一种微生物发酵饲料原料及其生产方法和饲料
阅读：295发布：2020-05-17
专利汇可以提供一种微生物发酵饲料原料及其生产方法和饲料专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 饲料 领域，公开了一种 微 生物 发酵 饲料原料及其生产方法和饲料，该微生物发酵饲料原料中，乳杆菌的含量为1×108‑5×108cfu/g，芽孢杆菌的含量为1×108‑6×108cfu/g， 酵母 菌的含量为6.5×106‑5×107cfu/g，以乳酸计总酸含量为4‑7重量％，以干基计粗 纤维 的含量为8‑9.1重量％，以干基计 粗蛋白 的含量为23.5‑24.1重量％，以干基计粗脂肪的含量为3.5‑4.1重量％，以干基计粗灰分的含量为9.1‑9.8重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为16‑17.2重量％。本发明所述分阶段发酵方法制备的微生物发酵饲料原料具有浓郁的酸香和醇 香味 ，且营养物质丰富，有利于提高生产性能。，下面是一种微生物发酵饲料原料及其生产方法和饲料专利的具体信息内容。
1.一种微生物发酵饲料原料，其特征在于，该微生物发酵饲料原料中，乳杆菌的含量为
1×108-5×108cfu/g，芽孢杆菌的含量为1×108-6×108cfu/g，酵母菌的含量为6.5×106-5×107cfu/g，以乳酸计总酸含量为4-7重量％，以干基计粗纤维的含量为8-9.1重量％，以干基计粗蛋白的含量为23.5-24.1重量％，以干基计粗脂肪的含量为3.5-4.1重量％，以干基计粗灰分的含量为9.1-9.8重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为16-17.2重量％。
2.根据权利要求1所述的微生物发酵饲料原料，其中，所述微生物发酵饲料原料中，乳杆菌的含量为2×108-4.5×108cfu/g，芽孢杆菌的含量为2.5×108-5×108cfu/g，酵母菌的
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含量为2×10-4.5×10cfu/g，以乳酸计总酸含量为5-6重量％，以干基计粗纤维的含量为
8.4-8.9重量％，以干基计粗蛋白的含量为23.8-24.1重量％，以干基计粗脂肪的含量为
3.9-4.1重量％，以干基计粗灰分的含量为9.2-9.8重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为
16.4-17.2重量％；
优选地，所述乳杆菌为嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和发酵乳杆菌中的一种或多种，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌中的一种或多种，所述酵母菌为产朊假丝酵母菌和/或酿酒酵母菌；
进一步优选地，所述乳杆菌为嗜酸乳杆菌，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，所述酵母菌为产朊假丝酵母菌。
3.一种微生物发酵饲料原料的生产方法，其特征在于，该生产方法包括先向发酵原料中接种芽孢杆菌进行第一阶段发酵，再接种乳杆菌和酵母菌进行第二阶段发酵；
所述发酵原料含有玉米淀粉渣、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、干酒糟及其可溶物和喷浆玉米皮中的一种或多种；且所述发酵原料以干基计粗蛋白含量为20重量％以上。
4.根据权利要求3所述的生产方法，其中，芽孢杆菌、乳杆菌和酵母菌分别以芽孢杆菌种子液、乳杆菌种子液和酵母菌种子液的形式进行接种；
优选地，所述芽孢杆菌种子液中芽孢杆菌活菌的含量为5×109-1×1010cfu/g，所述乳杆菌种子液中乳杆菌活菌的含量为5×109-1×1010cfu/g，所述酵母菌种子液中酵母菌活菌的含量为2.5×109-5×109cfu/g。
5.根据权利要求3或4所述的生产方法，其中，相对于每克的发酵原料，所述芽孢杆菌的接种量为4×107-8×107cfu，所述乳杆菌的接种量为4×107-8×107cfu，所述酵母菌的接种量为5×106-1×107cfu。
6.根据权利要求3或4所述的生产方法，其中，所述第一阶段发酵的条件包括：氧气含量为0.5-2体积％，温度为25-35℃，时间为24-48小时，起始pH值为5-7；
优选地，所述第一阶段发酵的条件包括：氧气含量为1.5-2体积％，温度为28-32℃，时间为35-45小时，起始pH值为5.5-7。
7.根据权利要求3或4所述的生产方法，其中，所述第二阶段发酵的条件包括：氧气含量低于0.5体积％，温度为30-40℃，时间为24-144小时；
优选地，所述第二阶段发酵的条件包括：氧气含量低于0.2体积％，温度为33-37℃，时间为72-96小时；
优选地，所述第二阶段发酵的过程在不透气的包装袋中进行，所述包装袋上设有单向排气阀，气体仅可通过所述单向排气阀从袋内排出袋外；
优选地，所述第二阶段发酵的温度比所述第一阶段发酵的温度高4-6℃。
8.根据权利要求3或4所述的生产方法，其中，所述乳杆菌为嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和发酵乳杆菌中的一种或多种，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌中的一种或多种，所述酵母菌为产朊假丝酵母菌和/或酿酒酵母菌；
优选地，所述乳杆菌为嗜酸乳杆菌，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，所述酵母菌为产朊假丝酵母菌。
9.根据权利要求3或4所述的生产方法，其中，所述发酵原料中的水分含量为35重量％以下；所述发酵原料以干基计粗纤维的含量为10重量％以下，以干基计粗脂肪的含量为2重量％以上，以干基计粗灰分的含量为10重量％以下，以干基计酸溶蛋白的含量为15重量％以上。
10.由权利要求3-9中任意一项所述的生产方法制备的微生物发酵饲料原料。
11.一种饲料，其特征在于，该饲料含有权利要求1、2和10中任意一项所述的微生物发酵饲料原料和大豆油。
一种微生物发酵饲料原料及其生产方法和饲料
技术领域
[0001] 本发明涉及饲料领域，具体地，涉及一种微生物发酵饲料原料及其生产方法和饲料。
背景技术
[0002] 在饲料工业中应用生物技术越来越受到重视，因为它能够变废为宝，充分利用工业废弃物，这样既提供了丰富的饲料资源，又减轻了环境污染。生物饲料凭借其含有优质的高含量蛋白和丰富的生物活性物质的优势，对缓解饲料原料紧张的局面，推动饲料工业和畜牧业的发展必将起到巨大的推动作用。
[0003] 微生物在饲料中与动物体内可发挥重要的作用：对饲料原料本身，在饲料发酵与储存期间，微生物生产代谢产生的酶系能使纤维、淀粉、蛋白质降解为更易被动物吸收利用的小分子物质，提高饲料的转化速率与转化率。调节胃肠微生态平衡，抑制肠道不良微生物的增殖，保持肠道的健康。肠道的健康重点体现在消化吸收良好、不易感染肠道疾病。现在越来越多的养殖户和饲料厂已经关注，并逐步提高发酵饲料的添加比例，对降低生产成本、提高产品的安全质量发挥关键作用。
[0004] 在以玉米、木薯渣为原料，生产柠檬酸、赖氨酸、酒精产品的过程中，会出现很多类副产品，如柠檬酸糟、玉米淀粉渣、玉米浆、玉米皮等。这些副产品单独处理或销售时，其市场价值没有得到最好的体现。采用混合原料、复合菌种进行微生物发酵，制作高能量饲料或高蛋白质饲料原料，对副产品进行有机整合、变废为宝，可以使产品效益最大化。
发明内容
[0005] 本发明的目的是为了充分利用工业副产品与微生物发酵技术，提高饲料生产性能和动物采食量，提供一种微生物发酵饲料原料及其生产方法，以及含有该微生物发酵饲料原料的饲料。
[0006] 为了实现上述目的，本发明提供了一种微生物发酵饲料原料，其中，该微生物发酵饲料原料中，乳杆菌的含量为1×108-5×108cfu/g，芽孢杆菌的含量为1×108-6×108cfu/g，酵母菌的含量为6.5×106-5×107cfu/g，以乳酸计总酸含量为4-7重量％，以干基计粗纤维的含量为8-9.1重量％，以干基计粗蛋白的含量为23.5-24.1重量％，以干基计粗脂肪的含量为3.5-4.1重量％，以干基计粗灰分的含量为9.1-9.8重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为16-17.2重量％。
[0007] 本发明还提供了一种微生物发酵饲料原料的生产方法，其中，该生产方法包括先向发酵原料中接种芽孢杆菌进行第一阶段发酵，再接种乳杆菌和酵母菌进行第二阶段发酵；
[0009] 本发明还提供了由本发明所述的生产方法制备的微生物发酵饲料原料。
[0010] 本发明还提供了一种饲料，其中，该饲料含有本发明所述的生产方法制备的微生物发酵饲料原料和大豆油。
[0011] 本发明所述微生物发酵饲料原料的生产方法结合每种菌的特性，分别添加菌种，通过分阶段发酵，充分发挥每种菌的优势。本发明所述的微生物发酵饲料原料酸香、醇香味浓郁，可刺激动物的食欲，提高动物采食量；并且，所述微生物发酵饲料原料含有丰富的酸溶蛋白、有机酸等营养物质，可提高动物生产性能。
[0012] 本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
[0013] 以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0014] 在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
[0015] 本发明提供了一种微生物发酵饲料原料，其中，该微生物发酵饲料原料中，乳杆菌的含量为1×108-5×108cfu/g，芽孢杆菌的含量为1×108-6×108cfu/g，酵母菌的含量为6.5×106-5×107cfu/g，以乳酸计总酸含量为4-7重量％，以干基计粗纤维的含量为8-9.1重量％，以干基计粗蛋白的含量为23.5-24.1重量％，以干基计粗脂肪的含量为3.5-4.1重量％，以干基计粗灰分的含量为9.1-9.8重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为16-17.2重量％。本文中涉及的菌体的含量(或接种量)均按活菌量计。本发明中，以干基计的某成分的含量是指以微生物发酵饲料原料的干基重量为基准而计算的某成分的含量。
[0016] 在上述各组分含量范围的条件下，尤其是在以乳酸计总酸的含量的条件下，所述微生物发酵饲料原料的pH值为3-5。
[0017] 根据本发明，动物喜欢具有酸香、醇香的食物，为了刺激动物食欲，提高采食量和生产性能，优选的情况下，所述微生物发酵饲料原料中，乳杆菌的含量为2×108-4.5×108cfu/g，芽孢杆菌的含量为2.5×108-5×108cfu/g，酵母菌的含量为2×107-4.5×107cfu/g，以乳酸计总酸含量为5-6重量％，以干基计粗纤维的含量为8.4-8.9重量％，以干基计粗蛋白的含量为23.8-24.1重量％，以干基计粗脂肪的含量为3.9-4.1重量％，以干基计粗灰分的含量为9.2-9.8重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为16.4-17.2重量％。
[0018] 本发明中，以所述微生物发酵饲料原料的总重量计，所述微生物发酵饲料原料中还可以含有30-40重量％的水分，优选为30-35重量％。
[0019] 本发明中，所述微生物发酵饲料原料中还可以含有淀粉、矿物质和不可避免的杂质。以所述微生物发酵饲料原料的干基重量为基准，淀粉、矿物质和不可避免的杂质的总含量可以为53.5-54.7重量％。
[0020] 本发明对所述乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌的选择没有特别的限定，可以为本领域常规的选择，例如可以所述乳杆菌可以为嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和发酵乳杆菌中的一种或多种，所述芽孢杆菌可以为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌中的一种或多种，所述酵母菌可以为产朊假丝酵母菌和/或酿酒酵母菌。
[0021] 进一步优选地，所述乳杆菌为嗜酸乳杆菌，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，所述酵母菌为产朊假丝酵母菌。
[0022] 本发明还提供了一种微生物发酵饲料原料的生产方法，其中，该生产方法包括先向发酵原料中接种芽孢杆菌进行第一阶段发酵，再接种乳杆菌和酵母菌进行第二阶段发酵；
[0024] 根据本发明，第一阶段发酵中的芽孢杆菌产成的酶将发酵原料中的纤维素降解成糖，用以供第二阶段发酵中的乳杆菌和酵母菌进行发酵使用。一方面降低了纤维素的含量，另一方面使发酵后的饲料原料含有丰富的营养物质，并且浓郁的酸香、醇香味。
[0025] 根据本发明的一种优选的实施方式，芽孢杆菌、乳杆菌和酵母菌分别以芽孢杆菌种子液、乳杆菌种子液和酵母菌种子液的形式进行接种。所述芽孢杆菌种子液、乳杆菌种子液和酵母菌种子液分别由芽孢杆菌、乳杆菌和酵母菌经过摇瓶种子培养、一级种子培养两步培养过程完成。培养方法和条件均为本领域常规方式，满足本申请所需的菌种含量即可。
[0026] 作为上述摇瓶种子培养的方法例如可以为：将菌悬液接入经灭菌的摇瓶培养基中，根据菌种性质，在静置(厌氧)/摇瓶机(好氧)条件下培养，培养过程测定OD(波长600nm、比色皿宽度1cm)和pH值。
[0027] 作为上述一级种子培养的方法例如可以为：将摇瓶培养液接入一级种子培养培养基，在扩培罐中，适当条件下培养；培养过程测定OD(波长600nm、比色皿宽度1cm)和pH值。
[0028] 根据本发明的一种优选的实施方式，所述芽孢杆菌种子液中芽孢杆菌活菌的含量为5×109-1×1010cfu/g，所述乳杆菌种子液中乳杆菌活菌的含量为5×109-1×1010cfu/g，所述酵母菌种子液中酵母菌活菌的含量为2.5×109-5×109cfu/g。
[0029] 根据本发明，对所述芽孢杆菌、乳杆菌和酵母菌的接种量没有特别的限定，优选情况下，相对于每克的发酵原料，所述芽孢杆菌的接种量为4×107-8×107cfu，优选为5×107-6×107cfu；所述乳杆菌的接种量为4×107-8×107cfu，优选为6×107-8×107cfu；所述酵母菌的接种量为5×106-1×107cfu，优选为5×106-8.2×106。
[0030] 根据本发明，对所述第一阶段发酵的条件没有特别的限定，可以为本领域常规的选择。优选情况下，所述第一阶段发酵的条件包括：氧气含量为0.5-2体积％，优选为1.5-2体积％；温度为25-35℃，优选为28-32℃；时间为24-48小时，优选为35-45小时；起始pH值为5-7，优选为5.5-7。在上述条件下，芽孢杆菌产生的酶能够将更多的纤维素降解，进一步降低微生物发酵饲料原料中的纤维素含量，同时降解过程中生成的糖为后续的第二阶段发酵提供了更有利的条件。
[0032] 根据本发明，对所述第二阶段发酵的条件没有特别的限定，可以为本领域常规的选择。优选情况下，所述第二阶段发酵的条件包括：氧气含量低于0.5体积％，优选为低于0.2体积％；温度为30-40℃，优选为33-37℃；时间为24-144小时，优选为72-96小时。在上述条件下，使乳杆菌和酵母菌均能够获得极好的发酵效果，最终得到具有较高菌种含量的微生物发酵饲料原料。
[0033] 本发明中，除特殊说明外，所述“氧气含量”是指发酵装置中氧气的体积与发酵装置总体积的比值。氧气可以以空气的形式加入，氧气含量可以通过计算通入的空气的量来确定。
[0034] 根据本发明，所述第二阶段发酵过程包括有氧发酵和无氧发酵两个阶段，有氧发酵消耗环境中的氧气，氧气消耗完毕后进行无氧发酵过程。优选地，所述发酵过程在不透气的包装袋中进行，所述包装袋上设有单向排气阀，气体仅可通过所述单向排气阀从袋内排出袋外。
[0035] 根据本发明的一种优选实施方式，所述第二阶段发酵的温度比所述第一阶段发酵的温度高4-6℃。在上述条件下，可以使每种菌在分阶段发酵中充分发挥各自优势，得到更好的发酵效果。
[0036] 本发明对所述芽孢杆菌、乳杆菌和酵母菌的选择没有特别的限定，例如，所述芽孢杆菌可以为枯草芽孢杆菌(如编号为安徽农业大学生命科学学院951NA4的菌种)、地衣芽孢杆菌(如编号为CGMCC 1.265的菌种)和凝结芽孢杆菌(如编号为CGMCC 1.3220的菌种)中的一种或多种，所述乳杆菌可以为嗜酸乳杆菌(如编号为CGMCC 1.1854的菌种)、植物乳杆菌(如编号为CGMCC 1.2158的菌种)和发酵乳杆菌(如编号为CGMCC 1.3223的菌种)中的一种或多种，所述酵母菌可以为产朊假丝酵母菌(如编号为CGMCC2.1180的菌种)和/或酿酒酵母菌(如编号为CGMCC 2.3853的菌种)。
[0037] 根据本发明的一种优选实施方式，所述乳杆菌为嗜酸乳杆菌，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，所述酵母菌为产朊假丝酵母菌。
[0038] 所述发酵原料中的玉米淀粉渣、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、DDGS和喷浆玉米皮可以为本领域公知的柠檬酸、赖氨酸、酒精等产品的副产物。例如，所述玉米淀粉渣优选为玉米经粉碎、液化、过滤而得到的玉米淀粉渣；所述玉米酒精糟可溶物优选为玉米经粉碎、液化、糖化、发酵、蒸馏、过滤而得到的玉米酒精糟可溶物；所述柠檬酸糟优选为以玉米经液化、糖化、发酵、过滤而得到的柠檬酸糟；所述玉米粉优选为玉米经粉碎得到的玉米粉；所述DDGS优选为玉米经粉碎、液化、糖化、发酵、过滤后得到液体与固渣、浓缩与烘干而得到的DDGS；所述喷浆玉米皮优选为将玉米浸泡液喷到玉米皮上并经干燥而得到的喷浆玉米皮。所述玉米淀粉渣、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、DDGS和喷浆玉米皮的制备方法和条件为本领域所公知，在此不再敖述。
[0039] 根据本发明的一种优选的实施方式，所述玉米淀粉渣中以干基计粗蛋白为25-30重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为2.5-3.5重量％，以干基计粗灰分为2.7-3.3重量％，以干基计粗纤维为9.2-11.2重量％，以干基计粗脂肪为10.8-13.2重量％，水分含量为9-11重量％；
[0040] 所述玉米酒精糟可溶物以干基计粗蛋白为14-17重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为16-20重量％，以干基计粗灰分为11.7-14重量％，以干基计粗纤维为0.4-0.6重量％，以干基计粗脂肪为0.12-0.14重量％，水分含量为60-75重量％；
[0041] 所述柠檬酸糟以干基计粗蛋白为10-13重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为2-3重量％，以干基计粗灰分为2.7-3.4重量％，以干基计粗纤维为20.5-25重量％，以干基计粗脂肪为2.3-2.8重量％，水分含量为60-75重量％；
[0042] 所述玉米粉以干基计粗蛋白为7.7-9.4重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为0.2-0.8重量％，以干基计粗灰分为1.2-1.5重量％，以干基计粗纤维为2.7-3.4重量％，以干基计粗脂肪为3-3.7重量％，水分含量为12-15重量％；
[0043] 所述DDGS以干基计粗蛋白为23-29重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为3.5-5重量％，以干基计粗灰分为4.5-5.5重量％，以干基计粗纤维为10-12重量％，以干基计粗脂肪为6.6-8重量％，水分含量为5.5-12重量％；
[0044] 所述喷浆玉米皮以干基计粗蛋白为17-21重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为15-17重量％，以干基计粗灰分为5-6重量％，以干基计粗纤维为7.4-9重量％，以干基计粗脂肪为1.9-2.3重量％，水分含量为7.8-12重量％。
[0045] 优选地，所述发酵原料含有玉米淀粉渣、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、DDGS和喷浆玉米皮中的一种或多种。
[0046] 更优选地，所述发酵原料为玉米淀粉渣、玉米酒精糟可溶物、柠檬酸糟、玉米粉、DDGS和喷浆玉米皮。
[0047] 根据本发明，出于营养成分、原料色泽与颗粒度的考虑，所述发酵原料以干基计粗蛋白含量在满足上述条件的基础上，优选所述发酵原料中的水分含量为35重量％以下，所述发酵原料以干基计粗纤维为10重量％以下，以干基计粗脂肪为2重量％以上，以干基计粗灰分为10重量％以下，以干基计酸溶蛋白的含量为15重量％以上。
[0048] 此外，所述发酵原料以干基计粗蛋白含量只要在20重量％以上即可，在从原料色泽与颗粒度、营养成分的方面来考虑，更优选为22-24重量％。
[0049] 在本发明中，所述发酵原料以干基计粗蛋白是指用《GB/T 6432饲料中粗蛋白测定方法》所得的数据，以干基计酸溶蛋白是指用《GB/T 22492-2008大豆肽粉》所得的数据，以干基计粗纤维是指用《GB/T 6434饲料中粗纤维测定方法》测定所得的数据，以干基计粗脂肪是指用《GB/T 6433饲料中粗脂肪的测定》测定所得的数据，以干基计粗灰分是指用《GB/T 6438-2007饲料中粗灰分的测定》测定所得的数据。
[0050] 根据本发明，所述微生物发酵饲料原料制备的原料处理、混合、分阶段接种及发酵过程由本领域常规方法进行。具体地，根据各种固体原料的配比，使用铲车向各个料斗内投料，采用皮带称实现固体原料的称重，投入斗式提升机；斗式提升机将固体原料输送至湿物料打散机，经打散后，原块状固体湿物料打散成均匀的小颗粒，湿物料打散机可连续生产；经打散机后的固体原料，进入混合机。开启液体原料及芽孢杆菌进料阀门，芽孢杆菌与发酵原料混合，混合5-10分钟后，将混合机内的物料装入发酵车，放置发酵间1在第一阶段发酵条件下进行第一阶段发酵。第一阶段发酵结束后，将物料卸至混合机，开启乳杆菌和酵母菌进料阀门，乳杆菌和酵母菌与发酵原料混合，混合5-10分钟后，将混合机内的物料卸下湿料仓内，通过螺旋输送机从湿料仓内采出，输送至包装袋内，称重密封。通过叉车移至发酵间2在第二阶段发酵条件下进行第二阶段发酵。
[0051] 本发明还提供了由本发明所述的生产方法制备的微生物发酵饲料原料。所述微生物发酵饲料原料的各成分含量及性能如前所述，在此不再敖述。
[0052] 本发明还提供了一种饲料，其中，该饲料含有本发明所述的微生物发酵饲料原料和大豆油。所述微生物发酵饲料原料可以用于替代玉米、豆粕等材料作为饲料的主要成分。优选地，所述微生物发酵饲料原料在饲料中的含量为4-12重量％。
[0053] 作为本发明的一种优选的实施方式，上述微生物发酵饲料原料的含量为8.3-8.4重量％，其它的成分的种类和含量分别可以为：玉米为48-49重量％，豆粕为35-36重量％，大豆油为4-5重量％，石粉为1-2重量％，磷酸氢钙为1-2重量％。
[0054] 以下将通过实施例和对比例对本发明进行详细描述。以下实施例和对比例中，总酸通过化学滴定法测定，水分通过《GB/T 6435饲料水分和其它挥发性物质含量的测定方法》测定，以干基计粗蛋白通过《GB/T 6432饲料中粗蛋白测定方法》测定，以干基计酸溶蛋白通过《GB/T 22492-2008大豆肽粉》测定，以干基计粗灰分通过《GB/T 6438-2007饲料中粗灰分的测定》测定，以干基计粗纤维通过《GB/T 6434饲料中粗纤维测定方法》测定，以干基计粗脂肪通过《GB/T 6433饲料中粗脂肪的测定》测定。
[0055] 以下实施例和对比例中，菌体含量通过平板计数法测定，乳杆菌、酵母菌和芽孢杆菌分别使用的平板培养基配制方法如下：
[0056] 乳杆菌平板培养基：称取MRS肉汤培养基55.2g/L，琼脂10.14g/L，加蒸馏水定容，调节pH值为6.2，120℃，20min灭菌，制成平板培养基，空培养24h后使用。
[0057] 酵母菌平板培养基：称取酵母粉10g/L，蛋白胨20g/L，葡萄糖20g/L，琼脂14g/L，加蒸馏水定容，调节pH值为6.0，120℃，20min灭菌，制成平板培养基，空培养24h后使用。
[0058] 芽孢杆菌平板培养基：称取酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖5g/L，氯化钠10g/L，琼脂20g/L，加蒸馏水定容，调节pH值为7.20，120℃，20min灭菌，制成平板培养基，空培养24h后使用。
[0059] 菌体含量采用平板计数法测定，称取5.0g物料到45g无菌水中，放置摇床培养(温度32℃，转速120rpm/min，时间40min-50min)，然后取0.1ml培养液至0.9ml无菌水摇匀，稀释至一定的梯度、涂布至相应菌种的平板培养基，放置恒温箱30℃培养48h。计数方法：一个稀释度的菌落数为30-300个菌落数，则以该稀释度菌落数除以涂布平板所用稀释液体积(0.1ml)，乘以稀释倍数作为该样品的菌体总数。
[0060] 下述实施例和对比例中，玉米淀粉渣为生产柠檬酸等玉米深加工产品过程中，玉米经粉碎、液化、过滤获得的滤渣，再经干燥获得的产品；
[0061] 玉米酒精糟可溶物为玉米经过浸润、粉碎、液化、糖化，再经酵母发酵、蒸馏除去乙醇后，对剩余的釜溜物过滤获得的清液(固含量为3重量％)进行浓缩(浓缩后固含量为35重量％)后的产品；
[0062] 柠檬酸糟为以玉米为原料发酵生产柠檬酸产品过程中，发酵液经过滤剩余的滤渣产品，其水分含量为70％；
[0063] 玉米粉为玉米经粉碎得到的粉末；
[0064] DDGS为玉米经浸润、脱胚芽、粉碎、液化、糖化、发酵、蒸馏的过程得到的滤液和清液混合而成；
[0065] 喷浆玉米皮为将玉米浸泡液喷到玉米皮上并经干燥获得的产品；
[0066] 下述实施例中，嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus，CGMCC 1.1854)、产朊假丝酵母菌(Candida utilis，CGMCC 2.1180)来自于中国普通微生物菌种保藏管理中心，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)购自安徽农业大学生命科学学院，编号为951NA4。
[0067] 制备例1
[0068] 该制备例用于说明嗜酸乳杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液和产朊假丝酵母菌种子液的制备。
[0069] (1)摇瓶种子培养
[0070] 摇瓶种子培养过程为配制下述培养基，121℃，20min高温灭菌，冷却后取菌悬液接入培养基中，在对应控制参数条件下培养，培养过程测定OD(波长600nm、比色皿宽度1cm)和pH值，达到终止参数时，摇瓶种子培养完成。
[0071] 嗜酸乳杆菌：
[0072] 培养基：MRS肉汤培养液48克于1000ml水中，调节pH值6.2±0.1。
[0073] 控制参数：30℃，静置条件下进行厌氧培养。
[0074] 终止参数：OD≥0.250
[0075] 枯草芽孢杆菌：
[0076] 培养基：酵母粉5g、蛋白胨10g、葡萄糖5g、氯化钠10g、水1000ml，用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。
[0077] 控制参数：35℃、160r/min。
[0078] 终止参数：OD≥0.120
[0079] 产朊假丝酵母菌：
[0080] 培养基：蛋白胨19g，葡萄糖19g，酵母浸膏9.5g，用水定容1000ml。
[0081] 控制参数：30℃、200r/min。
[0082] 终止参数：OD≥0.320
[0083] (2)一级种子培养
[0084] 一级种子培养过程为配制如表1所示原辅料种类和添加比例的一级种子培养基于扩培罐中，121℃，20min高温灭菌，冷却后，取摇瓶培养后的培养基100mL接入一级种子培养基500L中，在如表1所示控制参数条件下培养，培养过程测定OD(波长600nm、比色皿宽度1cm)、pH值，培养至表1所示终止参数时，一级种子培养完成。
[0085] 表1
[0086]
[0087]
[0088] 其中，所述玉米浆为玉米用亚硫酸溶液浸泡、稀玉米浆浓缩后得到的玉米浆，其中固含量为35重量％。
[0089] 玉米浆购自中粮生物化学(安徽)股份有限公司、甜菜糖蜜购自广西亚糖太古贸易有限公司，牛肉膏、吐温80购自安徽滁州华宇试剂材料有限公司。
[0090] 经测量，培养得到的枯草芽孢杆菌种子液中枯草芽孢杆菌活菌的含量为5×8 9
10cfu/mL，嗜酸乳杆菌种子液中嗜酸乳杆菌活菌的含量为5×10 cfu/mL，产朊假丝酵母菌种子液中产朊假丝酵母菌活菌的含量为2.5×109cfu/mL。
10cfu/mL，嗜酸乳杆菌种子液中嗜酸乳杆菌活菌的含量为5×10 cfu/mL，产朊假丝酵母菌种子液中产朊假丝酵母菌活菌的含量为2.5×109cfu/mL。
[0091] 实施例1
[0092] 将7重量份玉米淀粉渣、26重量份玉米酒精糟可溶物、5重量份玉米粉、10份柠檬酸糟、6重量份DDGS和46重量份喷浆玉米皮混合打散后(混合物的水分含量为30.50重量％，以干基计粗纤维的含量为9.20重量％，以干基计粗脂肪的含量为3.96重量％，以干基计粗灰分的含量为9.12重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为14.29重量％)与枯草芽孢杆菌种子液混合(枯草芽孢杆菌种子液的用量使枯草芽孢杆菌的接种量如表2所示)，在表2所示的第一阶段发酵条件下进行第一阶段发酵。第一阶段发酵结束后，向物料中加入嗜酸乳杆菌种子液和产朊假丝酵母菌种子液(嗜酸乳杆菌种子液和产朊假丝酵母菌种子液的用量使嗜酸乳杆菌和产朊假丝酵母菌的接种量如表3所示)，将物料装入不透气的包装袋，该包装袋上设有单向排气阀，气体仅可通过所述单向排气阀从袋内排出袋外，在表3所示的第二阶段发酵条件下进行第二阶段发酵。
[0093] 发酵完成后，测定所得微生物发酵饲料原料的气味、pH、酸度及各成分含量等，如表4和表5所示。
[0094] 实施例2
[0095] 根据实施例1的方法制备微生物发酵饲料原料，不同的是，发酵原料为7重量份玉米淀粉渣、30重量份玉米酒精糟可溶物、5重量份玉米粉、10重量份柠檬酸糟、6重量份DDGS和42重量份喷浆玉米皮的混合物，该混合物的水分含量为31.05重量％，以干基计粗纤维的含量为9.00重量％，以干基计粗脂肪的含量为3.86重量％，以干基计粗灰分的含量为9.30重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为14.50重量％；发酵过程及条件如表2和表3所示。
[0096] 发酵完成后，测定所得微生物发酵饲料原料的气味、pH、酸度及各成分含量等，结果如表4和表5所示。
[0097] 实施例3
[0098] 根据实施例1的方法制备微生物发酵饲料原料，不同的是，发酵原料为7重量份玉米淀粉渣、38重量份玉米酒精糟可溶物、7重量份玉米粉、6重量份DDGS和42重量份喷浆玉米皮的混合物，该混合物的水分含量为31.60重量％，以干基计粗纤维的含量为8.40重量％，以干基计粗脂肪的含量为3.50重量％，以干基计粗灰分的含量为9.60重量％，以干基计酸溶蛋白的含量为14.89重量％；发酵过程及条件如表2和表3所示。
[0099] 发酵完成后，测定所得微生物发酵饲料原料的气味、pH、酸度及各成分含量等，结果如表4和表5所示。
[0100] 实施例4-10
[0101] 根据实施例1的方法制备微生物发酵饲料原料，不同的是，实施例4-10的发酵过程及条件分别在表2和表3所示的条件下进行。
[0102] 发酵完成后，测定所得微生物发酵饲料原料的气味、pH、酸度及各成分含量等，结果如表4和表5所示。
[0103] 对比例1-3
[0104] 根据实施例1的方法制备微生物发酵饲料原料，不同的是，对比例1-3的发酵过程及条件分别在表2和表3所示的条件下进行。
[0105] 发酵完成后，测定所得微生物发酵饲料原料的气味、pH、酸度及各成分含量等，结果如表4和表5所示。
[0106] 表2
[0107]
[0108]
[0109] 表3
[0110]
[0111] 表2和表3中的芽孢杆菌、酵母菌和乳杆菌分别是指枯草芽孢杆菌产朊假丝酵母菌和嗜酸乳杆菌，其接种量以活菌量计算，单位是cfu/g发酵原料。
[0112] 表4
[0113]
[0114] 注：表4中芽孢杆菌、酵母菌和乳杆菌分别是指枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和嗜酸乳杆菌；水分含量和总酸含量是以微生物发酵原料的总重量为基准。
[0115] 表5
[0116]
[0117]
[0118] 注：酸溶蛋白提高率＝(微生物发酵饲料原料中酸溶蛋白的重量―发酵原料中酸溶蛋白的重量)/发酵原料中酸溶蛋白的重量×100％；粗纤维、粗蛋白、酸溶蛋白、粗脂肪和粗灰分的含量都是以微生物发酵饲料原料的干基计，余量为淀粉、矿物质和不可避免的杂质。
[0119] 由实施例1与对比例1的结果可以看出，本发明所述分阶段发酵的方法比单次发酵的方法制备出的微生物发酵饲料原料具有更多的营养成分，且分阶段发酵制备的微生物发酵饲料原料具有酸香和醇香气味，可刺激动物的食欲，提高采食量，而单次发酵的方法制备出的微生物发酵饲料原料仅具有淡酸香和淡醇香气味，且营养成分的含量较低。
[0120] 由实施例1与对比例2、3(接种顺序不同于实施例1)的结果比较可以看出，本发明所述方法制备出的微生物发酵饲料原料具有更高的营养价值和浓郁的酸香和醇香的气味。
[0121] 以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0122] 另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
[0123] 此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
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