一种松茸面膜液的制备方法
阅读：35发布：2020-05-11
专利汇可以提供一种松茸面膜液的制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种松茸面膜液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)将燕麦、松茸、三七、石斛和葛根分别通过物理 破碎 后与 水 混合打浆制备预处理液；(2)加热搅拌过滤制备燕麦、松茸、三七、石斛和葛根预处理液；(3)将(2)中提取液过滤后上清液与芦荟汁和 植物 油 搅拌混合，均质得所述面膜液。本发明采用药食同源的植物为原料(燕麦，松茸，葛根， 植物油 和芦荟等天然成分)以水为介质，经过提取除杂工艺，直接制备一种安全、温和、补水美白效果显著的全植物美白面膜液，不含有香精、 防腐剂 以及 杀菌剂 ，对 皮肤 滋养的同时不产生刺激和 副作用 。，下面是一种松茸面膜液的制备方法专利的具体信息内容。
1.一种松茸面膜液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将燕麦、松茸、三七、石斛和葛根分别通过物理破碎后与水混合打浆制备预处理液；
(2)加热搅拌过滤制备燕麦、松茸、三七、石斛和葛根预处理液；
(3)将(2)中提取液过滤后上清液与芦荟汁和植物油搅拌混合，均质得所述面膜液；
优选地，所述植物油选自以下一种或多种：橄榄油、青刺果油、澳洲坚果油。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述燕麦、松茸、三七、石斛和葛根预处理液的制备方法包括以下步骤：
将燕麦粉、松茸、三七、石斛、葛根分别和水混合后打浆，超声提取后取滤液为所述预处理液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，
所述燕麦粉和水的比例为1:10～200g/mL，优选为1:20～150g/mL，更优选为1:30～
130g/mL，最优选为1:50g/mL；
所述松茸和水的比例为1:10～100g/mL，优选为1:20～80g/mL，更优选为1:30～60g/mL，最优选为1:50g/mL；
所述三七粉和水的比例为1:10～100g/mL，优选为1:20～80g/mL，更优选为1:30～60g/mL，最优选为1:50g/mL；
所述石斛和水的比例为1:10～100g/mL，优选为1:20～80g/mL，更优选为1:30～60g/mL，最优选为1:50g/mL；和/或
所述葛根粉和水的比例为1:1～1000g/mL，优选为1:1～300g/mL，更优选为1：1～200g/mL，最优选为1:150g/mL。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述超声提取的温度为10～100℃，优选为20～80℃，更优选为30～60℃，最优选为50℃；和/或所述超声提取的时间为1～30分钟，优选为1～20分钟，更优选为1～10分钟，最优选为5分钟。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述加热温度为10～200℃，优选为50～150℃，更优选为80～120℃，最优选为70℃；
所述加热时间为1～12小时，优选为1～9小时，更优选为1～6小时，最优选为3小时；和/或
所述搅拌速率为10～500r/min，优选为10～200r/min，更优选为10～100r/min，最优选为90r/min。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中:
植物油的加入量为1～20％，优选为1～10％；更优选为1～5％，最优选为2％；和/或所述芦荟汁的加入量为1～20％，优选为1～10％；更优选为1～5％，最优选为3％。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述芦荟汁的制备方法方法包括以下步骤：
取芦荟肉和水混合榨汁过滤超声提取得到所述芦荟汁。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述芦荟肉与水的比例为1:1～50g/mL，优选为1:1～30g/mL，更优选为1:1～20g/mL，最优选为1:10g/ml。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中:
所述均质速度为1000～20000r/min，优选为1000～15000r/min，更优选为1500～
10000r/min；最优为5000r/min；均质时间为1～60分钟，优选为1～30分钟，更优选为1～20分钟，最优选为10分钟。
10.一种面膜，其特征在于，所述面膜包括按照权利要求1至9中任一项所述方法制备的面膜液。
一种松茸面膜液的制备方法
技术领域
背景技术
[0002] 常规化妆品以化妆品配方设计原则，在功效原料的基础上，为了保持其外观状态的稳定性和商品化的需求，还会添加增稠剂、乳化剂、防腐剂和香精等。并且，美白类化妆品为了提高其美白效果，还会添加多种美白功效成分，这其中包括植物来源等美白功效提取物，还有一些非植物来源的美白剂。对于妊娠期、哺乳期以及其他皮肤较为敏感的人群，这增加了皮肤的负担，甚至增加刺激性和敏感性产生的风险。
[0003] 随着化妆品追求天然，全植物成分的市场需求，越来越多的化妆品配方减少了非植物源原料的使用。但是，现有美白用化妆品技术及发明，也仅是植物化妆品原料的复配和后加工，没有从原料源头上以及生产技术上进行控制和改变，去满足市场消费者对于面膜液全植物成分，天然和温和安全的诉求。
发明内容
[0005] 为实现上述目的，本发明的第一方面提供了一种松茸面膜液的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
[0007] (2)加热搅拌过滤制备燕麦、松茸、三七、石斛和葛根预处理液；
[0010] 根据本发明第一方面的制备方法，其中，所述步骤(1)中，所述燕麦、松茸、三七、石斛和葛根预处理液的制备方法包括以下步骤：
[0011] 将燕麦粉、松茸、三七、石斛、葛根分别和水混合后打浆，超声提取后取滤液为所述预处理液。
[0012] 根据本发明第一方面的制备方法，其中，
[0013] 所述燕麦粉和水的比例为1:10～200g/mL，优选为1:20～150g/mL，更优选为1:30～130g/mL，最优选为1:50g/mL；
[0014] 所述松茸和水的比例为1:10～100g/mL，优选为1:20～80g/mL，更优选为1:30～60g/mL，最优选为1:50g/mL；
[0015] 所述三七粉和水的比例为1:10～100g/mL，优选为1:20～80g/mL，更优选为1:30～60g/mL，最优选为1:50g/mL；
[0016] 所述石斛和水的比例为1:10～100g/mL，优选为1:20～80g/mL，更优选为1:30～60g/mL，最优选为1:50g/mL；
[0017] 所述葛根粉和水的比例为1:1～1000g/mL，优选为1:1～300g/mL，更优选为1：1～200g/mL，最优选为1:150g/mL；
[0019] 所述超声提取的时间为1～30分钟，优选为1～20分钟，更优选为1～10分钟，最优选为5分钟。
[0020] 根据本发明第一方面的制备方法，其中，所述步骤(2)中，所述加热温度为10～200℃，优选为50～150℃，更优选为80～120℃，最优选为70℃；所述加热时间为1～12小时，优选为1～9小时，更优选为1～6小时，最优选为3小时；和/或
[0021] 所述搅拌速率为10～500r/min，优选为10～200r/min，更优选为10～100r/min，最优选为90r/min。
[0022] 根据本发明第一方面的制备方法，其中，所述步骤(3)中:
[0023] 植物油的加入量为1～20％，优选为1～10％；更优选为1～5％，最优选为2％；和/或
[0024] 所述芦荟汁的加入量为1～20％，优选为1～10％；更优选为1～5％，最优选为3％。
[0025] 优选地，所述芦荟汁的制备方法方法包括以下步骤：
[0026] 取芦荟肉和水混合榨汁过滤超声提取得到所述芦荟汁。
[0027] 更优选地，所述芦荟肉与水的比例为1:1～50g/mL，优选为1:5～20g/mL，更优选为1:5～15g/mL，最优选为1:10g/ml。
[0028] 根据本发明第一方面的制备方法，其中，所述步骤(3)中，所述均质速度为1000～20000r/min，优选为1000～15000r/min，更优选为1500～10000r/min；最优为5000r/min；均质时间为1～60分钟，优选为1～30分钟，更优选为1～20分钟，最优选为10分钟。
[0029] 本发明的第二方面提供了一种面膜，所述面膜包括按照第一方面所述方法制备的面膜液。
[0030] 本发明的松茸美白面膜液的制备方法可以具有但不限于以下有益效果：
[0031] 本发明采用药食同源的植物为原料(燕麦，松茸，石斛，葛根，植物油等天然成分)以水为介质，经过提取除杂工艺，直接制备一种安全、温和、补水美白效果显著的全植物美白面膜液，不含有香精、防腐剂以及杀菌剂，对皮肤滋养的同时不产生刺激和副作用。附图说明
[0032] 以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
[0033] 图1示出了试验例1中实施例1和对比例1的不同浓度松茸面膜液对HaCat细胞活率的影响。
[0034] 图2示出了试验例1中实施例2和对比例1的不同浓度松茸面膜液对HaCat细胞活率的影响。
[0035] 图3示出了试验例1中实施例3和对比例1的不同浓度松茸面膜液对HaCat细胞活率的影响。
[0036] 图4示出了试验例4中B16细胞黑色素合成抑制实验结果。
[0038] 图6示出了试验例5中过氧化氢酶活力检测结果。
具体实施方式
[0039] 下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
[0040] 本部分对本发明试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在上下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
[0041] 以下实施例中使用的试剂和仪器如下：
[0042] 试剂：
[0043] 燕麦(炒制熟)购自张家口建军燕麦食品有限公司；
[0044] 松茸(干燥)购自云南誉成隆经贸有限公司；
[0045] 三七粉，石斛，购自云南白药集团文山七花有限责任公司；
[0046] 葛根(干燥粉)购自同仁堂大药房；
[0047] 芦荟，橄榄油，青刺果油，澳洲坚果油，购自云南誉成隆经贸有限公司；
[0048] 仪器：
[0049] 均质机，购自IKA。
[0050] 实施例1
[0051] 本实施例用于说明本发明面膜液的制备方法。
[0052] 1、原料处理(食品级)
[0054] 松茸：清洗，切片；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为松茸预处理液。
[0055] 石斛：将石斛茎部洗净切段；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为石斛预处理液。
[0056] 三七:将三七洗净；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为三七预处理液。
[0057] 葛根：购买葛根粉，打碎过80目筛；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为葛根预处理液。
[0058] 芦荟：取芦荟肉，和水以1:10(g/ml)的比例混合；榨汁过滤得芦荟汁待用；超声提取后15分钟后取滤液为所述芦荟汁预处理液。
[0059] 橄榄油。
[0060] 2、面膜液制备
[0061] (1)燕麦、松茸、三七、石斛和葛根预处理液添加比例如表1所示；
[0062] 表1预处理液的添加比例
[0064] (2)45℃加热3小时，70rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤去除杂质，留上清液(不透明)；
[0065] (3)加入质量比为2％橄榄油和质量比为5％芦荟汁预处理液，以均质机均质5分钟，物理分散油脂。
[0066] 3、面膜液灭菌处理
[0067] 面膜液灌装入面膜袋(含面膜布)。
[0068] 80℃灭菌2小时。
[0069] 实施例2
[0070] 本实施例用于说明本发明面膜液的制备方法。
[0071] 1、原料处理(食品级)
[0072] 燕麦：将炒制熟的燕麦进行超微粉。粒径为粉碎后50目，超微粉碎后粒径为20um。1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为燕麦预处理液。
[0073] 松茸：清洗，切片；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为松茸预处理液。
[0074] 三七:将三七洗净；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为三七预处理液。
[0075] 石斛：将石斛茎部洗净切段；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为石斛预处理液。
[0076] 葛根：购买葛根粉，打碎过80目筛；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为葛根预处理液。
[0077] 山药：清洗，去皮，切块，1:2(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为山药预处理液。
[0078] 芦荟：取芦荟肉，和水以1:5(g/ml)的比例混合；榨汁过滤得芦荟汁待用。超声提取后15分钟后取滤液为所述芦荟汁预处理液。
[0079] 青刺果油。
[0080] 2、面膜液制备
[0081] (1)燕麦、松茸、三七、山药、石斛和葛根预处理液添加比例如表2所示；
[0082] 表2实施例2预处理液的添加比例
[0083] 原料成分 质量份数燕麦预处理液 20
松茸预处理液 25
三七预处理液 25
石斛预处理液 25
葛根预处理液 25
山药预处理液 16
松茸预处理液 25
三七预处理液 25
石斛预处理液 25
葛根预处理液 25
山药预处理液 16
[0084] (2)100℃加热2小时，70rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤去除杂质，留上清液(不透明)；
[0085] (3)加入质量比为2％青刺果油和质量比为5％芦荟汁预处理液，以均质机均质10000r/min,5分钟，物理分散油脂。
[0086] 3、面膜液灭菌处理
[0087] 面膜液灌装入面膜袋(含面膜布)。
[0088] 80℃灭菌2小时。
[0089] 实施例3
[0090] 本实施例用于说明本发明面膜液的制备方法。
[0091] 1、原料处理(食品级)
[0092] 燕麦：将炒制熟的燕麦进行超微粉。粒径为粉碎后50目，超微粉碎后粒径为20um。1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为燕麦预处理液。
[0093] 松茸：清洗，切片；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为松茸预处理液。
[0094] 三七:将三七洗净；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为三七预处理液。
[0095] 石斛：将石斛茎部洗净切段；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为石斛预处理液。
[0096] 葛根：购买葛根粉，打碎过100目筛；1:5(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液为葛根预处理液。
[0097] 芦荟：取芦荟肉，和水以1:2(g/ml)的比例混合；榨汁过滤得芦荟汁待用。超声提取后15分钟后取滤液为所述芦荟汁预处理液。
[0098] 橄榄油。
[0099] 澳洲坚果油。
[0100] 2、面膜液制备
[0101] (1)燕麦、松茸、三七、石斛和葛根预处理液添加比例如表3所示：
[0102] 表3实施例3预处理液的添加比例
[0103] 原料成分 质量份数燕麦预处理液 1
松茸预处理液 2
三七预处理液 2
石斛预处理液 2
葛根预处理液 2
松茸预处理液 2
三七预处理液 2
石斛预处理液 2
葛根预处理液 2
[0104] (2)100℃加热5小时，70rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤去除杂质，留上清液(不透明)；
[0105] (3)加入质量比为1％橄榄油、1％澳洲坚果油和质量比为1％芦荟汁预处理液，以均质机均质10000r/min,10分钟，物理分散油脂。
[0106] 3、面膜液灭菌处理
[0107] 面膜液灌装入面膜袋(含面膜布)。
[0108] 80℃灭菌2小时。
[0109] 试验例1
[0110] 本试验例提供了本发明方法制备的面膜液的HaCat细胞增殖实验。
[0111] 收集对数期细胞，铺板使待测细胞密度至5000个/孔，于5％CO2，37℃条件下培养，细胞生长至一定密度，换液加入不同浓度梯度的实施例1样品，以不含样品的培养液为对照。继续培养24小时，每孔加入20μl 0.5％MTT溶液(即5mg/ml)，培养4h后弃去培养液，用PBS小心冲洗2-3遍后，每孔加入150μl二甲基亚砜，于摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。于490nm处测量各孔的吸光值。细胞存活率＝(测定孔OD值-空白对照OD值)/(细胞对照组OD值-空白对照OD值)*100％。
[0112] 常规方法配置(对比例1)：
[0113] (1)提取液制备方法如下。
[0114] 燕麦提取液：将炒制熟的燕麦进行超微粉。粒径为粉碎后50目，超微粉碎后粒径为20um。1:10(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液。100℃加热5小时，70rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤去除杂质，留上清液(不透明)为燕麦提取液。
[0115] 松茸提取液：松茸清洗，切片；1:12(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液。100℃加热5小时，70rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤去除杂质，留上清液(不透明)为松茸提取液。
[0116] 三七提取液：三七清洗，切片；1:10(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液。100℃加热5小时，70rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤去除杂质，留上清液(不透明)为三七提取液。
[0117] 石斛提取液：石斛茎部清洗，切段；1:10(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液。100℃加热5小时，70rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤去除杂质，留上清液(不透明)为石斛提取液。
[0118] 葛根提取液：购买葛根粉，打碎过80目筛；1:30(g/ml)与水混合后打浆，超声提取后15分钟后取滤液。100℃加热5小时，70rad/min进行搅拌；冷却至室温，过滤去除杂质，留上清液(不透明)为葛根提取液。
[0119] 芦荟汁：取芦荟肉，和水以1:10(g/ml)的比例混合；榨汁过滤得芦荟汁待用。超声提取后15分钟后取滤液为所述芦荟汁。
[0120] 橄榄油。
[0121] (2)按照表4配比添加各提取物。
[0122] 表4对比例1预处理液的添加比例
[0123]
[0124] (3)加入质量比为2％橄榄油和质量比为5％芦荟汁预处理液，以均质机均质5分钟，物理分散油脂。
[0125] 3、面膜液防腐处理
[0126] 加入质量0.5％苯氧乙醇，搅拌均匀。面膜液灌装入面膜袋(含面膜布)。
[0127] 如图1所示，实施例1样品50％浓度面膜液对HaCat细胞存活率都在90％以上(93.23％)，并且随着面膜液浓度的降低，其对HaCat细胞存活率也是逐渐降低的，而且具有促进细胞增殖的效果，使得其细胞存活率高于100％。
[0128] 对比例1样品浓度高于12.5％时，对HaCat细胞的存活率都是抑制的。
[0129] 如图所示，1％-5％浓度的松茸面液对HaCat细胞活率都在75％以上，并且1.5％-2.5％浓度的松茸面液对HaCat细胞具有明显的促增殖作用，使得其细胞存活率高于100％。
[0130] 试验例2
[0131] 本试验例用于说明通过本发明制备面膜液的生物基检测结果。
[0132] 通过ISO 16620-2天然产品来源的测试，生物基含量测试(碳-14法)可以区分天然产品和石油化工衍生产品。区分产品中来自于天然来源与合成来源的含量百分比。委托BETA Analytic测试实验室对本发明实施例1的面膜液进行检测，检测结果表明本发明面膜液为100％生物基碳含量(有机碳总量百分比)。
[0133] 试验例3
[0134] 样品在25℃室温放置、-20℃低温放置及60℃放置后，微生物检测结果如下表5所示：
[0135] 表5实施例1-3产品微生物检测结果
[0136] 样品类别 25℃放置3年 60℃放置3年 -20℃放置3年实施例1样品 微生物未检出 微生物未检出 微生物未检出
实施例2样品 微生物未检出 微生物未检出 微生物未检出
实施例3样品 微生物未检出 微生物未检出 微生物未检出
实施例2样品 微生物未检出 微生物未检出 微生物未检出
实施例3样品 微生物未检出 微生物未检出 微生物未检出
[0137] 试验例4
[0138] 本试验例用于说明通过本发明面膜液的美白性能。本试验例用于说明实施例1中面膜液对B16细胞黑色素合成抑制实验。
[0139] 取对数生长期状态良好的B16细胞计数并接种于T25培养瓶中，置于培养箱37℃，5％CO2环境中培养过夜；更换培养基，加入质量浓度分别为0.63％、1.25％、2.5％的松茸提取液样品，阴性对照组未做处理，阳性对照组为33mM熊果苷，培养48小时后吸弃培养基，使用PBS洗涤后加入裂解液，刮取细胞并收集于离心管中；80℃水浴30min；振荡混匀，吸取至
96孔板于475nm读取吸光度值。黑色素含量变化＝(测定孔OD值-空白对照OD值)/(细胞对照组OD值-空白对照OD值)。结果如图4所示。
96孔板于475nm读取吸光度值。黑色素含量变化＝(测定孔OD值-空白对照OD值)/(细胞对照组OD值-空白对照OD值)。结果如图4所示。
[0140] 图4结果表明，阳性对照熊果苷和实施例1面膜液样品能够降低B16细胞中黑色素的相对含量，当实施例1面膜液样品质量浓度为5.0％时，降低黑色素含量效果更加明显，此时相对黑色素含量为74.73％。表明实施例1面膜液样品能够降低黑色素含量，达到美白的功效。
[0141] 试验例5
[0142] 本试验例用于说明通过本发明面膜液的抗氧化性能。
[0143] 过氧化氢酶活性检测
[0144] 试剂：过氧化氢酶检测缓冲液(60ml)、过氧化氢(约1M、5ml)、过氧化氢酶反应终止液(50ml)、显色底物(20ml)、过氧化物酶(20μl)、细胞裂解液。
[0145] 样品：实施例1样品。
[0146] 仪器与设备：细胞培养箱，上海一恒、6孔板，康宁、96孔板，康宁、UV紫外灯箱，SPECTRONICS、冷冻高速离心机,TGL-16湖南湘仪实验室仪器开发有限公司、荧光酶标仪，infinite M200 PRO TECAN、制冰机，AF 103Scotsman
[0147] 1)准备工作：
[0148] a.配制250mM过氧化氢溶液。试剂盒提供的过氧化氢浓度约为1M。由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的过氧化氢用试剂盒提供的过氧化氢酶检测缓冲液稀释100倍，使过氧化氢的浓度约为10mM。测定A240。过氧化氢浓度(mM)＝22.94×A240。从而计算出本试剂盒提供的过氧化氢的实际浓度。然后再根据实际的过氧化氢浓度配制250mM过氧化氢溶液。
[0149] b.配制5mM过氧化氢溶液。根据测定得到的实际过氧化氢浓度配制5mM过氧化氢溶液。
[0150] c.配制显色工作液。在冰浴上溶解显色底物，适当分装后再使用，尽量避免反复冻融。其它试剂放置在冰浴上备用。取适当量的过氧化物酶，按照1:1000的比例用显色底物稀释，配制成显色工作液。例如取5μl过氧化物酶，加入5ml显色底物，混匀即得到5ml显色工作液。
[0151] 2)样品准备：用适当的裂解液裂解细胞或组织。裂解好的样品至少加入等体积的过氧化氢酶检测缓冲液进行稀释。具体的稀释倍数如表6所示。
[0152] 表6具体稀释倍数
[0153]
[0154] 3)标准曲线测定：
[0155] a.取0、12.5、25、50、75微升配制好的5mM过氧化氢溶液至1.5ml塑料离心管中，分别加入过氧化氢酶检测缓冲液至最后体积为100微升，混匀。
[0156] b.各取4微升，加入到96孔板中的一个孔内。加入200μl显色工作液。25℃至少孵育15分钟后测定A520，但孵育时间不宜超过45分钟。
[0157] 4)样品测定
[0158] 表7各溶液加入量
[0159] 空白对照(blank) 样品(sample)
样品体积 0μl xμl
过氧化氢酶检测缓冲液 40μl 40-xμl
250mM过氧化氢溶液 10μl 10μl
样品体积 0μl xμl
过氧化氢酶检测缓冲液 40μl 40-xμl
250mM过氧化氢溶液 10μl 10μl
[0160] a.参考表6，取x微升(0-40微升)样品至1.5ml塑料离心管中，加入过氧化氢酶检测缓冲液至体积为40微升(即加入40-x微升过氧化氢酶检测缓冲液)，混匀。再加入10微升250mM过氧化氢溶液，用移液器迅速混匀。参考表7，25℃反应5分钟。
[0161] b.加入450微升过氧化氢酶反应终止液，颠倒混匀或Vortex混匀以终止反应。需在终止反应后15分钟内完成下面的步骤c和步骤d。
[0162] c.在一洁净的塑料离心管内加入40微升过氧化氢酶检测缓冲液，再加入10微升已终止并混匀的上述反应体系，混匀。
[0163] d.从上一步骤的50微升体系中取10微升加入到96孔板中的一个孔内。加入200微升显色工作液。
[0164] e.25℃至少孵育15分钟后测定A520，但孵育时间不宜超过45分钟。
[0165] 5)样品中过氧化氢酶酶活力的计算：
[0166] a.计算出标准曲线。A520＝k[过氧化氢微摩尔数]+b，由标准曲线计算出k和b的值。标准曲线如图5所示。
[0167] b.计算出样品中残余的过氧化氢微摩尔数。
[0168] 残余过氧化氢微摩尔数＝(A520-b)/k
[0169] c.过氧化氢酶酶活力单位的定义：1个酶活力单位(1unit)在25℃，pH7.0的条件下，在1分钟内可以催化分解1微摩尔过氧化氢。
[0170] d.对于细胞或组织样品的过氧化氢酶活力计算：
[0171] [样品过氧化氢酶酶活力]＝[消耗过氧化氢微摩尔数]×[稀释倍数]/([反应分钟数]×[样品体积]×[蛋白浓度])[样品过氧化氢酶酶活力]的单位为units/mg蛋白[0172] [消耗过氧化氢微摩尔数]＝[空白对照残余过氧化氢微摩尔数]－[样品残余过氧化氢微摩尔数]
[0173] [稀释倍数]＝250
[0174] [反应分钟数]即为实际的反应分钟数
[0175] [样品体积]为表2中的X微升，以毫升来表示即为X/1000毫升。
[0176] [蛋白浓度]为取X微升样品时，样品中的蛋白浓度，单位为mg/ml。
[0177] 结论：如图6所示，模型组是只通过UVA照射，未添加样品的细胞组，空白组为未照射且未添加样品的细胞组，经试验发现UVA照射后，细胞内过氧化氢酶酶活力会降低，样品组与模型组、空白组对比，实施例1样品能够增加细胞内过氧化氢酶的酶活力，且随着样品浓度的降低，细胞内过氧化氢酶活力逐渐增加。
[0178] 尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。
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