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一种快速繁殖闹羊花组培苗的方法

阅读:147发布:2020-05-11

专利汇可以提供一种快速繁殖闹羊花组培苗的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种快速繁殖闹羊花试管苗的方法:每年7~8月,采集闹羊花的成熟塑果,剥出 种子 ,搓揉去除膜状翅,再装入纱布袋进行漂洗、消毒,然后接入固体培养基,培养30~40d,种子萌发长成 幼苗 ;将幼苗转入增殖培养基中培养,40~50d继代一次,增殖系数达4~5,直到达到所需的种苗量,再转入壮苗生根培养基,培养60~70d,苗高3~4cm,根2~3条,即可移栽。本发明可直接用于工厂化规模化的种苗生产,具有污染少,增殖速度快,变异率低,种苗整齐健壮,生产成本低,移栽成活率高等优势。,下面是一种快速繁殖闹羊花组培苗的方法专利的具体信息内容。

1.一种快速繁殖闹羊花组培苗的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)从闹羊花塑果中剥取出种子,搓揉去除膜质翅,清洗消毒,备用;
(2)将步骤(1)得到的闹羊花种子播种于固体培养基中,在22~25℃、光照度500~1000勒克斯、光照时间11~13h/d的条件下,培养30~40d,种子萌发形成1~2cm的幼弱的小苗,取小苗备用;
(3)将步骤(2)得到的小苗在超净工作台上转移到增殖培养基,在22~25℃、光照度500~1000勒克斯、光照时间11~13h/d的条件下,培养45~60d,小苗长至2~3cm,并形成多个分枝,将形成的分枝从小苗上切下,重新接入新的增殖培养基,继续增殖培养,直到种苗量达到需求,便可进行壮苗生根培养;
(4)将步骤(3)中得到闹羊花小苗转接到壮苗生根培养基中,在25~28℃、光照度1000~2000勒克斯、光照时间11~13h/d的条件下培养50~60d,苗长至4~5cm,根2~3根时可进行移栽;
(5)将步骤(4)得到的成苗移至有外遮荫的大棚温室苗床上,温度控制在25~30℃,利用太阳光或自然光作为光源进行驯化培养,驯化10d左右得到成苗,将苗从瓶内取出用清冲洗去除培养基后,移栽入基质上。
2.根据权利要求1所述的快速繁殖闹羊花组培苗的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述清洗消毒是指:用纱布袋包裹种子并扎好袋口,置于流水中冲洗、用去污剂清洗、再用流水冲洗,挤干水分带入超净工作台,在超净工作台上,先后用酒精、消毒剂浸泡,然后无菌水冲洗5~7次。
3.根据权利要求2所述的快速繁殖闹羊花组培苗的方法,其特征在于,所述酒精体积百分浓度为70%~75%,所述消毒剂是指质量百分含量为0.1%~0.15%的氯化汞。
4.根据权利要求1所述的快速繁殖闹羊花组培苗的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述的固体培养基组成为:乙酸(NAA)0.1~0.5mg/L+土豆汁60~80g/L+蔗糖25~30g/L+琼脂
6~8g/L+改良MS培养基+pH 5..4~5.6。
5.根据权利要求4所述的快速繁殖闹羊花组培苗的方法,其特征在于,所述的固体培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.2mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+改良MS培养基+pH 
5.4。
6.根据权利要求1所述的快速繁殖闹羊花组培苗的方法,其特征在于,步骤(3)中,所述的增殖培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.1~0.3mg/L+6苄基嘌呤(6~BA)0.5~1.0mg/L+玉米素(ZT)0.1~0.5mg/L+土豆汁60~80g/L+蔗糖25~30g/L+琼脂6~8g/L+改良MS培养基+pH 5.4~5.6。
7.根据权利要求6所述的快速繁殖闹羊花组培苗的方法,其特征在于,所述的继代增殖培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.2mg/L+6~苄氨基嘌呤(6~BA)0.8mg/L+玉米素(ZT)0.3mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+改良MS培养基+pH 5.4。
8.根据权利要求1所述的快速繁殖闹羊花组培苗的方法,其特征在于,步骤(4)中,所述的壮苗生根培养基组成为:萘乙酸(NAA)0~0.3mg/L+香蕉泥60~80g/L+蔗糖25~30g/L+white培养基+琼脂6~8g/L+pH 5.4~5.6。
9.根据权利要求8所述的快速繁殖闹羊花组培苗的方法,其特征在于,所述的壮苗生根培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.2mg/L+香蕉泥80g/L+蔗糖25g/L+white培养基+琼脂8g/L+pH 
5.4。

说明书全文

一种快速繁殖闹羊花组培苗的方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物栽培技术,具体涉及一种快速繁殖闹羊花组培苗的方法。

背景技术

[0002] 闹羊花为杜鹃花科闹羊花属植物Rhododendron molle G.Don,又名羊踯躅,羊踯躅华,羊踯躅花,玉枝,羊不吃草,羊不食草,搜山虎,老虎花等,分布于我国长江流域至南部各地,生长于山坡、灌丛或草丛中。闹羊花以花入药,每年四、五月花初开时采收,阴干或晒干后入药。《中国药典(2015版)》记载,闹羊花味辛,性温;有大毒。归肝经。具有祛除湿,散瘀定痛之功效。用于风湿痹痛,偏正头痛,跌扑肿痛,顽癣。用量0.6~1.5g,浸酒或入丸散,外用适量,煎洗。因闹羊花易引起严重的不良反应,所以不宜多服、久服;体虚者及孕妇禁用。闹羊花虽有毒,但对治疗风湿痹痛,偏正头痛,跌扑肿痛,顽癣有很好的疗效,本发明通过组织培养的方法可一年四季不间断提供闹羊花种苗,满足药农种植需求。

发明内容

[0003] 发明目的:针对上述现有技术,本发明提供一种规模化高效繁殖闹羊花组培苗的方法。
[0004] 技术方案:本发明所述的一种快速繁殖闹羊花组培苗的方法,包括以下步骤:
[0005] (1)从闹羊花塑果中剥取出种子,搓揉去除膜质翅,清洗消毒,备用;
[0006] (2)将步骤(1)得到的闹羊花种子播种于固体培养基中,在22~25℃、光照度500~1000勒克斯、光照时间11~13h/d的条件下,培养30~40d,种子萌发形成1~2cm的幼弱的小苗,取小苗备用;
[0007] (3)将步骤(2)得到的小苗在超净工作台上转移到增殖培养基,在22~25℃、光照度500~1000勒克斯、光照时间11~13h/d的条件下,培养45~60d,小苗长至2~3cm,并形成多个分枝,将形成的分枝从小苗上切下,重新接入新的增殖培养基,继续增殖培养,直到种苗量达到需求,便可进行壮苗生根培养;
[0008] (4)将步骤(3)中得到闹羊花小苗转接到壮苗生根培养基中,在25~28℃、光照度1000~2000勒克斯、光照时间11~13h/d的条件下培养50~60d,苗长至4~5cm,根2~3根时可进行移栽;
[0009] (5)将步骤(4)得到的成苗移至有外遮荫的大棚温室苗床上,温度控制在25~30℃,利用太阳光或自然光作为光源进行驯化培养,驯化10d左右得到成苗,将苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后,移栽入基质上。
[0010] 步骤(1)中,所述清洗消毒是指:用纱布袋包裹种子并扎好袋口,置于流水中冲洗10min,用去污剂清洗10min,再用流水冲洗20min,挤干水分带入超净工作台,在超净工作台上,酒精浸泡45~60s,消毒剂浸泡6~8min,无菌水冲洗5~7次。然后剪开纱布袋,用镊子夹出种子。其中,所述去污剂是指家用洗衣粉,所述酒精体积百分浓度为70%~75%,优选
75%。所述消毒剂是指质量百分含量为0.1%~0.15%的氯化汞。
[0011] 步骤(2)中,所述的固体培养基组成为:乙酸(NAA)0.1~0.5mg/L+土豆汁60~80g/L+蔗糖25~30g/L+琼脂6~8g/L+改良MS培养基+pH 5..4~5.6。优选的,所述的固体培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.2mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+改良MS培养基+pH 
5.4。
[0012] 步骤(3)中,所述的增殖培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.1~0.3mg/L+6苄基嘌呤(6~BA)0.5~1.0mg/L+玉米素(ZT)0.1~0.5mg/L+土豆汁60~80g/L+蔗糖25~30g/L+琼脂6~8g/L+改良MS培养基+pH 5.4~5.6。优选的,所述的继代增殖培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.2mg/L+6~苄氨基嘌呤(6~BA)0.8mg/L+玉米素(ZT)0.3mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖
30g/L+琼脂8g/L+改良MS培养基+pH 5.4。
[0013] 步骤(4)中,所述的壮苗生根培养基组成为:萘乙酸(NAA)0~0.3mg/L+香蕉泥60~80g/L+蔗糖25~30g/L+white培养基+琼脂6~8g/L+pH 5.4~5.6。优选的,所述的壮苗生根培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.2mg/L+香蕉泥80g/L+蔗糖25g/L+white培养基+琼脂8g/L+pH 
5.4。
[0014] 本申请中,所述改良MS培养基是指MS培养基中KNO3含量调整为480mg/L,NH4NO3含量调整为400mg/L。
[0015] 有益效果:与现有技术相比,本发明具有如下优势:
[0016] (1)闹羊花种子较小,有膜状翅,采用搓揉的方法去除膜状翅,并用纱布袋包裹消毒,相比现有消毒方法,种子消毒更彻底,损失少,便于接种。(2)闹羊花种子消毒后,将种子播散到步骤(2)中的固体培养基中,采用改良MS并配以适当的激素和添加天然附加物土豆汁,与现有的种子萌发培养基相比,该方法种子萌发时间大大缩短至20~30d,并且萌发率高达90%以上,变异率小于1%,出芽整齐。(3)步骤(3)所述的继代增殖培养基中,采用改良MS并配以适当的激素和天然附加物,与传统的继代增殖培养基相比,该方法能更好更快的促进小苗的生长和分枝,增殖系数可达到4~5。(4)步骤(4)所述的壮苗生根培养基中,采用white培养基并配合适当的激素与天然附加物,与传统的壮苗生根培养基相比,该方法能更好促进小苗迅速生根且根较粗壮。

具体实施方式

[0017] 根据下述实施例,可以更好地理解本发明。
[0018] 实施例1:一种高效繁殖闹羊花试管苗的方方法,该方法包括以下步骤:
[0019] (1)从闹羊花塑果中剥取出种子,通用搓揉去除膜质翅,用纱布袋包裹种子并扎好袋口,置于流水中冲洗10min,用去污剂清洗10min,再用流水冲洗20min,挤干水分带入超净工作台,在超净工作台上,用75%酒精浸泡45~60s,0.1%升汞浸泡6~8min,无菌水冲洗5~7次。然后剪开纱布袋,用镊子夹出种子,备用。
[0020] (2)将步骤(1)得到的闹羊花种子播种于固体培养基中,在22~25℃、光照度500~1000勒克斯、光照时间11~13h/d的条件下,培养30~40d,种子萌发形成1~2cm的幼弱的小苗,取小苗备用;其中,所述的固体培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.2mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖
30g/L+琼脂8g/L+改良MS培养基+pH 5.4;
[0021] (3)将步骤(2)得到的小苗在超净工作台上转移到增殖培养基,在22~25℃、光照度500~1000勒克斯、光照时间11~13h/d的条件下,培养45~60d,小苗长至2~3cm,并形成多个分枝,将形成的分枝从小苗上切下,重新接入新的增殖培养基,继续增殖培养,直到种苗量达到需求,便可进行壮苗生根培养,其中,所述的增殖培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.2mg/L+6苄氨基嘌呤(6~BA)0.8mg/L+玉米素(ZT)0.3mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+改良MS培养基+pH 5.4;
[0022] (4)将步骤(3)中得到闹羊花小苗转接到壮苗生根培养基中,在25~28℃、光照度1000~2000勒克斯、光照时间11~13h/d的条件下培养50~60d,苗长至4~5cm,根2~3根时可进行移栽,其中,所述的壮苗生根培养基组成为:萘乙酸(NAA)0.2mg/L+香蕉泥80g/L+蔗糖25g/L+white培养基+琼脂8g/L+pH 5.4;
[0023] (5)将步骤(4)得到的成苗移至有外遮荫的大棚温室苗床上,温度控制在25~30℃,利用太阳光或自然光作为光源进行驯化培养,驯化10d左右得到成苗,将苗从瓶内取出用清水冲洗去除培养基后,移栽入基质上。
[0024] 实施例2
[0025] 与实施例1基本相同,步骤(2)、步骤(3)、步骤(4)中闹羊花种子萌发、小苗继代增殖、壮苗生根分别以表1、表2和表3中所列各因子及水平进行正交设计进行筛选,通过正交设计分析优选出最适培养基组合。表1、表2、表3说明如下:
[0026] ①本实例中均设计成固体培养基,每种配方中琼脂浓度均为8g/L,种子萌发和小苗增殖阶段蔗糖为30g/L,壮苗生根阶段蔗糖浓度为25g/L,培养环境为温度25℃、光照度1000~2000勒克斯、光照时间12h/d培养室内。
[0027] ②种子播种阶段主要观察种子萌发的快慢、长势、颜色(翠绿为佳)等指标判断配方是否合理;继代增殖阶段主要观察小苗分枝情况(越多越好)、玻璃化程度、种苗健壮程度等指标判断配方是否合理;壮苗生根培养阶段,主要通关观察苗的生长势、生根速度、玻璃化程度(越低越好)、颜色等指标来判断配方的好坏。通过观察和各项指标的测定,对各阶段各因素、水平组合给予附分,分值为0~10分。
[0028] 表1闹羊花种子萌发各因素、水平L934正交设计分析结果
[0029]
[0030]
[0031] 表2闹羊花增殖培养各因素、水平L1645正交设计分析结果
[0032]
[0033] 表3闹羊花生根培养各因素、水平L934正交设计分析结果
[0034]
[0035]
[0036] 从表1中可以看出,基本培养基R值大于其他因子,说明基本培养基对闹羊花种子萌发的影响最大,综合分析,基础培养基因子K2>K3>K1,即改良MS优于WPM优于MS,因此在种子萌发阶段,最佳的基础培养基为MS,同理,在种子萌发阶段,最佳的NAA水平为0.2mg/L,6~BA为0mg/L,土豆汁为80g/L,因此,闹羊花种子萌发的最优培养基组合为改良MS+NAA0.2mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L,pH5.4;分析方法同上,从表2中可以看出,基本培养基和NAA的R值略大于其他因子,但差异不大,说明在闹羊花增殖培养中各因子都对闹羊花增殖有影响,闹羊花增殖培养的最优培养基组合为改良MS培养基+NAA 0.2mg/L+6~BA 0.8mg/L+ZT 0.3mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L,pH 5.4;从表3中可以看出,基本培养基R值大于其他因子,说明基本培养基对闹羊花壮苗生根的影响最大,闹羊花壮苗生根的最适培养基为white培养基+NAA 0.2mg/L+香蕉泥80g/L+蔗糖25g/L+琼脂8g/L,pH 5.4。
[0037] 实施例4为更好验证本配方的有益效果,将本配方与传统配方进行比较。
[0038] (1)种子萌发,①为传统配方,配方为MS+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,pH5.4,②为新配方,配方为改良MS+NAA0.2mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖80g/L+琼脂8g/L,pH5.4,消毒后常规播种,以萌发率达60%所需的时间为平均萌发时间,60d后统计总萌发率。
[0039] 表4种子萌发新配方与传统配方对种子萌发的影响
[0040]
[0041] (2)小苗增殖,①为传统配方,配方为MS+NAA0.1mg/L+6~BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,pH5.4,②为新配方,配方为改良MS培养基+NAA0.2mg/L+6~BA 0.8mg/L+ZT 0.3mg/L+土豆汁80g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L,pH5.4,将种子萌发获得的小苗转接到新的培养基,每瓶接种6株,60d后将小苗长出的分枝剪成带2个节的小段,重接接种新的培养基,每瓶接种6个茎段,统计增殖率。
[0042] 表5增殖阶段传统配方与新配方对小苗增殖的影响
[0043] 序号 初始接种瓶数 60d后增殖瓶数 平均增殖率 种苗生长情况1 5 12 2.4 苗高1~2cm,叶色淡绿,分枝较少
2 5 17 3.4 苗高2~3cm,叶色浓绿,分枝较多
[0044] (3)生根培养①为传统配方,配方为1/2MS+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,pH5.4,②为新配方,配方为white培养基+NAA 0.2mg/L+香蕉泥80g/L+蔗糖25g/L+琼脂8g/L,pH 5.4,将增殖后的小苗接入新的培养基,每瓶接种6株,每配方接种5瓶,50d后统计生根数及种苗生长情况。
[0045] 表6生根阶段传统培养基与新增养基对小苗生根壮苗的影响
[0046] 序号 平均根系 种苗生长情况1 1.8 苗高2~3cm,叶色淡绿,根系较弱
2 2.4 苗高3~4cm,叶色浓绿,根系粗状
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