一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法
专利汇可以提供一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，包括以下步骤：茶多酚脂质体的制备、提取鱼内脏油、鱼油改性、营养强化。有益效果为：通过提取鱼内脏油并进行酶促改性，可以将鱼油中的饱和 脂肪酸 转化为不 饱和脂肪酸 ，可以大大提高卤虫体内DHA、EPA等不饱和脂肪酸的含量，并且使强化后的卤虫营养更全面更均衡，可满足真蛸浮游幼体培养的营养需求，能够改变幼体脂类和脂肪酸组成，提高幼体的生长速度、存活率、免疫 力 与应激抵抗能力，因此是一种高效、安全的适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法。，下面是一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法专利的具体信息内容。
1.一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，包括以下步骤：茶多酚脂质体的制备、提取鱼内脏油、鱼油改性、营养强化，其特征在于，所述的鱼油改性步骤中，用脱饱和酶与还原型辅酶Ⅱ对鱼油进行酶促改性。
2.根据权利要求1所述的一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，其特征在于：所述的茶多酚脂质体的制备步骤为：称取0.04-0.05mol/L、pH为7.5-7.8的磷酸二氢钠与磷酸氢二钠混合溶液800-850份，缓慢加入茶多酚8.0-8.1份，强力搅拌下加热至58-60℃并保持恒温；称取蛋黄卵磷脂300-320份、胆固醇58-60份、VE16-17份，加入到500-600份无水乙醇中，加热至58-60℃搅拌溶解，溶解完全后将混合溶液加入茶多酚溶液中，保持温度强力搅拌30-45分钟后，在55-60℃温度、0.1-0.15MPa真空下旋转蒸发20-25分钟除去残留乙醇，然后超声处理，超声功率为200-230W，频率为23-25 KHz，以超声4秒间隔4秒的频率超声处理2-3分钟，超声结束后将茶多酚脂质体置于3-4℃保存。
3.根据权利要求1所述的一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，其特征在于：所述的提取鱼内脏油步骤为：取新鲜鱼类内脏，去除内脏中的消化残留物，洗净沥干，在匀浆机中匀浆，称取200-210份鱼内脏匀浆到烧杯中，加入60-65份蒸馏水，搅拌下水浴升温至30-34℃，调节pH到8-9，继续搅拌升温至45-55℃，保温25-35分钟，加入鱼内脏重5-7%的氯化钾搅拌溶解后盐析20-30分钟后趁热离心，分离得粗鱼油。
4.根据权利要求1所述的一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，其特征在于：所述的提取鱼内脏油步骤中所用的鱼类为：鲈鱼或鳙鱼或鲢鱼。
5.根据权利要求1所述的一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，其特征在于：所述的鱼油改性步骤为：称取粗鱼油100-110份、维生素C0.07-0.08份放于密闭容器中混合均匀，将反应容器置于超声仪中，加热至70-73℃并保持，持续通入氧气5-8分钟，然后加入脱饱和酶0.3-0.4份、还原型辅酶Ⅱ0.05-0.06份，在功率为400-500W、频率为80-90KHz的高超声波作用下反应110-140秒后待用；虹吸酶促鱼油并用热水洗5-3次，趁热离心，取上层液体，用真空干燥箱干燥即得鱼内脏油。
6.根据权利要求1所述的一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，其特征在于：所述的鱼油改性步骤中脱饱和酶与还原型辅酶Ⅱ的质量比为6-7:1。
7.根据权利要求1所述的一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，其特征在于：所述的营养强化步骤为：称取裂壶藻10-15份、茶多酚脂质体20-25份、鱼内脏油20-25 份、小球藻10-15份、肥料30-40份、诱食剂2-4份充分混合均匀，粉碎成10-45微米大小的颗粒即得营养强化饵料，以10g虫体喂养4-6g饵料的食量强化卤虫，喂食时将饵料稀释于少量池水中再均匀全池泼洒，每隔2-3小时喂食一次，每次喂食量相等，强化喂养20-24小时即可投喂真蛸浮游幼体。
8.根据权利要求1所述的一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，其特征在于：所述的肥料为牛粪或鸡粪或猪粪或豆饼粕或棉籽粕或菜籽粕，所述的诱食剂为柑橘皮粉或牛磺酸或酵母粉或蚕蛹粉或啤酒糟。
一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法
技术领域
发明内容
称取蛋黄卵磷脂300-320份、胆固醇58-60份、VE16-17份，加入到500-600份无水乙醇中，加热至58-60℃搅拌溶解，溶解完全后将混合溶液加入茶多酚溶液中，保持温度强力搅拌30-
45分钟后，在55-60℃温度、0.1-0.15MPa真空下旋转蒸发20-25分钟除去残留乙醇，然后超声处理，超声功率为200-230W，频率为23-25 KHz，以超声4秒间隔4秒的频率超声处理120-
180秒，超声结束后将茶多酚脂质体置于3-4℃保存；此方法制备的茶多酚脂质体包封率高，易于卤虫的吸收，并且制备方法简单，制备过程中避免了含有乙醚等潜在有害物质的理化处理，非常适合工业化大规模生产；
提取鱼内脏油：取新鲜鱼类内脏，去除内脏中的消化残留物，洗净沥干，在匀浆机中匀浆，称取200-210份鱼内脏匀浆到烧杯中，加入60-65份蒸馏水，搅拌下水浴升温至30-34℃，调节pH到8-9，继续搅拌升温至45-55℃，保温25-35分钟，加入鱼内脏重5-7%的氯化钾搅拌溶解后盐析20-30分钟后趁热离心，分离得粗鱼油；钾法提取鱼内脏油以除去杂质，为进一步改性做准备；本方法鱼油得率高，操作简单，废水、废渣可制成绿色高效肥料完全综合利用，还可以作为提取核酸的原料进一步高值化，达到了废弃物综合利用的目的；
鱼油改性：称取粗鱼油100-110份、维生素C0.07-0.08份放于密闭容器中混合均匀，将反应容器置于超声仪中，加热至70-73℃并保持，持续通入氧气5-8分钟，然后加入脱饱和酶
0.3-0.4份、还原型辅酶Ⅱ0.05-0.06份，在功率为400-500W、频率为80-90KHz的高超声波作用下反应110-140秒后待用；虹吸酶促鱼油并用热水洗5-3次，趁热离心，取上层液体，用真空干燥箱干燥即得鱼内脏油；酶促反应能将饱和脂肪酸的中间位置碳碳双键的氢被氧夺去生成水，从而使长链饱和脂肪酸失去氢转化为对应的不饱和脂肪酸，从而使鱼内脏油中富含DHA、EPA等多不饱和脂肪酸，非常适合作为卤虫强化成分，脱饱和酶与还原型辅酶的质量比为6-7:1时，反应活性最高；
营养强化：称取裂壶藻10-15份、茶多酚脂质体20-25份、鱼内脏油20-25 份、鱼蛋白水解物28-33份、小球藻10-15份、尿素20-23份、硝酸铵18-20份、磷酸钙15-20份、肥料60-80份、诱食剂2-4份充分混合均匀，粉碎成10-45微米大小的颗粒即得营养强化饵料，以10g虫体喂养4-6g饵料的食量强化卤虫，喂食时将饵料稀释于少量池水中再均匀全池泼洒，每隔
2-3小时喂食一次，每次喂食量相等，强化喂养20-24小时即可投喂真蛸浮游幼体；强化饵料中富含有DHA、EPA等HUFA、蛋白质与其他营养物质，在诱食成分与肥料的联合作用下，能够促进卤虫消化吸收，使卤虫加快生长，并且饵料中饱和脂肪酸含量极低，较普通鱼油饵料喂养后卤虫的成活率大大提高，经过强化后，卤虫的EPA和DHA等HUFA含量明显提高，投喂给真蛸浮游幼体后，能够改变幼体脂类和脂肪酸组成，提高幼体的生长速度、存活率、免疫力与应激抵抗能力，因此本方法是一种行之有效的卤虫营养强化方法。
图3是本发明中不同时间段的真蛸浮游幼体的胴长增长率示意图；
图4是本发明中实施例1-3的鱼油中不饱和脂肪酸的含量示意图。
具体实施方式
一种适于真蛸浮游幼体培养的卤虫营养强化方法，包括以下步骤：
1）配制茶多酚的磷酸盐溶液，称取蛋黄卵磷脂300份、胆固醇58份、VE16份，加入到500份无水乙醇中，加热至58℃搅拌溶解，溶解完全后将混合溶液加入茶多酚溶液中，保持温度强力搅拌30分钟后，在55℃温度旋蒸除去残留乙醇，超声处理后将茶多酚脂质体置于3℃保存；此方法制备的茶多酚脂质体包封率高，易于卤虫的吸收；2）称取200份新鲜鲈鱼内脏匀浆到烧杯中，加入60份蒸馏水，搅拌下水浴升温至30℃，调节pH到8，继续搅拌升温至45℃，保温25分钟，加入10份的氯化钾搅拌溶解后盐析20分钟后趁热离心，分离得粗鱼油；3）称取粗鱼油100份、维生素C0.07份放于密闭容器中混合均匀，将反应容器置于超声仪中，加热至
70℃并保持，持续通入氧气5分钟，然后加入脱饱和酶0.3份、还原型辅酶Ⅱ0.05份，在高超声波作用下反应110秒后待用；虹吸酶促鱼油并用热水洗5次，趁热离心，取上层液体，用真空干燥箱干燥即得鱼内脏油；酶促反应能将饱和脂肪酸的中间位置碳碳双键的氢被氧夺去生成水，从而使长链饱和脂肪酸失去氢转化为对应的顺式不饱和脂肪酸，从而使鱼内脏油中富含DHA、EPA等多不饱和脂肪酸；4）称取裂壶藻10份、茶多酚脂质体20份、鱼内脏油20份、鱼蛋白水解物28份、小球藻10份、尿素20份、硝酸铵18份、磷酸钙15份、花生粕60份、蚕蛹粉2份充分混合均匀，粉碎成10微米的颗粒即得营养强化饵料，以10g虫体喂养4g饵料的食量强化卤虫，每隔3小时喂食一次，每次喂食量相等，强化喂养21小时即可投喂真蛸浮游幼体；强化饵料中富含有DHA、EPA等HUFA、蛋白质与其他营养物质，在诱食成分与肥料的联合作用下，能够促进卤虫消化吸收，使卤虫加快生长。
1）制备茶多酚含量为1%的磷酸盐溶液850份，强力搅拌下加热至60℃并保持恒温；称取蛋黄卵磷脂320份、胆固醇60份、VE17份，加入到600份无水乙醇中，加热至60℃搅拌溶解，溶解完全后将混合溶液加入茶多酚溶液中，保持温度强力搅拌45分钟后，在60℃温度、
0.15MPa真空下旋转蒸发25分钟除去残留乙醇，超声处理结束后将茶多酚脂质体置于3-4℃保存；茶多酚脂质体制备方法简单，制备过程中避免了含有乙醚等潜在有害物质的理化处理，非常适合工业化大规模生产；
2）称取210份新鲜鲢鱼内脏匀浆到烧杯中，加入65份蒸馏水，搅拌下水浴升温至34℃，调节pH到9，继续搅拌升温至55℃，保温35分钟，加入14.7份的氯化钾搅拌溶解后盐析30分钟后趁热离心，分离得粗鱼油；钾法提取鱼内脏油以除去杂质，为进一步改性做准备；
3）称取粗鱼油110份、维生素C0.08份放于密闭容器中混合均匀，将反应容器置于超声仪中，加热至73℃并保持，持续通入氧气8分钟，然后加入脱饱和酶0.4份、还原型辅酶Ⅱ
0.06份，在高超声波作用下反应140秒，虹吸酶促鱼油并用热水洗3次，趁热离心，取上层液体，用真空干燥箱干燥即得鱼内脏油；本方法鱼油中不饱和脂肪酸含量高，操作简单，废水、废渣可制成绿色高效肥料完全综合利用，还可以作为提取核酸的原料进一步高值化，达到了废弃物综合利用的目的；
4）称取裂壶藻15份、茶多酚脂质体25份、鱼内脏油25 份、鱼蛋白水解物33份、小球藻15份、尿素23份、硝酸铵20份、磷酸钙20份、牛粪40份、菜籽粕40份、啤酒糟4份充分混合均匀，粉碎成45微米的微粒即得营养强化饵料，以10g虫体喂养6g饵料的食量强化卤虫，喂食时将饵料稀释于少量池水中再均匀全池泼洒，每隔3小时喂食一次，每次喂食量相等，强化喂养
24小时即可投喂真蛸浮游幼体；经强化后的卤虫体内的EPA和DHA等HUFA含量明显提高，卤虫的免疫能力增强，营养价值更加丰富，将强化后的卤虫投喂给真蛸浮游幼体后，能够改变浮游幼体脂类和脂肪酸的组成，提高幼体的生长速度、存活率、免疫力与应激抵抗能力，因此本方法是一种行之有效的卤虫营养强化方法。
茶多酚脂质体的制备：称取0.05mol/L、pH为7.8的磷酸二氢钠与磷酸氢二钠混合溶液
840份，缓慢加入茶多酚8.0份，强力搅拌下加热至58℃并保持恒温；称取蛋黄卵磷脂300份、胆固醇58份、VE17份，加入到580份无水乙醇中，加热至60℃搅拌溶解，溶解完全后将混合溶液加入茶多酚溶液中，保持温度强力搅拌40分钟后，在60℃温度、0.12MPa真空下旋转蒸发
25分钟除去残留乙醇，然后超声处理，超声功率为220W，频率为24 KHz，以超声4秒间隔4秒的频率超声处理160秒，超声结束后将茶多酚脂质体置于3℃保存；此方法制备的茶多酚脂质体包封率高，易于卤虫的吸收，并且制备方法简单，制备过程中避免了含有乙醚等潜在有害物质的理化处理，非常适合工业化大规模生产；
提取鱼内脏油：取新鲜鲈鱼类内脏，去除内脏中的消化残留物，洗净沥干，在匀浆机中匀浆，称取210份鱼内脏匀浆到烧杯中，加入60份蒸馏水，搅拌下水浴升温至33℃，调节pH到
9，继续搅拌升温至50℃，保温30分钟，加入12份氯化钾搅拌溶解后盐析25分钟后趁热离心，分离得粗鱼油；钾法提取鱼内脏油以除去杂质，为进一步改性做准备；本方法鱼油得率高，操作简单，废水、废渣可制成绿色高效肥料完全综合利用，还可以作为提取核酸的原料进一步高值化，达到了废弃物综合利用的目的；
鱼油改性：依次称取维生素E0.16g、乙二胺四乙酸0.50g、硫代月桂酸酐0.14g、L-(+)-
2,3-二羟基丙酸0.02g、丙烯酸树脂改性酪蛋白2.3g、聚氨酯改性硝酸纤维2.5g，丙二醇乙醚11g，置于8000r/min的高速混合机中混合3分钟得涂层制剂，取涂层制剂均匀涂覆于密闭反应容器内底面与内壁，在25℃温度下烘干25分钟待用；称取粗鱼油100份、维生素C0.08份放于密闭容器中混合均匀，将反应容器置于超声仪中，加热至72℃并保持，持续通入氧气6分钟，然后加入脱饱和酶0.4份、还原型辅酶Ⅱ0.06份，在功率为450W、频率为87KHz的高超声波作用下反应130秒后待用；虹吸酶促鱼油并用热水洗4次，趁热离心，取上层液体，用真空干燥箱干燥即得鱼内脏油；涂层制剂中各成膜组分协同作用，使涂层性质更加稳定，涂层质地更加均匀，可使膜的通透性更加均一，有利于膜内有效物质的释放，有效物质能够与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Zn2+、Fe2+、Al3+等二、三价金属离子结合，从而降低金属离子对还原型辅酶Ⅱ与脱饱和酶的活性抑制作用；特别的，当硫代月桂酸酐与L-(+)-2,3-二羟基丙酸的质量比为7:1时，能够使酶促反应的产物以顺式不饱和脂肪酸为主，降低反式不饱和脂肪酸的生成率，从而降低不饱和脂肪酸对生物的毒副作用；涂层释放的有效物质还具有清除鱼油中多余自由基的功效，将自由基对顺式不饱和脂肪酸的氧化降解降至最低，增强酶促产物的稳定性；酶促反应能将饱和脂肪酸的中间位置碳碳双键的氢被氧夺去生成水，从而使长链饱和脂肪酸失去氢转化为对应的顺式不饱和脂肪酸，从而使鱼内脏油中富含DHA、EPA等多不饱和脂肪酸，非常适合作为卤虫强化成分；
营养强化：称取裂壶藻12份、茶多酚脂质体24份、鱼内脏油24份、鱼蛋白水解物30份、小球藻10份、尿素20份、硝酸铵20份、磷酸钙16份、鸡粪30份、棉籽粕40份、酵母粉3份充分混合均匀粉碎成30微米大小的颗粒即得营养强化饵料，以10g虫体喂养5g饵料的食量强化卤虫，喂食时将饵料稀释于少量池水中再均匀全池泼洒，每隔2小时喂食一次，每次喂食量相等，强化喂养24小时即可投喂真蛸浮游幼体；强化饵料中富含有DHA、EPA等HUFA、蛋白质与其他营养物质，在诱食成分与肥料的联合作用下，能够促进卤虫消化吸收，使卤虫加快生长，并且饵料中饱和脂肪酸含量极低，较普通鱼油饵料喂养后卤虫的成活率大大提高，经过强化后，卤虫的EPA和DHA等HUFA含量明显提高，投喂给真蛸浮游幼体后，能够改变幼体脂类和脂肪酸组成，提高幼体的生长速度、存活率、免疫力与应激抵抗能力，因此本方法是一种行之有效的卤虫营养强化方法。
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