微藻肥料及其制备方法
阅读：677发布：2020-05-25
专利汇可以提供微藻肥料及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及微藻 肥料 及其制备方法，微藻肥料由微藻和肥料组成，其制备方法为将微藻加入到肥料中，即得微藻肥料。本发明可以提高作物根系中的糖含量，进而提高作物的抗逆性，同时，本发明还可以改善作物品质。，下面是微藻肥料及其制备方法专利的具体信息内容。
1.微藻肥料，其特征在于，由肥料和微藻组成；
所述肥料是单质肥、复混肥、掺混肥、水溶肥、有机无机肥、生物有机肥和有机肥中的一种或任意比例的几种；
所述微藻是小球藻、杜氏盐藻和雨生红球藻中的一种或任意比例的几种。
2.如权利要求1所述微藻肥料，其特征在于，所述微藻是微藻培养液和微藻粉中的一种或任意比例的两种；
所述微藻粉是将微藻培养液烘干后，得到的粉剂。
3.如权利要求2所述微藻肥料，其特征在于，微藻培养液按照以下步骤进行：将微藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段微藻培养液；
所述培养基为BG11或BM中的一种；
培养条件为培养温度18～27℃；光照强度为60～90μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为2～10%；培养时间4～7天。
4.如权利要求3所述微藻肥料，其特征在于，所述培养基中含有三磷酸腺苷。
5.如权利要求4所述微藻肥料，其特征在于，培养基和三磷酸腺苷的质量比是999.95～
999.99:0.01～0.05。
6.如权利要求4所述微藻肥料，其特征在于，培养基中还含有甘氨酸组分；所述甘氨酸组分是甘氨酸、甘氨酸钠和甘氨酸钾中的一种或任意比例的几种；培养基、三磷酸腺苷和甘氨酸组分的质量比是999.95～999.99:0.01～0.05:0.01～0.05。
7.如权利要求1至6任意一项所述微藻肥料，其特征在于，将游动生长阶段微藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至微藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段微藻培养液；
所述缺氮培养基是缺氮BG11培养基或缺氮BM培养基中的一种；
培养条件为培养温度28～32℃；光照强度为100～200μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为
10～15%。
8.如权利要求7所述微藻肥料，其特征在于，缺氮培养基的的pH是3.5～5.5。
9.如权利要求8所述微藻肥料，其特征在于，缺氮培养基中还包括碘化物和硫酸铜；所述碘化物为碘化钾和碘化钠中的一种或任意比例的几种；缺氮培养基、碘化物和硫酸铜的质量比是999.75～999.945:0.005～0.05:0.05～0.2。
10.微藻肥料的制备方法，其特征在于，将微藻加入到肥料中，即得微藻肥料；微藻和肥料的质量比是1～96:4～99；所述微藻是微藻培养液和微藻粉中的一种或任意比例的两种。
微藻肥料及其制备方法
[0001]
技术领域
[0002] 本发明涉及微藻肥料及其制备方法。
背景技术
[0003] 雨生红球藻被公认为自然界中生产天然虾青素的最好生物，因此，利用这种微藻提取虾青素无疑具有广阔的发展前景，已成为国际上天然虾青素生产的研究热点。
[0004] 雨生红球藻于自然界中主要生长分布在小的水塘和雨后积水形成的小的临时性水泡中，是自然界中合成和积累虾青素最多的微生物。雨生红球藻对环境的适应能力极强：在适宜的生长条件下，它以带鞭毛的游动细胞进行快速的生长繁殖；而当条件变得恶劣时，雨生红球藻的游动细胞就会失去鞭毛，细胞壁加厚，同时积累大量的红色物质，细胞由此进入休眠状态。休眠40年后细胞仍有活性，在适宜的条件下，还能繁殖产生新的绿色细胞。
[0005] 目前，由于盲目追求作物产量而忽视了对土壤的调理。
[0006] 土壤环境遭到了很大的破坏，土壤板结、盐渍化以及酸化均是常见问题，而且自然环境也变得比较复杂，如倒春寒，为了改变和适应自然环境的变化，因此对植物的抗逆性提出了更高的要求，市场需要能改变土壤环境和提高植物抗逆性的产品。
[0007] 土壤生态环境的变化也使得作物的品质产生了变化，人们常说现在的瓜果没有以前的瓜果味了，蔬菜也不如以前的好吃了，市场也需要可以提高作物品质的产品。
发明内容
[0008] 本发明提供微藻肥料及其制备方法，解决技术问题是1）提高作物的抗逆性；2）改善作物的品质。
[0009] 为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：微藻肥料，由肥料和微藻组成；
所述肥料是单质肥、复混肥、掺混肥、水溶肥、有机无机肥、生物有机肥和有机肥中的一种或任意比例的几种；
所述微藻是小球藻、杜氏盐藻和雨生红球藻中的一种或任意比例的几种。
所述肥料是单质肥、复混肥、掺混肥、水溶肥、有机无机肥、生物有机肥和有机肥中的一种或任意比例的几种；
所述微藻是小球藻、杜氏盐藻和雨生红球藻中的一种或任意比例的几种。
[0010] 优选地，所述微藻是微藻培养液和微藻粉中的一种或任意比例的两种；所述微藻粉是将微藻培养液烘干后，得到的粉剂。
[0011] 优选地，微藻培养液按照以下步骤进行：将微藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段微藻培养液；所述培养基为BG11或BM中的一种；
培养条件为培养温度18～27℃；光照强度为60～90μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为2～10%；培养时间4～7天。
培养条件为培养温度18～27℃；光照强度为60～90μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为2～10%；培养时间4～7天。
[0012] 优选地，所述培养基中含有三磷酸腺苷。
[0013] 优选地，培养基和三磷酸腺苷的质量比是999.95～999.99:0.01～0.05。
[0014] 优选地，培养基中还含有甘氨酸组分；所述甘氨酸组分是甘氨酸、甘氨酸钠和甘氨酸钾中的一种或任意比例的几种；培养基、三磷酸腺苷和甘氨酸组分的质量比是999.95～999.99:0.01～0.05:0.01～0.05。
[0015] 优选地，将游动生长阶段微藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至微藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段微藻培养液；所述缺氮培养基是缺氮BG11培养基或缺氮BM培养基中的一种；
培养条件为培养温度28～32℃；光照强度为100～200μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为
10～15%。
培养条件为培养温度28～32℃；光照强度为100～200μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为
10～15%。
[0016] 优选地，缺氮培养基的的pH是3.5～5.5。
[0017] 优选地，缺氮培养基中还包括碘化物和硫酸铜；所述碘化物为碘化钾和碘化钠中的一种或任意比例的几种；缺氮培养基、碘化物和硫酸铜的质量比是999.75～999.945:0.005～0.05:0.05～0.2。
[0018] 微藻肥料的制备方法，将微藻加入到肥料中，即得微藻肥料；微藻和肥料的质量比是1～96:4～99。
[0019] 发明具有以下有益技术效果：1.本发明可以改变土壤生态环境，提高作物的抗逆性。
[0020] 2. 本发明可以提高作物品质。
具体实施方式
[0021] 下面结合具体实例进一步说明本发明。
[0022] 实施例1将雨生红球藻培养液加入到水溶肥中，即得微藻肥料；雨生红球藻培养液和水溶肥的质量比是5:95。
[0023] 实施例2将雨生红球藻培养液加入到水溶肥中，即得微藻肥料；雨生红球藻培养液和水溶肥的质量比是5:95。
[0024] 雨生红球藻培养液按照以下步骤进行：将雨生红球藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段雨生红球藻培养液；所述培养基为BG11；
培养条件为培养温度20℃；光照强度为80μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为6%；培养时间7天。
培养条件为培养温度20℃；光照强度为80μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为6%；培养时间7天。
[0025] 实施例3将雨生红球藻加入到水溶肥中，即得微藻肥料；雨生红球藻和水溶肥的质量比是5:95。
[0026] 雨生红球藻培养液按照以下步骤进行：将雨生红球藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段雨生红球藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷；培养条件为培养温度20℃；光照强度为80μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为6%；培养7天。
[0027] 所述培养基为BG11；培养基和三磷酸腺苷的质量比是999.99:0.01。
[0028] 实施例4将雨生红球藻加入到水溶肥中，即得微藻肥料；雨生红球藻和水溶肥的质量比是5:95。
[0029] 雨生红球藻培养液按照以下步骤进行：将雨生红球藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段雨生红球藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷；培养条件为培养温度20℃；光照强度为80μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为6%；培养7天。
[0030] 培养基中还含有甘氨酸组分；所述甘氨酸组分是甘氨酸钾。
[0031] 所述培养基为BG11；培养基、三磷酸腺苷和甘氨酸组分的质量比是999.98:0.01:0.01。
[0032] 实施例5将不动生长阶段雨生红球藻培养液加入到水溶肥中，即得微藻肥料；不动生长阶段雨生红球藻培养液和水溶肥的质量比是5:95。
[0033] 雨生红球藻培养液按照以下步骤进行：将雨生红球藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段雨生红球藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷；培养条件为培养温度20℃；光照强度为80μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为6%；培养7天。
[0034] 所述培养基为BG11；培养基和三磷酸腺苷的质量比是999.99:0.01。
[0035] 将游动生长阶段雨生红球藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至雨生红球藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段雨生红球藻培养液；培养条件为培养温度30℃；光照强度为150μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为14%。所述缺氮培养基是缺氮BG11培养基。
[0036] 实施例6将不动生长阶段雨生红球藻培养液加入到水溶肥中，即得微藻肥料；不动生长阶段雨生红球藻培养液和水溶肥的质量比是5:95。
[0037] 雨生红球藻培养液按照以下步骤进行：将雨生红球藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段雨生红球藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷；培养条件为培养温度20℃；光照强度为80μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为6%；培养7天。
[0038] 培养基中还含有甘氨酸组分；所述甘氨酸组分是甘氨酸钾。
[0039] 所述培养基为BG11；培养基、三磷酸腺苷和甘氨酸组分的质量比是999.98:0.01:0.01。
[0040] 将游动生长阶段雨生红球藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至雨生红球藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段雨生红球藻培养液；培养条件为培养温度30℃；光照强度为150μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为14%。所述缺氮培养基是缺氮BG11培养基。
[0041] 实施例7将不动生长阶段雨生红球藻培养液加入到水溶肥中，即得微藻肥料；不动生长阶段雨生红球藻培养液和水溶肥的质量比是5:95。
[0042] 雨生红球藻培养液按照以下步骤进行：将雨生红球藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段雨生红球藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷；培养条件为培养温度20℃；光照强度为80μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为6%；培养7天。
[0043] 培养基中还含有甘氨酸组分；所述甘氨酸组分是甘氨酸钾。
[0044] 所述培养基为BG11；培养基、三磷酸腺苷和甘氨酸组分的质量比是999.98:0.01:0.01。
[0045] 将游动生长阶段雨生红球藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至雨生红球藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段雨生红球藻培养液；培养条件为培养温度30℃；光照强度为150μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为14%。
[0046] 所述缺氮培养基是缺氮BG11培养基。
[0047] 缺氮培养基的的pH是6.0。
[0048] 缺氮培养基中还包括碘化钾和硫酸铜；缺氮培养基、碘化钾和硫酸铜的质量比是999.945:0.005:0.05。
[0049] 实施例8将不动生长阶段雨生红球藻培养液加入到水溶肥中，即得微藻肥料；不动生长阶段雨生红球藻培养液和水溶肥的质量比是5:95。
[0050] 雨生红球藻培养液按照以下步骤进行：将不动生长阶段雨生红球藻培养液加入到水溶肥中，即得微藻肥料；不动生长阶段雨生红球藻培养液和水溶肥的质量比是5:95。
[0051] 提高雨生红球藻中虾青素含量的方法，将雨生红球藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段雨生红球藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷；培养条件为培养温度20℃；光照强度为80μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为6%；培养7天。
[0052] 培养基中还含有甘氨酸组分；所述甘氨酸组分是甘氨酸钾。
[0053] 所述培养基为BG11；培养基、三磷酸腺苷和甘氨酸组分的质量比是999.98:0.01:0.01。
[0054] 将游动生长阶段雨生红球藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至雨生红球藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段雨生红球藻培养液；培养条件为培养温度30℃；光照强度为150μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为14%。
[0055] 所述缺氮培养基是缺氮BG11培养基。
[0056] 缺氮培养基的的pH是4.5。
[0057] 缺氮培养基中还包括碘化钾和硫酸铜；缺氮培养基、碘化钾和硫酸铜的质量比是999.945:0.005:0.05。
[0058] 实施例9将不动生长阶段微藻粉、磷酸二氢钾、尿素和硫酸铵混合均匀后，即得微藻水溶肥；不动生长阶段微藻粉、磷酸二氢钾、尿素和硫酸铵的质量比是25:25:25:25。
[0059] 微藻培养液按照以下步骤进行：将微藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段微藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷。
[0061] 小球藻微藻粉按照以下步骤进行：将小球藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段小球球藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷；培养条件为培养温度18℃；光照强度为60μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为3%；培养5天。
[0062] 培养基中还含有甘氨酸组分；所述甘氨酸组分是甘氨酸钾。
[0063] 所述培养基为BM；培养基、三磷酸腺苷和甘氨酸组分的质量比是999.98:0.04:0.05。
[0064] 将游动生长阶段小球藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至小球藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段小球藻培养液，将不动生长阶段杜氏盐藻培养液在进口温度为120℃，出口温度为60℃的烘干机中烘干，得微藻粉；培养条件为培养温度28℃；光照强度为120μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为11%。
[0065] 所述缺氮培养基是缺氮BG11培养基。
[0066] 缺氮培养基的的pH是3.6。
[0067] 缺氮培养基中还包括碘化钠和硫酸铜；缺氮培养基、碘化钠和硫酸铜的质量比是999.912:0.008:0.08。
[0068] 实施例11将不动生长阶段杜氏盐藻培养液、有益微生物和动物粪便混合后，通过造粒烘干后，即得微藻生物有机肥；不动生长阶段杜氏盐藻培养液、枯草芽孢杆菌和动物粪便的质量比是
45:0.2:54.8。
45:0.2:54.8。
[0069] 杜氏盐藻培养液按照以下步骤进行：将杜氏盐藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段杜氏盐藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷；培养条件为培养温度25℃；光照强度为70μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为4%；培养6天。
[0070] 培养基中还含有甘氨酸组分；所述甘氨酸组分是甘氨酸钾和甘氨酸钠按照质量比1:1的组合物。
[0071] 所述培养基为BG11；培养基、三磷酸腺苷和甘氨酸组分的质量比是999.97:0.01:0.02。
[0072] 将游动生长阶段杜氏盐藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至杜氏盐藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段杜氏盐藻培养液；培养条件为培养温度31℃；光照强度为180μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为15%。
[0073] 所述缺氮培养基是缺氮BG11培养基。
[0074] 缺氮培养基的的pH是4.2。
[0075] 缺氮培养基中还包括碘化钾、碘化钠和硫酸铜；缺氮培养基、碘化钾、碘化钠和硫酸铜的质量比是999.895:0.005:0.01:0.1。
[0076] 实施例12将不动生长阶段雨生红球藻培养液加入到复混肥中，通过造粒、烘干、冷却和筛分后，即得微藻肥料；不动生长阶段雨生红球藻培养液和复混肥的质量比是15:85。
[0077] 雨生红球藻培养液按照以下步骤进行：将雨生红球藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段雨生红球藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷；培养条件为培养温度22℃；光照强度为85μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为7%；培养7天。
[0078] 培养基中还含有甘氨酸组分；所述甘氨酸组分是甘氨酸钠。
[0079] 所述培养基为BM；培养基、三磷酸腺苷和甘氨酸组分的质量比是999.93:0.03:0.04。
[0080] 将游动生长阶段微藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至微藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段微藻培养液；
培养条件为培养温度32℃；光照强度为200μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为12%。
培养条件为培养温度32℃；光照强度为200μmol/(m2· s)；二氧化碳浓度为12%。
[0081] 所述缺氮培养基是缺氮BG11培养基。
[0082] 缺氮培养基的的pH是5.5。
[0083] 缺氮培养基中还包括碘化钾和硫酸铜；缺氮培养基、碘化钾和硫酸铜的质量比是999.845:0.005:0.15。
[0084] 实施例13将不动生长阶段微藻培养液加入到尿素溶液中，通过喷浆造粒、烘干、冷却和筛分后，即得微藻肥料；不动生长阶段微藻培养液和尿素溶液的质量比是6:94。
[0085] 微藻培养液按照以下步骤进行：将微藻接种至培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，得游动生长阶段微藻培养液，培养基中含有三磷酸腺苷。
[0086] 将游动生长阶段微藻培养液接种至缺氮培养基中，置于封闭式光生物反应器中，进行培养，至微藻培养液转变为红色，且颜色不再发生明显改变，即得不动生长阶段微藻培养液。
[0087] 实施例14微藻肥料，由肥料和微藻组成。
[0088] 将微藻加入到肥料中，即得微藻肥料。
[0089] 下面结合实验数据进一步说明本发明的有益效果：实验一
1、实验
供试材料
1材料与方法：
1.1试验地点：烟台广源食品检测有限公司。
1、实验
供试材料
1材料与方法：
1.1试验地点：烟台广源食品检测有限公司。
[0090] 1.2实验检测：虾青素含量。
[0091] 1.3供试材料：空白（除游动生长阶段雨生红球藻培养液中培养基为BG11外，其它制备方法均与实施例1一致）、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、对比1（除游动生长阶段雨生红球藻培养液中培养基为BG11，不含ATP外，而是将ATP加入到缺氮BG11培养基中，其它制备方法均与实施例1一致）和对比2（除游动生长阶段雨生红球藻培养液中培养基为BG11，不含ATP和甘氨酸钾外，而是将ATP和甘氨酸钾加入到缺氮BG11培养基中，其它制备方法均与实施例2一致）中制备的不动生长阶段雨生红球藻培养液。
[0092] 1.4检测方法：制备样品：
1）分别取空白（除游动生长阶段雨生红球藻培养液中培养基为BG11外，其它制备方法均与实施例1一致）、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、对比1（除游动生长阶段雨生红球藻培养液中培养基为BG11，不含ATP外，而是将ATP加入到缺氮BG11培养基中，其它制备方法均与实施例1一致）和对比2（除游动生长阶段雨生红球藻培养液中培养基为BG11，不含ATP和甘氨酸钾外，而是将ATP和甘氨酸钾加入到缺氮BG11培养基中，其它制备方法均与实施例
2一致）制备的不动生长阶段雨生红球藻培养液，按照细胞总OD630mm=5计算每个样品的体积置于离心机中，以4500rpm的转速，在4℃条件下离心8.5min，弃上清液；2）将离心得到的藻细胞用pH6.8的PBS吹洗，转移到1.5mEP管中，以4500rpm的转速，在4℃条件下离心
8.5min，弃上清液；3）加入适量直径0.2mm氧化锆珠于EP管中，并加入300μL丙酮，将其置于细胞破碎仪中，使用细菌芽胞模式进行破碎，4000r/min，破碎3min，间隔时间1min；4）将破碎后的细胞加入200μL丙酮后静置5min，放入离心机中，以13000rpm转速离心3min，取上清液转移到另一离心管中；5）加500μL丙酮到EP管内充分提取虾青素，以3000rpm转速离心
3min，取上清液转移到另一离心管中，再重复一次；6）将三次得到的上清液混合，定容到
1.5ml，置于-80℃冰箱中以待HPLC检测。
1）分别取空白（除游动生长阶段雨生红球藻培养液中培养基为BG11外，其它制备方法均与实施例1一致）、实施例5、实施例6、实施例7、实施例8、对比1（除游动生长阶段雨生红球藻培养液中培养基为BG11，不含ATP外，而是将ATP加入到缺氮BG11培养基中，其它制备方法均与实施例1一致）和对比2（除游动生长阶段雨生红球藻培养液中培养基为BG11，不含ATP和甘氨酸钾外，而是将ATP和甘氨酸钾加入到缺氮BG11培养基中，其它制备方法均与实施例
2一致）制备的不动生长阶段雨生红球藻培养液，按照细胞总OD630mm=5计算每个样品的体积置于离心机中，以4500rpm的转速，在4℃条件下离心8.5min，弃上清液；2）将离心得到的藻细胞用pH6.8的PBS吹洗，转移到1.5mEP管中，以4500rpm的转速，在4℃条件下离心
8.5min，弃上清液；3）加入适量直径0.2mm氧化锆珠于EP管中，并加入300μL丙酮，将其置于细胞破碎仪中，使用细菌芽胞模式进行破碎，4000r/min，破碎3min，间隔时间1min；4）将破碎后的细胞加入200μL丙酮后静置5min，放入离心机中，以13000rpm转速离心3min，取上清液转移到另一离心管中；5）加500μL丙酮到EP管内充分提取虾青素，以3000rpm转速离心
3min，取上清液转移到另一离心管中，再重复一次；6）将三次得到的上清液混合，定容到
1.5ml，置于-80℃冰箱中以待HPLC检测。
[0093] 虾青素含量检测：将检测到的紫外波长467nm下的峰面积进行加和，利用虾青素标准曲线计算样品中虾青素含量。
[0094] 1）高效液相色谱中流动相由二氯甲烷、乙腈和甲醇按照7:2:1的体积比进行混合，色谱柱为C18柱，填充颗粒大小为5μm，色谱柱内径4.6mm，长度250mm；2）采用等度洗脱的方式进行洗脱，总的运行时间为32min，样品注射体积为10μl，流速恒定为0.7ml/min。3）检测器为二极管阵列检测器（DAD，Agilengt 1260 series）（Agilengt Technologies，Waldbronn，Germany），检测波长为467nm，分色在30℃下在相同的色谱柱上分析；4）质谱参数设置如下：离子喷射源ESI（负模式）；喷雾器喷射面积40pis；干气温度为325℃；干气（氮气）流速8L/min。
[0095] 本实验除检测物不同外，其它操作均一致。
[0096] 2结果与分析虾青素含量，见表1。
[0097] 表1样品 虾青素含量（%）
实施例5 1.8
实施例6 2.1
实施例7 2.6
实施例8 2.8
空白 0.6
对比1 0.8
对比2 1.1
由表1可以看出，本发明较空白可以提高虾青素的含量；同样加入ATP的实施例5和对比
1，分别处理不同生长阶段的雨生红球藻，最终获得的虾青素含量差别很大；同样加入ATP和甘氨酸钾的实施例6和对比2，分别处理不同生长阶段的雨生红球藻，最终获得的虾青素含量差别也很大；而既对游动生长阶段处理又对不动生长阶段处理的雨生红球藻中虾青素含量最高；由实施例7和实施例8数据可以看出，进一步调低pH更有利于虾青素含量的提高。由此可见，雨生红球藻不同生长阶段采用不同的处理对虾青素含量的提高均有影响。
实施例5 1.8
实施例6 2.1
实施例7 2.6
实施例8 2.8
空白 0.6
对比1 0.8
对比2 1.1
由表1可以看出，本发明较空白可以提高虾青素的含量；同样加入ATP的实施例5和对比
1，分别处理不同生长阶段的雨生红球藻，最终获得的虾青素含量差别很大；同样加入ATP和甘氨酸钾的实施例6和对比2，分别处理不同生长阶段的雨生红球藻，最终获得的虾青素含量差别也很大；而既对游动生长阶段处理又对不动生长阶段处理的雨生红球藻中虾青素含量最高；由实施例7和实施例8数据可以看出，进一步调低pH更有利于虾青素含量的提高。由此可见，雨生红球藻不同生长阶段采用不同的处理对虾青素含量的提高均有影响。
[0099] 1.2实验检测：检测根系中可溶性糖和脯氨酸含量；检测葡萄果实中可溶性固形物、可溶性总糖、可滴定酸、维生素C含量。
[0100] 1.3供试材料：空白（除不含雨生红球藻外，其它制备方法与实施例1均一致）、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、实施例7。水溶肥由青岛大救星海洋生物科技有限公司提供，含量为20-20-20，原料组成一致。
[0101] 1.4检测方法：根系检测：取休眠期的根粗度直径在2～3cm，洗净去须根，剪成3cm长的根段，混匀晾晒后，于-6℃，保存10h后取出检测；果实检测：随机选取100颗葡萄，进行检测。
[0102] 本实验除检测物不同外，其它操作均一致。
[0103] 2结果与分析根系中可溶性糖和脯氨酸含量见表2
表2
可溶性糖（%） 脯氨酸（μg/g）
空白 1.24 72.4
实施例1 1.31 74.3
实施例2 1.38 75.4
实施例3 1.52 77.8
实施例4 1.59 78.3
实施例5 1.65 79.6
实施例6 1.73 80.5
实施例7 1.84 81.6
实施例8 1.93 83.2
由表2可以看出，本发明可以提高葡萄根系中可溶性糖和脯氨酸的含量，根系中可溶性糖和脯氨酸的含量越高，作物的抗逆性越好，加入微藻的实施例1效果好于未加入微藻的空白；加入培养后的微藻的实施例2好于加入普通微藻的实施例1；加入三磷酸腺苷的实施例3效果又好于实施例2；加入甘氨酸钾的实施例4效果又好于仅加入三磷酸腺苷的实施例3；由实施例7和实施例8数据比较可以看出，实施例8培养的微藻效果更优。
表2
可溶性糖（%） 脯氨酸（μg/g）
空白 1.24 72.4
实施例1 1.31 74.3
实施例2 1.38 75.4
实施例3 1.52 77.8
实施例4 1.59 78.3
实施例5 1.65 79.6
实施例6 1.73 80.5
实施例7 1.84 81.6
实施例8 1.93 83.2
由表2可以看出，本发明可以提高葡萄根系中可溶性糖和脯氨酸的含量，根系中可溶性糖和脯氨酸的含量越高，作物的抗逆性越好，加入微藻的实施例1效果好于未加入微藻的空白；加入培养后的微藻的实施例2好于加入普通微藻的实施例1；加入三磷酸腺苷的实施例3效果又好于实施例2；加入甘氨酸钾的实施例4效果又好于仅加入三磷酸腺苷的实施例3；由实施例7和实施例8数据比较可以看出，实施例8培养的微藻效果更优。
[0104] 葡萄果实中可溶性固形物、可溶性总糖、可滴定酸、维生素C含量见表3表3 可溶性固形物（%） 可溶性总糖（%） 可滴定酸（%） 维生素C（mg/100g）空白 1.24 72.4 0.49 3.73
实施例1 1.31 74.3 0.46 3.75
实施例2 1.38 75.4 0.45 3.76
实施例3 1.52 77.8 0.42 3.77
实施例4 1.59 78.3 0.42 3.77
实施例5 1.65 79.6 0.41 3.78
实施例6 1.73 80.5 0.40 3.78
实施例7 1.84 81.6 0.40 3.79
实施例8 1.93 83.2 0.38 3.80
由表3可以看出，本发明可以提高葡萄中可溶性固形物、可溶性总糖、可滴定酸和维生素C的含量，可以改善作物品质。
实施例1 1.31 74.3 0.46 3.75
实施例2 1.38 75.4 0.45 3.76
实施例3 1.52 77.8 0.42 3.77
实施例4 1.59 78.3 0.42 3.77
实施例5 1.65 79.6 0.41 3.78
实施例6 1.73 80.5 0.40 3.78
实施例7 1.84 81.6 0.40 3.79
实施例8 1.93 83.2 0.38 3.80
由表3可以看出，本发明可以提高葡萄中可溶性固形物、可溶性总糖、可滴定酸和维生素C的含量，可以改善作物品质。
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