技术领域
[0001] 本
发明属于农业
害虫防治技术领域，具体涉及一种
生物防治松褐天牛有效控制松材线虫病的方法。
背景技术
[0002] 松材线虫病，被称为松树的“癌症”，是世界上最具危险性的森林病害，是松科
植物的毁灭性疫病，由于松材线虫具有传播迅速、繁殖
力强，致死树木快的特点，松树感染松材线虫病后最快40天就可死亡，松林感病后3-5 年即可毁灭，对我国以林业为主的生态环境建设造成重大威胁。松材线虫病危害的毁灭性在于：致病力强，寄主死亡速度快；传播快，且常常猝不及防；一旦发生，治理难度大。它不仅给国民经济造成巨大损失，也破坏了自然景观及生态环境，对我国丰富的松林资源构成了严重威胁。目前，对松材线虫病，主要依靠清除所有病树来进行治理，但因为其病原生活周期的特殊性，效果不明显。因此，从致病机理出发寻找适宜的防治方法成为当务之急。
[0003] 虽然松材线虫危害严重，但其却有致命的弱点--自己不能传播扩散，必须借助松褐天牛等媒介昆虫才能传播蔓延。但是，由于松褐天牛通常在松树皮下和木质部活动、蛀食和危害，生活方式十分隐蔽，导致常规方式的防治难度很大。已有研究表明，松材线虫的生活周期可分为繁殖周期和扩散周期两部分。每年6-10月，繁殖型松材线虫寄生在健康松树木质部的
树脂道，大约以4d一代的速度大量繁殖，并逐渐遍及全株，并导致树脂道薄壁细胞和上皮细胞的破坏和死亡，造成植株失
水，蒸腾作用降低，树脂分泌急剧减少和停止。林间松材线虫病的初发病时间一般在6月初，7、8月份是松材线虫病的发病高峰，而被松材线虫侵染了的松树是松褐天牛产卵的对象，待来年1-5月，松材线虫进入滞育，形成扩散型松材线虫。松材线虫首先经
蜕皮形成扩散型三龄幼虫(LIII)，并聚集在松褐天牛蛹室周围，6月形成扩散型四龄幼虫(LIV)并随着木质部松褐天牛的
羽化出孔而被携带传播到新的健康松树，开始新一轮的侵染循环。LIV通过松褐天牛取食或产卵时在树皮上所造成的伤口进入树脂道，然后蜕皮形成成虫，这些雌、雄成虫交尾后产卵，卵孵化后变为繁殖型松材线虫并大量繁殖而使松树很快枯萎变黄再次成为松褐天牛产卵的对象，产卵孵化的松褐天牛幼虫又进入松材线虫病树内取食蛀道，形成蛹室。两者协调配合，为对方完成生活史提供所需条件，并利用对方创造的条件完成自身发育。
[0004] 总之，松材线虫的大量繁殖是松树致死的直接原因，而扩散型三龄幼虫(LIII)和扩散型四龄幼虫(LIV)形成的时间与松褐天牛羽化时间的契合则是松材线虫被携带传播的关键。可见，如果可以有效控制了松褐天牛的羽化数量，也就阻断了松材线虫病扩散蔓延的途径。因此，通过对松褐天牛幼虫的发育进行干扰和调控，可以将松褐天牛羽化时间推迟或者无法羽化，从而使扩散型四龄幼虫(LIV)无法形成并切断其传播扩散的途径，是控制松材线虫病的关键，对于松材线虫病的防治具有积极的意义。
发明内容
[0005] 为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种生物防治松褐天牛有效控制松材线虫病的方法，所述方法通过控制松褐天牛的羽化数量进而控制松材线虫的传播，进而达到生物防治松材线虫病的目的。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明所述的一种生物防治松褐天牛有效控制松材线虫病的方法，包括在含有松褐天牛幼虫的松树中施加山茱萸提取物的步骤。
[0007] 具体的，所述山茱萸提取物包括莫诺苷。
[0008] 具体的，所述山茱萸提取物按照如下步骤制备：将干燥山茱萸
粉碎，并加入6-8倍量的50-70v/v％
乙醇进行超声提取2-3小时，提取2-3次并合并提取液；将上述提取液浓缩至无醇，加水分散后，加等体积的正丁醇进行萃取，收集正丁醇萃取液浓缩并回收正丁醇，至干，即得到粗苷提取物。
[0009] 具体的，所述山茱萸提取物的施用量以莫诺苷量计为50-100μM/m3松树体。
[0010] 具体的，所述生物防治松褐天牛有效控制松材线虫病的方法，还包括将所述山茱萸提取物
吸附于具备吸附性和缓释效果的载体中，并将该载体置于含有松褐天牛幼虫的松树中的步骤。
[0012] 具体的，所述生物防治松褐天牛有效控制松材线虫病的方法，所述吸附步骤包括将所述山茱萸提取物溶于挥发性
溶剂，并与所述载体相
接触的步骤，待所述挥发性溶剂挥发后，即得到吸附有所述山茱萸提取物的载体。
[0013] 具体的，所述可挥发溶剂包括乙醇。
[0014] 本发明还公开了一种莫诺苷在生物防治松褐天牛有效控制松材线虫病领域中的应用。
[0015] 具体的，莫诺苷在生物防治松褐天牛有效控制松材线虫病领域中的应用，包括在含有松褐天牛幼虫的松树中施加莫诺苷的步骤，控制所述莫诺苷的施用量为50-100μM/m3松树体。
[0016] 本发明所述生物防治松褐天牛有效控制松材线虫病的方法，在每年的4 月底5月初松褐天牛
化蛹开始前，通过在含有松褐天牛幼虫的松树中施加山茱萸提取物/莫诺苷的方式，可以有效阻断松褐天牛的蛹化，使松褐天牛幼虫停止发育，降低松材线虫蛹和成虫种群
密度，进而减少松树死亡率，同时，也有效阻止了后续松材线虫随着松墨天牛的羽化而形成扩散型四龄线虫，有效阻截了松材线虫的扩散传播，从而实现减少松材线虫发生区松树死亡率和扩散蔓延速度，并
预防在林区进一步蔓延扩展的防控目标，可解决在松材线虫疫情发生地的松材线虫大量繁殖发生和迅速扩散的问题。
具体实施方式
[0017] 本发明下述
实施例中，所述山茱萸提取物可以采用
现有技术中已知的方式进行提取获得，诸如中国
专利CN102477053A和CN108558970A均公开了进行山茱萸提取制备含莫诺苷和
马钱苷提取物的方法。本发明方案仅利用制得粗苷即可，无需单独进行莫诺苷和马钱苷的分离机提取。
[0018] 本发明下述实施例中，所述山茱萸提取物按照如下方法制备：取2kg 干燥山茱萸粉碎，用14L 70％乙醇超声提取3小时，提取3次，合并提取液，浓缩至无醇，加1.8L水分散，加等体积的正丁醇萃取3次，回收正丁醇层并浓缩回收正丁醇至干，得到粗苷，即为所需山茱萸提取物。采用现有技术已知方法测定所述提取物中莫诺苷和马钱苷的含量。
[0019] 本发明下述实施例中，所述山茱萸提取物/莫诺苷通过吸附于硅橡胶塞头中进行使用，即将所述山茱萸提取物/莫诺苷与乙醇充分混合后滴入硅橡胶塞头，待乙醇挥发后，制得含莫诺苷1μl的硅橡胶塞头进行使用。
[0020] 实施例1
[0021] 在吉林省吉林市松树种植地域区，于4月底5月初松褐天牛化蛹开始前，选择90株经检测含有松褐天牛幼虫的马尾松进行效果验证，具体识别方法为：有松材线虫危害的松树钻孔后不流脂，有松褐天牛产卵刻槽痕迹，部分松针失绿黄化。
[0022] 选取松树中，以30株作为第一实验组、30株作为第二实验组、30株作为空白组，在树体向阳面木质部松墨天牛蛀入孔用电钻钻1cm直径2cm 深的孔，与松褐天牛幼虫蛹室相通。
[0023] 在第一实验组松树的孔中插入若干吸附有山茱萸提取物的硅橡胶塞头 (莫诺苷吸附量为1μl/个)，控制所述山茱萸提取物以莫诺苷量计为 80μM/m3松树体；
[0024] 在第二实验组松树的孔中插入若干吸附有莫诺苷化合物的硅橡胶塞头 (莫诺苷吸附量为1μl/个)，控制所述莫诺苷量为80μM/m3松树体；
[0025] 空白组松树中不进行任何处理。
[0026] 10天后，剖出松褐天牛幼虫进行观察，分别计算松褐天牛中蛹和幼虫的含量，记录于下表1。
[0027] 表1各组松褐天牛处理情况
[0028] 编号 蛹含量/％ 幼虫含量/％第一实验组 18％ 82％
第二实验组 24％ 76％
空白组 84％ 16％
[0029] 可见，本实施例中通过在松树中加入山茱萸提取物/莫诺苷，可以有效阻断松褐天牛的蛹化，使松褐天牛幼虫停止发育，降低松材线虫蛹和成虫种群密度，进而减少松树死亡率，同时，也有效阻止了后续松材线虫随着松墨天牛的羽化而形成扩散型四龄线虫，有效阻截了松材线虫的扩散传播，从而实现减少松材线虫发生区松树死亡率和扩散蔓延速度。
[0030] 后续进一步对上述各组松树的生长情况进行观察，第一实验组和第二实验组中松树感染松材线虫病的比例低于10％，而空白组则达到80％以上，可见，本发明所述方法可以对松材线虫病进行有效的防治。
[0031] 实施例2
[0032] 同应
用例1中操作方式相同的，于4月底5月初松褐天牛化蛹开始前，在吉林省吉林市松树种植地域区，选择100株经检测含有松褐天牛幼虫的马尾松进行效果验证，具体识别方法为：有松材线虫危害的松树钻孔后不流脂，有松褐天牛产卵刻槽痕迹，部分松针失绿黄化。
[0033] 选取松树中，以25株作为第一实验组、25株作为第二实验组、25株作为第三实验组、25株作为第四实验组，在树体向阳面木质部松墨天牛蛀入孔用电钻钻1cm直径2cm深的孔，与松褐天牛幼虫蛹室相通。
[0034] 在第一实验组松树的孔中插入若干吸附有山茱萸提取物的硅橡胶塞头(莫诺苷吸附量为1μl/个)，控制所述山茱萸提取物以莫诺苷量计为 50μM/m3松树体；
[0035] 在第二实验组松树的孔中插入若干吸附有山茱萸提取物的硅橡胶塞头 (莫诺苷吸附量为1μl/个)，控制所述山茱萸提取物以莫诺苷量计为 100μM/m3松树体；
[0036] 在第三实验组松树的孔中插入若干吸附有莫诺苷化合物的硅橡胶塞头 (莫诺苷吸附量为1μl/个)，控制所述莫诺苷量为50μM/m3松树体；
[0037] 在第四实验组松树的孔中插入若干吸附有莫诺苷化合物的硅橡胶塞头 (莫诺苷吸附量为1μl/个)，控制所述莫诺苷量为100μM/m3松树体。
[0038] 10天后，剖出松褐天牛幼虫进行观察，分别计算松褐天牛中蛹和幼虫的含量，记录于下表2。
[0039] 表2各组松褐天牛处理情况
[0040]编号 蛹含量/％ 幼虫含量/％
第一实验组 21％ 79％
第二实验组 17％ 83％
第三实验组 26％ 74％
第四实验组 23％ 77％
[0041] 可见，本实施例中通过在松树中加入山茱萸提取物/莫诺苷，在 50-100μM/m3松树体的施加量下，均具有较好的阻截效果，可有效阻断松褐天牛的蛹化，使松褐天牛幼虫停止发育，降低松材线虫蛹和成虫种群密度，进而减少松树死亡率，同时，也有效阻止了后续松材线虫随着松墨天牛的羽化而形成扩散型四龄线虫，有效阻截了松材线虫的扩散传播，从而实现减少松材线虫发生区松树死亡率和扩散蔓延速度。
[0042] 后续进一步对上述各组松树的生长情况进行观察，各实验组中松树感染松材线虫病的比例均低于10％，可见，本发明所述方法可以对松材线虫病进行有效的防治。
[0043] 显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的
基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
