿度控制:
菌丝生长阶段,培养基含水量保持在60%—65%, 空气相对湿度保持在60%—70%;子实体生长阶段,培养基含水量要达到65%—70%,空气相对湿度保持在80%—90%;
C.空气控制:
菌丝生长阶段保持不通风状态;子实体发生期保持通风状态;
D.光照控制:
孢子萌发和菌丝生长阶段保持黑暗环境;生殖生长阶段保持散射光照射,光照度为
120—260勒。
[0037] E.酸碱度控制:菌丝生长发育阶段保持pH为5.2—6.8;
F.维生素控制:
一周加入一次0.1mgVB1;
(6)成熟与采收:
子实体形成后,一周旋转一次培养瓶,保持培养瓶与光源的相对方向,以保证子实体的正常生长形态;子实体慢慢形成橘黄色或橘红色的顶部略膨大的呈棒状的子座,待子实体不再生长,其顶端出现许多小刺时,表明已成熟;采收时,用无菌镊子钳出子实体,然后再加少许营养液,重新包扎好瓶口,继续培养,20d左右,又可长出第二批子座;采收下的子实体晾干或低温烘干后,密封并置于低温干燥处贮存。
[0038] 实施例4一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,由以下重量配比的原料组成:维生素C钠
0.05%,玉米粉4%,黄豆粉0.6%,酵母粉0.3%,桑叶粉0.3%,K2HPO40.05%,MgSO40.05%,接种量
1-5%,pH6-8。
[0039] 本发明的另一目的在于提供一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物的培养方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)育种:
选取高产、优质、早熟的虫草菌丝子实体,用0.1%升汞溶液,或75%的酒精进行表面消毒后,用无菌水清洗表面药液,置于盛有综合培养基容器上方悬空,在21℃-23℃下静置培养,待培养基表面出现星芒状虫草菌落时,在接种箱内挑取单个或多个菌落置试管斜面培养基培养,待虫草菌丝菌丝布满斜面后再提纯,获得的孢子母种出草比较试验后,选取优质虫草子实体再进行一次组织分离,经筛选后用于转扩栽培种;
(2)考种:
将母种扩大培养后,置米饭培养基上,于18℃-20℃下培养20-30d,观察生长情况,纯化有细菌或霉菌污染的母种,继续栽培一个月后即有橙红色子实体产生,用于二级种子培养;
(3)二级种子培养:
将液体培养基分装于500ml三角瓶中,每瓶加培养液200ml,用12层纱布外加一层牛皮纸封口;13-30分钟灭菌后,将母种在无菌条件下用接种钩接入三角瓶中,每支斜面可接10瓶以上;接种后于20℃摇床培养5d左右,待形成均匀小球后,镜检筛选出无污染的母种进行栽培;
(4)液体深层培养法栽培虫草菌丝菌种:
使用本发明的一种用离子维C桑叶培养虫草菌丝的组合物,且按照配比量制作液体培养基,并进行接种。
[0040] (5)控制环境:A.温度控制:
菌丝生长温度为17℃—23℃;子实体生长温度为19℃—24℃;原基分化时保持4℃—11℃温差;
B.水分和湿度控制:
菌丝生长阶段,培养基含水量保持在60%—65%, 空气相对湿度保持在60%—70%;子实体生长阶段,培养基含水量要达到65%—70%,空气相对湿度保持在80%—90%;
C.空气控制:
菌丝生长阶段保持不通风状态;子实体发生期保持通风状态;
D.光照控制:
孢子萌发和菌丝生长阶段保持黑暗环境;生殖生长阶段保持散射光照射,光照度为
120—260勒。
[0041] E.酸碱度控制:菌丝生长发育阶段保持pH为5.2—6.8;
F.维生素控制:
一周加入一次0.1mgVB1;
(6)成熟与采收:
子实体形成后,一周旋转一次培养瓶,保持培养瓶与光源的相对方向,以保证子实体的正常生长形态;子实体慢慢形成橘黄色或橘红色的顶部略膨大的呈棒状的子座,待子实体不再生长,其顶端出现许多小刺时,表明已成熟;采收时,用无菌镊子钳出子实体,然后再加少许营养液,重新包扎好瓶口,继续培养,20d左右,又可长出第二批子座;采收下的子实体晾干或低温烘干后,密封并置于低温干燥处贮存。
[0042] 以上详细说明仅为本发明之较佳实施例的说明,非因此局限本发明的专利范围,所以,凡运用本创作说明书内容所为的等效技术变化,均包含于本发明的专利范围。
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