一种含有海洋芽孢杆菌的杀菌组合物及其应用
阅读：558发布：2020-05-17
专利汇可以提供一种含有海洋芽孢杆菌的杀菌组合物及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种含有海洋芽孢杆菌的杀菌组合物及其应用，含有活性组分A和活性组分B的杀菌组合物，活性组分A选自海洋芽孢杆菌B‑9987，活性组分B选自以下任意一种 杀菌剂 ：嘧菌环胺、咯菌酯、乙霉威，且A、B两种活性组分的重量比为1～80∶1～80。该杀菌组合物可应用于防治果树，蔬菜， 禾谷类作物 的多种细菌、 真菌 性病害，具有明显的协同增效作用，延缓了病原菌的抗药性，持效期长，减少用药次数和用药量，降低了使用成本。本发明所述的杀菌组合物可用于防治番茄、葡萄、黄瓜灰霉病等病害，效果显著。，下面是一种含有海洋芽孢杆菌的杀菌组合物及其应用专利的具体信息内容。
1.一种含有海洋芽孢杆菌海洋芽孢杆菌的杀菌组合物，其特征在于，包括有效量的活性组分A和活性组分B，其余为农药制剂中允许添加的辅助成分，其中，活性组分A选自海洋芽孢杆菌B-9987，活性组分B选自嘧菌环胺、咯菌酯、乙霉威中的任意一种。
2.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物中活性组分A和活性组分B的重量和占总重量的百分比为2％～80％。
3.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物中活性组分A与活性组分B之间的重量比为1～80∶1～80。
4.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物中活性组分A与活性组分B之间的重量比为1～70∶1～60。
5.根据权利要求1中所述的含有海洋芽孢杆菌的杀菌组合物应用于作物的防治，其特征在于，所述杀菌组合物应用于番茄、葡萄、黄瓜等作物的灰霉病的防治。
6.根据权利要求5所述的杀菌组合物的应用，其特征在于，其使用剂量为100-150g a.i./hm2。
一种含有海洋芽孢杆菌的杀菌组合物及其应用
技术领域
[0001] 本发明涉及农业病害防治领域，具体涉及一种含有海洋芽孢杆菌的杀菌组合物及其应用。
背景技术
[0002] 海洋芽孢杆菌(Bacillus marinus)是一类兼性厌氧、产芽孢的革兰氏阳性杆状细菌，属于类芽孢杆菌属。目前无任何研究表明海洋芽孢杆菌可以引起人、动物或植物致病，即该菌对人畜是安全的，可用于开发微生物农药。
[0003] 华东理工大学和上海泽元海洋生物技术有限公司获得的海洋芽孢杆菌B-9987菌株来自渤海潮间带植物-盐地碱蓬根部，对灰霉病等多种病原真菌和青枯病等病原细菌都具有良好的抑制作用。海洋芽孢杆菌B-9987菌株由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)鉴定并保藏，保藏号为CGMCCNo.2095，拉丁学名为Bacillus marinusB-9987(本文简称B-9987)(罗远婵等，海洋细菌B-9987的鉴定及其对植物病原菌的抑菌试验，《农药》，第47卷第9期，2008年9月，第691-693页〕。
[0004] 海洋芽孢杆菌B-9987还具有许多优良性能。如生长速度快，适应环境能力强，能在植物根际土壤、植物各器官中良好定殖；诱导植物产生抗病性；产生多种抑制真菌、细菌的活性物质。以B-9987为生防菌创制的微生物农药对植物灰霉病有良好防效，此外对根腐病等多种真菌性病害及青枯病等多种细菌性病害也有很好的防效。此外，B-9987还可以明显促进香蕉、苹果等农作物的生长。
[0005] 嘧菌环胺(Cyprodinil)，为嘧啶胺类杀菌剂，其化学名称为4-环丙基-6-甲基-N-苯基嘧啶-2-胺，是蛋氨酸生物合成抑制剂，同三唑类、咪唑类、吗啉类、苯基吡咯类等无交互抗性，具有保护、治疗、叶片穿透及根部内吸活性作用，可于叶面喷雾或种子润湿处理，也可作大麦种衣剂用药。嘧菌环胺适用于小麦、大麦、葡萄、草莓、果树、蔬菜、观赏植物等，主要用于防治灰霉病、白粉病、黑星病、盈枯病以及小麦眼纹病等。
[0006] 咯菌酯(Fludioxonil)，化学名称为：4-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧-4-基)吡咯-3-腈；4-(2，2-二氟-1，3-苯并二氧戊环-4-基)吡咯-3-腈，为新颖广谱、非内吸吡咯类杀菌剂，通过抑制葡萄糖磷酰化的有关转移，并抑制真菌菌丝体的生长，从而最终导致病原菌死亡，于小麦、大麦、玉米、豌豆、油菜、水稻、蔬菜、葡萄、草坪、观赏作物叶面处理，对于防治雪腐镰孢菌、小麦网腥黑腐菌、立枯病菌等，对灰霉病有特效；对谷物和非谷物种子处理，可防治如链格孢属、壳二孢属、曲霉属、镰孢菌属、长蠕孢属、丝核菌属及青霉属菌之类的种传和土传病菌。
[0007] 乙霉威(Diethofencarb)，化学名称为：3，4-二乙氧苯基氨基甲酸异丙酯，是一种与多菌灵有副交互抗性的杀菌剂。乙霉威进入菌体细胞后会与菌体细胞内的微管蛋白结合，从而影响细胞的分裂。这种作用方式与多菌灵很相似，但二者不在同一作用点。如灰霉菌一旦对多菌灵产生抗药性，而对乙霉威很敏感。相反，对多菌灵敏感的灰霉菌，乙霉威则表现为无抑菌活性。
[0008] 灰霉病是露地、保护地作物常见且比较难防治的一种真菌性病害，属低温高湿型病害，病原菌生长温度为20～30℃，温度20～25℃、湿度持续90％以上时为病害高发期。灰霉病是由灰葡萄孢菌侵染所致，属真菌病害，花、果、叶、茎均可发病。
[0009] 番茄灰霉病是番茄危害较重且常见的病害，各菜区都发生。除危害番茄外，还可危害茄子、辣椒、黄瓜、瓠瓜等20多种作物。低温、连续阴雨天气多的年份危害严重。番茄灰霉病是大棚栽培番茄的重要病害，病菌主要侵害果实，侵染由残留的花及花托向果实或果柄扩展，使果皮成为灰白色水渍状，变软腐烂；之后在果面、花萼及果柄上出现大量灰褐色霉层，果实失水僵化。灰霉病也为害茎叶，成株期病斑识见于叶片，由边缘向里呈“V”字型发展，并产生深浅相同的轮纹，表面着生少量灰霉，叶片最后枯死。
[0010] 葡萄灰霉病俗称“烂花穗”，又叫葡萄灰腐病，病原菌为灰葡萄孢。葡萄灰霉病是目前世界上发生比较严重的一种病害，在所有贮藏发生的病害中，葡萄灰霉病所造成的损失最为严重。
[0011] 黄瓜灰霉病是黄瓜保护地栽培常年发生的一种病害，近年来发生呈逐年趋重。由于果实常常受到侵扰而引起腐烂，菜农常常称之烂果病、霉烂病。该病多从开败的雌花开始侵入，初始在花蒂产生水渍状病斑，逐渐长出灰褐色霉层，引起花器变软、萎缩和腐烂，并逐步向幼瓜扩展，瓜条病部先发黄，后期产生白霉并逐渐变为淡灰色，导致病瓜生长停止，变软、腐烂和萎缩，最后腐烂脱落。叶片染病，病斑初为水渍状，后变为不规则形的淡褐色病斑，边缘明显，有时病斑长出少量灰褐色霉层。高湿条件下，病斑迅速扩展，形成直径15-20毫米的大型病斑。茎蔓染病后，茎部腐烂，瓜蔓折断，引起烂秧。
[0012] 灰霉病是一种典型的气传病害，近年来，在农作物上的发生呈明显的上升趋势，该病害在实际病害防治过程中，难以采取有效措施来彻底切断传染源，而在病原菌侵入的情况下，也难以彻底消灭病原菌。因此，亟需一种绿色、安全、高效的防治药剂来防治各作物的灰霉病害。
[0013] 发明人通过大量复配筛选和生测实验发现，有效量的海洋芽孢杆菌B-9987分别与嘧菌环胺、咯菌酯、乙霉威复配后对多种植物的灰霉病病害表现出较好的抑制作用，明显优于单剂的效果，同时可以显著降低农药使用量。
发明内容
[0014] 本发明针对上述情况，提供了一种含有海洋芽孢杆菌B-9987的杀菌组合物，具有防治效果突出，用量低特点，对番茄、葡萄、黄瓜等作物的灰霉病有显著防治作用。
[0015] 本发明采用以下技术方案：
[0016] 一种含有海洋芽孢杆菌的杀菌组合物，包括有效量的活性组分A和活性组分B，其余为农药制剂中允许添加的辅助成分；其中，活性组分A选自海洋芽孢杆菌B-9987，活性组分B选自嘧菌环胺、咯菌酯、乙霉威中的任意一种。
[0017] 所述杀菌组合物中活性组分A和活性组分B的重量和占总重量的百分比为2％～80％。
[0018] 所述杀菌组合物中活性组分A与活性组分B之间的重量比为1～80∶1～80，优选为1～70∶1～60。
[0019] 所述杀菌组合物可选取合适的农药制剂的辅助成分后使用本领域技术人员常用的制备方法配制成农药制剂中允许的任意剂型。
[0020] 所述杀菌组合物应用于番茄、葡萄、黄瓜等作物的灰霉病防治。
[0021] 所述杀菌组合物的应用，其使用剂量为100-150g a.i./hm2。
[0022] 本发明相较于现有技术，具有以下有益效果：
[0023] 1、有效量的两种活性组分复配，表现出良好的增效作用，提高防治效果，且用药量少，持效期长；
[0024] 2、组合物中的各有效成分作用机制不同，复配应用时能最大限度的延缓害虫抗药性产生。
具体实施方式
[0025] 下面结合具体的实施例对本发明的技术方案和技术效果做进一步说明，但本发明的实施方式不局限于实施例表述的范围。
[0026] 需要说明的是，下述实施例中选用的海洋芽孢杆菌B-9987均为活菌含量为1010cfu/g的海洋芽孢杆菌菌液，嘧菌环胺为市购可得的嘧菌环胺98％原药，其余组分也均为市购可得。
[0027] 实施例1海洋芽孢杆菌B-9987与嘧菌环胺复配对番茄灰霉病的室内毒力测定[0028] 室内抑菌效果测定方法：采用生长速率法测定杀菌组合物对番茄灰霉病病菌的抑制作用。从PDA培养基上培养4d的小麦全蚀病菌落边缘取直径为5mm的菌丝块分别接种到含不同浓度杀菌剂的PDA培养基平板上，28℃下恒温培养，以不含药剂平板为空白对照，4d后测量各处理的菌落直径，计算药剂对菌丝生长的抑制百分率。通过各处理剂量的对数和菌丝生长抑制率的几率值进行回归分析，计算处理杀菌剂对番茄灰霉病病的抑制中浓度(EC50)，再依孙云沛法计算共毒系数(CTC)，结果见表1。
[0029] 当CTC≤80，则组合物表现为拮抗作用，当80＜CTC＜120，则组合物表现为相加作用，当CTC≥120，则组合物表现为增效作用。
[0030] 实测毒力指数(ATI)＝(标准药剂EC50/供试药效EC50)×100；
[0031] 理论毒力系数(TTI)＝A药剂的毒力指数×混剂中A的百分含量+B药剂的毒力指数×混剂中B的百分含量；
[0032] 共毒系数(CTC)＝[混剂实测毒力指数(ATI)/混剂理论毒力指数(TTI)]×100。
[0033] 表1海洋芽孢杆菌B-9987B-9987与嘧菌环胺不同比例复配对番茄灰霉病室内毒力测定
[0034]
[0035] 由表1可知，海洋芽孢杆菌B-9987和嘧菌环胺单剂对番茄灰霉病病的EC50分别为1.78mg/L和6.43mg/L，而海洋芽孢杆菌B-9987与嘧菌环胺在80∶1～1∶80的重量比范围内混配时，共毒系数(CTC)均大于120，表现出良好的增效作用，并非为简单的相加作用，且当海洋芽孢杆菌B-9987与嘧菌环胺按5∶1的重量比范围内复配后，对番茄灰霉病的增效作用尤为显著，防治效果最好。
[0036] 实施例2海洋芽孢杆菌B-9987与咯菌酯复配对葡萄灰霉病的室内毒力测定[0037] 室内抑菌效果测定方法：采用生长速率法测定杀菌组合物对葡萄灰霉病的抑制作用。从PDA培养基上培养4d的小麦纹枯病菌落边缘取直径为5mm的菌丝块分别接种到含不同浓度杀菌剂的PDA培养基平板上，28℃下恒温培养，以不含药剂平板为空白对照，4d后测量各处理的菌落直径，计算药剂对菌丝生长的抑制百分率。通过各处理剂量的对数和菌丝生长抑制率的几率值进行回归分析，计算处理杀菌剂对葡萄灰霉病的抑制中浓度(EC50)，再依孙云沛法计算共毒系数(CTC)，结果见表2。
[0038] 当CTC≤80，则组合物表现为拮抗作用，当80＜CTC＜120，则组合物表现为相加作用，当CTC≥120，则组合物表现为增效作用。
[0039] 实测毒力指数(ATI)＝(标准药剂EC50/供试药效EC50)×100；
[0040] 理论毒力系数(TTI)＝A药剂的毒力指数×混剂中A的百分含量+B药剂的毒力指数×混剂中B的百分含量；
[0041] 共毒系数(CTC)＝[混剂实测毒力指数(ATI)/混剂理论毒力指数(TTI)]×100。
[0042] 表2海洋芽孢杆菌B-9987与咯菌酯不同比例复配对葡萄灰霉病室内毒力测定[0043]
[0044]
[0045] 由表2可知，海洋芽孢杆菌B-9987、咯菌酯单剂对葡萄灰霉病的EC50分别为1.84mg/L和5.69mg/L，而海洋芽孢杆菌B-9987与咯菌酯在80：1～1：80重量比范围内混配时，共毒系数(CTC)均大于120，表现出良好的增效作用，并非简单的相加作用，且当海洋芽孢杆菌B-9987与咯菌酯按1：1重量比范围复配后，对葡萄灰霉病的增效作用尤为显著，防治效果最好。
[0046] 实施例3海洋芽孢杆菌B-9987与乙霉威复配对黄瓜灰霉病的室内毒力测定[0047] 室内抑菌效果测定方法：采用生长速率法测定杀菌组合物对黄瓜灰霉病菌的抑制作用。从PDA培养基上培养4d的小麦根腐病菌落边缘取直径为5mm的菌丝块分别接种到含不同浓度杀菌剂的PDA培养基平板上，28℃下恒温培养，以不含药剂平板为空白对照，4d后测量各处理的菌落直径，计算药剂对菌丝生长的抑制百分率。通过各处理剂量的对数和菌丝生长抑制率的几率值进行回归分析，计算处理杀菌剂对黄瓜灰霉病的抑制中浓度(EC50)，再依孙云沛法计算共毒系数(CTC)，结果见表3。
[0048] 当CTC≤80，则组合物表现为拮抗作用，当80＜CTC＜120，则组合物表现为相加作用，当CTC≥120，则组合物表现为增效作用。
[0049] 实测毒力指数(ATI)＝(标准药剂EC50/供试药效EC50)×100；
[0050] 理论毒力系数(TTI)＝A药剂的毒力指数×混剂中A的百分含量+B药剂的毒力指数×混剂中B的百分含量；
[0051] 共毒系数(CTC)＝[混剂实测毒力指数(ATI)/混剂理论毒力指数(TTI)]×100。
[0052] 表3海洋芽孢杆菌B-9987与乙霉威不同比例复配对黄瓜灰霉病室内毒力测定[0053]
[0054] 由表3可知，海洋芽孢杆菌B-9987和乙霉威单剂对黄瓜灰霉病的EC50分别为1.79mg/L和6.83mg/L，而海洋芽孢杆菌B-9987与乙霉威在80∶1～1∶80重量比范围内混配时，共毒系数(CTC)均大于120，表现出良好的增效作用，并非简单的相加作用，且当海洋芽孢杆菌B-9987与乙霉威按20：1重量比范围复配后，对黄瓜灰霉病的增效作用尤为显著，防治效果最好。
[0055] 实施例4防治番茄灰霉病病田间药效实验
[0056] 参照中华人民共和国国家标准农药田间试验准则GB/T 17980.28-2000中《农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治蔬菜灰霉病》进行试验。
[0057] 1.实验处理：本实验根据成分的不同分别设三个处理浓度，对照药剂分别是30％嘧菌环胺悬浮剂和10亿cfu/克海洋芽孢杆菌B-9987可湿性粉剂及空白清水对照。
[0058] 2.试验方法：每个小区66.7m2，重复3次；采用叶面喷雾法，于灰霉病发生初期第一次施药，7d后第2次施药，统计施药前及第2次施药后7天后、14天后、21天后病情，调查方法为：在小区内随机取样5点，调查全株叶片，并按照国家田间试验相关标准进行病情分级，计算防效，结果见表4。
[0059] 表4海洋芽孢杆菌B-9987、嘧菌环胺不同比例复配对番茄灰霉病病药效试验[0060]
[0061]
[0062] 从表4可以看出，海洋芽孢杆菌B-9987与嘧菌环胺在80∶1～1∶80重量比范围内混配时对番茄灰霉病病的防治效果明显优于海洋芽孢杆菌B-9987与嘧菌环胺单剂的防治效果，在低于单剂用量的情况下表现出优异的协同增效性，持效期长。
[0063] 实施例5防治番茄灰霉病田间药效实验
[0064] 参照中华人民共和国国家标准农药田间试验准则GB/T 17980.28-2000中《农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治蔬菜灰霉病》进行试验。
[0065] 1.实验处理：本实验根据成分的不同分别设三个处理浓度，对照药剂分别是20％咯菌酯悬浮剂和10亿cfu/克海洋芽孢杆菌B-9987可湿性粉剂及空白清水对照。
[0066] 3. 2.试验方法：每个小区66.7m2，重复3次；采用叶面喷雾，于灰霉病发生初期第一次施药，7d后第2次施药，统计施药前及第2次施药后7天后、14天后、21天后病情，调查方法为：在小区内随机取样5点，调查全株叶片，并按照国家田间试验相关标准进行病情分级，计算防效，结果见表5。
[0067] 表5海洋芽孢杆菌B-9987与咯菌酯不同比例复配对番茄灰霉病药效试验[0068]
[0069]
[0070] 从表5可以看出，海洋芽孢杆菌B-9987与咯菌酯在80∶1～1∶80重量比范围内混配时对番茄灰霉病的防治效果明显优于海洋芽孢杆菌B-9987与咯菌酯单剂防治效果，在低于单剂用量的情况下表现出优异的协同增效性，持效期长。
[0071] 实施例6防治番茄灰霉病田间药效实验
[0072] 参照中华人民共和国国家标准农药田间试验准则GB/T 17980.28-2000中《农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治蔬菜灰霉病》进行试验。
[0073] 1.实验处理：本实验根据成分的不同分别设三个处理浓度，对照药剂分别是20％乙霉威可湿性粉剂和10亿cfu/克海洋芽孢杆菌B-9987可湿性粉剂及空白清水对照。
[0074] 2.试验方法：每个小区66.7m2，重复3次；采用叶面喷雾，于灰霉病发生初期第一次施药，7d后第2次施药，统计施药前及第2次施药后7天后、14天后、21天后病情，调查方法为：在小区内随机取样5点，调查全株叶片，并按照国家田间试验相关标准进行病情分级，计算防效，实验结果见表6。
[0075] 表6海洋芽孢杆菌B-9987与乙霉威不同比例复配对番茄灰霉病药效试验[0076]
[0077]
[0078] 从表6可以看出，海洋芽孢杆菌B-9987与乙霉威杀菌组合在80∶1～1∶80重量比范围内混配时对番茄灰霉病的防治效果优于海洋芽孢杆菌B-9987与乙霉威单剂防治效果，组合物在低于单剂用量的情况下表现出优异的协同增效性，持效期长。
[0079] 实施例7含海洋芽孢杆菌B-9987和嘧菌环胺的乳油剂的制备
[0081] 制备工艺为：按上述配比称取物料，将海洋芽孢杆菌B-9987、嘧菌环用甲醇、二甲苯彻底溶解，与十二烷基苯磺酸钙，失水山梨醇酯聚氧乙烯醚充分混合均匀制成即得到40％海洋芽孢杆菌B-9987嘧菌环乳油。
[0082] 实施例8含海洋芽孢杆菌B-9987和咯菌酯的微乳剂剂的制备
[0083] 组分包括：海洋芽孢杆菌B-998725％，咯菌酯15％，二甘醇-丁醚20％，琥珀酸盐4％，芳基聚氧烷基醚12％，水补足100％。
[0084] 制备工艺为：按配比称取物料，将海洋芽孢杆菌B-9987、咯菌酯用二甘醇-丁醚彻底溶解，与琥珀酸盐，芳基聚氧烷基醚充分混合均匀制成油相，然后将水加入油相中，充分搅拌至透亮状，即得到40％海洋芽孢杆菌B-9987乙霉威微乳剂。
[0085] 实施例9含海洋芽孢杆菌B-9987和乙霉威的水乳剂剂的制备
[0087] 制备工艺为：按上述配比称取物料，将海洋芽孢杆菌B-9987、乙霉威用二甲苯、芳烃溶剂油彻底溶解，与十二烷基苯磺酸钙、琥珀酸盐充分混合均匀制成油相，将丙二醇投入水中混合均匀为水相，在3000转/分高速剪切搅拌下，将油相加入水相中，剪切分散1小时，即得到40％海洋芽孢杆菌B-9987乙霉威水乳剂。
[0088] 实施例10含海洋芽孢杆菌B-9987和嘧菌环胺的悬浮剂剂的制备
[0090] 制备工艺为：按上述配比称取物料，将水，磷酸酯类润湿分散剂，尿素，硅酸镁铝，黄原胶，苯甲酸钠，消泡剂混合均匀，然后边搅拌边加入海洋芽孢杆菌B-9987和嘧菌环胺。将上述物料混合剪切30分钟，使物料混合均匀。在砂磨机中研磨至粒径D90小于5微米，即得
40％海洋芽孢杆菌B-9987嘧菌环胺威悬浮剂。
40％海洋芽孢杆菌B-9987嘧菌环胺威悬浮剂。
[0091] 实施例12含海洋芽孢杆菌B-9987和咯菌酯的水分散粒剂剂的制备
[0093] 制备工艺为：按上述配比称取物料，将海洋芽孢杆菌B-9987，咯菌酯，磷酸酯，硫酸铵，玉米淀粉，葡萄糖酸钠投入混合机中混合均匀，然后进行气流粉碎。在混合机中加入气流粉碎好的物料，喷水进行流化床造粒，在50-80度条件下烘干至水分合格，即得40％海洋芽孢杆菌B-9987咯菌酯水分散粒剂。
[0094] 实施例13含海洋芽孢杆菌B-9987和乙霉威的可湿性粉剂剂的制备
[0096] 制备工艺为：按上述配比称取物料，将海洋芽孢杆菌B-9987，乙霉威，烷基萘磺酸盐甲醛缩合物，异丙基萘磺酸钠，白炭黑，高岭土投入混合搅拌机搅拌均匀，气流粉碎至800目以下即得40％海洋芽孢杆菌B-9987乙霉威可湿性粉剂。
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