专利汇可以提供一种利用苹果废渣生产果胶酶生防诱导剂的方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种利用苹果废渣为主要原料来生产果胶酶 生物 防治诱导剂的方法,本发明属于 微生物 农药 和环境保护技术领域。 发酵 果胶酶选用的菌株为高产果胶酶且制剂诱导抗病效果明显的 草酸 青霉BZH-2002,果胶酶生防诱导剂的生产方法包括5个步骤:菌种活化及保存、 种子 制备、固态发酵、后处理技术、果胶酶活 力 的测定,以苹果渣作为发酵培养基的主要 碳 源,无机 硫酸 铵为氮源。本发明技术方案不仅为苹果废渣的资源化利用提供了一条新途径,而且生产的果胶酶生防诱导剂可用于田间施用,对多种 植物 病害起到较好的防治作用。,下面是一种利用苹果废渣生产果胶酶生防诱导剂的方法专利的具体信息内容。
1.利用苹果废渣生产果胶酶生防诱导剂的方法,其特征在于:发酵培养基以苹果废渣为主要原料,生产步骤包括:
1、菌种的活化及保存:本发明所用草酸青霉BZH-2002菌株是从环境中分离、筛选获得,该菌株保存于PDA培养基上。
2、种子制备:培养基组成比例(W/W)如下:苹果渣25%,硫酸铵2%,自来水73%,少量磷酸盐。按上述比例配制的培养基分装于500mL三角瓶中,每瓶30g,于0.1Mpa压力下蒸
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气灭菌20分钟,冷却后接种1所述方法制备的菌种,接种浓度10-10 个孢子/g培养基,于温度28-30℃、环境湿度70%左右,接触空气条件下,静置培养48-72小时,制得草酸青霉种子。
3、固态发酵:按2所述的原料比配制培养基:培养基分装于搪瓷盘中(长、宽、高分别为30cm、20cm、7cm),每盘500g,不用灭菌,直接生料发酵。由步骤2培养获得的子种按物料比10%接种,接种后于30℃左右、环境湿度70%左右、接触空气条件下,静置培养72小时,用水浸提,即得果胶酶生防诱导剂。
4、后处理:每盘发酵产物加入1000mL去离子水浸提1小时,100目尼龙纱布挤压过滤,收集滤液;滤渣再用500mL去离子水浸提一次,再挤压过滤,收集滤液;两次滤液合并后定容至2000mL,于离心机上3000rpm下离心10分钟,上清液即为果胶酶提取液。
5、果胶酶测定采用脱胶法,测定方法如下:取5mL当天配制的1%果胶溶液(用pH4.8的0.05M柠檬/柠檬酸三钠缓冲液和柑橘果胶配制),置于25X250mm的试管中,加入pH4.8的0.05M柠檬/柠檬酸三钠缓冲液10mL,试管于40℃恒温水浴预热平衡5分钟,加入5mL稀释一定倍数的酶液,并立即开始计时,反应3分钟后取样1mL放入试管,立即加入2滴1%I2/KI溶液,摇匀,再加入2mL异丙醇,转动试管,观察沉淀是否消失,准确记录脱胶时间。酶活力单位定义:在上述操作条件下,30分钟使1毫克果胶完全胶胶所需的酶量为一个酶活力单位。
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